| 序号 | 专利名 | 申请号 | 申请日 | 公开（公告）号 | 公开（公告）日 | 发明人 |
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| 61 | mRNA甲基化高通量检测方法 | CN201610362981.3 | 2016-05-27 | CN106047997A | 2016-10-26 | 王新霞; 汪以真; 江芹 |
| 本发明公开了一种mRNA甲基化高通量检测方法，包括以下步骤：mRNA样品提取；将提取的RNA样品进行片段化；将得到的RNA片段利用特异性识别mRNA上m6A甲基化(m6A)的抗体进行免疫富集；将步富集后含有m6A的mRNA片段洗脱后进行沉淀纯化；将所得纯化后的RNA反转录成cDNA，并进行DNA末端修复、接头连接和PCR扩增，完成mRNA甲基化文库的构建；将完成的文库利用分析测序文库的高通量测序平台进行测序。 | ||||||
| 62 | 用于检测碎片化DNA目标区域的引物组合物及其应用 | CN201610307184.5 | 2016-05-10 | CN106011230A | 2016-10-12 | 王永利; 宋卓; 袁梦兮 |
| 本发明公开了用于检测碎片化DNA目标区域的引物组合物及其应用，其中该引物组合物包括：第一引物组，所述第一引物组包含第一通用引物和第二通用引物，所述第一通用引物和所述第二通用引物的靶点位于所述目标区域的两端，分别用于构成测序文库的5’端和3’端；以及第二引物组，所述第二引物组包括第一特异性引物组和第二特异性引物组。利用本发明的引物组合物对碎片化DNA的目标区域进行扩增富集，能够显著提高引物扩增的适应范围和有效模板量，进而对富集产物进行测序检测，能够显著提高碎片化DNA的检测灵敏度。 | ||||||
| 63 | 基于III型纤连蛋白结构域的支架组合物、方法及用途 | CN200980153649.4 | 2009-10-27 | CN102307896B | 2016-10-12 | S·雅各布斯; K·奥奈尔 |
| 本发明涉及一种基于III型纤连蛋白(FN3)蛋白质的共有序列的蛋白质支架，所述III型纤连蛋白(FN3)蛋白质例如来自人纤连蛋白(人生腱蛋白)的第10个FN3重复序列，还涉及编码蛋白质支架的分离的核酸、载体、宿主细胞，以及它们的制备和使用方法，它们在诊断性和/或治疗性组合物、方法和装置中具有应用。具体而言，能结合IgG的蛋白质支架分子已被鉴定为可用于诊断性和/或治疗性应用。 | ||||||
| 64 | 一种人干性记忆T细胞库的构建方法 | CN201610281300.0 | 2016-04-29 | CN105821483A | 2016-08-03 | 孙长斌; 张曦; 张家文; 周欣 |
| 本发明涉及一种人干性记忆T细胞库的构建方法，包括以下步骤：(1)人外周血的采集；(2)外周血单个核细胞的分离；(3)初始T细胞的分选；(4)干性记忆T细胞的制备；(5)细胞冻存；(6)编码入库。本发明通过采用体外定向诱导的方法，可在短时间内获得足量的干性记忆T细胞(TSCM)并对其进行建库，该方法所需外周血体量小，具有成本低、实验室条件要求不高，操作简单等优点。 | ||||||
| 65 | CHO细胞的合成启动子、使用转录因子结合位点模块生产合成启动子的方法 | CN201480064846.X | 2014-11-28 | CN105793415A | 2016-07-20 | D·C·詹姆斯; A·J·布朗 |
| 用于表达重组蛋白的CHO细胞特异性合成启动子构建体，其启动子构建体文库，以及用于生产该启动子构建体的方法。该启动子构建体能够横跨三个数量级精确控制重组基因转录，该表达最强的启动子能够使CMV启动子的转录活性翻倍。 | ||||||
| 66 | 一种基因组DNA的PCR-free测序文库制备方法 | CN201610108344.3 | 2016-02-26 | CN105734048A | 2016-07-06 | 张洪源; 郑媛坤; 束礼平; 杨冰; 范艺翔; 王宇峰; 何银竹; 束礼伟; 黄刚; 董扬 |
| 本发明涉及分子生物学技术领域，公开了一种基因组DNA的PCR?free测序文库制备方法，包含下述步骤：(1)基因组DNA超声波打断；(2)对片段DNA进行纯化回收；(3)片段化DNA末端修复；(4)末端修复产物纯化回收；(5)DNA末端加A；(6)末端加A产物纯化回收；(7)DNA两侧加测序接头进行连接反应；(8)对连接产物进行片段筛选，回收产物即为测序文库；(9)对文库进行质检和上机测序。本发明提供了上述步骤(1)基因组DNA超声波打断方法、步骤(2)(4)(6)中对产物进行纯化的方法、步骤(3)(5)(7)中反应体系和条件以及步骤(7)中兼容于Illumina二代测序仪的测序接头的设计和使用方法，保证了本发明所提供的PCR?free文库构建方法能够快速顺利的进行，利用该方法可得到不经过PCR反应(PCR?free)而直接制备成上机测序的文库。 | ||||||
| 67 | 一种基于IonProtonTM测序平台的血液游离DNA的文库构建方法、试剂及其应用 | CN201610139977.0 | 2016-03-11 | CN105695448A | 2016-06-22 | 丁聪聪; 丁志远; 叶佳芝; 牟晓威; 邱宝义; 刘明明; 陈贤丰 |
| 本发明公开了一种基于Ion ProtonTM测序平台的血液游离DNA的文库构建方法、试剂及其应用，构建过程包括血液游离DNA提取、末端修复、片段选择、接头连接、磁珠纯化、文库扩增、文库检测、高通量测序等步骤。本发明还提供一种用于构建基于Ion ProtonTM测序平台的血液游离DNA文库的血液游离DNA提取试剂、末端修复试剂、接头连接反应试剂、扩增试剂。本发明明显提高了孕妇血浆胎儿游离DNA的提取浓度，且步骤简单，成本低，提高了建库的成功率；优化后的文库构建体系更利于操作，节省成本，且更换磁珠后，纯化回收效率更高；文库扩增也不需凑够样本量和二次检测，操作更加简单。本发明方法更适用于胎儿染色体非整倍体无创产前诊断。 | ||||||
| 68 | 一种单细胞简化代表性重亚硫酸氢盐测序的方法及试剂盒 | CN201511029177.5 | 2015-12-31 | CN105506109A | 2016-04-20 | 柳青; 王晓雯; 洪燕; 姜涛; 赵红梅; 张广思; 玄兆伶; 李大为; 梁峻彬; 陈重建 |
| 本发明涉及一种单细胞简化代表性重亚硫酸氢盐测序文库的构建方法，包括单细胞裂解、MspI酶切、末端修复、3'端加A、加甲基化接头、重亚硫酸氢盐处理以及PCR扩增的步骤，本发明同时包括单细胞简化代表性重亚硫酸氢盐测序文库的构建试剂盒、检测方法和检测试剂盒，属于基因测序领域。本发明提供的测序用单细胞简化代表性重亚硫酸氢盐测序文库的构建方法，以单个细胞为研究对象，能够从单细胞水平上研究细胞的异质性。 | ||||||
| 69 | 多特异性肽 | CN201080017619.3 | 2010-02-04 | CN102405060B | 2016-04-13 | P.G.温特; C.黑尼斯; E.贝纳; D.罗亚克斯; J.P.泰特; M.维斯伯德; D.P.托伊费尔; L.雷赫曼 |
| 本发明涉及提供多特异性肽配体的方法，所述多特异性肽配体包含在三个或更多个氨基酸残基处与分子支架共价连接的、能够结合两种或更多种独立的靶的多肽，所述方法包括步骤：（a）提供多肽的第一集合，每个多肽包含能够与分子支架共价连接的两个或更多个反应基团，以及至少一个环，所述环包含在所述反应基团的两个之间对向的两个或更多个氨基酸的序列；（b）提供如（a）中描述的多肽的第二集合；（c）将所述第一集合的一个或更多个成员的至少一个环连接到所述第二集合的一个或更多个成员的至少一个环，来形成包含两个环的至少一个多肽，和（d）在至少三个氨基酸位置处将所述复合多肽轭合到分子支架。 | ||||||
| 70 | 对血浆游离DNA进行多目标位点扩增建库的方法 | CN201511021881.6 | 2015-12-30 | CN105442054A | 2016-03-30 | 金谷雷; 牛耀芳 |
| 本发明公开了一种对血浆游离DNA进行多目标位点扩增建库的方法，依次包括以下步骤：1)、末端修复和加A；2)、接头连接：在步骤1)所得的末端加A的DNA片段中加入已退火形成环状发夹结构的接头DNA，从而获得两侧结合上环状发夹接头后的双链DNA；当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量≤10ng时，进行步骤3)；反之，当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量＞10ng时，直接进行步骤4)；3)、在步骤2)所得的加好接头的DNA中加入特异性引物I、Phi29酶和缓冲液，进行线性扩增；4)、PCR扩增：所述扩增产物构成游离DNA突变位点富集测序文库。 | ||||||
| 71 | 一种构建测序用DNA文库的方法 | CN201511028398.0 | 2015-12-30 | CN105401222A | 2016-03-16 | 玄兆伶; 王占东; 李大为; 梁峻彬; 陈重建 |
| 本发明涉及一种构建测序用DNA文库的方法、测序用DNA文库以及测序方法。采用构建测序用DNA文库的方法，通过利用全新设计的标签接头，能够在对大数目量样本的混合测序中，实现由每个样本进行一个PCR的扩增反应变成多个样本共用一个PCR反应，从而减少文库构建试剂用量、降低测序人工成本。 | ||||||
| 72 | 用于产生用于定向进化的文库的方法 | CN201480023547.1 | 2014-02-26 | CN105283588A | 2016-01-27 | M.维纳; M.基斯 |
| 本文公开的是生成例如可以用于定向进化中的目的序列的变体文库的有效方法，在一个实施方案中，该方法包括扩增反应，例如易错PCR，以生成目的序列的双链DNA(dsDNA)变体，这之后dsDNA变体的一条链可以选择性降解，以产生单链DNA(ssDNA)变体。ssDNA变体可以与ssDNA中间体例如尿嘧啶化的环状ssDNA中间体杂交，以形成异源双链DNA，其可以转化到细胞例如大肠杆菌细胞内，获得变体文库。这种方法消除无效的亚克隆步骤和由许多现有方法要求的昂贵引物组的需要。 | ||||||
| 73 | 一种基于高通量测序构建猪BCR重链文库的多重PCR引物和方法 | CN201510478591.8 | 2015-08-07 | CN105087560A | 2015-11-25 | 葛良进; 刘松; 黄莎莎; 刘丽春; 黄亮; 林群婷; 李改玲 |
| 本发明提供了一种基于高通量测序构建猪BCR重链文库的多重PCR引物和方法。所述的多重PCR引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述下游引物为SEQ ID NO:2～SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成的下游引物组。本发明提供的多重PCR引物组能高效构建猪的B淋巴细胞受体高通量测序文库，可获得丰富的猪BCR重排信息。 | ||||||
| 74 | 一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶BCR文库的多重PCR引物和方法 | CN201510500391.8 | 2015-08-14 | CN105063032A | 2015-11-18 | 葛良进; 刘松; 林群婷; 刘丽春; 曾立董; 黄莎莎; 黄亮; 李改玲 |
| 本发明提供了一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶BCR文库的多重PCR引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物为比SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列多或少0～3个碱基的核苷酸序列组成的上游引物组；所述下游引物为比SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列多或少0～3个碱基的核苷酸序列组成的。本发明提供的多重PCR引物组能高效构建白血病患者的B淋巴细胞受体高通量测序文库，可获得丰富的白血病微小残留病灶BCR重排信息。 | ||||||
| 75 | 一种基于合成单链DNA文库进化酶的方法 | CN201510213131.2 | 2015-04-29 | CN104877977A | 2015-09-02 | 康振; 陈坚; 金鹏; 堵国成; 张琳培 |
| 本发明公开了一种基于合成单链DNA文库进化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明基于PCR技术，先得到单链突变体，再以此为模板获得多样性丰富的双链突变体文库。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对酶基因进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。 | ||||||
| 76 | 高通量测序文库的构建方法 | CN201510078568.X | 2015-02-13 | CN104630372A | 2015-05-20 | 曹志生; 李宗文; 张宝亮; 张兰英; 丁雪; 宋超; 孟雪红; 魏龙刚; 尹静妮; 刘聪 |
| 本发明公开了一种高通量测序文库的构建方法。该方法包括：S1，用引物混合物进行多重PCR得到多个目标片段；S2，对多个目标片段接头连接得到多个带接头的目标片段；以及S3，对多个带接头的目标片段进行乳液PCR得到高通量测序文库；引物混合物为cDNA引物混合物和/或DNA引物混合物；cDNA引物混合物包括SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示第1对引物以及SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示第2对引物；DNA引物混合物包括SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示第3对引物以及SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示第4对引物。该方法可有效提高检测通量。 | ||||||
| 77 | 一种无创人肝癌早期检测与鉴别诊断方法及系统 | CN201410522229.1 | 2014-09-30 | CN104313136A | 2015-01-28 | 朱克卿; 邢同京; 徐洪涛; 徐祖龙; 朱霞; 胡月; 薄世平; 陆思嘉; 王春香 |
| 本发明公开了一种无创人肝癌早期检测与鉴别诊断方法，包括下述步骤：1)从离体血浆中提取血浆游离DNA，构建基因组测序文库；2)对其进行测序，测定基因组DNA顺序并进行序列比对；3)以不同的基因组顺序长度为基本分析单元，进行染色体拷贝数变异CNV分析并构建染色体CNV图观察是否有目视可观察到的拷贝数改变；4)以不同的基因组顺序长度为基本分析单元，进行染色体拷贝数变异Z分值CNV的分析。本发明的检测方法可以用于肝癌的早期检测及鉴别诊断，用于临床前研究或临床检测。 | ||||||
| 78 | 高通量测序文库的构建方法及其应用 | CN201110362032.2 | 2011-11-15 | CN103103624B | 2014-12-31 | 王君文; 高飞; 蒋慧; 武靖华; 吴红龙 |
| 提供了高通量测序文库的构建方法及其应用。构建高通量测序文库的方法包括：将基因组DNA片段化；将DNA片段进行末端修复；在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A；将具有粘性末端A的DNA片段与甲基化接头相连；利用特异性探针对所述连接产物进行杂交捕获，以便获得目的片段；将所述目的片段进行重亚硫酸盐处理，以便将所述目的片段中非甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶；将经过转换的目的片段进行PCR扩增；分离纯化扩增产物，该扩增产物构成高通量测序文库。采用本发明的构建高通量测序文库的方法及其应用，能够方便有效地构建样本的基因组特定区域的高通量测序文库。 | ||||||
| 79 | 基于抑制的对细胞克隆的高通量筛选方法 | CN201080026227.3 | 2010-06-10 | CN102648288B | 2014-07-30 | 刘伟广; 丁敏珮 |
| 本发明公开了一种用于筛选对靶蛋白具有高水平表达的细胞的方法。所述方法包括向多个宿主细胞引入DNA构建体，所述DNA构建体编码靶蛋白和针对所述宿主细胞中的内源性可选标记物的抑制剂；筛选带有该DNA构建体的宿主细胞，用于表达所述内源性可选标记物；和分离出所述可选标记物表达降低的细胞。本发明还公开了构造为在该宿主细胞中表达该靶蛋白和该抑制剂的DNA构建体。 | ||||||
| 80 | 降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的制备方法 | CN200980132279.6 | 2009-08-25 | CN102124106B | 2014-06-25 | 大床国世; 杉山雅英; 加藤诚志 |
| 本发明提供一种有效地制备降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的方法。在使用具有寡脱氧胸苷酸的双链DNA引物、并且以mRNA为模板的cDNA文库的制备方法中，通过使具有结合到高表达的目的基因的mRNA、且阻止由逆转录酶而引起的cDNA延伸反应的特性的探针共存，从而降低cDNA文库中高表达基因来源的cDNA克隆的比例。 | ||||||
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