：本发明涉及一种可用于癌症治疗，特别是可用于通过肝脏动脉内注射的癌症治疗的顺铂细粉。
随着癌症治疗的发展，使用抗癌试剂的方法已越来越多样化。据报道，肝癌是一种很难治疗的癌症，并且在肝脏动脉栓塞的治疗中，化学疗法例如肝脏动脉内注射化学疗法、普通给药化学疗法等在多学科的治疗中起着一定的作用。特别是可使药物以高浓度接近癌症组织的肝脏动脉内注射化学疗法非常有效。顺铂被认为是一种高效的抗癌试剂，并且人们也期望它能用于肝癌的治疗。但是，顺铂在水中的溶解度非常低，室温下的溶解度为大约1mg/ml，因此其商品注射液是一种稀溶液(0.5mg/ml)，其缺点是在肝脏动脉内注射时需要太多的体积。因此希望有一种可以形成高浓度溶液并可用于肝脏动脉内注射化学疗法的很方便的粉末制剂。
已知的获得顺铂细粉的方法在第10930/1987和13174/1991号日本专利公开文本中已公开，其中顺铂溶解在叔酰胺或者可溶解顺铂的二烷基亚砜中，该溶液与一种不溶解或很难溶解顺铂的溶剂例如水、醇等混合，以沉淀出细的晶态的顺铂，然后通过过滤将其回收。
然而在用这些方法获得的顺铂细粉中，即使在试验规模下也有高至70ppm或更多的相当高水平的作为溶剂使用的叔酰胺等存在，而在工业规模下有100ppm或更多的溶剂残留是不可避免的。因此如果如此使用这些方法，则产品被溶剂污染是不可避免的。在动脉内注射疗法中，与静脉内注射传统药物制剂不同的是，由于含有高浓度药物的溶液直接进入受侵害的人体局部区域，所以应当考虑杂质的影响。叔酰胺等对人体的不利影响是可以想象的，人们希望最大限度地除去这些杂质。
另外，按照传统方法的粉末在干燥后是一种大块的材料，通过研磨或筛分而碎裂该大块材料是必需的步骤。由于该块状材料含有80％或更多，实质上90％或更多的大小小于5微米的细粉，在碎裂该块状材料的步骤以及以后的药物制备步骤中，在其操作过程中这些细粉会扩散，因此工作环境的污染是一个问题。特别是诱变抗癌试剂如顺铂应该仔细操作，为了防止粉尘扩散，在干的工序或开放式体系中的操作应该避免。此外，传统的细粉由于其小的尺寸大小而是高度可凝聚的，因此粉末颗粒聚集形成一种低流动性并容易附着于器械等上的粉末，该粉末即使在运动下也不移动，从而造成其在药物制备操作中的操作困难。这些二次聚集颗粒通过比较强的结合力而聚集并在制备溶液时很难分散，因而阻碍了其快速溶解。
作为另一种粉碎方法，已是已知的一种方法是其中将顺铂注射液进行冷冻干燥以获得一种粉末药剂。这一方法易于消毒，而且所得顺铂粉末具有快速溶解的优点。但是正如第13174/1991号日本专利公开文本中所描述的那样，在制备步骤中的顺铂溶液是一种稀溶液。因此为了获得适于使用的顺铂粉末量就必须除去大量的水，所以该方法成本高，很费时，因而不实用。另外，在冷冻干燥过程中会同时出来氯化氢，产生了冷冻干燥单元的系统腐蚀问题。而且由于冷冻干燥产品的稳定性问题，其玻璃容器应该在冷冻温度下保存(N.C.I.药物数据表)。
因此，本发明的目的是生产一种顺铂细粉块，该细粉块具有低含量的晶化用溶剂，不会形成阻碍溶解和药物制备的操作的二次聚集颗粒，并具有如粉末一样的较高的流动性；还提供一种具有优良稳定性的其药物制剂。
本发明的公开：本发明人发现，通过将顺铂粗药物溶解在一种含有氯化氢和水的溶剂如二甲基甲酰胺中，并按照本发明的方法沉淀出顺铂晶体，就可以得到满足所说发明目的即具有高的流动性并难以产生粘附和聚集的顺铂细粉。本发明人还进一步发现，通过将所得的顺铂细粉在一种很难溶解顺铂的溶剂如稀盐酸中搅拌预定的时间并洗脱残留的溶剂，可将该溶剂如DMF充分除去；还发现即使在该除去残留溶剂的步骤之后，本发明所得的顺铂细粉的性质仍能保持高流动性并难以产生粘附和聚集，从而实现本发明的目的。
另外，在按照本发明的顺铂细粉中残留溶剂的量明显低于现有技术方法所得顺铂细粉的残留溶剂量；如果使用DMF，用气相色谱分析所得其含量为60ppm或更低。另外本发明的顺铂细粉容易在水或生理盐水中分散，在室温下以2-3转/秒(r.p.s.)轻轻摇动即可在其中快速溶解。干燥后所得粗药物为不会形成二次聚集颗粒的高流动性粉末，因而可省去如研磨等步骤，并且没有粉末扩散和粘附的问题，所以该粉末能在药物制备工作中容易操作。此外可用无菌技术制备无菌的粗药物，并可将其转化到药物制备的操作中，从而具有实际工业应用价值。以这种方式无菌制得的药物制剂可用作动脉内注射治疗的一种抗癌试剂。
此外，本发明的细粉药物制剂具有优良的稳定性，并可悬浮在注射用蒸馏水或生理盐水中，因而可用作肝脏动脉栓塞治疗的药物制剂。
那就是说，本发明涉及如下1-6项：
1.一种基本上由通过40目筛的顺铂细粉所组成的顺铂细粉，其中当由这些细碎颗粒组成的细粉放在一个40目的筛子上并进行通筛试验(用4.6G的振动强度在50r.p.s.下振动5分钟)时，遗留在筛子上的二次聚集颗粒的百分比为10％或更低，该细粉为具有下述X射线粉末衍射特征峰的晶体形式：2θ                                   间距(埃)13.98               6.32915.1                5.86216.42               5.39426.92               3.3092.一种按照项目1的顺铂细粉，其中由轻叩试验测得的粉末压缩度为45-54％，体相度为0.45-0.55，叔酰胺的含量为60ppm或更低。
3.一种按照项目1或2的顺铂细粉，其中通过轻轻摇动(2-3r.p.s.)获得浓度为1mg/ml的一种顺铂水溶液的溶解时间为10分钟以内。
4.一种按照项目3的顺铂细粉，该顺铂细粉用于癌症治疗中的动脉内注射治疗或拴塞治疗。
5.一种制备顺铂细粉的方法，该方法包括下列连续的步骤：(1).制备一种顺铂溶液，该溶液，相对于全部叔酰胺溶液，含有0.3-3重量％浓度的氯化氢，4-15重量％的水，以及20-40克/升浓度的顺铂，(2).在搅拌和保持冷却在10-30℃的条件下，将所说顺铂溶液以20-40分钟的恒速率滴入到过量1-4倍体积的0.1-2N的盐酸中，以沉淀出顺铂细粉，和(3).通过过滤回收该沉淀出的顺铂细粉。
6.一种制备具有较低浓度有机溶剂的顺铂细粉的方法，该方法包括在室温下将含有有机溶剂的顺铂细粉在0.02-1N的盐酸中悬浮并搅拌1-5小时，然后将其过滤并回收。
图2为对比例所得顺铂细粉的电子显微镜照片(4000倍)。
实施本发明的最好方式：下面描述本发明的具有高流动性和快速溶解性的顺铂细粉的制备方法的优选条件。
用作本发明起始原料的顺铂没有特别的限制，按照印度化学杂志第8卷第193页(1970)所描述的方法，具有能用于药物制剂的粗药物纯度的顺铂是优选的。
作为起始原料的顺铂首先溶解在含有氯化氢和水的叔酰胺溶液中，制成由，相对于全部叔酰胺溶液，含有0.3-3重量％的氯化氢，4-15重量％的水，以及20-40克/升的顺铂的叔酰胺溶液所组成的顺铂溶液。该顺铂溶液可按任意方式制备，但一般是首先将盐酸与一种叔酰胺均匀混合，然后将顺铂溶解在所说盐酸/叔酰胺溶液中得到该顺铂溶液。也就是说，相对于全部叔酰胺溶液，顺铂是以大约20-40克/升的浓度溶解在含有大约0.3重量％，优选大约0.4-4重量％，更优选约3重量％的盐酸，大约4重量％，优选大约7-15重量％的，更优选约12重量％水的盐酸/叔酰胺溶液中。上述用于溶解顺铂的盐酸/叔酰胺溶液可按任意方式制备，通常可通过将2-6N，优选2.5-4N的盐酸加入到一种叔酰胺如二甲基甲酰胺(DMF)中并混合它们而得到。相对于全部所得溶液的盐酸的加入量为5-15重量％，优选为8-12重量％。
本发明人发现，当将按上述方式得到的顺铂溶液滴入到稀盐酸中以沉淀出晶体时，其质量受滴入时间的影响。也就是说，当1-4升的所说顺铂溶液在搅拌下滴入到体积为相对于所说顺铂溶液过量1-4倍的盐酸中时，如果滴入时间在20分钟以内，形成的是流动性很差而且易于形成二次聚集颗粒的细粉，而如果顺铂溶液在40分钟或更长的时间内滴入，形成的粉末虽然流动性很好但其溶解性非常差。这就是说，滴入时间优选的是20-40分钟，更优选的是22-35分钟。
用于晶体沉淀的温度为保持冷却在10-30℃，优选12-25℃。可以观察到在较高温度下沉淀晶体时会使收率减少。如上所述，将顺铂溶液加入到稀盐酸中的方法对于沉淀出晶体是优选的方法。虽然在该方法中加入顺序可以根据情况进行颠倒，如上所述的将顺铂加入到稀盐酸中的方法对于易于控制温度是有利的。反应系统优选的是均匀地搅拌，但产品质量不受搅拌速度和搅拌叶片形状的影响。
这就是说，优选的制备本发明的顺铂细粉的方法包括：(1).制备一种顺铂溶液，该溶液中顺铂是以20-40克/升，优选22-30克/升的浓度溶解在含有5-15％，优选8-12％的，浓度为2-6N，优选2.5-4N的盐酸的一种叔酰胺溶液中，(2).在搅拌和保持冷却在10-30℃，优选12-25℃的条件下，将所说顺铂溶液以20-40分钟，优选22-35分钟的恒速率滴入到过量1-4倍体积，优选过量1.5-3倍体积的0.1-2N，优选0.2-0.6N的盐酸中，以沉淀出顺铂细粉，和(3).通过过滤回收该沉淀出的顺铂细粉。
本发明中的叔酰胺包括例如N，N-二烷基甲酰胺和N，N-二烷基乙酰胺。其特定的例子包括N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二乙基乙酰胺等。特别是N，N-二甲基甲酰胺为本发明所优选。
从溶剂中结晶出并且该溶剂已最大限度被除去的顺铂细粉按下述步骤得到。
将沉淀出的顺铂细粉过滤、回收并悬浮在0.02-1N，优选0.05-0.2N的稀盐酸中，在室温下，优选10-30℃下搅拌1-5小时，更优选3-4.5小时，然后过滤以除去残留的溶剂。
按照该除去溶剂的步骤，本发明的顺铂细粉中溶剂的含量可以减少至60ppm或更少，优选55ppm或更少，更优选40ppm或更少，最优选30ppm或更少。这样得到的本发明的顺铂细粉其特征在于具有非常低的残留有机溶剂浓度(例如10-60ppm，优选10-55ppm，更优选10-40ppm，最优选10-30ppm)，在储存过程中具有优良的稳定性，并且由于很难形成大的二次聚集颗粒而具有优良的流动性。
下面将对本发明的顺铂细粉的性质进行更详细的描述。
当在大约1000-4000倍的电子显微镜下观察时，所有本发明的顺铂细粉单独颗粒是大小为小于等于30微米的菱晶或片晶形式，并很难形成大的二次聚集颗粒。
另一方面，按照后面将描述的第13174/1991号日本专利公开文本中的实例(对比例)的单独颗粒小至5微米或更小，这些单独颗粒初步聚集成规模形式(大约10微米)，并且这些初步聚集颗粒进一步二次聚集形成一种聚集体。作为参考，本发明中和对比例中的细粉的电子显微镜晶体图象示于图1(本发明)和图2(对比例)中。并且，在本发明的顺铂细粉中，例如，其大于等于40目大的二次聚集颗粒占10％或更小(如测试例2所示的在40目筛通过试验中的留在筛上的颗粒数)，优选1-10％，更优选1-5％。并且，本发明的顺铂细粉的性质(物理性质)为，如测试例3所示的由轻叩试验所得的粉末的压缩度为45-54％，优选46-50％，体相度为0.45-0.55，优选0.48-0.53。此外，当100mg本发明的顺铂细粉和100ml生理盐水或蒸馏水在一个试管中轻轻摇动(2-3r.p.s.)时，在10分钟内完全溶解，优选在6分钟内完全溶解，更优选在5分钟内完全溶解，一般是在2-5分钟内完全溶解。凭借这些性质，该细粉在药物制备中易于操作，并且所得的该细粉的药物制剂可以溶解并用于肝脏动脉内注射，而且由于其良好的分散性而可用于肝脏栓塞的治疗。
下面表1所示为从粉末X射线衍射仪(CuKα1过滤靶，15406埃)得到的本发明顺铂细粉的晶相结构的数据。
表1.  本发明实施例1中的粉末的X射线衍射图中的主要峰2θ                    相对强度        间距(埃)13.98          100            6.32915.1           22             5.86216.42          24             5.39424.2           8              3.67426.92          24             3.30928.51          12             3.128从上表可以明显地看出，本发明的顺铂细粉的特征是具有2θ值为13.98、15.1、16.42和26.92的强峰。
另一方面，冷冻干燥产品在同样条件下测得的X射线粉末衍射图中在上述2θ值范围内观察不到明显的特征峰，说明其晶体结构明显不同。
下面将通过与现有技术的合适对比而对本发明的效果进行明确描述。
首先，作为结晶用溶剂的叔酰胺如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的残留度的对比表明，在现有技术(第13174/1991号日本专利公开文本)的顺铂细粉中通过气相色谱分析所得的溶剂残留量为大于等于70ppm，而本发明的顺铂细粉中溶剂残留量为小于等于30ppm(见测试例1)。
如果现有技术中所得的含大量残留溶剂的顺铂细粉再进行本发明的溶剂去除步骤以减少残留DMF量，虽然溶剂的含量可以减少，但是其流动性变得更坏，而且不能获得象本发明这样的具有低的残留DMF量和优良的流动性等性能的顺铂细粉(见参比例)。
然后将粉末在一个40目筛子上振动5分钟，对比筛子上残留的粉末量以评价与药物制备操作难易度有关的粉末聚集性。结果表明，本发明的粉末很难聚集并很少粘附于筛子等上面，而且几乎所有的粉末都通过了筛子。而另一方面，不管是现有技术得到的粉末(对比例)还是通过减少对比例粉末中的溶剂量而得到的粉末(参比例)，都形成了直径比筛子的网孔大的聚集颗粒，并且大部分的粉末留在筛子上(见测试例2)。
粉末的装填性是药物制备操作的一个重要评价因素，它可作为流动性的一个指标。因此，将顺铂细粉堆积在一个测量圆筒中并轻叩，从其表观体相密度和体积测定其压缩度和体相度，以比较其装填性。该体相度由Zairyo，第14卷，第574页(1970)中报道的方法测定，具体由在测试例3中描述的方法测定。
本发明的顺铂细粉的压缩度和体相度都低，并且装填性能优良。
为了测验溶解性，将100mg本发明的顺铂细粉与100ml生理盐水混合并轻轻摇动，使其在5分钟内溶解。而另一方面，二次聚集颗粒在其中不能分散，仍保持其按照对比例和参比例的样品形式，即使在10分钟后它们也确实不能有效地溶解。
另外，本发明的顺铂细粉在储存稳定性方面也非常出色，当将其密封在棕色玻璃小瓶中时，在室内的自然条件下即使储存39个月也不分解。
本发明提供的顺铂细粉可用于生产无菌的粗药物，经过杀菌处理并无菌地装入消毒密封容器如安瓿或玻璃容器中制成顺铂细粉的药物制剂。
为了阐明本发明顺铂细粉的有益效果，使用了按照第13174/1991号日本专利公开文本中的实施例4制得的粉末(对比例)以及将所说现有技术中的粉末继续进行脱溶剂(二甲基甲酰胺)处理(本发明中的脱溶剂处理)而得到的粉末(参比例)。
下面通过实施例对本发明进行更详细的描述，但是这些实施例不能理解为对本发明的限定。
将所得的顺铂细粉100毫克与100毫升生理盐水在一个试管中混合，轻轻摇动4分钟后，通过肉眼观察证实其已完全溶解。实施例2顺铂细粉的无菌粗药物的制备所用的仪器、过滤设备等预先已通过合适的消毒方法消毒。将3.6升N，N-二甲基甲酰胺与0.4升浓度为3N的盐酸混合。将100克顺铂加入到其中并在室温下搅拌溶解1小时。将所得溶液通过一个0.2微米的预先消毒过的膜过滤器。在搅拌和冷却条件下将该顺铂溶液以25分钟的恒速率滴入到8.0升保持冷却在15℃并已通过一个0.2微米的预先消毒过的膜过滤器的0.3N盐酸中。沉淀出顺铂细粉并形成一种悬浮液。在完成滴加后，将该悬浮液在室温下搅拌1小时。将沉淀出的顺铂细粉通过过滤收集并用180毫升已预先通过过滤消毒过的0.1N的盐酸洗涤二次。将所得湿滤饼悬浮在1.2升已预先通过过滤消毒过的0.1N的盐酸中，并在室温下搅拌4小时。将该悬浮液过滤得到顺铂细粉。将其用180毫升0.1N的盐酸洗涤二次，然后用180毫升已通过过滤消毒过的乙醇洗涤二次。通过在减压下干燥3小时，得到65.1克顺铂细粉。将该细粉装入一消毒过的玻璃容器中并密封。
将所得的顺铂细粉100毫克与100毫升生理盐水到入一试管中，混合并轻轻摇动5分钟。摇动以后，通过肉眼观察证实其已完全溶解。对比例将20克顺铂溶解在500毫升DMF-浓盐酸(9∶1)中。将该溶液搅拌1小时，并向其中加入1000毫升0.1N的盐酸。将所得悬浮液搅拌15分钟，并通过过滤回收其中的固体。将这些固体用40毫升0.1N的盐酸洗涤二次并用80毫升丙酮洗涤二次，并在减压下室温干燥3小时，得到一种粉末。参比例将对比例1所得的顺铂细粉按照本发明实施例1的方法在0.1N盐酸中室温下搅拌处理4小时以除去DMF，从而得到一种粉末。测试例1残余DMF量的分析将上述每一种方法所得的顺铂细粉溶解在二甲亚砜中并用气相色谱分析测定产品中所含的残余DMF。
按照本发明实施例1的顺铂细粉中残余DMF：    18ppm对比例的顺铂细粉中残余DMF：               72ppm参比例的顺铂细粉中残余DMF：               27ppm气相色谱分析条件柱：Gas-Chro Pack55(GL科学有限公司)。
柱温：180℃。
载气：氮气，50毫升/分钟。
检测器：氢火焰离子检测器。
样品：将0.2克样品溶解在二甲亚砜中得到1毫升溶液，注射5.0微升。测试例2筛分分析将2.00克已通过一个40目筛的细分形式的顺铂轻轻地放在一个外径为7.5厘米的40目筛子上，将其用50次振动/秒的速率和4.6G的振动强度在筛振器上振动5分钟(垂直方向)。振动强度在“应变型加速转换器”中测定。测量通过筛子的顺铂量和残留在筛子上的顺铂量以测定残留度。
本发明实施例1的顺铂细粉的残留度：    2.0％。
对比例的顺铂细粉的残留度：           63.5％。
参比例的顺铂细粉的残留度：           70.0％。
筛分分析中筛子上的残留度通过按照日本药典的通用试验方法所描述的下列公式测定：A＝B/S×100A：残留度(％)B：残留在筛子上的样品量(克)S：样品量(克)测试例3轻叩装填试验将已通过一个40目筛的顺铂细粉通过一个粉末漏斗轻轻地装入到一个25毫升的测量圆筒中累积至20-25毫升的体积。记录下松弛装填状态时的表观体积。将其以2厘米的轻叩高度轻叩。记录下每20次轻叩后的表观体积。当该轻叩后的表观体积恒定不变时，停止轻叩。将装填的顺铂称重，测定每次轻叩后的体相密度。从该体相密度测得压缩度。另外用Zairyou，第14卷，第574页(1970)中报道的方法测定体相度。
本发明实施例1的顺铂细粉其装填粉末的压缩度：48.8％，体相度：0.51。
按照参比例的顺铂细粉其装填粉末的压缩度：58.6％，体相度：0.65。
源自轻叩试验的压缩度从下列公式得到：c＝(ρf-ρ0)/ρf×100c：压缩度(％)ρf：紧体相密度(克/毫升)ρ0：松体相密度(克/毫升)体相度可按下述方法得到。
当将n/C与n之间的关系从上述轻叩装填获得的数据作图时，其中n：轻叩次数(次)C＝1-V/V0(V0：松弛装填状态时的表观体积，V：每次轻叩后的表观体积)按照基本公式：n/C＝1/ab+n/a(a和b为常数)得到n/C与n之间的线性关系，从该图的斜率得到体相度a。测试例4储存稳定性试验将15克本发明的顺铂细粉密封在一个透明的玻璃小瓶中并在室内的自然条件下储存39个月。其后由HPLC测得的分解度的结果表明，没有观察到由分解而形成的顺铂类物质，顺铂的粗药物的含量为100.1％。与传统方法在药物制备操作性方面的比较本发明的顺铂细粉(实施例1)不产生二次聚集，平整并具高流动性，而且不粘附于容器，在药物制备的各个步骤(储存、混合、分散以及包装、称重等)中操作平稳。与此相反，按照对比例和参比例的顺铂细粉在干燥后为团状材料，因此需要用磨进行研磨，除非在封闭体系中进行加工否则由该细粉散发而引起的化学危害不可避免。此外用磨研磨后的粉末会产生二次聚集，流动性很差，粘附于仪器等上面，在药物制备操作中妨碍混合、分散、包装和称重等操作，而且精确称重等很困难。
工业实用性：本发明涉及一种作为抗癌试剂的顺铂细粉的药物制剂，该制剂适用于癌症治疗中的动脉内注射疗法，它具有高流动性并在药物制备操作中易于控制。另外它还具有优良的分散性，在水中快速溶解，从而可以提供一种很方便的细粉制剂。另外还可提供一种具有低N，N-二甲基甲酰胺浓度的适用于临床的安全的顺铂细粉。