盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法
专利汇可以提供盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法，包括盾叶薯蓣的初代培养、生长培养、丛芽增殖培养、生根培养步骤，取盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和 腋芽 清洗灭菌进行初代培养，用MS无 激素 +pH5.8培养基，在光照强度1000LX，光照时间12h/d， 温度 25±1℃中培养，转入6-BA0.2mg/l+NAA0.01+pH5.8的MS培养基中，再转入激素配比是BA0.2+IAA0.1或NAA0.1的MS培养基中进行丛芽增殖，再转入IAA0.5+NAA0.5的MS生根培养基中，待生根后移栽。解决了因薯蓣茎结构特殊而导致生根困难的问题，同时无性系后代保持与母本优良特性的高度一致性，并实现了组培工厂化生产。，下面是盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法专利的具体信息内容。
1、盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法，包括盾叶薯蓣的初代培 养、生长培养、丛芽增殖培养、生根培养步骤，其特征是取盾叶薯蓣 一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽，清洗后，在超菌台上用75％酒精浸泡 30s，再用0.1％升汞灭菌5-8min，最后用无菌水冲洗数次，切成带单个 腋芽或顶芽的小节，转于初代培养基即MS无激素+PH5.8，在光照强度 1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃中培养，把初代培养得到的无 菌苗切成带单个腋芽或顶芽的节后，转入6-BA0.2mg/l+NAA0.01+PH5.8 的MS培养基中，然后转入激素配比是BA0.2+IAA0.1或NAA0.1的MS 培养基中进行丛芽增殖，再转入IAA0.5+NAA0.5的MS生根培养基中， 待生根后移栽。
技术领域：本发明涉及生物技术领域里植物无菌克隆系生产方法， 具体地，涉及一种盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法。
背景技术：盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)是薯蓣皂素 含量最高的中国特有薯蓣科植物。薯蓣皂素是合成甾体激素类药物的 重要原料，其结构经改造和合成后，可得到数千种不同的甾体激素药 物，如：双烯、黄体酮，催产素，避孕药，强的松系列，可的松系列， 还是地奥心血康、盾叶冠心宁的重要原料，在国际上有“药用黄金” 的美誉。中国有皂素生产厂50多家，年产500t左右，出口量位居世 界第二。因其价值高，需求量大，加之连年采挖，野生资源已近枯竭， 而薯叶块茎的生长周期需要3-5年，造成了目前皂素工业原料匮乏， 转产的41.7％，开工不足的50.6％，满负荷运转的只有7.8％。选取生 长周期短，性状稳定，高产，抗病的优良种苗是发展薯蓣种植的关键。 就目前薯蓣优良种源不足和种质退化等问题，利用生物技术繁殖薯蓣 植物，既可保存种质资源，又可快速繁殖优良种苗。现有技术中还未 有利用生物技术进行薯蓣植物繁殖的报道。
发明内容：本发明的目的在于提供一种盾叶薯蓣无菌高产克隆系 工厂化生产方法，该方法解决了因薯蓣茎结构特殊而导致生根困难的 问题，同时无性系后代保持与母本优良特性的高度一致性，并实现了 组培工厂化生产。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：
盾叶薯蓣无菌克隆系工厂化生产方法，包括盾叶薯蓣的初代培养、 生长培养、丛芽增殖培养、生根培养步骤，取盾叶薯蓣一年生植株的 幼嫩顶芽和腋芽，清洗后，在超菌台上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％ 升汞灭菌5-8min，最后用无菌水冲洗数次，切成带单个腋芽或顶芽的 小节，转于初代培养基即MS无激素+PH5.8，在光照强度1000LX，光 照时间12h/d，温度25±1℃中培养，把初代培养得到的无菌苗切成带 单个腋芽或顶芽的节后，转接入6-BA0.2mg/l+NAA0.01+PH5.8的MS培 养基中，然后转入激素配比是BA0.2+IAA0.1或NAA0.1的MS培养基中 进行丛芽增殖，再转入IAA0.5+NAA0.5的MS生根培养基中，待生根后 移栽。
与现有技术相比，本发明的优益效果在于：
1、本发明采用低龄材料和高龄材料作培养物，结果得出：低龄材 料的丛芽诱导率最高，增殖倍数达5倍，生根率100％，生长周期缩短 到30d。解决了因薯蓣茎结构特殊而导致生根困难的问题，同时无性 系后代保持与母本优良特性的高度一致性，并实现了组培工厂化生产。
2、本发明利用生物技术繁殖薯蓣植物，既保存了种质资源，又快 速繁殖了优良种苗。
具体实施方式：下面结合本发明的实施例来进一步说明本发明的 实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例l：
1.1材料：
1.1.1低龄材料：盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽。
1.1.2高龄材料：多年生盾叶薯蓣块茎上长出的幼嫩顶芽和腋芽。
1.2材料处理：用肥皂和自来水清洗外植体后，在超菌台上用75％酒 精浸泡30s，再用0.1％升汞灭菌5~8min，最后用无菌水冲洗数次，切 成带单个腋芽或顶芽的小节，转于初代培养基中。
1.3培养基：初代培养基为MS无激素+PH5.8。
1.4培养条件：光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃。
2、结果与讨论
2.1不同培养基对盾叶薯蓣在生长的影响
把初代培养得到的无菌苗切成带单个腋芽或顶芽的节后，分别转 接于表1的培养基中，各培养基的激素均为 6-BA0.2mg/l+NAA0.01+PH5.8。试验结果表明，MS培养基较适宜盾叶 薯蓣的生长；不同年龄的材料在同一种培养基中差异明显，低龄材料 生长快，自身的增殖能力强，苗的长势较好，而高龄材料在培养基中 的反应迟缓，增殖能力也较弱。
表1不同培养基对盾叶薯蓣生长的影响(接种60d的统计数) 材料 培养基种 类 接种芽数 (个) 芽增殖数量 (腋芽和顶芽) 芽增殖 倍数 评价 低龄材料 MS White B5 GS H 20 20 20 20 20 101 96 99 83 88 5.05 4.8 4.95 4.15 4.4 优 良 良 中 良 高龄材 料 MS White B5 GS H 20 20 20 20 20 53 42 47 33 40 2.65 2.1 2.35 1.65 2 良 中 中 差 中
2.2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣丛芽增殖的影响
试验结果(表2)表明，幼龄材料不论在诱导、增殖、生根、长 势上都比高龄材料效果好。最适合低龄材料的激素配比是 BA0.2+IAA0.1或NAA0.1，并有90％左右的增殖芽生根。随BA浓度的 增加，丛芽数量减少，愈伤组织增大，不定芽出现，这对母本优良特 性的保存不利。高龄材料诱导芽的数量与BA浓度成正比，BA浓度在 1mg/l以上产生愈伤组织，其形态与根茎相似，表面光滑，有少量芽 眼，无根。
表2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣丛芽增殖的影响(接种60d 的统计数) 材料 激素组合 接种芽 数 (个) 芽增殖数量 (腋芽和顶 芽) 芽增殖倍 数 愈伤组 织 带根率 评价 低龄材 料 BA0.2+IAA0.1 BA0.2+NAA0.1 BA0.5+IAA0.1 BA0.5+NAA0.1 BA1.0+IAA0.1 BA1.0+NAA0.1 BA2.0+IAA0.1 BA2.0+NAA0.1 100 100 100 100 100 100 100 100 520 493 345 250 12 8 0 0 5.2 4.93 3.45 2.5 0.12 0.08 0 0 - - + + ++ ++ +++ +++ 92％ 90％ 20％ 17％ 0 0 0 0 优 优 中 中 差 差 差 差 高龄材 料 BA0.2+IAA0.1 BA0.2+NAA0.1 BA0.5+IAA0.1 BA0.5+NAA0.1 BA1.0+IAA0.1 BA1.0+NAA0.1 BA2.0+IAA0.1 BA2.0+NAA0.1 100 100 100 100 100 100 100 100 139 117 256 245 280 257 320 285 1.39 1.17 2.56 2.45 2.8 2.57 3.2 2.85 - - - - + + ++ ++ 0 0 0 0 0 0 0 0 差 差 中 中 良 良 优 优
注：“-”愈伤组织；“+”愈伤组织0.10.5cm；“++”愈伤组织 0.51.0cm； “+++”愈伤组织1.0cm以上；
2.3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣生根的影响
试验(表3)表明，高龄材料生根率最高仅36％，不能满足生产上 对幼苗生产的要求。低龄材料生根容易，在盾叶薯蓣的组培文献中未见 报道，对种苗的规模化生产有实际应用价值。
表3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣生根的影响(接种30d 的统计数) 材料 激素组合 接种量 生根苗数 生根率 综合评价 低龄材料 (一年生植 株) IAA0.1 IAA0.5 IAA1.0 NAA0.1 NAA0.5 NAA1.0 IAA0.5+NAA0.5 100 100 100 100 100 100 100 74 82 80 57 76 83 92 74％ 82％ 80％ 57％ 76％ 83％ 92％ 优 优 良 中 良 良 优 高龄材料 (一年生植 株) IAA0.1 IAA0.5 IAA1.0 NAA0.1 NAA0.5 NAA1.0 IAA0.5+NAA0.5 100 100 100 100 100 100 100 12 14 17 3 7 16 36 12％ 14％ 17％ 3％ 7％ 16％ 36％ 差 差 差 差 差 差 中
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