高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法
专利汇可以提供高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种表征高浓度的大分子溶液的缔合性质的方法。在浓度范围上分布的样品等分试样被顺序地注入光散射光度计。平衡缔合常数和缔合化学计量由散射 信号 的 角 度和浓度依赖性的分析导出。热动 力 学非理想性，其在高浓度下变得重要，在简化形式的分析中被处理，其可应用于多个缔合的物质。，下面是高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法专利的具体信息内容。
1.一种 表示 来自 高 浓度 的自 缔合 溶液 的组 成梯 度多 角度 静态 光散射 数据的方 法，考虑 高度简 化形式 的热动 力学非 理想性，根据等 式其中M是单体的摩尔质量；i是每个缔合
i-mer的阶；ci是i-mer的部分平衡浓度； λ是照明光束的
波长； 是i-mer的均方半径； n是所述溶液的折射率；NA是阿佛加德罗数；
dn/dc是所述溶液中的大分子的折射增量；以及A2和A3分别是所述单体的第二维里系数和第三维里系数。
2.根据权利要求1所述的方法，其中 针对R(c，θ)的等式的分母中的全部i-mertot
设定为零，并且c 是溶液中的分子的总重量浓度，导致更简单的形式
3.根据权利要求2所述的方法，其中 针对R(c，θ)的等式的分母和分子中的全部i-mer设定为零，导致更简单的形式
4.根据权利要求1所述的方法，其中A3被设定为零。
5.一 种 表 示 来 自 高 浓 度 的 可 逆 异 缔 合 大 分 子X 和Y 的 溶 液 的CG-MALS数据的方法，考虑高度简化形式的热动力学非理想性，根据等式其中MX和MY是X和Y单体的
摩尔质量，i和j是XiYj复合物的化学计量阶；Mij＝iMX+jMY摩尔质量，以及cij是XiYj复合物的部分平衡浓度； λ是照明光束的波长； 是XiYj复
合物的均方半径； n是所述溶液的折射率；NA是阿佛加德罗数；dn/dcX和dn/dcY是所述溶液中的分子物质X和Y的折射增量。
6.根据权利要求5所述的方法，其中 在分母中针对全部ij设定为零，导致更简单的等式形式：
tot tot
其中cX 和cY 分别是溶液中的X和
Y的总浓度。
7.根据权利要求6所述的方法，其中 在分子中被设定为零，导致更简单的等式形式：
8.一种表征溶剂中的高浓度的溶液中可逆缔合大分子的自缔合的方法，包括以下步骤：
a.引入浓度cf，f＝1...k的感兴趣分子的溶液的一系列k等分试样到光散射光度计，由此所述光散射光度计
i.用光束照射每个注入的稀释的等分试样
ii.在设置光灵敏检测器的一个或更多个角度位置θ检测从其散射的光的强度；
b.测定每个稀释的等分试样f的浓度cf；
c.由所述检测的散射光强度形成过量瑞利比R(cf，θ)；
d.依照所述k个稀释液cf，f＝1...k表示所述过量瑞利比，以校正热动力学非理想性，如下
其中M是单体的
摩尔质量，i是每个自缔合i-mer的阶，cf，i是第f个稀释等分试样中的i-mer的部分平衡浓度， λ是照明光束的波长； 是i-mer的均方半径，
n是所述溶液的折射率，NA是阿佛加德罗数，以及dn/dc是所述溶液中的所述大分子的折射增量；
e.拟合所述过量瑞利比的所述表示为缔合模型的等式以测定平衡缔合常数、缔合的化学计量、不强干部分、第二和第三维里系数、以及摩尔质量中的一些或全部。
9.根据权利要求8所述的方法，其中基于从分子结构导出的分子半径r的估计量，A2被估计为排除的体积值，
10.根据权利要求8所述的方法，其中A2被估计为排除体积值， 其基于对应于流体动力学半径的分子半径r的估计量，如通过动态光散射、差示黏度测量法或类似的实验技术测定。
11.根据权利要求8所述的方法，其中A3设定为零。
12.根据权利要求8所述的方法，其中针对全部i-mer， 设定为零。
13.根据权利要求8所述的方法，其中针对仅仅R(cf，θ)的分子中的全部i-mer，设定为零。
14.根据权利要求8所述的方法，其中所述等分试样被人工制备，以及通过闪烁管引入检测器。
15.根据权利要求8所述的方法，其中所述等分试样被人工制备，以及通过泵引入检测器。
16.根据权利要求8所述的方法，其中所述等分试样通过稀释最高要求浓度的原液的双泵被自动地准备和引入检测器。
17.根据权利要求8所述的方法，其中所述浓度的所述测定由如下组成：
a.与散射光度计串联放置浓度检测器；
b.注射足够体积的稀释等分试样以填充光散射光度计和浓度检测器的流量室；
c.检测来自所述浓度检测器的信号；
d.基于大分子的已知响应因子将所述信号转换为浓度。
18.根据权利要求8所述的方法，其中所述浓度的所述测定由如下组成：
a.在浓度检测器中测量所述高浓度溶液的浓度；
b.由所述稀释步骤的参数计算每个稀释的等分试样的浓度cj。
19.根据权利要求8所述的方法，其中所述浓度检测器包括UV/可见光吸收光度计，以及响应因子是吸收系数。
20.根据权利要求8所述的方法，其中所述浓度检测器包括差示折光计，以及响应因子是折射增量。
21.根据权利要求8所述的方法，其中所述拟合包括Levenberg-Marquardt非线性最小二乘方拟合。
22.一种表征溶剂中高浓度溶液中的两个可逆缔合大分子物质的异缔合的方法，包括以下步骤：
a.制备包含每个大分子物质的高浓度溶液的容器和包含所述溶剂的其他容器；
b.通过混合所述高浓度溶液的等分试样和所述溶剂制备所述高浓度溶液的一系列k组合物等分试样 f＝1...k，其中每个组合物等分试样包括浓度 的大分子X和浓度 的大分子Y；
c.顺序地注射所述组合物等分试样到光散射光度计，由此所述光散射光度计i.通过光束照射每个注射的稀释液；
ii.在设置光灵敏检测器的一个或更多个角度位置检测从其散射的光的强度；
d.通过浓度检测器和所述溶液中的所述大分子的响应因子测定每个组合物等分试样f的组成
e.由所述检测的散射光强度形成过量瑞利比
f.依照所述k个稀释液cf，f＝1...k表示所述过量瑞利比，以校正热动力学非理想性，如下
其中M是单体的摩尔质量，i和j是XiYj复合物的化学计量比，cf，ij是第f个组合物等分试样中XiYj复合物的部分平衡浓度， λ是照明光束
的波长； 是XiYj复合物的均方半径， n是所述溶液的折射率，NA是阿佛加德罗数，以及dn/dcX和dn/dc是所述溶液中的所述大分子X和Y的折射增量；
g.拟合所述过量瑞利比的所述表示为缔合模型的等式以确定平衡缔合常数、缔合的化学计量、不强干部分、第二维里系数以及摩尔质量中的一些或全部。
23.根据权利要求22所述的方法，其中A2，X和A2，Y分别被估计为排除体积值：
其基于由分子结构导出的分子半径rX和rY的估计。
24.根据权利要求22所述的方法，其中A2，X和A2，Y分别被估计为排除体积值：
其基于对应于流体动力学半径的分子半径rX和rY的估
计，如通过动态光散射、差示黏度测量法或类似的实验技术所测定。
25.根据权利要求22所述的方法，其中在R(cf，θ)的分母中针对全部ij， 被设定为零。
26.根据权利要求22所述的方法，其中在R(cf，θ)的分子和分母中针对全部ij，被设定为零。
27.根据权利要求22所述的方法，其中所述等分试样由人工制备，以及通过闪烁管引入检测器。
28.根据权利要求22所述的方法，其中所述等分试样由人工制备，以及通过泵引入检测器。
29.根据权利要求22所述的方法，其中所述等分试样通过吸取最高要求浓度的分子X和Y的原液和溶剂的三泵自动地制备和引入检测器；混合这些溶液为要求的组合物；以及随后输送所述等分试样到检测器。
30.根据权利要求22所述的方法，其中所述组合物的所述测定由如下组成：
a.与所述光散射光度计串联放置浓度检测器；
b.注射足够体积的组合物等分试样以填充光散射光度计和浓度检测器的流量室；
c.检测来自所述浓度检测器的信号；
d.基于大分子的已知响应因子以及混合步骤限定的它们的比将信号转换为组成
31.根据权利要求22所述的方法，其中所述组合物的所述测定由如下组成：
a.与所述光散射光度计串联放置浓度检测器，其中所述浓度检测器对所述分子的两个独立的性质灵敏；
b.注射足够体积的组合物等分试样以填充所述光散射光度计和所述浓度检测器的流量室；
c.检测来自所述浓度检测器的所述信号；
d.基于所述大分子对所述独立性质的已知响应因子将信号转换为组成
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述两个性质是在两个不同波长的光谱吸收率。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述两个性质是在一个波长的光谱吸收率，以及折射增量。
34.根据权利要求22所述的方法，其中所述组合物的所述测定由如下组成：
a.在浓度检测器中测量每个高浓度溶液；
b.由等分试样混合步骤的参数计算每个组合物等分试样的组成
35.根据权利要求22所述的方法，其中所述浓度检测器包括UV/可见光吸收光度计，以及所述响应因子是吸收系数。
36.根据权利要求22所述的方法，其中所述浓度检测器包括差示折光计，以及所述响应因子是折射增量。
37.根据权利要求22所述的方法，其中所述拟合包括Levenberg-Marquardt非线性最小二乘方拟合。
高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法
背景技术
Fernandez和Minton，Biophysical J.96，1992-1998(2009)已经示出起伏理论结合EHSA可以成功地应用于大至70g/L浓度下蛋白质可逆自缔合为一个或两个低聚状态的CG-MALS分析。
δm，n等于1否则等于零，以及γn是成分n的热动力学活性，以及Q2，m，n是θ的一些函数，其总体上取决于m和n分子大小和质量分布，以及随着θ接近零或大小比 小很多，接近值1；|ψm，n(θ)|是ψm，n(θ)行列式；Ψm，n(θ)是ψm，n(θ)的m，n余因子或子行列式；以及dn/dcm是第m个物质的差示折射率增量。如果第m个物质是由类型X的iX单体、类型Y的iY单体等组成的杂合物，则dn/dcm是组分分子的贡献性折射率增量的加权平均。折射增量的加权平均是 其中下标X代表不同的组分单体。如果存在超过两个或三个
物质，则等式(1)变得非常复杂，因为行列式和子行列式中并入的很多项。
产生
半径。推导类似于针对相同单体的低聚物所描述的。
步骤确定或由浓度检测器测量，以及c 是不强干缔合以及被认为是独特物质的大分子的浓度。
对于每个溶液是已知的，如由制备步骤确定或用浓度检测器测量；以及cx 和cY 分别是X和Y大分子的浓度，所述大分子不强干缔合以及被认为是另外的独特物质。
如果MALS和浓度检测器被并联连接，则样品流必须被以受控方式在它们之间分流，以确保在每个样品注射完成时，两个检测器中的浓度相同。样品流分流通常用针阀控制，以及通过适当的流量计监视以保持要求的比例。
式中，拟合步骤由Levenberg-Marquardt算法组成，如应用于两个变量(c和sin(θ/2))，其中M和A2固定。
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