顺铂配合物及其制备方法
阅读：404发布：2020-05-12
专利汇可以提供顺铂配合物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种 顺铂 配合物，具有式(I)或式(II)结构。所述顺铂配合物的制备方法为顺铂与具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物在 水 性介质中发生配合作用，生成顺铂配合物。所述顺铂配合物具有良好的溶解性和 生物 相容性 ，可降解。在水性介质中，顺铂受到聚(γ-丙炔基-L-谷 氨 酸酯-g-巯基丁二酸)段和聚乙二醇段的保护，因此所述顺铂配合物 稳定性 好。另外，本发明提供的顺铂配合物中含有的羧基具有pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。，下面是顺铂配合物及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种顺铂配合物，具有式(I)或式(II)结构；
式(I)中和式(II)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
R3独立地选自氢或疏水基团；
m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
2.根据权利要求1所述的顺铂配合物，其特征在于，所述R1独立地选自C1～C40烷基或由氨基、巯基、糖残基、醛基、羧基、乙烯基、炔基、丁二酰亚胺、马来酰亚胺、生物素、RGD短肽或叶酸取代的烷基。
3.根据权利要求1所述的顺铂配合物，其特征在于，所述R3独立地选自C4～C20的烷基、苯甲基、胆固醇基或胆酸基。
4.根据权利要求1所述的顺铂配合物，其特征在于，R1是甲基；R2为-NH-；R3是氢。
5.一种顺铂配合物的制备方法，包括以下步骤：
顺铂与具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物在水性介质中发生配合作用，生成顺铂配合物；
式(III)和式(IV)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
R3独立地选自氢或疏水基团；
m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的羧基与顺铂中Pt的摩尔比的比值为小于10。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述水性介质为双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液或体液。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物按照以下方法制备：
具有式(V)或式(VI)结构的嵌段共聚物在紫外光照射下经光引发剂引发，在有机溶剂中与巯基丁二酸发生接枝反应，得到具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物；
式(V)和式(VI)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
R3独立地选自氢或疏水基团；
m为聚合度，40≤m≤250；x为聚合度，1≤x≤300。
9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述紫外光的波长为245nm～
365nm。
10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂为安息香双甲醚或2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮。
顺铂配合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及高分子药物领域，特别涉及顺铂配合物及其制备方法。
背景技术
[0002] 顺式-二胺二氯铂，简称顺铂(CDDP)是一种具有抗癌活性的金属配合物，由B.Rosenborg等人在1965年首次发现。顺铂具有抗癌谱广、作用强、与多种抗肿瘤药有协同作用、且无交叉耐药等特点，因此顺铂是联合化疗中最常用的药物之一。目前，顺铂对治疗生殖系统肿瘤、头颈部癌、膀胱癌、肺癌、恶性淋巴瘤等具有良好效果。顺铂口服无效，临床使用方法多为以静脉滴注的方式给药。静脉注射后，顺铂在血浆中迅速消失，迅速分布全身，尤其是在肝、肾、大小肠及皮肤中分布最多，毒副作用大，如会引起肾毒性、骨髓抑制及胃肠道副作用等。同时，顺铂在血液中的半衰期短，达到病灶部位的比例很低，药效较差。
[0003] 为了延长药物在血液中的半衰期，并减少药物与蛋白间的非特异性吸附作用从而提高药效，高分子材料经常用来作为药物输送的载体。近期迅速发展起来的是微米和纳米尺度的高分子载体，如：胶束、囊泡和纳米颗粒等，这类高分子载体可有效的将药物分子分散到其中，利用载体的各种响应方式，实现药物的输送和控制释放。肿瘤细胞内环境主要表现为“三低一高”，即：低氧、低糖、低pH值和高谷胱甘肽浓度，其中尤为显著的是低pH值，晚期内涵体和溶酶体的pH值可低至5.0(Advanced Functional Materials，19(22)：3580～3589)。而且肿瘤部位血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子类物质和脂质颗粒具有高通透性和滞留性。因而，纳米至微米尺寸的药物担载体系具有显著的“增强的渗透和滞留效应”，即EPR效应。利用EPR效应这种被动靶向方式，可使药物在肿瘤部位有效聚集，同时减小非病灶部位的毒副作用。
[0004] 许多研究者利用聚合物载体担载药物的方式开发了顺铂制剂，但目前还没有上市的产品。其中，研究最为深入的是Kataoka等人，他们利用聚乙二醇-b-聚谷氨酸复合顺铂制备的胶束(NC-6004)，已进入临床二期研究。但所得胶束是聚氨基酸侧链间的交联作用而形成，此类方法所得复合物经冻干后的冻干粉有时难以复溶。Stenzel等利用“巯基-炔基”和“巯基-烯基”Click反应在聚合物侧链引入巯基乙酸和巯基丁二酸，得到了复合物(Biomacromolecules 12(5)：1738-1751)，该复合物具有良好的溶解性，但是作为载体的聚合物生物相容性差，无法降解，限制了其进一步的应用。
发明内容
[0005] 本发明解决的技术问题在于提供一种顺铂配合物，所述配合物通过配位作用担载顺铂，不仅载体材料生物相容性好，溶解性好，而且所述顺铂配合物在生理条件下可稳定存在，且顺铂的释放具有pH值敏感性。
[0006] 本发明提供了一种顺铂配合物，具有式(I)或式(II)结构；
[0007]
[0008] 式(I)中和式(II)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0009] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0010] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0011] m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
[0013] 优选的，所述R3独立地选自C4～C20的烷基、苯甲基、胆固醇基或胆酸基。
[0014] 优选的，R1是甲基；R2为-NH-；R3是氢；此时，具有式(I-a)或式(II-a)结构；
[0015]
[0016] 式(I-a)或式(II-a)中，m为聚合度，40≤m≤250，优选为60≤m≤150；n为聚合度，1≤n≤200，优选为10≤n≤100；y为聚合度，0≤y≤100，优选为0≤y≤50。
[0017] 本发明还提供了一种顺铂配合物的制备方法，包括以下步骤：
[0018] 顺铂与具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物在水性介质中发生配合作用，生成顺铂配合物；
[0019]
[0020]
[0021] 式(III)和式(IV)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0022] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0023] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0024] m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
[0025] 优选的，所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的羧基与顺铂中Pt的摩尔比的比值为小于10。
[0026] 优选的，所述水性介质为双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液或体液。
[0027] 优选的，所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物按照以下方法制备：
[0029]
[0030]
[0031] 式(V)和式(VI)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0032] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0033] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0034] m为聚合度，40≤m≤250；x为聚合度，1≤x≤300。
[0035] 优选的，所述紫外光的波长为245nm～365nm。
[0036] 优选的，所述引发剂为安息香双甲醚或2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮。
[0037] 与现有技术相比，本发明利用顺铂与具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物制备了顺铂配合物。所述嵌段共聚物由聚(乙二醇-聚(γ-丙炔基-L-谷氨酸酯)嵌段共聚物接枝巯基丁二酸形成，因此制备的顺铂配合物具有良好的生物相容性，可降解。顺铂与所述嵌段共聚物侧链的羧基形成七元环，因此制备的顺铂配合物具有良好的溶解性。同时，本发明提供的顺铂配合物含有聚(γ-丙炔基-L-谷氨酸酯-g-巯基丁二酸)段和聚乙二醇段，结合有顺铂的聚(γ-丙炔基-L-谷氨酸酯-g-巯基丁二酸)段具有疏水性，聚乙二醇段具有亲水性。当溶于水性介质时，顺铂受到这两部分的保护，可以有效避免由于静脉注射后血液循环系统的影响而发生的顺铂突然释放，因此本发明提供的顺铂配合物稳定性好。另外，本发明提供的顺铂配合物中含有的羧基具有pH值敏感性，在较低的pH值环境中，羧基趋于去质子化，有利于促进药物的释放，提高药物的疗效。附图说明
[0039] 图2为本发明实施例8～10制备的顺铂配合物的载药量和包封率变化趋势；
[0040] 图3为本发明实施例9制备的顺铂配合物的胶束在pH为5.5和7.4时释放顺铂的曲线图；
[0041] 图4为本发明实施例9制备的顺铂配合物以及顺铂裸药对A549细胞的药效考察结果图；
[0042] 图5为本发明实施例8制备的顺铂配合物的溶血实验结果图。
具体实施方式
[0044] 本发明实施例公开了一种顺铂配合物，具有式(I)或式(II)结构；
[0045]
[0046] 式(I)中和式(II)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0047] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0048] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0049] m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
[0050] 在本发明中，所述嵌段共聚物具有式(I)或式(II)结构，式(I)中和式(II)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基，优选的，独立选自C1～C40烷基或由氨基、巯基、糖残基、醛基、羧基、乙烯基、炔基、丁二酰亚胺、马来酰亚胺、生物素、RGD短肽或叶酸取代的烷基；
[0051] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，优选为-NH-；其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0052] R3独立地选自氢或疏水基团，优选为C4～C20的烷基、苯甲基、胆固醇基或胆酸基；
[0053] m为聚合度，40≤m≤250，优选为60≤m≤150；n为聚合度，1≤n≤200，优选为10≤n≤100；y为聚合度，0≤y≤100，优选为0≤y≤50。
[0054] 在本发明中，所述具有式(I)或式(II)结构的嵌段共聚物优选R1是甲基；R2为-NH-；R3是氢。
[0055] 本发明提供了一种顺铂配合物的制备方法，包括以下步骤：
[0056] 顺铂与具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物在水性介质中发生配合作用，生成顺铂配合物；
[0057]
[0058] 式(III)和式(IV)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0059] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0060] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0061] m为聚合度，40≤m≤250；n为聚合度，1≤n≤200；y为聚合度，0≤y≤100。
[0062] 本发明中，所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物为担载顺铂的载体，顺铂中的Pt与所述嵌段共聚物的羧基通过配位键形成七元环结构，得到顺铂配合物；优选的，全部顺铂分子与所述嵌段共聚物形成配位键，但不一定限于全部的顺铂分子和共聚物的羧基形成配位键，也包含部分顺铂分子之间以疏水相互作用或其他任何的物理方式担载于载体材料上；也不限于全部的顺铂分子和所述嵌段共聚物的羧基形成七元环结构，也包含顺铂分子与不同高分子链间的羧基形成配位键的情况。所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的羧基与顺铂中Pt的摩尔比的比值优选大于0.3且小于10，更优选为大于0.5且小于8。
[0063] 在本发明顺铂配合物的制备方法中，优选在避光条下进行。所述配合作用的时间优选为24h～72h，更优选为48h～72h；所述配合作用的温度优选为20℃～40℃；在所述配合作用过程中，所述嵌段共聚物的羧基浓度优选为0.1mM～100mM，更优选为1mM～60mM，最优选为2mM～20mM。
[0064] 所述水性介质优选为双蒸水、生理盐水、缓冲溶液、组织培养液或体液，更优选为双蒸水，所述双蒸水的pH值优选为6.5～8.5，更优选为7.0～8.0。
[0065] 按照本发明顺铂配合物的制备方法，得到的所述顺铂配合物以胶束的形式存在于水性介质中，所述胶束的流体力学半径优选为10nm～2000nm，更优选为10nm～300nm。
[0066] 由于以胶束形式存在的顺铂配合物不利于保存，优选经过后处理得到顺铂配合物的冻干粉，所述后处理优选包括以下步骤：
[0068] 所述透析时间优选为24h～48h；所述冻干过程中可加入少量冻干保护剂，如小分子氨基酸、麦芽糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇中的一种或几种，保护剂的加入可有效避免载药复合物的聚集。由于本发明涉及的大部分复合物具有良好水溶性，无需加入上述保护剂。
[0069] 本发明在制备顺铂配合物时，以具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物为原料，在水性介质中与顺铂发生配合作用。所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的羧基与顺铂中Pt的当量比的比值优选大于0.3且小于10；本发明对所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的形态没有特殊限制，优选为冻干粉；本发明对所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的来源也没有特殊限制，优选按照以下方法制备：
[0070] 具有式(V)或式(VI)结构的嵌段共聚物在紫外光照射下经引发剂引发，在有机溶剂中与巯基丁二酸发生接枝反应，得到具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物；
[0071]
[0072] 式(V)和式(VI)中，R1独立地选自氢、烷基或取代烷基；
[0073] R2独立地选自-NH-或-R4(CH2)rNH-，其中，R4为-O-、-OCONH-、-OCO-、-NHCOO-或-NHCO-，1≤r≤8；
[0074] R3独立地选自氢或疏水基团；
[0075] m为聚合度，40≤m≤250；x为聚合度，1≤x≤300。
[0076] 所述式(V)或式(VI)结构的嵌段共聚物优选R1是甲基；R2为-NH-；R3是氢；此时，具有式(V-a)或式(VI-a)结构；
[0077]
[0078] m为聚合度，40≤m≤250；x为聚合度，1≤x≤300。
[0079] 本发明在制备具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物时，以巯基丁二酸和具有式(V)或式(VI)结构的嵌段共聚物为原料；本发明对具有式(V)或式(VI)结构的嵌段共聚物的来源没有特殊限制，可以参考中国专利CN10267818A公开的方法制备。
[0080] 本发明制备具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的反应优选在无氧条件下进行，所述引发剂优选为安息香双甲醚或2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮；所述紫外光的波长优选为245nm～365nm，更优选为300nm～365nm；所述反应时间优选为
0.2h～5h；所述有机溶剂优选为N，N-二甲基甲酰胺、二氧六环或三氯甲烷，更优选为N，N-二甲基甲酰胺；得到所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物后优选经透析72h、冷冻干燥得到具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的冻干粉。
0.2h～5h；所述有机溶剂优选为N，N-二甲基甲酰胺、二氧六环或三氯甲烷，更优选为N，N-二甲基甲酰胺；得到所述具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物后优选经透析72h、冷冻干燥得到具有式(III)或式(IV)结构的嵌段共聚物的冻干粉。
[0081] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的顺铂配合物及其制备方法进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
[0082] 实施例1
[0083] 将具有式(V-a)结构、m＝45并且x＝10的嵌段共聚物，记为mPEG45-b-PPLG10。
[0084] 向干燥的反应瓶内加入0.2003g mPEG45-b-PPLG10，用5mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，通氮气0.5小时，在室温、氮气保护条件下加入14.0mg安息香双甲醚和0.6543g巯基丁二酸，365nm紫外光照射反应2h，得到产物；将产物透析72小时，换水12次，冷冻干燥得具有式(III-a)结构的嵌段共聚物冻干粉。
[0085] 对所述嵌段接枝共聚物进行核磁共振测试，计算得到接枝率为61.8％，反应转化率为30.2％。所述具有式(III-a)结构的嵌段共聚物m＝45，n＝6，y＝4，记为mPEG45-b-PPLG10-g-MSA12。
[0086] 实施例2
[0087] 将具有式(V-a)结、m＝113并且x＝25的嵌段共聚物，记为mPEG113-b-PPLG25。
[0088] 向干燥的反应瓶内加入0.2008g mPEG113-b-PPLG25，用5mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，通氮气0.5小时，在室温、氮气保护条件下加入14.0mg安息香双甲醚和1.3201g巯基丁二酸，365nm紫外光照射反应2h，得到产物；将产物透析72小时，换水12次，冷冻干燥得具有式(III-a)结构的嵌段共聚物冻干粉。
[0089] 对所述嵌段接枝共聚物进行核磁共振测试，计算得到接枝率为60.0％，反应转化率为16.1％。所述具有式(III-a)结构的嵌段共聚物m＝113，n＝15，y＝10，记为mPEG113-b-PPLG25-g-MSA30。
[0090] 实施例3
[0091] 将具有式(V-a)结构、m＝227并且x＝81的嵌段共聚物，记为mPEG227-b-PPLG81。
[0092] 向干燥的反应瓶内加入0.2006g mPEG227-b-PPLG81，用5mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，通氮气0.5小时，在室温、氮气保护条件下加入17.8mg安息香双甲醚和1.6539g巯基丁二酸，365nm紫外光照射反应2h，得到产物；将产物透析72小时，换水12次，冷冻干燥得具有式(III-a)结构的嵌段共聚物冻干粉。
[0093] 对所述嵌段接枝共聚物进行核磁共振测试，计算得到接枝率为61.4％，反应转化率为13.7％。所述具有式(III-a)结构的嵌段共聚物m＝227，n＝49，y＝32，记为mPEG227-b-PPLG81-g-MSA98。
[0094] 实施例4
[0095] 将 具 有 式 (VI-a) 结 构、m ＝45 并 且 x ＝8 的 嵌 段 共 聚 物，记 为PPLG8-b-PEG45-b-PPLG8。
[0096] 向干燥的反应瓶内加入0.2004g PPLG8-b-PEG45-b-PPLG8，用5mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，通氮气0.5小时，在室温、氮气保护条件下加入17.3mg安息香双甲醚和0.2055g巯基丁二酸，365nm紫外光照射反应2h，得到产物；将产物透析72小时，换水12次，冷冻干燥得具有式(IV-a)结构的嵌段共聚物冻干粉。
[0097] 对所述嵌段接枝共聚物进行核磁共振测试，计算得到接枝率为59.2％，反应转化率为70.4％。所述具有式(IV-a)结构的嵌段共聚物m＝45，n＝5，y＝3，记为PEG45-b-[PPLG8-g-MSA10]2。
[0098] 实施例5
[0099] 将 具 有 式 (VI-a)结 构、m ＝90 并 且x ＝15 的 嵌 段 共 聚 物，记 为PPLG15-b-PEG90-b-PPLG15。
[0100] 向干燥的反应瓶内加入0.2007g PPLG15-b-PEG90-b-PPLG15，用5mL N，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解后，通氮气0.5小时，在室温、氮气保护条件下加入17.1mg安息香双甲醚和0.7992g巯基丁二酸，365nm紫外光照射反应2h，得到产物；将产物透析72小时，换水12次，冷冻干燥得具有式(IV-a)结构的嵌段共聚物冻干粉。
[0101] 对所述嵌段接枝共聚物进行核磁共振测试，计算得到接枝率为58.2％，反应转化率为26.8％。所述具有式(IV-a)结构的嵌段共聚物m＝90，n＝9，y＝6，记为PEG90-b-[PPLG15-g-MSA18]2。
[0102] 实施例6
[0103] 将20mg实施例1制备的mPEG45-b-PPLG10-g-MSA12溶于9mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入13.2mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体羧基与顺铂中的Pt摩尔比为2∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为70.36％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构，m＝45，n＝6，y＝4。
[0104] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照以下公式计算包封效率(DLE)和包封量(DLC)；
[0105]
[0106]
[0107] 得到的顺铂配合物的包封效率为70.16％，包封量为1.02mmol Pt/g。
[0108] 实施例7
[0109] 将20mg实施例1制备的mPEG45-b-PPLG10-g-MSA12溶于9mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入6.6mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体羧基与顺铂中的Pt摩尔比为4∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为82.43％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构，m＝45，n＝6，y＝4。
[0110] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为83.27％，包封量为0.73mmol Pt/g。
[0111] 实施例8
[0112] 将20mg实施例2制备的mPEG113-b-PPLG25-g-MSA30溶于9mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入13.2mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为2∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为68.10％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构m＝113，n＝15，y＝10。
[0113] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为68.08％，包封量为0.99mmol Pt/g。
[0114] 利用动态光散射分析，测定胶束的流体力学半径，结果参见图1，图1为实施例8制备的顺铂配合物的流体力学半径分布图，结果表明，顺铂配合物胶束的流体力学半径在10nm～100nm之间。
[0115] 实施例9
[0116] 将30mg实施例2制备的mPEG113-b-PPLG25-g-MSA30溶于13mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入9.9mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为4∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为81.65％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构m＝113，n＝15，y＝10。
[0117] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为82.56％，包封量为0.72mmol Pt/g。
[0118] 实施例10
[0119] 将20mg实施例2制备的mPEG113-b-PPLG25-g-MSA30溶于9mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入3.3mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为8∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为84.15％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构m＝113，n＝15，y＝10。
[0120] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为93.53％，包封量为0.45mmol Pt/g。
[0121] 比较实施例8～10制备的顺铂配合物的包封效率和包封量，结果参见图2，图2为实施例8～10制备的顺铂配合物的包封效率和包封量的变化趋势图，其中，曲线A为包封效率变化趋势，曲线B为包封量变化趋势，结果表明，mPEG113-b-PPLG25-g-MSA30对顺铂具有良好的担载能力，且其担载顺铂的量可以通过投料比控制。
[0122] 实施例11
[0123] 将20mg实施例3制备的mPEG227-b-PPLG81-g-MSA99溶于10mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入15.7mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为2∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为63.53％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构，m＝227，n＝49，y＝32。
[0124] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为72.61％，包封量为1.18mmol Pt/g。
[0125] 实施例12
[0126] 将20mg实施例3制备的mPEG227-b-PPLG81-g-MSA99溶于10.5mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入7.8mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为4∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为80.26％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(I-a)结构，m＝227，n＝49，y＝32。
[0127] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为86.01％，包封量为0.86mmol Pt/g。
[0128] 实施例13
[0129] 将20mg实施例4制备的PEG45-b-[PPLG8-g-MSA10]2溶于10.5mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入15.2mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为2∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为65.47％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(II-a)结构，m＝45，n＝5，y＝3。
[0130] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为74.42％，包封量为1.57mmol Pt/g。
[0131] 实施例14
[0132] 将20mg实施例4制备的PEG45-b-[PPLG8-g-MSA10]2溶于10mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入7.6mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为4∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为83.43％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(II-a)结构，m＝45，n＝5，y＝3。
[0133] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为85.70％，包封量为1.19mmol Pt/g。
[0134] 实施例15
[0135] 将20mg实施例5制备的PEG90-b-[PPLG15-g-MSA18]2溶于10mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入14.7mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为2∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为68.39％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(II-a)结构，m＝90，n＝9，y＝6。
[0136] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为69.56％，包封量为1.43mmol Pt/g。
[0137] 实施例16
[0138] 将20mg实施例5制备的PEG90-b-[PPLG15-g-MSA18]2溶于10mL双蒸水中，调节pH值7.0～7.6，加入7.4mg顺铂，37℃避光搅拌72h，纯水透析24h，换水6次以除去游离顺铂，得到顺铂配合物的胶束；将所述顺铂配合物的胶束在无菌条件下迅速冷冻，冷冻干燥得到载体的羧基与顺铂中的Pt摩尔比为4∶1的顺铂配合物冻干粉，其转化率为81.97％。所述顺铂配合物冻干粉具有式(II-a)结构，m＝90，n＝9，y＝6。
[0139] 将得到的顺铂配合物冻干粉复溶，按Pt浓度稀释为0.1mg/mL，其Pt含量利用电感耦合等离子体质谱测定，按照实施例6提供的公式计算得到包封效率为77.06％，包封量为1.03mmol Pt/g。
[0140] 实施例17
[0141] 在37℃，取5mg实施例9制备的顺铂配合物溶解在5mL 0.01M pH值为5.5的磷酸盐缓冲溶液中，然后转移至透析袋，透析袋的截留分子量为3500，用40mL相应pH值的缓冲液进行透析，在20h、50h、70h、120h和170h分别取样3mL，并加入相应量的缓冲液；利用电感耦合等离子体质谱进行定量分析，得到累计释放百分比随着时间增加的变化关系，释放结果如图3所示，图3为实施例9制备的顺铂配合物在pH值为5.5和7.4的释放顺铂的曲线图。
[0142] 实施例18
[0143] 在37℃，取5mg的实施例9制备的顺铂配合物溶解在5mL 0.01M的pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，然后转移至透析袋，透析袋的截留分子量为3500，用40mL相应pH值的缓冲液进行透析，在20h、50h、70h、120h和170h分别取样3mL，并加入相应量的缓冲液；利用电感耦合等离子体质谱进行定量分析，得到累计释放百分比随着时间增加的变化关系，释放结果如图3所示，图3为本发明实施例9制备的顺铂配合物的胶束在pH为5.5和7.4时释放顺铂的曲线图，结果表明，顺铂配合物具有缓释能力，且其释放受pH影响，在pH5.5环境下比pH7.4环境下，更有利于加速顺铂释放。
[0144] 实施例19
[0145] 收集对数期A549细胞，调整细胞浓度，接种入96孔板内，每孔中含有100μL(约4
10 个)细胞，37℃培养24h后弃培养液；
10 个)细胞，37℃培养24h后弃培养液；
[0146] 用培养基将顺铂裸药稀释为80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL 7个浓度的样品，用培养基将实施例9制备的顺铂配合物分别按照顺铂中Pt浓度稀释为80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、
1.25μg/mL 7个浓度的样品；
1.25μg/mL 7个浓度的样品；
[0147] 将各个样品加入96孔板，每孔加入200μL，每种浓度6个复孔；
[0148] 在37℃，饱和湿度，5％CO2细胞培养箱中培养24h；
[0149] 24h后，每孔加入20μL浓度为5mg/mL的噻唑蓝，继续培养4h；
[0150] 终止培养，吸去孔内培养液，每孔加入150μL二甲基亚砜，低速振荡10min，用酶标仪检测各孔在492nm处的吸收值，换算得到使用各个浓度的顺裸药铂及顺铂配合物后细胞的存活率。
[0151] 比较顺铂裸药及顺铂配合物作用的效果参见图4，图4为实施例9制备的顺铂配合物和顺铂裸药对A549细胞的药效考察结果图，其中，曲线A为实施例9制备的顺铂配合物对A549细胞的毒性效果，曲线B为顺铂裸药对A549细胞的毒性效果，由图4可知，与顺铂裸药相比，顺铂配合物具有显著的缓释功能，同时还呈现明显的剂量-药效关系。
[0152] 实施例20
[0153] 取加入5g/L的EDTA的兔血5mL，加入40mL 0.9％生理盐水，1200rpm，离心10分钟，弃上清；将沉淀用0.9％生理盐水反复离心清洗，弃上清，至上清透明，弃上清得到血细胞；取3mL的血细胞，加入27mL 0.9％生理盐水，使血细胞浓度稀释十倍；
[0154] 用pH 7.4的磷酸盐缓冲液溶解实施例8制备的嵌段共聚物，稀释为0.0031mg/mL、0.0062mg/mL、0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL和0.4mg/mL 8个浓度的样品，分别取上述浓度的样品0.4mL，再加入等体积的血细胞溶液，得到混合液，将混合液在37℃电热水浴振荡器中孵育2小时；
[0155] 将混合液离心，取100μL上清于96孔板中，测试其在540nm的吸光度。以0.1％曲拉通-100为阳性对照，磷酸盐缓冲液为阴性对照，按照下式计算溶血百分数。
[0156]
[0157] 图5为实施例8制备的顺铂配合物的溶血结果图，结果表明，顺铂配合物不会引起溶血反应，具有良好的血液相容性。
[0158] 以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
[0159] 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
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