用于治疗癌症的药物组合
阅读：1064发布：2020-07-26
专利汇可以提供用于治疗癌症的药物组合专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种药物组合，其包括(A)：多不饱和 脂肪酸 和(B)： 化学 治疗 剂化合物，其用以同时、分开或依序用于治疗人类患者的癌症。，下面是用于治疗癌症的药物组合专利的具体信息内容。
1.一种药物组合，其包括：
(A)：作为式COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)多不饱和脂肪酸的化合物、其药学上可接受的盐或其组合和
(B)：化学治疗剂化合物，其中化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
环磷酰胺；
美法仑(Melphalan)；
多西他赛(Docetaxel)；
紫杉醇；
Nab-紫杉醇；
卡铂(Carboplatin)；
顺铂；
奥沙利铂(Oxaliplatin)；
甲氨蝶呤
培美曲塞(Pemetrexed)；
硫唑嘌呤；
卡培他滨(Capecitabine)；
氟尿嘧啶；
巯嘌呤；
吉西他滨(Gemcitabine)；
博来霉素(Bleomcycin)；
放线菌素；
长春新碱(Vincristine)；
长春碱(Vinblastine)；
长春瑞滨(Vinorelbine)；
视黄酸；
替莫唑胺(Temozolomide)；
道诺霉素(Daunorubicin)
阿霉素(Doxorubicin)；
伊立替康(Irinotecan)；和
拓扑替康(Topotecan)
其用以同时、分开或依序用于治疗人类患者的癌症。
2.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
多西他赛；
紫杉醇；
Nab-紫杉醇；
卡铂；
顺铂；
奥沙利铂；
甲氨蝶呤
培美曲塞；
吉西他滨；
博来霉素
视黄酸；
替莫唑胺；
阿霉素；
伊立替康；和
拓扑替康。
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)的钠盐。
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
肺癌；
非小细胞肺癌；
小细胞肺癌；
鳞状细胞癌；
腺癌；
子宫内膜癌；
胰腺癌；
胶质母细胞瘤；
乳腺癌；
头颈癌；
神经母细胞瘤；和
胆管癌。
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
非小细胞肺癌；
鳞状细胞癌；
子宫内膜癌；
胰腺癌；
胶质母细胞瘤；
乳腺癌；
神经母细胞瘤；和
胆管癌。
6.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中
化合物(B)是多西他赛，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
化合物(B)是视黄酸，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌，优选非小细胞肺鳞癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是培美曲塞和顺铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是子宫内膜癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
化合物(B)是紫杉醇和吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是吉西他滨和Nab-紫杉醇，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
化合物(B)是阿霉素酸，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌；
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌；
化合物(B)是拓扑替康，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
化合物(B)是伊立替康，并且所述癌症是神经母细胞瘤；或
化合物(B)是替莫唑胺，并且所述癌症是神经母细胞瘤。
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中
化合物(B)是多西他赛，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
化合物(B)是视黄酸，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌，优选非小细胞肺鳞癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是培美曲塞和顺铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
化合物(B)是紫杉醇和吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是吉西他滨和Nab-紫杉醇，并且所述癌症是胰腺癌；
化合物(B)是阿霉素酸，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌；或
化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌。
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是晚期子宫内膜癌，优选晚期子宫内膜癌；
或
化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌。
9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(A)经口施用。
10.根据权利要求9所述的药物组合，其中化合物(A)的施用剂量是1200mg到1400mg的剂量。
11.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(A)和化合物(B)两者的单一组合物。
12.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)经口施用。
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)的所述施用剂量是每天200mg到2000mg的总剂量。
14.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中
化合物(B)是多西他赛，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是紫杉醇，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是卡铂，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是顺铂，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是吉西他滨，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是Nab-紫杉醇，并且其经由输注混悬液静脉内施用；
化合物(B)是替莫唑胺，并且其经口施用；
化合物(B)是伊立替康，并且其经由输注溶液静脉内施用；
化合物(B)是阿霉素，并且其静脉内施用；或
化合物(B)是拓扑替康，并且其经由输注溶液静脉内施用。
用于治疗癌症的药物组合
技术领域
背景技术
[0003] 所述脂肪酸衍生物化合物具有下式：
[0004] COOR1-CHR2-(CH2)a-(CH＝CH-CH2)b-(CH2)c-CH3
[0005] 一种优选化合物的实例是：
[0006] COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(182A1)
[0007] 文章“Erazo等人；《临床癌症研究(Clinical Cancer Research)》；22(10)，2016年5月15日”中进一步详细描述了上述化合物(182A1)——在本文中将本化合物称为
“ABTL0812”，并且在本文中使用了本术语。
“ABTL0812”，并且在本文中使用了本术语。
[0008] 所述文章描述了ABTL0812诱导自噬介导的癌细胞死亡而不活化细胞凋亡。文章写道：
[0009] [p2515]：
[0010] “当前大多数的抗癌治疗均能活化凋亡，而对化学治疗的耐药性是癌症的主要挑战(24)。自噬介导的细胞死亡已成为杀死癌细胞而不诱导对凋亡诱导药物的耐药性的一种替代方法(25)。”
[0011] [p2517]：
[0012] “另一方面，mTORCI活化通常与对抗肿瘤药物的耐药性相关(6)。由于ABTL0812是Akt/mTORC1轴的有效抑制剂，因此将其与标准化疗药物组合施用可以证明对治疗耐药或凋亡难治性肿瘤有效。”
[0013] 在本申请的提交日，本申请人的网页(AbilityPharma-www.abilitypharma.com)包括新闻部分(本申请的所有发明人已将所有本文相关权利转让给了本申请和2017年5月16日的EP17382282.6优先权申请的申请人——换句话说，以下讨论的本申请人的网页公布内容可以被视为所谓的“源自发明人的公开内容”——(即公开的主题必须归归属于发明人、一个或多个共同发明人、或直接或间接从发明人或共同发明人获得主题的另一人)。
[0014] 2016年11月22日的新闻写道：
[0015] “加泰罗尼亚生物制药公司Ability Pharmaceuticals，SL今天宣布了其首个2期临床试验的开启及其新型靶向抗癌剂ABTL0812，以评估其作为一线治疗剂与紫杉醇和卡铂组合在80例晚期或复发性子宫内膜癌或肺鳞癌患者中的功效和安全性(……)
[0016] 在临床前癌症模型中，ABTL0812作为单一试剂有效，在多种癌症类型(肺癌、子宫内膜癌、胰腺癌和神经母细胞瘤)中均具有出色的安全性。在这些模型中，所述化合物还与化学治疗剂(紫杉烷、铂化合物和吉西他滨)具有协同作用，而不会增加其毒性。”[0017] 2016年12月14日的新闻写道：
[0018] “在临床前研究中，ABTL0812作为单一试剂已在胰腺癌中表现出功效，并且与紫杉烷、铂化合物和吉西他滨组合则表现出协同作用(8到90倍)，其诱导肿瘤消退而不增加与化学治疗相关的毒性(……)
[0019] ABTL0812目前处于2期，作为一线治疗剂与化学治疗剂组合，用于子宫内膜癌或肺鳞癌患者。”
[0020] 关于ABTL0812化合物与其它化学治疗剂的组合使用——上述Erazo文章和申请人(AbilityPharma)公布的新闻均未公开任何有效的实验数据——即与组合相关的陈述可以仅被视为是没有任何有效的可验证实验数据的支持的陈述。
[0021] 已公布的新闻是指II期研究——如本领域所知，正在进行II期研究这一事实是指I期研究已经结束，并且根据本信息，技术人员只能得出有关在人类中的安全性和耐受性的结果以及药代动力学研究都是积极的——即这没有提供有关在人类患者中可能产生的治疗作用的信息，特别是没有提供有关任何可能的组合协同作用的信息。技术人员仅在完成II期试验后才能知道药物是否治疗有效的结果评估——在本申请提交之日，未公布来自II期试验的任何本文相关实验数据。
发明内容
[0022] 本发明要解决的问题是提供一种改善的癌症治疗。
[0023] 如上所讨论，化合物COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3在本文中被称为ABTL0812。
[0024] 本文的工作实例提供了许多详细的实验数据，表明了上面讨论的ABTL0812化合物与其它化学治疗剂的组合使用所相关的显著协同作用。
[0025] 如本文进一步详细讨论——本文提供的实验数据基于已建立的体外和体内(例如，小鼠)实验测试——因此，基于本文提供的实验数据，可以在人类癌症患者中获得本文相关的协同作用是可信/可靠的。
[0026] 本文的实例4讨论了已从人类关键试验获得的初步结果——这些结果表明，在人类中也存在ABTL0812化合物与紫杉醇和卡铂的组合在晚期子宫内膜癌或鳞状细胞癌患者中的使用所相关的协同作用，从这一意义上来说，已获得的人类临床试验是积极的。
[0027] 基于现有技术的知识，技术人员不能以合理的成功预期预见本文实验描述的显著协同作用。
[0028] 如以上关于本申请人(AbilityPharma)的网页公开内容所讨论，这些网页公开内容中的与组合相关的陈述可以仅被视为是没有任何有效的可验证实验数据的支持的陈述——显然，基于这些网页公开内容，可以在人类癌症患者中获得本文相关的协同作用是可信/可靠的。
[0029] 简而言之，本文的工作实例尤其说明了以下方面：
[0030] 实例1：-体外实验：
[0031] 1.1：ABTL0812和多西他赛在代表性非小细胞肺腺癌细胞系中具有体外协同作用，其中ABTL0812使多西他赛的IC50降低了80倍以上——即大大增加了多西他赛细胞毒性；
[0032] 1.2：ABTL0812和紫杉醇在4种不同的肺癌细胞系中具有体外协同作用，其中ABTL0812取决于细胞系使紫杉醇的IC50降低了2到7倍，即增加了紫杉醇细胞毒性；
[0033] 1:3：ABTL0812和吉西他滨在代表性胰腺癌细胞系中具有体外协同作用，其中ABTL0812使吉西他滨的IC50降低了7倍——即大大增加了吉西他滨细胞毒性；
[0034] 1:4：ABTL0812和卡铂在代表性子宫内膜癌细胞系中具有体外协同作用，其中ABTL0812使卡铂的IC50降低了3倍——即增加了卡铂细胞毒性；
[0035] 1:5：ABTL0812和视黄酸在代表性神经母细胞瘤癌细胞系中具有体外协同作用；
[0036] 1:6：ABTL0812和紫杉醇在代表性乳腺癌细胞系中具有体外协同作用，其中ABTL0812使紫杉醇的IC50降低了3倍——即增加了紫杉醇细胞毒性。
[0037] 实例2：-体内实验：
[0038] 2.1：在代表性体内小鼠模型中，低剂量的ABTL0812增强了多西他赛的肺癌抗肿瘤活性，而没有负面的毒性作用。
[0039] 2.2：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+紫杉醇和卡铂(P/C)治疗的组合在鳞状细胞癌(SCC)模型中表现出存活率的显著提高，其中在治疗后20天时的存活为75％，相比之下，ABTL0812和媒剂组中的存活为0％，而P/C组中的存活为25％。
[0040] 2.3：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+P/C的组合表现出协同作用(相对于单独每种药物与腺癌肺癌相关的作用)，因为在用组合治疗的动物与对照和化学治疗剂治疗动物中观察到显著的肿瘤体积减小；
[0041] 2.4：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+培美曲塞和顺铂的组合表现出协同作用(相对于单独的化学治疗剂与腺癌肺癌相关的作用)，因为在用组合治疗的动物与对照和化学治疗剂治疗动物中观察到显著的肿瘤体积减小；
[0042] 2.5：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+紫杉醇的组合表现出协同作用(相对于单独每种药物与子宫内膜癌相关的作用)，因为在用组合治疗的动物与对照动物中观察到显著的肿瘤体积减小；
[0043] 2.6：在来自患者源异种移植物的代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+P/C的组合表现出与子宫内膜癌相关的协同作用，其表现出相较于P/C的显著更高的肿瘤体积减小，P/C在前47天期间还表现出相较于媒剂组的显著的肿瘤体积减小；
[0044] 2.7：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+紫杉醇/吉西他滨的组合表现出与胰腺癌相关的协同作用，其表现出相较于单独的P/Gm的显著更高的肿瘤体积减小。P/Gm还表现出相较于媒剂的更高的肿瘤体积减小；
[0045] 2.8：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+Nab-紫杉醇/吉西他滨的组合表现出与胰腺癌相关的协同作用，其表现出相较于单独的Nab-P/Gm的显著更高的肿瘤体积减小。Nab-P/Gm还表现出相较于媒剂的更高的肿瘤体积减小；
[0046] 2.9：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+顺铂的组合表现出与神经母细胞瘤癌相关的协同作用，其中ABTL0812与顺铂的组合在更长的时间内稳定了肿瘤进展；
[0047] 2.10：在代表性体内小鼠模型中，ABTL0812+阿霉素的组合表现出与乳腺癌相关的协同作用，其中ABTL0812与紫杉醇的组合表现出相较于媒剂的更高的肿瘤体积减小。
[0048] 本文提供的实验数据基于已建立的体外和体内(例如，小鼠)实验测试——因此，基于本文提供的实验数据，可以在人类癌症患者中获得本文相关的协同作用是可信/可靠的。
[0049] 本文的工作实例中测试的化学治疗剂的实例包含：
[0050] 紫杉烷：紫杉醇(Taxol)、Nab-紫杉醇(白蛋白结合型紫杉醇)和多西他赛；
[0051] 铂基试剂：卡铂和顺铂；
[0052] 核苷酸类似物和前体类似物：吉西他滨；
[0053] 叶酸抗代谢物：培美曲塞；
[0054] 蒽环霉素：阿霉素；
[0055] 因此，已测试了不同组/类的化学治疗剂，并且当与ABTL0812化合物组合使用时，所有化学治疗剂均表现出显著的协同作用。
[0056] 基于本文提供的实验数据，可通过大多数相关的化学治疗剂获得本文的积极协同作用是可信的。
[0057] 如上所讨论，当前大多数的抗癌治疗均能活化凋亡，并且所有上述受试其它化学治疗剂均能活化凋亡。
[0058] ABTL0812诱导自噬介导的癌细胞死亡而不活化细胞凋亡。本文提供的实验数据表明，ABTL0812与化学治疗剂组合可以出乎意料地增加凋亡的水平，但这不是ABTL0812的基本机制。
[0059] 本文提供的实验数据表明，化学治疗剂(例如，多西他赛)基本具有以下特点：
[0060] 产生100％治疗作用的量的多西他赛＝>导致毒性Y。
[0061] 产生50％治疗作用的量的多西他赛＝>导致毒性降低。
[0062] 产生50％治疗作用的量的多西他赛+产生50％治疗作用的量的ABTL0812＝>导致100％作用，并且毒性维持在相同的降低水平。
[0063] 对于本发明人而言出乎意料的是，通过与ABTL0812组合，可以显著提高化学治疗剂(例如，多西他赛)的作用而不会显著增加毒性。
[0064] ABTL0812化合物在结构和功能上与上文讨论的EP2409963B1中所述的其它多不饱和脂肪酸的1,2-衍生物(D-PUFA)化合物相似。
[0065] 因此，从表面上看，基本上所有的EP2409963B1的脂肪酸衍生物化合物与化学治疗剂结合将具有本文相关的协同作用。
[0066] 因此，本发明的第一方面涉及一种药物组合，其包括：
[0067] (A)：作为式COOR1-CHR2-(CH2)a-(CH＝CHCH2)b-(CH2)c-CH3多不饱和脂肪酸的化合物、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0068] (i)a可以是0和7之间的任何整数值，
[0069] (ii)b可以是2和7之间的任何整数值，
[0070] (iii)c可以是0到7之间的任何整数值，
[0071] (iv)R1是H、Na、K、CH3、CH3-CH2或PO(O-CH2-CH3)2，和
[0072] (v)R2是OH、OCH3、O-CH3COOH、CH3、Cl、CH2OH、OPO(O-CH2-CH3)2、NOH、F、HCOO或N(OCH2CH3)2；
[0073] 和
[0074] (B)：化学治疗剂化合物
[0075] 其用以同时、分开或依序用于治疗人类患者的癌症。
[0076] 如本领域技术人员所理解——第一方面的化合物(B)的化学治疗剂当然不是第一方面的化合物(A)的范围内的化合物。
[0077] 如本领域技术人员所理解——在将两种化合物(A)和(B)例如作为单一组合物同时施用或例如作为两种不同的组合物依序施用的情况下，关于本文讨论的组合治疗并非是必需的。重要的是，当施用第二化合物/试剂时，首先施用的有效量的化合物/试剂已存在于患者体内。
[0078] 因此，第一方面的术语“组合”在本文中涉及化合物(A)和(B)的各种组合，例如单一药物组合物的形式，由多种单一活性化合物的不同药物调配物/组合物构成的组合混合物的形式(例如，“罐混物”)，以及以依序方式应用(即先后应用，以适度短的时间段为间隔(例如，几小时或几天))或同时施用时多种单一活性成分的组合使用。应用化合物(A)和(B)的顺序并非是必需的。
[0079] 可以调配化合物(A)和(B)的组合以同时、分开或依序施用。特别地，如果施用不是同时的，则化合物在彼此相对较近的时间内施用。此外，化合物以相同或不同的剂型或通过相同或不同的施用途径施用，例如一种化合物可以局部施用，而另一种化合物可以经口施用。两种化合物的组合可以例如以如下形式施用：
[0080] -作为同一药物调配物的一部分的组合的形式，两种化合物总是同时施用；
[0081] -两个单元/组合物的组合的形式，每个单元/组合物均具有可实现同时、依序或分开施用的多种物质中的一种；
[0082] 例如，化合物(A)独立于化合物(B)(即在两个单元中)但在同一时间施用。
[0083] 在另一个合适的实例中，首先施用化合物(A)，然后分开或依序施用化合物(B)——可替代地，首先施用化合物(B)，然后分开或依序施用化合物(A)。
[0084] 术语“药物”(例如，关于“药物组合物”)应根据本领域理解——即它是指以允许活性成分的生物活性有效且生理上可耐受的形式存在(即不含对组合物将施用于的受试者具有不可接受的毒性的其它组分)的制剂/组合物。特别地，术语“药学上可接受的”是指它由州或联邦政府的监管机构批准或包含在美国药典或其它公认的药典中，用于动物(特别是人类)。
[0085] 下面仅通过实例的方式描述本发明的实施例。
[0087] 图1：ABTL0812在A549人肺腺癌细胞系中表现出与多西他赛的体外协同。ABTL0812、多西他赛和两种药物的组合的细胞毒性。由于在加入低浓度(大约其IC50的一半)的ABTL0812时，其IC50降低了86倍，因此可以观察到多西他赛细胞毒性的增强。结果示出了两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0088] 图2：ABTL0812在A549和H1975人肺腺癌细胞系以及在H157和HTB182人肺鳞癌细胞系中表现出与紫杉醇的体外协同。ABTL0812、紫杉醇和两种药物的组合在所有四种不同的肺癌细胞系中的细胞毒性。由于在加入低浓度(大约其IC50的一半)的ABTL0812时，其IC50取决于细胞系降低了2到7倍，因此在所有四个细胞系中均可以观察到紫杉醇细胞毒性的增强。结果示出了每个细胞系的两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0089] 图3：ABTL0812在MiaPaca2人胰腺癌细胞系中表现出与吉西他滨的体外协同。ABTL0812、吉西他滨和两种药物的组合的细胞毒性。由于在加入低浓度(大约其IC50的一半)的ABTL0812时，其IC50降低了7倍，因此在存在ABTL0812的情况下可以观察到吉西他滨细胞毒性的增强。结果示出了两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0090] 图4：ABTL0812在Ishikawa人子宫内膜癌细胞系中表现出与卡铂的体外协同。ABTL0812、卡铂和两种药物的组合的细胞毒性。由于在加入低浓度(大约其IC50的一半)的ABTL0812时，其IC50降低了3倍，因此可以观察到多西他赛细胞毒性的增强。结果示出了两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0091] 图5：ABTL0812在LAI-5S和SK-N-BE(2)人神经母细胞瘤细胞系中表现出与视黄酸的体外协同。ABTL0812、视黄酸和两种药物的组合的细胞毒性。由于在RA与低浓度(大约其IC30的一半)的ABTL0812一起温育时，LAI-5S细胞中视黄酸(RA)的细胞活力从82.8％降低到23.8％，而SK-N-BE(2)中RA的细胞活力从70.4％降低到34.7％，因此在两个细胞系中可以观察到RA细胞毒性的增强。结果示出了两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0092] 图6：ABTL0812在MDA-DB-231人三阴性乳腺癌细胞系中表现出与紫杉醇的体外协同。ABTL0812、紫杉醇和两种药物的组合的细胞毒性。由于在加入低浓度(低于其IC50)的ABTL0812时，其IC50降低了2.7倍，因此可以观察到紫杉醇细胞毒性的增强。结果示出了两个独立实验的平均值。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0093] 图7：ABTL0812在体内A549人肺腺癌异种移植物模型中表现出多西他赛治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812与多西他赛的组合在a549人肺腺癌异种移植物模型中的抗肿瘤作用，示出了相较于ABTL0812、多西他赛和媒剂组的肿瘤生长的显著减少。p值在ABTL0812+多西他赛与多西他赛之间以及与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0094] 图8：ABTL0812在体内H157人肺鳞癌异种移植物模型中表现出紫杉醇/卡铂(P/C)治疗作用的增强而未增加毒性。用ABTL0812、P/C、ABTL0812+P/C和媒剂治疗的H157异种移植物的Kaplan-Meier图，其中ABTL0812+P/C示出了最高的存活率。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0095] 图9：ABTL0812在体内H1975人肺腺癌异种移植物模型中表现出P/C治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812与P/C的组合在H1975人肺腺癌异种移植物模型中的抗肿瘤作用，示出了相较于P/C、ABTL0812或媒剂组的最高的肿瘤体积减小。p值在ABTL0812+P/C与P/C之间以及与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0096] 图10：ABTL0812在体内A549人肺腺癌异种移植物模型中表现出培美曲塞和顺铂治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812与培美曲塞和顺铂的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于培美曲塞和顺铂和媒剂组的肿瘤生长的显著减少。p值在ABTL0812+培美曲塞和顺铂与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0097] 图11：ABTL0812在原位植入的体内Ishikawa人子宫内膜癌异种移植物模型中表现出紫杉醇治疗作用的增强而未增加毒性。左：治疗三周后处死动物，切除肿瘤，并确定肿瘤体积。与仅接受媒剂的对照动物相比，在接受ABTL0812+紫杉醇的组合的动物中观察到显著的统计学减小。p值在ABTL0812+紫杉醇与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0098] 图12：ABTL0812在体内人子宫内膜癌患者源异种移植物中表现出P/C治疗作用的增强而未增加毒性。左图：将一块肿瘤植入裸小鼠中，所述肿瘤是通过外科手术从患有浆液性组织学，IIIC2级，100％子宫肌层浸润以及骨盆和主动脉淋巴结及淋巴血管间隙浸润并且携带p53和PI3KCA基因突变的患者取出的。ABTL0812与P/C的组合示出了相较于P/C、ABTL0812和媒剂的肿瘤的显著减少。图p值在图中指示。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重如下所示。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0099] 图13：ABTL0812在体内MiaPAca2人胰腺癌异种移植物模型中表现出吉西他滨和紫杉醇(Gm/P)的增强而未增加毒性。左：ABTL0812+Gem/P的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于Gm/P、ABTL0812或媒剂的最高的肿瘤体积减小。p值在ABTL0812+吉西他滨和紫杉醇与吉西他滨和紫杉醇之间、与吉西他滨之间以及与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0100] 图14：ABTL0812在两个体内MiaPAca2人胰腺癌异种移植物模型中表现出单独的吉西他滨(Gm)的增强和吉西他滨与Nab-紫杉醇(Gm/Nab-P)的增强而未增加毒性。左：ABTL0812+Gm/Nab-P的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于Gm/Nab-P、ABTL0812或媒剂的最高的肿瘤体积减小。右：ABTL0812+Gm的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于Gm、ABTL0812或媒剂的最高的肿瘤体积减小。p值在ABTL0812+Gm/Nab-P和ABTL0812+Gm与媒剂之间测量。整个实验期间的不同治疗组的总体重如下所示。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0101] 图15：ABTL0812在体内SH-SY5Y人神经母细胞瘤异种移植物模型中表现出顺铂治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812+顺铂的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于ABTL0812、顺铂或媒剂的最高的肿瘤体积减小。在第10天，必须处死对照组中的动物，与此同时，也处死治疗组中的一半动物，而对其余的动物进行更长时间的研究。左：治疗10天后处死时的肿瘤重量(通过t测试，p<0.05)。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0102] 图16：ABTL0812在体内MDA-DB-231人三阴性乳腺癌异种移植物模型中表现出阿霉素治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812+阿霉素的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于阿霉素、ABTL0812或媒剂的最高的肿瘤体积减小。p值在ABTL0812+阿霉素与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
[0103] 图17：ABTL0812在体内EGI-1人胆管癌异种移植物模型中表现出吉西他滨和顺铂(Gm/Cis)治疗作用的增强而未增加毒性。左：ABTL0812+Gm/Cis的组合的抗肿瘤作用，示出了相较于Gm/Cis、ABTL0812或媒剂的最高的肿瘤体积减小。p值在ABTL0812+Gm/Cis与媒剂之间测量。右：整个实验期间的不同治疗组的总体重。有关进一步的细节，请参见本文的工作实例。
具体实施方式
[0104] 第一方面的化合物(A)
[0105] 一个优选实施例是其中
[0106] (i)a可以是5和7之间的任何整数值，
[0107] (ii)b可以是2和4之间的任何整数值，
[0108] (iii)c可以是1到5之间的任何整数值。
[0109] 优选地，R1可以是H、Na、K、CH3、CH3-CH2或PO(O-CH2-CH3)2，
[0110] 优选地，R2可以是OH、OCH3、O-CH3COOH、CH3、Cl、CH2OH、OPO(O-CH2-CH3)2、NOH、F、HCOO或N(OCH2CH3)2。
[0111] 在一个优选实施例中，R1是H，并且R2是OH。
[0112] 在另一个优选实施例中，R1是Na，并且R2是OH。
[0113] 优选地，化合物(A)是选自由以下组成的组的至少一种化合物：
[0114] COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)、
[0115] COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)3-CH3(183A1)、
[0116] COOH-CHOH-(CH2)3-(CH＝CH-CH2)3-(CH2)3-CH3(183A2)、
[0117] COOH-CHOH-(CH2)2-(CH＝CH-CH2)4-(CH2)3-CH3(204A1)、
[0118] COOH-CHOH-(CH2)2-(CH＝CH-CH2)5-CH3(205A1)和
[0119] COOH-CHOH-CH2-(CH＝CH-CH2)6-CH3(226A1)。
[0120] 最优选地，化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)。
[0121] 化合物(A)的药学上可接受的盐是指化合物(A)的任何药学上可接受的盐。如本领域中已知，存在多种已知的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的实例包含但不限于钠(Na)、钾、乙酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、链烷磺酸盐(例如，甲烷磺酸盐或甲磺酸盐)、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。在一个特定实施例中，化合物(A)的盐是钠盐。
[0122] 如本领域技术人员所理解，当在本文中提及化合物(A)(例如，ABTL0812)的优选式时——在本文中应理解，所述式也包含其盐形式——例如，当在本文中提及化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)时，其还指ABTL0812的盐。
[0123] 优选地，化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)的钠盐。
[0124] 第一方面的化合物(B)
[0125] 优选地，化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0126] 双功能烷基化剂(优选环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮芥或美法仑)；
[0127] 单功能烷基化剂(优选达卡巴嗪(DTIC)、亚硝基脲或替莫唑胺)；
[0128] 蒽环霉素(优选道诺霉素、阿霉素、表柔比星、依达比星、米托蒽醌或戊柔比星)；
[0129] 紫杉烷(优选紫杉醇、多西他赛、Nab-紫杉醇或泰索帝)；
[0130] 埃博霉素(优选帕土匹龙、沙戈匹隆或伊沙匹隆)；
[0131] 脱乙酰基酶抑制剂(优选伏立诺他或罗米地辛)；
[0132] 拓扑异构酶I抑制剂(优选伊立替康或拓扑替康)；
[0133] 拓扑异构酶II抑制剂(优选依托泊苷、替尼泊苷或他夫泊苷(Tafluposide))；
[0134] 激酶抑制剂(优选硼替佐米、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、维莫非尼或维莫德吉)；
[0136] 肽抗生素(优选博来霉素或放线菌素)；
[0137] 铂基试剂(优选卡铂、顺铂或奥沙利铂)；
[0138] 视黄素(优选维甲酸、阿利维甲酸或贝沙罗汀)；和
[0139] 长春花生物碱及衍生物(优选长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨)。
[0140] 如在本领域中所理解，相对于化合物(B)的任何优选列出的实例，最优选的是，化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)。
[0141] 更优选地，化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0142] 环磷酰胺；
[0143] 美法仑；
[0144] 多西他赛；
[0145] 紫杉醇；
[0146] Nab-紫杉醇；
[0147] 卡铂；
[0148] 顺铂；
[0149] 奥沙利铂；
[0150] 甲氨蝶呤
[0151] 培美曲塞；
[0152] 硫唑嘌呤；
[0153] 卡培他滨；
[0154] 氟尿嘧啶；
[0155] 巯嘌呤；
[0156] 吉西他滨；
[0157] 博来霉素；
[0158] 放线菌素；
[0159] 长春新碱；
[0160] 长春碱；
[0161] 长春瑞滨；
[0162] 视黄酸；
[0163] 替莫唑胺；
[0164] 道诺霉素
[0165] 阿霉素；
[0166] 伊立替康；和
[0167] 拓扑替康。
[0168] 甚至更优选地，化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0169] 多西他赛；
[0170] 紫杉醇；
[0171] Nab-紫杉醇；
[0172] 卡铂；
[0173] 顺铂；
[0174] 奥沙利铂；
[0175] 甲氨蝶呤
[0176] 培美曲塞；
[0177] 吉西他滨；
[0178] 博来霉素
[0179] 视黄酸；
[0180] 替莫唑胺；
[0181] 阿霉素；
[0182] 伊立替康；和
[0183] 拓扑替康。
[0184] 可以优选的是，第一方面的化合物(B)包括两种或两种以上不同的化学治疗剂(特别是当化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)时)——例如优选地，其中第一方面的化合物(B)包括：
[0185] 紫杉醇和卡铂；
[0186] 紫杉醇和吉西他滨；
[0187] Nab-紫杉醇和吉西他滨；
[0188] 吉西他滨和顺铂；
[0189] 培美曲塞和顺铂。
[0190] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是多西他赛——特别是其中癌症是肺癌(优选非小细胞肺腺癌)。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例1.1和2.1)。
[0191] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇——特别是其中癌症是肺癌(非小细胞肺癌)。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例1.2)。
[0192] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是吉西他滨——特别是其中癌症是胰腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见例如本文的实例1.3)。
[0193] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是卡铂——特别是其中癌症是子宫内膜细胞癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例1.4)。
[0194] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是视黄酸——特别是其中癌症是神经母细胞瘤。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例1.5)。
[0195] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇——特别是其中癌症是乳腺癌(优选三阴性乳腺癌)。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例1.6)。
[0196] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇和卡铂——特别是其中癌症是鳞癌(优选非小细胞肺鳞癌)。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.2)。
[0197] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇和卡铂——特别是其中癌症是非小细胞肺腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.3)。
[0198] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是培美曲塞和顺铂——特别是其中癌症是非小细胞肺腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.4)。
[0199] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇——特别是其中癌症是子宫内膜癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.5)。
[0200] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇和卡铂——特别是其中癌症是子宫内膜癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.6)。
[0201] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是紫杉醇和吉西他滨——特别是其中癌症是胰腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.7)。
[0202] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是吉西他滨、或Nab-紫杉醇和吉西他滨——特别是其中癌症是胰腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.8)。
[0203] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是顺铂——特别是其中癌症是神经母细胞瘤癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.9)。
[0204] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是阿霉素——特别是其中癌症是三阴性乳腺癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.10)。
[0205] 特别优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是吉西他滨和顺铂——特别是其中癌症是胆管癌。(有关本优选实施例的实例，请参见本文的实例2.11)。
[0206] 优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是替莫唑胺和伊立替康——特别是其中癌症是神经母细胞瘤癌。
[0207] 优选的是，化合物(A)是ABTL0812，并且化合物(B)是阿霉素和拓扑替康——特别是其中癌症是神经母细胞瘤癌。
[0208] 优选地，本文所讨论的药物组合是其中化合物(A)是ABTL0812，并且其中：
[0209] -化合物(B)是多西他赛，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
[0210] -化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
[0211] -化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0212] -化合物(B)是卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
[0213] -化合物(B)是视黄酸，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
[0214] -化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
[0215] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌，优选非小细胞肺鳞癌；
[0216] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
[0217] -化合物(B)是培美曲塞和顺铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
[0218] -化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是子宫内膜癌；
[0219] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
[0220] -化合物(B)是紫杉醇和吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0221] -化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0222] -化合物(B)是吉西他滨和Nab-紫杉醇，并且所述癌症是胰腺癌；
[0223] -化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
[0224] -化合物(B)是阿霉素酸，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
[0225] -化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌；
[0226] -化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌；
[0227] -化合物(B)是拓扑替康，并且所述癌症是神经母细胞瘤；
[0228] -化合物(B)是伊立替康，并且所述癌症是神经母细胞瘤；或
[0229] -化合物(B)是替莫唑胺，并且所述癌症是神经母细胞瘤。
[0230] 如上所讨论，本文的实例4讨论了已从人类关键试验获得的初步结果——这些结果表明，在人类中也存在ABTL0812化合物与紫杉醇和卡铂的组合在晚期子宫内膜癌或鳞状细胞癌患者中的使用所相关的协同作用，从这一意义上来说，已获得的人类临床试验是积极的。
[0231] 因此，优选的是，本文所讨论的药物组合是其中化合物(A)是ABTL0812，并且其中：
[0232] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是晚期子宫内膜癌，优选晚期子宫内膜癌；或
[0233] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌。
[0234] 优选地，ABTL0812经口施用——优选地，ABTL0812的施用剂量是1200mg到1400mg的剂量。
[0235] 更优选地，ABTL0812经口施用，起始剂量是1200mg到1400mg，每天三次，与化学治疗组合。
[0236] 癌症
[0237] 优选地，所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0238] 肺癌；
[0239] 非小细胞肺癌；
[0240] 小细胞肺癌；
[0241] 鳞状细胞癌；
[0242] 腺癌；
[0243] 子宫内膜癌；
[0244] 胰腺癌；
[0245] 胶质母细胞瘤；
[0246] 乳腺癌；
[0247] 头颈癌；
[0248] 神经母细胞瘤；和
[0249] 胆管癌。
[0250] 更优选地，所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0251] 非小细胞肺癌；
[0252] 鳞状细胞癌；
[0253] 子宫内膜癌；
[0254] 胰腺癌；
[0255] 胶质母细胞瘤；
[0256] 乳腺癌；
[0257] 神经母细胞瘤；和
[0258] 胆管癌。
[0259] 化合物(A)和/或化合物(B)的施用：
[0260] 如上所讨论，在将两种化合物(A)和(B)例如作为单一组合物同时施用或例如作为两种不同的组合物依序施用的情况下，关于本文讨论的组合治疗并非是必需的。重要的是，当施用第二化合物/试剂时，首先施用的有效量的化合物/试剂已存在于患者体内。
[0261] 可能优选的是，本文讨论的药物组合是包括化合物(A)和化合物(B)两者的单一组合物。
[0262] 化合物(A)(特别是ABTL0812)优选经口施用。
[0263] 化合物(A)(特别是ABTL0812)的施用剂量优选是200mg到6000mg(优选2000mg)的剂量，更优选是300mg到1600mg的剂量，甚至更优选是450mg到1450mg的剂量。
[0264] 更优选地——化合物(A)(特别是ABTL0812)的施用剂量优选是每天200mg到6000mg(优选2000mg)的总剂量，更优选是每天300mg到1600mg的总剂量，甚至更优选是每天
450mg到1450mg的总剂量。优选地，总剂量通过每天施用1到5次，更优选每天施用2到4次，最优选每天施用3次来提供。
450mg到1450mg的总剂量。优选地，总剂量通过每天施用1到5次，更优选每天施用2到4次，最优选每天施用3次来提供。
[0265] 因此，如果总剂量是例如每天1200mg并且通过每天施用3次来提供——则3次施用中的每一次可以例如是400mg。
[0266] 关于化合物(B)，优选施用途径将通常取决于目标化学治疗剂。
[0267] 优选的化合物(B)的优选施用途径简述如下：
[0268] 多西他赛；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0269] 紫杉醇；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0270] 卡铂；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0271] 顺铂；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0272] 吉西他滨；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0273] Nab-紫杉醇 ——优选经由输注混悬液静脉内施用
[0274] 培美曲塞；——优选经由输注溶液静脉内施用
[0275] 阿霉素；——优选静脉内施用
[0277] 1.一种药物组合，其包括：
[0278] (A)：作为式COOR1-CHR2-(CH2)a-(CH＝CHCH2)b-(CH2)c-CH3多不饱和脂肪酸的化合物、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0279] (i)a可以是0和7之间的任何整数值，
[0280] (ii)b可以是2和7之间的任何整数值，
[0281] (iii)c可以是0到7之间的任何整数值，
[0282] (iv)R1是H、Na、K、CH3、CH3-CH2或PO(O-CH2-CH3)2，和
[0283] (v)R2是OH、OCH3、O-CH3COOH、CH3、Cl、CH2OH、OPO(O-CH2-CH3)2、NOH、F、HCOO或N(OCH2CH3)2；
[0284] 和
[0285] (B)：化学治疗剂化合物
[0286] 其用以同时、分开或依序用于治疗人类患者的癌症。
[0287] 2.根据权利要求1的所述药物组合，其中
[0288] (i)a可以是5和7之间的任何整数值，
[0289] (ii)b可以是2和4之间的任何整数值，并且
[0290] (iii)c可以是1到5之间的任何整数值。
[0291] 3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中R1是H，并且R2是OH。
[0292] 4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0293] COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)、
[0294] COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)3-CH3(183A1)、
[0295] COOH-CHOH-(CH2)3-(CH＝CH-CH2)3-(CH2)3-CH3(183A2)、
[0296] COOH-CHOH-(CH2)2-(CH＝CH-CH2)4-(CH2)3-CH3(204A1)、
[0297] COOH-CHOH-(CH2)2-(CH＝CH-CH2)5-CH3(205A1)和
[0298] COOH-CHOH-CH2-(CH＝CH-CH2)6-CH3(226A1)。
[0299] 5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)或其药学上可接受的盐。
[0300] 6.根据权利要求5所述的药物组合，其中化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)的钠盐。
[0301] 7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0302] 肺癌；
[0303] 非小细胞肺癌；
[0304] 鳞状细胞癌；
[0305] 腺癌；
[0306] 子宫内膜癌；
[0307] 浆液性癌症；
[0308] 胰腺癌；
[0309] 胶质母细胞瘤癌；
[0310] 耐药性复发性乳腺癌；
[0311] 头颈癌；
[0312] 神经母细胞瘤和
[0313] 胆管癌。
[0314] 8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(B)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0315] 多西他赛；
[0316] 紫杉醇；
[0317] 卡铂；
[0318] 顺铂；
[0319] 吉西他滨；
[0320] Nab-紫杉醇；
[0321] 视黄酸；
[0322] 替莫唑胺；
[0323] 伊立替康；
[0324] 阿霉素；和
[0325] 拓扑替康。
[0326] 9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)或其药学上可接受的盐。
[0327] 10.根据权利要求9所述的药物组合，其中
[0328] -化合物(B)是多西他赛，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
[0329] -化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是肺癌，优选非小细胞肺腺癌；
[0330] -化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0331] -化合物(B)是卡铂，并且所述癌症是子宫内膜细胞癌；
[0332] -化合物(B)是视黄酸，并且所述癌症是神经母细胞瘤癌；
[0333] -化合物(B)是紫杉醇酸，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；
[0334] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是鳞状细胞癌，优选非小细胞肺鳞癌；
[0335] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
[0336] -化合物(B)是培美曲塞和顺铂，并且所述癌症是非小细胞肺腺癌；
[0337] -化合物(B)是紫杉醇，并且所述癌症是子宫内膜癌；
[0338] -化合物(B)是紫杉醇和卡铂，并且所述癌症是子宫内膜癌；
[0339] -化合物(B)是紫杉醇和吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0340] -化合物(B)是吉西他滨，并且所述癌症是胰腺癌；
[0341] -化合物(B)是吉西他滨和Nab-紫杉醇，并且所述癌症是胰腺癌；
[0342] -化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是神经母细胞瘤癌；
[0343] -化合物(B)是阿霉素酸，并且所述癌症是乳腺癌，优选三阴性乳腺癌；或[0344] -化合物(B)是顺铂和吉西他滨，并且所述癌症是胆管癌。
[0345] 11.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(A)和化合物(B)两者的单一组合物。
[0346] 12.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)经口施用。
[0347] 13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)的施用剂量是每天200mg到2000mg的总剂量。
[0348] 14.根据权利要求12到13中任一项所述的药物组合，其中化合物(A)是COOH-CHOH-(CH2)6-(CH＝CH-CH2)2-(CH2)3-CH3(ABTL0812)或其药学上可接受的盐。
[0349] 15.根据权利要求14所述的药物组合，其中
[0350] -化合物(B)是多西他赛，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0351] -化合物(B)是紫杉醇，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0352] -化合物(B)是卡铂，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0353] -化合物(B)是顺铂，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0354] -化合物(B)是吉西他滨，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0355] -化合物(B)是Nab-紫杉醇，并且其经由输注混悬液静脉内施用；
[0356] -化合物(B)是替莫唑胺，并且其经口施用(例如，以胶囊形式)；
[0357] -化合物(B)是伊立替康，并且其经由输注溶液静脉内施用；
[0358] -化合物(B)是阿霉素，并且其静脉内施用；或
[0359] -化合物(B)是拓扑替康，并且其经由输注溶液静脉内施用。
[0360] 实例
[0361] 实例1：ABTL0812与不同的化学治疗剂的组合——体外测定
[0362] 1.1：
[0363] ABTL0812与多西他赛的组合在肺癌中的细胞活力测定
[0364] 研究参考：ABT-EI-
[0366] GLP符合性：否
[0367] 测试化合物：ABTL0812(批次006/2010)
[0368] 参考化合物：多西他赛(Fluka，01855-5MG-F，批次1425738V)
[0369] 测试系统：A549(人肺癌)细胞系
[0370] 目的：评估ABTL0812与多西他赛的组合对细胞活力的作用。多西他赛是一种用于肺癌的细胞毒性化合物；因此，肺癌的潜在治疗组合可能涉及使用ABTL0812和多西他赛。
[0371] 方法：将A549细胞与递增浓度的ABTL0812(3-300μM)、多西他赛(0.01-100μM)或两者的组合(IC50以下，即20μM固定浓度的ABTL0812和0.01-100μM多西他赛)一起温育三天(FBS 0.5％)。在所有情况下均通过MTT测定评估细胞活力，并且计算ABTL0812、多西他赛以及组合的IC50。最后，根据Chou和Talalay方法(Chou 2006；Chou 2010)计算用于评估协同的组合指数(CI)，如下所示：CI＝(D)1/(Dx)1+(D)2/(Dx)2，其中CI<1，＝1和>1分别表示协同、相加作用和拮抗。在分母中，(Dx)1表示D1“单独”抑制系统x％，而(Dx)2表示D2“单独”抑制系统x％。在分子中，(D)1和(D)2的“组合”也抑制x％。示出的结果是两个独立实验的平均值。
[0372] 结果：如所预期，在独立使用时，ABTL0812和多西他赛具有细胞毒性。低浓度的ABTL0812(20μM，相当于其IC10)的加入大大地增加了多西他赛细胞毒性。在存在ABTL0812的情况下的多西他赛的IC50降低了>80倍，即从1.7μM降低到0.02μM(参见下表和本文的图1)。
[0373]
[0374] 然后，根据Chou和Talalay的方法(Chou 2006；Chou 2010)计算ABTL0812与多西他赛的潜在协同。两种药物的组合在整个活性范围内具有协同性，在50％细胞活力下CI＝0.47。本CI表示协同。
[0375] 结论：ABTL0812和多西他赛在肺腺癌细胞系A549中具有体外协同作用。次最优浓度的ABTL0812(20μM)使多西他赛的IC50降低了80倍以上。这些结果为两种药物在肺癌中的体内组合提供了机会。多西他赛是肺癌多个阶段的首选药物；因此，与ABTL0812的组合具有潜在的有益作用，因为已观察到两种药物之间的协同增加了它们在肺癌细胞中的细胞毒性作用。
[0376] 1.2：
[0377] ABTL0812与紫杉醇的组合在肺癌中的细胞活力测定
[0378] 研究参考：LN3-T30和ABT-EI-048
[0379] 研究地点：蛋白激酶和细胞信号转导小组，UAB
[0380] GLP符合性：否
[0381] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2012)
[0382] 参考化合物：紫杉醇(SelleckChem，S1150-10MG，批次09)
[0383] 测试系统：具有突变KRAS的A549(人肺癌)细胞系；具有突变PTEN的H157(人非小细胞肺鳞癌；HTB182：人非小细胞肺鳞癌和H1975：具有突变PI3KCA的人非小细胞肺腺癌[0384] 目的：评估ABTL0812与紫杉醇的组合对细胞活力的作用。紫杉醇是一种用于肺癌的细胞毒性化合物；因此，肺癌的潜在治疗组合可能涉及使用ABTL0812和紫杉醇。
[0385] 方法：将A549细胞与递增浓度的ABTL0812(3-300μM)、紫杉醇(0.003-1μM)或两者的组合(使用IC50以下的固定浓度的ABTL0812和0.003-1μM紫杉醇)在含0.1％FBS的DMEM中一起温育72小时。将H157、H1957和HTB-812细胞与递增浓度的紫杉醇(0.001-10μM)(单独)和紫杉醇与IC50以下的固定浓度的ABTL0812的组合在含0.1％FBS的DMEM中一起温育48小时。在所有情况下均通过MTT测定评估细胞活力，并且计算紫杉醇和组合的IC50。不同细胞系的组合的浓度为：
[0386] A549细胞：ABTL0812 IC50＝49μM。紫杉醇与10(IC10)、20(IC25)和30μM(IC35)ABTL0812组合
[0387] H157细胞：ABTL0812 IC50＝23μM。紫杉醇与10(IC20)和15(IC35)μM ABTL0812组合[0388] H1957细胞：ABTL0812 IC50＝43μM。紫杉醇与10(IC10)和20(IC20)μM ABTL0812组合
[0389] HTB-812细胞：ABTL0812 IC50＝29μM。紫杉醇与10(IC20)和15(IC35)μM ABTL0812组合。
[0390] 最后，如上一部分所述，针对紫杉醇IC50值计算组合指数(CI)。
[0391] 结果：ABTL0812和紫杉醇在所有四种肺癌细胞系中均具有细胞毒性。在独立使用时，在A549肺癌细胞系中，15、20或30μM ABTL0812的加入增加了紫杉醇细胞毒性。组合的IC50低于每种单独的药物的IC50，并且观察到紫杉醇的IC50降低了2倍(15μM和20μM)或7倍(30μM)。这些紫杉醇IC50的降低具有协同性，并且对于15、20和30μM ABTL0812，CI分别为0.34、0.28和0.22。在H157细胞中，观察到的协同不如A549细胞强，仅在与15μM ABTL0812(IC35)结合时增强了紫杉醇细胞毒性，将紫杉醇IC50从4.19降低到2.39μM，降低了1.75倍，表现出协同，CI为0.7。在H1957细胞的情况下，当以10μM(IC10)加入ABTL0812时，没有协同，并且IC50值未改变(3.68相对于3.47μM)，但是当以20μM(IC20)加入ABTL0812时，IC50值从
3.68降低到0.56μM，降低了6.5倍。H1957中的本紫杉醇IC50的降低具有协同性，CI为0.3。最后，HTB-812细胞在两种测试浓度下均表现出良好的协同，当以10μM(IC20)加入ABTL0812时从2.71降低到0.81μM，降低了3倍；当以20μM(IC35)加入ABTL0812时从2.71降低到0.75μM，降低了3.6倍。在HTB-812细胞中的这些紫杉醇IC50的降低具有协同性，CI分别为0.4和0.5。
有关进一步的细节，请参见图2。
3.68降低到0.56μM，降低了6.5倍。H1957中的本紫杉醇IC50的降低具有协同性，CI为0.3。最后，HTB-812细胞在两种测试浓度下均表现出良好的协同，当以10μM(IC20)加入ABTL0812时从2.71降低到0.81μM，降低了3倍；当以20μM(IC35)加入ABTL0812时从2.71降低到0.75μM，降低了3.6倍。在HTB-812细胞中的这些紫杉醇IC50的降低具有协同性，CI分别为0.4和0.5。
有关进一步的细节，请参见图2。
[0392] 结论：ABTL0812和紫杉醇在所有四种测试的肺癌细胞系中均具有体外协同作用，而与它们的突变状况无关。次最优浓度的ABTL0812降低了紫杉醇的IC50。这些结果为两种药物在肺癌中的体内组合提供了机会。
[0393] 1.3：
[0394] 单独的ABTL0812或其与吉西他滨的组合在胰腺癌中的细胞活力测定
[0395] 研究参考：LN1-T56-T58
[0396] 研究地点：蛋白激酶和细胞信号转导小组，UAB
[0397] GLP符合性：否
[0398] 测试化合物：ABTL0812(批次006/2010)
[0399] 参考化合物：吉西他滨(Sigma，G6423，批次041M4727V)
[0400] 测试系统：MiaPaca2(人胰腺癌)
[0401] 目的：研究在胰腺癌细胞系MiaPaca2中将ABTL0812加入吉西他滨时的潜在协同。吉西他滨被认为是治疗大多数类型胰腺癌的护理标准。在许多情况下(大多数是针对晚期胰腺癌)，它与其它药物组合施用(Ghaneh和Neoptolemos2007)；因此，要知道两种药物之间是否存在任何相加作用是一件有趣的事。
[0402] 方法：将MiaPaca2细胞与吉西他滨(0.01-100μM)、ABTL0812(3-300μM)或两者的组合(IC50以下，即25μM固定浓度的ABTL0812与0.01-100μM吉西他滨)一起接种在24孔板中并在培养箱中放置72小时(0.5％FBS)。通过MTT测定研究细胞活力，并确定几个参数以评估可能的协同。首先，计算每种单独的药物或组合的IC50。然后，如上所述计算协同(CI)。
[0403] 结果：组合的IC50低于每种单独的药物的IC50，因为观察到吉西他滨的IC50降低了7倍。注意，为组合实验选择的ABTL0812浓度单独具有非常低的活性(<10％细胞毒性)，但是它增强了吉西他滨的细胞毒性——参见下表和本文的图3。
[0404]
[0405] 对于非恒定组合比，根据Chou和Talalay的方法(Chou 2006；Chou 2010)计算ABTL0812与吉西他滨的潜在协同。两种药物的组合在整个活性范围内具有协同性，在50％细胞活力下CI＝0.65。本CI表示协同。
[0406] 结论：ABTL0812和吉西他滨在胰腺癌细胞系MiaPaca2中具有体外协同作用。次最优浓度的ABTL0812(25μM)使吉西他滨的IC50降低了7倍。这些结果为两种药物的体内组合提供了机会。
[0407] 1.4：
[0408] 单独的ABTL0812或与其与卡铂的组合在子宫内膜癌中的细胞活力测定
[0409] 研究参考：ABT-EI-065
[0410] 研究地点：蛋白激酶和细胞信号转导小组，UAB
[0411] GLP符合性：否
[0412] 测试化合物：ABTL0812(批次006/2010)
[0413] 参考化合物：卡铂(Sigma，C2538)
[0414] 测试系统：Ishikawa(人子宫内膜癌)
[0415] 目的：研究在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中将ABTL0812加入卡铂时的潜在协同。卡铂被认为是治疗大多数类型的子宫内膜癌的护理标准。因此，要知道两种药物之间是否存在任何相加作用是一件有趣的事。
[0416] 方法：在存在4μM ABTL0812(相当于IC10)的情况下，将Ishikawa细胞与递增浓度的卡铂(1-300μM)一起接种在24孔板中48小时(0.5％FBS)。通过MTT测定研究细胞活力，并确定几个参数以评估可能的协同。首先，计算每种单独的药物或组合的IC50。
[0417] 结果：组合的IC50低于每种单独的药物的IC50，因为观察到卡铂的IC50降低了3倍。注意，为组合实验选择的ABTL0812浓度单独具有非常低的活性(<10％细胞毒性)，但是它增强了吉西他滨的细胞毒性——参见本文的图4。
[0418] 结论：ABTL0812和卡铂在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中具有体外协同作用。次最优浓度的ABTL0812(4μM)使卡铂的IC50降低了3倍。这些结果为两种药物的体内组合提供了机会。
[0419] 1.5：
[0420] 单独的ABTL0812或其与视黄酸的组合在神经母细胞瘤中的细胞活力测定研究参考：ABT-EI-055
[0421] 研究地点：小儿癌症转化研究实验室(VHIR)
[0422] GLP符合性：否
[0423] 测试化合物：ABTL0812(批次006/2010)
[0424] 参考化合物：视黄酸(Sigma，R2625)
[0425] 测试系统：SK-N-BE(2)：人神经母细胞瘤细胞系和LA1-5S：神经母细胞瘤细胞系LA-N-1的克隆亚系
[0426] 目的：评估ABTL0812与视黄酸(RA)的组合在神经母细胞瘤细胞系SK-N-BE(2)和LA1-5S中对细胞活力的作用。
[0427] 方法：将LA1-5S和SK-N-BE(2)细胞与IC50以下的固定浓度的ABTL0812(30μM)、递增浓度的10μM、20μM和30μM视黄酸或两者的组合一起温育。10μM视黄酸是I期临床试验中向神经母细胞瘤患者经口施用的药理剂量(Villablanca等人，1995)。在含0.5％FBS的IMDM中对细胞治疗24小时。在所有情况下，通过结晶紫测定评估细胞活力。在六个平行样中对不同剂量进行评定，并且示出的结果是两个独立实验的平均值。使用GraphPad 5.0软件，根据T测试原理进行统计学分析(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001)。
[0428] 结果：当作为单一试剂以低浓度使用时，ABTL0812在LA1-5S和SK-N-BE(2)神经母细胞瘤细胞系中均表现出轻度的细胞毒性。浓度为10μM和20μM的视黄酸功效甚至更低。30μM ABTL0812和视黄酸的组合在两种神经母细胞瘤细胞系中均产生高细胞毒性。在任何组合中的死亡/非增殖细胞的百分比均高于每种单独的药物的死亡/非增殖细胞的百分比，这表明了协同作用。在所有浓度下，细胞死亡的增加均具有统计学显著性(***p<0.001)。有关进一步的细节，请参见本文的图5。
[0429] 结论：ABTL0812和RA的组合具有强协同作用，其增强了它们在神经母细胞瘤细胞系SK-N-BE(2)和LA1-5S中的体外细胞毒活性。RA通常在临床上用于治疗神经母细胞瘤最小残留疾病阶段，因此，本数据鼓励了对本组合用于治疗神经母细胞瘤的进一步研究。
[0430] 1.6：
[0431] 单独的ABTL0812或其与紫杉醇的组合在乳腺癌中的细胞活力测定
[0432] 研究参考：待定
[0433] 研究地点：目标实验室，UdG
[0434] GLP符合性：否
[0435] 测试化合物：ABTL0812(批次006/2010)
[0436] 参考化合物：紫杉醇(SelleckChem，S1150)
[0437] 测试系统：MDB-DA-231(人三阴性乳腺癌)
[0438] 目的：研究在三阴性乳腺癌细胞系MDB-DA-231中将ABTL0812加入紫杉醇时的潜在协同。
[0439] 方法：在存在5、10和20μM ABTL0812(所有剂量均低于IC25)的情况下，将MDB-DA-231细胞与递增浓度的紫杉醇(1-100nM)一起接种在24孔板中48小时(0.5％FBS)。通过MTT测定研究细胞活力，并确定几个参数以评估可能的协同。首先，计算每种单独的药物或组合的IC50。
[0440] 结果：组合的IC50低于每种单独的药物的IC50，因为观察到紫杉醇的IC50降低了2.7倍。注意，为组合实验选择的ABTL0812浓度单独具有非常低的活性(<10％细胞毒性)，但是它增强了紫杉醇的细胞毒性，表现出强协同，对于5、10和20μM ABTL0812，CI值分别为0.3、0.2和0.16——参见下表和本文的图6。
[0441] 化合物 IC50ABTL0812 29μM
紫杉醇 8,7nM
紫杉醇+5μM ABTL0812 5,1nM
紫杉醇+10μM ABTL0812 3,2nM
紫杉醇+20μM ABTL0812 3,2nM
紫杉醇 8,7nM
紫杉醇+5μM ABTL0812 5,1nM
紫杉醇+10μM ABTL0812 3,2nM
紫杉醇+20μM ABTL0812 3,2nM
[0442] 结论：ABTL0812和卡铂在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中具有体外协同作用。次最优浓度的ABTL0812(4μM)使卡铂的IC50降低了3倍。这些结果为两种药物的体内组合提供了机会。
[0443] 实例2：ABTL0812与不同的化学治疗剂的组合——体内测定
[0444] 2.1：
[0445] 与多西他赛组合的小鼠中的A549异种移植物
[0446] 研究参考：ALM-IDIBAPS
[0447] 研究地点：分子和转化肿瘤学研究小组，IDIBAPS，巴塞罗那医院诊所(Hospital Clinic)。
[0448] GLP符合性：否
[0449] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2012)
[0450] 参考化合物：多西他赛。
[0451] 测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0452] 目的：研究单独的ABTL0812及其与多西他赛(一种用于治疗NSCLC的参考药物)的组合的抗肿瘤活性。
[0453] 方法：在每一侧侧腹部向小鼠注射5x106个A549细胞以诱导肿瘤形成。20天后，当肿瘤的体积大约是50mm3时，将动物同类随机化分组并开始不同的治疗。ABTL0812通过口服途径按30mg/kg/天每周施用5次。多西他赛5mg/kg每周腹膜内施用一次(Coxon等人，2012)。每周监测肿瘤体积和体重3次。
[0454] 结果：与对照动物相比，ABTL0812显著减小了肿瘤体积(ANOVA，接着为t测试)。ABTL0812的功效确实与多西他赛治疗所观察到的功效相似。有趣的是，ABTL0812增强了多西他赛的抗肿瘤作用。统计学分析表明，与单独的多西他赛相比，本组合治疗显著改善了肿瘤生长的减少(t检验，p<0.001)。另外，在任何治疗组(包含将ABTL0812与多西他赛一起施用的治疗组)中均未观察到体重或血液学计数的降低(未示出)，表明本组合没有毒性作用。
关于ABTL0812和多西他赛的组合在A549肺癌异种移植物模型中的抗肿瘤作用，与处死时的对照相比，所有治疗均显著减小了肿瘤体积(*，ANOVA，接着为t测试分析)。另外，30mg/kg ABTL0812+多西他赛的组合比单独的多西他赛的治疗显著更有功效(**p<0.01，t-测试)。另一方面，无论是任何单独的治疗还是其组合，均未观察到对体重的影响。有关进一步的细节，请参见本文的图7。
关于ABTL0812和多西他赛的组合在A549肺癌异种移植物模型中的抗肿瘤作用，与处死时的对照相比，所有治疗均显著减小了肿瘤体积(*，ANOVA，接着为t测试分析)。另外，30mg/kg ABTL0812+多西他赛的组合比单独的多西他赛的治疗显著更有功效(**p<0.01，t-测试)。另一方面，无论是任何单独的治疗还是其组合，均未观察到对体重的影响。有关进一步的细节，请参见本文的图7。
[0455] 结论：ABTL0812减少了源自A549细胞的肺癌异种移植物模型中的肿瘤生长。在本模型中，ABTL0812具有类似于SOC多西他赛的功效。单一治疗形式的ABTL0812和多西他赛在源自A549细胞的肺癌异种移植物模型中类似地减小了肿瘤体积。ABTL0812增强了多西他赛的抗肿瘤活性而无毒性作用。这些结果表明，ABTL0812加多西他赛的组合治疗对肺癌的治疗可能具有临床意义。
[0456] 2.2：
[0457] ABTL0812与紫杉醇和卡铂的组合在小鼠中的人鳞状NSCLC(H157)异种移植物中的功效
[0458] 研究参考：ALM-IDIBAPS
[0459] 研究地点：分子和转化肿瘤学研究小组，IDIBAPS，巴塞罗那医院诊所。
[0460] GLP符合性：否
[0461] 测试化合物：ABTL0812(批次K102E)
[0462] 测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0463] 目的：用人Kaplan-Meier分析在人鳞状NSCLC异种移植物模型中研究单独的ABTL0812及其与紫杉醇和卡铂(P/C)的组合的存活率
[0464] 方法：在一侧侧腹部向小鼠注射5x106个H157细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤的体积大约是100mm3时，将动物同类随机分组(每组n＝8)并开始不同的治疗。研究的不同条件是媒剂、每天120mg/kg口服ABTL0812、15mg/kg卡铂+50mg/kg紫杉醇通过i.p.途径、和接受这两种方案的组合的另一组。始终在首次P/C施用前两天和后两天施用ABTL0812，维持每周4剂量ABTL0812和一剂量P/C。每周监测肿瘤体积3次。为了进行Kaplan-Meier绘图，将动物从研究中排除的终点标准是肿瘤体积大于>1000mm3或伦理委员会确认的不同动物福利指标。维持不同组的治疗，直到每组中的所有动物达到1000mm3或福利相关终点标准，但ABTL0812+P/C组除外，在本组中的小鼠必须在它们达到1000mm3之前处死以终止实验程序。
[0465] 结果：在Kaplan-Meier分析中，ABTL0812治疗与P/C的组合表现出最有效的治疗。如本文的图8中所示，就存活率而言，ABTL0812+P/C的组合是最有效的治疗，示出了优于其它组的显著益处。在开始治疗后的第20天，相较于ABTL0812和P/C组的0％以及媒剂组的
20％，ABTL0812+P/C治疗示出了75％存活而未表现出任何相关的毒性征象。
20％，ABTL0812+P/C治疗示出了75％存活而未表现出任何相关的毒性征象。
[0466] 结论：基于动物福利指标的不同测量并指示终点决策，建立了终点标准。当动物健康状况稳定时，将1000mm3的肿瘤体积设置为终点标准。在这些条件下，ABTL0812+P/C治疗的组合在H157鳞状NSCLC异种移植物模型中表现出通过Kaplan-Meier分析测量的存活率的显著增加，治疗后20天75％存活，相比之下，ABTL0812和媒剂中0％存活，P/C组中25％存活。
[0467] 2.3：ABTL0812与紫杉醇和卡铂的组合在小鼠中的人腺癌NSCLC(H1975)异种移植物中的功效
[0468] 研究参考：ABT-EI-049
[0469] 研究地点：分子和转化肿瘤学研究小组，IDIBAPS，巴塞罗那医院诊所。
[0470] GLP符合性：否
[0471] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2012)
[0472] 参考化合物：紫杉醇(Selleckchem#S1150)卡铂(Sigma Aldrich#C2538)测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0473] 目的：研究单独的ABTL0812及其与紫杉醇和卡铂的组合在人肺腺癌异种移植物中的抗肿瘤活性。紫杉醇和卡铂组合是治疗NSCLC的参考治疗之一。
[0474] 方法：将H1975细胞系常规地在DMEM 10％FBS中培养，并且收获处于指数生长期的细胞并计数以进行肿瘤接种。在一侧侧腹部向小鼠注射2.5x106个H1957细胞，所述细胞混悬在50μl无FBS的生长培养基和50μl基质胶(Corning#354234)中。每周监测肿瘤体积3天，并且当肿瘤达到100mm3(介于50和150mm3之间)时，将动物同类分布到四个治疗组中，其表现出相似的平均组内肿瘤体积(排除小于50mm3或大于150mm3的肿瘤以最小化差异)。
[0475] 治疗组为：
[0476] -媒剂组(n＝7)：口服200μl水+5％甘油治疗，每周四天；并且两i.p.注射剂100μl盐水溶液，每周一次
[0477] -ABTL0812(n＝9)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812(重悬于水+5％甘油中)治疗，每周5次
[0478] -紫杉醇/卡铂(n＝9)：i.p.施用100μl 15mg/kg紫杉醇治疗；并且i.p.施用100μl 5mg/kg卡铂，每周一次
[0479] -ABTL0812+紫杉醇/卡铂(n＝9)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812治疗，每周四天；并且i.p.施用100μl 15mg/kg紫杉醇，并i.p.施用100μl 5mg/kg卡铂，每周一次[0480] 结果：施用的ABTL0812与紫杉醇和卡铂的组合在源自H1957细胞的异种移植物中表现出最佳的体内抗肿瘤作用。尽管与媒剂组相比，紫杉醇和卡铂的施用减小了肿瘤体积，但单独施用的ABTL0812表现出相似的肿瘤体积减小，且趋势有所改善，而ABTL0812+紫杉醇和卡铂的三联组合表现出最高的肿瘤体积减小，且差异显著。此外，在三联组合组治疗的第一周期间，观察到体重略有降低，而其余的实验均保持稳定。(在任何治疗组(包含将ABTL0812与多西他赛一起施用的治疗组)中均未观察到体重或血液学计数的降低(未示出)，表明本组合没有毒性作用。有关进一步的细节，请参见本文的图9。
[0481] 结论：经口施用的ABTL0812减少了源自H1975细胞的肺癌异种移植物模型中的肿瘤生长。在本模型中，ABTL0812具有类似于SOC紫杉醇+卡铂的功效。另外，ABTL0812增强了紫杉醇/卡铂的抗肿瘤活性而无毒性作用。这些结果表明，ABTL0812加紫杉醇/卡铂的组合治疗对肺癌的治疗可能具有临床意义。
[0482] 2.4：ABTL0812与培美曲塞和顺铂的组合在小鼠中的人腺癌NSCLC(A549)异种移植物中的功效
[0483] 研究参考：ABT-EI-052
[0484] 研究地点：蛋白激酶和细胞信号转导小组，UAB
[0485] GLP符合性：否
[0486] 测试化合物：ABTL0812(批次K102E)
[0487] 参考化合物：培美曲塞(Sigma Aldrich#PHR1596)和顺铂(Sigma Aldrich#P4394)[0488] 测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0489] 目的：本研究的目的是评估单独的ABTL0812或其与培美曲塞和顺铂(护理标准化学治疗)的组合在治疗移植有人肺腺癌A549细胞的免疫抑制裸小鼠中的肺癌皮下异种移植物模型中的抗肿瘤作用。
[0490] 方法：将A549细胞系常规地在DMEM 10％FBS中培养，并且收获处于指数生长期的细胞并计数以进行肿瘤接种。在一侧侧腹部向50只8周龄雌性裸小鼠注射5x106个MiaPaca2细胞，所述细胞混悬在50μl无FBS的生长培养基和50μl基质胶(Corning#354234)中。每周监测肿瘤体积3天，并且当肿瘤达到100mm3(介于50和150mm3之间)时，将动物同类分布到三个治疗组中，其表现出相似的平均组内肿瘤体积(排除小于50mm3或大于150mm3的肿瘤以最小化差异)。
[0491] 治疗组为：
[0492] -媒剂组(n＝7)：口服200μl水+5％甘油治疗，每周4次；并且i.p.200μl盐水缓冲液(化学治疗媒剂)，每周两次
[0493] -培美曲塞/顺铂(n＝20)：i.p.100μl00 mg/kg培美曲塞，每周两次；并且i.p.100μl 2mg/kg顺铂，每周一次
[0494] -ABTL0812+培美曲塞/顺铂(n＝20)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812(重悬于水+5％甘油中)，每周4次；并且i.p.100μl 100mg/kg培美曲塞，并i.p.100μl 2mg/kg顺铂，每周一次
[0495] 结果：如图1中所示，施用的ABTL0812与培美曲塞和顺铂的组合表现出强抗肿瘤作用，并增强了培美曲塞/顺铂治疗作用，从而实现了相较于培美曲塞/顺铂治疗组的肿瘤体积的显著减小。从治疗第33天起，与培美曲塞/顺铂相比，ABTL0812+培美曲塞/顺铂表现出显著的肿瘤减少，在接下来的几天直到治疗的最后一天(第41天)，差异更为显著。从治疗的第22天直到治疗的最后一天(第41天)，两个治疗组(培美曲塞/顺铂和ABTL0812+培美曲塞/顺铂)均表现出相较于媒剂组的显著的肿瘤体积减小。
[0496] 就治疗产生的毒性而言，图2示出了在治疗的41天中监测的所有四个组的总体重的时间过程。尽管未见毒性征象或临床病理症状，但观察到ABTL0812+培美曲塞/顺铂组在治疗的第一周与其余组相比略有降低，这是由于在施用化学治疗的日子里食物摄入的减少。在任何组中均未观察到另外的临床病理征象。有关进一步的细节，请参见本文的图10。
[0497] 结论：如前所述，ABTL0812减少了源自A549细胞的肺癌异种移植物模型中的肿瘤生长。在本模型中，ABTL0812增强了培美曲塞和顺铂的抗肿瘤活性而无毒性作用。培美曲塞和顺铂治疗是肺腺癌患者最常见的一线治疗选择，因此这些结果表明，ABTL0812加培美曲塞和顺铂的组合治疗对肺癌患者的治疗可能具有临床意义。
[0498] 2.5：
[0499] ABTL0812与紫杉醇的组合在小鼠中的子宫内膜原位模型中的功效研究
[0500] 研究地点：Xenopat(巴塞罗那，西班牙)
[0501] GLP研究：否
[0502] 测试化合物：ABTL0812(批次001R/2014)，紫杉醇(Teva)
[0503] 测试系统：无胸腺裸-Foxn1nu雌性小鼠
[0504] 目的：评估经口施用的ABTL0812与ip紫杉醇的组合在子宫内膜癌Ishikawa原位模型中的抗肿瘤功效。
[0505] 方法：在雌性小鼠的子宫中原位植入3mm3的Ishikawa细胞系源肿瘤块。在开始药物治疗之前，对所有动物进行称重并通过触诊对肿瘤体积进行评定。基于小鼠的肿瘤体积，使用随机化分组块设计将小鼠分为几组。紫杉醇每7天i.p.施用(15mg/kg)。ABTL0812通过口服填喂施用，并其施用时间表为用药5天停药2天(120mg/kg/天)。总体来说，将动物如下表所示分为四个施用组。
[0506] 表.子宫内膜癌原位模型中的施用组。
[0507]
[0508] 根据公式V＝π/6xLxW2估计肿瘤体积，其中L是肿瘤的长轴，W是肿瘤的短轴。在常规监测时，检查动物的肿瘤生长和治疗对正常行为的作用，例如活动性、食物的视觉估计、体重增加/降低(在药物施用期间每周测量体重两次)、眼睛/毛发无光以及其它任何异常作用。基于每个子集中的动物数量记录死亡和观察到的临床征象。
[0509] 鉴于原位肿瘤只能在处死时测量，将一组动物(每组n＝2-3)在治疗一周后处死以确定对肿瘤生长的早期作用。治疗3周后将大多数动物处死(每组n＝5-7)。
[0510] 结果：在一组小鼠(n＝36)中原位植入3mm3 Ishikawa细胞系源肿瘤片段。在整个实验治疗期间中未记录到对动物行为的作用。用组合紫杉醇治疗的动物表现出肿瘤重量增加的减少，并且一些体重降低在治疗期结束时部分恢复。鉴于相较于对照组的这种体重降低未达到10％，因此不被视为具有毒性。将动物在施用药物治疗一周或三周后处死，并按照方法中所示确定肿瘤体积。在治疗一周的那些动物中未观察到差异。然而，在治疗三周的那些动物中，对于用紫杉醇+ABTL0812的组合治疗的那些动物观察到了相加作用——参见本文的图11。
[0511] 结论：ABTL0812+紫杉醇的组合已表现出协同作用(相对于每种单独的药物的作用)，因为与对照动物相比，在用组合治疗的动物中观察到显著的肿瘤体积减小。同时，在用组合治疗的动物中观察到一些体重降低。然而，本作用不被认为具有毒性。
[0512] 2.6：
[0513] ABTL0812与紫杉醇和卡铂的组合在小鼠中的患者源异种移植物(PDX)子宫内膜模型中的功效研究
[0514] 研究参考：ABT-EI-043
[0515] 研究地点：VHIR
[0516] GLP符合性：否
[0517] 测试化合物：ABTL0812(批次K102E＝MEI-014-15)
[0518] 参考化合物：紫杉醇(Selleckchem#S1150)卡铂(Sigma Aldrich#C2538)
[0519] 测试系统：无胸腺裸-Foxn1nu雌性小鼠
[0520] 目的：研究单独的ABTL0812及其与紫杉醇和卡铂(P/C)的组合在裸小鼠皮下移植的PDX模型中的抗肿瘤活性。
[0521] 方法：在几只裸小鼠的一侧侧腹部植入肿瘤，所述肿瘤是通过外科手术从患有浆液性组织学，IIIC2级，100％子宫肌层浸润以及骨盆和主动脉淋巴结及淋巴血管间隙浸润并且携带p53和PI3KCA基因突变的患者取出的。在肿瘤长到100mm3后，从小鼠中提取肿瘤，切成2mm长的碎块，重新植入40只小鼠的一侧侧腹部。当平均肿瘤体积达到100mm3时，将小鼠随机分布到治疗组中，并按以下方式给药：媒剂(n＝11)；ABTL0812：口服120mg/kg，每周5次(n＝10)；紫杉醇/卡铂(P/C)：腹膜内P：50mg/kg/C：15mg/kg(n＝12)；和ABTL0812+P/C：ABTL0812(n＝10)，始终在首次P/C施用前两天和后二天施用，每周维持4剂量ABTL0812和一剂量P/C；剂量与分开给予时相同。
[0522] 治疗的有效性通过治疗对肿瘤生长的影响来测量(通过其体积来测量)。在研究期间，通过动物体重确定动物的健康状态和药物引起的毒性。通过双因素ANOVA(逐日分析)评估肿瘤大小演变和肿瘤重量。
[0523] 为了模拟II期临床试验设计(其中ABTL0812将在P/C周期后长期施用)，从P/C和ABTL0812+P/C组中去除P/C治疗，长期维持ABTL0812。在额外的17天中，在去除P/C治疗后，测量肿瘤体积。
[0524] 结果：当肿瘤达到约100mm3时，将一组40只小鼠随机分布到四个治疗组中。如本文的图12中所示，在治疗开始后的第47天，与单独的媒剂、单独的ABTL0812和单独的P/C相比，ABTL0812+P/C表现出最高的功效和统计学上显著的肿瘤生长减少。从总体重中不存在显著的体重降低可以看出，治疗结果的改善与毒性征象的增加无关。单独施用的ABTL0812表现出与P/C相同的功效而无任何相关毒性征象。
[0525] 在第47天，停止P/C施用，同时长期维持ABTL0812(每周5天)以确定维持的ABTL0812施用是否可以避免或延迟肿瘤复发。尽管在小鼠停止接受治疗的P/C组中，肿瘤继续以相似或略高的斜率生长，但维持了ABTL0812施用的ABTL0812+P/C组不仅没有表现出肿瘤生长率的增加，而且还表现出缓解的征象。在整个实验期间维持ABTL0812的ABTL0812组表现出与P/C非常相似的肿瘤生长抑制，维持恒定的生长斜率，这表明没有会增加生长率的抗药过程的征象。
[0526] 结论：ABTL0812+P/C的组合已表现出协同作用，示出了相较于单独的P/C的显著更高的肿瘤体积减小，其还示出了在前47天期间相较于媒剂组的显著的肿瘤体积减小。作为单一治疗施用的ABTL0812在减少肿瘤生长方面表现出与P/C施用所获得相同的功效。在第15天，仅在ABTL0812组中部分地观察到体重降低，在接下来的四天中便恢复了体重的降低并且在其余的实验中维持稳定。其它组均未表现出被视为具有毒性的任何作用。
[0527] 为了在人类中模拟II期临床试验(其中ABTL0812将与P/C组合作为一线药物施用，并且ABTL0812将在化学治疗周期后长期保留)，我们在第47天去除了P/C治疗，同时维持ABTL0812。尽管从P/C和ABL0812开始的肿瘤生长没有减少，但是ABTL0812的长期施用在本人子宫内膜PDX中有效地避免了P/C治疗后的肿瘤复发，在化学治疗后10天表现出缓解的征象。
[0528] 2.7：
[0529] ABTL0812与紫杉醇/吉西他滨(P/Gm)的组合在移植有MiaPaca-2细胞的小鼠中的人胰腺异种移植物模型中的功效研究
[0530] 研究参考：ABT_EI_001_XP
[0531] 研究地点：能力虚拟实验室-UAB
[0532] GLP符合性：否
[0533] 测试化合物：ABTL0812(批次K102E＝MEI-014-15)
[0534] 参考化合物：紫杉醇/吉西他滨(P/Gm)
[0535] 测试系统：无胸腺裸-Foxn1nu雌性小鼠
[0536] 目的：评估通过口服途径的ABTL0812与P/Gm的结合在胰腺癌MiaPaCa2异种移植物小鼠模型中的抗肿瘤功效。i.p.施用的P/Gm与媒剂、ABTL0812以及ABTL0812+P/Gm的组合一起用作阳性对照。通过肿瘤生长、化合物的耐受性和由动物体重演变指示的毒性来评定功效。
[0537] 方法：经由皮下途径在一侧侧腹部向无胸腺雌性裸小鼠(每组n＝9)注射0.1ml MiaPaca2细胞(5X106个细胞/ml，无血清DMEM培养基，与基质胶1：1)。测量肿瘤体积(TV)为长度x宽度2x1/2，每周三次。当平均肿瘤体积达到100mm3时，将小鼠随机分布到治疗组中，并按以下方式给药：媒剂；ABTL0812 120mg/kg，每周5次；P/Gm 15mg/kg和60mg/kg，每周两次；和ABTL0812+P/Gm的组合，其中ABTL0812每周给予四次(第1、2、4和5天)，始终在P/Gm施用前两天(第3天和第6天)给予，持续共4周。
[0538] 治疗的有效性通过治疗对肿瘤生长的影响来测量(通过其体积来测量)。在研究期间，通过动物体重确定动物的健康状态和药物引起的毒性。通过双因素ANOVA(逐日分析)并通过学生t测试(发现显著差异的日子)评估肿瘤大小演变。
[0539] 结果：本文的图13的图示出了经口施用的ABTL0812与P/Gm的组合对相对肿瘤体积和总体重的作用(作为毒性的量度)。ABTL0812与P/Gm的组合表现出最高的功效，相较于单独的P/Gm在指示时间显著减小了肿瘤体积。另外，ABTL0812+P/Gm组合治疗从治疗后第10天起在所有动物中表现出肿瘤消退，与其余组所观察到的相反。单独的ABTL0812似乎在治疗后的前15天内具有积极作用，在接下来的几天中表现与媒剂组相似的肿瘤体积。与媒剂和ABTL0812组相比，指示剂量的P/Gm治疗减小了肿瘤体积，但在任何时间均未分析出统计学显著性。在总体重图中，我们可以看到ABTL0812+P/Gm的组合相较于其余组在总体重中的影响。尽管在前几剂量ABTL0812+P/Gm后体重略有降低，但组合产生的毒性最小，并且在实验期间在任何动物中均没有急性毒性作用。
[0540] 结论：组合ABTL0812+P/Gm已表现出协同作用，具有相较于单独的P/Gm显著更高的肿瘤体积减小。P/Gm还表现出相较于与媒剂和ABTL0812组更高的肿瘤体积减小，但没有统计学显著性。作为单一治疗施用的ABTL0812表现出与媒剂组所获得相同的肿瘤生长曲线。值得注意的是，ABTL0812+P/Gm治疗可以在用组合治疗的所有个体动物中诱发肿瘤消退，在治疗第10天之前将肿瘤体积维持为大约100mm3，并在治疗第10天后维持在100mm3以下，表明肿瘤消退。在ABTL0812+P/Gm组中部分地观察到体重降低，但任何组的小鼠均未表现出被视为具有毒性的任何作用。
[0541] 2.8：
[0542] 施用的ABTL0812与Nab-紫杉醇/吉西他滨(Nab-Pac/Gm)的组合在移植有MiaPaca-2细胞的小鼠中的人胰腺异种移植物模型中的功效研究
[0543] 研究参考：ABT-EI-053
[0544] 研究地点：能力虚拟实验室-UAB
[0545] GLP符合性：否
[0546] 测试化合物：ABTL0812(批次K102E＝MEI-014-15)
[0547] 参考化合物：吉西他滨盐酸盐(Sigma Aldrich G6423)，Nab-紫杉醇(Abraxane；ID：3369272 Celgene)
[0548] 测试系统：无胸腺裸-Foxn1nu雌性小鼠
[0549] 目的：本研究的目的是评估经口施用以增强护理标准(SOC)化学治疗吉西他滨的抗肿瘤作用的ABTL0812以及腹膜内(i.p.)施用的组合吉西他滨/Nab-紫杉醇在移植有MiaPaca2细胞的免疫抑制裸小鼠中的体内人胰腺异种移植物模型中的功效和安全性。两种化学治疗选择都是治疗人类晚期胰腺癌的最常见的一线治疗。
[0550] 方法：常规地培养MiaPaca2细胞系，并且收获处于指数生长期的细胞并计数以进行肿瘤接种。在一侧侧腹部向55只免疫缺陷的无胸腺裸雌性小鼠皮下注射5x106个MiaPaca2细胞，所述细胞混悬在50μl无FBS的生长培养基和50μl基质胶(Corning#354234)中。每周监测肿瘤体积3天，并且当肿瘤达到100mm3(介于50和150mm3之间)时，将动物同类分布到六个治疗组中，其表现出相似的平均组内肿瘤体积并且排除小于50mm3或大于150mm3的肿瘤以最小化差异。
[0551] 治疗组为：
[0552] -媒剂组(n＝9)：口服200μl水+5％甘油治疗，每周5次(ABTL0812媒剂)；并且i.p.200μl盐水缓冲液(化学治疗媒剂)，每周两次。
[0553] -ABTL0812(n＝9)：口服120mg/kg(于200μl蒸馏水+5％甘油中)治疗，每周5次。
[0554] -吉西他滨(n＝9)：i.p.60mg/kg(于100μl无菌水中)治疗，每周2次。
[0555] -吉西他滨+Nab-紫杉醇(n＝8)：Nab-紫杉醇由粉状原料(10％(m/m)，0.9％NaCl溶液中)新鲜制备，以5mg/kg(于230μl中)i.p.施用，每周2次。吉西他滨以60mg/kg(于100μl无菌水中)i.p.施用，每周2次。重要的是，改变注射部位以避免肠坏死，并使Nab-紫杉醇和吉西他滨注射液在小鼠腹部中彼此保持得尽可能远。
[0556] -吉西他滨+ABTL0812(n＝10)：口服120mg/kg ABTL0812(于200μl蒸馏水+5％甘油中)治疗，每周5次；并且i.p.施用60mg/kg吉西他滨(于100μl无菌水中)，每周2次。ABTL0812始终在化学治疗前施用，目的是减轻i.p.注射引起的应激，通常作为最后一次施用。
[0557] -吉西他滨+Nab-紫杉醇+ABTL0812(n＝8)：口服120mg/kg ABTL0812(于200μl蒸馏水+5％甘油中)治疗，每周5次；i.p.施用60mg/kg吉西他滨(于100μl无菌水中)，每周2次；并且i.p.施用5mg/kg Nab-紫杉醇(于230μl 0.9％NaCl溶液中)，每周2次。与吉西他滨+Nab-紫杉醇组一样，在腹部的分开的区域中施用注射剂。ABTL0812始终在化学治疗前施用，目的是减轻i.p.注射引起的应激。
[0558] 通过每周测量肿瘤体积三天来评定治疗功效。另外，除了视觉检查指示临床病理症状的征象外，每周监测总体重三天以测试与治疗有关的毒性。在研究结束时，通过吸入二氧化碳使小鼠安乐死，并通过颈脱位进一步确认死亡。
[0559] 结果：我们选择了次最优剂量的化学治疗(基于参考书目)，目的是不具有可以由ABTL0812增强的强抗肿瘤反应，从而降低化学治疗剂量并因此减少其不期望的不良事件。图14示出了用不同化学治疗方案(ABTL0812或两者的组合)治疗的MiaPaca2源异种移植物的肿瘤体积进展。图14A示出了除ABTL0812和媒剂治疗外，吉西他滨+Nab-Pac治疗的异种移植物的肿瘤体积进展(与吉西他滨+Nab-Pac+ABTL0812治疗相比)。与媒剂组相比，只有三联组合Gem+Nab-Pac+ABTL0812从第22天开始表现出显著的肿瘤体积减小，并维持这种统计学显著性直到研究结束，其中治疗的最后五天表现出最高的肿瘤体积差异，并且与未表现出相较于媒剂组的肿瘤体积的显著差异的Gem+Nab-Pac组相反。当比较Gem+Nab-Pac+ABTL0812与Gem+Nab-Pac时，三联组合在治疗的最后一天显著减小了肿瘤体积。还可以观察到，与Gem+Nab-Pac组相比，在治疗的前20天期间，单独施用的ABTL0812在肿瘤体积演变中表现出更好的反应，在其余研究中，肿瘤体积演变相似，但在任何时间点均未观察到显著差异。
[0560] 图14B示出了除ABTL0812和媒剂治疗外，吉西他滨治疗的异种移植物的肿瘤体积进展(与吉西他滨+ABTL0812治疗相比)。与媒剂组相比，只有双联组合Gem+ABTL0812从第17天开始表现出显著的肿瘤体积减小，并维持这种统计学显著性直到研究结束，与未表现出相较于媒剂组的肿瘤体积的显著差异的吉西他滨组相反。当比较Gem与Gem+ABTL0812时，双联组合在治疗的最后一天显著减小了肿瘤体积。还可以观察到，与Gem组相比，在整个研究期间，单独施用的ABTL0812在肿瘤体积演变中表现出更好的反应，但在任何时间点均未观察到显著差异。
[0561] 在整个研究期间，每周监测小鼠总体重三次。图14C示出了除媒剂和ABTL0812组外，Gem+Nab-Pac和Gem+Nab-Pa+ABTL0812的总体重演变，并且图14D示出了除媒剂和ABTL0812组外，Gem和Gem+ABTL0812的总体重演变。就体重降低而言，在任何组中均未观察到毒性征象，在整个研究期间所有组均表现出体重增加，表明缺少与治疗相关的毒性。在任何组中均未观察到另外的临床病理征象。有关进一步的细节，请参见图14。
[0562] 结论：本研究被设计用于确定单独的ABTL0812或其与SOC化学治疗的组合在治疗晚期胰腺癌中的功效。吉西他滨与Nab-紫杉醇的组合或单独的吉西他滨是大多数晚期胰腺癌患者的首选治疗，因此，我们评估了通过与ABTL0812组合并使用次最优剂量的化学治疗(从而减少不期望的次级作用)而产生的两种治疗的增强。ABTL0812增强了两种化学治疗，同时降低了毒性，表现出相较于载剂以及相较于单独的化学治疗最高的肿瘤体积减小。另外，单独施用的ABTL0812表现出与化学治疗相似的功效，并且在任何治疗组中均未观察到总体重方面的临床病理或毒性相关征象。
[0563] 2.9：
[0564] 单独的ABTL0812或其与顺铂的组合在神经母细胞瘤异种移植物模型(顺铂敏感)中的功效研究
[0565] 研究参考：ABTL0812笔记本，pg 20-36
[0566] 研究地点：Vail d'Hebron研究所小儿癌症转化研究实验室
[0567] GLP符合性：否
[0568] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2013)
[0569] 参考化合物：顺铂(Sigma#C2210000)
[0570] 测试系统：Nu/nu雌性小鼠，SH-SY5Y细胞系
[0571] 目的：确定单独的ABTL0812或其与顺铂的组合在神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的功效。
[0572] 方法：向免疫缺陷的无胸腺NMRI-Foxn1nu/Foxn1nu裸小鼠皮下注射SH-SY5Y细胞。本细胞系经过基因修饰以表达萤光素酶，这不仅可以进行肿瘤大小的体内研究，还可以进
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行转移形成的体内研究。当肿瘤达到80mm的平均体积时，将小鼠随机分布到不同治疗组中。每天以120mg/kg经口施用ABTL0812。同时，我们使用了顺铂，其是治疗神经母细胞瘤的化学诱导阶段中包含的一种药物。顺铂以2mg/kg i.p.施用，每周两次(Wang等人，2010)。另外，我们研究了将ABTL0812与指示剂量的顺铂组合的作用。
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行转移形成的体内研究。当肿瘤达到80mm的平均体积时，将小鼠随机分布到不同治疗组中。每天以120mg/kg经口施用ABTL0812。同时，我们使用了顺铂，其是治疗神经母细胞瘤的化学诱导阶段中包含的一种药物。顺铂以2mg/kg i.p.施用，每周两次(Wang等人，2010)。另外，我们研究了将ABTL0812与指示剂量的顺铂组合的作用。
[0573] 结果：A.肿瘤大小。本实验表明，ABTL0812抑制肿瘤进展，其功效与顺铂相似。治疗十天后，出于与肿瘤大小有关的伦理问题的原因，将对照组中的动物处死。此时，处死治疗组中的一半动物以测量肿瘤重量、血液学参数和转移形成(参见下文)。根据肿瘤大小的统计学分布在这些组中选择用于处死的动物。处死的小鼠的肿瘤重量测量证实了以下观察结果：ABTL0812的功效与护理标准顺铂相似。治疗组(每组大约5只小鼠)中的其余动物的肿瘤体积的分析表明，ABTL0812与顺铂的组合实现了肿瘤生长的长期稳定。体重监测表明，用ABTL0812治疗短暂地诱导轻度体重降低(<10％)。然而，本作用几天后便得以恢复。有关进一步的细节，请参见本文的图15。
[0574] B.安全性。用于评估治疗安全性的血液学分析表明，ABTL0812对血细胞比容没有影响，但是顺铂会诱发贫血和白细胞计数降低(见下表)。顺铂相关性贫血是在用本化学治疗药物治疗的患者中观察到的常见副作用(Wood和Hrushesky 1995)。
[0575] 表.SH-SY5Y异种移植物模型中的动物的血液学分析。血液采自处死时的动物，并且用自动分析仪确定血液成分。*p<0.05ANOVA，接着为Bonferroni。
[0576]
[0577] C.转移形成。为了研究ABTL0812在转移形成中的作用，我们使用了用萤光素酶报告载体转导的SH-SY5Y细胞系。如上所述，用ABTL0812、顺铂或两种药物的组合治疗携带源自本细胞系的异种移植物肿瘤的小鼠。治疗十天后，将动物处死，并通过监测肺和肝中表达荧光素酶的细胞离体评定转移。这些分析表明，ABTL0812，无论是单一试剂还是与顺铂组合，均在这些器官中抑制转移形成。相反，与载剂治疗的动物相比，单独的顺铂对抑制转移形成没有显著作用。
[0578] 结论：单一试剂形式的ABTL0812具有与顺铂相当的功效，同时在血液学参数方面具有更好的安全性。有趣的是，ABTL0812与顺铂的组合在较长时间内稳定了肿瘤进展。另外，ABTL0812在神经母细胞瘤小鼠模型中抑制了自发转移形成，而顺铂则没有。这些数据进一步支持了ABTL0812可能具有相较于目前基于铂的化学治疗增强的治疗作用。
[0579] 2.10：
[0580] ABTL0812与阿霉素的组合在小鼠中的人三阴性乳腺癌(MDA-MB-231)异种移植物中的功效
[0581] 研究参考：待定
[0582] 研究地点：UAB能力实验室。
[0583] GLP符合性：否
[0584] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2012)
[0585] 参考化合物：阿霉素(sigma#D1515)
[0586] 测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0587] 目的：研究单独的ABTL0812及其与阿霉素的组合在人三阴性乳腺癌异种移植物中的抗肿瘤活性。
[0588] 方法：将MDA-DB-231细胞系常规地在DMEM 10％FBS中培养，并且收获处于指数生长期的细胞并计数以进行肿瘤接种。在一侧侧腹部向小鼠注射2.5x106个MDA-DB-231细胞，所述细胞混悬在50μl无FBS的生长培养基和50μl基质胶(Corning#354234)中。每周监测肿瘤体积3天，并且当肿瘤达到100mm3(介于50和150mm3之间)时，将动物同类分布到四个治疗组中，其表现出相似的平均组内肿瘤体积(排除小于50mm3或大于150mm3的肿瘤以最小化差异)。
[0589] 治疗组为：
[0590] -媒剂组(n＝7)：口服200μl水+5％甘油治疗，每周四天；并且两i.p.注射剂100μl盐水溶液，每周一次
[0591] -ABTL0812(n＝9)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812(重悬于水+5％甘油中)治疗，每周5次
[0592] -阿霉素(n＝9)：i.p.施用100μl 2mg/kg阿霉素治疗，每周一次
[0593] -ABTL0812+阿霉素(n＝9)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812治疗，每周四天；并且i.p.100μl 2mg/kg阿霉素，每周一次
[0594] 结果：施用的ABTL0812与阿霉素的组合的在源自MDA-DB-231细胞的异种移植物中表现出最佳的体内抗肿瘤作用。单独施用的ABTL0812表现出与单独的阿霉素相似的肿瘤体积减小，但是ABTL0812与阿霉素的双联组合表现出最高的肿瘤体积减小，且在研究结束时差异显著。所有治疗组均表现出相似的总体重演变，表明缺少与治疗相关的毒性。有关进一步的细节，请参见本文的图16。
[0595] 结论：如前所述，ABTL0812在源自MDA-DB-231细胞的乳腺癌异种移植物模型中减少了肿瘤的生长。在本模型中，ABTL0812增强了阿霉素的抗肿瘤活性。阿霉素治疗是乳腺癌患者的常见治疗选择，因此这些结果表明，ABTL0812加阿霉素的组合治疗对乳腺癌患者的治疗可能具有临床意义。
[0596] 2.11：
[0597] ABTL0812与吉西他滨和顺铂的组合在小鼠中的人胆管癌(EGI-1)异种移植物中的功效
[0598] 研究参考：ABT-EI
[0599] 研究地点：Biodonostia健康研究所肝脏疾病小组
[0600] GLP符合性：否
[0601] 测试化合物：ABTL0812(批次002/2012)
[0602] 参考化合物：吉西他滨盐酸盐(Sigma Aldrich G6423)和顺铂(Sigma#C2210000)[0603] 测试系统：Nu/nu雄性小鼠
[0604] 目的：研究单独的ABTL0812及其与吉西他滨和顺铂的组合在人胆管癌异种移植物中的抗肿瘤活性。吉西他滨和顺铂组合是治疗胆管癌的参考治疗之一。
[0605] 方法：将EGI-1细胞系常规地在DMEM 10％FBS中培养，并且收获处于指数生长期的细胞并计数以进行肿瘤接种。在一侧侧腹部向小鼠注射1x106个H1957细胞，所述细胞混悬在50μl无FBS的生长培养基和50μl基质胶(Corning#354234)中。每周监测肿瘤体积3天，并且当肿瘤达到100mm3(介于50和150mm3之间)时，将动物同类分布到四个治疗组中，其表现出相似的平均组内肿瘤体积(排除小于50mm3或大于150mm3的肿瘤以最小化差异)。
[0606] 治疗组为：
[0607] -媒剂组(n＝8)：口服200μl水+5％甘油治疗，每周四天；并且两i.p.注射剂100μl盐水溶液，每周一次
[0608] -ABTL0812(n＝8)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812(重悬于水+5％甘油中)治疗，每周5次
[0609] 吉西他滨/顺铂(n＝8)：i.p.施用100μl 50mg/kg吉西他滨治疗；并且i.p.施用100μl 2mg/kg顺铂，每周一次
[0610] ABTL0812+吉西他滨/顺铂(n＝8)：口服200μl 120mg/kg ABTL0812治疗，每周四天；并且i.p.施用100μl 50mg/kg吉西他滨，并i.p.施用100μl 2mg/kg顺铂，每周一次[0611] 结果：施用的ABTL0812与吉西他滨和顺铂的组合在源自EGI-1细胞的异种移植物中表现出最佳的体内抗肿瘤作用。与媒剂组相比，吉西他滨和顺铂的施用减小了肿瘤体积，但是没有任何统计学显著差异，与表现出相较于媒剂的统计学显著的肿瘤体积减小的ABTL0812+吉西他滨和顺铂治疗相反，单独施用的ABTL0812在治疗的最后一天之前未表现出相较于载剂的肿瘤体积减小，其中其表现出与化学治疗组相似的肿瘤体积。有关进一步的细节，请参见图17。
[0612] 结论：如前所述，ABTL0812在源自EGI-1细胞的胆管癌异种移植物模型中减少了肿瘤生长。在本模型中，ABTL0812增强了吉西他滨和顺铂施用的抗肿瘤活性。吉西他滨和顺铂治疗是胆管癌患者的常见治疗选择，因此这些结果表明，ABTL0812加吉西他滨和顺铂的组合治疗对胆管癌患者的治疗可能具有临床意义。
[0613] 实例3：与化学治疗的组合的毒性
[0614] 在在免疫抑制小鼠中进行的功效研究期间，获得了有关ABTL0812与化学治疗剂的组合的毒性的信息。已对ABTL0812+/-紫杉醇+/-卡铂的组合进行了具体的毒理学研究。
[0615] 研究参考：N-02220
[0616] 研究地点：Vivotecnia(马德里，西班牙)
[0617] GLP研究：否
[0618] 测试化合物：ABTL0812(批次001R/2014)，紫杉醇(Aurovitas，批次68J5041)，卡铂(Sigma-Aldrich，批次LSBL7058v)
[0619] 测试系统：CD-1雌性小鼠，12周龄。
[0620] 目的：确定ABTL0812与卡铂和紫杉醇的组合在施用两周后的毒理学特征。
[0621] 方法：通过体重分层方法将四十五只雌性CD-1小鼠分布到就个实验组(A-I)(每组5只动物)，各组在治疗或施用参考项目(紫杉醇和卡铂)的天数方面有所不同。
[0622] 下表总结了各个治疗组。请注意，使用了与先前的功效研究相同的施用时间表和剂量。
[0623] 表.用于评估ABTL0812、紫杉醇、卡铂及其组合在小鼠中的毒性的治疗组。
[0624]
[0625]
[0626] 安全性评定依赖于整个研究中记录的观察死亡率、局部和全身性临床征象、体重和食物消耗。另外，在所有动物处死前进行临床病理学确定(生物化学和血液学)。在观察阶段结束时(最后一次施用后一天)，将所有存活的动物处死并进行肉眼尸检。此外，安全性评定还基于处死时收集的选定目标器官的重量。
[0627] 结果：用测试项目进行重复口服治疗和用参考项目进行腹膜内治疗均未导致死亡。未记录到与治疗有关的局部或全身性临床征象。
[0628] 在研究过程中，在动物中观察到平均体重增加略有差异。除了A组(对照组)和C组(用一定剂量的紫杉醇治疗，每周一次)的动物外，大多数动物在研究的前四天表现出体重降低的趋势。然而，在整个研究期间，在大多数动物中未观察到绝对体重增加的统计学显著差异。与几个动物组(用媒剂治疗的A组、用紫杉醇治疗的C组、用用紫杉醇和卡铂的组合治疗的E组)相比，在整个研究期间，仅F组的动物(经口施用ABTL0812，每天一次，持续两个5天阶段；并且腹膜内施用紫杉醇和卡铂，每周一次(每一阶段的第一次经口给药当天))的体重增加有明显降低。
[0629] 尽管由于样本量小而无法进行统计学分析，但A组动物的估计食物消耗似乎比其余动物要高。关于临床生物化学参数，与对照组相比，大多数组的肌酐和甘油三酯水平较低。另一方面，与对照组相比，在用经口ABTL0812给药和腹膜内紫杉醇和卡铂给药的组合治疗的组中观察到血细胞比容水平的统计学显著下降(F组的动物)和血小板水平的统计学均显著下降(F组和G组的动物)。尽管这些值在正常范围内，但是不能排除临床病理学参数的治疗作用。
[0630] 对在治疗结束时进行安乐死的所有动物的尸检后肉眼观察未见任何被视为与测试项目有关的相关变化。观察到动物ID32的肝脏上存在白色区域，并且动物ID33的胰腺上存在色素沉着。另外，各治疗组之间的绝对和相对器官重量相似。
[0631] 下表从安全角度总结了最重要的研究结果。
[0632] 表.ABTL0812及其与紫杉醇和卡铂的组合的毒理学研究中的最相关的生物化学和血液学研究结果
[0633]
[0634] 结论：考虑到获得的这些结果，可以得出结论，在测定的实验条件下：
[0635] -单独的口服测试项目ABTL0812的重复施用及其与紫杉醇和卡铂的每周一次的腹膜内给药的组合均未导致死亡，并且耐受性良好，因为研究过程中，在任何动物中均未观察到指示毒性的局部或全身性临床征象。
[0636] -大多数动物在整个研究期间保持了体重。仅在用测试项目和两个参考项目的组合治疗的动物中(同是每个阶段的第一天)观察到统计学显著的降低。
[0637] -在研究期间，A组的动物的食物消耗似乎高于几乎所有动物。
[0638] -与对照组相比，治疗组中的临床病理(生物化学和血液学参数)表现出统计学显著差异。尽管对于来自本品系和性别的动物来说，大多数值都在正常范围内，但是不能排除治疗作用。对血小板计数的影响是由于卡铂引起的，但是当将三种实验药物组合时，血小板计数的另外的轻微降低是不能忽略的。
[0639] -未观察到治疗对肉眼尸检研究结果和绝对/相对器官重量的相关影响。
[0640] 实例4：ABTL0812与不同的化学治疗剂的组合——人类数据
[0641] 4.1：用于评定ABTL0812与紫杉醇和卡铂的组合在晚期子宫内膜癌或鳞状NSCLC患者中的功效和安全性的I/II期开放标签研究。
[0642] 正在在晚期子宫内膜癌或鳞状非小细胞肺癌患者中进行I/II期临床试验。这是一项多中心开放标签试验，其中ABTL0812经口使用，起始剂量为1300mg，每天三次，与化学治疗组合。
[0643] A.试验的目的
[0644] ·I期主要终点：评定ABTL0812加紫杉醇+卡铂一线治疗在晚期或转移性子宫内膜癌或鳞状NSCLC患者中的安全性和耐受性
[0645] ·II期主要终点：评估ABTL0812加紫杉醇+卡铂一线治疗在晚期或转移性子宫内膜癌或鳞状NSCLC患者中的功效
[0646] B.研究设计
[0647] 本研究不是随机分组的，除紫杉醇+卡铂外，所有入选患者均接受ABTL0812。本时期分为2个阶段：
[0648] ·阶段1：ABTL0812与化学治疗组合施用。
[0649] ·阶段2：SOC周期结束后，从开始阶段1起采用ABTL0812作为单一治疗，最多12个月。
[0650] 结论：
[0651] 这些结果表明，在人类中也存在ABTL0812化合物与紫杉醇和卡铂的组合在晚期子宫内膜癌或鳞状细胞癌患者中的使用所相关的协同作用，从这一意义上来说，已获得的人类临床试验是积极的。
[0652] 参考文献
[0653] 1：EP2409963B1(Lipopharma——2010年提交)
[0654] 2：Erazo等人；《临床癌症研究(Clinical Cancer Research)》；22(10)，2016年5月15日
[0655] 3：2016年11月22日的新闻-在本申请人(AbilityPharma)的网页上公布
[0656] 4：2016年12月14日的新闻-在本申请人(AbilityPharma)的网页上公布
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