一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeScEy01及应用
阅读：405发布：2020-05-13
专利汇可以提供一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeScEy01及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一株酿酒 酵母 Saccharomyces cerevisiae ScEy01及应用。该菌株于2019年6月14日保藏于广东省 微 生物 菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC No.60692。本发明筛选出的菌株 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ScEy01来源于豉香型白酒酿酒用曲中，具有高产酯的性能，经检测，该酿酒酵母产酯量可达到0.48g/L，产总酯含量高，有利于该菌株在豉香型白酒及其他香型白酒 酿造 中的应用。另外，本发明通过对该菌株 发酵 特性的研究，优化了培养基成分及培养条件，提高了该菌总酯的产量。，下面是一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeScEy01及应用专利的具体信息内容。
1.一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01，其特征在于，所述菌株于2019年
6月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC No.60692。
2.根据权利要求1所述酿酒酵母ScEy01，其特征在于，所述菌株的ITS序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述酿酒酵母ScEy01，其特征在于，所述菌株在麦芽汁培养基形成的菌落凸起，黄色表面光滑有光泽、圆形，边缘整齐光滑，粘稠、易被挑起。
4.权利要求1～3任一所述酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01在制备总酯中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，利用大米糖化液培养基制备总酯。
6.一种总酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将权利要求1～3任一所述酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01接入液体种子活化培养基活化得一级种子活化液；
S2：将一级种子活化液接入到液体种子活化培养基中活化得二级种子活化液；
S3：将二级种子液接入到大米糖化液培养基，发酵即得总酯。
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，S1和S2中所述液体种子活化培养基通过如下方法制备得到：将大米煮熟，加入沸水，加入α-淀粉酶液化，冷却后加入糖化酶，糖化，过滤，离心，取上清液，调节糖度，灭菌即得。
8.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，S1中的活化条件为：于27～30℃，140～
160r/min的条件下活化16～24h；S2中的活化条件为：于27～30℃，140～160r/min的条件下活化16～24h。
9.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，S3中大米糖化液培养基通过如下方法制备得到：将大米煮熟，加入沸水，加入α-淀粉酶液化，待其冷却后至再加入糖化酶糖化，过滤，再离心，取上清液，调节糖度和pH，灭菌即得。
10.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，S3中发酵的条件为：以6％的接入量，在糖度为18Bx°，初始pH为6，培养温度为28℃，转速为250r/min，装液量为100mL，发酵4d。
一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01及应用
技术领域
背景技术
[0002] 酯类物质是白酒、黄酒等发酵食品中风味物质的主要组成部分，是评判产品质量的重要指标。酯类应用于清、浓、老白干、特香、豉香等香型的白酒生产中，使白酒赋予水果香味，使酒体丰满，醇和。酯类在发酵食品中主要来源于白酒发酵过程微生物的作用，包括酯化反应和生化反应，酯化反应是白酒中存在大量的乙醇和其他的醇类物质，与微生物产生的有机酸会进行酯化进而生成酯类物质。生化反应是发酵过程中的微生物产生的酯酶，催化白酒中的乙酰辅酶A与醇类物质反应生成酯类物质和辅酶A。由此看来，筛选出产酯性能强的微生物是提高酒体中酯类含量的有效途径。
[0003] 在白酒发酵过程中酵母发挥着重要的作用，酿酒酵母做为白酒发酵过程中的主体发酵微生物，希望其能够在产乙醇的同时大量产生酯类物质，以提高白酒整体的口感与风味。因此能否筛选出高产酯的酵母是提高酒体风味及品质的关键之一。
[0004] 豉香型白酒由于特殊的发酵工艺，其酿造过程中重要风味物质酯类的含量较清香型、酱香型等低，导致酒体较淡薄。因此，筛选出一种适用于用于豉香型白酒发酵工艺的酵母来提高其酿造过程中重要风味物质酯类的含量具有重要的研究意义和经济价值。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术中豉香型白酒的酿造过程中重要风味物质酯类的含量较低，酒体较淡薄的缺陷或不足，提高株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01。本发明筛选出的菌株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01来源于豉香型白酒酿酒用曲中，具有高产酯的性能，经检测，该酿酒酵母产酯量可达到0.48g/L，产总酯含量高，有利于该菌株在豉香型白酒及其他香型白酒酿造中的应用。
[0006] 本发明的另一目的在于提供上述酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01 在制备总酯中的应用。
[0007] 本发明的另一目的在于提供一种总酯的制备方法。
[0008] 为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
[0009] 一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01，所述菌株于2019年6月14 日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市越秀区先烈路 100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC No.60692。
[0010] 发明人从广东省佛山市九江酒厂酒曲中分离得到一株高产酯的酿酒酿酒酵母株，命名为Saccharomyces cerevisiae ScEy01，简称为ScEy01。经初步鉴定其为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，该菌株已于2019年6月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市越秀区先烈路100号大院 59号楼5楼，保藏号为GDMCC No.60692。
[0011] 所述菌株的ITS序列如SEQ ID NO：1所示。
[0012] 具体如下：
[0013] GGCTAGACTTATATTTTGAAATGGATTTTTTTTGTTTTGGCAAGAGCATGAG AGCTTTTACTGGGCAAGAAGACAAGAGATGGAGAGTCCAGCCGGGCCTGC GCTTAAGTGCGCGGTCTTGCTAGGCTTGTAAGTTTCTTTCTTGCTATTCCAA ACGGTGAGAGATTTCTGTGCTTTTGTTATAGGACAATTAAAACCGTTTCAAT ACAACACACTGTGGAGTTTTCATATCTTTGCAACTTTTTCTTTTGGGCATTC GAGCAATCGGGGCCCAGAGGTAACAAACACAAACAATTTTATTTATTCATT AAATTTTTGTCAAAAAACAAGAATTTTCGTAACTGGAAATTTTAAAATATTA AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGC GAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTT GAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGT CATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTA ACTTGAAATTGCTGGCCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTTTTCCAAAGAGAGG TTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGTCGTTTTAGGTTTTACC AACTGCGGCTAATCTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGA AGAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCA。
[0014] 本发明提供的菌株ScEy01菌落特征和生化特征如下：该菌株在麦芽汁培养基上菌落凸起，黄色表面光滑有光泽、圆形，中间凸起，边缘整齐光滑，粘稠、易被挑起。显微结构为圆形，一端出芽，无菌丝体。
[0015] 该菌株主要用于微生物发酵产酯，产酯量可达0.48g/L，可以做为提高豉香型白酒等发酵食品中总酯含量的功能微生物菌株应用到生产中。
[0016] 上述酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01在制备总酯中的应用也在本发明的保护范围内。
[0017] 本发明提供的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01的产酯量可达到 0.48g/L，产总酯含量高，有利于该菌株在豉香型白酒及其他香型白酒酿造中的应用。
[0018] 本发明在此也提供一种总酯的制备方法，包括如下步骤：
[0020] S2：将一级种子活化液接入到液体种子活化培养基中活化得二级种子活化液；
[0021] S3：将二级种子液接入到大米糖化液培养基，发酵即得总酯。
[0023] 具体地，按煮熟大米和沸水的体积比为1:3加入沸水，加入α-淀粉酶于90℃液化1h，待其冷却至60℃再加入糖化酶，糖化2h，糖化后过滤，离心，取上清液，调节糖度至
12Bx°，灭菌即得。
12Bx°，灭菌即得。
[0024] 优选地，S1中的活化条件为：于27～30℃，140～60r/min的条件下活化16～24 h。
[0025] 具体地，S1中的活化条件为：在28℃、150r/min的条件下活化24h。
[0026] 优选地，S2中所述液体种子活化培养基通过如下方法制备得到：将大米煮熟，加入沸水，加入α-淀粉酶液化，冷却后加入糖化酶，糖化，过滤，离心，取上清液，调节糖度，灭菌即得。
[0027] 具体地，按煮熟大米和沸水的体积比为1:3加入沸水，加入α-淀粉酶于90℃液化1h，待其冷却至60℃再加入糖化酶，糖化2h，糖化后过滤，离心，取上清液，调节糖度至
12Bx°，灭菌即得。
12Bx°，灭菌即得。
[0028] 优选地，S2中的活化条件为：于27～30℃，140～160r/min的条件下活化16～24 h。
[0029] 具体地，S2中的活化条件为：以1％的接种量取混匀的一级种子液接入到液体种子活化培养基中，在28℃、150r/min的条件下活化24h。
[0030] 优选地，S3中大米糖化液培养基通过如下方法制备得到：将大米煮熟，加入沸水，加入α-淀粉酶液化冷却后再加入糖化酶，糖化，过滤，离心，取上清液，调节糖度和pH，灭菌即得。
[0031] 具体地，S3中大米糖化液培养基通过如下方法制备得到：将大米煮熟，按煮熟大米和沸水的体积比为1:3加入沸水，加入α-淀粉酶于90℃液化1h，待其冷却至60℃再加入糖化酶，糖化2h，糖化后过滤，再离心，取上清液，调节糖度至18Bx°，pH为6，灭菌即得。
[0032] 优选地，S3中发酵的条件为：S3中发酵的条件为：以2～6％的接入量，在糖度为6～18Bx°，初始pH为3～7，培养温度为22～34℃，转速为150～250r/min，装液量为50～150mL，发酵至少3d。
[0033] 更为优选地，S3中发酵的条件为：以6％的接入量，在糖度为18Bx°，初始 pH为6，培养温度为28℃，转速为250r/min，装液量为100mL，发酵4d。
[0034] 该条件下菌株的产总酯量可达0.48g/L。
[0035] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0036] 本发明筛选出的菌株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01来源于豉香型白酒酿酒用曲中，具有高产酯的性能，经检测，该酿酒酵母产酯量可达到0.48 g/L，产总酯含量高，有利于该菌株在豉香型白酒及其他香型白酒酿造中的应用。另外，本发明通过对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01发酵特性的研究，优化了培养基成分及培养条件，提高了该菌总酯的产量。附图说明
[0037] 图1是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株在麦芽汁培养基上的菌落形态图片；
[0038] 图2是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的细胞形态照片(放大40倍)；
[0039] 图3是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的细胞形态照片(放大100倍)；
[0040] 图4是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的系统进化发育树；
[0041] 图5是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的生长曲线；
[0042] 图6是培养方式对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响；
[0043] 图7是装液量对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响；
[0044] 图8是接种量对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响；
[0045] 图9是大米糖化液糖度对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响；
[0046] 图10是培养时间对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响；
[0047] 图11是培养温度对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01的影响；
[0048] 图12是大米糖化液初始pH对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产酯的影响。
具体实施方式
[0049] 下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
[0050] 麦芽汁培养基：购自广东省环凯微生物科技有限公司。
[0051] 麦芽汁琼脂培养基：于麦芽汁培养基中加入琼脂20g/L。
[0052] 实施例中所述酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株已于2019年6 月14日保藏在广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.60692。地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼。
[0053] 实施例1酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的分离
[0054] 准确称取豉香型白酒酒曲25g加入225mL的无菌水中，在150r/min摇床中振摇20min，取出，静止5min，在无菌操作条件下，用移液枪吸取上清液1mL 于9mL无菌水的试管中，反复吸打均匀，依次制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、 10-6、10-7、10-8菌悬液。从10-5、10-6、
10-7、10-8菌悬中，分别取100μL，涂布在麦芽汁琼脂培养基平板上。每个浓度梯度做三个平行，倒置在28℃的培养箱中培养48h，之后观察菌落形态，挑取疑似酿酒酵母株的单菌落，在麦芽汁琼脂培养基上进行平板划线纯化再继续培养，直至出现单一菌落且显微镜镜检下观察菌体形态一致为止。
10-7、10-8菌悬中，分别取100μL，涂布在麦芽汁琼脂培养基平板上。每个浓度梯度做三个平行，倒置在28℃的培养箱中培养48h，之后观察菌落形态，挑取疑似酿酒酵母株的单菌落，在麦芽汁琼脂培养基上进行平板划线纯化再继续培养，直至出现单一菌落且显微镜镜检下观察菌体形态一致为止。
[0055] 实施例2酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的筛选
[0056] 将实施例1中筛选出来的菌株接种在糖度为12Bx°大米糖化液中，在28℃静置培养5d，测定其发酵后总酯含量，最终筛选出产总酯量最高的菌株，即为酿酒酵母
Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株。
Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株。
[0057] 测产总酯量：取所有发酵液于500mL的蒸馏器中，加入100mL蒸馏水，混匀，蒸馏出100mL的馏出液，取50mL，把馏出液倒入250mL的回流瓶中，再滴入两滴酚酞指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至粉红色，记录消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的体积，再加入25mL的氢氧化钠标准滴定溶液，摇匀并放入几颗沸石，装上冷凝管，放入沸水中回流30min，待冷却，再用硫酸标准滴定溶液滴定使粉红色刚好消失，记录消耗的硫酸标准滴定溶液体积，每株菌做三次平行试验。同时用40％的无酯乙醇溶液做空白试验，记录消耗的硫酸标准滴定溶液的体积。
[0058] 结果计算：
[0059] 样品中的总酯含量按式计算。
[0060]
[0061] 式中：
[0062] x——样品中总酯的质量浓度(以乙酸乙酯计)，单位为g/L；
[0063] c——硫酸标准滴定溶液的实际浓度，单位为mol/L；
[0064] V0——空白试验样品消耗硫酸标准滴定溶液的体积，单位为mL；
[0065] V1——样品消耗硫酸标准滴定溶液的体积，单位为mL；
[0066] 88——乙酸乙酯的摩尔质量的数值，单位为g/mol；
[0067] 50.0——吸取样品的体积，单位为mL。
[0068] 实施例3酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的保存
[0069] 上述所获得的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的通过以下方法进行保存：
[0071] (2)甘油管保存：将纯化后的菌种挑取一环接至麦芽汁培养基中，于培养箱28℃培养48h后，将菌液用移液枪吸打混匀分装至2mL无菌冻存管中，并以无菌甘油液封，于4℃下保存。
[0072] 实施例4酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的鉴定
[0073] 上述所涉及的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的的鉴定包括以下步骤：
[0074] 步骤1：形态学特征
[0075] 为鉴定上述所涉及酿酒酵母株，对其进行以下形态学特征观察：
[0076] 麦芽汁培养基菌落形态和细胞观察：将实施例2中所获得的菌株纯培养体接种于麦芽汁琼脂培养基上，于72h后观察其形态特征(图1)，由图可以看出，菌落凸起，黄色表面光滑有光泽、圆形，边缘整齐光滑，粘稠、易被挑起。将其在光学显微镜下放大40倍和100倍后观察，结果如图2、图3，菌体呈现圆形，芽殖。
[0077] 步骤2：分子生物学测定
[0078] 为鉴定上述所涉及酿酒酵母株，对其进行的分子生物学测定包括以下步骤：
[0079] (1)菌体培养
[0080] 上述涉及酵母是按照以下步骤进行培养：将实施例2中酿酒酵母株在麦芽汁琼脂培养基中进行活化，在28℃条件下培养24h后，在麦芽汁琼脂固体培养基划线培养。
[0081] (2)PCR扩增
[0083]
[0084] 本发明为鉴定所用的扩增引物为ITS区1和2序列的扩增引物，由以下引物组成：正向引物：ITS1：5，-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3，；反向引物：ITS4:5，-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3，。
[0085] 上述所涉及酿酒酵母株鉴定的PCR条件包括以下：
[0086] PCR反应体系：DNA 0.5μL、10×Buffer 2.5μL、dNTP 1μL、酶0.2μL、正反引物各1μL、ddH2O补至25μL。
[0087] PCR扩增程序：94℃预变性4min、94℃变性45s、55℃退火45s、72℃延伸1min，共30个循环，72℃修复延伸10min；
[0088] PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检验。
[0089] (3)序列测定及系统发育树的构建
[0090] 将上述酿酒酿酒酵母株送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序，得到菌株PCR扩增的序列，在NCBI核酸序列数据库中进行同源序列搜索(BLAST search)，与其它多株酿酒酵母进行比对，结果有99％的相似性；为进一步显示供试菌株与已知酿酒酵母的亲缘关系及系统地位，根据同源性搜索结果，使用 DNAMAN 8.0生物学软件对测试菌株和相关菌株的多个序列进行比对分析及构建系统发育树；所构建的系统发育树如图4(Saccharomyces cerevisiae代表酿酒酵母；Saccharomyces kudriavzevii代表库德里亚夫酵母；Saccharomyces pastorianus代表巴斯德酵母；Saccharomyces bayanus代表贝酵母)所示，将该菌鉴定为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
[0091] 具体的，其ITS序列为：
[0092] GGCTAGACTTATATTTTGAAATGGATTTTTTTTGTTTTGGCAAGAGCATGAG AGCTTTTACTGGGCAAGAAGACAAGAGATGGAGAGTCCAGCCGGGCCTGC GCTTAAGTGCGCGGTCTTGCTAGGCTTGTAAGTTTCTTTCTTGCTATTCCAA ACGGTGAGAGATTTCTGTGCTTTTGTTATAGGACAATTAAAACCGTTTCAAT ACAACACACTGTGGAGTTTTCATATCTTTGCAACTTTTTCTTTTGGGCATTC GAGCAATCGGGGCCCAGAGGTAACAAACACAAACAATTTTATTTATTCATT AAATTTTTGTCAAAAAACAAGAATTTTCGTAACTGGAAATTTTAAAATATTA AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGC GAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTT GAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGT CATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTA ACTTGAAATTGCTGGCCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTTTTCCAAAGAGAGG TTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGTCGTTTTAGGTTTTACC AACTGCGGCTAATCTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGA AGAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCA。
[0093] 该酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株已于2019年6月14日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60692。
[0094] 实施例5酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的生长曲线
[0095] 本实施例按照如下步骤得到酿酒酵母ScEy01生长曲线。
[0096] 步骤1从斜面上挑取1环酿酒酵母ScEy01，接种于灭菌、冷却的麦芽汁培养基中28℃活化24h，得一级种子液；
[0097] 步骤2取步骤1中得1％活化一级种子液接种于灭菌、冷却的麦芽汁培养基中28℃活化24h，得二级种子液；
[0098] 步骤3取11个100mL的锥形瓶，分别装入25mL麦芽汁培养基，八层纱布加一层牛皮纸封口，放入灭菌锅中灭菌20min，待冷却后在超净工作台里用移液枪将步骤2中0.1mL酿酒酵母ScEy01二级种子液接种到上述锥形瓶中，震荡摇匀，并且编号贴标签，其中一个没接种菌液的注为CK，另外10个锥形瓶从 0-72h，每隔8h分别标明一个培养时间。故11个锥形瓶编号分别为CK、0、8、 16、24、32、40、48、56、64、72h。将标签为0的锥形瓶拿出，然后放入4℃冰箱储存。加入未接种的CK样品于1cm比色皿调零然后将其余已接种的锥形瓶置于150r/min、28℃震荡培养，每隔8h拿出一瓶，测定该瓶中的菌悬液的 OD600值，每个条件做三组平行，记录数据。并以横坐标为时间，纵坐标为OD600值，绘制酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01的生长曲线，如图5所示。
[0099] 实施例6培养方式对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0100] 本实施例探究培养方式对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株ScEy01产总酯量的影响，具体过程如下。
[0101] 酿酒酵母株ScEy01最适产酯摇床转速，将活化的二级种子液以2％接种于糖度为12Bx°，pH为6的大米糖化液培养基中，分别置于0(静置)、50、100、 150、200r/min的条件下
28℃培养5d，测定发酵后的总酯含量，结果如图6所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的培养方式为200r/min。
28℃培养5d，测定发酵后的总酯含量，结果如图6所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的培养方式为200r/min。
[0102] 实施例7装液量对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0103] 本实施例探究装液量对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株ScEy01产总酯量的影响，具体过程如下。
[0104] 将活化的二级种子液以2％的接种量接入到装液量分别为50、75、100、 125、150mL且糖度为12Bx°，pH为6，大米糖化液的250mL锥形瓶中，于28℃培养箱中静置培养5d，测发酵液的总酯含量，结果如图6所示，由图可以看出该菌株最适产酯的装液量是125mL。
[0105] 实施例8接种量对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0106] 本实施例探究酿酒酵母株ScEy01最适产酯接种量，具体过程如下。
[0107] 将活化的二级种子液以2％、3％、4％、5％、6％的接种量接入到糖度为12Bx°， pH为6的大米糖化液中，装液量为40％，于28℃培养5d，测发酵液的总酯含量，结果如图7所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的接种量是5％。
[0108] 实施例9大米糖化液初始糖度对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0109] 本实施例探究酿酒酵母株ScEy01最适产酯的大米糖化液的初始糖度，具体过程如下。
[0110] 将活化的二级种子液以2％的接种量接入到装液量40％，初始糖度为6、9、 12、15、18Bx°的大米糖化液中，于28℃培养5d后，测其发酵液的总酯含量，结果如图8所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的大米糖化液培养基初始糖度为18Bx°。
[0111] 实施例10培养时间对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0112] 本实施例探究酿酒酵母株ScEy01最适产酯的大米糖化液的培养时间，具体过程如下。
[0113] 将活化的二级种子液以2％的接种量接入到装液量40％，初始糖度为12Bx°的大米糖化液中静置于28℃的培养箱中培养3、4、5、6、7d，测其发酵液的总酯含量，结果如图9所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的培养时间为4d。
[0114] 实施例11培养温度对酿酒酿酒酵母株Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0115] 本实施例探究酿酒酵母株ScEy01最适产酯的培养温度，具体过程如下。
[0116] 将活化的二级种子液以2％的接种量接入到装液量，初始糖度为12Bx°的大米糖化液中于22、25、28、31、34℃的培养箱静置培养5d，测其发酵液的总酯含量，结果如图10所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的培养温度为28℃。
[0117] 实施例12初始pH对酿酒酿酒酵母株Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯量的影响
[0118] 本实施例探究酿酒酵母株ScEy01最适产酯的pH，具体过程如下。
[0119] 将活化的种子液以2％的接种量接入到pH为3、4、5、6、7，初始糖度为 12Bx°的大米糖化液中于28℃静置培养5d，测其发酵液总酯含量，结果如图11 所示，由图可以看出本发明所涉及菌株最适产酯的pH为6。
[0120] 实施例13正交实验
[0121] 根据上述各实施例得到的结果，对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01 菌株产酯量的影响进行正交试验，试验条件及结果如表1、表2。由表可知，在大米糖化液培养基：糖度为18Bx°、pH为6、培养温度28℃、发酵时间4d、转速250r/min、接种量为6％、装液量100mL时该菌株的产总酯量可达0.48g/L。
[0122] 表1正交实验测试条件及结果
[0123]
[0124]
[0125] 表2正交设计方差分析表
[0126]
[0127] 对影响酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株发酵的转速、装液量、接种量进行正交试验，对正交试验结果进行极差分析与方差分析所示，影响酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株产总酯因素的主次为：转速＞装液量＞接种量，最佳产总酯组合为A3B1C1，与实际试验过程中最佳产酯条件A3B1C3不符，因此进行验证试验，结果显示，A3B1C1条件下酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株的产总酯量为
0.15g/L，综上所述，酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株在A3B1C3的发酵条件下总酯的生成量最高为0.48g/L。
0.15g/L，综上所述，酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae ScEy01菌株在A3B1C3的发酵条件下总酯的生成量最高为0.48g/L。
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