序号 专利名 申请号 申请日 公开(公告)号 公开(公告)日 发明人
141 一种小鼠滑膜细胞的分离及培养方法 CN201610415862.X 2016-06-07 CN107475179A 2017-12-15 何刚; 张亚洲; 蒋敏; 齐来俊
发明提供了一种小鼠细胞的分离及培养方法,包括以下步骤:(1)组织处理器械消毒;(2)选取1~2月的雄性BALB/c小鼠,断颈处死,用手术剪分离关节囊的滑膜层和纤维层,然后取出滑膜层组织,将组织放入预冷无菌含双抗的PBS液中洗涤数次除去血渍和脂肪组织;(3)剪碎组织,并用预热的II型胶原酶和胰蛋白酶分别消化;(4)终止消化,离心,弃上清;(5)人工贴壁法接种到包被后的培养瓶;(6)孵育1~2h后,置于37℃、5%CO2环境中培养;(7)细胞形态学观察;(8)细胞传代培养;(9)细胞鉴定。本发明提供的种小鼠滑膜细胞的分离及培养方法,操作简单,所得细胞数量多,成活率高,是一种理想的小鼠滑膜细胞原代分离与培养方法,为实验提供可靠的细胞资源。
142 一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法及储存方法 CN201710443698.8 2017-06-13 CN107435039A 2017-12-05 韦玉军; 李航; 陆宝石; 苏军; 吴远航
发明公开了一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法及储存方法,具体步骤如下:合成油酸-Fe3O4;Fe3O4/PVAc磁性微球制备;(Fe3O4/PVA)/SiO2磁性微球的制备;将0.4ml 3-丙基三乙烷滴加到磁性微球(Fe3O4/PVA)/SiO2的乙醇悬浮液中,室温下搅拌7h氨基化,利用外加磁场从反应介质中分离出,并用乙醇溶液对其清洗五次备用;将氨基化的磁性纳米颗粒加入到50ml3%戊二的PBS溶液中,37℃下搅拌3h,通过氨基与醛基之间形成的Schiff在磁性颗粒表面修饰上醛基官能团,反应结束后利用外加磁场从反应介质中分离出颗粒,用PBS溶液反复冲洗产物,将颗粒分散在PBS溶液中,终浓度为8μg/μl;抗体的肼基化修饰;免疫磁珠的制备,储存方法为:置于4℃下保存。本发明具有稳定性好、特异性强等优点。
143 一种构建验证视网膜感光细胞特异性表面蛋白的方法 CN201610290828.4 2016-05-04 CN107345219A 2017-11-14 王晓冰
发明涉及一种构建验证视网膜感光细胞特异性表面蛋白的方法,利用本发明所述方法可以对纯化的感光细胞前体细胞进行分析筛选,找到一种感光细胞所特异的表面蛋白,其特异性表达在人胚胎干细胞以及人多能干细胞来源的视网膜感光细胞膜表面;从而利用该特异性表面蛋白对诱导的人胚胎干细胞或人多能干细胞来源的感光细胞进行纯化。通过表面蛋白筛选获得的纯化感光细胞,可以避免转基因或者应用多种小分子化合物为诱导剂所带来的潜在危险。这一关键科学问题的解决,将加快干细胞向临床转化的过程,符合医学研究的需要,为人类视网膜相关疾病(如青光眼、黄斑性眼病等)的细胞替代治疗奠定了基础
144 单个多能干细胞培养 CN200880104926.8 2008-06-30 CN101978044B 2017-10-24 S·内尔逊
发明涉及多能干细胞培养领域以及易于在工业平培养多能干细胞的方法。
145 外周血单个核细胞的分离方法 CN201710702562.4 2017-08-16 CN107254438A 2017-10-17 孙俊; 张金保; 陈燕
发明公开了一种外周血单个核细胞的分离方法,包括以下步骤:(1)将外周血与杜氏磷酸缓冲液混匀得到稀释后的外周血;将淋巴细胞分离液装于离心管中并遮光保存;(2)倾斜装有淋巴细胞分离液的离心管,使淋巴细胞分离液的液面与平面呈50°~70°;将稀释后的外周血沿离心管的侧壁加入到淋巴细胞分离液中得到混合液;稀释后的外周血与淋巴细胞分离液的体积比为1~2:1;(3)装有混合液的离心管离心分离并取白膜层,即得到外周血单个核细胞层。该分离方法,操作简单,适合大量样本的分离;能够实现无菌操作,得到的外周血单个核细胞适宜临床应用;对分离的外周血单个核细胞的损伤很小,细胞得率高,分离过程中也不会受到干扰。
146 一种人脐带组织消化方法 CN201710241722.X 2017-04-14 CN107043746A 2017-08-15 沈晓延
发明公开了一种人脐带组织消化方法,从脐带中获取华通氏胶,并用不同的组织消化酶进行两次消化,然后进行过滤、离心获得所需要的间充质干细胞。本发明提出的一种人脐带组织消化方法采用两次消化,一次消化中将胶原酶、透明质酸酶和DNA酶进行复配使用,对脐带华通氏胶进行消化,该消化酶可有效降低消化粘稠度,对细胞损伤小;二次消化中采用胰酶,使细胞分离的更加完全。本发明提出的方法避免了胶原酶和胰酶等消化酶长期消化对细胞体的影响,最终得到的脐带间充质干细胞获取率高且具有较高的活性和分化潜能。
147 脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用 CN201710202124.1 2017-03-30 CN107007627A 2017-08-04 王群; 赵汇; 张利宁; 朱法良; 郭春; 潘真真
发明公开了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用,所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成:(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中,以产生细胞悬浮液;(2)离心细胞悬浮液,以形成细胞沉淀,分离沉淀,洗涤,得到含有脂肪来源间充质干细胞的脂肪组织基质细胞;(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养,收集扩增培养后的上清液进行浓缩,向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂,即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。本发明的脂肪来源间充质干细胞外泌体能够抑制腹内脂肪组织巨噬细胞的浸润活化,并抑制促炎细胞因子的产生和释放,对脂肪组织炎症具有很好的抑制效果。
148 脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用 CN201710202148.7 2017-03-30 CN106974937A 2017-07-25 王群; 赵汇; 张利宁; 朱法良; 郭春; 张慧颖
发明公开了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用,所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成:(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中,以产生细胞悬浮液;(2)离心细胞悬浮液,以形成细胞沉淀,分离沉淀,洗涤,得到含有脂肪来源间充质干细胞的血管基质成分;(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养,收集扩增培养后的上清液进行浓缩,向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂,即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。本发明的脂肪来源间充质干细胞外泌体可有效缓解胰岛素抵抗和代谢紊乱,在一定程度上抑制代谢综合征以及非酒精性脂肪肝的发生发展。
149 一种集中捕获的磁分选装置及其分选方法 CN201710151342.7 2017-03-14 CN106957798A 2017-07-18 樊嘉; 周俭; 杨欣荣; 孙云帆
发明公开了一种集中捕获的磁分选装置,包括磁芯和屏磁外鞘,磁芯为柱状磁体,磁体的磁极分别位于柱的两端,屏磁外鞘由软磁材料制得,包覆磁芯,仅露出磁芯一个磁极处的端面。该结构的磁分选装置具有装置简单、可产生磁场聚集平面的特点,同时可快速、完全、集中吸附目标样品中的磁性颗粒。
150 一种包埋功能化纳米纤维膜的微流控芯片及其应用 CN201710166242.1 2017-03-20 CN106916725A 2017-07-04 朱晓玥; 王梦媛; 徐刚伟; 尹迪; 肖云超; 魏延传; 史向阳
发明涉及一种包埋功能化纳米纤维膜的微流控芯片和应用,微流控芯片包括玻璃底板、样品注入口、细胞捕获通道和储液池,所述功能化纳米纤维膜位于细胞捕获通道和玻璃底板之间。应用于去除白细胞及阴性分选循环肿瘤细胞。本发明操作方法简单,可在短时间完成肿瘤细胞的无标记、无损伤、高通量分选,循环肿瘤细胞的分离效率高,具有很好的应用前景。
151 一种人脂肪组织消化酶及其制备方法 CN201710241718.3 2017-04-14 CN106834259A 2017-06-13 沈晓延
发明公开了一种人脂肪组织消化酶,包括按照重量份计的如下组份:胶原酶30‑50份、DNA酶0.1‑0.8份、青霉素4‑10份、链霉素15‑23份。本发明提出的一种人脂肪组织消化酶,在胶原酶中添加了DNA酶,DNA酶防止分离细胞时细胞黏附聚集,可有效降低消化粘稠度,缩短了脂肪组织的消化时间,分离得到的脂肪干细胞具有优良的增殖活性和分化能;此外本发明的组织消化酶中还添加青霉素和链霉素,可有效防止样本采集过程中会污染,抑制细菌滋生。
152 一种胎盘源性干细胞的分离方法及其应用 CN201611240190.X 2016-12-29 CN106754680A 2017-05-31 王立生; 肖凤君; 王华; 杨月峰; 黄玉香; 高宏
发明涉及一种新的胎盘源性干细胞的分离方法及其在治疗缺血性疾病中的应用。具体而言,在本发明中,利用一种新的复合酶液体组合物,有效地分离胎盘源性干细胞。胎盘源性干细胞经过体外基因修饰后,能够在动物模型中诱导血管新生,通过改善侧枝循环,起到治疗缺血的效果。
153 一种干细胞制剂及其制备方法和应用 CN201710161077.0 2017-03-17 CN106729642A 2017-05-31 葛啸虎; 陈海佳; 王一飞; 卢瑞珊; 王小燕
发明涉及生物治疗领域,公开了一种干细胞制剂及其制备方法和应用,所述干细胞制剂对黄斑性病变具有良好的疗效。本发明公开的干细胞制剂,包括:骨髓间充质干细胞、神经样细胞、白蛋白溶剂。本发明公开了所述干细胞制剂的制备方法,包括以下步骤:(1)将所述白蛋白和溶剂混合,配制白蛋白悬液;(2)用步骤(1)制备得到的白蛋白溶液重悬所述骨髓间充质干细胞,得到所述骨髓间充质干细胞制剂;(3)用步骤(2)制备得到所述骨髓间充质干细胞制剂重悬神经样细胞,制得产品。本发明还公开了所述干细胞制剂或所述制备方法制得的干细胞制剂在制备治疗黄斑性病变生物制剂中的应用。
154 一种高效率循环肿瘤细胞富集方法 CN201611180054.6 2016-12-19 CN106701684A 2017-05-24 毕国明
发明提供了一种循环肿瘤细胞的富集方法及其应用,适用于生物技术及医学领域。该循环肿瘤细胞的富集方法包括:将血液样品与通过配体特异性结合白细胞的微球进行孵育、将孵育后样品进行密度梯度离心,以及将上清通过滤膜截留或者进一步离心。本发明涉及的循环肿瘤细胞富集方法具有富集效率高、灵敏度高,且操作简便、成本低廉的特点。富集后的循环肿瘤细胞没有经过任何标记,能够保持循环肿瘤细胞的原始状态,便于进行后续分析。
155 一种白细胞或单核细胞收集用冲洗液及收集装置 CN201611181374.3 2016-12-20 CN106668970A 2017-05-17 杨海兵; 李剑平
发明公开了一种白细胞或单核细胞收集用冲洗液及收集装置,所述冲洗液中包括如下组分,氯化钠、氯化、枸橼酸钠、磷酸二氢钠、葡萄糖白蛋白及甘露醇,其中,每1000ml保护液中含有氯化钠7.02~8.95g;氯化钾0.13~0.21g;枸橼酸钠2.52~3.57g;磷酸二氢钠3.80~5.25g;葡萄糖3.05~4.25g;白蛋白20~32g;甘露醇3.22~4.02g;将上述成分混合后,在1000ml容量瓶内加注蒸馏稀释至1000ml。本发明的冲洗液,其具有与血浆类似的离子环境、pH环境和营养成分,有利于延长所收集到的白细胞或单核细胞的存活时间,同时还能提升白细胞或单核细胞的收集量;而该收集装置结构简单,可以在线收集白细胞或单核细胞,且收集效率高可达90%;存活率高可达80%,收集后的血液可保存利用或者回输回自体,有效避免了血液的浪费。
156 一种自体软骨细胞的原代分离方法 CN201710053459.1 2017-01-22 CN106635971A 2017-05-10 陈海佳; 葛啸虎; 王一飞; 罗二梅; 王小燕
发明涉及细胞领域,公开了一种自体软骨细胞的原代分离方法。本发明所述原代分离方法为自体软骨组织预处理后,剪碎,先用胰蛋白酶‑EDTA溶液处理,然后用Ⅱ型胶原酶溶液消化,待大部分细胞游离时,细胞筛网过滤,离心弃上清,收集细胞用DMEM高糖完全培养基重悬后培养3天,收集贴壁细胞即得原代软骨细胞。本发明所述原代分离方法可以提高软骨细胞的得率,同时保证软骨细胞活较好,分离获得的原代软骨细胞扩增培养后可以满足临床上自体软骨细胞或组织移植的要求。
157 获得底蜕膜间充质干细胞的方法及试剂 CN201610983608.X 2016-11-08 CN106520688A 2017-03-22 裴雪涛; 岳文; 贾雅丽; 苏如玉; 庞晓敏; 曹宁
发明公开了获得底蜕膜间充质干细胞的方法及试剂盒。所述获得底蜕膜间充质干细胞的方法包括:利用混合酶制剂将底蜕膜进行消化处理,得到消化产物;以及从所述消化产物中分离所述底蜕膜间充质干细胞,其中,所述混合酶制剂包括:胰酶;胶原酶Ⅳ;以及胶原酶Ⅱ。本发明的获得底蜕膜间充质干细胞的方法能够获得大量、纯度较高且活性较高的底蜕膜间充质干细胞。
158 获得绒毛膜间充质干细胞的方法及试剂 CN201610983609.4 2016-11-08 CN106434544A 2017-02-22 裴雪涛; 岳文; 贾雅丽; 苏如玉; 曹宁
发明公开了获得绒毛膜间充质干细胞的方法及试剂盒。所述获得绒毛膜间充质干细胞的方法包括:利用混合酶制剂将绒毛膜进行消化处理,得到消化产物;以及从所述消化产物中分离所述绒毛膜间充质干细胞,其中,所述混合酶制剂包括:胰酶;胶原酶Ⅳ;以及胶原酶Ⅱ。本发明的获得绒毛膜间充质干细胞的方法能够获得大量、纯度较高且活性较高的绒毛膜间充质干细胞。
159 一种口腔鳞癌细胞株、其制备方法及应用 CN201610795728.7 2016-08-31 CN106399252A 2017-02-15 祁胜财; 陈万涛; 吴祥冰; 曹巍; 严明; 朱雪琴; 王晓宁
发明提供了一种口腔鳞癌细胞株、其制备方法及应用,所述的口腔鳞癌细胞株来源于含4-硝基喹啉-1化物饮诱导MAL-/-C57BL/6小鼠口腔癌组织。通过对肿瘤组织原代培养,所得肿瘤细胞在体外持续传代培养并生长活跃。通过单克隆筛选的方法获取了此口腔鳞癌细胞株,该细胞株体外可持续培养且生长活跃,分析了该细胞生物学特性:细胞增殖,生长曲线,细胞周期和凋亡,平板克隆和迁移,以及裸鼠体内成瘤和转移能。结果证实,该口腔鳞癌细胞株具有典型的肿瘤细胞生物学特性,可作为细胞模型研究口腔癌的发生、发展和转移的机理。可将其作为工具用于筛选或研制抗癌药物。
160 一种促进脂肪干细胞生长的培养方法 CN201611058563.1 2016-11-28 CN106399236A 2017-02-15 谢海涛; 张严冬; 李相鲁
发明涉及一种促进脂肪干细胞生长的培养方法,包括以下步骤:采集脂肪组织,用洗涤液进行洗涤,去除肉眼可见的血管和纤维部分;将脂肪组织破碎成体积为0.5-1.5mm3的组织,用洗涤液清洗若干次至洗出液清亮;加入胶原酶,在37℃温度下均匀震荡消化55-100分钟,使脂肪细胞充分消化,过滤,去除表层脂肪,获得含有脂肪干细胞的滤液,用离心机分离,沉淀即为脂肪干细胞群;将脂肪干细胞群重悬浮;将脂肪干细胞群重悬液置于培养瓶,加入培养液,以后每24小时更换培养液一次,待细胞生长达到80%融合,在培养瓶中加0.25%胰酶-EDTA进行消化获得培养后的脂肪干细胞,其具有纯度高、增殖能强的特点。
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