[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请要求2013年3月13日提交的美国临时申请序列第61/780,272号的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。

[0003] 在联邦赞助的研究和开发下所做的关于发明权利的陈述

[0004] 不适用

[0005] 关于以光盘提交的“序列表”、表格或计算机程序列表附件

[0006] 不适用

[0007] 发明背景

[0008] 基于铂的药物(或“铂类”)是有效的抗癌药物，其形成阻断癌细胞中DNA和RNA合成的DNA加合物并诱导细胞凋亡。顺铂、卡铂和奥沙利铂是用于治疗多种实体瘤，包括卵巢癌、肺癌、结肠直肠癌、睾丸癌、膀胱癌、胃癌、黑色素瘤和头颈癌的主要铂类。然而，铂类的主要缺点是毒性。常见的副作用包括肾和神经损伤、高端听力损失、持久恶心和呕吐。

[0009] 顺铂(Cis-PtCl2(NH3)2；如下面式I所示)在1978年经FDA批准用于治疗多种癌症，并自那以后已用于癌症治疗。顺铂呈现出平面分子结构，并在25-37℃在0.9％盐水中
具有约1-2mg/mL(在65℃为8mg/mL)的溶解度。顺铂通过静脉注射盐水(氯化钠溶液)给
予患者并通过被动扩散或其他易化转运机制进入细胞。一旦在细胞质内，顺铂发生水解。氯化物配体各自被水分子代替，产生带正电荷的分子。不带电荷的种类是非反应性的，但一价阳离子和二价阳离子种类是最具反应性的。

[0010] 顺铂是特别有毒的药物。存在与使用该药物相关联的几个缺点：a)其严重毒性，例如肾毒性、神经毒性和呕吐发生(emetogenesis)，这是主要的剂量限制因素；b)其通过
肾脏快速排泄，导致循环半衰期短；c)其与血浆蛋白亲和力强；和d)其在室温下约1mg/mL
的有限水溶性。希望开发一种制剂，其将在肿瘤部位局部增加顺铂的浓度。还希望减少顺
铂在其他组织中的积累以使毒副作用最小化。

[0011]

[0012] 脂质体已用作铂类的传送载体以试图减少药物的毒性。脂质体是包括分离外部和内部水相的磷脂双层的囊泡。脂质体能够在脂质双层中运载疏水性药物和/或在水性核心
中运载亲水性药物以用于药物递送。脂质体尺寸通常在直径为50至250nm的范围内，其中
50至150nm的直径特别优选用于某些应用。脂质体铂类(包括顺铂)的使用已呈现出巨大
的挑战。脂质体铂类证实与游离药物相比，分布、代谢和从体内排泄的独特模式，以及不同的毒性水平和独特的副作用。特别地，优化脂质体铂类的释放速率在安全性与效力之间难
以维持平衡。通常，泄漏的脂质体将使包封的药物更容易获得，但会造成与天然药物类似的更大的毒性风险。另一方面，较少泄漏的脂质体可以减少毒性，但可能无法为足够的效力提供充足的药物释放。

[0013] 美国专利第6,126,966号(‘966专利)描述了空间稳定的脂质体顺铂。具体地，脂质体组合物被描述为成囊泡(vesicle-forming)脂质(例如，磷脂酰胆碱)，其具有1-20摩
尔％之间的成囊泡脂质衍生物和具有不带电帽的亲水性聚合物(例如，聚(乙二醇)改性
磷脂)，所述脂质体经形成，使得亲水性聚合物在脂质体的内和外表面上形成亲水聚合物链的涂层。然而，另一报道包括含有聚(乙二醇)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG5000)的
二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)分散体在各浓度下的低温-TEM图像(Biophysical Journal，
第85卷，2003年12月，第3839-3847页)。该图像表明，相对于‘966专利中要求保护的脂
质体，含有低至7.1mol％的DSPE-PEG5000DSPC的混合物主要为胶束。此外，‘966专利中描述的空间稳定的脂质体顺铂在II期研究试验中显示有限的体内功效(Feng等人，Cancer
Chemother.Pharmacol.54：441-448.2004)。清楚地，不能基于脂质体的组成简单地预测脂质体结构和物理性质，包括体内半衰期和药物释放曲线。

[0014] 考虑到已知制剂的缺点，希望开发与现有的脂质体和非脂质体铂疗法相比具有改善性质的脂质体顺铂。存在平衡效力和安全性并改善顺铂对靶向癌细胞的生物利用度的制
剂的需求。本发明满足了这些和其他需求。

[0015] 发明概述

[0016] 在一个方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物。该组合物包括：(a)基本上由50-75mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、20-45mol％的胆固醇和2-8mol％
的PEG-脂质组成的两性离子脂质体；和(b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例
为约40:1至约95:1的量包封在脂质体中。

[0017] 在第二个方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物。该组合物包括：(a)基本上由50-65mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、30-45mol％的胆固醇和2-8mol％
的PEG-脂质组成的两性离子脂质体；和(b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例
为约65:1至约95:1的量包封在脂质体中。

[0018] 在另一个方面，本发明提供治疗癌症的方法。该方法包括向需要其的受试者给予本发明的组合物。
附图说明

[0019] 图1显示含有和不含有二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-PEG2000(DSPE-PEG2000)的脂质体顺铂制剂的TEM显微照片。

[0020] 图2显示含有不同量的DSPE-PEG2000的脂质体顺铂制剂的TEM显微照片。

[0021] 图3显示含有不同量的DSPE-PEG5000的脂质体顺铂制剂的TEM显微照片。

[0022] 图4显示在小鼠KB肿瘤模型中给予各种脂质体顺铂制剂所产生的最大耐受剂量(MTD)和DNA/Pt加合物水平。

[0023] 图5显示在小鼠KB肿瘤模型中DNA/Pt加合物随时间的形成。

[0024] 图6显示给予脂质体顺铂制剂后裸小鼠的KB肿瘤随时间的中位生长。

[0025] 图7显示给予脂质体顺铂制剂后裸小鼠的A427肿瘤随时间的平均生长。

[0026] 发明详述

[0027] I.概述

[0028] 本发明涉及用于癌症疗法的脂质体顺铂组合物。本文所述的脂质体组合物基本上由磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇(PEG)缀合的脂质和包封的顺铂组成。本领域技术人员将理解，该组合物将通常包括包封的介质或缓冲剂，和外部介质。还描述了用于制备该组合物和用该组合物治疗癌症的方法。该组合物特别有用于增强癌细胞中细胞内的顺铂生物利用
度和改善癌症治疗的整体安全性。该组合物可广泛适用于预防和控制癌症，为患者和临床
医生提供多种益处。

[0029] II.定义

[0030] 如本文所用，术语“脂质体”涵盖由脂质双层包围的任何隔室。术语脂质体包括单层囊泡，其由单一的脂质双层构成，且直径通常在约20至约400nm范围内。脂质体也可以是多层的，其直径通常在1-10μm范围内。在一些实施方式中，脂质体可包括多层囊泡(MLV；尺寸为约1μm至约10μm)、大单层囊泡(LUV；尺寸为几百纳米至约10μm)和小单层囊泡
(SUV；尺寸为约20nm至约200nm)。

[0031] 如本文所用，术语“两性离子脂质体”是指含有在同一脂质分子中具有带正电荷和带负电荷的官能团的脂质的脂质体。两性离子脂质体的整个表面电荷将根据外部介质的pH而变化。通常，两性离子脂质体的整个表面电荷在生理pH(即，pH～7.4)下是中性的或阴
性的。

[0032] 如本文所用，术语“脂质体尺寸”和“平均粒径”是指脂质体的外径。平均粒径可通过多种技术，包括动态光散射(DLS)、准弹性光散射(QELS)和电子显微镜来确定。

[0033] 如本文所用，术语“摩尔百分数”和“mol％”是指给定的脂质组分的摩尔数除以所有脂质组分的总摩尔数。除非明确说明，当计算脂质体的脂质组分的mol％时，不包括活性剂、稀释剂或其它组分的量。

[0034] 如本文所用，术语“磷脂酰胆碱脂质”是指具有胆碱头基的二酰基甘油酯磷脂(即，1,2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱)。磷脂酰胆碱脂质中的酰基通常衍生自具有
6-24个碳原子的脂肪酸。磷脂酰胆碱脂质中的两个酰基可具有相同数量的碳原子或不同数
量的碳原子。磷脂酰胆碱脂质可包括合成的和天然来源的1,2-二酰基-sn-甘油基-3-磷
酸胆碱。

[0035] 如本文所用，“胆固醇”是指2,15-二甲基-14-(1,5-二甲基己基)四环2,7 11,15
[8.7.0.0 .0 ]二十七碳-7-烯-5-醇(化学文摘服务登记编号57-88-5)。

[0036] 如本文所用，术语“PEG-脂质”是指共价结合至疏水性或两性脂质部分的聚(乙二醇)聚合物。脂质部分可包括油脂、蜡、类固醇、脂溶性维生素、甘油一酯、甘油二酯、磷脂和鞘脂。优选的PEG-脂质包括二酰基-磷脂酰乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)]和N-酰
基-鞘氨醇-1-{琥珀酰基[甲氧基(聚乙二醇)]}。PEG-脂质中的PEG的分子量通常为
约500至约5000道尔顿(Da；g/mol)。PEG-脂质中的PEG可具有直链或支链结构。

[0037] 如本文所用，术语“顺铂”是指(SP-4-2)-二氯二氨络铂(II)(化学文摘服务登记编号15663-27-1)。

[0038] 如本文所用，术语“组合物”是指包含特定量的特定成分的产品，以及由特定量的特定成分的组合直接地或间接地产生的任何产品。本发明的药物组合物通常含有如本文所述的脂质体顺铂和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容且对其接受者无害。

[0039] 如本文所用，“烷醇”是指具有至少一个羟基的C1-4烷烃。烷醇包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇和叔丁醇。

[0040] 如本文所用，术语“多孔过滤器”是指含有具有限定的直径(例如，30-1000nm)的孔的聚合物或无机膜。多孔过滤器可由聚合物，包括但不限于聚碳酸酯和聚酯，以及无机底物，包括但不限于多孔氧化铝制成。

[0041] 如本文所用，术语“无菌过滤”是指通过使组合物穿过具有从滤液中排除微生物和/或病毒的能力的过滤器进行的组合物的灭菌。通常，用于灭菌的过滤器含有足够大以使脂质体穿过过滤器进入滤液，但足够小以阻止微生物例如细菌或真菌通过的孔。

[0042] 如本文所用，术语“癌症”是指包括人类癌症(cancers)和癌(carcinoma)、肉瘤、腺癌、淋巴瘤、白血病以及实体瘤和淋巴癌的病症。不同类型的癌症的实例包括但不
限于肺癌(例如，非小细胞肺癌或NSCLC)、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肝癌(即，肝癌(hepatocarcinoma))、肾癌(即，肾细胞癌)、膀胱癌、乳腺癌、甲状腺癌、胸膜癌、胰腺癌、子宫癌、宫颈癌、睾丸癌、肛门癌、胰腺癌、胆道癌、胃肠道类癌肿瘤、食管癌、胆囊癌、阑尾癌、小肠癌、胃(胃部)癌、中枢神经系统的癌症、皮肤癌、绒毛膜癌、头颈癌、血癌、骨原性肉瘤、纤维肉瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、单核细胞性白血病、髓细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞性白血病和多发性骨髓瘤。

[0043] 如本文所用，术语“治疗或处理(treat/treating/treatment)”是指在治疗或改善癌症或癌症症状中的任何成功指标，包括任何客观的或主观的参数，例如症状的减少；缓解；消退或使癌症或癌症症状对于患者更加可容忍。症状的治疗或改善可基于任何客观的
或主观的参数，包括例如，体检或临床试验的结果。

[0044] 如本文所用，术语“给予(administer/administered/administering)”是指给予本发明的脂质体组合物的方法。本发明的脂质体组合物可以各种方式给予，包括胃肠外、静脉内、皮内、肌内或腹膜内。脂质体组合物也可作为组合物或制剂的一部分给予。

[0045] 如本文所用，术语“受试者”是指在生命的任何阶段的任何哺乳动物，尤其是人。

[0046] 如本文所用，术语“约”表示用于修改该特定值时数值附近的闭合范围(closerange)。如果“X”为所述值，例如，“约X”将表示0.9X至1.1X的值，且更优选地，0.95X至
1.05X的值。任何提及“约X”特别表示至少值X、0.9X、0.91X、0.92X、0.93X、0.94X、0.95X、
0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、1.02X、1.03X、1.04X、1.05X、1.06X、1.07X、1.08X、1.09X和1.1X。

[0047] III.发明实施方案

[0048] 脂质体

[0049] 在一个方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物。该组合物包括：(a)基本上由约50mol％至约75mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、约20mol％至约
45mol％的胆固醇和约2mol％至约8mol％的PEG-脂质组成的两性离子脂质体；和(b)顺
铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约40:1至约95:1的量包封在脂质体中。

[0050] 在另一个方面，本发明提供用于治疗癌症的组合物。该组合物包括：(a)基本上由约50mol％至约65mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、约30mol％至约
45mol％的胆固醇和约2mol％至约8mol％的PEG-脂质组成的两性离子脂质体；和(b)顺
铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约65:1至约95:1的量包封在脂质体中。

[0051] 本发明的脂质体可含有任何合适的磷脂酰胆碱脂质(PC)或PC混合物。合适的磷脂酰胆碱脂质包括饱和的PC和不饱和的PC。

[0052] 饱和的PC的实例包括1,2-二月桂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱；DMPC)、1,2-二硬脂酰-sn-甘
油基-3-磷酸胆碱(二硬脂酰磷脂酰胆碱；DSPC)、1,2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱
(DOPC)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(二棕榈酰磷脂酰胆碱；DPPC)、1-肉豆蔻
酰-2-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(MPPC)、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷
酸胆碱(PMPC)、1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(MSPC)、1-棕榈酰-2-硬
脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(PSPC)、1-硬脂酰-2-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱
(SPPC)和1-硬脂酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(SMPC)。

[0053] 不饱和的 PC的实例包括但不限于 1,2- 二顺式肉豆蔻烯酰(1,2-dimyristoleoyl)-sn-甘 油 基-3- 磷 酸 胆 碱、1,2- 二 反 式 肉 豆 蔻 异 烯
酰(1,2-dimyristelaidoyl)-sn- 甘 油 基 -3-磷 酸 胆 碱、1,2- 二 顺 式 棕 榈 烯
酰(1,2-dipamiltoleoyl)-sn-甘 油 基-3- 磷 酸 胆 碱、1,2-二 反 式 棕 榈 异 烯 酰
(1,2-dipalmitelaidoyl)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1,2-二油酰-sn-甘油基-3-磷
酸胆 碱(DOPC)、1,2-二 反油 烯酰(1,2-dielaidoyl)-sn- 甘油 基-3-磷酸 胆 碱、
1,2-dipetroselenoyl-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1,2-二亚油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆
碱、1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(棕榈酰油酰磷脂酰胆碱；POPC)、1-棕
榈酰-2-亚油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆
碱(SOPC)、1-硬脂酰-2-亚油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-油酰-2-肉豆蔻酰-sn-甘
油基-3-磷酸胆碱(OMPC)、1-油酰-2-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(OPPC)和1-油
酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(OSPC)。

[0054] 脂质提取物，例如蛋黄PC、心脏提取物、脑提取物、肝脏提取物、大豆PC和氢化大豆PC(HSPC)也可用于本发明中。

[0055] 在一些实施方案中，磷脂酰胆碱脂质选自POPC、DSPC、DMPC和DPPC。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱脂质是POPC。在一些实施方案中，磷脂酰胆碱脂质包括DSPC和DPPC。

[0056] 通常，本发明的组合物包括含有50-75mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物的脂质体。脂质体可含有，例如，50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、
64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74或75mol％磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有50-55mol％磷脂酰胆碱。通常，本发明的组合物包括含有50-65mol％的磷脂酰胆碱
脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物的脂质体。在一些实施方案中，脂质体含有55-65mol％磷脂
酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有65-75mol％磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂
质体含有约75mol％磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有约70mol％磷脂酰胆碱。
在一些实施方案中，脂质体含有约65mol％磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有约
60mol％磷脂酰胆碱。在一些实施方案中，脂质体含有约55mol％磷脂酰胆碱。

[0057] 本发明组合物中的脂质体还含有20-45mol％的胆固醇(即，2,15-二甲2,7 11,15
基-14-(1,5-二甲基己基)四环[8.7.0.0 .0 ]二十七碳-7-烯-5-醇)。脂质体可含
有，例如，20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、
43、44或45mol％胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有20-30mol％胆固醇。在一些实
施方案中，脂质体含有30-40mol％胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有30-45mol％胆
固醇。在一些实施方案中，脂质体含有40-45mol％胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含
有约20mol％胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有约25mol％胆固醇。在一些实施方案
中，脂质体含有约30mol％胆固醇。在一些实施方案中，脂质体含有约35mol％胆固醇。在
一些实施方案中，脂质体含有约40mol％胆固醇。

[0058] 本发明的脂质体可包括任何合适的聚(乙二醇)-脂质衍生物(PEG-脂质)。在一些实施方案中，PEG-脂质选自二酰基-磷脂酰乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)]、N-酰
基-鞘氨醇-1-{琥珀酰基[甲氧基(聚乙二醇)]}及其组合物。PEG-脂质中的聚(乙二醇)
的分子量通常在约500Da至约5000Da的范围内。聚(乙二醇)可具有例如750Da、1000Da、
2000Da或5000Da的分子量。在一些实施方案中，PEG-脂质选自二硬脂酰-磷脂酰乙醇
胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](DSPE-PEG-2000)和二硬脂酰-磷脂酰乙醇胺-N-[甲氧
基(聚乙二醇)-5000](DSPE-PEG-5000)。在一些实施方案中，PEG-脂质为DSPE-PEG-2000。

[0059] 通常，本发明的组合物包括含有2-8mol％的PEG-脂质的脂质体。该脂质体可含有，例如，约2、约3、约4、约5、约6、约7或约8mol％PEG-脂质。在一些实施方案中，脂质体含有4-6mol％PEG-脂质。在一些实施方案中，脂质体含有约5mol％PEG-脂质。

[0060] 在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约55mol％POPC、约40mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约60mol％POPC、约
35mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约
65mol％POPC、约30mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离
子脂质体包括约57mol％POPC、约38mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。

[0061] 在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约40-50mol％DSPC、约15-25mol％DPPC、约25-35mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性
离子脂质体包括约46mol％DSPC、约19mol％DPPC、约30mol％胆固醇和约5mol％
DSPE-PEG(2000)。

[0062] 在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约55-75mol％DSPC、约20-40mol％胆固醇和约2-8mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约55-75mol％
DSPC、约20-40mol％胆固醇、约2-8mol％DSPE-PEG(2000)并且无DPPC。在一些实施方案
中，两性离子脂质体包括约65mol％DSPC、约30mol％胆固醇和5mol％DSPE-PEG(2000)。

[0063] 在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约45mol％DSPC、约20mol％DPPC、约30mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。在一些实施方案中，两性离子脂质体包括约
46mol％DSPC、约19mol％DPPC、约30mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)。

[0064] 通常，本发明的组合物含有脂质体包封的顺铂，其量为使得治疗有效剂量的顺铂可以方便的剂量体积递送至受试者。给定制剂的顺铂含量可表示为绝对浓度(例如，mg/
mL)或相对于脂质体中的脂质的相对量。通常，总脂质重量与顺铂重量的比例为约40:1至
约95:1。在一些实施方案中，总脂质重量与顺铂重量的比例为约65:1至约95:1。脂质:
顺铂比例可以为，例如，40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1或
95:1。在一些实施方案中，本发明的组合物包括脂质体，该脂质体含有顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约70:1的量包封于脂质体中。在一些实施方案中，本发明的组
合物包括脂质体，该脂质体含有顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约90:1的
量包封于脂质体中。

[0065] 脂质体尺寸可通过本领域技术人员已知的多种方法来确定。脂质体尺寸可例如，通过动态光散射(DLS)、准弹性光散射(QELS)、分析超速离心或电子显微镜来确定。在一些实施方案中，本发明的组合物包括具有约75至约125nm的平均粒径(直径，体积平均值)
的两性离子脂质体。例如，脂质体可具有75、85、90、95、100、105、110、115、120或125nm的直径。在一些实施方案中，脂质体具有80-120nm的平均粒径。在一些实施方案中，脂质体
具有90-120nm的平均粒径。在一些实施方案中，本发明的组合物含有具有90nm的平均粒
径(体积平均值)的脂质体。

[0066] 制备脂质体顺铂的方法

[0067] 可使用本领域技术人员已知的多种技术来制备脂质体并装载顺铂。脂质囊泡可例如，通过用水或水性缓冲液水合干燥的脂质膜(通过在合适的容器中蒸发脂质和有机溶剂
的混合物而制备)来制备。脂质膜的水合通常得到多层囊泡(MLV)的悬浮液。或者，MLV可
通过用水或水性缓冲液在合适的溶剂例如C1-4烷醇中稀释脂质溶液来形成。单层囊泡可由
MLV通过超声处理或经具有限定的孔径的膜挤出来形成。顺铂的包封可通过将药物包括在
用于在MLV形成期间膜水合或脂质稀释的水溶液中来进行。顺铂也可包封在预先形成的囊
泡中。

[0068] 因此，本发明的一些实施方案提供含有如上所述的两性离子脂质体的组合物，其中脂质体通过以下方法制备，包括：a)形成含有磷脂酰胆碱脂质、胆固醇、PEG-脂质和选自C1-4烷醇和C1-4烷醇/水混合物的溶剂的脂质溶液；b)将脂质溶液与水性缓冲液混合以形
成多层囊泡(MLV)；c)通过多孔过滤器挤出MLV以形成小单层囊泡(SUV)；和d)渗滤以除
去未包封的顺铂。在一些实施方案中，未包封的顺铂的除去也可通过离心进行。在一些实
施方案中，顺铂的包封通过在MLV形成期间将顺铂包括在水性缓冲液中来进行。在一些实
施方案中，脂质体制剂进一步包括无菌过滤两性离子脂质体。

[0069] 制剂和给药

[0070] 在一些实施方案中，本发明的组合物可包括如上所述的脂质体和生理学上(即，药学上)可接受的载体。术语“载体”是指用作脂质体顺铂的稀释剂或媒介物(vehicle)
的通常的惰性物质。该术语也包括赋予组合物粘着特性的通常的惰性物质。通常，生理学
上可接受的载体以液体形式存在。液体载体的实例包括生理盐水、磷酸盐缓冲液、生理缓
冲盐水(135-150mM NaCl)、水、缓冲水、0.4％盐水、0.3％甘氨酸、0.3M蔗糖(和其他碳水化合物)、提供增强的稳定性的糖蛋白(例如，白蛋白、脂蛋白、球蛋白等)等。因为生理学上可接受的载体部分通过所给予的具体组合物以及通过用于给予组合物的具体方法来决定，
因此有很多种本发明的药物组合物的合适制剂(参见，例如Remington's Pharmaceutical
th
Sciences，17 ed.，1989)。

[0071] 本发明的组合物可通过常规的、众所周知的灭菌技术进行灭菌或可在无菌条件下制备。水溶液可被包装使用或在无菌条件下过滤并冻干，该冻干制剂在给药前与无菌水溶
液合并。该组合物可按需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，例如pH调节和
缓冲剂、张力调节剂、润湿剂等，例如，乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、去水山梨糖醇月桂酸酯和三乙醇胺油酸酯。可包含糖以稳定组合物，例如用于冻干的脂质体组合物的
稳定剂。

[0072] 适合肠胃外给药的制剂，例如，通过关节内、静脉内、肌内、瘤内、皮内、腹膜内和皮下途径，包括水性和非水性、等渗无菌注射溶液。该注射溶液可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包括助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。注射溶液和悬浮液也可由无菌粉末，例如冻干的脂质体制备。在本发明的实践中，组合物可例如，通过静脉内输注、腹膜内、膀胱内或鞘内给药。肠胃外给药和静脉内给药是优选的给药方法。脂质体组合物的制剂可存在于单位剂量
或多剂量密封容器，例如安瓿和小瓶中。

[0073] 该药物制剂优选以单位剂型形式。在该形式中，制剂细分为含有适当量的活性成分的单位剂量，例如，脂质体组合物。该单位剂型可以是包装的制剂，含有离散量的制剂的包装。如果需要的话，该组合物也可含有其他相容的治疗剂。

[0074] 治疗癌症的方法

[0075] 在另一个方面，本发明提供治疗癌症的方法。该方法包括向需要其的受试者给予含有如上所述的脂质体顺铂的组合物。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下
的组合物：(a)基本上由约50mol％至约75mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混
合物、约20mol％至约45mol％的胆固醇和约2mol％至约8mol％的PEG-脂质组成的两性
离子脂质体；和(b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约40:1至约95:1的
量包封在脂质体中。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：(a)基本上
由约50mol％至约65mol％的磷脂酰胆碱脂质或磷脂酰胆碱脂质混合物、约30mol％至约
45mol％的胆固醇和约2mol％至约8mol％的PEG-脂质组成的两性离子脂质体；和(b)顺
铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约65:1至约95:1的量包封在脂质体中。在
一些实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：a)基本上由约46mol％DSPC、约
19mol％DPPC；约30mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；和
b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约40:1至约90:1的量包封在脂质体
中。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：a)基本上由约46mol％DSPC、约19mol％DPPC；约30mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；
和b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约70:1至约90:1的量包封在脂质体
中。在一些实施方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：a)基本上由约57mol％POPC、约38mol％胆固醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；和b)顺铂，其以
使得总脂质重量与顺铂重量的比例为约40:1至约90:1的量包封在脂质体中。在一些实施
方案中，该方法包括给予含有以下的组合物：a)基本上由约57mol％POPC、约38mol％胆固
醇和约5mol％DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；和b)顺铂，其以使得总脂质重量
与顺铂重量的比例为约70:1至约90:1的量包封在脂质体中。在一些实施方案中，该方法
包括给予含有以下的组合物：a)基本上由约65mol％DSPC、约30mol％胆固醇和约5mol％
DSPE-PEG(2000)组成的两性离子脂质体；和b)顺铂，其以使得总脂质重量与顺铂重量的比
例为约40:1至约90:1的量包封在脂质体中。

[0076] 在癌症治疗的治疗使用中，可给予本发明的脂质体组合物使得顺铂的初始剂量在每日约0.001mg/kg至约1000mg/kg的范围内。可使用约0.01-500mg/kg，或约0.1-200mg/
kg，或约1-100mg/kg，或约10-50mg/kg，或约10mg/kg，或约5mg/kg，或约2mg/kg，或约1mg/kg的每日剂量范围。

[0077] 剂量可根据患者的需要、所治疗的癌症的严重程度和所采用的脂质体组合物而变化。例如，可考虑在特定患者中诊断的癌症的类型和阶段凭经验确定剂量。给予至患者的
剂量应足以随着时间的推移在患者中实现有益的治疗反应。剂量的大小还将通过伴随特定
脂质体组合物的给药在特定患者中的任何不良副作用的存在、性质和程度来确定。具体情
况的适当剂量的确定在执业医师的技能范围内。通常，治疗以小于脂质体组合物的最佳剂
量的较小剂量开始。此后，小幅度增加剂量，直至在环境下达到最佳效果。为方便起见，如果需要的话，可将总的每日剂量分开并在一天期间分批给药。

[0078] 组合物可以在本发明的方法中单独给药，或与其他治疗剂组合给药。其他药剂可以是抗癌剂或细胞毒素剂，包括但不限于阿瓦斯丁、多柔比星、奥沙利铂、卡铂、
5-氟尿嘧啶、吉西他滨或紫杉烷，如紫杉醇和多西他赛。另外的抗癌剂可包括但不限
于20-epi-1,25-二羟基维生素D3,4-甘薯苦醇、5-乙炔基尿嘧啶、9-二氢紫杉醇、阿
比特龙、阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、acylfulvene、腺环戊醇、阿多来新、阿地白介素、all-tk拮抗剂、六甲蜜胺、氨莫司汀、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、amidox、氨磷汀、氨鲁米特、氨基乙酰丙酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内
酯、血管发生抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯、安曲霉素、抗背部化形态发生蛋
白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)、抗雌激素药、抗瘤酮、反义寡核苷
酸、阿非迪霉素甘氨酸盐、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨基酶、门冬酰胺酶、曲林菌素、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、海洋环
肽(axinastatin)1、海洋环肽2、海洋环肽3、阿扎胞苷、阿扎司琼、阿扎毒素、重氮酪
氨酸、阿扎替派、阿佐霉素、浆果赤霉素III衍生物、balanol、巴马司他、苯并二氢卟酚
(benzochlorins)、苯佐替派、苯甲酰基十字孢碱(benzoylstaurosporine)、β内酰胺
衍生物、β-alethine、β克拉霉素B(betaclamycin B)、桦木酸、BFGF抑制剂、比卡鲁
胺、比生群、盐酸比生群、双吖丙啶基精胺(bisaziridinylspermine)、双奈法德、二甲磺酸双奈法德(bisnafide dimesylate)、bistratene A、比折来新、博来霉素、硫酸博来霉
素、BRC/ABL拮抗剂、breflate、布喹那钠、溴匹立明、布多替钛、白消安、丁硫氨酸亚矾胺(buthionine sulfoximine)、放线菌素C、卡泊三醇、卡弗他丁C(calphostin C)、卡普睾
酮、喜树碱衍生物、金丝雀痘IL-2(canarypox IL-2)、卡培他滨、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、甲酰胺-氨基-三唑、羧基酰胺基三唑、carest M3、卡莫司汀、cam700、软骨衍生的抑制
剂(cartilage derived inhibitor)、盐酸卡柔比星、卡折来新、酪蛋白激酶抑制剂、澳粟精胺、杀菌肽B、西地芬戈、西曲瑞克、苯丁酸氮芥、绿素类(chlorins)、氯喹喔啉磺酰胺、西卡前列素、西罗霉素、顺铂、顺-卟啉、克拉屈滨、氯米芬类似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、考布他汀A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin 816、克立那
托、甲磺酸克立那托、念珠藻素8(cryptophycin 8)、念珠藻素A衍生物、curacin A、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinones)、环磷酰胺、环钼(cycloplatam)、cypemycin、阿糖胞
苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabine ocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚、达卡巴嗪、达昔单抗、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他滨、脱氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、地洛瑞林、右异环磷酰胺、右奥马铂、右雷佐生、右维拉帕米、地扎呱宁、甲磺酸地扎呱宁、地吖醌、代代宁B、didox、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮胞
苷、dioxamycin、二苯基螺莫司汀、多西他赛、二十二烷醇、多拉司琼、去氧氟尿苷、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、柠檬酸屈洛昔芬、屈他雄酮丙酸酯、屈大麻酚、达佐霉素(duazomycin)、duocarmycin SA、依布硒、依考莫司汀、依达曲沙、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、盐酸依氟鸟氨酸、榄香烯、依沙芦星(elsamitrucin)、乙嘧替氟、恩洛铂、恩普氨酯(enpromate)、依匹哌啶、表柔比星(epirubicin)、盐酸表柔比星、爱普列特、厄布洛唑、红细胞基因治疗载体体系、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌莫司汀类似物、雌莫司汀磷酸酯钠、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、依西美坦、法倔唑、盐酸法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、夫拉平度、氟卓斯汀、氟尿苷、fluasterone、氟达拉滨、磷酸氟达拉滨、盐酸氟代柔红霉素(fluorodaunorunicin hydrochloride)、氟尿嘧啶、fluorocitabine、福酚美克、福美司坦(formestane)、磷喹
酮、福司曲星、福司曲星钠、福莫司汀、钆替沙林(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、盐酸吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、heregulin、六亚甲基双乙酰胺、羟基脲、金丝桃素、伊班膦酸、伊达比星、盐酸伊达比星、艾多昔芬、伊决孟酮、异环磷酰胺、伊莫福新(ilmofosine)、伊洛马司他、咪唑并吖啶酮、咪喹莫特、免疫刺激剂肽、胰岛素样生长因子-1受体抑制剂、干扰素激动剂、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-N1、干扰素α-N3、干扰素β-IA、干扰素γ-IB、干扰素、白细胞介素、碘苄胍、碘阿霉素、异丙铂、伊立替康、盐酸伊立替康、伊罗普拉、伊索拉定、伊苯加峻(isobengazole)、isohomohalicondrin B、伊他司琼、jasplakinolide、kahalalide F、lamellarin-N triacetate、兰瑞肽、醋酸兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、硫酸香菇多糖、leptolstatin、来曲唑、白血病抑制因子、白细胞α干扰素、醋酸亮丙瑞林、亮丙瑞林/雌激素/孕酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、盐酸利阿唑、线性多胺类似物、亲脂二糖肽、亲脂铂化合物、lissoclinamide 7、洛铂、胍乙基磷酸丝氨酸、洛美曲索、洛美曲索钠、洛莫司汀、氯尼达明、洛索蒽醌、盐酸洛索蒽醌、洛伐他汀、洛索立宾、勒托替康、lutetium texaphyrin、lysofylline、裂解肽、美坦辛、mannostatin A、马立马司他、马索罗酚、maspin、基质溶解因子抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、美登素、盐酸氮芥、乙酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑(melphalan)、美诺立尔、美巴龙(merbarone)、疏基嘌呤、美替瑞林(meterelin)、蛋氨酸酶、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、甲氧氯普胺、氯苯氨啶、美妥替哌、微藻蛋白激酶C抑制剂、MIF抑制剂、米非司酮、米替福新、米立司亭、错配双链RNA、米丁度胺、米托卡星(mitomalcin)、丝裂红素、米托洁林、米托胍腙、二溴卫矛醇、米托马星、丝裂霉素、丝裂霉素类似物、米托萘胺、米托司培、米托坦、mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素、米托蒽醌、盐酸米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、单克隆抗体、人绒毛膜促性腺激素、单磷酰脂质a/分支杆菌细胞壁SK、莫哌达醇、多重抗药性基因抑制剂、基于多重肿瘤抑制因子1的治疗、芥子抗癌剂、美卡普罗B(mycaperoxide B)、分枝杆菌细胞壁提取物、霉酚酸(mycophenolic acid)、迈
普隆(myriaporone)、正乙酰基地那林、那法瑞林、那瑞替喷(nagrestip)、纳洛酮/喷他佐辛、napavin、萘萜二醇、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性肽链内切酶、尼鲁米特、nisamycin、一氧化氮调节剂、硝基氧抗氧化剂(nitroxide antioxidant)、nitrullyn、诺考达唑、诺加霉素(nogalamycin)、n-取代的苯甲酰胺、06-苄基鸟嘌呤、奥曲肽、奥康斯恩(okicenone)、寡核苷酸、奥那司酮、昂丹司琼、oracin、口腔细胞因子诱导剂、奥马铂、奥沙特隆、oxaunomycin、奥昔舒仑、紫杉醇、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、palauamine、棕榈酰基根霉素、帕米膦酸、人参炔三醇、帕诺米芬、parabactin、帕折普汀、培门冬酶、培得星、培利霉素、戊氮芥、木聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁、pentrozole、硫酸培洛霉素、全氟溴烷、培磷酰胺、紫苏醇、phenazinomycin、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、溶链菌素、盐酸毛果云香碱、哌泊溴烷、哌泊舒凡、吡柔比星、吡曲克辛、盐酸吡罗蒽醌、placetin A、placetin B、纤溶酶原激活物抑制剂、铂络合物、铂化合物、铂-三胺络合物、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀(prednimustine)、盐酸丙卡巴肼、丙基双吖啶酮、前列腺素J2、前列腺癌抗雄激素、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白质A的免疫调节剂、蛋白质激酶C抑制剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、嘌呤霉素、嘌呤霉素盐酸盐、红紫素、吡唑呋喃菌素、吡唑啉吖啶(pyrazoloacridine)、吡哆酰基化血红蛋白聚氧乙烯缀合物(pyridoxylated hemoglobin polyoxyethylene conjugate)、RAF拮抗
剂、雷替曲塞、雷莫司琼、RAS法尼基蛋白质转移酶抑制剂、RAS抑制剂、RAS-GAP抑制剂、脱甲基瑞替普汀、铼RE186依替膦酸盐(rhenium RE 186etidronate)、根霉素、利波腺苷、核酶、RII维甲酰胺(retinamide)、RNAi、罗谷亚胺、罗希吐碱、罗莫肽、罗喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、盐酸沙芬戈、saintopin、sarcnu、sarcophytol A、沙格司亭、SDI1模拟物、司莫司汀、老化衍生的抑制剂1、正义寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、辛曲秦、单链抗原结合蛋白质、sizofuran、索布佐生、硼卡钠、苯基乙酸钠、索尔醇(solverol)、生长调节素结合蛋白质、索纳明、磷乙酰天冬氨酸钠、膦门冬酸、司帕霉素(sparsomycin)、spicamycin D、盐酸螺旋锗、螺莫司汀、螺铂、脾脏五肽、海绵抑制素1(spongistatin 1)、角鲨胺、干细胞抑制剂、干细胞分裂抑制剂、斯提酰胺(stipiamide)、链黑菌素、链佐星、基质分解素抑制剂、sulfinosine、磺氯苯脲、强效血管活性肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明、苦马豆素、合成糖胺聚糖、他利霉素、他莫司汀、他莫昔芬甲碘化物、牛磺莫司汀、他扎罗汀、替可加兰钠、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制剂、替洛蒽醌盐酸盐、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酯酮(testolactone)、四氯十氧化物、tetrazomine、thaliblastine、沙利度胺、硫咪嘌呤、噻可拉林(thiocoraline)、硫鸟嘌呤、塞替派、血小板生成素、血小板生成素模拟物、胸腺法新、胸腺生成素受体激动剂、胸腺曲南、甲状腺刺激激素、噻唑羧胺核苷、本紫红素乙酯锡(tin ethyl etiopurpurin)、替拉扎明、二氯二茂钛、盐酸拓扑替康、topsentin、托瑞米芬、柠檬酸托瑞米芬、全能干细胞因子、翻译抑制剂、醋酸曲托龙、维甲酸(tretinoin)、三乙酰基尿苷、曲西立滨、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、葡萄糖醛酸三甲曲沙、曲普瑞林、托烷司琼、盐酸妥布氯唑、妥罗雄脲、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)、UBC抑制剂、乌苯美司、尿嘧啶氮芥、乌瑞替派、泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽、variolin B、维拉雷琐、藜芦明、verdins、维替泊芬、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、长春瑞滨、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春罗定(vinrosidine sulfate)、vinxaltine、硫酸长春利定、vitaxin、伏氯唑、扎诺特隆、折尼铂、亚苄维C、净司他丁、净司他丁斯酯或盐酸佐柔比星。在一些实施方案中，该方法可包括给予选自氟尿嘧啶、亚叶酸
(leucovorin)的药物及其混合物。

[0079] IV.实施例

[0080] 实施例1.制备脂质体顺铂组合物的一般方法

[0081] 顺铂包封于脂质体中通过溶剂稀释法进行。将脂质混合物(不同脂质比例的500mg部分)溶于1mL t-BuOH/EtOH(1/1，v/v比例)或t-BuOH/EtOH/水(49/49/2v/v比
例)，并在70℃加热直至澄清。在70℃将90mg顺铂溶于9mL缓冲液(145mM NaCl，10mM组氨
酸缓冲液pH 6.5)。在快速混合下将脂质溶液加入到顺铂溶液中以形成多层囊泡(MLV)。使
TM
用加热至70℃的LlPEX 挤出机(Northern Lipid Inc.)，使MLV通过两个堆叠的80nm聚碳
酸酯过滤器。每次通过后，使用基于准弹性光散射原理(QELS)的粒度分析仪测定囊泡大小
和粒度分布，并在平均体积直径达到90-120nm后，停止挤出。挤出后，用冷(2-15℃)145mM NaCl将脂质体稀释10倍。该步骤降低顺铂浓度，并预防顺铂沉淀物的形成。此外，其降低
溶剂浓度，否则可能促进顺铂从囊泡释放。

[0082] 渗滤(也称为错流过滤)用光谱实验室盒(SpectrumLaboratories cartridge)2
(500kD，145cm表面积，Cat#X3-500-300-02N)进行。其用于除去未包封的顺铂和残留的
有机溶剂、交换外部缓冲液和浓缩脂质体。典型地，制剂经过超滤以达到50mg/mL的脂
质浓度，并随后通过10洗涤体积的指示缓冲液渗滤，随后超滤至70-90mg/mL脂质和大
约1mg/mL顺铂。制剂的无菌过滤用具有醋酸纤维素膜的Sartorius 0.2μm注射过滤器
2
(Cat#16534-K，～28mM直径，6.2cm表面积)使用拇指压力进行。将药物制剂装入无菌的
除去热原的小瓶中并在2-8℃储存。

[0083] 实施例2.脂质体形态随PEG化脂质含量而变化

[0084] 制备一系列含有DSPC、胆固醇和DSPE-PEG(2000或5000)的脂质体。DSPC/胆固醇的比例固定在55/45(摩尔％)，且PEG化脂质分别为总脂质组合物的0、5、10、20、30摩
尔％。脂质体组合物示于表1中。低温TEM图像示于以下图1、2和3中。这些图像清楚地
表明，脂质体形态随脂质体中的PEG化脂质的水平而变化。超过约5摩尔％，基本上，脂质
体是不稳定的且形成大圆盘状颗粒。水平大于7摩尔％导致特别高的形态异质性。

[0085] 表1.通过低温TEM对脂质体组合物的形态学研究

[0086]

[0087] 实施例3.具有各种磷脂的脂质体的制备

[0088] 根据上述方法制备一系列的14种脂质体样品。脂质体组合物列于表2中。出于比较目的，根据美国专利第6,126,966号的实施例5(SPI-077组合物)制备样品1。使用胆
固醇水平在0摩尔％至40摩尔％的范围的DSPC磷脂制备样品3、4、14和10。DSPC和DPPC
的二元混合物用于样品5-9中。样品5、6和7具有较高的胆固醇水平(30-40摩尔％)，而
样品8-9具有较低的胆固醇水平(10-20摩尔％)。为了与其中使用HSPC的样品1和2进
行具体比较，使用DSPC作为主要的磷脂组分制备样品10。使用DPPC和DMPC作为主要的磷
脂组分制备样品11和12，其中DMPC具有14个碳原子的脂肪酸链。样品13使用POPC作为
主要的磷脂组分，其中所述脂肪酸链含有饱和及不饱和脂肪酸。

[0089] 表2.脂质体组合物.

[0090]样品编号 脂质体组成 摩尔比，摩尔％
1 HSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 51/44/5
2 HSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 55/40/5
3 DSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 95/0/5
4 DSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 75/20/5
5 DSPC/DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 18.75/46.25/30/5
6 DSPC/DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 27.5/27.5/40/5
7 DSPC/DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 46.25/18.75/30/5
8 DSPC/DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 65/10/20/5
9 DSPC/DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 66.25/18.75/10/5
10 DSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 55/40/5
11 DPPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 56.3/38.4/5.3
12 DMPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 56.3/38.4/5.3
13 POPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 56.3/38.4/5.3
14 DSPC/Chol/DSPE-PEG(2000) 65/30/5

[0091] 实施例4.脂质体顺铂制剂的安全性和疗效

[0092] 本实施例说明在实施例2的表2给出的脂质体组合物中，样品7、13和14的优异疗效和安全性。

[0093] 在患KB肿瘤的动物中评价脂质体制剂的PK研究。根据以下方案进行动物研究。将KB肿瘤注入裸小鼠中并使其生长～10天。将18只动物注射脂质体制剂。在治疗前、
5min、4hrs、24hrs、48hrs和96hrs时间点，以3只为一组处死动物。收集组织样品，并分析肿瘤中的Pt/DNA加合物。使用掺有(spiked with)顺铂的幼稚肿瘤评价样品分析期间离
体(ex vivo)产生的Pt/DNA加合物的可能性。

[0094] 通过改编自Qiagen’s DNeasy方案的程序分离组织的DNA。收集洗脱馏分用于DNA/Pt加合物Pt分析。通过电感耦合质谱(ICPMS)测定Pt定量且通过Picogreen荧光法
测定DNA定量。

[0095] 根据上述方案，来自实施例2的脂质体样品1-14用于体内动物研究。在DNA/Pt加合物分析中，以8mg/kg顺铂的剂量给予所有制剂。通过皮克(pg)Pt/微克(μg)DNA测
定DNA/Pt加合物峰肿瘤的值，且最大耐受剂量(MTD)绘制如图4中所示。DNA/Pt加合物的
水平越高和MTD值越高表明各自的脂质体组合物的疗效和安全性越好。DNA/Pt加合物值随
时间的函数示于图5中。在具有A427肺异种移植瘤的小鼠的肿瘤疗效研究中评价样品7。

[0096] 与其它样品相比，样品7、13和14明显突出。应注意，样品1显示出非常低的MTD，小于8mg/kg，且DNA/Pt加合物峰值小于20pg Pt/μg DNA。样品7、13和14明显优于样品1，美国专利第6,126,966号中所述的实施例。此外，当使用天然顺铂时，其MTD小于10mg/
kg，且DNA/Pt加合物值小于10pg Pt/μg DNA。

[0097] 与样品5、6、8、9和11相比时，样品7突出。样品7具有30mol％的胆固醇水平和摩尔比大于2倍的DSPC/DPPC的二元混合物。这一趋势进一步由样品14支持，其中该组合
物具有30mol％的高胆固醇水平，但无DPPC，且优于其中仅使用DPPC而无DSPC的样品11。
样品5如同样品7和14具有30mol％胆固醇，然而样品5仅含有18.75％DSPC和46.25％
DPPC且产生较低的DNA/Pt加合物。

[0098] 在图5中，样品7、13和14以其在体内形成DNA/Pt加合物的能力随时间的函数而明显突出。应注意，样品1显示出小于20pg Pt/μg DNA的DNA/Pt加合物峰值。

[0099] 在KB人模型中研究功效。如以上KB模型所述进行实验。图6显示在具有KB人异种移植物的小鼠中，给予相当的顺铂水平，样品14在体内产生比顺铂或样品2(HSPC比较
器(comparator))更大的功效。

[0100] 还在A427人NSCLC模型中研究功效。如以上KB模型所述进行实验。图6显示在具有A427人NSCLC异种移植物的小鼠中，给予相当的顺铂水平，样品7在体内具有比顺铂
更大的功效。注射后14天，与游离顺铂的30％相比，样品7的单一治疗导致61％的肿瘤生
长抑制。

[0101] 虽然为了清楚和理解的目的，已通过说明和实例的方式详细地描述了上述发明，但本领域技术人员应理解，可在所附的权利要求的范围内进行某些改变和修饰。此外，本文提供的各参考文献通过引用整体并入，如同各参考文献通过引用各自并入一样。