一种检测真菌多糖的方法
专利汇可以提供一种检测真菌多糖的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种检测 真菌 多糖的方法，该方法是单相色谱技术为核心，并与MALS，高灵敏示差法及DLS进行有机组合构成的一种既可在线、又可离线，既可定量检测，又可对多糖的绝对分子量；分散度；分子构象；溶解性和 稳定性 等特性进行表征及分析。该方法包括制样、流动相的制备、进样、缓冲、聚焦平衡、洗脱分离和检测等步骤。与现有的 苯酚 － 硫酸 、凝胶 电泳 、HPLC等法相比，本发明具有以下特点：集定量与定性于一体；不破坏样品，全物理检测；样品 吸附 极少；操作程序简便、迅速，条件温和；无需标样即可获得多糖的绝对分子量及其分布；灵敏度高，可达10－9；可同时检测多糖的多种物理化学特性。可广泛用于多糖及其它相关化合物的分析检测、 质量 控制及研发。，下面是一种检测真菌多糖的方法专利的具体信息内容。
1.一种检测真菌多糖的方法，包括以下工艺步骤：
(1)制样
称取10-100mg的真菌多糖样品置于干净的试管或小量杯中，加入5-60ml 蒸馏水或0.85％氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液(7.0mmol/L KH2PO4，7.0mmol/L Na2HPO4，pH＝6.8)搅拌使其溶解后，于4℃低温冰箱中保存备用，样品液的浓 度为0.1-0.98mg/ml；
(2)流动相的制备
将上述用于溶解多糖的溶剂用脱气机进行脱气处理后作为流动相；
(3)进样、缓冲、聚焦平衡
将单相色谱(非对称场流分离)仪(The Eclipse AF4)、多角度静态光散 射仪(MALS，DAWN HELEOS II)、动态光散射仪(DLS，DynaPro Titan)、示 差折光检测器(RI，OPTILAB rEX)、脱气机(1100Series vacuum degasser)和进 样泵等进行有效连接整合成一个完整的系统，以该系统为基础来实施本检测真 菌多糖的方法；
工艺操作条件：用微量移液器吸取上述已制备好的多糖样品5-120μL及适 量的流动相进行进样、缓冲与聚焦平衡，进样、缓冲、聚焦平衡时间为5-10min， 进样速度：0.05-0.95mL/min，聚焦平衡时间为1-5min；流道流速：0.2-2mL/min， 交叉流流速：起始以2-9mL/min运行1-5分钟，然后降至1-4mL/min运行3-8 分钟后逐渐降低至0ml/min，总运行时间为10-60分钟；操作方式为先调节流 道流和交叉流的流动相的流速，待平衡稳定后再开始进样，糖样的流速为： 0.05-0.95mL/min；
(4)洗脱分离
用上述制备的流动相溶液做洗脱剂，在上述样品进样、缓冲与聚焦平衡完 成后开始洗脱5-49分钟；
(5)检测
检测手段采用在线或离线两种检测，在线检测是指自洗脱开始至洗脱结束 的全程检测；而离线检测则是指洗脱完毕后的全部检测。
2.根据权利要求1所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述(1)制 样中的真菌多糖样品系指香菇多糖、猴头多糖、灵芝多糖、黑木耳多糖、灰树 花多糖等食、药用真菌多糖中的任何一种或数种。
3.根据权利要求1或2所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述 的步骤(1)制样方法是一种不改变样品理化性质的方法。
4.根据权利要求1或2所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述 (2)步骤中的流动相是指所有能溶解多糖的溶剂，包括水相及有机相。
5.根据权利要求1或2所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述 (3)步骤中的进样既包括自动进样方式也包括手动进样方式，缓冲和聚焦平衡是 既包括流道流和交叉流的流动相的缓冲和聚焦平衡、也包括多糖样品的缓冲和 聚焦平衡。
6.根据权利要求1或2所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述 (5)步骤检测多糖的种类既可以是水溶性多糖又可以是水不溶性多糖。
7.根据权利要求1或2所述的检测真菌多糖的方法，其特征在于：所述 (3)、(4)和(5)步骤是以单相色谱作为样品的分离系统，并以多角度激光光散射法 (MALS)，动态光散射(DLS)法及高灵敏示差(OPTILAB rEX)法进行动态在线 或离线检测来获得多糖的各种理化参数；它是将单相色谱法，多角度激光光散 射法(MALS)，动态光散射(DLS)法及高灵敏示差(OPTILAB rEX)法进行有机 组合构成的一种既可直接定量检测多糖，又可对多糖的绝对分子量；分子尺寸 和第二维里系数；分散度；均方根旋转半径；分子构象；溶解性和稳定性等特 性进行表征以及分析的方法。
技术领域
背景技术
发明内容
本发明采用的技术方案是：
该检测真菌多糖的方法是以具有宽广的动态量程、不存在剪切力、快速分 离的单相色谱技术为核心，并与多角度激光光散射法，高灵敏示差法及动态光 散射法进行有机组合构成的一种既可在线、又可离线，既可直接定量检测真菌 多糖，又可对多糖的绝对分子量；分子尺寸和第二维里系数；分散度；均方根 旋转半径；分子构象；溶解性和稳定性等特性进行表征以及分析的方法。
该检测真菌多糖的方法，具体包括以下工艺步骤：
(1)制样
称取10-100mg的真菌多糖样品置于干净的试管或小量杯中，加入5-60ml 蒸馏水或0.85％氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液(7.0mmol/L KH2PO4，7.0mmol/L Na2HPO4，pH＝6.8)搅拌使其溶解后，于4℃低温冰箱中保存备用。样品液的浓 度为0.1-0.98mg/ml；
(2)流动相的制备
将上述用于溶解多糖的溶剂用脱气机进行脱气处理后作为流动相；
(3)进样、缓冲、聚焦平衡
将单相色谱(非对称场流分离)仪(The Eclipse AF4)、多角度静态光散 射仪(MALS，DAWN HELEOS II)、动态光散射仪(DLS，DynaPro Titan)、示 差折光检测器(RI，OPTILAB rEX)、脱气机(1100 Series vacuum degasser)和进 样泵等进行有效连接整合成一个完整的系统；以该系统为基础来实施本检测真 菌多糖的方法；
工艺操作条件：用微量移液器吸取上述已制备好的多糖样品5-120μL及适 量的流动相进行进样、缓冲与聚焦平衡。进样、缓冲、聚焦平衡时间为5-10min， 进样速度：0.05-0.95mL/min，聚焦平衡时间为1-5min；流道流速：0.2-2mL/min， 交叉流流速：起始以2-9mL/min运行1-5分钟，然后降至1-4mL/min运行3-8 分钟后逐渐降低至0ml/min，总运行时间为10-60分钟；操作方式为先调节流 道流和交叉流的流动相的流速，待平衡稳定后再开始进样。糖样的流速为： 0.05-0.95mL/min；
进样既包括自动进样方式也包括手动进样方式，缓冲和聚焦平衡是既包括 流道流和交叉流的流动相的、也包括多糖样品的缓冲和聚焦平衡。
(4)洗脱分离
用上述制备的流动相溶液做洗脱剂，在上述样品进样、缓冲与聚焦平衡完 成后开始洗脱5-49分钟；
(5)检测
检测手段采用在线或离线两种检测，在线检测是指自洗脱开始至洗脱结束 的全程检测；而离线检测则是指洗脱完毕后的全部检测。检测多糖的种类既可 是水溶性又可是水不溶性多糖。
本发明所述的真菌多糖样品系指香菇多糖、猴头多糖、灵芝多糖、黑木耳 多糖、灰树花多糖等食、药用真菌多糖中的任何一种或数种。其制样方法是一 种不改变样品理化性质的方法。
本发明所公开的检测真菌多糖方法的有益效果是：
该方法是以具有宽广的动态量程、不存在剪切力、快速分离的单相色谱技 术为基础，并与多角度激光光散射法，动态光散射法及高灵敏示差法进行有机 组合构成的一种既可直接定量检测多糖，又可对多糖的绝对分子量；分子尺寸 和第二维里系数；分散度；均方根旋转半径；分子构象；溶解性和稳定性等特 性进行表征以及分析的方法。与现有的多糖检测方法如苯酚-硫酸法、凝胶电 泳法、HPLC等法相比，本发明具有以下几个特点：①既可定量又可定性检测多 糖，它是一种集定量与定性于一体的检测方法。②不破坏样品，全物理检测。 ③样品吸附极少。④操作程序简便、迅速，条件温和。⑤无需标样即可获得多 糖的绝对分子量及其分布，且所测多糖的分子量大小范围广泛。⑥灵敏度高， 可达10-9。⑦可同时检测多糖的多种物理化学特性。本发明可广泛用于多糖及 其它相关化合物的分析检测、质量控制及研发。
具体实施方式
实施例1：该检测真菌多糖的方法，具体包括以下工艺步骤：
(1)制样
分别称取一定量(20mg)的多糖样品(香菇多糖，猴头多糖，灰树花多 糖，金针菇多糖，苦瓜多糖)置于5个干净的试管或小量杯中，加入5ml蒸馏 水搅拌使其溶解后，于低温(4℃)冰箱中保存备用。样品液的浓度为0.1mg/ml；
(2)流动相的制备
将上述用于溶解多糖的溶剂用脱气机进行脱气处理后作为流动相；
(3)进样、缓冲、聚焦平衡
将单相色谱(非对称场流分离)仪(The Eclipse AF4)、多角度静态光散 射仪(MALS，DAWN HELEOS II)、动态光散射仪(DLS，DynaPro Titan)、示 差折光检测器(OPTILAB rEX)、脱气机(1100 Series vacuum degasser)和进样泵 等进行有效连接整合成一个完整的系统；以该系统为基础来实施本实施例及下 述各实施例；
工艺操作条件：用微量移液器吸取上述已制备好的多糖样品10μL及适量 的流动相进行进样、缓冲与聚焦平衡。进样、缓冲、聚焦平衡时间为5min， 进样速度：0.1mL/min；聚焦平衡时间为1min，流道流速：0.2mL/min，交叉 流流速：起始以2mL/min运行5分钟，然后降至1mL/min运行8分钟后逐渐 降低至0ml/min，总运行时间为55分钟。糖样的流速为：0.1mL/min；
(4)洗脱分离
用上述制备的流动相溶液做洗脱剂，在上述样品进样、缓冲与聚焦平衡完 成后开始洗脱48分钟；
(5)检测
检测手段为在线检测。
实施例2：与实施例1的步骤相同，所不同的是：
1.称取60mg的多糖样品(香菇多糖，猴头多糖，灰树花多糖，金针菇 多糖，苦瓜多糖)置于干净的试管或小量杯中，加入30ml0.85％氯化钠溶液搅 拌使其溶解后，于低温(4℃)冰箱中保存备用。样品液的浓度为0.5mg/ml；
2.操作工艺条件为：用微量移液器吸取上述已制备好的多糖样品60μL 及适量的流动相进行进样、缓冲与聚焦平衡。进样、缓冲、聚焦平衡时间为8 min，进样速度：0.5mL/min；聚焦平衡时间为3min，流道流速：1.2mL/min， 交叉流流速：起始以5mL/min运行3分钟，然后降至2.5mL/min运行5.5分 钟后逐渐降低至0ml/min，总运行时间为35分钟。糖样的流速为：0.5mL/min；
3.洗脱分离：用上述制备的流动相溶液(0.85％氯化钠)做洗脱剂，在上 述样品进样、缓冲与聚焦平衡完成后开始洗脱23分钟；
4.本实施例的检测手段为离线检测。
实施例3：与实施例1的步骤相同，所不同的是：
1.称取100mg的多糖样品置于干净的试管或小量杯中，加入60ml磷酸 盐缓冲液(7.0mmol/L KH2PO4，7.0mmol/L Na2HPO4，pH＝6.8)搅拌使其溶解 后，于低温(4℃)冰箱中保存备用。样品液的浓度为0.95mg/ml；
2.操作工艺条件为：用微量移液器吸取上述已制备好的多糖样品120μL 及适量的流动相进行进样、缓冲与聚焦平衡。进样、缓冲、聚焦平衡时间为 10min，进样速度：0.95mL/min；聚焦平衡时间为5min，流道流速：2.0mL/min， 交叉流流速：起始以9mL/min运行1分钟，然后降至4mL/min运行3分钟后 逐渐降低至0ml/min，总运行时间为25分钟。糖样的流速为：0.95mL/min；
3.洗脱分离：用上述制备的流动相溶液(磷酸盐缓冲液)做洗脱剂，在 上述样品进样、缓冲与聚焦平衡完成后开始洗脱15分钟；
4.本实施例的检测手段为在线检测。
根据上述3个实施例，均可获得以下结果(见表1、表2)：
表1：几种不同多糖样品的浓度及分子量(Mw)
表2：几种不同多糖样品的浓度及分子量分布特性(Mw)
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 金属氧化物和金属硫属化物以及混合金属氧化物与硫属化物的热力学溶液 | 2020-05-14 | 378 |
| 一种检测真菌多糖的方法 | 2020-06-03 | 389 |
| 陶瓷浆组合物及其制造方法 | 2020-05-29 | 569 |
| 一种检测真菌多糖的方法 | 2020-05-31 | 156 |
| 一种制备炭黑的风-燃比的控制方法及系统 | 2020-05-22 | 356 |
| 一种适用于80K-400K温区的相平衡测量装置 | 2020-05-11 | 229 |
| 一种气枪子波模拟方法 | 2020-05-13 | 991 |
| 改变抗体溶液中离子强度以减少乳光/聚集物 | 2020-05-19 | 801 |
| 确定样品扩散特性的方法和装置 | 2020-06-01 | 651 |
| 聚酰亚胺薄膜 | 2020-05-24 | 945 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
