在生殖细胞癌的系统性治疗中，顺铂——顺式-二胺-二氯合铂(II) 是一种比较有效的抗肿瘤剂。该化疗药物对实验室动物肿瘤模型以及 人类肿瘤有很好的治疗效果，诸如子宫内膜肿瘤、膀胱肿瘤、卵巢肿 瘤、睾丸肿瘤以及头、颈部的扁平细胞癌(Sur等人1983；Steerenberg 等人1987)。
如同其它的癌症化疗剂一样，顺铂也具有很高的毒性。其主要缺 点是具有严重的肾脏毒性，这是其剂量受限制的主要因素；其通过肾 脏排泄过快，循环半衰期仅为几分钟；并且其与血浆蛋白具有很强的 亲和力。
为了降低药物的毒性，可以联合进行化疗方法、合成顺铂类似物、 进行免疫疗法以及将药物包埋到脂质体中。将包括顺铂在内的抗肿瘤 剂包埋到脂质体中，与游离态剂相比，毒性降低且仍保持抗肿瘤活性。
然而，仍有继续鉴定降低顺铂毒性的新方法的需要。本发明正可 以满足这种需要。
                        发明概要
本发明提供了顺铂活性试剂的使用方法，采用该方法可以观察到 主体毒性降低。在该主题方法中，向患者联合提供有效量的顺铂活性 试剂和本发明的顺铂毒性降低剂。本发明还提供了用于实施该主题方 法的组合物，如毒性降低了的顺铂药物组合物以及含有该组合物的小 盒。所述方法和组合物可用于多种不同的应用，包括治疗多种不同的 病况。
                        附图说明
图1是测量在不同浓度的顺铂和/或TK-211作用下，肿瘤在一段 时间内的增长情况所得结果的图。
                    具体实施方式的说明
本发明提供了顺铂活性试剂的使用方法，采用该方法可以观察到 主体毒性降低。在该主题方法中，向患者联合提供有效量的顺铂活性 试剂和本发明的顺铂毒性降低剂。本发明还提供了用于实施所述方法 的组合物，如毒性降低了的顺铂药物组合物以及含有该组合物的小 盒。所述方法和组合物可用于多种不同的应用，包括治疗多种不同的 病况。
在进一步描述本发明之前，必须理解，本发明并不局限于以下所 述具体的实施方式，因为可据此作出具体实施方式的各种变体，且这 些变体依然落在本发明所附的权利要求的范围之内。同样还需理解， 本文中所使用的术语意在描述具体的实施方式，而并非用于限制其内 容。而本发明范围将在所附的权利要求中确认。此外，根据本发明的 目的、精神和范围，可以进行多种修改以适应特定的情况、物料、物 质组成、操作、操作步骤。所有的这些变体都在此处所要求保护的范 围之内。
在说明书以及所附的权利要求中，单数形式的″a″、″an″和″the″ 包括了复数情况，除非文中另有明确的说明。相反，期望如此设计的 权利要求可避免任何的任选成分。这样的陈述意在作为使用与权利要 求部分有关的排他性术语诸如“单独”、“仅”等或利用“否定型” 限定的前提基础。
当出现数值范围时，应当理解，每一个中间插入值可以延伸至下 限数值单位的十分之一，除非文中另有明确的说明，在此范围的上下 限之间，以及任一其它的表述，或者所表述的范围中的中间插入值， 都包含在本发明中。这些较小范围的上下限值可独立地包括在所述较 小范围之内，且也同时包括在本发明的范围之内，除非明确说明需要 排除。当所述范围包括上下限值中的一个或两个时，不包括其中一个 或两个端值的范围也包括在本发明之中。同时，此处所述的本发明变 体的任一任选特征将独立地、或与任何一个或多个所述特征相结合的 形式进行阐述及要求保护。
除非另有定义，所有本发明使用的技术和科学术语与本发明领域 普通技术人员的常规理解的含义相同。尽管那些与此文中所述相似或 相当的方法、装置和物料可以用于本发明的实践或试验，然而，优选 的方法、装置和物料是如下所述的。
所有此处提及的内容(例如，出版物、专利、专利申请和硬件)以 整体形式作为参考引入。只给出公开于本申请的申请日之前的参考条 目。没有任何资料表明本发明对上述材料的利用要晚于优先发明。
在对本发明的进一步描述中，首先对方法进行更为详细的描述， 随后是不同组合物的评论，如制剂和小盒，这些组合物将在本发明方 法中用到，还将讨论不同的具有代表性的应用，其中将要用到本发明 的方法和组合物。
方法
如上所概括的那样，本发明给出了向有需要的患者给予顺铂活性 试剂的方法，例如，用于治疗受到能用顺铂活性试剂(如以下详细阐述 的)治疗的病况困扰的患者的方法。主题方法的一个重要特征是用于给 药的所考虑的顺铂活性试剂与顺铂毒性降低剂联合给药。“联合”的 意思是在顺铂活性试剂给药前后的的同时至直达5小时或更多，如 10、15、20小时或更多的任意时刻，给予顺铂毒性降低剂。
由此，毒性降低剂和顺铂活性试剂可以以下任何形式给药：(a)顺 序给药，毒性降低剂在顺铂活性试剂给药的前或后给药或(b)同时给 药，毒性降低剂与顺铂活性试剂同时向给药对象给药。当毒性降低剂 与顺铂活性试剂同时给药时，它们(此两种组分)可以作为单一、结合 的组合物或作为两种不同的组合物同时向患者给药。
在主题方法中，有效量的顺铂活性试剂与有效量的顺铂毒性降低 剂联合给予有此需要的患者。顺铂活性试剂指的是顺铂或其类似物/衍 生物，例如，天然顺铂及其类似物。天然顺铂，此文也称为顺铂，是 一种含中心原子铂，且周围环绕着两个氯原子和两个顺位氨分子的重 金属配合物。该配合物为黄色粉末，分子式为PtCl2H6N2，分子量约为 300道尔顿。它在室温下可以1mg/ml的比例溶于水或盐水，熔点为 207℃，在270℃下分解。顺铂分子中的氯原子易于被亲核物质如水或 巯基发生化学置换反应。在水性介质中，水分子是潜在的配体，可能 会取代氯原子以形成单羟基单氯-顺式-二胺铂(II)。
已经合成了宽谱的顺铂类似物，这些类似物具有不同的抗肿瘤 谱、较好的治疗指数以及比天然顺铂更低的毒性。此类类似物包括卡 铂、奥马铂、奥沙利铂、DWA2114R((-)-(R)-2-氨基甲基吡咯烷(1，1- 环丁二羧酸)合铂)、折尼铂、恩洛铂、洛铂、C1-973(SP-4-3(R)-1，1- 环丁二羧酸(2-)-(2-甲基-1，4-丁二胺-N，N′)合铂)、254-S奈达铂以 及JM-216(二-乙酸-胺-二氯-环己胺-合铂(IV))(Weiss等人1993)。 某些顺铂类似物，诸如螺铂，被发现毒性要大于天然顺铂。而更多的 有毒类似物则不适于以游离态进行静脉给药，这些类似物可以脂质体- 包埋形式使用，以降低药物毒性。
本发明顺铂活性试剂包括顺铂及其任一种类似物/衍生物，它们在 与本发明的一种毒性降低试剂联合给药时，毒性会降低。
通过以下试验中使用的测试法，可以方便地判断所给的顺铂活性 试剂是否适用于本发明。通常，通过以下试验中所描述的果蝇试验， 如果顺铂活性试剂的毒性降低了至少2倍，通常为至少约10倍，更通 常为约100倍，则该试剂适用于本发明主题方法。在某些具体实施方 式中，如以下试验部分中所述的老鼠试验可观察到的，顺铂活性试剂 可降低或减轻可见的毒副作用的发生率和/或强度。
顺铂毒性降低剂指的是可降低顺铂活性试剂所不期望的毒性的一 种试剂。令人感兴趣的毒性降低试剂是那些通过以下试验部分的果蝇 试验证实，可将顺铂活性试剂的毒性至少降低约2倍，通常至少约为 10倍，更通常至少约为100倍的试剂。在某些具体实施方式中，如以 下试验部分中所述的老鼠试验可观察到的，令人感兴趣的毒性降低剂 是那些可降低或减轻所给顺铂活性试剂的可见的毒副作用的发生率和 /或强度的试剂。
在多个具体实施方式中，令人感兴趣的毒性降低剂是小的有机化 合物，典型的，分子量为约100至约1,500道尔顿。在某些具体实施 方式中，这些化合物中含有一个或多个稠合或不稠合的环结构；和可 以含有或不含有一个或多个杂原子，例如N、S或O。在某些具体实施 方式中，所考虑的化合物不含有任何的环状结构。
代表性的毒性降低试剂包括但不限于：

如上所述，有效量的毒性降低剂可用于本发明主题方法。在某些 具体实施方式中，毒性降低剂所使用的量不大于顺铂活性试剂所使用 的量。在某些具体实施方式中，所使用的量低于等摩尔的所给顺铂活 性试剂的量。典型的，毒性降低剂的给药量比顺铂活性试剂的量要低 约75％，优选低约50％，低约25％，在许多具体实施方式中低约15％， 优选低约10％，甚至低约5％或1％。在另一些具体实施方式中，毒性 降低剂的有效量与活性试剂的量相同，并且在某些具体实施方式中， 毒性降低剂的有效量要大于顺铂活性试剂的量。利用以下试验部分所 提供的数据，可凭经验容易地确定毒性降低剂的有效量。
制剂
本发明还提供了实施本发明主题中使用的制剂，其中的制剂在药 学可接受的给药载体中含有至少一种顺铂活性剂及顺铂毒性降低剂， 以致在某些具体实施方式中，提供了一种含顺铂活性试剂的第一制剂 以及含顺铂毒性降低剂的第二制剂，而在另一些具体实施方式中，提 供了单一的含有顺铂活性试剂和顺铂毒性降低剂的制剂。
在某些所考虑的具体实施方式中，顺铂活性试剂和毒性降低剂作 为单一的药物制剂给药，也即，除了含有有效量的活性试剂和毒性降 低剂之外，还含有其它的适宜化合物和载体，并且，也可以用其它的 活性试剂联合给药。由此，本发明也包括了含有药学可接受的赋形剂 的药物组合物。
药学可接受的赋形剂包括，例如任一已被公众所接受的适宜的赋 形剂、载体、辅剂或稀释剂。如本领域所公知的，本发明药物组合物 可进一步含有其它的活性剂。
本领域技术人员可以理解多种适于向治疗对象或患者，如有此需 要的患者给予本发明制剂的各种合适方法；尽管特定制剂的给药有多 种途径，但其中有一种特定的途径可提供比其它途径更快更有效的反 应。药学可接受的赋形剂对于本领域技术人员是公知的，且也是易于 获得的。赋形剂的选择可部分地根据特定化合物来决定，也可根据给 予组合物所用的特定方法来决定。相应的，本发明药物组合物存在着 种类繁多的适宜制剂形式。以下方法和赋形剂仅仅是示例性的，而绝 非限制性的。
适于口服给药的制剂可由以下组成：(a)液态溶液，诸如溶解了有 效量化合物的稀释剂，如水、盐水或橙汁；(b)胶囊、药囊或片剂，每 一种含有预定量的固态或颗粒状的活性成分；(c)适宜液体的混悬液； 以及(d)适宜的乳液。片剂中可含有一种或多种乳糖、甘露醇、玉米淀 粉、马铃薯淀粉、微晶纤维素、阿拉伯胶、明胶、胶体二氧化硅、交 联羧甲基纤维素钠、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸以及其它的赋形剂、 着色剂、稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂、调味剂，以及药理学可 相容的赋形剂。锭剂可在矫味剂中，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍 胶中含有活性成分；以及在合有活性成分的锭剂的惰性基质，诸如明 胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶、乳液、凝胶中，除了活性成分之外还 可含有本领域公知的赋形剂。
本发明主题制剂也可制成经吸入给药的气雾制剂。此种气雾制剂 可置于加压可接受的发射剂，诸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等等之 中。它们也可制成用于非-加压制剂的药剂，例如用在喷雾器或雾化器 中的制剂。
适于非经肠给药的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射液，其可 含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及能使制剂与想要接受者的血液等 渗的溶质；还包括水性和非-水性无菌混悬液，其中可含有悬浮剂、增 溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。这些制剂可存放于单位剂量或多剂 量密封容器，诸如安瓿及管瓶之中，并且可以冷冻干燥状态储存，此 时仅需要在使用之前快速加入无菌液体赋形剂，如注射用水即可。临 时注射溶液和混悬液可以由前述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于局部给药的制剂可以霜膏、凝胶、糊剂或泡沫剂形式存在， 其除了含有活性成分之外，还含有诸如本领域公知的适宜载体。
栓剂可通过与各种诸如乳化基质或水溶性基质相混合而制得。适 宜阴道给药的制剂可以制成阴道栓剂、棉塞、霜膏、凝胶、糊剂、泡 沫剂的形式。
也可以提供用于口服和直肠给药的单位剂型诸如糖浆剂、酏剂和 混悬剂，其中的每种剂量单位，例如一茶匙量、一汤匙量、一片片剂 或一颗栓剂，含有预定量的含一种或多种抑制剂的组合物。类似地， 用于注射或静脉给药的单位剂型也可在作为无菌水、生理盐水或其它 药学可接受载体中的溶液的组合物中含有抑制剂。
此文所用的术语“单位剂型”指的是适用于人和动物单元剂量的 物理上不连续的单位，每一单位中含有预定的经计算足以产生所需效 果的量的本发明化合物以及药学可接受的稀释剂、载体或赋形剂。本 发明新型单位剂型的规格根据所使用的具体化合物以及所需达到的效 果、与患者中每一化合物相关的药效学而定。
本领域技术人员易于理解，剂量水平应作为特定化合物、给药载 体的性质等的函数而变化。给定化合物的优选剂量可由本领域技术人 员通过多种手段容易地确定。
在本发明上下文中，给予动物，特别是人类的剂量必须足以在一 段适当的时段内在动物体内产生预防性或治疗性的作用。本领域技术 人员可以理解，剂量是随着不同因素而改变的，包括所使用的化合物 的强度、动物的状况、动物体重、以及疾病的严重程度和疾病的发展 阶段。剂量大小也可根据特定化合物给药时可能伴随出现的不良副作 用的存在与否、性质及程度来确定。适宜的剂量和给药方案可通过比 较公知的产生所需的肿瘤生长抑制或免疫抑制反应的抗癌剂或免疫抑 制剂后来确定。在使用本发明化合物治疗某些个体时有可能需要与用 于非恶性细胞的救援剂相结合的高剂量治疗方案。在这样的治疗中， 任何可援救非恶性细胞的试剂都可以使用，诸如嗜橙菌因子、叶酸衍 生物、或亚叶酸。这些救援剂对于本领域普通技术人员来说是熟知的。 优选的救援剂不会干扰本发明化合物调节细胞功能的能力。
实用性
本发明主题方法用于以给予顺铂为特征的治疗应用中。一种典型 的治疗应用是治疗细胞增生病况，例如，以伴随有异常细胞增生为特 征的癌症和相关疾病。所述疾病状况包括癌症/肿瘤及其它疾病，它们 的特征在于有不希望的细胞增生，如数量性肥大等。
治疗处理指的是，与折磨患者的病况有关的症状至少有所改善， 其中的改善是广义的，指的是在一些与治疗病况相关的参数指标如症 状的级别上至少有所降低。因而，治疗处理也包括病理状况或至少其 中一种相关症状被抑制的情况，例如，预防发生、或中止，以使患者 不再受病况或至少是表征病况的症状的折磨。
根据本发明方法，各种患者都是可治疗的。通常，此种患者是 “哺乳动物”，该术语广泛用于描述属于哺乳动物的有机体，包括常 见的肉食动物(例如猫、狗)、啮齿目(例如小鼠、豚鼠和大鼠)、以及 灵长类(例如人、黑猩猩和猴子)。在许多具体实施方式中，患者是人 类。
在其它应用中，本发明主题方法可用于治疗细胞增生病况，包括 瘤形成疾病如癌症。在这些应用中，向有此需要的对象给予有效量的 活性剂。治疗处理的意思为上文所述的广义意思，例如，包括减轻疾 病的至少一种或多种症状，以及完全中止这些症状，以及逆转和/或完 全除掉这些病况，例如，治愈。
许多疾病与细胞增生失调有关，例如细胞过度增生疾病。所考虑 的病况包括但不限于以下病况。
本发明主题方法可用于治疗各种以下状况，平滑肌细胞的增殖和/ 或迁移、和/或炎症细胞进入血管内膜层导致血流通过血管受阻，即内 膜增生闭塞性损伤。所考虑的闭塞性血管病况包括动脉粥样硬化、移 植后移植冠状动脉疾病、静脉移植物狭窄，外周口漏修复性移植物狭 窄(peri-anastomatic prosthetic graft stenosis)、血管成形术 或支架放置后狭窄等等。
通过给予本发明化合物，那些过度增生且具有组织重塑或生殖组 织修复的疾病，如子宫癌、睾丸癌和卵巢癌、子宫内膜异位、宫颈鳞 状上皮癌及腺状上皮癌等等此类病况的细胞数量有所降低。
可以治疗的有价值的肿瘤包括：癌症，如结肠癌、十二指肠癌、 前列腺癌、乳腺癌、黑素瘤、导管癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、子宫内 膜癌、胃癌、混合型口腔粘膜癌、息肉病、侵入性口腔癌、非小细胞 性肺癌、尿道移行细胞癌及鳞状上皮细胞癌等等；神经系统恶性肿 瘤，如成神经细胞瘤、神经胶质瘤等等；血液恶性肿瘤，如儿童急性 白血病、急性髓细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性 白血病、恶性皮肤T-细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病，非-MF皮肤T-细胞 淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、T-细胞富集性皮肤淋巴组织增生、蕈样肉芽 肿病、盘状红斑狼疮、扁平苔癣等；诸如此类。
特别有价值的癌症包括乳腺癌，是一种主要的腺癌亚型。导管原 位癌是最常见的非侵袭性乳腺癌。在导管原位癌中，癌细胞不经过导 管壁转移到乳腺的脂肪中。浸润性(或侵袭性)导管癌(IDC)则能通过导 管壁转移且侵袭乳腺的脂肪组织。浸润性(或侵袭性)小叶癌(ILC)与 IDC相似，有向身体其它部位侵袭的可能。约10％-15％的侵袭性乳腺癌 是侵袭性小叶癌。
同样有价值的是非小细胞型肺癌。非小细胞型肺癌(NSCLC)由三种 常见肺癌亚型组成。表皮样癌(也称作鳞状上皮细胞癌)通常从一根较 大的小支气管中开始，且生长较慢。此类肿瘤的大小可从很小到很大。 腺癌从靠近肺外表面的区域开始，它们的大小和生长速度各不相同。 某些生长缓慢的腺癌被描述成肺泡上皮细胞癌。大细胞癌则从肺的表 面开始，且生长迅速，等能诊断时已经生长得相当大了。其它不常见 的肺癌的类型为类癌瘤、圆柱瘤、粘液表皮样瘤以及恶性间皮细胞瘤。
黑素瘤是黑色素细胞的一种恶性肿瘤。尽管大多数黑素瘤发生在 皮肤，然而它们也可能从粘膜表面或其它神经鞘细胞向之转移的位点 开始。黑素瘤主要发生于成人，并且半数的病例发生在看起来正常的 皮肤区域。它的预测通常受临床和组织学因素的影响，也受对受损部 位的解剖位置的影响。黑素瘤侵袭的厚度和/或程度、分裂指数、肿瘤 浸润淋巴细胞以及初发位点的溃疡或出血都能影响对其的预测。其临 床阶段的判断以肿瘤是否向局部淋巴结或较远位点扩散为基础。其原 发位点决定了疾病在临床上的发展，黑素瘤局部侵袭的厚度和深度越 大，淋巴腺转移的几率越高，疾病预测得更严重。黑素瘤可通过局部 扩散(通过淋巴)和/或通过血液途径扩散至较远位置。尽管所有的器 官都能通过转移而感染，但比较常见的是肺和肝。
其它所考虑的过度增生疾病涉及表皮过度增生、组织改造和修 复。例如，与增生性表皮角质细胞以及浸润性单核细胞，包括CD4+记 忆T细胞、中性白细胞和巨噬细胞相关的牛皮癣慢性皮肤炎症。
本发明的方法可提供一种非常通行可用的方法用于治疗许多(即 使不是全部)的恶性肿瘤，包括从皮肤、结缔组织、脂肪、乳腺、肺、 胃、胰脏、卵巢、宫颈、子宫、肾脏、膀胱、结肠、前列腺、中枢神 经系统(CNS)、视网膜以及血液等等中的细胞衍生而来的肿瘤。代表性 的有价值的癌症包括但不限于：头/颈和肺部组织癌症(例如，头部及 颈部鳞状上皮细胞癌、非小细胞性肺癌、小细胞肺癌)；胃肠道和胰脏 癌(例如，胃癌、结肠直肠腺瘤、结肠直肠癌、胰腺癌)；肝组织癌(如， 肝细胞癌)；肾脏/尿道癌(如，混合型膀胱上皮癌、膀胱癌、肾癌、肾 母细胞瘤)；乳腺癌(例如，乳腺癌)；神经组织癌(如，视网膜母细胞 瘤、间胶质瘤、成神经细胞瘤、脑脊髓膜瘤)；皮肤癌(如，正常表皮 细胞癌、鳞状上皮细胞癌，基底细胞癌、黑素瘤等等)；血液组织癌(例 如，淋巴瘤、CML慢性髓细胞样白血病、APL急性前髓细胞性白血病，ALL 急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病等)；诸如此类。
描述了这些方法以及所用到的组合物的特定的申请包括美国专利 号6,251,355；6,224,883；6,130,245；6,126,966；6,077,545； 6,074,626；6,046,044；6,030,783；6,001,817；5,922,689； 4,322,391；4,310,515；这些文献的公开内容在此处引入作为参考。
小盒
本发明提供了含有本发明方法使用的制剂的小盒。便利地，制剂 可以单位剂量形式提供，所述形式是本领域所公知的。
在此种小盒中，除了含有制剂如单位剂量的容器外，还含有记载 信息的包装说明书，记载了本发明方法中用到的制剂的用途，也即， 指导使用单位剂量以治疗细胞增生性病况的说明书。
说明书可以各种形式置于小盒中，可在小盒中放置一种或多种说 明书。此类说明书可以采用的一种形式是在将信息印刷在适宜介质或 衬底上，例如，在印刷了信息的一张或数张纸片，该纸片存在于小盒 包装中或放置在包装说明书中。其它方式为计算机可读介质，例如， 磁盘、CD等等，在这些介质上记录着信息。其它的方式可以是互联网 网址，可以通过国际互联网在任意地点获得该信息。在小盒中可采用 任一便利的方式。
以下示例将进一步阐述本发明且不应理解为以任何方式限制本发 明范围。
                             试验
I.致死剂量(LD)曲线数据
由顺铂产生的果蝇LD曲线通过以下方法获得：将特定浓度的化学 药品与给果蝇食用的食物和水混合，然后将50粒野生型胚胎加到该试 料中。该浓度的LD值以100-(2×(存活果蝇数量))计算。在某一浓度 范围内重复该方法以绘制LD曲线。例如，用于测试的顺铂浓度为0.01 mM至100mM。验明LD98(对于顺铂，为5mM)。LD98作为严格的标准用 于衡量降低毒性的添加化合物。此严格毒性标准成为关键的主要原因 有以下：1)高毒性剂量可使得果蝇身上轻微的毒副作用转变为危害其 存活的严重障碍。例如，顺铂会导致以重金属中毒和DNA损伤为基础 的毒害作用。这些中毒因素将导致不同程度的对不同靶器官和组织的 毒副作用、以及肾毒性、神经毒性等等。在顺铂的LD98浓度，所有的 这些毒性机制与所观察到的生理治疗剂量呈数量级的关系。在LD98剂 量下，抑制任一项毒副作用都不能保证果蝇能显著存活。可保证果蝇 显著存活的添加物更可能减轻所有顺铂的毒副作用。
II.添加物的鉴别结果
筛选含有10000种各种结构的小分子数据库以寻找顺铂的添加化 合物。发现15种添加化合物可基本抑制顺铂的毒性。TK-211便是所 发现的可用于顺铂的添加化合物中的一个。
TK-211经鉴定为导致果蝇致死性的顺铂的抑制剂。
果蝇试验                               ％存活果蝇(n＝50)
顺铂(.002mM)                           94
顺铂(.5mM)                             2
顺铂(.5mM)+TK-211(1μM)                96
顺铂(.5mM)+                            4
氨磷汀*
在一定浓度范围内的最佳结果
氨磷汀(商品名Ethyol)是先前最佳的唯一的流行市场销售的降低 顺铂毒性的产品。本发明严格的鉴定出了在降低顺铂毒性上比其它已 知的任何现有添加物都要大大有效的添加物。母药和添加化合物(上述 TK-211)之间的化学计量是添特效性且不会损害母药效果的关键。毒性 是呈梯度状的，以96％致死剂量作为筛选级别，所有不期望的副作用都 应抑制。此外，能检测5只(以上)果蝇存活的化合物都是可以察觉的。 其它能倍数性降低果蝇(括号内为数量)体内顺铂毒性的可考虑的已鉴 定化合物为：TK-295(225)；TK-516(300)；TK-523(125)；TK- 363(80)；TK-204(80)；TK-5145(250)；TK-5175(75)。
III.人类癌细胞鉴定
顺铂已被充分的证明了对人类癌细胞系具有治疗效果。作为快速 第二级筛分，在这些人类癌细胞系中检测出了添加物单独以及与靶药 物结合的情况。TK-211的结果作为一个特别的例子而给出。单独使用 该化合物，在很宽的浓度范围内，它对抵抗癌细胞都没有任何作用。 更重要的是，当它与靶药物相结合使用时，，即使是在很宽的浓度范 围内，它也不会改变靶药物的抗癌活性。在下文显示了对于卵巢癌的 此种发现，而在其它类型的人类癌细胞型如黑素瘤中，顺铂的活性也 没有发生改变。
化合物          浓度/测试μg/ml           癌细胞       细胞存活
211             .02-1.5                   卵巢         100％
顺铂            2                         卵巢         1％
顺铂            1                         卵巢         3％
顺铂+TK-211     2+.02                     卵巢         1％
IV.小鼠试验
在小鼠身上进行主要方面的测试，用于将果蝇身上添加物的毒性 降低能力研究转移到小鼠身上。顺铂测试通过利用高剂量的顺铂或顺 铂/添加物混合物注射剂而施行。
单独使用顺铂      顺铂+TK-211             单独使用TK-211
LD100             LD15                    LD0
LD50              LD0                     N/D
TK-211可抑制顺铂造成的小鼠死亡
小鼠试验                                       小鼠存活
TK-211(.001-1mg/kg)                            100％
顺铂(37mg/kg)                                  0％
顺铂+TK-211(37mg/kg+0.37mg/kg)                 100％
顺铂+氨磷汀(37mg/kg+200mg/kg)                  0％*
*20％的动物能活到比对照长15％
在果蝇身上观察到的添加物的效果在小鼠身上也能看到，上文中 TK-211已说明了这点。
TK-211对小鼠死亡的抑制转成抑制所有所不希望的顺铂毒副作 用。
毒副作用             顺铂              顺铂+TK-211        顺铂+氨磷汀
体重减轻             ++++              +                  +++
血便                 ++++              无                 ++++
体温过低             ++++              无                 +++
神经损伤             ++++              无                 ++++
听力损伤             ++++              无                 ++++
小鼠中的顺铂副作用与患者身上所观察到的相似。作为预测，本 发明添加物可大大降低所有的副作用。而氨磷汀公知只能轻微减少体 重及体温过低。
TK-211不会改变小鼠体内顺铂的功效。
图1所显示的数据表明，本发明的添加物不会改变母药的功效。 而氨磷汀则显示可轻微损害顺铂的功效(结合使用的时候仅显示轻微 的有利效果，而在需要较高剂量时导致其本身的副作用，所有这些都 限制了该药的市场潜力)。事实上，本发明添加物可使顺铂以高剂量使 用发挥其显著的有益效果，而在没有这些添加物时，高剂量水平的顺 铂可导致死亡。
从上述结果及讨论中可明显看出，本发明提供了在降低顺铂活性 试剂所不希望的毒性的同时保持其所期望的活性的方法。因而，本发 明可用于各种不同的应用并且为本领域作出了显著的贡献。
如同每个单独的出版物或专利申请明确且单独地指明被引入作为 参考一样，所有本说明书中引用的出版物及专利申请在此处作为参考 引入。引入了任何在申请日之前的公开物内容的做法不能理解为承认 本发明不能获得比这些出版物更早的申请日(因为本发明具有在先申 请)。
尽管本文通过示例性的阐述及实施例详细叙述了上述发明，以达 到能清楚地理解本发明，但对于本领域普通技术人员来说，显然在本 发明的教导下，在不背离以下权利要求的精神和范围的情况下，可以 对本发明作出某些改变和修饰。
                   相关申请的相互参照
依照35 U.S.C.119(e)，本申请要求享有2001年9月24日 申请的美国临时申请序列No.60/324,566的优先权；该申请所公开的 内容在本文中引入作为参考。
                        发明介绍
相关文献
相关美国专利包括：6,251,355；6,224,883；6,130,245； 6,126,966；6,077,545；6,074,626；6,046,044；6,030,783； 6,001,817；5,922,689；4,322,391；以及4,310,515。