一株酿酒酵母及其应用
阅读：516发布：2020-05-11
专利汇可以提供一株酿酒酵母及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一株酿酒 酵母 及其应用，属于 发酵 技术领域。所述 酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)已于2014年12月1日保藏于中国 微 生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10124。将该菌株应用于格瓦斯传统发酵生产过程，具有缩短传统发酵格瓦斯周期、耐酸性良好可与乳酸菌共同发酵的特点。，下面是一株酿酒酵母及其应用专利的具体信息内容。
一株酿酒酵母及其应用
技术领域
背景技术
[0002] 酵母(Yeast)是一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，是一种天然发酵剂，分布于整个自然界，它有自己的生命现象，是一种典型的兼性厌氧微生物，在有氧气和没有氧气存在的条件下都能够存活。多数酵母可以分离于富含糖类的环境中，比如一些水果(葡萄、苹果、桃等)或者植物分泌物(如仙人掌的汁)。一些酵母在昆虫体内生活。酵母菌是单细胞真核微生物，形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1～5微米或5～20微米，无鞭毛，不能游动。
[0003] 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)在分类学上属于真核生物原界、真菌界、子囊菌门、酵母亚门、半子囊菌纲、酵母目、酵母科、酵母属。酿酒酵母菌落呈圆形，有光泽，平坦，边缘整齐，在麦芽汁中培养细胞呈小圆形或卵圆形。适宜生长温度为28℃～30℃，最适pH值为4～5。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，不仅因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒，在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5–10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。
[0004] 格瓦斯，又叫卡瓦斯、克瓦斯，产自俄罗斯，翻译为中文是“用面包发酵的饮料”，是一种谷物发酵饮料。它是以谷物、山花蜜、浆果、糖等天然物质为原料，经多种微生物发酵而成的低醇饮品。其口感醇香微甜，具有开胃、健脾之功效，还能降血压、消除疲劳。格瓦斯因其悠久的历史和香醇的口感，与德国啤酒、美国可乐、保加利亚布扎一起被誉为世界四大民族饮品。本发明涉及的酿酒酵母从格瓦斯的传统发酵中筛选，酿酒酵母是格瓦斯发酵过程中的有益酵母，赋予格瓦斯独特的醇香口味和微量的酒精度。筛选传统发酵过程中的酿酒酵母，为阐述格瓦斯风味形成机制奠定一定的基础。
发明内容
[0005] 本发明提供了一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，已于2014年12月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10124，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0006] 本发明所述的酿酒酵母，分离自新疆某种以传统方法发酵的格瓦斯，该菌株具有典型特征的GTG-PCR指纹；其ITS序列经在NCBI网站上进行比对，表明该菌与一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae有最高匹配度，为99％。
[0007] 本发明还提供了一种应用所述酿酒酵母发酵格瓦斯的方法，将培养良好的酿酒酵母在卡瓦斯传统发酵过程的前期发酵中加入，可缩短传统发酵格瓦斯发酵周期。
[0008] 所述酿酒酵母的保藏方法如下：从生长良好的YEPD培养基平板中取单菌落移入新鲜的液体YEPD培养基中，28℃摇床培养24h，取0.9mL移入盛有0.9mL无菌甘油(35％，v/v)的甘油管中，放-70℃冰箱保存。
[0009] 所述YEPD培养基为：蛋白胨20g·L-1，酵母粉10g·L-1，葡萄糖20g·L-1，pH自然。
[0010] 本发明提供的酿酒酵母具有耐酸性，在pH为3的条件下生长良好，可以和乳酸菌共同发酵，得到风味良好的格瓦斯成品。应用于传统发酵格瓦斯，能够缩短60h的发酵时间。同时，赋予格瓦斯独特的醇香口感和微量的酒精度。
[0011] 生物材料保藏
[0012] 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，已于2014年12月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10124，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。附图说明
[0013] 图1 Rep-PCR(GTG-PCR)扩增指纹图谱，M:10kb Marker，1:样品。
[0014] 图2酿酒酵母CGMCC No.10124生长曲线及pH为3的趋势线
[0015] 图3酿酒酵母G03生长曲线及pH为3的趋势线
[0016] 图4酿酒酵母扫描电镜图，A、B：Mag 5000x，C、D：Mag 10000x。
具体实施方式
[0017] 实施例1酿酒酵母筛选及鉴定
[0018] 从传统发酵格瓦斯中取1ml样品，梯度稀释到10-5，涂布于YEPD平板，28℃培养5天。挑取乳白色单菌落反复进行平板划线分离，重复三次得到纯化的单菌落，供下一步鉴定用。
[0019] 所述YEPD培养基为：蛋白胨20g·L-1，酵母粉10g·L-1，葡萄糖20g·L-1，pH自然。灭菌条件：115℃，15min。待冷却至45℃左右加入制霉菌素，添加量为50μg/ml。
[0020] 鉴定主要通过：1)菌落特征观察：用肉眼直接观察，挑选菌落直径在2.0mm左右，圆形，表面光滑，乳白色等符合酵母菌菌落特征的菌株。2)个体形态观察：用光学显微镜观察，挑选卵圆形，大小(1-5)μm×(5-30)μm，视野中有明显出芽细胞的菌株。将满足鉴定条件的菌株挑出甘油管保藏。
[0021] 以2％接种量取-70℃甘油贮存液接种于YEPD培养基中，28℃、150转/分钟培养24h。取适量培养液离心1min(12000rpm，4℃)，弃尽上清液，得到适量菌体，用酵母基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。用酵母ITS序列通用引物对扩增基因组DNA，反应条件为：94℃预变性5min后进入以下循环：94℃变性45s，55℃退火40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果良好。将扩增产物寄送生工基因测序，在NCBI网站上进行BLAST序列比对，确定为酿酒酵母。该菌株具有典型特征的GTG-PCR指纹，即菌株专一性的特征指纹，如图1所示；测序分析，其ITS序列(基因间隔序列)基因型如SEQ ID NO.1所示，在NCBI网站上进行比对的结果是，该菌与一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae(序列ID:emb|LK021686.1)有最高匹配度，为99％。
[0023] 将甘油管保藏的酿酒酵母接入YEPD液体培养基，在28℃、150rpm摇瓶培养36h，达到菌种活化的目的。
[0024] 制备麦汁液体培养基，取少量菌液至10ml麦汁培养基中，28℃静置培养36h；从其中取1ml菌液，接种至10ml麦汁培养基中，25℃静置培养36h；从其中取1ml菌液，接种至100ml麦汁培养基中，23℃静置培养48h，得到种子液。用于格瓦斯的接种发酵。
[0025] 实施例3酿酒酵母在格瓦斯发酵中的应用效果
[0026] 按照传统格瓦斯的发酵工艺，用本发明筛选的酿酒酵母进行格瓦斯的发酵，大体流程如下：
[0029] pH：3.36
[0030] 总酸含量：0.2025g/100mL
[0031] 总糖含量：2.875g/L
[0032] 总氮含量：7.135mgN/100mL
[0033] 经感官品评分析，其风味、口感均达到优质格瓦斯饮品的标准，而且，相比于目前常用的酿酒酵母，本发明筛选的酵母能够有效地促进格瓦斯发酵，缩短60h的发酵周期。
[0034] 实施例4酿酒酵母耐酸性实验-测生长曲线
[0035] 酿酒酵母耐酸性实验所使用的培养基为不同pH值的YEPD培养基。YEPD培养基为：蛋白胨2g/L，酵母粉1g/L，葡萄糖2g/L，pH值梯度分别为3、4、5、6、7。115℃灭菌15分钟。
[0036] 将常用酿酒酵母工业菌株G03作为对照，以1％接种量取-70℃甘油贮存液接种于YEPD培养基中，28℃，150转/分钟培养36h。以1％接种量转接至不同pH值的YEPD培养基中，28℃，150转/分钟。测生长曲线，每2h取样，紫外分光光度计测两株酵母培养液的OD560nm值，共24h取样12次。通过对比，可知两株酿酒酵母的生长特性。
[0037] 由图2可知，酿酒酵母CGMCC No.10124在低pH值(pH为3)下，生长良好(在第4h即进入对数生长期)；与图3对比可知，酿酒酵母CGMCC No.10124在酸性培养条件下，生长趋势明显优于常用酿酒酵母G03。从而可知，本发明提供的酿酒酵母耐酸性良好。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 酿酒酵母及酿酒酵母制备琥珀酸的方法 | 2020-05-12 | 434 |
| 酿酒酵母及其用途 | 2020-05-12 | 697 |
| 酿酒酵母及酿酒酵母生产氨基葡萄糖的方法 | 2020-05-12 | 322 |
| 一株酿酒酵母及其应用 | 2020-05-11 | 785 |
| 一种酿酒酵母及其应用 | 2020-05-12 | 607 |
| 酿酒酵母及酿酒酵母制备琥珀酸的方法 | 2020-05-12 | 514 |
| 一株酿酒酵母及其应用 | 2020-05-11 | 115 |
| 新型酿酒酵母菌株 | 2020-05-11 | 703 |
| 基于酿酒酵母发酵生产根皮素的工艺及酿酒酵母 | 2020-05-13 | 269 |
| 一种酿酒酵母菌菌株 | 2020-05-11 | 301 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈