技术领域
[0001] 本
发明属于医疗材料领域，具体涉及一种负载复合药物的
纳米材料及其制备方法。
背景技术
[0002] 随着我国人民生活
水平的不断提高以及人口老龄化的加剧，
冠状动脉粥样硬化性心脏病已经日益成为严重威胁人民生命健康的
疾病。冠状动脉
支架植入术(PCI)与冠状动脉旁路移植术(CABG)是目前
治疗冠心病的两大手段，但PCI和CABG术后血管
再狭窄的发生率高达15—60％，如今，局部
给药治疗血管再狭窄的方法主要有
药物洗脱支架(Dmg-eluting stenl，DES)和基于球囊
导管的药物传递系统。虽然已经有DES进入了临床应用，但是DES仍然存在一些有效性和安全性的问题。DES重要的
缺陷就是在支架撑杆上药物浓度最高，抗增殖药物可抑制内皮的愈合，而此部位的内皮愈合是最重要的。另一方面，支架边缘和撑杆之间的部位却不能完全抑制新生内膜的形成，从而影响了DES的疗效。此外，DES不能应用在小血管和分支血管的病变部位,也不适用于冠脉搭桥术。一些重要的安全问题也没有完全明确，如围术期血栓、晚期支架贴壁不良、形成
动脉瘤、边缘效应、用于结合药物所选用的
聚合物引起的晚期
炎症反应、释放毒素等。因此，有必要开发其它局部药物传递系统作为DES的补充。
[0003] 针对药物输送到没有被支架直接
覆盖的血管部位，特别是小血管和多支血管，有必要采用其它局部药物传递系统，以抑制血管内围术期的血管内血栓形成、术后短期(1年内)的内膜增厚以及远期的粥样硬化。
发明内容
[0004] 针对本领域存在的不足之处，本发明的目的在于提供一种载复合药物成分的纳米粒子。
[0005] 本发明的第二个目的是提出所述载复合药物成分的纳米粒子的制备方法。
[0006] 本发明的第三个目的是提出该载复合药物成分的纳米粒子的应用。
[0007] 实现本发明上述目的的技术方案为：
[0008] 一种载复合药物成分的纳米粒子，为阳离子
表面活性剂修饰的纳米粒子，所述纳米粒子负载有肝素、紫杉醇、氟伐他汀复合药物；所述阳离子表面活性剂为溴化双十二烷基二甲基铵(didodecyl dimethylammonium bromide，DMAB)。
[0009] 本发明还提出所述的载复合药物成分的纳米粒子的制备方法，包括步骤：
[0010] 1)肝素、紫杉醇和氟伐他汀溶解于水，制成复合药物溶液，
[0011] 2)向有机溶液中溶解聚乳酸-羟基乙酸共聚体(PLGA)，加入复合药物溶液，然后立即在
冰浴条件下超声分散，形成W1/O溶液，冷却得到初乳；
[0012] 3)初乳加入到聚乙烯醇水溶液中，在冰浴条件下超声分散，形成W1/O/w2复乳，[0013] 4)W1/O/w2复乳经过
溶剂挥发、离心分离、洗涤，获得
固化了的纳米粒子，[0014] 5)用阳离子表面活性剂配制成溶液，与步骤4)所得纳米粒子混合，充分混合后
冷冻干燥。
[0015] 本发明的一种优选技术方案为，步骤1)中肝素溶解于水的
质量浓度为10～30％、紫杉醇溶解于水的质量浓度为10～20％，氟伐他汀溶解于水的质量浓度为20～40％。
[0016] 其中，步骤2)所述有机溶液为二氯甲烷和丙
酮体积比1：1～2的混合溶液，其中聚乳酸-羟基乙酸共聚体质量浓度为30～70％，所述有机溶液中含有0.01～0.1％质量浓度的乳化剂，所述乳化剂为普流尼克F68。
[0017] 因为复合药物溶液加入到有机溶液之后要挥发除去
有机溶剂，对复合药物溶液：有机溶液体积比例不做限定。
[0018] 其中，步骤2)中，在冰浴条件下超声分散1～2min，再在2～5℃下静置，以获得稳定的初乳。
[0019] 其中，步骤3)中，初乳按照1：10～30的体积比加入到聚乙烯醇水溶液中，所述聚乙烯醇分子量为30000～70000，聚乙烯醇水溶液的质量浓度为0.2～5％，所述超声分散的时间为1～5min。
[0020] 其中，步骤4)中，W1/O/w2复乳经过常压在搅拌挥发10～15h，再减压挥发1～3h，以除去有机溶剂；所述减压挥发的表压为-0.1～-0.2MPa；所述离心分离的转速为15000～50000，离心时间为20～40min；所述洗涤是用蒸馏水洗涤。
[0021] 优选地，步骤5)中，所述阳离子表面活性剂与纳米粒子的质量比例为1～10：95；所述阳离子表面活性剂为溴化双十二烷基二甲基铵(didodecyl dimethylammonium bromide，DMAB)。
[0022] 其中，步骤5)中用阳离子表面活性剂的溶液，与纳米粒子混合后，超声处理60秒，经过0±2℃的预预冻和-30～-10℃冷冻干燥。
[0023] 本发明所述的载复合药物成分的纳米粒子在药物洗脱支架、药物渗透球囊、冠脉搭桥手术术中冠脉探条制备中的应用。
[0024] 与
现有技术相比，本发明具有以下主要优点：
[0025] 本发明采用载有肝素、紫杉醇、氟伐他汀的聚乳酸-羟基乙酸共聚体(PLGA)纳米微球，用物理
吸附法对纳米微球用阳离子表面活性剂溴化双十二烷基二甲基(didodecyl dimethylammonium bromide，DMAB)进行表面修饰，形成了新型血管内药物传递系统。增加了该药物传递系统吸附
力，增加其在血管内皮的驻留时间。
[0026] 根据血运重建后再狭窄的病理
基础，确定所载的药物，其中肝素针对围术期血栓形成，紫杉醇针对1年内的血管内膜增生，氟伐他汀针对远期粥样硬化，三种药物协同作用，可避免血栓形成、术后短期(1年内)的内膜增厚以及远期的粥样硬化等症状的发生。本系统可同时应用于药物渗透球囊，药物洗脱支架等系统，可以将药物输送到没有被支架直接覆盖的血管部位，特别是小血管和多支血管。
附图说明
[0027] 图1为本发明载复合药物成分的纳米粒子的制备工艺
流程图。
[0028] 图2为体外释放曲线。
具体实施方式
[0029] 下面结合具体
实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0030] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0031] 实施例1：
[0032] 用
物理吸附法对载有肝素、紫杉醇、氟伐他汀的纳米微球用阳离子表面活性剂溴化双十二烷基二甲基铵(didodecyldimethylammonium bromide，DMAB)进行修饰，增加其在血管内皮的驻留时间。具体制备方法为用复乳化-溶媒挥发法，制备流程见图1。
[0033] 1)制备复合药物溶液：肝素、紫杉醇、氟伐他汀溶解于蒸馏水中，三种药物的质量浓度为肝素20％、紫杉醇15％、氟伐他汀30％。
[0034] 2)用体积比1：1.5的二氯甲烷/丙酮有机溶液溶解适量聚乳酸-羟基乙酸共聚体(PLGA 50：50，特性
粘度1.13dl/g)，质量浓度50％，有机溶液中含有质量百分比为0.05％的普流尼克F68(Pluronic F68)作为乳化剂。将复合药物溶液：有机溶液按照1:1.5-1:2的比例加入到该有机溶液中，立即在冰浴条件下超声lmin，形成W1/O溶液。
[0035] 3)W1/O溶液在4℃条件下冷却，得到稳定初乳。初乳按照1：20的体积比加入到聚乙烯醇(PVA，分子量30000—70000)质量浓度1％的水溶液中，同样在冰浴条件下进行超声乳化2min，即形成W1/O/w2复乳。常压下搅拌挥发12h，再在表压-0.1Mpa条件下减压挥发2h，以除去有机溶剂。
[0036] 4)0℃低温、23000rpm下高速离心30min，收集固化的纳米粒子，再用蒸馏水洗涤、离心3次除去纳米粒子悬液的聚乙烯醇。-20℃冷冻干燥，完成纳米粒子制备。
[0037] 5)纳米粒子的表面修饰：称取5mg DMAB，加入10ml蒸馏水溶解，再加入95mg纳米粒子。在冰浴条件下超声处理60秒，使纳米粒均匀悬浮，经过0℃的预冻和-20℃冷冻干燥后即得5％DMAB修饰的载有复合药物的PLGA纳米粒子。
[0038] 对比例 未经修饰的PLGA载复合药物纳米粒子制备
[0039] 1)制备复合药物溶液：肝素、紫杉醇、氟伐他汀溶解于蒸馏水中，三种药物的质量浓度为肝素20％、紫杉醇15％、氟伐他汀30％。
[0040] 2)用体积比1：1.5的二氯甲烷/丙酮有机溶液溶解适量聚乳酸-羟基乙酸共聚体(PLGA，特性粘度1.13dl/g)，质量浓度50％，有机溶液中含有质量百分比为0.05％的普流尼克F68(Pluronic F68)作为乳化剂。将复合药物溶液加入到此有机溶液中，立即在冰浴条件下超声lmin，形成W1/O溶液。
[0041] 3)在4℃条件下冷却以稳定初乳。初乳按照1：20的体积比加入到聚乙烯醇(PVA，分子量30000—70000)质量浓度1％的水溶液中，同样在冰浴条件下进行超声乳化2min，即形成W1/O/w2复乳。常压下搅拌挥发12h，再减压挥发2h，以除去有机溶剂。
[0042] 4)0℃低温、23000rpm下高速离心30min，收集固化的纳米粒子，再用蒸馏水洗涤、离心3次除去纳米粒子悬液的聚乙烯醇。冷冻干燥，完成纳米粒子制备。
[0043] 缓释释放实验：
[0044] 采用lmol/L水杨酸钠水溶液分散实施例1的纳米粒子，检测到纳米粒子在该溶液中平均粒径为109.7纳米，比在蒸馏水中的平均粒径(100.64)略有增大，但并不明显，证明了纳米粒在该释放介质中不会聚集，具有一定的
稳定性。
[0045] 体外缓释释放实验以氟伐他汀释放率作为评价标准，其中实验组采用PLGA+DMAB修饰的新型载复合药物纳米粒子，对照组采用未经修饰的PLGA载复合药物纳米粒子。结果见图2。
[0046] 体外释放曲线呈两相特征，可见实验组药物释放率高峰提前，于5天后药物浓度即达到稳定，优于对照组。
[0047] 以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的
权利要求书确定的保护范围内。
