专利汇可以提供一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,该方法具体步骤如下:取胚胎干细胞接种在小鼠胚胎 成 纤维 细胞 培养层上;胚胎干细胞的常规培养;胚胎干细胞预诱导形成胚 胎体 ;胚胎干细胞定向分化形成造血干细胞;将消化后的干细胞加入至脱核诱导培养基重悬细胞,接种于培养皿中,培养20d后得到定向分化的红细胞。本发明通过在胚胎干细胞向造血干细胞定向转化过程中加入干细胞因子(SCF),采用分阶诱导的方式促使细胞分化,诱导使用的干细胞来源于胚胎干细胞,易于体外扩增,取材方便,提供了一种经济安全,行之有效的新的红细胞来源。,下面是一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法专利的具体信息内容。
1.一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于,该方法具体步骤如下:
S1、取胚胎干细胞接种在小鼠胚胎成纤维细胞培养层上;
S2、胚胎干细胞的常规培养;
S3、胚胎干细胞预诱导形成胚胎体;
S4、胚胎干细胞定向分化形成造血干细胞;
S5、将消化后的干细胞加入至脱核诱导培养基重悬细胞,接种于培养皿中,培养20d后得到定向分化的红细胞。
2.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于:
所述S1中培养液成分为,85%DMEM培养基中加入15%Knockout Serum Replacement、4ng/mL bFGF、1-1.5mmol谷氨酰胺、0.1-0.15mol/Lβ-巯基乙醇、1mmol/L非必需氨基酸、50μg/mL链霉素、50μg/mL青霉素。
3.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于:
所述S2中的具体步骤为,将S1中的培养基置于37℃,5%CO2培养箱中培养,每天更换培养液,细胞培养至汇合状态后,37℃条件下加入1mg/ml胶原酶Ⅳ进行消化传代,接种于新的饲养层细胞上,传代比例1:5-6。
4.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于:
所述S3中的具体步骤为,将S2中的胚胎干细胞继续培养5-6d后取上清液,离心去细胞碎片,上清液过0.22μm滤膜,过滤后接种于含15%FCS,0.9%甲基纤维素的IMDM液中,并加入30-
50ng/mL SCF,置于六孔培养板上悬浮3-4d形成胚胎体。
5.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于:
所述S4中的具体步骤为,用PBS液吹打所述胚胎体,离心沉淀后加入胰蛋白酶消化,并吹打成单个小细胞团,以lx105mL-1的细胞密度接种于骨髓基质细胞饲养层,并加入50ng/mL SCF,37℃,5%CO2培养箱中培养,每5-6d换液一次,培养20-22d形成造血干细胞。
6.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法,其特征在于:
所述脱核诱导培养基为Stem Span无血清培养基为基础培养基中加入10-12U/ml EPO和40-
50ng/ml IGF-1。
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