| 序号 | 专利名 | 申请号 | 申请日 | 公开（公告）号 | 公开（公告）日 | 发明人 |
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| 1 | 适用于单细胞RRBS测序的文库建立方法及其应用 | CN201710864035.3 | 2017-09-22 | CN107475779A | 2017-12-15 | 李静; 陈昌岳; 王芳; 张祥林; 胡秋萍; 董东; 郑冠涛; 段彪 |
| 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种适用于单细胞RRBS测序的文库建立方法及其应用。本发明公开的适用于单细胞RRBS测序的文库建立方法包括如下步骤：（1）对样本的基因组DNA依次进行酶切、末端补平和加A、加接头以及重亚硫酸盐转化；（2）对步骤（1）中转化后的基因组DNA进行线性扩增；（3）对步骤（2）中线性扩增的扩增子进行指数扩增，所述指数扩增的扩增子用作测序文库。该方法测序所需的DNA起始量低，可以对单个细胞的基因组进行甲基化测序；具有有效的文库片段控制步骤，通过线性扩增步骤控制最终产物的片段，避免繁复操作的同时提高覆盖率。 | ||||||
| 2 | 多重乳液核酸扩增 | CN201680016134.X | 2016-02-03 | CN107429426A | 2017-12-01 | A·R·阿贝特; S·李; D·苏克维奇; S·T·兰斯 |
| 多重乳液核酸扩增允许基于生物系统中包含的核酸的序列(如利用核酸扩增技术例如PCR所检测的)来检测、定量和/或分选所述核酸。所述核酸可以是自由漂浮的或包含在有生命或无生命结构(包括颗粒、病毒和细胞)中。所述核酸可包括例如DNA或RNA。还提供了用于实施本公开的方法的系统和装置。 | ||||||
| 3 | 一种用于检测染色体拷贝数变异的测序文库构建方法和试剂盒 | CN201710476884.1 | 2017-06-21 | CN107217308A | 2017-09-29 | 商玲; 吕萌; 陈祥彬; 王婷婷; 张建光 |
| 本发明公开了一种用于检测染色体拷贝数变异的测序文库的构建方法，其主要包括以下步骤：(1)利用双链DNA片段化酶将待测DNA随机片段化；(2)对片段化后的DNA进行末端补平和3’端悬A；(3)将末端补平并3’端悬A的DNA与测序接头连接，获得连接产物；(4)纯化所述连接产物，获得测序文库，其中步骤(1)‑(3)在单一反应管中完成。本发明还提供用于构建检测染色体拷贝数变异的测序文库的试剂盒。 | ||||||
| 4 | 一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板 | CN201610882475.7 | 2016-10-08 | CN107130300A | 2017-09-05 | 李笑宇 |
| 本发明公开了一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板，该方法包含以下步骤：(1)DNA编码；(2)构建DNA模板，其包含依次连接的发卡形的PCR结合区PBS‑1、与N个结构单元对应结合的N个反应区t及PCR引物结合区PBS‑2；在反应区中，具有非经典的inosine碱基；(3)DNA偶合；(4)酶连；(5)化学反应；(6)光照，实现对结构基团R1化学反应的编码；(7)对剩余的结构单元依次重复步骤(3)至(6)，重复N‑1次，实现对N个结构基团R之间化学反应的编码；即完成DNA编码分子库的合成；其中，N≥2。本方法实现以一个T模板指引整个分子库的合成，而和具体的n，m，o数值无关，与分子库中的化合物数量无关。 | ||||||
| 5 | 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法 | CN201710463397.1 | 2017-06-19 | CN107099850A | 2017-08-29 | 吕嘉伟; 赵艳华; 刘忠华 |
| 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法，涉及一种基因组敲除文库的构建方法。是要解决现有敲除文库构建方法存在物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力的问题。方法：一、构建Mspl.f‑library文库；二、获得20bp gRNA靶序列片段；三、构建PAM‑f.library文库；四、Lenti‑gRNA‑library文库构建。本发明获得gRNA文库的方法不依赖于已知物种基因组序列信息，避免了物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力等缺点，大大提高敲除文库的覆盖率。本发明用于构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库。 | ||||||
| 6 | 在生产宿主中同时整合抗体/蛋白的性能和表达的筛选和演化的方法 | CN201611220313.3 | 2010-07-16 | CN107090031A | 2017-08-25 | 杰·米尔顿·谢特 |
| 本发明提供了在真核宿主中整合治疗性蛋白和抗体的产生和/或筛选、演化和表达的方法，以实现在单一系统中生产。在同一真核宿主系统中产生、优化并生产治疗性蛋白，包括抗体。本发明公开的综合性整合的抗体优化系统(CIAO！TM)可同时实现蛋白性能和表达优化的演化。 | ||||||
| 7 | 用于细胞系鉴定的21位点STR数据库的建立方法及细胞鉴定及匹配率的计算方法和系统 | CN201710108853.0 | 2017-02-27 | CN106894095A | 2017-06-27 | 沈超; 朱欢; 刘晏瑞; 刘月红; 袁冰; 徐国东; 郑从义 |
| 本发明涉及用于细胞系鉴定的21位点STR数据库的建立方法及细胞鉴定及匹配率的计算方法和系统，通过检测得到多个细胞系的21个位点数据；建立数据表，以获得所述21位点STR数据库，数据表包含21组STR位点数据记录，一组记录对应一个STR位点，每组记录包含至多三条STR位点记录。在21位点STR数据库的基础上，本发明提供了三种鉴定未知细胞的方法：CCTCC、ATCC、DSMZ数据库匹配率计算。此外，本发明还提供了一种计算两株未知细胞亲缘性的方法。本发明数据库的另一优点在于，可以根据待测细胞任选的，至少9个至多21个STR位点的来计算其与数据库中已知细胞系间的匹配率，从而来鉴定其细胞系种类。 | ||||||
| 8 | 一种细胞染色体分析快速建库方法及试剂盒 | CN201611078305.X | 2016-11-30 | CN106755337A | 2017-05-31 | 祝云英 |
| 本发明公开了一种细胞染色体分析快速建库方法，包括以下步骤：(1)细胞中直接加入蛋白酶K裂解细胞；(2)直接往步骤1反应体系中加入DNA破碎酶和DNA末端补平试剂，(3)直接向步骤2反应体系中加入DNA连接试剂，使目标待测DNA与DNA接头连接。本发明可供高通量测序仪检测的测序文库，可实现单管试验，无需基因组DNA提取、无需PCR扩增、无需步骤间纯化，从而使基于微量细胞的染色体测序检测更快速和更简便。本发明还公开了一种细胞染色体分析快速建库试剂盒。 | ||||||
| 9 | 一种海洋放线菌基因组文库及其构建方法 | CN201610989636.2 | 2016-11-10 | CN106636062A | 2017-05-10 | 马艳玲; 陈锦灵; 刘富来; 黄桂东; 曾荣 |
| 本发明公开一种海洋放线菌基因组文库及其构建方法，包括：提取海洋放线菌S.arenicola CNS‑205的DNA；采用注射器的针头随机剪切提取的DNA；采用末端修复酶修复经随机剪切后的DNA，然后与载体连接；采用包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞，得到海洋放线菌S.arenicola CNS‑205的基因组文库。本发明旨在以稀有海洋放线菌菌株S.arenicola CNS‑205作为研究对象，构建该菌株的基因组文库，以便于异体表达该菌株中具有生物活性的次级代谢产物生物合成有关的基因簇，以及对些基因簇的基因功能进行分析，从而将代谢工程或组合生物合成方法应用于化合物结构的改造。 | ||||||
| 10 | 一种测序文库构建方法 | CN201611026894.7 | 2016-11-15 | CN106591956A | 2017-04-26 | 郑贤杰; 朱月艳; 孙子奎 |
| 本发明公开的测序文库构建方法，包括如下步骤：步骤1：使用ERAT反应体系一步完成样本DNA片段末端修复、片段5’端磷酸化和片段3’端加dA工作；步骤2：在步骤1获得的ERAT修复样本中加入接头、连接酶和连接酶缓冲液，根据文库需求保留样本中的小片段DNA；步骤3：使用1x至XP磁珠纯化回收连接产物；此处可根据需要进行磁珠比例等方面的调整进行片段筛选；步骤4：使用高保真酶进行7‑11个循环的PCR反应，扩增连接产物；步骤5：使用磁珠纯化回收PCR产物，质控检测完成文库构建。本发明使用了合适的反应体系和更少的建库步骤，可以有效降低建库成本。 | ||||||
| 11 | 用于检测血液病相关基因变异的试剂盒 | CN201710093319.7 | 2017-02-21 | CN106591486A | 2017-04-26 | 刘伟; 魏少华; 侯光远; 陈玥茏; 刘卉; 玄兆伶; 李大为; 梁峻彬; 陈重建 |
| 本发明提供一种用于检测血液病相关基因变异的试剂盒，该试剂盒包括用于基因捕获的探针，所述用于捕获的探针包括针对SNV区域设计的探针、针对CNV区域设计的探针、针对ITD区域设计的探针，公共引物如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列引物，以及标签引物如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列引物。根据本发明，在基于血液病相关基因变异的捕获测序方法中，能够同时稳定的检出基因SNV、CNV以及ITD。 | ||||||
| 12 | 一种串联RAD标签测序文库的构建方法 | CN201610629494.9 | 2016-08-02 | CN106192021B | 2017-04-26 | 王师; 包振民; 刘平平; 吕佳; 张玲玲 |
| 本发明公开了一种串联RAD标签测序文库的构建方法，步骤为：1）酶切：利用内切酶对DNA进行酶切反应；2）接头连接：对酶切片段分别连接接头，接头设计有SapI酶的酶切位点和用于实现标签串联的特征序列以及扩增引物结合的通用序列；3）连接产物扩增：利用生物素引物和普通引物组合进行PCR扩增，富集，切胶回收PCR产物，再次扩增，等量混合纯化；4）串联标签文库：利用SapI酶对PCR产物进行酶切，依次串联；5）串联长标签富集：串联长标签经凝胶纯化后利用引物进行PCR扩增，引入barcode构建文库；6）文库测序本发明能够实现对全基因组范围遗传标记和表观遗传变异进行高通量、低成本地筛查和检测。 | ||||||
| 13 | 一种宏转录组文库的建库方法 | CN201610984532.2 | 2016-11-09 | CN106567133A | 2017-04-19 | 陈叶; 潘小宝; 丁方美; 孙子奎 |
| 本发明公开的一种宏转录文库的建库方法，其特征在于，在RNA提取完成后，先用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物的mRNA，mRNA产物在‑80℃保存以备后用，且将没有被Oligo(dT)的磁珠富集的其他RNA样品依次完成真核生物rRNA的去除和原核生物rRNA的去除，剩余产物‑80℃保存以备后用。将两次富集放入产物混合、纯化以及加入随机引物片段化，第一链的mix以及逆转录酶的共同作用下合成第一链(cDNA链)，然后加入第二链合成mix的完成第二链合成，再在3’加poly(A)，连接接头，进行PCR扩增，再进行凝胶片段选择，最后需要对文库进行检测。 | ||||||
| 14 | 一种用于高通量测序检测化疗药物基因SNP变异文库的构建方法及其应用 | CN201610871090.0 | 2016-09-30 | CN106498035A | 2017-03-15 | 陈琰; 郭飞飞 |
| 本发明公开了一种用于高通量测序检测化疗药物基因SNP变异文库的构建方法，其特征在于：覆盖人类基因DPYD、UGT1A1、MTHFR、ERCC1、UMPS、CDA、DYNC2H1、DHFR、GGH、GSTP1、CYP2B6、SLC22A16、TP53、XRCC1、C8orf34、ABCC4、MTR、CBR3、CYP2D6、ABCB1、ABCC2、SOD2、XPC、SLC19A1、FOLR3和FCGR3A上的总共33遗传性SNP位点。本发明的构建方法针对多个靶序列进行单管，快速完成文库的构建，整个文库构建过程仅需要2～3小时，手动时间仅仅需要15～30分钟即可，结合高通量测序平台可以十分有效的解决目前对于临床上多种肿瘤疾病中临床样本基础上需要对多基因、多靶点检测这一难点，且成本低廉。 | ||||||
| 15 | 一种用于非小细胞肺癌基因突变检测的文库构建方法及试剂盒 | CN201611026504.6 | 2016-11-21 | CN106497920A | 2017-03-15 | 于竞; 毕书琳; 林木飞; 刘轶颖; 陈龙昀; 陈焱; 曾爽; 朱师达; 蒋慧 |
| 本发明公开了一种可用于非小细胞肺癌基因突变检测的优化的测序文库构建方法和试剂盒。方法包括：一管式反应完成基因组DNA打断至接头连接，连接产物扩增后与非小细胞肺癌相关基因目标区域探针进行杂交捕获，之后进行BGISEQ-500/1000平台测序及数据分析得到突变发生情况。基于一管式反应极大的优化了实验流程，减少操作复杂性和时间，降低了对临床样本起始量的要求；一次性可检测多基因多位点，覆盖点突变、插入缺失、结构变异及拷贝数变异，检测结果准确并弥补了PCR捕获方法无法一次性检测结构变异的不足，大大提升高通量测序应用于非小细胞肺癌基因突变检测的实效性。本发明的覆盖面广、性价比高，可为医师诊断、治疗和用药提供参考依据，适于大规模推广应用。 | ||||||
| 16 | 一种基于CRISPR/Cas9高通量技术筛选药物靶点基因的方法 | CN201610807508.1 | 2016-09-07 | CN106399377A | 2017-02-15 | 蒋征; 刘小乐 |
| 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9高通量技术筛选药物靶点基因的方法，首先建立sgRNA文库；然后用慢病毒包装sgRNA文库，并收集病毒；之后在癌细胞系中筛选sgRNA文库；再提取筛选所得细胞及筛选前细胞的基因组DNA；最后富集基因组DNA中的sgRNA。与现有技术相比，本发明对CRISPR/Cas细胞的筛选过程做了改进，利用被感染细胞的puromycin抗性，用简便的方法确定了病毒感染效率，确定了病毒MOI值；更重要的是，本发明极大优化了病毒包装方法，将病毒包装效率提高至常规方法的5倍以上，能够大大节省大规模的药物靶点筛选成本，用于推动癌症药物靶点筛选的产业化。 | ||||||
| 17 | 基于Ion Torrent测序平台融合基因检测文库的构建方法及融合基因检测的方法 | CN201610677918.9 | 2016-08-15 | CN106282163A | 2017-01-04 | 蒋智; 张振宇; 师文霞; 李晓敏; 夏贇; 高长欣 |
| 本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台融合基因检测文库的构建方法及融合基因检测的方法。其中，该构建方法包括以下步骤：S1，对样品DNA进行片段化，得到DNA片段；S2，对DNA片段进行末端修复及加碱基A；S3，连接序列已知的接头；S4，进行PCR扩增，得到样本核酸文库；S5，将样本核酸文库基于目标区域捕获平台的探针杂交捕获融合基因及伴侣基因的DNA片段；以及S6，将S5的产物通过PCR引入测序接头序列，得到融合基因检测文库。应用本发明的技术方案，解决了现有技术中Ion Torrent测序平台因RNA样本不合格导致无法检测基因融合及无法检测未知融合断点的融合类型问题。 | ||||||
| 18 | 一种基于多维Index的多重测序文库构建方法 | CN201610645867.1 | 2016-08-08 | CN106192023A | 2016-12-07 | 赵倍伦 |
| 本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种基于多维Index的多重测序文库构建方法。本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种对样品进行Index标记的多重测序文库构建方法，所述的多重测序文库构建方法基于多维Index设计，通过两轮PCR扩增，在每轮PCR扩增时对同一个样品引入1-2个Index，从而使得使用相对较少的Index数目，能够获得相对更多的Index组合，大大提高多重测序可混合分析的样品数量。本发明提供的方法能够实现使用40个Index完成对多达10000个不同样品进行标记。 | ||||||
| 19 | 人脂肪亚全能干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法 | CN201610630541.1 | 2016-08-04 | CN106190968A | 2016-12-07 | 王军霞; 殷鉴强; 刘定生; 谢再东 |
| 本发明公开了一种人脂肪亚全能干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法，包括以下步骤：人脂肪组织采集、亚全能干细胞分离和获得、亚全能干细胞培养与扩增、亚全能干细胞冻存、产品质量控制、干细胞建库和干细胞复苏年检；本发明使用的混合胶原酶能够有效的从人脂肪组织中分离出亚全能干细胞，组织消化均一，没有明显的组织残留，细胞活性好，贴壁快，均一性好；本发明的冻存液能够有效的维持细胞的活性，采用梯度降温盒冻存细胞不影响细胞活性，而且操作简单，方便，效率高。 | ||||||
| 20 | 一种EGFR基因超低频突变检测试剂盒 | CN201610387723.0 | 2016-06-03 | CN106048008A | 2016-10-26 | 王永利; 宋卓; 袁梦兮 |
| 本发明公开了用于检测待测核酸样本目标区域的引物组合物及其应用，其中该引物组合物包括：第一通用引物和第二通用引物，所述第一通用引物和所述第二通用引物的靶点位于所述目标区域的两端，分别用于构成测序文库的5’端和3’端；以及特异性引物组，所述特异性引物组包括n条特异性引物，各特异性引物的结构相同，均是从5’端至3’端依次包括第一核酸序列、连接序列和第二核酸序列。该引物组合物能够有效地用于检测待测核酸样本目标区域的序列信息，尤其是超低频突变的检测，且检测灵敏度高，结果准确可靠。 | ||||||
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