子分类：
| 序号 | 专利名 | 申请号 | 申请日 | 公开（公告）号 | 公开（公告）日 | 发明人 |
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| 161 | 一种皮肤来源的成纤维细胞的培养方法 | CN201610994328.9 | 2016-11-11 | CN106399230A | 2017-02-15 | 林峰 |
| 本发明涉及细胞分离培养技术领域，特别涉及成纤维细胞的分离培养方法。本发明提供一种皮肤来源的成纤维细胞的分离培养方法，包括如下步骤：1)采用两步酶消化法从人皮肤组织获得成纤维细胞；2)用DMEM和F12培养基并添加细胞生长因子EGF和/或bFGF培养成纤维细胞，DMEM培养基与F12培养基的比例为1:1。用DMEM/F12(1:1)培养基可有效促进成纤维细胞的增殖，保持成纤维细胞原有细胞形态，提高细胞前期胶原蛋白表达，EGF和bFGF能促进了成纤维细胞的增殖和胶原蛋白分泌的增加。 | ||||||
| 162 | 一种人类视网膜色素上皮细胞层的分离培养方法 | CN201610911776.8 | 2016-10-19 | CN106282096A | 2017-01-04 | 李宁; 谢磊; 范国平; 吕志刚; 方攀峰 |
| 本发明涉及一种人类视网膜色素上皮细胞的分离培养方法，属于生物医学技术领域。其通过缓冲液浸泡清洗、分离、酶溶液浸泡清洗、清洗、消化和培养重悬对RPE细胞进行分离培养。本发明利用生物加机械方法分离出胎儿来源的人类视网膜色素上皮细胞，即RPE细胞，并进行体外培养。本发明提供的对人类RPE细胞层分离培养方法步骤简单易操作；在细胞分离的过程中能最大限度的保存RPE细胞层的完整性；在细胞分离过程中能完整的将RPE细胞层与脉络层分离开，获得的细胞纯度高；后续培养中细胞纯度高、均一性高、增殖能力出色、能更早的分化成具有典型形态的细胞；为体外培养、扩增RPE细胞，治疗AMD等RPE细胞损伤提供了新来源。 | ||||||
| 163 | 一种脾脏终隔细胞原代分离培养方法 | CN201610833378.9 | 2016-09-20 | CN106244536A | 2016-12-21 | 常玉巧; 郭康; 马洁; 郭志坤; 李辞霞; 付海鹏; 郭永龙 |
| 本发明属于动物细胞培养技术领域，涉及一种脾脏终隔细胞原代分离培养方法。步骤如下：脾脏样品的预处理；酶解样品，获得终隔细胞悬液；终隔细胞悬液的细胞接种，制备原代细胞；原代细胞的传代扩大培养，制备传代细胞；固定传代细胞，完成大鼠脾脏终隔细胞的原代分离培养。本发明针对脾脏组织的结构特点，采用0.1%胶原酶I、0.125%胰蛋白酶和0.002%I型脱氧核糖核酸酶，联合消化法分离培养脾脏中的TCs，该方法得到的细胞纯度高，活力好，且传代后细胞形态稳定，活力高，可广泛用于后续相关TCs形态和功能实验的有效开展。 | ||||||
| 164 | 一种蜕膜间充质干细胞的制备方法 | CN201610742838.7 | 2016-08-26 | CN106190969A | 2016-12-07 | 全丽丽 |
| 本发明公开了一种蜕膜间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：1)取样及前处理；2)细胞分离；3)细胞传代培养；4)冻存。该方法是从蜕膜组织中制备得到蜕膜间充质干细胞的方法，在建立成熟且安全可靠的分离技术基础上，获得高纯度、高活率、无污染干细胞，并将其长期储存于液氮中，可经复苏做干细胞移植用，并有望逐渐代替价格昂贵的、难以寻找匹配相合的骨髓干细胞。 | ||||||
| 165 | 人脂肪亚全能干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法 | CN201610630541.1 | 2016-08-04 | CN106190968A | 2016-12-07 | 王军霞; 殷鉴强; 刘定生; 谢再东 |
| 本发明公开了一种人脂肪亚全能干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法，包括以下步骤：人脂肪组织采集、亚全能干细胞分离和获得、亚全能干细胞培养与扩增、亚全能干细胞冻存、产品质量控制、干细胞建库和干细胞复苏年检；本发明使用的混合胶原酶能够有效的从人脂肪组织中分离出亚全能干细胞，组织消化均一，没有明显的组织残留，细胞活性好，贴壁快，均一性好；本发明的冻存液能够有效的维持细胞的活性，采用梯度降温盒冻存细胞不影响细胞活性，而且操作简单，方便，效率高。 | ||||||
| 166 | 一种促进创伤再生修复的细胞制剂的制备方法 | CN201610569368.9 | 2016-07-19 | CN106190960A | 2016-12-07 | 张正亮 |
| 本发明公开了一种促进创伤再生修复细胞制剂的制备方法，按照如下步骤进行：将跟腱组织块剪碎并消化后，离心弃上清液，并将得到的肌腱干细胞群加入培养液中重悬后过滤，接种于培养板中培养，之后与富血小板血浆混合后加入生理盐水中配置成肌腱干细胞细胞制剂。通过分离培养大鼠肌腱干细胞，并将体外培养的肌腱干细胞混合富血小板血浆配置成细胞制剂，富血小板血浆中含有大量的生长因子，如PDGF、EGF、TGF-β1、IGF等，这些因子对肌腱的修复具有很大的促进作用，在体内富血小板血浆促进了肌腱细胞的增殖及I型、III型胶原蛋白的表达，而这些是肌腱的主要组成部分，实验结果为人体肌腱损伤修复起到了一定的指导作用。 | ||||||
| 167 | 一种快速获取外周血PBMC的方法 | CN201610483091.8 | 2016-06-24 | CN106119199A | 2016-11-16 | 钱鹏; 赵依妮; 许国贞; 刘振云 |
| 本发明公开了一种快速获取外周血PBMC的方法，包括如下步骤：将装有血液样本的塑料血袋放入离心管适配器中，配平后离心，除去上层血浆后，将中间的灰黄层取出，向取出的灰黄层中加入生理盐水稀释；将得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中所述得到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到外周血PBMC。本发明在处理全血使用过程中不需要剪断塑料血袋的血管，将血样放入离心管中再进行相关的操作，操作简便，对于大量人外周血PBMC分离不仅可减少操作步骤，且节约了操作时间、试剂耗材及试剂用量，有利于PBMC的分离和细胞的活率。 | ||||||
| 168 | 一种临床级脐带间质细胞提取制备方法 | CN201610570610.4 | 2016-07-19 | CN106085953A | 2016-11-09 | 张正亮 |
| 本发明公开一种临床级脐带间质细胞提取制备方法，包括下述顺序步骤：取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净，剔去血管，剥离华氏胶组织，将所得组织充分剪碎，加入α‑MEM培养液置于CO2培养箱培养，形成大小不等的细胞集落；取基础培养基DMEM/F12，并向其中添加血清、细胞因子白细胞介素3、粒细胞‑集落刺激因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β、胰岛素样生长因子1与血小板源性生长因子，然后接种细胞集落于培养基中，进行体外扩增；收集扩增后的脐带间质细胞，加入溶液混合并离心处理，取上样液进行浓缩，提取制得临床级脐带间质细胞。本发明提供的制备方法，能快速有效地增值提取脐带间质细胞，能够满足临床上对脐带间质细胞的需求。 | ||||||
| 169 | 一种胎盘绒毛板间充质干细胞及其提取方法 | CN201610527144.1 | 2016-07-05 | CN106085952A | 2016-11-09 | 黄海森 |
| 本发明公开了一种胎盘绒毛板间充质干细胞，其提取方法包括以下步骤：(1)获取胎盘绒毛板；(2)去除血管和绒毛组织；(3)清洗绒毛板至没有血色；(4)将绒毛板剪成0.5‑5mm2的组织微块，清洗；(5)加入含胰酶、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸酶的组织消化液消化；(6)过滤，离心；(7)培养；(8)当细胞融合度达到70‑90％时，用0.25％胰酶消化细胞；(9)传代培养；(10)检测；(11)冻存；(12)建库。该方法步骤简单，能快速从胎盘组织获取大量的间充质干细胞，分离过程中不需要太多清洗操作，也避免了抗生素的使用，分离得到的胎盘绒毛板间充质干细胞的纯度较高。 | ||||||
| 170 | 分离卵巢中不同种类单细胞的方法 | CN201610519416.3 | 2016-07-04 | CN106085950A | 2016-11-09 | 陈子江; 马金龙; 吕跃; 赵涵; 梁子君; 王成栋 |
| 本发明提供了用于分离哺乳动物早期卵泡获得单个卵母细胞和其单个颗粒细胞的方法。本发明的方法能够分离哺乳动物早期卵泡获得具有活性的单个卵母细胞及其相应颗粒细胞。本发明还提供了用于获得哺乳动物早期卵泡单个卵母细胞和其单个颗粒细胞的试剂盒。 | ||||||
| 171 | 一种衰老肾小管细胞的分选方法 | CN201610470775.4 | 2016-06-23 | CN106047794A | 2016-10-26 | 陈佳; 何娅妮; 付碧琼; 陈客宏 |
| 本发明涉及一种分选衰老细胞的方法，特别涉及一种应用DcR2抗体偶联免疫磁珠分选衰老肾小管细胞的分选方法。所述的方法是首先向待分选的细胞液中加入DcR2抗体，使DcR2抗体与细胞结合，得预处理的分选细胞液；然后向预处理的分选细胞液中加入免疫磁珠，用免疫磁珠分离方法进行分离，免疫磁珠吸附的部分为衰老肾小管细胞。该方法可分选出高纯度的衰老肾小管细胞，并进一步证实分选出的衰老肾小管细胞具有生物学活性。 | ||||||
| 172 | 一种提高DC-CIK细胞制剂活率的方法 | CN201610482968.1 | 2016-06-24 | CN106011062A | 2016-10-12 | 钱鹏; 赵依妮; 许国贞; 刘振云 |
| 本发明公开了一种提高DC‑CIK细胞制剂活率的方法，包括如下步骤：将培养扩增后的T细胞进行第一次离心，得到一次离心细胞；将一次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第二次离心，得到二次离心细胞；将二次离心细胞用生理盐水清洗后，进行第三次离心，得到DC‑CIK细胞制剂。本发明可有效去除死细胞，增加收获细胞制剂的细胞活率，获得的细胞活率能大于90％，有利于临床回输。 | ||||||
| 173 | 一种高纯度经血来源干细胞的制备方法 | CN201610422697.0 | 2016-06-15 | CN106011052A | 2016-10-12 | 葛剑云; 汪土根; 刘心星; 黄启明 |
| 本发明提供一种高纯度经血来源干细胞的制备方法：使用经血采集套装收集经血；收集中间层单个核细胞；加入磁珠缓冲液，充分混匀后加入FcR试剂，孵育后再加入交联抗人抗体的微磁珠试剂，混匀后孵育；再加入磁珠缓冲液，洗涤、离心后重悬于磁珠缓冲液中；加入到预先放置于磁性分选架的分选柱中，使用磁珠缓冲液冲柱洗涤；将分选柱取出，加入1.5‑2ml磁珠缓冲液，收集细胞悬液；将所得悬液用经血干细胞原代培养基培养，每2‑3天半量换液一次；培养5‑7天后消化收集贴壁细胞，用经血干细胞传代培养基继续扩增培养；消化所得细胞，加入冻存液进行冻存。该方法获得的经血来源干细胞纯度高，生长周期短，自我更新能力强、污染率低。 | ||||||
| 174 | 敖汉细毛羊毛囊细胞系建立方法 | CN201610352736.4 | 2016-05-24 | CN106011049A | 2016-10-12 | 贺建宁; 杨峰; 赵金山; 柳楠; 李和刚; 巨安庆 |
| 本发明公开了一种敖汉细毛羊毛囊细胞系建立方法，属于生物技术领域，用40日龄的敖汉细毛羊皮肤作为实验材料，通过对皮肤进行体外培养，将分离出来的毛囊细胞进行生物学特性分析及鉴定，包括形态学观察、冻存、复苏及过程中细胞活力检测、生长动力学分析及生长曲线绘制、核型分析、波形蛋白免疫组化以及微生物污染检测等，以获得活性较高活力较强的细胞，进而建立敖汉细毛羊皮肤毛囊细胞细胞系。细胞活性更好，更利于后续的试验。降低了消化过程中胰蛋白酶的用量，同时缩短了消化时间。同时，细胞冻存保护液采用(80％FBS+20％DMSO)：细胞原液＝4：1，对细胞冻存保护效果在敖汉细毛羊成纤维细胞上效果更好。 | ||||||
| 175 | 一种采用血清替代物建立人脐带间充质干细胞库的方法 | CN201610311244.0 | 2016-05-11 | CN105970300A | 2016-09-28 | 芦慧颖; 张怡; 孟庆雪; 刘春香 |
| 一种采用血清替代物建立人脐带间充质干细胞库的方法，它涉及一种建立干细胞库的方法。步骤如下：分离脐带华通胶，加入无血清培养基中培养，每5天更换一次培养基，待细胞长满至70％，传代；重新收集组织块，加入无血清培养基中二次培养，每5天更换一次培养基，待细胞长满至70％，传代。经传代培养，冻存后建立脐带间充质干细胞库。本发明采用了无血清培养、冻存体系建立细胞库，以及组织块二次爬片方法。本发明优势在于有效利用所有组织，让细胞尽可能的爬出，获得细胞数量是传统方法的2倍。本发明细胞培养体系采用血清替代物替代牛源血清，胰酶替代物替代猪源胰酶，有效的避免了动物源性对人源的污染，省去了检测牛源、猪源的质控环节。 | ||||||
| 176 | 一种胎盘多能干细胞提取制备方法 | CN201610570529.6 | 2016-07-19 | CN105969722A | 2016-09-28 | 张正亮 |
| 本发明公开一种胎盘多能干细胞提取方法，包括以下步骤：无菌条件下获取胎盘组织，经PBS反复冲洗、碘伏消毒、生理盐水充分冲洗胎盘，至少三次；将胎盘组织剪成1×1×1mm3碎片，置于无菌离心管中，利用0.25％胰蛋白酶和0.2％Ⅳ型胶原酶消化胎盘组织碎片，离心收集得细胞沉淀，将细胞沉淀重悬于含体积分数为10％的胎牛血清α‑MEM培养基，常规方法冻存；流式细胞学分析：CD73、CD90和CD105细胞表达。本发明在无菌条件下获取胎盘，接着对胎盘进行PBS反复冲洗、胎盘表面消毒、生理盐水冲洗胎盘一系列预处理，保证获取的胎盘新鲜，便于保证胎盘组织中多能干细胞的活性。 | ||||||
| 177 | 一种分离培养动物胚胎肝干细胞方法 | CN201610504748.4 | 2016-06-30 | CN105925525A | 2016-09-07 | 石毅; 董欣; 熊丽东 |
| 本发明提供了一种分离培养动物胚胎肝干细胞方法。所述方法中，通过将动物胚胎肝脏取出，再进行培养离心纯化，再进一步加入酶除去成纤维细胞，并重复纯化培养，从而能够简单便捷的得到具有高纯度的肝干细胞，进而解决了现有技术中分离纯化培养胚胎肝干细胞操作复杂、成本高的技术问题。本发明方法具有操作简便、效率高，培养得到的肝干细胞纯度高、活性好、增殖速度快、性状稳定等优点。同时也能够为肝脏疾病的基础研究和临床应用提供大量的细胞来源。 | ||||||
| 178 | 一种赤眼鳍条细胞系及其建立方法与应用 | CN201610277718.4 | 2016-04-29 | CN105925523A | 2016-09-07 | 肖调义; 邓亚林; 乔庆; 李伟; 赵鑫; 周智愚; 何美凤; 金生振 |
| 一种赤眼鳟鱼鳍条细胞系及其建立方法与应用，该赤眼鳟鱼鳍条细胞系的保藏号为CCTCC NO：C201642，是赤眼鳟的尾鳍经过原代培养、传代培养所得，所用的培养基为Leibovitz’sl‑15培养所制得。所述赤眼鳟鱼鳍条细胞系的生物学特性包括：细胞为成纤维样细胞，细胞在含有20％体积分数的胎牛血清的Leibovitz’sl‑15培养基在25℃恒温培养箱中呈最适状态。在此生长条件下复苏后的细胞经胎盼蓝染色，细胞的成活率达82.5％，细胞呈成纤维样，生长旺盛，其特征染色体数目为48条。另外，将质粒pEGFP‑N1转入该细胞系中表达显示荧光。本发明的细胞系能应用于支持草鱼出血病病毒的生长与复制中，不仅可以用于外源基因的表达，还可以运用于毒理学。 | ||||||
| 179 | 具有抗衰老功效的脐带间充质干细胞注射液及其制备方法 | CN201610228362.5 | 2016-04-13 | CN105920042A | 2016-09-07 | 朱兵锐 |
| 本发明提供了一种具有抗衰老功效的脐带间充质干细胞注射液及其制备方法，其包含如下数量或浓度的组分：脐带间充质干细胞：5×105～10×105/ml；人血白蛋白：2wt％；复方电解质溶液：98wt％。本发明生产出的脐带间充质干细胞可以快速地修复和替换受损的细胞和组织，具有扩增和定向分化的特性，细胞接收到受损部位信号会归巢到受损部位，在受损部位扩增并诱导分化及促进自身干细胞恢复功能，快速的修复和替换受损细胞和组织；及时迅速的分泌细胞因子、生长因子和组织相关因子，从而改善机体血液循环，增强代谢功能，提高组织修复能力、提高免疫力，从而到达抗衰老目的。 | ||||||
| 180 | 一种原代小鼠或大鼠神经元的分离培养方法 | CN201610277888.2 | 2016-04-28 | CN105907717A | 2016-08-31 | 王晓冰 |
| 本发明公开了一种原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法，开创性的采用了活检针采取处理后的组织，使得采样直接针对目的细胞，不但直接有效，同时巧妙地避免了表面包膜细胞以及细菌的混入，降低了细胞、细菌污染的同时，大大提高了目的细胞的纯度。同时，本发明的原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法，使用特殊制备的复合酶消化液，相比传统单一的胶原酶预热消化，不但避免了对组织过度消化过度吹打所导致的细胞活性低、得率差的问题，而且消化的更均匀透彻。采用预贴壁以及原代培养早期加入Laminin的方式，可以极大地促进神经元的贴壁、神经突触的生长以及神经网络的形成，从而进一步提高神经元的得率及长期存活率。 | ||||||
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