雷帕霉素衍生物
阅读：625发布：2020-05-11
专利汇可以提供雷帕霉素衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本披露涉及具有式(I)的化合物，和药学上可接受的盐、及其组合物，其中取代基如本文中所定义。还提供制造具有式(I)的化合物的方法，以及涉及所述化合物或组合物用于 治疗 本文所述的障碍和 疾病 的方法。，下面是雷帕霉素衍生物专利的具体信息内容。
1.一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1选自由以下组成的组：羟基，
并且
R2选自由以下组成的组：
其中
m是0、1、2或3；
n是1、2或3；
o是1、2、3、4、5或6；
p是1、2、3、4或5；
q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
r是2、3或4；
s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
X是O、S、NR6或SO2；
R3是氢、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
R4是氢；
R5是氢、羟基或氰基；或R4和R5一起形成＝O；并且
R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1选自由以下组成的组：羟基，
并且
R2选自由以下组成的组：
其中
m是0、1、2或3；
n是1、2或3；
o是1、2、3、4、5或6；
p是1、2、3、4或5；
q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
r是2、3或4；
s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
X是O、S、NR6或SO2；
R3是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
R4是氢；
R5是氢、羟基或氰基；或R4和R5一起形成＝O；并且
R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是羟基。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是并且n是1、2或3。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱
氧-雷帕霉素。
8.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素。
10.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的载体。
11.一种药物组合，所述药物组合包含治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种治疗活性剂。
12.一种在有需要的受试者中治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合。
13.一种在受试者中治疗疾病或障碍的方法，其中与所述疾病或障碍的病理学相关的靶组织、细胞或器官具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包括向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合。
14.一种在受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述受试者具有或先前被确定具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包括向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述疾病或障碍选自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
16.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述障碍是肝纤维化。
17.一种在有需要的受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，其中所述障碍或疾病选自：
-急性或慢性器官或组织移植排斥；
-移植血管病变；
-导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
-自身免疫性疾病和炎性病症；
-哮喘的治疗和预防；
-多药耐药性(MDR)；
-真菌感染；
-炎症；
-感染；
-与年龄有关的疾病；
-神经退行性疾病；
-增殖性障碍，特别是癌症；
-癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；以及
-线粒体肌病和线粒体应激。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述障碍是包括纤维化和/或炎症过程的障碍。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述障碍选自肝和肾障碍。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述肾障碍是肾纤维化。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述肾纤维化发生是急性肾损伤的结果。
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述肾障碍是慢性肾障碍。
24.根据权利要求19所述的方法，其中所述肾障碍是糖尿病性肾病。
25.一种在有需要的受试者中治疗与年龄有关的障碍或疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，其中所述障碍或疾病选自：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
26.一种在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合。
27.根据权利要求26所述的方法，所述方法进一步包括PD-1/PDL-1抑制剂。
28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述癌症选自肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤和颈癌。
29.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用作药物。
30.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于预防或治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病。
31.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于预防或治疗选自以下的障碍或疾病：
-急性或慢性器官或组织移植排斥；
-移植血管病变；
-导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
-自身免疫性疾病和炎性病症；
-哮喘的治疗和预防；
-多药耐药性(MDR)；
-真菌感染；
-炎症；
-感染；
-与年龄有关的疾病；
-神经退行性疾病；
-增殖性障碍，特别是癌症；
-癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
-线粒体肌病和线粒体应激；以及
-已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子增加的情况。
32.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于预防或治疗包括纤维化或炎症过程的障碍或疾病。
33.根据权利要求32所述使用的化合物，其中所述障碍选自肝和肾障碍。
34.根据权利要求33所述使用的化合物，其中所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
35.根据权利要求33所述使用的化合物，其中所述肾障碍是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果。
36.根据权利要求33所述使用的化合物，其中所述肾障碍是慢性肾障碍。
37.根据权利要求33所述使用的化合物，其中所述肾障碍是糖尿病性肾病。
38.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于预防或治疗与年龄有关的选自以下的障碍或疾病：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
39.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于预防或治疗癌症。
40.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合，用于治疗肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤、或颈癌。
41.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备药物的用途。
42.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备预防或治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病的药物的用途。
43.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备预防或治疗障碍或疾病的药物的用途，所述障碍或疾病选自：
-急性或慢性器官或组织移植排斥；
-移植血管病变；
-导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
-自身免疫性疾病和炎性病症；
-哮喘的治疗和预防；
-多药耐药性(MDR)；
-真菌感染；
-炎症；
-感染；
-与年龄有关的疾病；
-神经退行性疾病；
-增殖性障碍，特别是癌症；
-癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
-线粒体肌病和线粒体应激；以及
-已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子增加的情况。
44.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备预防或治疗包括纤维化或炎症过程的障碍或疾病的药物的用途。
45.根据权利要求44所述的用途，其中所述障碍选自肝和肾障碍。
46.根据权利要求45所述的用途，其中所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
47.根据权利要求45所述的用途，其中所述肾障碍是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果。
48.根据权利要求45所述的用途，其中所述肾障碍是慢性肾障碍。
49.根据权利要求45所述的用途，其中所述肾障碍是糖尿病性肾病。
50.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备预防或治疗与年龄有关的障碍或疾病的药物的用途，所述与年龄有关的障碍或疾病选自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
51.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
52.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求10所述的药物组合物、或根据权利要求11所述的药物组合用于制备治疗以下癌症的药物的用途：肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤、或颈癌。
雷帕霉素衍生物
[0001] 优先权
[0002] 本申请要求于2017年9月26日提交的U.S.S.N.62/563,312的优先权，将该文献通过引用以其全文并入本文。
技术领域
背景技术
[0004] 在哺乳动物细胞中，雷帕霉素靶标(mTOR)激酶存在于两种不同的多蛋白复合物中(称为mTORC1复合物和mTORC2复合物)，这两种复合物均可感知营养素和能量的利用，并整
合来自生长因子和应激信号的输入。所述mTORC1整合来自生长因子和营养素的信号，并控
制细胞的生长和代谢。Laplante M.等人Cell[细胞].(2012)149(2):274-93。mTORC1是蛋白质翻译和自体吞噬的关键调节剂。所述mTORC1复合物对变构mTOR抑制剂，如雷帕霉素和雷
帕霉素类似物(rapamycin analog)(所谓的‘雷帕霉素类似物(rapalog)’)敏感。雷帕霉素和先前生产的雷帕霉素类似物的作用方式涉及形成具有FK506结合蛋白FKBP12、FKBP51或
FKBP52(这三种FKBP在这里称为“FKBP”或“FKBPs”)的细胞内复合物，然后使FKBP-雷帕霉素类似物复合物与mTOR的FRB(FK506-雷帕霉素结合)结构域结合。 A.M.等人Mol Cell
Biol.[分子细胞生物学](2013)33(7):1357-1367。大型FK506-结合蛋白影响雷帕霉素的药
理作用。FKBP-雷帕霉素类似物复合物与mTORC1的这种相互作用导致复合物的变构抑制。雷帕霉素和雷帕霉素类似物(如RAD001(依维莫司； ))通过抑制与良性和恶性增殖
性障碍相关的mTORC1的活性获得了临床相关性。Royce M.E.等人Breast Cancer[乳腺癌]
(Auckl).(2015)9:73-79；Pleniceanu O.等人Kidney Int Rep.[国际肾脏报告](2018)3
(1):155-159。
合来自生长因子和应激信号的输入。所述mTORC1整合来自生长因子和营养素的信号，并控
制细胞的生长和代谢。Laplante M.等人Cell[细胞].(2012)149(2):274-93。mTORC1是蛋白质翻译和自体吞噬的关键调节剂。所述mTORC1复合物对变构mTOR抑制剂，如雷帕霉素和雷
帕霉素类似物(rapamycin analog)(所谓的‘雷帕霉素类似物(rapalog)’)敏感。雷帕霉素和先前生产的雷帕霉素类似物的作用方式涉及形成具有FK506结合蛋白FKBP12、FKBP51或
FKBP52(这三种FKBP在这里称为“FKBP”或“FKBPs”)的细胞内复合物，然后使FKBP-雷帕霉素类似物复合物与mTOR的FRB(FK506-雷帕霉素结合)结构域结合。 A.M.等人Mol Cell
Biol.[分子细胞生物学](2013)33(7):1357-1367。大型FK506-结合蛋白影响雷帕霉素的药
理作用。FKBP-雷帕霉素类似物复合物与mTORC1的这种相互作用导致复合物的变构抑制。雷帕霉素和雷帕霉素类似物(如RAD001(依维莫司； ))通过抑制与良性和恶性增殖
性障碍相关的mTORC1的活性获得了临床相关性。Royce M.E.等人Breast Cancer[乳腺癌]
(Auckl).(2015)9:73-79；Pleniceanu O.等人Kidney Int Rep.[国际肾脏报告](2018)3
(1):155-159。
[0005] 雷帕霉素是一种已知的由吸水链霉菌(Streptomyces hygoscopius)产生的大环内酯类抗生素，参见例如McAlpine,J.B.等人,J.Antibiotics[抗生素杂志](1991)44:688；
Schreiber,S.L.等人,J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志](1991)113:7433；美国专利号
3,929,992。本文件中使用的雷帕霉素及其衍生物的下列编号规定如下所示：
Schreiber,S.L.等人,J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志](1991)113:7433；美国专利号
3,929,992。本文件中使用的雷帕霉素及其衍生物的下列编号规定如下所示：
[0006]
[0007] 雷帕霉素是有效的免疫抑制剂，也已显示具有抗肿瘤和抗真菌活性。它已显示可用于预防或治疗系统性红斑狼疮、肺部炎症、胰岛素依赖型糖尿病、皮肤障碍如银屑病、血管损伤后平滑肌细胞增殖和内膜增厚、成人T细胞白血病/淋巴瘤、恶性癌、心脏炎性疾病、贫血和神经突增生。然而，它作为药物的实用性受到其极低且可变的生物利用度的限制。此外，雷帕霉素的配制具挑战性，因此难以获得稳定的盖仑(galenic)组合物。
[0008] 为了克服这些问题，已经(半)合成了许多雷帕霉素类似物。通过将雷帕霉素在C28和40处衍生化而形成甘氨酸盐、丙酸盐和吡咯烷基丁酸盐前药来制备水溶性前药(美国专
利号4,650,803)。其他雷帕霉素的类似物包括单酰基和二酰基类似物(US 4,316,885)、缩
醛类似物(美国专利号5,151,413)、甲硅烷基醚(美国专利号5,120,842)、羟基酯(美国专利号5,362,718)以及芳基、烷基、烯基、和炔基类似物(美国专利号5,665,772；5,258,389；6,
384,046；WO 97/35575)。对雷帕霉素的修饰包括一个或多个甲氧基基团的脱甲基化、消除或置换；一个或多个羟基基团的消除、衍生或置换；一个或多个酮基团的还原、消除或衍生；
用5元脯氨酰基环置换6元甲基哌啶(pipecolate)环；环己基环上的被经取代的环戊基环进
行的替代性取代。该领域专利文献的说明性实例是美国专利号5,527,907、WO 96/41865和
WO 99/36553，其描述了很多种雷帕霉素类似物，目的是避免雷帕霉素的免疫抑制性副作
用。美国专利号5,985,890披露了32脱氧-雷帕霉素类似物的实例(包括32-脱氧-雷帕霉素
本身)。据描述，这些化合物已被报道比雷帕霉素具有改善的药理作用特性和更高的稳定
性。
利号4,650,803)。其他雷帕霉素的类似物包括单酰基和二酰基类似物(US 4,316,885)、缩
醛类似物(美国专利号5,151,413)、甲硅烷基醚(美国专利号5,120,842)、羟基酯(美国专利号5,362,718)以及芳基、烷基、烯基、和炔基类似物(美国专利号5,665,772；5,258,389；6,
384,046；WO 97/35575)。对雷帕霉素的修饰包括一个或多个甲氧基基团的脱甲基化、消除或置换；一个或多个羟基基团的消除、衍生或置换；一个或多个酮基团的还原、消除或衍生；
用5元脯氨酰基环置换6元甲基哌啶(pipecolate)环；环己基环上的被经取代的环戊基环进
行的替代性取代。该领域专利文献的说明性实例是美国专利号5,527,907、WO 96/41865和
WO 99/36553，其描述了很多种雷帕霉素类似物，目的是避免雷帕霉素的免疫抑制性副作
用。美国专利号5,985,890披露了32脱氧-雷帕霉素类似物的实例(包括32-脱氧-雷帕霉素
本身)。据描述，这些化合物已被报道比雷帕霉素具有改善的药理作用特性和更高的稳定
性。
[0009] 已经披露以上文献中描述的雷帕霉素类似物可用于治疗与雷帕霉素可用于治疗的相同的障碍。美国专利号8,906,374和美国专利号9,669,032披露在癌症中的用途。美国
专利号9,358,236披露在神经退行性障碍中的用途。
专利号9,358,236披露在神经退行性障碍中的用途。
[0010] 在动物模型中，雷帕霉素类似物延长寿命并延缓与年龄有关的疾病的发作。像其他生物过程一样，衰老也受到如TOR途径(在这种情况下，命名为“TOR”，以包括酵母和秀丽隐杆线虫(C elegans)系统，其中哺乳动物的等效物[mTOR]简称为“TOR”)等信号传导途径的调节，并且在哺乳动物中则受mTORC1途径的调节。TOR和mTORC1信号传导的调节可延长寿命，并延缓从蝇到哺乳动物的各种生物体中与年龄有关的疾病的发作。例如，通过基因突变对TOR途径的抑制延长了酵母、秀丽隐杆线虫和果蝇的寿命，并且对mTORC1途径的抑制延长了小鼠的寿命(Kaeberlein等人,Science[科学](2005)310:1193-1196；Kapahi等人,Curr
Biol[当代生物学](2004)14:885-890；Selman等人,Science[科学](2009)326:140-144；
Vellai等人,Nature[自然](2003)426:620)。此外，mTORC1抑制剂雷帕霉素延长小鼠的寿
命，即使在晚年(Harrison等人,Nature[自然](2009)460(7253):392-395)。这些数据增加
了靶向哺乳动物TOR(mTOR)途径的药物将对人类衰老和与年龄有关的疾病具有治疗作用的
可能性。例如，WO 2008/022256描述了包含mTOR抑制剂的用于治疗或预防与年龄有关的疾
病的方法和局部配制品。M.Leslie在Science[科学],2013,342中描述了在老年男性中使用
雷帕霉素的临床试验报告。J.Mannick等人在Sci Transl Med.[科学转化医学](2014)6
(268):268ra179中描述了mTOR抑制可改善老年人的免疫功能。然而，由于其副作用(包括免疫抑制、血球减少、口腔炎、胃肠道不适和间质性肺炎)，研究人员一直警惕在人类衰老试验中使用当前可用的mTOR抑制剂。
Biol[当代生物学](2004)14:885-890；Selman等人,Science[科学](2009)326:140-144；
Vellai等人,Nature[自然](2003)426:620)。此外，mTORC1抑制剂雷帕霉素延长小鼠的寿
命，即使在晚年(Harrison等人,Nature[自然](2009)460(7253):392-395)。这些数据增加
了靶向哺乳动物TOR(mTOR)途径的药物将对人类衰老和与年龄有关的疾病具有治疗作用的
可能性。例如，WO 2008/022256描述了包含mTOR抑制剂的用于治疗或预防与年龄有关的疾
病的方法和局部配制品。M.Leslie在Science[科学],2013,342中描述了在老年男性中使用
雷帕霉素的临床试验报告。J.Mannick等人在Sci Transl Med.[科学转化医学](2014)6
(268):268ra179中描述了mTOR抑制可改善老年人的免疫功能。然而，由于其副作用(包括免疫抑制、血球减少、口腔炎、胃肠道不适和间质性肺炎)，研究人员一直警惕在人类衰老试验中使用当前可用的mTOR抑制剂。
[0011] 在局灶性皮质发育不良(FCD)和结节性硬化症(TSC)的动物和人类研究中，mTOR途径与介导导致皮质畸形形成和癫痫表达的细胞和分子变化有关(Wong等人,Experimental
Neurology[实验神经学](2013)244:22-26)。局灶性皮质发育不良(FCD)是皮质发育的畸
形，这是小儿人群难治性癫痫的最常见原因，也是成人医学上难治性癫痫发作的第二/第三大最常见病因(Kabat J等人,Pol J.Radiology[波兰放射学杂志](2012)77(2)35-43)。结
节性硬化症(TSC)(包括结节性硬化症-1(TSC1)和结节性硬化症-2(TSC2))中的突变在mTOR
途径的上游起作用，导致良性肿瘤的广泛发展、智力低下和癫痫高发(Manning等人,
Identification of the tuberous sclerosis complex-2tumor suppressor gene
product tuberin as a target of the phosphoinositide 3-kinase/akt pathway[结节
性硬化症-2肿瘤抑制基因产物结节蛋白作为磷酸肌醇3-激酶/akt途径的靶标的鉴定],
Mol.Cell[分子细胞],(2002)10:151-162；Inoki等人,Dysregulation of the TSC-mTOR
pathway in human Disease[人类疾病中TSC-mTOR途径的调节异常],Nat.Genet[自然遗传
学],(2005),37:19-24；以及Holmes和Stafstrom,Tuberous sclerosis complex and
epilepsy:recent developments and future Challenges[结节性硬化症和癫痫：最新发
展和未来挑战],Epilepsia[癫痫],(2007)48:617-630)。
Neurology[实验神经学](2013)244:22-26)。局灶性皮质发育不良(FCD)是皮质发育的畸
形，这是小儿人群难治性癫痫的最常见原因，也是成人医学上难治性癫痫发作的第二/第三大最常见病因(Kabat J等人,Pol J.Radiology[波兰放射学杂志](2012)77(2)35-43)。结
节性硬化症(TSC)(包括结节性硬化症-1(TSC1)和结节性硬化症-2(TSC2))中的突变在mTOR
途径的上游起作用，导致良性肿瘤的广泛发展、智力低下和癫痫高发(Manning等人,
Identification of the tuberous sclerosis complex-2tumor suppressor gene
product tuberin as a target of the phosphoinositide 3-kinase/akt pathway[结节
性硬化症-2肿瘤抑制基因产物结节蛋白作为磷酸肌醇3-激酶/akt途径的靶标的鉴定],
Mol.Cell[分子细胞],(2002)10:151-162；Inoki等人,Dysregulation of the TSC-mTOR
pathway in human Disease[人类疾病中TSC-mTOR途径的调节异常],Nat.Genet[自然遗传
学],(2005),37:19-24；以及Holmes和Stafstrom,Tuberous sclerosis complex and
epilepsy:recent developments and future Challenges[结节性硬化症和癫痫：最新发
展和未来挑战],Epilepsia[癫痫],(2007)48:617-630)。
[0012] 异常mTOR激活会干扰正常的大脑发育并导致癫痫。抑制mTORC1途径的雷帕霉素治疗显示出可减弱结构异常并减少TSC和PTEN小鼠模型的癫痫发作(Ehninger等人,Reversal
of learning deficits in a Tsc2+/-mouse model of tuberous sclerosis[在结节性硬
化的Tsc2+/-小鼠模型中逆转学习缺陷]；Nat.Med.[自然医学],(2008),843-848；Meikle等人,Response of a neuronal model of tuberous sclerosis to mammalian target of
rapamycin,mTOR inhibitors:effects on mTORC1 and Akt signaling lead to
improved survival and function[结节性硬化的神经元模型对哺乳动物雷帕霉素靶标
(mTOR抑制剂)的反应：对mTORC1和Akt信号传导的影响可改善存活率和功能]；
J.Neuroscience.[神经科学杂志],(2008)28:5422-5432；Zeng等人,Rapamycin prevents
epilepsy in a mouse model of tuberous sclerosis complex[雷帕霉素预防结节性硬
化症小鼠模型中的癫痫]；Ann.Neurol.[神经病学年鉴],(2008)63:444-453；Ljungberg等
人,Rapamycin suppresses seizures and neuronal hypertrophy in a mouse model of
cortical dysplasia[雷帕霉素抑制皮质发育异常小鼠模型中的癫痫发作和神经元肥大]；
(2009)第389-398页；以及Zhou等人,Pharmacological inhibition of mTORC1
suppresses anatomical,cellular,and behavioral abnormalities in neural-
specific Pten knock-out mice[mTORC1的药理抑制作用可抑制神经特异性Pten敲除小鼠
中的解剖异常、细胞异常和行为异常],J.Neurosci.[神经科学杂志],(2009),29:1773-
1783)。此外，在神经损伤之前或紧随之后，mTOR途径的药理抑制作用可预防动物脑部的病理变化和获得性癫痫模型中的自发性反复性癫痫发作的发展(Zeng等人,The mammalian
target of rapamycin signaling pathway mediates epileptogenesis in a model of
temporal lobe epilepsy[雷帕霉素信号传导途径的哺乳动物靶标介导颞叶癫痫模型中的
癫痫发生]；J.Neurosci.[神经科学杂志],(2009)第6964-6972页)。因此，雷帕霉素和雷帕霉素类似物也被认为在此类适应症中具有潜在价值。
of learning deficits in a Tsc2+/-mouse model of tuberous sclerosis[在结节性硬
化的Tsc2+/-小鼠模型中逆转学习缺陷]；Nat.Med.[自然医学],(2008),843-848；Meikle等人,Response of a neuronal model of tuberous sclerosis to mammalian target of
rapamycin,mTOR inhibitors:effects on mTORC1 and Akt signaling lead to
improved survival and function[结节性硬化的神经元模型对哺乳动物雷帕霉素靶标
(mTOR抑制剂)的反应：对mTORC1和Akt信号传导的影响可改善存活率和功能]；
J.Neuroscience.[神经科学杂志],(2008)28:5422-5432；Zeng等人,Rapamycin prevents
epilepsy in a mouse model of tuberous sclerosis complex[雷帕霉素预防结节性硬
化症小鼠模型中的癫痫]；Ann.Neurol.[神经病学年鉴],(2008)63:444-453；Ljungberg等
人,Rapamycin suppresses seizures and neuronal hypertrophy in a mouse model of
cortical dysplasia[雷帕霉素抑制皮质发育异常小鼠模型中的癫痫发作和神经元肥大]；
(2009)第389-398页；以及Zhou等人,Pharmacological inhibition of mTORC1
suppresses anatomical,cellular,and behavioral abnormalities in neural-
specific Pten knock-out mice[mTORC1的药理抑制作用可抑制神经特异性Pten敲除小鼠
中的解剖异常、细胞异常和行为异常],J.Neurosci.[神经科学杂志],(2009),29:1773-
1783)。此外，在神经损伤之前或紧随之后，mTOR途径的药理抑制作用可预防动物脑部的病理变化和获得性癫痫模型中的自发性反复性癫痫发作的发展(Zeng等人,The mammalian
target of rapamycin signaling pathway mediates epileptogenesis in a model of
temporal lobe epilepsy[雷帕霉素信号传导途径的哺乳动物靶标介导颞叶癫痫模型中的
癫痫发生]；J.Neurosci.[神经科学杂志],(2009)第6964-6972页)。因此，雷帕霉素和雷帕霉素类似物也被认为在此类适应症中具有潜在价值。
[0013] 线粒体肌病(MM)是成人发病型线粒体疾病的最常见表现，并表现出多方面的组织特异性应激反应：(1)转录反应，包括代谢性细胞因子FGF21和GDF15；(2)一碳代谢的重构；
和(3)线粒体未折叠蛋白反应。Khan等人在2017年8月1日在Cell Metabolism[细胞代谢]
26,419-428中描述到，这些过程是一个整合的线粒体应激反应(ISRmt)的一部分，该反应由骨骼肌中的mTORC1控制。mtDNA复制缺陷激活了mTORC1，mTORC1通过ATF4激活来驱动整合的线粒体应激反应，从而诱导核苷酸和丝氨酸从头合成、1C循环、以及FGF21和GDF15的产生。
雷帕霉素对mTORC1的抑制下调了ISRmt(整合的线粒体应激反应)的所有组成部分，改善了
所有MM标志，甚至逆转了晚期MM的进程，而不引起线粒体生物发生。因此，雷帕霉素和雷帕霉素类似物也被认为在此类适应症中具有潜在价值。
和(3)线粒体未折叠蛋白反应。Khan等人在2017年8月1日在Cell Metabolism[细胞代谢]
26,419-428中描述到，这些过程是一个整合的线粒体应激反应(ISRmt)的一部分，该反应由骨骼肌中的mTORC1控制。mtDNA复制缺陷激活了mTORC1，mTORC1通过ATF4激活来驱动整合的线粒体应激反应，从而诱导核苷酸和丝氨酸从头合成、1C循环、以及FGF21和GDF15的产生。
雷帕霉素对mTORC1的抑制下调了ISRmt(整合的线粒体应激反应)的所有组成部分，改善了
所有MM标志，甚至逆转了晚期MM的进程，而不引起线粒体生物发生。因此，雷帕霉素和雷帕霉素类似物也被认为在此类适应症中具有潜在价值。
[0014] 仍然需要提供新的mTOR抑制剂作为优良的候选药物。特别地，优选的化合物应至少具有mTORC1抑制能力，能从胃肠道被充分吸收，具有足够的代谢稳定性并具有有利的药
代动力学特性。此外，理想的候选药物将能够以稳定的、非吸湿的和适用于配制的物质形态存在。
代动力学特性。此外，理想的候选药物将能够以稳定的、非吸湿的和适用于配制的物质形态存在。
发明内容
[0015] 具有结构式(I)的化合物是mTORC1抑制剂，因此，其潜在地可用于治疗多种障碍，特别是与年龄有关的障碍，或目前被批准使用雷帕霉素类似物治疗的疾病和障碍。将C32上的酮完全还原并用环状含氮脂族环系统(如环胺、酰胺或磺内酰胺)置换C16甲氧基基团可
提供具有上述所希望的优点、并显示出良好效力、稳定性和生物利用度的平衡的化合物。
提供具有上述所希望的优点、并显示出良好效力、稳定性和生物利用度的平衡的化合物。
[0016] 在一个方面，本披露提供了具有结构式(I)的化合物：
[0017]
[0018] 或其药学上可接受的盐，其中
[0019] R1选自由以下组成的组：羟基，
[0020]
[0021] 并且
[0022] R2选自由以下组成的组：
[0023]
[0024] 其中
[0025] m是0、1、2或3；
[0026] n是1、2或3；
[0027] o是1、2、3、4、5或6；
[0028] p是1、2、3、4或5；
[0029] q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
[0030] r是2、3或4；
[0031] s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
[0032] X是O、S、NR6或SO2；
[0033] R3是氢、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
[0034] R4是氢；
[0035] R5是氢、羟基或氰基；或R4和R5一起形成＝O；并且
[0036] R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
[0038] 在一个实施例中，本披露提供了药物组合，所述药物组合包含治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种治疗活性剂。
[0039] 在另一方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物、或药物组合物、或其药物组合。在另一方面，本披露提供了在受试者中治疗疾病或障碍的方法，其中与疾病或障碍的病理学相关的靶组织或器官具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包
括向有需要的受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、
或药物组合物、或其药物组合。
括向有需要的受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、
或药物组合物、或其药物组合。
[0040] 在一个实施例中，根据经验确定，与要用具有结构式(I)的化合物(例如，与雷帕霉素或RAD001相比，使用FKBP12特异性抑制剂)治疗的疾病或障碍的病理学相关的靶组织或器官具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平。
[0041] 在另一方面，本披露提供了在受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述受试者具有或先前被确定具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包括向有需要的受试者施用治
疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物、或其药物组合。
疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物、或其药物组合。
[0042] 在一个实施例中，受试者在靶组织、器官或细胞中具有或先前被确定具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平。
[0043] 在另一方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗年龄有关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受
的盐、或药物组合物、或其组合。
的盐、或药物组合物、或其组合。
[0044] 在一个实施例中，所述疾病或障碍选自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压(high blood pressure)、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压(hypertension))、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0045] 在另一方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或药
物组合物、或其药物组合，其中所述障碍或疾病选自：
物组合物、或其药物组合，其中所述障碍或疾病选自：
[0046] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0047] -移植血管病变；
[0049] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0050] -哮喘的治疗和预防；
[0051] -多药耐药性(MDR)；
[0052] -真菌感染；
[0053] -炎症；
[0054] -感染；
[0055] -与年龄有关的疾病；
[0056] -神经退行性疾病；
[0057] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0058] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；以及
[0059] -线粒体肌病和线粒体应激。
[0060] 在另一方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有结构式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、或药物组合
物、或其药物组合。
物、或其药物组合。
[0061] 在一个实施例中，所述方法进一步包括PD-1/PDL-1抑制剂。
[0062] 在一个实施例中，所述癌症选自肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤和颈癌。
[0063] 在一个实施例中，所述障碍是包括纤维化和/或炎症过程的障碍，例如，发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或
NASH；和酒精相关性脂肪变性。
NASH；和酒精相关性脂肪变性。
[0064] 在一个实施例中，所述障碍是在肾脏中包括纤维化或炎症过程的肾障碍，例如，肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果，导致慢性肾脏疾病和糖尿病性肾病。
[0065] 在一个实施例中，所述障碍是心脏功能障碍，例如，心肌梗塞或心脏肥大。在一个实施例中，所述心脏功能障碍是收缩和/或舒张功能障碍。在一个实施例中，所述心脏功能障碍是高血压。在一个实施例中，所述心脏功能障碍导致射血分数降低。
[0066] 在一个实施例中，所述障碍是由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老。
[0067] 在一个实施例中，所述障碍是癌症，包括通过免疫疗法治疗的肿瘤，以及先前已通过雷帕霉素、依维莫司或另一雷帕霉素类似物治疗过的那些肿瘤。在一个实施例中，所述癌症包括显示mTOR途径被激活的肿瘤，包括其中Tsc1基因中存在突变的情况，或其中通过雷帕霉素类似物适当治疗的肿瘤微环境的情况。
附图说明
[0069] 图1A是实例1与FKBP12的共晶体结构的图像。在C16处的绝对构型是(S)。
[0070] 图1B显示了除去FKBP12蛋白的实例1的结构。
[0071] 图2A是实例2与FKBP12的共晶体结构的图像。在C16处的绝对构型是(R)。
[0072] 图2B显示了除去FKBP12蛋白的实例2的结构。
[0073] 图3是显示3mg/kg的单次口服剂量之后在大鼠中实例2的药代动力学曲线的线形图。Y轴-实例2的血液浓度(nM)。X轴-实例2施用后采血的时间(小时)。数据为来自3只大鼠的平均值±标准偏差。
[0074] 图4A是显示了在口服给予3、10和30mg/kg的单一剂量的任一化合物的大鼠中RAD001(空心条)和实例2(实心条)的比较性血液浓度的条形图。给药后3和24小时(h)测量
化合物浓度。数据为来自每组5-6只大鼠的平均值±标准偏差。将其中化合物低于定量限的
大鼠从数据分析中排除：这适用于RAD001处理组。星号(*)表示相应的RAD001和实例2处理
组之间的显著性差异。**P<0.01，***P<0.001；****P<0.0001，t-检验。BQL-低于定量限。Y轴-血液中的化合物浓度(nM)。X轴-口服给药以及口服给予剂量(3、10和30mg/kg)后的时间(3和24小时)。
化合物浓度。数据为来自每组5-6只大鼠的平均值±标准偏差。将其中化合物低于定量限的
大鼠从数据分析中排除：这适用于RAD001处理组。星号(*)表示相应的RAD001和实例2处理
组之间的显著性差异。**P<0.01，***P<0.001；****P<0.0001，t-检验。BQL-低于定量限。Y轴-血液中的化合物浓度(nM)。X轴-口服给药以及口服给予剂量(3、10和30mg/kg)后的时间(3和24小时)。
[0075] 图4B是显示了在口服给予3、10和30mg/kg的单一剂量的任一化合物的大鼠中RAD001(空心条)和实例2(实心条)的比较性脑浓度的条形图。给药后3和24小时(h)测量化
合物浓度。数据为平均值±标准偏差。在每组中使用5-6大鼠。将其中化合物低于定量限的
大鼠从数据分析中排除：这适用于RAD001处理组。星号(*)表示相应的RAD001和实例2处理
组之间的显著性差异。**P<0.01；***P<0.001；****P<0.0001，t-检验。BQL-低于定量限。Y轴-脑中的化合物浓度(nM)。X轴-给药以及口服给予剂量(3、10和30mg/kg)后的时间(3和24小时)。
合物浓度。数据为平均值±标准偏差。在每组中使用5-6大鼠。将其中化合物低于定量限的
大鼠从数据分析中排除：这适用于RAD001处理组。星号(*)表示相应的RAD001和实例2处理
组之间的显著性差异。**P<0.01；***P<0.001；****P<0.0001，t-检验。BQL-低于定量限。Y轴-脑中的化合物浓度(nM)。X轴-给药以及口服给予剂量(3、10和30mg/kg)后的时间(3和24小时)。
[0076] 图4C显示了静脉内(i.v.)和口服(p.o.)给药后大鼠中实例2的血液浓度。Y轴-实例2的血液浓度(nM)。X轴-实例2施用后采血的时间(小时)。数据为来自3只大鼠的平均值±
标准偏差。
标准偏差。
[0077] 图4D显示了静脉内(i.v.)和口服(p.o.)给药后大鼠中RAD001的血液浓度。Y轴-RAD001的血液浓度(nM)。X轴-RAD001施用后采血的时间(小时)。数据为来自3只大鼠的平均值±标准偏差。
[0078] 图5A-5D显示了实例2抑制在大鼠肝脏中的mTORC1途径。给予大鼠3或10或30mg/kg的单次口服剂量的实例2，并在给药后3小时(h)和24h收集肝脏样品。用媒介物(Veh)处理的大鼠用作对照。(5A)和(5C)显示了用媒介物或3或10或30mg/kg的实例2处理并在处理后3h
(5A)和24h(5C)进行了分析的大鼠肝脏中磷酸化(p-)和总(t-)S6蛋白的免疫印迹图像。
(5B)和(5D)中的直方图显示了在处理后3h(5B)和24h(5D)p-S6至t-S6的光密度定量。在直
方图(5B和5D)中，每个条上方显示了表示p-S6/t-S6比的平均任意值。X轴代表口服给予剂
量(3、10、30mg/kg)。Y-轴代表任意单位。在每个实验组中使用六只大鼠。数据为平均值±标准偏差。用单因素ANOVA然后用邓尼特多重比较检验进行数据分析，其中将所有组的平均值与媒介物处理组进行比较。**P<0.01，****P<0.001，ns-不显著。
(5A)和24h(5C)进行了分析的大鼠肝脏中磷酸化(p-)和总(t-)S6蛋白的免疫印迹图像。
(5B)和(5D)中的直方图显示了在处理后3h(5B)和24h(5D)p-S6至t-S6的光密度定量。在直
方图(5B和5D)中，每个条上方显示了表示p-S6/t-S6比的平均任意值。X轴代表口服给予剂
量(3、10、30mg/kg)。Y-轴代表任意单位。在每个实验组中使用六只大鼠。数据为平均值±标准偏差。用单因素ANOVA然后用邓尼特多重比较检验进行数据分析，其中将所有组的平均值与媒介物处理组进行比较。**P<0.01，****P<0.001，ns-不显著。
[0079] 图6A-6C显示了用RAD001(虚线)和实例2(实线)处理后，在野生型(6A)、FKBP12敲低(6B)和FKBP12敲除(6C)的293T细胞中对S6K1(Thr389)的抑制作用。将细胞以一式三份进
行处理。Y轴代表相对于用培养基加DMSO处理的细胞中的S6K1(Thr389)水平的抑制百分比。
X轴代表RAD001和实例2的浓度。
行处理。Y轴代表相对于用培养基加DMSO处理的细胞中的S6K1(Thr389)水平的抑制百分比。
X轴代表RAD001和实例2的浓度。
具体实施方式
[0080] 在第一方面，本披露提供了具有式(I)的化合物
[0081]
[0082] 或其药学上可接受的盐，其中
[0083] R1选自由以下组成的组：羟基，
[0084]
[0085] 并且
[0086] R2选自由以下组成的组：
[0087]
[0088] 其中
[0089] m是0、1、2或3；
[0090] n是1、2或3；
[0091] o是1、2、3、4、5或6；
[0092] p是1、2、3、4或5；
[0093] q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
[0094] r是2、3或4；
[0095] s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
[0096] X是O、S、NR6或SO2；
[0097] R3是氢、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
[0098] R4是氢；
[0099] R5是氢、羟基或氰基；或R4和R5一起形成＝O；并且
[0100] R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
[0101] 在一个实施例中，本披露提供了具有式(I)的化合物
[0102]
[0103] 或其药学上可接受的盐，其中
[0104] R1选自由以下组成的组：羟基，
[0105]
[0106] 并且
[0107] R2选自由以下组成的组：
[0108]
[0109] 其中
[0110] m是0、1、2或3；
[0111] n是1、2或3；
[0112] o是1、2、3、4、5或6；
[0113] p是1、2、3、4或5；
[0114] q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
[0115] r是2、3或4；
[0116] s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
[0117] X是O、S、NR6或SO2；
[0118] R3是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
[0119] R4是氢；
[0120] R5是氢、羟基或氰基；或R4和R5一起形成＝O；并且
[0121] R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
[0122] 定义
[0123] 除非另有指明，否则术语“本披露的化合物(compounds of the disclosure或compound of the disclosure)”是指具有式(I)的化合物及示例化合物、及其盐，以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记
的化合物(包括氘取代物)以及固有形成的部分。
的化合物(包括氘取代物)以及固有形成的部分。
[0125] 如本文所用，术语“C1-6烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团中不存在不饱和，具有从一至六个碳原子，并且通过单键连接到分子的其余部分。术语“C1-4烷基”应相应地解释。C1-6烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基和1,1-二甲基乙基(叔丁基)。
[0126] 如本文所用，术语“羟基C1-6烷基”是指被一个或多个-OH基团取代的烷基基团。羟基C1-6烷基基团的实例包括HO-CH2-、HO-CH2CH2-和-CH2-CH(OH)-。
[0127] 如本文所用，术语“C3-8环烷基C0-6烷基”是指仅由碳和氢原子组成的稳定的单环饱和烃基团，所述基团具有从三至八个碳原子、并且通过单键或通过如上所定义的C1-6烷基基团连接到分子的其余部分。C3-8环烷基C0-6烷基的实例包括但不限于环丙基、环丙基-甲基、环丁基、环丁基-乙基、环戊基、环戊基-丙基、环己基、环庚基和环辛基。
[0128] 如本文所用，术语“苯基C0-6烷基”是指通过单键或通过如上所定义的C1-6烷基基团连接到分子的其余部分的苯环。苯基C0-6烷基的实例包括但不限于苯基和苄基。
[0129] 如本文所用，“羟基”(hydroxy或hydroxyl)是指-OH。
[0131] 实施例1.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如上所述。
[0132] 实施例2.根据实施例1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是羟基。
[0133] 实施例3.根据实施例1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自特别是
其中m、n、X和R3如上所定义。
其中m、n、X和R3如上所定义。
[0134] 实施例4.根据实施例1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是 并且n是1、2或3。在一个实施例中，R2是
[0135] 实施例5.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是
[0136] 实施例6.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是
[0137] 实施例7.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是 在一个实施例中，R3是氢、C1-6烷基或羟基C1-6烷基。
[0138] 实施例8.根据实施例1至5中任一项所述的化合物，其具有式(I)-A：
[0139]
[0140] 或其药学上可接受的盐，其中R1选自由以下组成的组：羟基，和
在一个实施例中，R1是羟基。在一个实施例中，R2如式(I)所定义。在一个实施
例中，所述C16位置具有(R)立体化学。在一个实施例中，所述C16位置具有(S)立体化学。
在一个实施例中，R1是羟基。在一个实施例中，R2如式(I)所定义。在一个实施
例中，所述C16位置具有(R)立体化学。在一个实施例中，所述C16位置具有(S)立体化学。
[0141] 实施例9.根据实施例1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(化合物1)：
[0142]
[0143] 实施例10.根据实施例1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，在C16处以单一非对映异构体存在。在一个实施例中，所述C16位置具有(R)立体化学。在一个实施例中，所述C16位置具有(S)立体化学。
[0144] 实施例11.根据实施例1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，在C16处以非对映异构体混合物存在。
[0145] 实施例12.根据实施例1至10中任一项所述的化合物，其具有式(I)-B，
[0146]
[0147] 或其药学上可接受的盐，其中R1和R2如式(I)所定义。在一个实施例中，R2是
[0148]
[0149] 实施例13.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)：
[0150]
[0151] 实施例14.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)：
[0152]
[0153] 实施例15：具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158] 以下更详细地描述特定官能团和化学术语的定义。化学元素根据元素周期表,CAS版本,Handbook of Chemistry and Physics[物理化学手册],第75版,内封面进行鉴定，并
且具体官能团通常如其中所述被定义。此外，有机化学的一般原则，以及特定的功能部分和反应性描述于Thomas Sorrell,Organic Chemistry[有机化学],University Science
Books[大学科学书籍],索萨利托(Sausalito),1999；Smith和March,March’s Advanced
Organic Chemistry[马奇的高等有机化学],第5版,John Wiley&Sons,Inc.[约翰威利父子
出版公司],纽约,2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations[有机官能团转
换],VCH Publishers,Inc.[VCH出版社有限公司],纽约,1989；和Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis[有机合成的一些现代方法],第3版,Cambridge
University Press[剑桥大学出版社],剑桥,1987。
且具体官能团通常如其中所述被定义。此外，有机化学的一般原则，以及特定的功能部分和反应性描述于Thomas Sorrell,Organic Chemistry[有机化学],University Science
Books[大学科学书籍],索萨利托(Sausalito),1999；Smith和March,March’s Advanced
Organic Chemistry[马奇的高等有机化学],第5版,John Wiley&Sons,Inc.[约翰威利父子
出版公司],纽约,2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations[有机官能团转
换],VCH Publishers,Inc.[VCH出版社有限公司],纽约,1989；和Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis[有机合成的一些现代方法],第3版,Cambridge
University Press[剑桥大学出版社],剑桥,1987。
[0159] 根据起始材料和程序的选择，对于没有被式(I)、式(I)-A和式(I)-B固定的立体中心，本披露的化合物可以呈可能的立体异构体之一的形式或作为其混合物(例如作为纯的
光学异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本披露旨在包括所有此类可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-立体异构体可以使用手性合成子
或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以处于E或Z构
型。如果所述化合物含有二取代的环烷基，则所述环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构
型。所有互变异构形式也旨在包括在内。
光学异构体或作为立体异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称碳原子的数目。本披露旨在包括所有此类可能的立体异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-立体异构体可以使用手性合成子
或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以处于E或Z构
型。如果所述化合物含有二取代的环烷基，则所述环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构
型。所有互变异构形式也旨在包括在内。
[0160] 术语“互变异构体”是指具有可互换形式的特定化合物结构并且在氢原子和电子移位方面变化的化合物。因此，两种结构可以通过π电子和原子(通常是H)的运动处于平衡。
例如，烯醇和酮是互变异构体，因为通过用酸或碱的处理它们快速地相互转化。互变异构的另一个实例是苯基硝基甲烷的酸-和硝基-形式，它们同样是通过用酸或碱处理而形成的。
互变异构形式可以与获得目的化合物的最优化学反应性和生物活性相关。
例如，烯醇和酮是互变异构体，因为通过用酸或碱的处理它们快速地相互转化。互变异构的另一个实例是苯基硝基甲烷的酸-和硝基-形式，它们同样是通过用酸或碱处理而形成的。
互变异构形式可以与获得目的化合物的最优化学反应性和生物活性相关。
[0161] 如本文所用，术语“盐(salt或salts)”是指本披露的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本披露的化合物的生物有效性和特性，并且通常不是生物学上或其他方面不需要的盐。在许多情况下，由于氨基和/或羧基基团或与其类似的基团的存在，本披露的化合物能够形成酸盐和/或碱
盐。药学上可接受的盐在本领域中是熟知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical
Sciences[药物科学杂志](1977)66,1-19(通过引用并入本文)中详细地描述了药学上可接
受的盐。
盐。药学上可接受的盐在本领域中是熟知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical
Sciences[药物科学杂志](1977)66,1-19(通过引用并入本文)中详细地描述了药学上可接
受的盐。
[0165] 可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。
[0167] 可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺(包括天然存在的取代的胺)；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
[0168] 在另一个方面，本披露提供了呈以下形式的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯脲鎓酸盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
[0169] 本文给出的任何式也旨在表示未标记的形式以及化合物的同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式表示的结构，除了一个或多个原子被具有所选择的原
子质量或质量数的原子取代。可以掺入本披露的化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
子质量或质量数的原子取代。可以掺入本披露的化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
[0170] 此外，掺入某些同位素，特别是氘(即2H或D)可提供更高代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求或治疗指数或耐受性的改善。应理解，在此上下文中的氘被认为是本披露的化合物的取代基。氘的浓度可以由同位素富集因子定
义。如本文所用，术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与特定同位素的天然丰度之间的比率。如果本披露的化合物中的取代基指示为氘，则这种化合物具有的针对每个指定的氘
原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000
(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少
6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应当理解，术语“同位素富集因子”能以与对氘描述的相同方式应用于任何同位素。
义。如本文所用，术语“同位素富集因子”意指同位素丰度与特定同位素的天然丰度之间的比率。如果本披露的化合物中的取代基指示为氘，则这种化合物具有的针对每个指定的氘
原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000
(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少
6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。应当理解，术语“同位素富集因子”能以与对氘描述的相同方式应用于任何同位素。
[0171] 可以掺入本披露的化合物的同位素的其他实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分别是3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、123I、124I、125I。因此，应当理解，本披露包括掺入任何上述同位素中一种或多种(包括例如放射性同位素，例如3H和14C)的化合物，或其中掺入非放射性同位素(例如2H和13C)的那些。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(例如用2H或3H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射治疗。特别地，18F或标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别期望的。同位素标记的本披露的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实例
和制备中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的
试剂来制备。
和制备中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的
试剂来制备。
[0172] 如本文所用，术语“药物组合物”是指呈适于口服或肠胃外施用的形式的本披露的化合物、或其药学上可接受的盐、以及至少一种药学上可接受的载体。
[0173] 如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指可用于制备或使用药物组合物的物质，并且包括例如适合的稀释剂、溶剂、分散介质、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等渗剂、缓冲剂、乳化剂、吸收延迟剂、盐、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、染料、及其组合，如本领域技术人员已知的(参见，例如，Remington The Science and Practice of Pharmacy[药物科学与实践],第22版,Pharmaceutical Press[药物出版社],2013,第1049-1070页)。
[0174] 术语本披露的化合物的“治疗有效量”是指本披露的化合物的将引起受试者的生物或医学应答(例如，酶或蛋白活性的减小或抑制，或改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等)的量。在一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本披露的化合物的以下量，当向受试者施用时，所述量有效地(1)至少部分地缓解、预防、和/或改善病症，或(i)由mTOR途径介导的或(ii)与mTOR活性相关的或(iii)以mTOR活性(正常或异常)为特征的障碍
或疾病；或(2)降低或抑制mTOR的活性；或(3)减少或抑制mTOR的表达。在一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本披露的化合物的如下量，所述量当被施用至细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时有效地至少部分降低或抑制mTOR的活性；或至少部分地减少或抑制
mTOR的表达。
或疾病；或(2)降低或抑制mTOR的活性；或(3)减少或抑制mTOR的表达。在一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本披露的化合物的如下量，所述量当被施用至细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时有效地至少部分降低或抑制mTOR的活性；或至少部分地减少或抑制
mTOR的表达。
[0175] 如本文所用，术语“受试者”是指灵长类动物(例如，人(男性或女性))、狗、猫、兔、豚鼠、猪、大鼠和小鼠。在某些实施例中，受试者是灵长类动物。在又其他的实施例中，受试者是人。
[0176] 如本文所用，术语“施用(administer、administering或administration)”是指植入、吸收、摄取、注射、吸入、或以其他方式引入本发明化合物或其药物组合物。
[0177] 如本文所用，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。
[0178] 如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”是指缓解、延迟发作或改善疾病或障碍(即，减慢或阻止疾病或其至少一种临床症状的发展)；或缓解或改善与所述疾病或障碍相关的至少一种物理参数或生物标记，包括患者可能无法辨别的那些物理参数或生物标记。在一些实施例中，“治疗”需要已经发展或已经观察到疾病、障碍或病症的体征或症状。在其他实施例中，可以在没有疾病或病症的体征或症状的情况
下施用治疗。例如，可以在症状发作之前对易感个体施用治疗(例如，根据症状史和/或根据遗传或其他易感因素)。症状已经解决后也可以继续治疗，例如，以延迟或防止复发。
下施用治疗。例如，可以在症状发作之前对易感个体施用治疗(例如，根据症状史和/或根据遗传或其他易感因素)。症状已经解决后也可以继续治疗，例如，以延迟或防止复发。
[0179] 如本文所用，术语任何疾病或障碍的“预防(prevent、preventing或prevention)”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展。
[0180] 如本文所用，“与年龄有关的疾病或障碍”是指在人群中的发病率或在个体中的严重程度与年龄进展相关的任何疾病或障碍。更具体地，与年龄有关的疾病或障碍是相对于25-35岁之间的人类个体而言，在65岁以上的人类个体中发病率至少高1.5倍的疾病或障
碍。与年龄有关的障碍的实例包括但不限于：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能
障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
碍。与年龄有关的障碍的实例包括但不限于：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能
障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0181] 如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中获益，则所述受试者是“需要”这种治疗的。
[0182] 本文所述的所有方法均能够以任何合适顺序进行，除非本文中另有指示或者与上下文明显相矛盾。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地说明本披露，而不对另外要求保护的本披露范围做出限制。
[0183] 本披露的一种或多种化合物的任何非对称原子(例如，碳等)可以以外消旋或对映异构体富集的形式存在，例如，(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施例中，每个不对称原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％
对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量。如果可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
[0184] 因此，如本文所用，本披露的化合物可以呈可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如，作为基本上纯的几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体、或其混合物。
[0185] 可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶法将任何所得的立体异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。
[0186] 可以通过已知方法将任何所得的本披露的化合物或中间体的外消旋体拆分成旋光对映体，例如通过将用光学活性酸或碱得到的其非对映异构体盐进行分离，并释放出光
学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本披露的化合物拆分成它
们的光学对映体，例如通过分级结晶用光学活性酸，例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐来拆
分。本披露的外消旋化合物或外消旋中间体还可以通过手性色谱法(例如，使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC))拆分。
学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本披露的化合物拆分成它
们的光学对映体，例如通过分级结晶用光学活性酸，例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐来拆
分。本披露的外消旋化合物或外消旋中间体还可以通过手性色谱法(例如，使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC))拆分。
[0187] 制造具有式(I)的化合物的方法
[0188] 在另一方面，本披露提供生产具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物的方法。具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物可以根据方案1、2和3中所述的以下方法制造：
[0189] 方案1：
[0190]
[0191] 在用于取代反应的合适试剂(例如，对甲苯磺酸)的存在下，在适当的溶剂(例如，二氯甲烷)的存在下，具有式(I)的化合物(其中R2如式(I)所定义)可以通过使C32-脱氧雷
帕霉素(中间体1)与R2-H(其中R2如式(I)所定义)反应来获得。合适的条件如下：
帕霉素(中间体1)与R2-H(其中R2如式(I)所定义)反应来获得。合适的条件如下：
[0192] 1)R2-H、对甲苯磺酸-H2O、二氯甲烷、室温
[0193] 2)R2-H、三氟乙酸、-40℃、二氯甲烷(参见EP1212331B1)
[0194] 3)R2-H、5M LiClO4、Et2O(0.1M)、室温(参见TL,1995,43,7823)
[0195] 4)R2-H、Cp2HfCl2-AgClO4(Suzuki's催化剂)、4A MS、二氯甲烷、室温(参见TL,1995,43,7823)
[0196] 5)R2-H、BF3-OEt2或Zn(OTf)2、THF、0℃(参见TL,1994,37,6835)
[0197] 6)R2-H、ZnCl2、二氯甲烷、0℃(参见JOC,1994,59,6512)。
[0198] 可以通过本领域已知的方法制备用作起始材料的C32-脱氧雷帕霉素，例如，如美国专利公开号005985890或WO 2007085400中所述的。
[0199] 方案2：
[0200]
[0201] 具有式(I)-A的化合物(其中R1选自并且R2如式(I)所
定义)可以通过使中间体1与R1-H或R1-X反应，然后与R2-H反应来获得。在一个实施例中，在烷基化、膦酸化(phosphination)或酯化条件下，中间体1与R1-H或R1-X反应，以提供中间体
1-A。在一个实施例中，在例如本文所提供的取代反应条件下，中间体1-A与R2-H反应，以提供具有式(I)-A的化合物。
定义)可以通过使中间体1与R1-H或R1-X反应，然后与R2-H反应来获得。在一个实施例中，在烷基化、膦酸化(phosphination)或酯化条件下，中间体1与R1-H或R1-X反应，以提供中间体
1-A。在一个实施例中，在例如本文所提供的取代反应条件下，中间体1-A与R2-H反应，以提供具有式(I)-A的化合物。
[0202] 方案3：
[0203]
[0204] 具有式(I)-C的化合物(其中R1是 并且R2如式(I)所定义)可通过使中间体1与R1-H反应，然后与R2-H反应来获得。在一个实施例中，中间体1在亲核条件下被激活并反应，以提供中间体1-A。在一个实施例中，在例如本文所提供的取代反应条件下，中间体1-A与R2-H反应，以提供具有式(I)-C的化合物。
[0205] 该反应可以根据常规方法进行，例如实例中所描述的。
[0206] 反应混合物的后处理和由此获得的化合物的纯化可以根据已知程序进行。
[0207] 酸加成盐可以根据已知的方法从游离碱制备，反之亦然。
[0208] 起始材料可以是已知的，或者可以根据常规方法由已知的化合物制备，例如实例中所描述的。
[0209] 在另一方面，本披露提供了药物组合物，所述药物组合物包含本披露的化合物、或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。在另外的实施例中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的载体(如本文所述的那些)。所述药物组合物可以配制用于特定的施用途径，例如口服施用、肠胃外施用(例如通过注射、输注、透皮或局部施用)和直肠施用。局部施用也可以涉及吸入或鼻内施用。本披露的药物组合物能以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。典型地，药物组合物是包含活性
成分及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：
成分及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：
[0211] b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；就片剂而言还包含
[0213] d)崩解剂，例如，淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；以及
[0214] e)吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
[0216] 呈游离形式或药学上可接受的盐形式的本披露的化合物展示出有价值的药理学特性，例如，mTOR途径调整特性，例如，如在下一个部分中提供的体外和体内测试所示，并且因此指示用于疗法或用作研究化学品，例如作为工具化合物。
[0217] 测量mTORC1抑制剂的效力的方法是本领域熟知的。通常，效力是通过IC50值确定的，IC50值是通过确定mTORC1信号传导途径中对S6的磷酸化的抑制作用来评估的。在同一
测定中，将mTORC1抑制剂的IC50值与雷帕霉素的IC50值进行比较。在同一测定中其IC50值
是雷帕霉素IC50值的100倍以内的mTORC1抑制剂适用于本披露-这意味着，仍然需要低效的
雷帕霉素类似物，以在特定情况下更容易地仅部分抑制mTORC1活性，并提高在血流中测量
所述分子的能力(因为较高的浓度对于低效的分子是必需的)-这将有助于微调血液浓度/
功效关系。
测定中，将mTORC1抑制剂的IC50值与雷帕霉素的IC50值进行比较。在同一测定中其IC50值
是雷帕霉素IC50值的100倍以内的mTORC1抑制剂适用于本披露-这意味着，仍然需要低效的
雷帕霉素类似物，以在特定情况下更容易地仅部分抑制mTORC1活性，并提高在血流中测量
所述分子的能力(因为较高的浓度对于低效的分子是必需的)-这将有助于微调血液浓度/
功效关系。
[0218] 测量mTOR抑制剂的效力的合适测定法描述于例如美国专利号5,665,772中，如在MLR(混合淋巴细胞反应)测定中和/或在IL-6(白细胞介素-6)依赖性介导的增殖测定中通
过IC50值所测量的。
过IC50值所测量的。
[0219] MLR测定通常如下进行：将来自Balb/c小鼠(雌性，8-10周)的脾细胞(0.5x 106)与0.5x 106个辐照(2000rad)或丝裂霉素C处理的来自CBA小鼠(雌性，8-10周)的脾细胞共孵
育5天。辐照的同种异体细胞诱导Balb/c脾细胞中的增殖反应，这可以通过将标记的前体掺入DNA中来测量。由于刺激细胞受到辐照(或丝裂霉素C处理)，因此它们不会对Balb/c细胞
产生增殖反应，但会保留其抗原性。在各种稀释度下测量所测试的化合物对Balb/c细胞的
抗增殖作用，并计算导致50％细胞增殖抑制(IC50)的浓度。可以将测试样品的抑制能力与
雷帕霉素进行比较，并表示为相对IC50(即IC50测试样品/IC50雷帕霉素)。
育5天。辐照的同种异体细胞诱导Balb/c脾细胞中的增殖反应，这可以通过将标记的前体掺入DNA中来测量。由于刺激细胞受到辐照(或丝裂霉素C处理)，因此它们不会对Balb/c细胞
产生增殖反应，但会保留其抗原性。在各种稀释度下测量所测试的化合物对Balb/c细胞的
抗增殖作用，并计算导致50％细胞增殖抑制(IC50)的浓度。可以将测试样品的抑制能力与
雷帕霉素进行比较，并表示为相对IC50(即IC50测试样品/IC50雷帕霉素)。
[0220] IL-6介导的增殖测定通常如下进行：所述测定使用白细胞介素-6(IL-6)依赖性小鼠杂交瘤细胞系，并在96孔微量滴定板中进行。在补充有1ng重组IL-6/ml的无血清培养基
中培养5000细胞/孔(如M.H.Schreier和R.Tees在Immunological Methods[免疫学方法],
I.Lefkovits和B.Pernis编辑,Academic Press[学术出版社]1981.第II卷,第263-275页中
所描述的)。在不存在或存在测试样品的情况下孵育66小时后，将细胞用1μCi(3-H)-胸苷/孔再进行脉冲6小时，收获并通过液体闪烁法计数。(3-H)-胸苷掺入DNA与细胞数目的增加
相关，因此是细胞增殖的量度。测试样品的稀释系列允许导致50％的细胞增殖抑制(IC50)
的浓度的计算。可以将测试样品的抑制能力与雷帕霉素进行比较，并表示为相对IC50(即
IC50测试样品/IC50雷帕霉素)。
中培养5000细胞/孔(如M.H.Schreier和R.Tees在Immunological Methods[免疫学方法],
I.Lefkovits和B.Pernis编辑,Academic Press[学术出版社]1981.第II卷,第263-275页中
所描述的)。在不存在或存在测试样品的情况下孵育66小时后，将细胞用1μCi(3-H)-胸苷/孔再进行脉冲6小时，收获并通过液体闪烁法计数。(3-H)-胸苷掺入DNA与细胞数目的增加
相关，因此是细胞增殖的量度。测试样品的稀释系列允许导致50％的细胞增殖抑制(IC50)
的浓度的计算。可以将测试样品的抑制能力与雷帕霉素进行比较，并表示为相对IC50(即
IC50测试样品/IC50雷帕霉素)。
[0221] 也可以使用基于MEF TSC1-/-细胞的测定法来确定mTOR抑制剂的效力。MEF TSC1-/-细胞是结节性硬化蛋白TSC1缺乏的小鼠胚胎成纤维细胞，所述结节性硬化蛋白负
调控mTORC1信号传导。因此，TSC1的缺乏会诱导mTORC1组成型激活，从而导致mTORC1信号传导途径中的下游蛋白的磷酸化(激活)。这种基于细胞的测定法用于测量雷帕霉素类似物或
其他mTOR抑制剂对mTORC1信号传导组分S6和4EBP1的抑制作用(脱磷酸化作用)。
调控mTORC1信号传导。因此，TSC1的缺乏会诱导mTORC1组成型激活，从而导致mTORC1信号传导途径中的下游蛋白的磷酸化(激活)。这种基于细胞的测定法用于测量雷帕霉素类似物或
其他mTOR抑制剂对mTORC1信号传导组分S6和4EBP1的抑制作用(脱磷酸化作用)。
[0222] 所述测定通常如下进行：将MEF TSC1-/-细胞铺板在聚-D-赖氨酸涂覆的384孔Griener透明底板上，并在37℃、5％CO2下孵育过夜。在第二天，将细胞用“Hard starve”溶液(1L DPBS+1g D-(+)葡萄糖+10ml 7.5％碳酸氢钠+20ml 1M HEPES)洗涤8次，并在相同溶
液中再孵育2小时。接下来用浓度降低的化合物(3.16倍稀释度时有8个点)处理细胞，并在
37℃、5％CO2下孵育2小时。将细胞用4％多聚甲醛固定30min，并用TBS-EDTA洗涤5次，然后用针对pS6和p4EBP1的荧光标记标记的抗体进行免疫染色。细胞核通过Hoechst染色可见。
使用各自的荧光通道对细胞进行成像，并通过pS6 IC50(nM)定义mTOR抑制剂的效力。
液中再孵育2小时。接下来用浓度降低的化合物(3.16倍稀释度时有8个点)处理细胞，并在
37℃、5％CO2下孵育2小时。将细胞用4％多聚甲醛固定30min，并用TBS-EDTA洗涤5次，然后用针对pS6和p4EBP1的荧光标记标记的抗体进行免疫染色。细胞核通过Hoechst染色可见。
使用各自的荧光通道对细胞进行成像，并通过pS6 IC50(nM)定义mTOR抑制剂的效力。
[0223] 疾病和障碍
[0224] 本披露的化合物可用于预防或治疗选自以下的适应症或前驱病症：
[0225] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0226] -移植血管病变；
[0227] -导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
[0228] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0229] -哮喘的治疗和预防；
[0230] -多药耐药性(MDR)；
[0231] -真菌感染；
[0232] -炎症；
[0233] -感染；
[0234] -与年龄有关的疾病；
[0235] -神经退行性疾病；
[0236] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0237] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
[0238] -线粒体肌病和线粒体应激；
[0239] -已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子(例如IL6)增加的情况；
[0240] -包括纤维化和/或炎症过程的障碍，例如肝和肾障碍。实例包括，发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。另一个实例是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果，导致慢性肾脏疾病。同样，糖尿病性肾病可以引起肾纤维化和炎症。通常肾脏疾病由于血压升高引起心力衰竭；这也可能与心脏纤维化相关。雷帕霉素类似物在治疗心力衰竭模型方面具有临床前功效，并且对于减少接受肝移植的患者中的肝纤维化有效(Buss,S.J.等人Beneficial
effects of Mammalian target of rapamycin inhibition on left ventricular
remodeling after myocardial infarction[哺乳动物雷帕霉素靶标抑制对心肌梗塞后左
心室重构的有益作用].J Am Coll Cardiol.[美国心脏病学会杂志](2009)54(25):2435-
46；Buss,S.J.等人Augmentation of autophagy by mTOR-inhibition in myocardial
infarction:When size matters.[在心肌梗塞中通过mTOR抑制作用增强自体吞噬：当大小
很重要时]Autophagy.[自体吞噬](2010)6(2):304-6；Villamil,F.G.等人Fibrosis
progression in maintenance liver transplant patients with hepatitis C
recurrence:a randomized study of everolimus vs.calcineurin inhibitors.[丙型肝
炎复发的维持性肝移植患者的纤维化进展：依维莫司与钙调磷酸酶抑制剂的随机研究]
Liver Int.[肝学国际](2014)34(10):1513-21)。
effects of Mammalian target of rapamycin inhibition on left ventricular
remodeling after myocardial infarction[哺乳动物雷帕霉素靶标抑制对心肌梗塞后左
心室重构的有益作用].J Am Coll Cardiol.[美国心脏病学会杂志](2009)54(25):2435-
46；Buss,S.J.等人Augmentation of autophagy by mTOR-inhibition in myocardial
infarction:When size matters.[在心肌梗塞中通过mTOR抑制作用增强自体吞噬：当大小
很重要时]Autophagy.[自体吞噬](2010)6(2):304-6；Villamil,F.G.等人Fibrosis
progression in maintenance liver transplant patients with hepatitis C
recurrence:a randomized study of everolimus vs.calcineurin inhibitors.[丙型肝
炎复发的维持性肝移植患者的纤维化进展：依维莫司与钙调磷酸酶抑制剂的随机研究]
Liver Int.[肝学国际](2014)34(10):1513-21)。
[0242] 移植血管病变包括动脉粥样硬化。
[0243] 自身免疫性疾病和炎性病症特别地包括具有以下病因的炎性病症，所述病因包括自体免疫组分，如关节炎(例如类风湿性关节炎、慢性进行性关节炎(arthritis chronica progrediente)和变形性关节炎)和风湿性疾病。可采用具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物的特定自身免疫性疾病包括自身免疫性血液学障碍(包括例如溶血性贫血、
再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血和特发性血小板减少症)、全身性红斑狼疮、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病(Wegener granulamatosis)、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、银屑病、史蒂文-约翰逊综合征(Steven-Johnson syndrome)、特发性腹泻、自身免疫性炎性肠病(包括例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、内分泌性眼病、格雷夫斯病(Graves disease)、结节病、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬化、幼年型糖尿病(I型糖尿病)、葡萄膜炎(前葡萄膜炎和后葡萄膜炎)、干燥性角膜结膜炎和春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病性关节炎、肾小球肾炎(伴有和不伴有肾病综合征，例如包括特发性肾病综合征或微小病变性肾病)和幼年型皮肌炎。
再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血和特发性血小板减少症)、全身性红斑狼疮、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病(Wegener granulamatosis)、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、银屑病、史蒂文-约翰逊综合征(Steven-Johnson syndrome)、特发性腹泻、自身免疫性炎性肠病(包括例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、内分泌性眼病、格雷夫斯病(Graves disease)、结节病、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬化、幼年型糖尿病(I型糖尿病)、葡萄膜炎(前葡萄膜炎和后葡萄膜炎)、干燥性角膜结膜炎和春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病性关节炎、肾小球肾炎(伴有和不伴有肾病综合征，例如包括特发性肾病综合征或微小病变性肾病)和幼年型皮肌炎。
[0244] 多药耐药性(MDR)的治疗包括增强其他化学治疗剂在治疗和控制多药耐药病症(例如多药耐药性癌症或多重耐药性AIDS)中的功效。MDR在对常规化疗没有反应的癌症患
者和ADS患者中尤其成问题，因为药物通过Pgp从细胞中泵出。
者和ADS患者中尤其成问题，因为药物通过Pgp从细胞中泵出。
[0245] 感染包括被具有Mip或Mip样因子的病原体感染。
[0246] 与年龄有关的疾病包括：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0247] 神经退行性疾病包括亨廷顿氏病、帕金森氏病、3型脊髓小脑性共济失调、阿尔茨海默氏病、运动神经元疾病和周围神经病变。
[0248] 增殖性障碍包括癌症。此类病症包括美国专利号9,669,032列出的那些，特别是肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤、或颈癌。
[0249] 癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍包括韦斯特综合症、局灶性皮质发育不良(FCD)、结节性硬化症(TSC)、儿童失神性癫痫、儿童良性局灶性癫痫、青少年肌阵挛癫痫
(JME)、颞叶癫痫、额叶癫痫、难治性癫痫、伦诺克斯-加斯多(Lennox-Gastaut)综合征、枕叶癫痫、普罗特斯综合征、半巨脑综合征(HMEG)、巨脑综合征(MEG)、巨脑-毛细血管畸形
(MCAP)和巨脑-多小脑回-多趾-脑积水综合征(MPPH)。
(JME)、颞叶癫痫、额叶癫痫、难治性癫痫、伦诺克斯-加斯多(Lennox-Gastaut)综合征、枕叶癫痫、普罗特斯综合征、半巨脑综合征(HMEG)、巨脑综合征(MEG)、巨脑-毛细血管畸形
(MCAP)和巨脑-多小脑回-多趾-脑积水综合征(MPPH)。
[0250] 线粒体肌病和线粒体应激是线粒体障碍，如Chinnery,P.F.(2015)；EMBO Mol.Med.[EMBO分子医学]7,1503-1512；Koopman,W.J.等人,(2016)；EMBO Mol.Med.[EMBO
分子医学]8,311-327；以及Young,M.J.,以及Yound和Copeland,W.C.(2016)；
Curr.Opin.Genet.Dev.[遗传学与发展的最新观点]38,52-62中所描述。
分子医学]8,311-327；以及Young,M.J.,以及Yound和Copeland,W.C.(2016)；
Curr.Opin.Genet.Dev.[遗传学与发展的最新观点]38,52-62中所描述。
[0251] 已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症包括衰老，例如，免疫衰老。这可以通过以下来诊断：(i)循环细胞因子(如IL-6)的增加；(ii)在肌肉、肾脏、肝脏、脑、神经元、肝脏、胰腺或心脏中发现的衰老细胞；或(iii)DNA修复效率的下降，这可以通过重复元件(包括转座子编码基因)转录的增加来证明。有关背景，请参见Baker,D.J.等人,
Nature[自然],2016；530(7589):184-9.doi:10.1038/nature16932.电子版2016年2月3日。
Nature[自然],2016；530(7589):184-9.doi:10.1038/nature16932.电子版2016年2月3日。
[0252] 治疗方法和用途
[0253] 本披露提供了用于在疗法中使用的本披露的化合物的用途。在另外的实施例中，所述疗法选自疾病或障碍或共病状，其可以通过调节mTOR途径来治疗。在一个实施例中，所述疾病选自上述列表，在一个实施例中，所述疾病选自与年龄有关的疾病，如在老年人中与呼吸道感染有关的病状。
[0254] 本披露提供了用于在疗法中使用的本披露的化合物。在另外的实施例中，所述疗法选自可以通过调节mTOR途径来治疗的疾病。在一个实施例中，所述疾病选自上述列表，在一个实施例中，所述疾病选自与年龄有关的疾病，如在老年人中与呼吸道感染有关的病状。
[0255] 本披露提供了本披露的化合物用于制备药物的用途。在另外的实施例中，所述药物用于预防或治疗可以通过调节mTOR途径来治疗的疾病。在一个实施例中，所述疾病选自
上述列表，在一个实施例中，所述疾病选自与年龄有关的疾病，如在老年人中与呼吸道感染有关的病状。
上述列表，在一个实施例中，所述疾病选自与年龄有关的疾病，如在老年人中与呼吸道感染有关的病状。
[0256] 在一个方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式
(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
[0257] 在一个方面，本披露提供了在受试者中治疗疾病或障碍的方法，其中与所述疾病或障碍的病理学相关的靶组织或器官具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包括向
有需要的受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其
药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
有需要的受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其
药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
[0258] 在一个方面，本披露提供了在受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述受试者具有或先前被确定具有足以抑制mTORC1的FKBP12水平，所述方法包括向有需要的受试者施用治
疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
[0259] 在一个实施例中，所述疾病或障碍选自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0260] 在一个实施例中，所述障碍是肝纤维化。
[0261] 在一个方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其
药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，其中所述障碍或疾病选自：
药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，其中所述障碍或疾病选自：
[0262] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0263] -移植血管病变；
[0264] -导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
[0265] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0266] -哮喘的治疗和预防；
[0267] -多药耐药性(MDR)；
[0268] -真菌感染；
[0269] -炎症；
[0270] -感染；
[0271] -与年龄有关的疾病；
[0272] -神经退行性疾病；
[0273] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0274] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；以及
[0275] -线粒体肌病和线粒体应激。
[0276] 在一个实施例中，所述障碍是包括纤维化和/或炎症过程的障碍。
[0277] 在一个实施例中，所述障碍选自肝和肾障碍。
[0278] 在一个实施例中，所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
[0279] 在一个实施例中，所述肾障碍是肾纤维化。
[0280] 在一个实施例中，所述肾纤维化发生是急性肾损伤的结果。
[0281] 在一个实施例中，所述肾障碍是慢性肾障碍。
[0282] 在一个实施例中，所述肾障碍是糖尿病性肾病。
[0283] 在一个方面，本披露提供了在有需要的受试者中治疗与年龄有关的障碍或疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，其中所述障碍或疾病选自：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免
疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0284] 在一个方面，本披露提供了在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的
盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合。
[0285] 在一个实施例中，所述方法进一步包括PD-1/PDL-1抑制剂。
[0286] 在一个实施例中，所述癌症选自肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤和颈癌。
[0287] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于用作药物。
[0288] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于预防或治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病。
[0289] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于预防或治疗选自以下的障碍或疾病：
[0290] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0291] -移植血管病变；
[0292] -导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
[0293] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0294] -哮喘的治疗和预防；
[0295] -多药耐药性(MDR)；
[0296] -真菌感染；
[0297] -炎症；
[0298] -感染；
[0299] -与年龄有关的疾病；
[0300] -神经退行性疾病；
[0301] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0302] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
[0303] -线粒体肌病和线粒体应激；以及
[0304] -已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子增加的情况。
[0305] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于预防或治疗包括纤维化和/或炎症过程的障碍或疾病。
[0306] 在一个实施例中，所述障碍选自肝和肾障碍。
[0307] 在一个实施例中，所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
[0308] 在一个实施例中，所述肾障碍是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果。
[0309] 在一个实施例中，所述肾障碍是慢性肾障碍。
[0310] 在一个实施例中，所述肾障碍是糖尿病性肾病。
[0311] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于预防或治疗与年龄有关的选自以下的障碍或疾病：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0312] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于预防或治疗癌症。
[0313] 在一个方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐，包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，或包含具有式(I)、式(I)-A、式(I)-B和式(I)-C的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合，用于治疗肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤、或颈癌。
[0314] 在一个实施例中，本披露提供了化合物
[0315]
[0316] 或其药学上可接受的盐，用于治疗与年龄有关的疾病，如在老年人中与呼吸道感染有关的病状。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0317] 在一个实施例中，所述障碍或疾病选自：
[0318] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0319] -移植血管病变；
[0320] -导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
[0321] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0322] -哮喘的治疗和预防；
[0323] -多药耐药性(MDR)；
[0324] -真菌感染；
[0325] -炎症；
[0326] -感染；
[0327] -与年龄有关的疾病；
[0328] -神经退行性疾病；
[0329] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0330] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
[0331] -线粒体肌病和线粒体应激；以及
[0332] -显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子(例如IL6)增加的情况。
[0333] 在一个实施例中，所述障碍或疾病是与年龄有关的选自以下的障碍或疾病：肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便(例如，虚弱)、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0334] 在一个实施例中，所述障碍或疾病包括纤维化和/或炎症过程，例如肝和肾障碍。在一个实施例中，所述障碍是肾障碍。在一个实施例中，所述障碍是肝障碍。实例包括，发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。另一个实例是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果，导致慢性肾脏疾病。同样，糖尿病性肾病可以引起肾纤维化和炎症。通常肾脏疾病由于血压升高引起心力衰竭；这也可能与心脏纤维化相关。雷帕霉素类似物在治疗心力衰竭模型方面具
有临床前功效，并且对于减少接受肝移植的患者的肝纤维化有效。
有临床前功效，并且对于减少接受肝移植的患者的肝纤维化有效。
[0335] 化合物、药物组合物、或其组合的治疗有效剂量取决于所述受试者的物种、体重、年龄和所治疗的个体病症、障碍或疾病或其严重程度。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗障碍或疾病或抑制所述障碍或疾病的进展所必需的每种活性成分的有效量。
[0336] 使用有利的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或其分离的器官、组织和制品在体外和体内测试中证明上述剂量特性。本披露的化合物能以溶液(例如水溶液)的形式体外应用，和例如以悬浮液或以水溶液的形式肠内、肠胃外(有利地，静脉内)体内应用。体外剂量可以在约10-3摩尔浓度与10-9摩尔浓度之间的范围内。取决于施用途径，体内治疗有效量可以在约0.1-500mg/kg之间，或约0.1-500mg/kg/受试者之间的范围内。
[0337] 本披露的化合物可以与一种或多种其他的治疗剂同时施用或在所述治疗剂之前或之后施用。本披露的化合物可以通过相同或不同的施用途径分开施用，或在与其他药剂
相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，所述治疗剂当与本披露的化合物组合施用至患者时具有治疗活性或增强治疗活性。
相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，所述治疗剂当与本披露的化合物组合施用至患者时具有治疗活性或增强治疗活性。
[0338] 在一个实施例中，本披露提供了包含本披露的化合物和至少一种其他的治疗剂的产品，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。在一个实施例中，所述疗法是经由部分或完全抑制mTOR来治疗疾病或病症。作为组合制剂提供的产品包括组合物，
所述组合物包含本披露的化合物和一起在相同的药物组合物中的一种或多种其他治疗剂，
或本披露的化合物和呈分开形式(例如，呈试剂盒的形式)的一种或多种其他治疗剂。
所述组合物包含本披露的化合物和一起在相同的药物组合物中的一种或多种其他治疗剂，
或本披露的化合物和呈分开形式(例如，呈试剂盒的形式)的一种或多种其他治疗剂。
[0339] 在一个实施例中，本披露提供了药物组合物，所述药物组合物包含本披露的化合物和另一种或多种治疗剂。任选地，所述药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的
载体。
载体。
[0340] 在一个实施例中，本披露提供了包含两种或更多种分开的药物组合物的试剂盒，其中至少一种药物组合物含有本披露的化合物。在一个实施例中，所述试剂盒包含用于单
独保留所述组合物的装置，如容器、分开的瓶、或分开的箔袋。这种试剂盒的实例是如典型地用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装。
独保留所述组合物的装置，如容器、分开的瓶、或分开的箔袋。这种试剂盒的实例是如典型地用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装。
[0342] 在本披露的组合疗法中，本披露的化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商生产和/或配制。此外，可以将本披露的化合物和另一种治疗剂一起形成组合疗法：(i)在向医师发布组合产品(例如，在包含本披露的化合物和另一种治疗剂的试剂盒的情况下)之
前进行；(ii)在施用前不久由医师本人(或在医师指导下)进行；(iii)在患者本身中，例如在顺序施用本披露的化合物和其他治疗剂期间进行。
前进行；(ii)在施用前不久由医师本人(或在医师指导下)进行；(iii)在患者本身中，例如在顺序施用本披露的化合物和其他治疗剂期间进行。
[0343] 因此，本披露提供了本披露的化合物用于经由部分或完全抑制mTOR来预防或治疗疾病或病症的用途，其中制备所述药物用于与另一种治疗剂一起施用。本披露还提供另一
种治疗剂用于预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的用途，其中将药物与本披露
的化合物一起施用。
种治疗剂用于预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的用途，其中将药物与本披露
的化合物一起施用。
[0344] 本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的方法中使用的具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐，其中制备本披露的化合物用于与另一种治疗剂一起施用。本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用
介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治疗剂，其中制备所述其他的治疗剂用于与具有
式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐一起施用。本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的方法中使用的具有式(I)、式(I)-A和式
(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物与另一种治疗剂一起施用。本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治
疗剂，其中所述其他的治疗剂与具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐一起施用。
介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治疗剂，其中制备所述其他的治疗剂用于与具有
式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐一起施用。本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的方法中使用的具有式(I)、式(I)-A和式
(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物与另一种治疗剂一起施用。本披露还提供了用于在预防或治疗由mTOR抑制作用介导的疾病或病症的方法中使用的另一种治
疗剂，其中所述其他的治疗剂与具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐一起施用。
[0345] 本披露还提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于预防或治疗由mTOR介导的疾病或病症的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已经用
另一种治疗剂进行了治疗。本披露还提供了另一种治疗剂用于预防或治疗由mTOR介导的疾
病或病症的用途，其中该患者先前(例如在24小时内)已经用具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐进行了治疗。
另一种治疗剂进行了治疗。本披露还提供了另一种治疗剂用于预防或治疗由mTOR介导的疾
病或病症的用途，其中该患者先前(例如在24小时内)已经用具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐进行了治疗。
[0346] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途。
[0347] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗由mTOR途径介导的障碍或疾病的药物的用途。
[0348] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗障碍或疾病的药物的用途，所述障碍或疾病选自：
[0349] -急性或慢性器官或组织移植排斥；
[0350] -移植血管病变；
[0351] -导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞性冠状动脉粥样硬化、再狭窄的平滑肌细胞增殖和迁移；
[0352] -自身免疫性疾病和炎性病症；
[0353] -哮喘的治疗和预防；
[0354] -多药耐药性(MDR)；
[0355] -真菌感染；
[0356] -炎症；
[0357] -感染；
[0358] -与年龄有关的疾病；
[0359] -神经退行性疾病；
[0360] -增殖性障碍，特别是癌症；
[0361] -癫痫发作和与癫痫发作有关的障碍；
[0362] -线粒体肌病和线粒体应激；以及
[0363] -已显示使与年龄有关的疾病的可能性更高的可治疗的病症，如衰老诱导性细胞因子增加的情况。
[0364] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗包括纤维化或炎症过程的障碍或疾病的药物的用途。
[0365] 在一个实施例中，所述障碍选自肝和肾障碍。
[0366] 在一个实施例中，所述肝障碍选自：发生在终末期肝脏疾病中的肝纤维化；肝硬化；毒性引起的肝衰竭；非酒精相关性肝脂肪变性或NASH；和酒精相关性脂肪变性。
[0367] 在一个实施例中，所述肾障碍是肾纤维化，其发生是急性肾损伤的结果。
[0368] 在一个实施例中，所述肾障碍是慢性肾障碍。
[0369] 在一个实施例中，所述肾障碍是糖尿病性肾病。
[0370] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗与年龄有关的障碍或疾病的药物的用途，所述障碍或疾病选
自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血
压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病
(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
自肌肉减少症、皮肤萎缩、樱桃状血管瘤、脂溢性角化病、脑萎缩-也称作痴呆、动脉粥样硬化、动脉硬化、肺气肿、骨质疏松症、骨关节炎、高血压、勃起功能障碍、白内障、黄斑变性、青光眼、中风、脑血管疾病(中风)、慢性肾脏疾病、糖尿病相关性肾脏疾病、肝功能受损、肝纤维化、自身免疫性肝炎、子宫内膜增生、代谢功能障碍、肾血管疾病、听觉损失、行动不便、认知减退、肌腱僵硬、心脏功能障碍(如心脏肥大和/或收缩和/或舒张功能障碍和/或高血
压)、导致射血分数降低的心脏功能障碍、免疫衰老、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、癌症、由于免疫监视降低导致的致癌免疫衰老、由于免疫功能下降导致的感染、慢性阻塞性肺疾病
(COPD)、肥胖、味觉消失、嗅觉消失、关节炎、和II型糖尿病，包括糖尿病引起的并发症，如肾功能衰竭、失明和神经病。
[0371] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
[0372] 在另一方面，本披露提供了具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗以下癌症的药物的用途：肾癌、肾细胞癌、结肠直肠癌、子宫肉瘤、子宫内膜子宫癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、纤维肉瘤、胰腺癌、肝癌、黑素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、间皮瘤、头癌、横纹肌肉瘤、肉瘤、淋巴瘤、或颈癌。
[0373] 可以提供特定治疗益处的特定个体组合包括化合物
[0374]
[0375] 或其药学上可接受的盐和催化性mTOR抑制剂(特别是如上所述的一种)的组合。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异
噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异
噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0376] 在一个实施例中，本披露提供了产品，所述产品包含化合物
[0377]
[0378] 或其药学上可接受的盐和催化性mTOR抑制剂(特别是如上所述的一种)，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个
实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例
2)或其药学上可接受的盐。
实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例
2)或其药学上可接受的盐。
[0379] 在一个实施例中，本披露提供了药物组合物，所述药物组合物包含化合物
[0380]
[0381] 或其药学上可接受的盐和催化性mTOR抑制剂(特别是如上所述的一种)以及药学上可接受的载体。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0382] 在一个实施例中，所述其他治疗剂选自CD4淋巴细胞耗竭剂，如抗CD4抗体或其抗原结合片段，如人源化抗CD4抗体，例如扎诺利木单抗(zanolimumab)。这种治疗剂可以特别地用于治疗增殖性障碍，特别是癌症。对于这种组合疗法，还参见美国专利号8,906,374和美国专利号9,427,463。
[0383] 可以提供特定治疗益处的特定个体组合包括化合物
[0384]
[0385] 或其药学上可接受的盐和CD4淋巴细胞耗竭剂(特别是如上所述的一种)的组合。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉
素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化
异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化
异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0386] 在一个实施例中，本披露提供了产品，所述产品包含化合物
[0387]
[0388] 或其药学上可接受的盐和CD4淋巴细胞耗竭剂(特别是如上所述的一种)，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。在一个实施例中，所述化合物是(S)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在
一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
(实例2)或其药学上可接受的盐。
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在
一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0389] 在一个实施例中，本披露提供了药物组合物，所述药物组合物包含化合物
[0390]
[0391] 或其药学上可接受的盐和CD4淋巴细胞耗竭剂(特别是如上所述的一种)以及药学上可接受的载体。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0392] 在一个实施例中，所述其他治疗剂选自调节免疫抑制蛋白(如PD-1/PDL-1)的活性的试剂，如抗PD-1抗体或PDL-1抗体。用作这种治疗剂的抗PD-1抗体如美国专利号9,683,
048所披露。这种治疗剂可以用于治疗癌症，特别是用于癌症免疫疗法。
048所披露。这种治疗剂可以用于治疗癌症，特别是用于癌症免疫疗法。
[0393] 可以提供特定治疗益处的特定个体组合包括化合物
[0394]
[0395] 或其药学上可接受的盐和调节免疫抑制蛋白(如PD-1)活性的试剂(特别是如上所述的一种)的组合。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0396] 在一个实施例中，本披露提供了产品，所述产品包含化合物
[0397]
[0398] 或其药学上可接受的盐和调节免疫抑制蛋白(如PD-1)活性的试剂(特别是如上所述的一种)，作为组合制剂用于在疗法中同时的、分开的或顺序的使用。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学
上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-
C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-
C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药学上可接受的盐。
[0399] 在一个实施例中，本披露提供了药物组合物，所述药物组合物包含
[0400]
[0401] 或其药学上可接受的盐和调节免疫抑制蛋白(如PD-1)活性的试剂(特别是如上所述的一种)、以及药学上可接受的载体。在一个实施例中，所述化合物是(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例1)或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，所述化合物是(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(实例2)或其药
学上可接受的盐。
学上可接受的盐。
[0402] 实例
[0403] 本披露设置了以下实例。提供了本申请中描述的合成实例和生物学实例以说明本文所提供的化合物、药物组合物和方法，并且所述实例不应被解释为以任何方式限制其范
围。
围。
[0404] 本文提供的化合物可以使用本领域技术人员熟知的对以下列出的特定合成方案的修饰，由容易获得的起始材料制备。应认识到，除非另有说明，否则在给出典型或优选的工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)的情况下，也可以使用其他工艺条件。最佳反应条件可以随着使用的特定反应物或溶剂而变化，但是此类条件可以由本
领域技术人员通过常规优化程序进行决定。
领域技术人员通过常规优化程序进行决定。
[0405] 此外，正如本领域技术人员将清楚的，常规保护基团对于保护某些官能团免于经受不希望的反应是必需的。选择用于特定官能团的合适的保护基团以及用于保护和脱保护
的合适条件是本领域众所周知的。例如，众多保护基团及其引入和去除，描述于Greene等
人,Protecting Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团],第二版,威利出
版社,纽约,1991，及其中引用的参考文献中。
的合适条件是本领域众所周知的。例如，众多保护基团及其引入和去除，描述于Greene等
人,Protecting Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团],第二版,威利出
版社,纽约,1991，及其中引用的参考文献中。
[0406] 雷帕霉素及其衍生物(例如，具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物)作为溶剂存在，并且以以下显示为E和F(方案4和5)的六元和七元半缩酮形式的pH依赖的平衡存在。参
见The Journal of Antibiotics[抗生素杂志](东京)(1991)44(6):688-90；和
Tetrahedron Letters[四面体快报](1992)33(33):4139-4142。雷帕霉素及其衍生物也以
以下显示的E、H、J和K(方案4和5)的顺式和反式酰胺的混合物形式存在。[参见Mierke,
D.F.,Schmieder,P.,Karuso,P.和Kessler,H.(1991),Conformational Analysis of the
cis-and trans-Isomers of FK506 by NMR and Molecular Dynamics[通过NMR和分子动
力学对FK506的顺式和反式异构体进行构象分析].Helvetica Chimica Acta[瑞士化学学
报],74:1027-1047.]实例中显示的NMR表征数据仅对应于在报道的氘代溶剂条件下观察到
的主要平衡形式。
见The Journal of Antibiotics[抗生素杂志](东京)(1991)44(6):688-90；和
Tetrahedron Letters[四面体快报](1992)33(33):4139-4142。雷帕霉素及其衍生物也以
以下显示的E、H、J和K(方案4和5)的顺式和反式酰胺的混合物形式存在。[参见Mierke,
D.F.,Schmieder,P.,Karuso,P.和Kessler,H.(1991),Conformational Analysis of the
cis-and trans-Isomers of FK506 by NMR and Molecular Dynamics[通过NMR和分子动
力学对FK506的顺式和反式异构体进行构象分析].Helvetica Chimica Acta[瑞士化学学
报],74:1027-1047.]实例中显示的NMR表征数据仅对应于在报道的氘代溶剂条件下观察到
的主要平衡形式。
[0407] 方案4：
[0408]
[0409] 其中：
[0410] R1选自由以下组成的组：羟基，并且
[0411] R2选自由以下组成的组：
[0412]
[0413] 其中
[0414] m是0、1、2或3；
[0415] n是1、2或3；
[0416] o是1、2、3、4、5或6；
[0417] p是1、2、3、4或5；
[0418] q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
[0419] r是2、3或4；
[0420] s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
[0421] X是O、S、NR6或SO2；
[0422] R3是氢、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
[0423] R4是氢且R5是氢、羟基或氰基，或R4和R5一起形成＝O；并且
[0424] R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
[0425] 在一个实施例中，R1是羟基。
[0426] 在一个实施例中，R2是
[0427] 并且n是1、2或3。在一个实施例中，R2是
[0428] 方案5：
[0429]
[0430] 其中：
[0431] R1是 且
[0432] R2选自由以下组成的组：
[0433]
[0434] 其中
[0435] m是0、1、2或3；
[0436] n是1、2或3；
[0437] o是1、2、3、4、5或6；
[0438] p是1、2、3、4或5；
[0439] q是1、2、3、4或5，其中p和q的和是2、3、4、5或6；
[0440] r是2、3或4；
[0441] s是2、3或4，其中r和s的和是4、5或6；
[0442] X是O、S、NR6或SO2；
[0443] R3是氢、C1-6烷基、羟基C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基或苯基C0-6烷基；
[0444] R4是氢且R5是氢、羟基或氰基，或R4和R5一起形成＝O；并且
[0445] R6是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基C0-6烷基、苯基C0-6烷基、C1-6烷基-CO-、C3-8环烷基C0-6烷基-CO-、C1-6烷基-SO2-或C3-8环烷基C0-6烷基-SO2-。
[0446] 在一个实施例中，R2是
[0447] 并且n是1、2或3。在一个实施例中，R2是
[0448] 在一个实施例中，具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物作为溶剂存在，并且以以下显示为E-1和F-1(方案6)的六元和七元半缩酮形式的pH依赖的平衡存在。在一个实施
例中，具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物以顺式和反式酰胺E-1和H-1的混合物存在。
例中，具有式(I)、式(I)-A和式(I)-B的化合物以顺式和反式酰胺E-1和H-1的混合物存在。
[0449] 方案6：
[0450]
[0451] 化合物的制备
[0452] 可以如以下实例中所述制备本披露的化合物。
[0453] 缩写：
[0454] 4-EP 4-乙基吡啶
[0455] AcOH 乙酸
[0456] ACN 乙腈
[0457] Aq 水性
[0458] C 摄氏度
[0459] d 双重峰
[0460] dd 双二重峰
[0461] DCM 二氯甲烷
[0462] DIPEA N,N-二异丙基乙胺
[0463] DMSO 二甲亚砜
[0464] EDTA 乙二胺四乙酸
[0465] ESIMS 电喷雾离子化质谱法
[0466] EtOAc 乙酸乙酯
[0467] EtOH 乙醇
[0468] FA 甲酸
[0469] g 克
[0470] h 小时
[0471] HPLC 高效液相色谱法
[0472] HRMS 高分辨质谱法
[0473] iPrOH 2-丙醇或异丙醇
[0474] L 升
[0475] LC 液相色谱
[0476] LCMS 液相色谱和质谱法
[0477] MeOH 甲醇
[0478] MS 质谱法
[0479] M 摩尔
[0480] m 多重峰
[0481] min 分钟
[0482] mL 毫升
[0483] μM 微摩尔
[0484] m/z 质荷比
[0485] N2 氮气
[0486] nM 纳摩尔
[0487] NMR 核磁共振
[0488] 1HNMR： 质子核磁共振波谱
[0489] PEI 聚乙烯亚胺
[0490] PPU 丙基吡啶基脲
[0491] pTsOH 对甲苯磺酸
[0492] prep 制备型
[0493] rac 外消旋的
[0494] rpm 每分钟转数
[0495] r.t. 室温
[0496] s 单峰
[0497] sat. 饱和的
[0498] SFC 超临界液相色谱法
[0499] t 三重峰
[0500] TCEP 三(2-羧基乙基)膦
[0501] TFA 三氟乙酸
[0502] THF 四氢呋喃
[0503] TLC 薄层色谱法
[0504] vol. 体积
[0505] 实例纯化中使用的方法
[0506] 通过正相或反相色谱进行中间体和终产物的纯化。
[0507] 使用预填充的SiO2筒(例如来自特利丹蒂斯科公司(Teledyne Isco,Inc.)的Rf柱)进行正相色谱，用适当的溶剂系统(例如，己烷和乙酸乙酯；DCM和MeOH；
或除非另有说明)进行梯度洗脱。
或除非另有说明)进行梯度洗脱。
[0508] SFC使用以下描述的方法进行：
[0509] 方法1：Princeton PPU 5μm(100A)柱(30x250 mm)；CO2/MeOH
[0510] 方法2：Princeton 4-EP 5μm(60A)柱(30x250 mm)；CO2/MeOH
[0511] 方法3：Reprospher PEI 5μm(100A)柱(30x250 mm)；CO2/MeOH
[0512] 基于分析性分离法选择梯度。
[0513] 使用以下描述的方法进行反向制备型HPLC：
[0514] 方法1：(Agilent)Phenomenex Luna C18；5μm柱(30x250 mm)；在乙腈中的0.1％甲酸和5％水；在水中的0.1％甲酸和5％乙腈。基于分析性分离法选择梯度。
[0515] 方法2：(EZprep)YMC Actus Triart C18；5μm柱(20x150 mm)；乙腈/水。基于分析性分离法选择梯度。
[0516] 使用以下描述的方法进行手性制备型HPLC：
[0517] 方法1：Chiralpak IC；5μm柱(20x 250mm)；正庚烷/DCM/EtOH
[0518] 方法2：Chiralpak ID；5μm柱(20x 250mm)；正庚烷/DCM/iPrOH
[0519] 基于分析性分离法选择梯度。
[0520] LC/MS方法：
[0521] 柱：Acquity UPLC BEH C18,130Angstrom,1.7uM,2.1mm X 50mm
[0522] 温度：50℃
[0523] 注射：1uL
[0524] 溶剂A：水+5mM氢氧化铵
[0525] 溶剂B：乙腈+5mM氢氧化铵
[0526] 梯度：
[0527] 时间(min) 流速 A％ B％ 曲线初始 1.000 98.0 2.0 初始
4.40 1.0 2.0 98.0 6
5.15 1.0 2.0 98.0 6
5.19 1.0 98.0 2.0 6
4.40 1.0 2.0 98.0 6
5.15 1.0 2.0 98.0 6
5.19 1.0 98.0 2.0 6
[0528] 1H NMR仪器：
[0530] 中间体1至7的制备
[0531] 中间体1：C32-脱氧-雷帕霉素
[0532]
[0533] 中间体1根据文献中已知的方法制备，所述文献包括在美国专利公开号005985890和WO 2007/085400 A1中披露的那些，将这些文献各自通过引用以其全文并入本文。
[0534] 中间体2：RAD001(依维莫司； )
[0535]
[0536] 中间体2根据文献中已知的方法制备，所述文献包括在WO2012103959中披露的那些，将这些文献通过引用以其全文并入本文。
[0537] 中间体3：
[0538]
[0539] 中间体3通过中间体A分两步制备，如下所示：
[0540]
[0541] 步骤1.中间体A的合成
[0542] 在反应小瓶中将2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙醇(0.471g，2.67mmol)溶于无水甲苯(0.95mL)中。将小瓶加盖，然后用氮气真空吹扫。经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.490ml，2.81mmol)。将混合物在冰水浴中冷却至0℃。在0℃下，经约两分钟的时间段逐滴添加三氟甲磺酸酐(Tf2O)(0.438ml，2.59mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分
钟。
钟。
[0543] 将小瓶从冷浴中取出。经由注射器添加DIPEA(0.490ml，2.81mmol)。打开小瓶，并快速一次性添加固体中间体1(0.600g，0.667mmol)。快速将小瓶重新加盖，并将混合物用氮气真空吹扫。添加甲苯(0.5mL)。
[0544] 将反应在40℃在氮气下搅拌过夜。将反应用饱和水性NaHCO3稀释。将淬灭的混合物用EtOAc萃取五次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，通过硅藻土真空过滤并浓缩，得到蜡状白色固体粗产物。
[0545] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-35％丙酮-庚烷，梯度洗脱，40g二氧化硅柱，以35％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出呈玻璃状的所需中间体A(0.245g，
0.231mmol，34.7％产率)，将其立即“按原样”用于下一步骤。
0.231mmol，34.7％产率)，将其立即“按原样”用于下一步骤。
[0546] 中间体A：ESIMS[M+NH4]1076.1，ESIMS[M-H]1056.0。
[0547] 步骤2.中间体3的合成
[0548] 在玻璃反应小瓶中将中间体A(0.135g，0.128mmol)溶于无水THF(1.2mL)。将小瓶加盖，并将混合物用氮气真空吹扫两次。将混合物在冰水浴中冷却至0℃。经30秒的时间段，经由注射器逐滴添加HF-吡啶(0.12mL，1.332mmol)。将反应混合物在0℃搅拌60分钟。
[0549] 将反应混合物逐滴添加到饱和水性NaHCO3溶液中。将淬灭的混合物用EtOAc萃取五次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，通过硅藻土真空过滤并浓缩，得到白色固体粗产物。
[0550] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-50％丙酮-庚烷梯度洗脱，40g二氧化硅柱，以50％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出呈白色固体的中间体3(0.087g，0.092mmol，
72.2％产率)。
72.2％产率)。
[0551] 中间体3：ESIMS[M+NH4]962.0，ESIMS[M-H]943.0
[0552] 1H NMR(400MHz,氯仿-d δ6.46-6.25(m,2H),6.19-6.09(m,1H),5.91(m,1H),5.55(m,1H),5.34-5.26(m,1H),5.26-5.15(m,1H),4.88-4.64(m,2H),4.11(m,1H),3.94-3.82
(m,1H),3.79(m,1H),3.73-3.63(m,3H),3.63-3.47(m,4H),3.45(m,4H),3.33(m,3H),3.28-
3.15(m,2H),3.13(s,3H),3.08(m,1H),2.80(m,1H),2.32(m,3H),2.14(m,2H),2.07-1.94
(m,2H),1.94-1.72(m,5H),1.72-1.56(m,8H),1.56-1.40(m,3H),1.39-1.21(m,7H),1.21-
1.09(m,1H),1.08-0.99(m,8H),0.98-0.83(m,9H),0.73(q,J＝12.0Hz,1H)。
(m,1H),3.79(m,1H),3.73-3.63(m,3H),3.63-3.47(m,4H),3.45(m,4H),3.33(m,3H),3.28-
3.15(m,2H),3.13(s,3H),3.08(m,1H),2.80(m,1H),2.32(m,3H),2.14(m,2H),2.07-1.94
(m,2H),1.94-1.72(m,5H),1.72-1.56(m,8H),1.56-1.40(m,3H),1.39-1.21(m,7H),1.21-
1.09(m,1H),1.08-0.99(m,8H),0.98-0.83(m,9H),0.73(q,J＝12.0Hz,1H)。
[0553] 中间体4：
[0554]
[0555] 将中间体1(0.233g，0.259mmol)与在无水二氯甲烷(2.6mL)中的2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(0.425g，2.071mmol)合并。将反应混合物用氮气真空吹扫一次。将反应混合物在冰水浴中冷却至0℃。一次性添加固体二甲基膦酰氯(0.146g，1.294mmol)。将反应混合物在
0℃搅拌80分钟。
0℃搅拌80分钟。
[0556] 将反应用饱和水性NaHCO3稀释，并用EtOAc萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出无色的焦油粗产物(0.768g)。
[0557] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-80％丙酮-庚烷梯度洗脱，24g二氧化硅柱，以80％EtOAc-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化。合并含产物的级分并浓缩，给出呈白色固体的中间体4(0.087g，0.089mmol，34.4％产率)。
[0558] 中间体4：ESIMS[M+NH4]993.7，ESIMS[M-H]974.7。
[0559] HRMS：计算值：999.5812(作为钠加合物)。实测值：999.5807。
[0560] 1H NMR(600MHz,氯仿-d)δ6.47-6.26(m,2H),6.22-6.08(m,1H),6.02-5.83(m,1H),5.54(m,1H),5.35-5.26(m,1H),5.21(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.12(m,2H),3.93-
3.81(m,1H),3.67(t,J＝7.7Hz,1H),3.62(d,J＝6.7Hz,1H),3.60-3.53(m,1H),3.53-3.44
(m,1H),3.42-3.36(m,3H),3.32(m,3H),3.28-3.18(m,1H),3.13(m,3H),3.05(m,1H),2.82
(m,1H),2.42-2.21(m,3H),2.16-2.08(m,3H),1.99(m,1H),1.95-1.83(m,1H),1.83-1.72
(m,4H),1.71-1.57(m,9H),1.57-1.43(m,12H),1.39(m,1H),1.34-1.20(m,4H),1.20-1.10
(m,1H),1.05(m,4H),1.00(d,J＝6.5Hz,3H),0.95(dd,J＝6.6,2.1Hz,3H),0.92(d,J＝
6.6Hz,3H),0.91-0.84(m,4H),0.77(q,J＝12.1Hz,1H)。
3.81(m,1H),3.67(t,J＝7.7Hz,1H),3.62(d,J＝6.7Hz,1H),3.60-3.53(m,1H),3.53-3.44
(m,1H),3.42-3.36(m,3H),3.32(m,3H),3.28-3.18(m,1H),3.13(m,3H),3.05(m,1H),2.82
(m,1H),2.42-2.21(m,3H),2.16-2.08(m,3H),1.99(m,1H),1.95-1.83(m,1H),1.83-1.72
(m,4H),1.71-1.57(m,9H),1.57-1.43(m,12H),1.39(m,1H),1.34-1.20(m,4H),1.20-1.10
(m,1H),1.05(m,4H),1.00(d,J＝6.5Hz,3H),0.95(dd,J＝6.6,2.1Hz,3H),0.92(d,J＝
6.6Hz,3H),0.91-0.84(m,4H),0.77(q,J＝12.1Hz,1H)。
[0561] 中间体5：
[0562]
[0564] 将干燥的起始材料与在无水二氯甲烷(58mL)中的2,6-二甲基吡啶(1.388ml，11.91mmol)合并。将烧瓶加盖，并将混合物用氮气真空吹扫两次。将混合物在乙腈/干冰浴中冷却至-30C。
[0565] 经四分钟的时间段，经由注射器逐滴添加三氟甲磺酸酐(1.209ml，7.16mmol)。将反应混合物在-30℃搅拌30分钟。将反应混合物转移至0℃的冰水浴中，并在0℃下搅拌20分钟。
[0566] 将反应混合物置于旋转蒸发仪上，并在不加热下浓缩。添加乙酸异丙酯(22mL)。一次性添加四唑(1.170g，16.71mmol)。快速将烧瓶加盖，并用氮气真空吹扫两次。经一分钟的时间段，经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(4.18ml，23.94mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。
[0567] 将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩。将浓缩物通过正相硅胶快速柱色谱法(0至40％丙酮-庚烷梯度洗脱，80g二氧化硅柱，TLC 40％丙酮-庚烷，UV下可见)纯化。
[0568] 合并第二洗脱峰级分(如通过在279nm下的UV吸光度确定)并浓缩，给出呈白色固体的中间体5(2.194g，2.304mmol，47.4％产率)。
[0569] 中间体5：ESIMS[M+NH4]969.8，ESIMS[M-H]950.8。
[0570] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(d,J＝6.4Hz,1H),6.58-6.41(m,2H),6.35-6.14(m,2H),6.09-5.98(m,1H),5.55-5.43(m,1H),5.19(m,1H),5.05(m,1H),5.00-4.93(m,1H),
4.87-4.79(m,1H),4.67-4.56(m,1H),3.98-3.87(m,1H),3.87(d,J＝6.9Hz,1H),3.61(m,
2H),3.55(dd,J＝11.8,1.9Hz,1H),3.49-3.38(m,1H),3.31-3.17(m,4H),3.10(m,4H),3.04
(s,3H),2.88-2.75(m,1H),2.29-2.09(m,3H),2.07-1.86(m,3H),1.88-1.60(m,9H),1.59-
1.44(m,7H),1.43-1.01(m,11H),0.96(t,J＝7.1Hz,5H),0.95-0.77(m,7H),0.72(m,4H)。
4.87-4.79(m,1H),4.67-4.56(m,1H),3.98-3.87(m,1H),3.87(d,J＝6.9Hz,1H),3.61(m,
2H),3.55(dd,J＝11.8,1.9Hz,1H),3.49-3.38(m,1H),3.31-3.17(m,4H),3.10(m,4H),3.04
(s,3H),2.88-2.75(m,1H),2.29-2.09(m,3H),2.07-1.86(m,3H),1.88-1.60(m,9H),1.59-
1.44(m,7H),1.43-1.01(m,11H),0.96(t,J＝7.1Hz,5H),0.95-0.77(m,7H),0.72(m,4H)。
[0571] 中间体6：
[0572]
[0573] 将2-乙氧基乙醇(0.538ml，5.55mmol)合并在无水甲苯(2.0mL)和无水二噁烷(0.22mL)中。经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(1.067ml，6.11mmol)。将反应混合物用氮气真空吹扫。将混合物在冰水浴中冷却至0℃。
[0574] 经两分钟的时间段，经由注射器逐滴添加三氟甲磺酸酐(0.901ml，5.33mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟。除去冷浴，经15分钟使反应平衡至室温。
[0575] 经30秒的时间段，经由注射器逐滴添加N,N-二异丙基乙胺(1.067ml，6.11mmol)。一次性添加中间体1(1.00g，1.111mmol)。快速将反应混合物加盖并用氮气真空吹扫。经由注射器添加无水甲苯(2.0mL)和无水二噁烷(0.22mL)。将反应混合物在55℃搅拌24小时。
[0576] 将反应混合物用盐水稀释并用EtOAc萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出无色的焦油粗产物(4.25g)。
[0577] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-50％丙酮-庚烷梯度洗脱，80g二氧化硅柱，以40％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化。合并含产物的级分并浓缩，给出呈无色玻璃状的中间体6(0.443g，0.456mmol，41.0％产率)。
[0578] 中间体6：ESIMS[M-H]970.9。
[0579] HRMS：计算值-989.6678(作为铵加合物)；实测值-989.6655
[0580] 计算值-994.6232(作为钠加合物)；实测值-994.6215。
[0581] 中间体7：
[0582]
[0583] 中间体7通过中间体B分两步制备，如下所示：
[0584]
[0585] 步骤1.中间体B的合成
[0586] 将2,2,5-三甲基-1,3-二噁烷-5-甲酸(0.400g，2.296mmol)和三乙胺(0.320ml，2.296mmol)合并溶于无水THF(7.6mL)中。将反应混合物冷却至0℃。经由注射器添加2,4,6-三氯苯甲酰氯(0.359ml，2.296mmol)。将反应混合物在0℃搅拌十分钟。除去冷浴，并且将反应在室温下搅拌2.5小时。沉淀出白色固体。
[0587] 将反应混合物通过注射器式滤器过滤。将滤器用THF冲洗(2mL)。合并滤液，并在旋转蒸发仪上浓缩，留下无色焦油。
[0588] 向浓缩物中添加甲苯(7.6mL)。一次性添加中间体1(1.447g，1.607mmol)然后添加4-二甲基氨基吡啶(0.281g，2.296mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。
[0589] 将混合物用水稀释并用EtOAc萃取四次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出黄色的焦油粗产物(2.15g)。
[0590] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-40％丙酮-庚烷梯度洗脱，40g二氧化硅柱，以40％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化。合并含产物的级分并浓缩，给出呈白色泡沫的中间体B(0.438g，0.415mmol，18.1％产率)。
[0591] 中间体B：ESIMS[M+NH4]1074.0，ESIMS[M-H]1055.1。
[0592] 步骤2.中间体7的合成
[0593] 将中间体B(0.431g，0.408mmol)溶于THF(4mL)中。经由注射器添加HCl(1M，水性)(2.0ml，2.00mmol)。将反应在室温搅拌36小时。
[0594] 将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取四次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出淡黄色焦油。将焦油溶于二氯甲烷中，并用庚烷稀释。将混合物浓缩并在高真空下干燥，给出呈白色固体的中间体7(0.407g，0.400mmol，98％产率)。
[0595] 中间体7：ESIMS[M+NH4]1034.0，ESIMS[M-H]1015.0。
[0596] HRMS计算值-1033.6576(作为铵加合物)；实测值-1033.6588
[0597] 计算值-1038.6130(作为钠加合物)；实测值-1038.6138。
[0598] 实例1：(S)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
[0599] 实例2：(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
[0600]
[0601] 向中间体1(2.0g，2.222mmol)和异噻唑烷1,1-二氧化物(4.04g，33.3mmol，15当量)在无水二氯甲烷(5.6mL)中的搅拌溶液中一次性添加对甲苯磺酸·H2O(0.042g，
0.222mmol，0.1当量)。将反应在环境温度下在氮气气氛下搅拌34分钟。将整个反应混合物直接通过二氧化硅进行色谱(从100％庚烷到40％丙酮-庚烷的梯度洗脱)，通过LC/MS分析
通过在279nm处的UV吸光度，给出约3:1的比例的两种非对映异构体的产物混合物。
0.222mmol，0.1当量)。将反应在环境温度下在氮气气氛下搅拌34分钟。将整个反应混合物直接通过二氧化硅进行色谱(从100％庚烷到40％丙酮-庚烷的梯度洗脱)，通过LC/MS分析
通过在279nm处的UV吸光度，给出约3:1的比例的两种非对映异构体的产物混合物。
[0602] 将非对映异构体混合物通过二氧化硅正相色谱法(从100％二氯甲烷到40％乙腈-二氯甲烷的梯度洗脱)分离。
[0603] 第一次洗脱的非对映异构体(在30％乙腈-二氯甲烷中展开的二氧化硅TLC上的Rf约0.23)提供了呈白色固体的实例1(S)-非对映异构体。
[0604] 实例1：ESIMS[M+NH4]1006.7，ESIMS[M-H]987.8。
[0605] 1H NMR(600MHz,氯仿-d δ6.43(dd,J＝14.9,10.4Hz,1H),6.35(dd,J＝14.9,10.7Hz,1H),6.16(dd,J＝15.1,10.2Hz,1H),6.06-6.01(m,1H),5.67(dd,J＝15.2,8.6Hz,
1H),5.35(dd,J＝6.4,1.8Hz,1H),5.26(d,J＝9.6Hz,1H),4.83(td,J＝6.6,4.7Hz,1H),
4.12(d,J＝7.4Hz,1H),3.88(dd,J＝11.1,5.1Hz,1H),3.84-3.77(m,1H),3.63-3.60(m,
2H),3.51(d,J＝7.5Hz,1H),3.46(s,3H),3.45-3.42(m,3H),3.35(s,3H),3.29-3.14(m,
3H),3.06-2.96(m,2H),2.93(ddd,J＝10.4,6.4,1.5Hz,1H),2.44(tt,J＝8.6,6.2Hz,1H),
2.37-2.23(m,4H),2.22-2.14(m,2H),2.03(dt,J＝12.3,3.8Hz,1H),1.96(pd,J＝6.4,5.7,
3.5Hz,2H),1.92-1.82(m,3H),1.80-1.76(m,2H),1.75(d,J＝1.2Hz,4H),1.72(d,J＝
3.1Hz,1H),1.68(d,J＝1.3Hz,3H),1.65-1.53(m,4H),1.48-1.17(m,9H),1.07(d,J＝
6.5Hz,1H),1.06(s,3H),1.04(d,J＝7.3Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H),0.99(dd,J＝6.7,
2.3Hz,3H),0.95(d,J＝6.8Hz,3H),0.74(q,J＝11.9Hz,1H)。
1H),5.35(dd,J＝6.4,1.8Hz,1H),5.26(d,J＝9.6Hz,1H),4.83(td,J＝6.6,4.7Hz,1H),
4.12(d,J＝7.4Hz,1H),3.88(dd,J＝11.1,5.1Hz,1H),3.84-3.77(m,1H),3.63-3.60(m,
2H),3.51(d,J＝7.5Hz,1H),3.46(s,3H),3.45-3.42(m,3H),3.35(s,3H),3.29-3.14(m,
3H),3.06-2.96(m,2H),2.93(ddd,J＝10.4,6.4,1.5Hz,1H),2.44(tt,J＝8.6,6.2Hz,1H),
2.37-2.23(m,4H),2.22-2.14(m,2H),2.03(dt,J＝12.3,3.8Hz,1H),1.96(pd,J＝6.4,5.7,
3.5Hz,2H),1.92-1.82(m,3H),1.80-1.76(m,2H),1.75(d,J＝1.2Hz,4H),1.72(d,J＝
3.1Hz,1H),1.68(d,J＝1.3Hz,3H),1.65-1.53(m,4H),1.48-1.17(m,9H),1.07(d,J＝
6.5Hz,1H),1.06(s,3H),1.04(d,J＝7.3Hz,3H),1.01(d,J＝6.6Hz,3H),0.99(dd,J＝6.7,
2.3Hz,3H),0.95(d,J＝6.8Hz,3H),0.74(q,J＝11.9Hz,1H)。
[0606] 第二次洗脱的非对映异构体(在30％乙腈-二氯甲烷中展开的二氧化硅TLC上的Rf约0.16)提供了呈白色固体的实例2(R)-非对映异构体
[0607] 实例2：ESIMS[M+NH4]1006.9，ESIMS[M-H]988.1。
[0608] 1H NMR(氯仿-d δ6.48(dd,J＝14.7,10.9Hz,1H),6.24(dd,J＝14.6,10.6Hz,1H),6.16(dd,J＝14.9,10.6Hz,1H),6.01(d,J＝11.0Hz,1H),5.38(dd,J＝14.9,9.8Hz,1H),
5.23(dd,J＝6.2,2.0Hz,1H),5.12(d,J＝9.9Hz,1H),4.73(dd,J＝12.1,2.9Hz,1H),4.65
(dt,J＝8.3,3.9Hz,1H),4.14(d,J＝6.7Hz,1H),3.97(m,1H),3.74(d,J＝6.7Hz,1H),3.62
(qd,J＝13.9,12.7,5.5Hz,2H),3.42(s,3H),3.39(m,1H),3.31(s,3H),3.24(ddd,J＝12.2,
7.5,4.6Hz,1H),3.10(td,J＝8.2,3.8Hz,1H),3.08(s,1H),3.02-2.97(m,1H),2.97-2.92
(m,1H),2.83-2.71(m,1H),2.42(ddt,J＝13.1,9.5,6.4Hz,1H),2.34(d,J＝4.3Hz,1H),
2.31(s,1H),2.28-2.23(m,1H),2.22-2.19(m,1H),2.19(s,2H),2.12-2.08(m,2H),2.03-
1.99(m,1H),1.90(s,3H),1.88(s,1H),1.79(s,1H),1.77(s,1H),1.76(s,1H),1.72-1.68
(m,1H),1.48(s,1H),1.46(s,1H),1.40(d,J＝3.0Hz,1H),1.38(s,1H),1.66(d,J＝3.0Hz,
2H),1.64(d,J＝2.9Hz,1H),1.62(s,2H),1.62(s,2H),1.58-1.53(m,1H),1.37(s,1H),1.36
(d,J＝2.3Hz,1H),1.33(d,J＝2.9Hz,1H),1.30(dd,J＝6.7,1.8Hz,1H),1.28(s,2H),1.28
(s,2H),1.24(s,1H),1.09(s,1H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H),1.01(d,J
＝3.2Hz,1H),0.95(d,J＝6.8Hz,3H),0.92(s,1H),0.92-0.90(m,3H),0.88(d,J＝6.8Hz,
2H),0.66(q,J＝12.0Hz,1H)
5.23(dd,J＝6.2,2.0Hz,1H),5.12(d,J＝9.9Hz,1H),4.73(dd,J＝12.1,2.9Hz,1H),4.65
(dt,J＝8.3,3.9Hz,1H),4.14(d,J＝6.7Hz,1H),3.97(m,1H),3.74(d,J＝6.7Hz,1H),3.62
(qd,J＝13.9,12.7,5.5Hz,2H),3.42(s,3H),3.39(m,1H),3.31(s,3H),3.24(ddd,J＝12.2,
7.5,4.6Hz,1H),3.10(td,J＝8.2,3.8Hz,1H),3.08(s,1H),3.02-2.97(m,1H),2.97-2.92
(m,1H),2.83-2.71(m,1H),2.42(ddt,J＝13.1,9.5,6.4Hz,1H),2.34(d,J＝4.3Hz,1H),
2.31(s,1H),2.28-2.23(m,1H),2.22-2.19(m,1H),2.19(s,2H),2.12-2.08(m,2H),2.03-
1.99(m,1H),1.90(s,3H),1.88(s,1H),1.79(s,1H),1.77(s,1H),1.76(s,1H),1.72-1.68
(m,1H),1.48(s,1H),1.46(s,1H),1.40(d,J＝3.0Hz,1H),1.38(s,1H),1.66(d,J＝3.0Hz,
2H),1.64(d,J＝2.9Hz,1H),1.62(s,2H),1.62(s,2H),1.58-1.53(m,1H),1.37(s,1H),1.36
(d,J＝2.3Hz,1H),1.33(d,J＝2.9Hz,1H),1.30(dd,J＝6.7,1.8Hz,1H),1.28(s,2H),1.28
(s,2H),1.24(s,1H),1.09(s,1H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H),1.01(d,J
＝3.2Hz,1H),0.95(d,J＝6.8Hz,3H),0.92(s,1H),0.92-0.90(m,3H),0.88(d,J＝6.8Hz,
2H),0.66(q,J＝12.0Hz,1H)
[0609] 实例1和实例2中的C16取代基的绝对构型通过与FKBP12的X射线晶体学共结晶来确定。[参见Stuart L.Schrieber和Jon Clardy等人,Atomic Structure of the
Rapamycin Humano Immunophilin FKBP-12Complex[雷帕霉素人免疫亲和蛋白FKBP-12复
合物的原子结构],J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会会志],1991,113,7433-7434。]晶体结构
在图1A和1B以及图2A和2B中示出。
Rapamycin Humano Immunophilin FKBP-12Complex[雷帕霉素人免疫亲和蛋白FKBP-12复
合物的原子结构],J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会会志],1991,113,7433-7434。]晶体结构
在图1A和1B以及图2A和2B中示出。
[0610] 将纯的FKBP12(1-108)蛋白在50mM Tris pH 8.0、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM TCEP中浓缩至9mg/mL。通过将所述蛋白与3mM的化合物(来自在90％dDMSO和10％D2O中制备
的50mM储备液)混合来制备用于共结晶的复合物。将复合物在4℃下孵育两小时，然后在结
晶之前以10000rpm离心2分钟以除去任何潜在的沉淀。在20℃下并通过使用微晶种基质筛
选进行的坐滴蒸汽扩散法获得共晶[Allan D’Arcy等人,An automated microseed
matrix-screening method for protein crystallization[用于蛋白质结晶的自动化微
晶种基质筛选方法],Acta Cryst[晶体学报],(2007)D63,550-554.]液滴由200nL的蛋白质
溶液、160nL的孔溶液和40nL的种子储备液组成。在可商购自凯杰公司(Qiagen)的“硫酸铵”筛的A1条件下，几天之内出现了晶体。储液由2.2M硫酸铵组成。将晶体在补充有20％乙二醇的储液中进行冷冻保护，然后快速冷冻到液氮中。数据是通过光束线X10SA在瑞士光源设施(SLS，Villigen，瑞士)上收集的。
的50mM储备液)混合来制备用于共结晶的复合物。将复合物在4℃下孵育两小时，然后在结
晶之前以10000rpm离心2分钟以除去任何潜在的沉淀。在20℃下并通过使用微晶种基质筛
选进行的坐滴蒸汽扩散法获得共晶[Allan D’Arcy等人,An automated microseed
matrix-screening method for protein crystallization[用于蛋白质结晶的自动化微
晶种基质筛选方法],Acta Cryst[晶体学报],(2007)D63,550-554.]液滴由200nL的蛋白质
溶液、160nL的孔溶液和40nL的种子储备液组成。在可商购自凯杰公司(Qiagen)的“硫酸铵”筛的A1条件下，几天之内出现了晶体。储液由2.2M硫酸铵组成。将晶体在补充有20％乙二醇的储液中进行冷冻保护，然后快速冷冻到液氮中。数据是通过光束线X10SA在瑞士光源设施(SLS，Villigen，瑞士)上收集的。
[0611] 将数据用XDS处理(Kabsch,W.(2010),XDS.Acta Cryst.[晶体学报]D,66:125-132)。使用先前的FKBP12 X射线结构作为搜索模型，通过分子置换法确定结构
(Collaborative Computational Project[协同计算项目],第4期,(1994)Acta Cryst.[晶
体学报]D50,760-763)。程序REFMAC(Murshudov GN,Skubák P,Lebedev AA等人,REFMAC5
for the refinement of macromolecular crystal structures[REFMAC5用于精制大分子
晶体结构].Acta Crystallographica Section D:Biological Crystallography[晶体学
报，部分D：生物晶体学].2011；67(Pt 4):355-367)和COOT(Emsley P,Lohkamp B,Scott
WG,Cowtan K.Features and development of Coot[Coot的特征和发展],Acta
Crystallographica Section D:Biological Crystallography[晶体学报，部分D：生物晶
体学].2010；66(Pt 4):486-501)被用于精制和模型(重新)构建。
(Collaborative Computational Project[协同计算项目],第4期,(1994)Acta Cryst.[晶
体学报]D50,760-763)。程序REFMAC(Murshudov GN,Skubák P,Lebedev AA等人,REFMAC5
for the refinement of macromolecular crystal structures[REFMAC5用于精制大分子
晶体结构].Acta Crystallographica Section D:Biological Crystallography[晶体学
报，部分D：生物晶体学].2011；67(Pt 4):355-367)和COOT(Emsley P,Lohkamp B,Scott
WG,Cowtan K.Features and development of Coot[Coot的特征和发展],Acta
Crystallographica Section D:Biological Crystallography[晶体学报，部分D：生物晶
体学].2010；66(Pt 4):486-501)被用于精制和模型(重新)构建。
[0612] 在以下实例中，C16取代基的绝对立体化学不是通过X射线共结晶确定的，且是未知的。在一些实例中，仅分离和表征了反应中的主要非对映异构体产物。在其他实例中，在没有绝对立体化学分配的情况下分离和表征了每种非对映异构体。
[0614]
[0615] *未指定C16的绝对立体化学
[0616] 向中间体1(130mg，0.144mmol，1.0当量)和氮杂环丁烷-2-酮(205mg，2.89mmol，20当量)在乙腈(3mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(82mg，0.433mmol，3当量)。将反应混合物在室温搅拌15min，然后用H2O稀释，并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将粗产物通过制备型HPLC色谱法(方法1)纯化，然后通过SFC纯化(方法1)，给出呈白色固体的实例3(2.5mg，1.7％产率)。
[0617] 实例3：ESIMS[M-H]938.0
[0618] 准确质量：938.59
[0619] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6 δ6.45(dd,J＝14.0,11.0Hz,1H),6.28-6.11(m,2H),5.98(d,J＝10.9Hz,1H),5.95-5.85(m,1H),5.50(dd,J＝14.2,9.5Hz,1H),5.06(d,J＝4.7Hz,
1H),5.02-4.97(m,1H),4.94(d,J＝9.8Hz,1H),4.63-4.53(m,2H),4.34-4.22(m,1H),3.99-
3.92(m,1H),3.84-3.74(m,1H),3.61-3.53(m,1H),3.49(d,J＝7.3Hz,1H),3.46-3.39(m,
1H),3.37-3.25(m,3H),3.22-3.12(m,4H),3.10-3.04(m,1H),3.04-2.95(m,1H),2.92-2.65
(m,4H),2.27-2.11(m,2H),2.10-1.99(m,2H),1.96-1.87(m,1H),1.84-1.70(m,5H),1.69-
1.37(m,15H),1.37-1.05(m,8H),1.03-0.93(m,4H),0.90(d,J＝6.4Hz,3H),0.88-0.83(m,
5H),0.79(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝6.7Hz,3H),0.59(q,J＝11.8Hz,1H)。
1H),5.02-4.97(m,1H),4.94(d,J＝9.8Hz,1H),4.63-4.53(m,2H),4.34-4.22(m,1H),3.99-
3.92(m,1H),3.84-3.74(m,1H),3.61-3.53(m,1H),3.49(d,J＝7.3Hz,1H),3.46-3.39(m,
1H),3.37-3.25(m,3H),3.22-3.12(m,4H),3.10-3.04(m,1H),3.04-2.95(m,1H),2.92-2.65
(m,4H),2.27-2.11(m,2H),2.10-1.99(m,2H),1.96-1.87(m,1H),1.84-1.70(m,5H),1.69-
1.37(m,15H),1.37-1.05(m,8H),1.03-0.93(m,4H),0.90(d,J＝6.4Hz,3H),0.88-0.83(m,
5H),0.79(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝6.7Hz,3H),0.59(q,J＝11.8Hz,1H)。
[0620] 实例4：C16-(3-甲基咪唑烷-2-酮-1-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
[0621]
[0622] *未指定C16的绝对立体化学
[0623] 向中间体1(100mg，0.111mmol，1.0当量)和1-甲基咪唑烷-2-酮(167mg，1.66mmol，15当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(63mg，0.333mmol，3当量)。将反应混合物在室温搅拌24h。将混合物用H2O稀释并用DCM萃取。减压蒸发有机萃取物。将粗产物通过制备型HPLC色谱法(方法1)纯化，得到呈白色固体的实例4(9.0mg，8％产率)。
[0624] 实例4：ESIMS[M-H]966.5
[0625] 准确质量：967.61
[0626] 1H NMR(600MHz,DMSO-d6δ0.59(q,J＝11.9Hz,1H),0.74(d,J＝6.7Hz,3H),0.79(d,J＝6.7Hz,3H),0.80-0.90(m,8H),0.92-1.00(m,4H),1.04-1.10(m,1H),1.12-1.34(m,7H),
1.34-1.67(m,14H),1.69(s,3H),1.71-1.78(m,2H),1.88-1.94(m,1H),1.96-2.08(m,3H),
2.10-2.25(m,2H),2.60-2.69(m,4H),2.80-2.94(m,2H),3.07-3.20(m,5H),3.21-3.26(m,
2H),3.33(s,3H),3.41-3.48(m,1H),3.56-3.66(m,3H),3.99(dd,J＝6.5,3.5Hz,1H),4.53-
4.63(m,3H),4.95-5.00(m,2H),5.07(d,J＝4.8Hz,1H),5.35(s,1H),5.45(dd,J＝14.9,
9.8Hz,1H),5.98(d,J＝11.0Hz,1H),6.15(dd,J＝14.8,10.7Hz,1H),6.23(dd,J＝14.6,
10.7Hz,1H),6.44(dd,J＝14.6,11.0Hz,1H)。
1.34-1.67(m,14H),1.69(s,3H),1.71-1.78(m,2H),1.88-1.94(m,1H),1.96-2.08(m,3H),
2.10-2.25(m,2H),2.60-2.69(m,4H),2.80-2.94(m,2H),3.07-3.20(m,5H),3.21-3.26(m,
2H),3.33(s,3H),3.41-3.48(m,1H),3.56-3.66(m,3H),3.99(dd,J＝6.5,3.5Hz,1H),4.53-
4.63(m,3H),4.95-5.00(m,2H),5.07(d,J＝4.8Hz,1H),5.35(s,1H),5.45(dd,J＝14.9,
9.8Hz,1H),5.98(d,J＝11.0Hz,1H),6.15(dd,J＝14.8,10.7Hz,1H),6.23(dd,J＝14.6,
10.7Hz,1H),6.44(dd,J＝14.6,11.0Hz,1H)。
[0627] 实例5：C16-(2-羟基乙基)-2-氧代咪唑烷-1-基)-C32-脱氧-雷帕霉素
[0628]
[0629] *未指定C16的绝对立体化学
[0630] 向中间体1(100mg，0.111mmol，1.0当量)和1-(2-羟基乙基)咪唑烷-2-酮(289mg，1.66mmol，15当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸一水合物(119mg，0.626mmol，
3当量)。将反应在室温搅拌过夜。将反应用H2O稀释并用DCM萃取。减压蒸发有机萃取物。将粗产物通过制备型HPLC色谱法(方法1)然后通过手性制备型HPLC(方法2)纯化，产出呈白色
固体的实例5(13.7mg，12％产率)。
3当量)。将反应在室温搅拌过夜。将反应用H2O稀释并用DCM萃取。减压蒸发有机萃取物。将粗产物通过制备型HPLC色谱法(方法1)然后通过手性制备型HPLC(方法2)纯化，产出呈白色
固体的实例5(13.7mg，12％产率)。
[0631] 实例5：ESIMS[M+H]998.5
[0632] 准确质量：997.62
[0633] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6 δ6.45(dd,J＝14.3,11.0Hz,1H),6.23(dd,J＝14.3,10.6Hz,1H),6.14(dd,J＝14.6,10.6Hz,1H),5.98(d,J＝10.9Hz,1H),5.44(dd,J＝14.5,
9.8Hz,1H),5.28(s,1H),5.07(d,J＝4.7Hz,1H),5.02-4.96(m,2H),4.67(t,J＝5.3Hz,1H),
4.64-4.53(m,3H),4.03-3.96(m,1H),3.71-3.57(m,3H),3.52-3.42(m,2H),3.42-3.29(m,
6H),3.22-3.07(m,7H),2.95-2.79(m,2H),2.71-2.56(m,1H),2.27-1.87(m,6H),1.80-1.36
(m,20H),1.36-1.12(m,6H),1.11-1.02(m,1H),1.00-0.91(m,4H),0.91-0.76(m,11H),0.74
(d,J＝6.7Hz,3H),0.59(q,J＝11.9Hz,1H)。
9.8Hz,1H),5.28(s,1H),5.07(d,J＝4.7Hz,1H),5.02-4.96(m,2H),4.67(t,J＝5.3Hz,1H),
4.64-4.53(m,3H),4.03-3.96(m,1H),3.71-3.57(m,3H),3.52-3.42(m,2H),3.42-3.29(m,
6H),3.22-3.07(m,7H),2.95-2.79(m,2H),2.71-2.56(m,1H),2.27-1.87(m,6H),1.80-1.36
(m,20H),1.36-1.12(m,6H),1.11-1.02(m,1H),1.00-0.91(m,4H),0.91-0.76(m,11H),0.74
(d,J＝6.7Hz,3H),0.59(q,J＝11.9Hz,1H)。
[0634] 实例6：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(非对映异构体1)
[0635] 实例7：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-雷帕霉素(非对映异构体2)
[0636]
[0637] *未指定C16的绝对立体化学
[0638] 非对映异构体1：在0℃下向中间体1(150mg，0.167mmol，1.0当量)和1,2-硫杂氮杂环丁烷1,1-二氧化物(89mg，0.833mmol，5当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加氯化锌(II)(在二乙醚中的1M溶液，0.5mL，0.500mmol，3当量)。将反应混合物在室温搅拌2h。将混合物用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过快速色谱法(二氧化硅；MeCN/DCM 0:100至100:0)分离。
[0639] 通过制备型HPLC(方法2)最终纯化第一洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例6(18mg，10.7％产率)。
[0640] 实例6：ESIMS[M+NH4]992.6，[M+FA-H]1019.6。
[0641] 准确质量：974.55
[0642] 1H NMR(400MHz,氯仿-d δ6.39(dd,J＝14.8,9.8Hz,1H),6.34(dd,J＝14.8,10.3Hz,1H),6.18-6.10(m,1H),6.02(d,J＝10.3,1.5Hz,1H),5.66(dd,J＝15.1,8.6Hz,
1H),5.38(s,1H),5.32(dd,J＝6.4,1.8Hz,1H),5.23(d,J＝9.6Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),
4.12-4.06(m,1H),3.99(ddd,J＝12.0,8.2,6.2Hz,1H),3.92-3.86(m,1H),3.84(dd,J＝
10.7,4.4Hz,1H),3.81-3.74(m,1H),3.63-3.59(m,2H),3.59(d,J＝3.6Hz,1H),3.46(d,J＝
7.6Hz,1H),3.43(s,3H),3.40-3.37(m,1H),3.32(s,3H),3.04(ddd,J＝8.2,5.8,3.8Hz,
1H),3.00-2.94(m,1H),2.94-2.89(m,1H),2.88-2.84(m,1H),2.64(d,J＝6.7Hz,1H),2.47-
2.38(m,1H),2.36-2.27(m,2H),2.21-2.12(m,1H),2.03-1.97(m,1H),1.95-1.77(m,7H),
1.76-1.67(m,5H),1.65(s,3H),1.60-1.50(m,6H),1.47-1.39(m,2H),1.38-1.27(m,4H),
1.25-1.10(m,3H),1.08-1.04(m,1H),1.03-1.01(m,3H),1.00(d,J＝1.4Hz,3H),0.99-0.97
(m,3H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H),0.75-0.66(m,1H)。
1H),5.38(s,1H),5.32(dd,J＝6.4,1.8Hz,1H),5.23(d,J＝9.6Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),
4.12-4.06(m,1H),3.99(ddd,J＝12.0,8.2,6.2Hz,1H),3.92-3.86(m,1H),3.84(dd,J＝
10.7,4.4Hz,1H),3.81-3.74(m,1H),3.63-3.59(m,2H),3.59(d,J＝3.6Hz,1H),3.46(d,J＝
7.6Hz,1H),3.43(s,3H),3.40-3.37(m,1H),3.32(s,3H),3.04(ddd,J＝8.2,5.8,3.8Hz,
1H),3.00-2.94(m,1H),2.94-2.89(m,1H),2.88-2.84(m,1H),2.64(d,J＝6.7Hz,1H),2.47-
2.38(m,1H),2.36-2.27(m,2H),2.21-2.12(m,1H),2.03-1.97(m,1H),1.95-1.77(m,7H),
1.76-1.67(m,5H),1.65(s,3H),1.60-1.50(m,6H),1.47-1.39(m,2H),1.38-1.27(m,4H),
1.25-1.10(m,3H),1.08-1.04(m,1H),1.03-1.01(m,3H),1.00(d,J＝1.4Hz,3H),0.99-0.97
(m,3H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H),0.75-0.66(m,1H)。
[0643] 使用SFC色谱法(方法2)最终纯化第二洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例7(15.8mg，9.2％产率)。
[0644] 实例7：ESIMS[M+NH4]992.7，[M+FA-H]1019.6
[0645] 准确质量：974.55
[0646] 1H NMR(400MHz,氯仿-d δ6.46(dd,J＝14.2,10.9Hz,1H),6.22(dd,J＝14.2,10.6Hz,1H),6.14(dd,J＝14.5,10.6Hz,1H),6.00(d,J＝10.9Hz,1H),5.38(dd,J＝14.5,
9.6Hz,1H),5.27-5.19(m,1H),5.12-5.05(m,1H),4.66-4.59(m,1H),4.59-4.53(m,1H),
4.25(d,J＝1.8Hz,1H),4.17-4.06(m,3H),4.02(ddd,J＝11.8,8.0,3.5Hz,1H),3.66(d,J＝
7.0Hz,1H),3.60-3.52(m,2H),3.43-3.34(m,4H),3.28(s,3H),3.17-3.07(m,1H),3.03-
2.95(m,1H),2.95-2.89(m,1H),2.84-2.73(m,1H),2.65-2.62(m,1H),2.35-2.26(m,1H),
2.27-2.21(m,1H),2.21-2.12(m,3H),2.12-2.05(m,1H),2.02-1.98(m,1H),1.97-1.95(m,
3H),1.91-1.83(m,1H),1.82-1.70(m,3H),1.70-1.51(m,10H),1.50-1.17(m,10H),1.11-
1.06(m,1H),1.06-1.02(m,6H),1.01-0.96(m,1H),0.93(d,J＝6.8Hz,4H),0.89(d,J＝
6.6Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.64(q,J＝11.9Hz,1H)。
9.6Hz,1H),5.27-5.19(m,1H),5.12-5.05(m,1H),4.66-4.59(m,1H),4.59-4.53(m,1H),
4.25(d,J＝1.8Hz,1H),4.17-4.06(m,3H),4.02(ddd,J＝11.8,8.0,3.5Hz,1H),3.66(d,J＝
7.0Hz,1H),3.60-3.52(m,2H),3.43-3.34(m,4H),3.28(s,3H),3.17-3.07(m,1H),3.03-
2.95(m,1H),2.95-2.89(m,1H),2.84-2.73(m,1H),2.65-2.62(m,1H),2.35-2.26(m,1H),
2.27-2.21(m,1H),2.21-2.12(m,3H),2.12-2.05(m,1H),2.02-1.98(m,1H),1.97-1.95(m,
3H),1.91-1.83(m,1H),1.82-1.70(m,3H),1.70-1.51(m,10H),1.50-1.17(m,10H),1.11-
1.06(m,1H),1.06-1.02(m,6H),1.01-0.96(m,1H),0.93(d,J＝6.8Hz,4H),0.89(d,J＝
6.6Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.64(q,J＝11.9Hz,1H)。
[0647] 实例8：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(2-羟基乙氧基)-雷帕霉素(非对映异构体1)
[0648] 实例9：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(2-羟基乙氧基)-雷帕霉素(非对映异构体2)
[0649]
[0650] *未指定C16的绝对立体化学
[0651] 向中间体3(50mg，0.053mmol，1.0当量)和1,2-硫杂氮杂环丁烷1,1-二氧化物(56.7mg，0.530mmol，10当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加氯化锌(II)(在二乙醚中的1M溶
液，0.265mL，0.265mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过快速色谱法
(二氧化硅；MeCN/DCM 0:100至100:0)分离。
液，0.265mL，0.265mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过快速色谱法
(二氧化硅；MeCN/DCM 0:100至100:0)分离。
[0652] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第一洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例8(3.1mg，5.5％产率)。
[0653] 实例8：ESIMS[M+NH4]1037.0，[M+FA-H]1064.1
[0654] 准确质量：1018.58
[0655] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:6.53-6.44(m,1H),6.41(dd,J＝11.0,5.6Hz,1H),6.29-6.14(m,2H),6.07(dd,J＝11.0,1.5Hz,1H),5.54(dd,J＝14.6,9.1Hz,1H),5.06(d,J
＝8.9Hz,1H),4.99-4.93(m,1H),4.92-4.83(m,1H),4.70-4.60(m,1H),4.49-4.42(m,1H),
4.13-4.02(m,3H),3.92-3.86(m,1H),3.69-3.64(m,1H),3.59-3.54(m,1H),3.52-3.42(m,
5H),3.33(s,3H),3.30-3.27(m,1H),3.13(s,3H),3.10-3.02(m,2H),3.02-2.94(m,2H),
2.90-2.80(m,1H),2.30-2.21(m,1H),2.21-2.10(m,1H),2.10-2.00(m,2H),2.00-1.87(m,
3H),1.82(s,3H),1.81-1.62(m,6H),1.58-1.54(m,1H),1.53-1.47(m,5H),1.47-1.35(m,
5H),1.36-1.23(m,2H),1.23-1.09(m,4H),1.06-1.01(m,1H),1.01-0.95(m,6H),0.90-0.87
(m,1H),0.87-0.83(m,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H),0.76-0.70(m,4H),0.68-0.60(m,1H)。
＝8.9Hz,1H),4.99-4.93(m,1H),4.92-4.83(m,1H),4.70-4.60(m,1H),4.49-4.42(m,1H),
4.13-4.02(m,3H),3.92-3.86(m,1H),3.69-3.64(m,1H),3.59-3.54(m,1H),3.52-3.42(m,
5H),3.33(s,3H),3.30-3.27(m,1H),3.13(s,3H),3.10-3.02(m,2H),3.02-2.94(m,2H),
2.90-2.80(m,1H),2.30-2.21(m,1H),2.21-2.10(m,1H),2.10-2.00(m,2H),2.00-1.87(m,
3H),1.82(s,3H),1.81-1.62(m,6H),1.58-1.54(m,1H),1.53-1.47(m,5H),1.47-1.35(m,
5H),1.36-1.23(m,2H),1.23-1.09(m,4H),1.06-1.01(m,1H),1.01-0.95(m,6H),0.90-0.87
(m,1H),0.87-0.83(m,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H),0.76-0.70(m,4H),0.68-0.60(m,1H)。
[0656] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第二洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例9(2.8mg，4.9％产率)。
[0657] 实例9：ESIMS[M+NH4]1037.2，[M+FA-H]1064.3
[0658] 准确质量：1018.58
[0659] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:6.48-6.40(m,1H),6.27-6.19(m,1H),6.19-6.13(m,1H),6.10-6.05(m,1H),5.52(dd,J＝14.2,9.3Hz,1H),5.13-5.00(m,2H),4.96(d,J＝
9.4Hz,1H),4.67-4.57(m,1H),4.48-4.40(m,1H),4.17-4.10(m,2H),4.10-4.02(m,2H),
3.98-3.90(m,1H),3.56-3.49(m,2H),3.50-3.43(m,4H),3.37(d,J＝11.2Hz,1H),3.33(s,
3H),3.23-3.15(m,1H),3.15-3.10(m,4H),3.07-2.95(m,2H),2.75-2.64(m,1H),2.27-2.14
(m,2H),2.11-2.00(m,2H),2.00-1.89(m,3H),1.82(s,3H),1.76-1.65(m,2H),1.65-1.56
(m,3H),1.56-1.49(m,7H),1.48-1.36(m,3H),1.34-1.23(m,3H),1.23-1.04(m,5H),1.01-
0.94(m,4H),0.90(d,J＝6.4Hz,3H),0.88-0.83(m,5H),0.80(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝
6.7Hz,3H),0.62(q,J＝11.8Hz,1H)。
9.4Hz,1H),4.67-4.57(m,1H),4.48-4.40(m,1H),4.17-4.10(m,2H),4.10-4.02(m,2H),
3.98-3.90(m,1H),3.56-3.49(m,2H),3.50-3.43(m,4H),3.37(d,J＝11.2Hz,1H),3.33(s,
3H),3.23-3.15(m,1H),3.15-3.10(m,4H),3.07-2.95(m,2H),2.75-2.64(m,1H),2.27-2.14
(m,2H),2.11-2.00(m,2H),2.00-1.89(m,3H),1.82(s,3H),1.76-1.65(m,2H),1.65-1.56
(m,3H),1.56-1.49(m,7H),1.48-1.36(m,3H),1.34-1.23(m,3H),1.23-1.04(m,5H),1.01-
0.94(m,4H),0.90(d,J＝6.4Hz,3H),0.88-0.83(m,5H),0.80(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝
6.7Hz,3H),0.62(q,J＝11.8Hz,1H)。
[0660] 实例10：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-二甲基氧膦基-雷帕霉素(非对映异构体1)
[0661] 实例11：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-二甲基氧膦基-雷帕霉素(非对映异构体2)
[0662]
[0663] *未指定C16的绝对立体化学
[0664] 向中间体4(100mg，0.102mmol，1.0当量)和1,2-硫杂氮杂环丁烷1,1-二氧化物(54.9mg，0.512mmol，5当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加氯化锌(II)(在二乙醚中的1M溶
液，0.512mL，0.512mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过SFC色谱法
(方法3)分离。
液，0.512mL，0.512mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过SFC色谱法
(方法3)分离。
[0665] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第一洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例10(20.7mg，18.8％产率)。
[0666] 实例10：ESIMS[M+H]1051.9，[M+FA-H]1096.0
[0667] 准确质量：1050.56
[0668] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6 δ6.49-6.39(m,2H),6.30-6.14(m,2H),6.11-6.01(m,1H),5.60-5.50(m,1H),5.06-5.00(m,1H),4.98-4.93(m,1H),4.87(d,J＝9.7Hz,1H),4.67-
4.58(m,1H),4.17-4.01(m,3H),4.01-3.92(m,1H),3.92-3.85(m,1H),3.73-3.64(m,1H),
3.60-3.52(m,1H),3.50-3.42(m,1H),3.35-3.26(m,4H),3.15-3.12(m,3H),3.11-3.01(m,
2H),3.01-2.95(m,1H),2.88-2.79(m,1H),2.29-2.20(m,1H),2.20-2.12(m,1H),2.10-1.99
(m,2H),1.99-1.87(m,3H),1.82(s,3H),1.80-1.71(m,1H),1.71-1.62(m,4H),1.58-1.54
(m,1H),1.52-1.48(m,5H),1.47-1.31(m,13H),1.28-1.11(m,4H),1.07-1.02(m,1H),1.01-
0.95(m,8H),0.87-0.84(m,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H),0.79-0.76(m,1H),0.74(d,J＝
6.7Hz,3H),0.72-0.66(m,1H)。
4.58(m,1H),4.17-4.01(m,3H),4.01-3.92(m,1H),3.92-3.85(m,1H),3.73-3.64(m,1H),
3.60-3.52(m,1H),3.50-3.42(m,1H),3.35-3.26(m,4H),3.15-3.12(m,3H),3.11-3.01(m,
2H),3.01-2.95(m,1H),2.88-2.79(m,1H),2.29-2.20(m,1H),2.20-2.12(m,1H),2.10-1.99
(m,2H),1.99-1.87(m,3H),1.82(s,3H),1.80-1.71(m,1H),1.71-1.62(m,4H),1.58-1.54
(m,1H),1.52-1.48(m,5H),1.47-1.31(m,13H),1.28-1.11(m,4H),1.07-1.02(m,1H),1.01-
0.95(m,8H),0.87-0.84(m,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H),0.79-0.76(m,1H),0.74(d,J＝
6.7Hz,3H),0.72-0.66(m,1H)。
[0669] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第二洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例11(13.4mg，12.2％产率)。
[0670] 实例11：ESIMS[M+H]1051.8，[M+FA-H]1095.8
[0671] 准确质量：1050.56
[0672] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.51-6.39(m,1H),6.28-6.13(m,2H),6.08(d,J＝11.1Hz,1H),6.04-5.88(m,1H),5.57-5.46(m,1H),5.05(s,1H),5.03(d,J＝5.7Hz,1H),
4.96(d,J＝9.9Hz,1H),4.67-4.56(m,1H),4.18-4.11(m,2H),4.09-4.02(m,2H),3.99-3.89
(m,2H),3.60-3.49(m,2H),3.37(d,J＝13.3Hz,1H),3.30(s,3H),3.18(dt,J＝7.7,5.1Hz,
1H),3.15-3.11(m,4H),3.07-3.00(m,1H),2.73-2.63(m,1H),2.28-2.13(m,2H),2.13-2.05
(m,2H),2.05-1.97(m,2H),1.97-1.88(m,1H),1.83(s,3H),1.80-1.69(m,1H),1.68-1.58
(m,4H),1.58-1.48(m,7H),1.48-1.43(m,1H),1.42-1.34(m,10H),1.34-1.28(m,1H),1.28-
1.22(m,2H),1.22-1.13(m,2H),1.13-1.03(m,1H),1.03-0.94(m,5H),0.94-0.88(m,4H),
0.86(d,J＝6.5Hz,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H),0.66(q,J＝12.0Hz,
1H)。
4.96(d,J＝9.9Hz,1H),4.67-4.56(m,1H),4.18-4.11(m,2H),4.09-4.02(m,2H),3.99-3.89
(m,2H),3.60-3.49(m,2H),3.37(d,J＝13.3Hz,1H),3.30(s,3H),3.18(dt,J＝7.7,5.1Hz,
1H),3.15-3.11(m,4H),3.07-3.00(m,1H),2.73-2.63(m,1H),2.28-2.13(m,2H),2.13-2.05
(m,2H),2.05-1.97(m,2H),1.97-1.88(m,1H),1.83(s,3H),1.80-1.69(m,1H),1.68-1.58
(m,4H),1.58-1.48(m,7H),1.48-1.43(m,1H),1.42-1.34(m,10H),1.34-1.28(m,1H),1.28-
1.22(m,2H),1.22-1.13(m,2H),1.13-1.03(m,1H),1.03-0.94(m,5H),0.94-0.88(m,4H),
0.86(d,J＝6.5Hz,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H),0.75(d,J＝6.6Hz,3H),0.66(q,J＝12.0Hz,
1H)。
[0673] 实例12：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(S)-(1H-四唑-1-基)-雷帕霉素(非对映异构体1)
[0674] 实例13：C16-(1,1-二氧化-1,2-硫杂氮杂环丁烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(S)-(1H-四唑-1-基)-雷帕霉素(非对映异构体2)
[0675]
[0676] *未指定C16的绝对立体化学
[0677] 向中间体5(118mg，0.124mmol，1.0当量)和1,2-硫杂氮杂环丁烷1,1-二氧化物(66.4mg，0.620mmol，5当量)在DCM(6mL)中的溶液中添加氯化锌(II)(在二乙醚中的1M溶
液，0.620mL，0.620mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌三小时。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过SFC色谱法
(方法3)分离。
液，0.620mL，0.620mmol，5当量)。将反应混合物在室温下搅拌三小时。将反应用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取。减压蒸发有机萃取物。将非对映异构体混合物的粗产物通过SFC色谱法
(方法3)分离。
[0678] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第一洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例12(14.8mg，11.3％产率)。
[0679] 实例12：ESIMS[M+NH4]1050.0，[M+FA-H]1072.1
[0680] 准确质量：1026.57
[0681] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6 δ9.32(s,1H),6.52(s,1H),6.45-6.37(m,1H),6.31-6.14(m,2H),6.10-6.04(m,1H),5.60-5.49(m,1H),5.23-5.12(m,1H),5.07-5.01(m,1H),4.99-
4.93(m,1H),4.87(d,J＝9.7Hz,1H),4.69-4.59(m,1H),4.15-4.02(m,3H),3.94-3.84(m,
1H),3.72-3.54(m,3H),3.51-3.42(m,1H),3.27(s,4H),3.11(s,3H),3.07(dd,J＝7.3,
5.1Hz,1H),3.01-2.91(m,1H),2.85(td,J＝10.6,9.5,4.7Hz,1H),2.28-2.13(m,3H),2.10-
2.00(m,2H),1.98-1.88(m,3H),1.82(s,3H),1.80-1.75(m,1H),1.73-1.67(m,4H),1.59-
1.53(m,4H),1.53-1.45(m,6H),1.45-1.34(m,3H),1.33-1.20(m,3H),1.20-1.07(m,3H),
1.05-1.01(m,1H),1.00-0.94(m,6H),0.88-0.82(m,6H),0.80-0.75(m,1H),0.73(d,J＝
6.7Hz,3H)。
4.93(m,1H),4.87(d,J＝9.7Hz,1H),4.69-4.59(m,1H),4.15-4.02(m,3H),3.94-3.84(m,
1H),3.72-3.54(m,3H),3.51-3.42(m,1H),3.27(s,4H),3.11(s,3H),3.07(dd,J＝7.3,
5.1Hz,1H),3.01-2.91(m,1H),2.85(td,J＝10.6,9.5,4.7Hz,1H),2.28-2.13(m,3H),2.10-
2.00(m,2H),1.98-1.88(m,3H),1.82(s,3H),1.80-1.75(m,1H),1.73-1.67(m,4H),1.59-
1.53(m,4H),1.53-1.45(m,6H),1.45-1.34(m,3H),1.33-1.20(m,3H),1.20-1.07(m,3H),
1.05-1.01(m,1H),1.00-0.94(m,6H),0.88-0.82(m,6H),0.80-0.75(m,1H),0.73(d,J＝
6.7Hz,3H)。
[0682] 使用制备型HPLC(方法2)最终纯化第二洗脱的非对映异构体，得到呈白色固体的实例13(12.3mg，9.4％产率)。
[0683] 实例13：ESIMS[M+H]1027.7，[M-H]1025.6,[M+FA-H]1071.6
[0684] 准确质量：1026.57
[0685] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6δ9.30(s,1H),6.52-6.38(m,1H),6.28-6.14(m,2H),6.08(d,J＝11.1Hz,1H),5.58-5.42(m,1H),5.21-5.14(m,1H),5.10-5.00(m,2H),5.00-4.92(m,
1H),4.69-4.57(m,1H),4.16-4.10(m,3H),4.08-4.01(m,1H),3.97-3.91(m,1H),3.61(dt,J
＝10.6,4.1Hz,1H),3.57-3.51(m,1H),3.51-3.46(m,1H),3.46-3.36(m,1H),3.27(s,3H),
3.19-3.15(m,1H),3.12(s,3H),3.11-3.08(m,1H),2.80-2.68(m,1H),2.25-2.15(m,3H),
2.10-2.01(m,2H),2.01-1.89(m,2H),1.83(s,3H),1.79-1.65(m,4H),1.64-1.58(m,2H),
1.57-1.54(m,2H),1.54-1.47(m,7H),1.46-1.35(m,3H),1.32-1.18(m,5H),1.14-1.04(m,
3H),0.98(d,J＝6.6Hz,3H),0.91-0.85(m,7H),0.83(d,J＝6.7Hz,3H),0.72(d,J＝6.6Hz,
3H)。
1H),4.69-4.57(m,1H),4.16-4.10(m,3H),4.08-4.01(m,1H),3.97-3.91(m,1H),3.61(dt,J
＝10.6,4.1Hz,1H),3.57-3.51(m,1H),3.51-3.46(m,1H),3.46-3.36(m,1H),3.27(s,3H),
3.19-3.15(m,1H),3.12(s,3H),3.11-3.08(m,1H),2.80-2.68(m,1H),2.25-2.15(m,3H),
2.10-2.01(m,2H),2.01-1.89(m,2H),1.83(s,3H),1.79-1.65(m,4H),1.64-1.58(m,2H),
1.57-1.54(m,2H),1.54-1.47(m,7H),1.46-1.35(m,3H),1.32-1.18(m,5H),1.14-1.04(m,
3H),0.98(d,J＝6.6Hz,3H),0.91-0.85(m,7H),0.83(d,J＝6.7Hz,3H),0.72(d,J＝6.6Hz,
3H)。
[0686] 实例14：C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-二甲基氧膦基-雷帕霉素(非对映异构体1)
[0687] 实例15：C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-二甲基氧膦基-雷帕霉素(非对映异构体2)
[0688]
[0689] *未指定C16的绝对立体化学
[0690] 将中间体4(0.146g，0.150mmol)和异噻唑烷1,1-二氧化物(0.181g，1.496mmol)溶于无水乙腈(1.5mL)中。一次性添加对甲苯磺酸一水合物(2.84mg，0.015mmol)。将反应混合物在室温下搅拌两小时。
[0691] 添加水性饱和NaHCO3。将混合物用乙酸乙酯萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO干燥，倾析并浓缩，给出无色的焦油粗产物。
[0692] 将粗产物溶于MeOH(2.5mL)中，并经由制备规模的反相色谱法(在100g C18 ISCO柱上使用40％-90％乙腈-水和0.1％TFA改性剂)进行一次进样纯化。
[0693] 合并第一洗脱峰级分，并在旋转蒸发仪上减小至约1/3体积。将剩余溶液用饱和水性NaHCO4变成碱性，并用EtOAc萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出呈白色固体的实例14(0.055g，0.044mmol，29.3％产率)。
[0694] 实例14：ESIMS[M+NH4]1082.8，[M-H]1063.7。
[0695] HRMS：作为钠加合物的C55H89N2O14PSNa的计算值-1087.5670。实测值-1087.5725。
[0696] 1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ6.45(dd,J＝14.4,10.9Hz,1H),6.22(dd,J＝14.5,10.6Hz,1H),6.13(dd,J＝14.6,10.5Hz,1H),5.98(d,J＝10.8Hz,1H),5.35(dd,J＝14.7,
9.8Hz,1H),5.23-5.17(m,1H),5.10(d,J＝9.8Hz,1H),4.67(m,2H),4.47(d,J＝1.8Hz,1H),
4.18-4.04(m,2H),4.03-3.91(m,1H),3.72(d,J＝6.5Hz,1H),3.68-3.48(m,2H),3.38(m,
4H),3.28(s,3H),3.26-3.12(m,2H),3.12-2.91(m,4H),2.74(m,1H),2.48-2.26(m,3H),
2.26-2.12(m,3H),2.12-2.04(m,2H),1.87(s,3H),1.85-1.72(m,4H),1.72-1.54(m,12H),
1.54-1.43(m,6H),1.43-1.33(m,3H),1.33-1.21(m,2H),1.21-1.09(m,2H),1.03(m,7H),
1.00-0.78(m,9H),0.72(q,J＝11.9Hz,1H)。
9.8Hz,1H),5.23-5.17(m,1H),5.10(d,J＝9.8Hz,1H),4.67(m,2H),4.47(d,J＝1.8Hz,1H),
4.18-4.04(m,2H),4.03-3.91(m,1H),3.72(d,J＝6.5Hz,1H),3.68-3.48(m,2H),3.38(m,
4H),3.28(s,3H),3.26-3.12(m,2H),3.12-2.91(m,4H),2.74(m,1H),2.48-2.26(m,3H),
2.26-2.12(m,3H),2.12-2.04(m,2H),1.87(s,3H),1.85-1.72(m,4H),1.72-1.54(m,12H),
1.54-1.43(m,6H),1.43-1.33(m,3H),1.33-1.21(m,2H),1.21-1.09(m,2H),1.03(m,7H),
1.00-0.78(m,9H),0.72(q,J＝11.9Hz,1H)。
[0697] 合并第二洗脱峰级分，并在旋转蒸发仪上减小至约1/3体积。将剩余溶液用饱和水性NaHCO3变成碱性。将混合物用乙酸乙酯萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，倾析并浓缩，给出呈白色固体的实例15(0.010g，7.51μmol，5.02％产率)。
[0698] 实例15：ESIMS[M+NH4]1082.8，[M-H]1063.8。
[0699] 1H NMR(400MHz,氯仿-dδ6.36(dd,J＝19.2,10.3Hz,1H),6.13(m,1H),6.04-5.84(m,1H),5.65(m,1H),5.32(m,1H),6.21(m,1H),5.11(m,1H),4.81(dd,J＝13.7,7.5Hz,1H),
4.21-4.03(m,1H),3.83(dd,J＝15.2,5.1Hz,2H),3.74(d,J＝13.2Hz,1H),3.59(dq,J＝
10.9,6.8,5.6Hz,2H),3.52(d,J＝7.1Hz,1H),3.46-3.33(m,7H),3.30(m,3H),3.18(m,3H),
3.10-2.82(m,3H),2.39(t,J＝4.1Hz,1H),2.28(m,3H),2.14(m,3H),1.90-1.77(m,4H),
1.74(m,4H),1.66(d,J＝10.4Hz,3H),1.61-1.41(m,12H),1.34-1.19(m,5H),1.18-1.11(m,
1H),1.11-0.79(m,19H),0.78-0.68(m,1H)。
4.21-4.03(m,1H),3.83(dd,J＝15.2,5.1Hz,2H),3.74(d,J＝13.2Hz,1H),3.59(dq,J＝
10.9,6.8,5.6Hz,2H),3.52(d,J＝7.1Hz,1H),3.46-3.33(m,7H),3.30(m,3H),3.18(m,3H),
3.10-2.82(m,3H),2.39(t,J＝4.1Hz,1H),2.28(m,3H),2.14(m,3H),1.90-1.77(m,4H),
1.74(m,4H),1.66(d,J＝10.4Hz,3H),1.61-1.41(m,12H),1.34-1.19(m,5H),1.18-1.11(m,
1H),1.11-0.79(m,19H),0.78-0.68(m,1H)。
[0700] 实例16：(R)-C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(2-羟基乙氧基)-雷帕霉素
[0701]
[0702] 基于使用实例2作为起始材料，C16处的绝对立体化学为(R)。
[0703] 实例16是由2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙醇和实例2分两步制备的。
[0704]
[0705] 步骤1.中间体C的制备
[0706] 将2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙醇(0.142g，0.803mmol)溶于无水甲苯(0.4mL)中。经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(0.147ml，0.843mmol)。将混合物用氮气真空吹扫，然后在冰水浴中冷却至0C。经60秒的时间段，经由注射器添加三氟甲磺酸酐
(0.132ml，0.779mmol)。将反应在0C下搅拌30分钟。
(0.132ml，0.779mmol)。将反应在0C下搅拌30分钟。
[0707] 添加N,N-二异丙基乙胺(0.147ml，0.843mmol)、甲苯(0.5mL)和实例2(0.198g，0.200mmol)。除去冰浴，将反应在40C下搅拌过夜，然后在55C下搅拌一小时。
[0708] 将反应用饱和水性NaHCO3稀释，并用EtOAc萃取四次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，通过硅藻土真空过滤并浓缩，给出无色油状的粗产物。
[0709] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-40％丙酮-庚烷，梯度洗脱，12g二氧化硅柱，以30％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出呈白色固体的中间体C(0.077g，
0.067mmol，33.5％产率)。
0.067mmol，33.5％产率)。
[0710] 中间体C：ESIMS[M+NH4]1164.7，[M-H]1147.0。
[0711] 步骤2.实例16的制备
[0712] 将中间体C(0.077g，0.067mmol)与在无水THF(0.7mL)中的吡啶(5.43μl，0.067mmol)合并。将混合物用氮气真空吹扫两次，且然后在冰水浴中冷却至0C。经15秒的时间段，经由注射器逐滴添加HF-吡啶(0.086ml，0.671mmol)。将反应在0C下搅拌70分钟。
[0713] 将反应用饱和水性NaHCO3淬灭，并用EtOAc萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO4干燥，通过硅藻土真空过滤并浓缩，给出白色固体粗产物。
[0714] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-40％丙酮-庚烷，梯度洗脱，12g二氧化硅柱，以40％EtOAc-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出呈白色固体的实例16(0.049g，
0.046mmol，69.0％产率)。
0.046mmol，69.0％产率)。
[0715] 实例16：ESIMS[M+NH4]1050.9，[M-H]1031.9。
[0716] 1H NMR(600MHz,氯仿-d δ6.45(dd,J＝14.6,10.9Hz,1H),6.22(dd,J＝14.7,10.6Hz,1H),6.13(dd,J＝14.9,10.6Hz,1H),5.98(d,J＝10.9Hz,1H),5.35(dd,J＝14.9,
9.8Hz,1H),5.20(d,J＝5.9Hz,1H),5.09(d,J＝9.9Hz,1H),4.71(d,J＝12.3Hz,1H),4.62
(m,1H),4.46(s,1H),4.11(d,J＝6.8Hz,1H),3.96(t,J＝11.3Hz,1H),3.78(m,1H),3.70(m,
3H),3.63-3.55(m,3H),3.43(s,3H),3.28(s,3H),3.24-3.15(m,2H),3.12-3.04(m,2H),
3.07-2.98(m,1H),2.97(q,J＝7.9Hz,1H),2.75(m,1H),2.44-2.33(m,1H),2.30(M,2H),
2.23(m,1H),2.16(m,2H),2.09(d,J＝13.1Hz,1H),2.01(m,1H),1.88(s,3H),1.84(d,J＝
13.1Hz,1H),1.78-1.70(m,3H),1.70-1.62(m,4H),1.52(dd,J＝11.8,7.7Hz,1H),1.50-
1.41(m,2H),1.43-1.32(m,1H),1.34-1.27(m,1H),1.30-1.17(m,8H),1.04(dd,J＝9.5,
6.6Hz,7H),1.02-0.85(m,10H),0.85(d,J＝6.8Hz,3H),0.69(q,J＝12.0Hz,1H)。
9.8Hz,1H),5.20(d,J＝5.9Hz,1H),5.09(d,J＝9.9Hz,1H),4.71(d,J＝12.3Hz,1H),4.62
(m,1H),4.46(s,1H),4.11(d,J＝6.8Hz,1H),3.96(t,J＝11.3Hz,1H),3.78(m,1H),3.70(m,
3H),3.63-3.55(m,3H),3.43(s,3H),3.28(s,3H),3.24-3.15(m,2H),3.12-3.04(m,2H),
3.07-2.98(m,1H),2.97(q,J＝7.9Hz,1H),2.75(m,1H),2.44-2.33(m,1H),2.30(M,2H),
2.23(m,1H),2.16(m,2H),2.09(d,J＝13.1Hz,1H),2.01(m,1H),1.88(s,3H),1.84(d,J＝
13.1Hz,1H),1.78-1.70(m,3H),1.70-1.62(m,4H),1.52(dd,J＝11.8,7.7Hz,1H),1.50-
1.41(m,2H),1.43-1.32(m,1H),1.34-1.27(m,1H),1.30-1.17(m,8H),1.04(dd,J＝9.5,
6.6Hz,7H),1.02-0.85(m,10H),0.85(d,J＝6.8Hz,3H),0.69(q,J＝12.0Hz,1H)。
[0717] 实例17：C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(S)-(1H-四唑-1-基)-雷帕霉素
[0718]
[0719] *未指定C16的绝对立体化学
[0720] 将中间体5(0.109g，0.114mmol)与在无水乙腈(1.1mL)中的异噻唑烷1,1-二氧化物(0.139g，1.145mmol)合并。添加对甲苯磺酸一水合物(0.0022g，0.011mmol)。将反应在室温搅拌两小时。
[0721] 将反应用饱和水性NaHCO3稀释。将混合物用EtOAc萃取几次。合并有机萃取物，经Na2SO干燥，倾析并浓缩，给出黄色的焦油粗产物。
[0722] 将粗产物通过硅胶快速柱色谱法(0-40％丙酮-庚烷，梯度洗脱，24g二氧化硅柱，以40％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出呈白色固体的实例17(0.053g，0.046mmol，
40.0％产率)。
40.0％产率)。
[0723] 实例17：ESIMS[M+H]1041.8，[M-H]1039.8。
[0724] HRMS：C54H84N6O12SNa的计算值-1063.5765。实测值-1063.5759。
[0725] 1H NMR(600MHz,氯仿-d δ8.86(s,1H),6.39(dd,J＝14.7,11.0Hz,1H),6.22(dd,J＝14.7,10.7Hz,1H),6.11(dd,J＝15.0,10.5Hz,1H),5.99(d,J＝10.9Hz,1H),5.34(dd,J＝
14.9,9.8Hz,1H),5.18(d,J＝5.7Hz,1H),5.10(d,J＝9.8Hz,1H),4.87(m,1H),4.67(m,1H),
4.63(d,J＝12.2Hz,1H),4.50(s,1H),4.13(d,J＝6.1Hz,1H),3.97(t,J＝11.4Hz,1H),3.78
(d,J＝6.2Hz,1H),3.69-3.62(m,1H),3.55(dt,J＝11.2,4.0Hz,1H),3.50-3.39(m,1H),
3.39(s,3H),3.38-3.30(m,1H),3.27(s,3H),3.25-3.13(m,1H),3.07(td,J＝8.4,3.8Hz,
1H),3.01(m,1H),2.96(q,J＝7.9Hz,1H),2.70-2.63(m,2H),2.39(m,1H),2.35-2.21(m,
3H),2.18(d,J＝13.7Hz,1H),2.16-2.09(m,1H),1.95-1.81(m,3H),1.82(s,3H),1.75(m,
3H),1.65(s,3H),1.60(m,6H),1.58-1.50(m,1H),1.53-1.34(m,2H),1.32(m,1H),1.29(m,
1H),1.25(m,6H),1.12(m,1H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H),1.05-0.78(m,12H)。
14.9,9.8Hz,1H),5.18(d,J＝5.7Hz,1H),5.10(d,J＝9.8Hz,1H),4.87(m,1H),4.67(m,1H),
4.63(d,J＝12.2Hz,1H),4.50(s,1H),4.13(d,J＝6.1Hz,1H),3.97(t,J＝11.4Hz,1H),3.78
(d,J＝6.2Hz,1H),3.69-3.62(m,1H),3.55(dt,J＝11.2,4.0Hz,1H),3.50-3.39(m,1H),
3.39(s,3H),3.38-3.30(m,1H),3.27(s,3H),3.25-3.13(m,1H),3.07(td,J＝8.4,3.8Hz,
1H),3.01(m,1H),2.96(q,J＝7.9Hz,1H),2.70-2.63(m,2H),2.39(m,1H),2.35-2.21(m,
3H),2.18(d,J＝13.7Hz,1H),2.16-2.09(m,1H),1.95-1.81(m,3H),1.82(s,3H),1.75(m,
3H),1.65(s,3H),1.60(m,6H),1.58-1.50(m,1H),1.53-1.34(m,2H),1.32(m,1H),1.29(m,
1H),1.25(m,6H),1.12(m,1H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H),1.05-0.78(m,12H)。
[0726] 实例18：C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-(2-乙氧基乙氧基)-雷帕霉素
[0727]
[0728] *未指定C16的绝对立体化学
[0729] 将中间体6(0.090g，0.093mmol)与在无水二氯甲烷(0.93mL)中的异噻唑烷1,1-二氧化物(0.112g，0.926mmol)合并。一次性添加对甲苯磺酸一水合物(1.761mg，9.26μmol)。
将反应在室温下搅拌100分钟。
将反应在室温下搅拌100分钟。
[0730] 将全部反应混合物通过硅胶快速柱色谱法(0-40％丙酮-庚烷，梯度洗脱，24g二氧化硅柱，以40％丙酮-庚烷进行TLC，UV下可见)纯化，给出实例18和残余未反应的异噻唑烷
1,1-二氧化物的混合物。
1,1-二氧化物的混合物。
[0731] 将混合材料通过硅胶快速柱色谱法(0-50％乙腈-二氯甲烷，梯度洗脱，24g柱，以30％乙腈-二氯甲烷进行TLC，UV下可见)再次纯化，给出呈白色固体的实例18(0.021g，
0.019mmol，20.4％产率)。
0.019mmol，20.4％产率)。
[0732] 实例18：ESIMS[M+NH4]1078.9，[M-H]1059.9。
[0733] HRMS：C57H92N2O14SNa钠加合物的计算值-1083.6167。实测值1083.6151。
[0734] 1H NMR(600MHz,氯仿-d δ6.45(dd,J＝14.5,11.0Hz,1H),6.21(dd,J＝14.6,10.7Hz,1H),6.14(dd,J＝14.8,10.8Hz,1H),5.98(d,J＝10.9Hz,1H),5.35(dd,J＝14.8,
9.8Hz,1H),5.20(d,J＝5.8Hz,1H),5.09(d,J＝9.8Hz,1H),4.72(d,J＝12.1Hz,1H),4.61
(m,1H),4.46(s,1H),4.10(d,J＝6.9Hz,1H),3.96(t,J＝11.4Hz,1H),**3.73(t,J＝5.5Hz,
2H),3.68(d,J＝6.9Hz,1H),3.59(m,4H),3.53(m,2H),3.46(s,3H),3.28(s,3H),3.21(m,
1H),3.13(m,1H),3.07(m,2H),3.05-2.99(m,1H),2.97(q,J＝8.0Hz,1H),2.78(dq,J＝
14.4,7.1Hz,1H),2.44-2.33(m,1H),2.31(m,2H),2.27-2.19(m,1H),2.19-2.12(m,2H),
2.07-1.94(m,2H),1.88(s,3H),1.83(d,J＝12.9Hz,1H),1.74(m,3H),1.66(m,7H),1.56-
1.44(m,1H),1.43(m,2H),1.41-1.15(m,12H),1.04(m,7H),0.91(m,8H),0.84(d,J＝6.7Hz,
3H),0.70(q,J＝12.0Hz,1H)。
9.8Hz,1H),5.20(d,J＝5.8Hz,1H),5.09(d,J＝9.8Hz,1H),4.72(d,J＝12.1Hz,1H),4.61
(m,1H),4.46(s,1H),4.10(d,J＝6.9Hz,1H),3.96(t,J＝11.4Hz,1H),**3.73(t,J＝5.5Hz,
2H),3.68(d,J＝6.9Hz,1H),3.59(m,4H),3.53(m,2H),3.46(s,3H),3.28(s,3H),3.21(m,
1H),3.13(m,1H),3.07(m,2H),3.05-2.99(m,1H),2.97(q,J＝8.0Hz,1H),2.78(dq,J＝
14.4,7.1Hz,1H),2.44-2.33(m,1H),2.31(m,2H),2.27-2.19(m,1H),2.19-2.12(m,2H),
2.07-1.94(m,2H),1.88(s,3H),1.83(d,J＝12.9Hz,1H),1.74(m,3H),1.66(m,7H),1.56-
1.44(m,1H),1.43(m,2H),1.41-1.15(m,12H),1.04(m,7H),0.91(m,8H),0.84(d,J＝6.7Hz,
3H),0.70(q,J＝12.0Hz,1H)。
[0735] 实例19：C16-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)-C32-脱氧-C40-((3-羟基-2-(羟基甲基)-2-甲基丙酰基)氧基)-雷帕霉素
[0736]
[0737] *未指定C16的绝对立体化学
[0738] 将中间体7(0.088g，0.087mmol)与在无水二氯甲烷(0.87mL)中的异噻唑烷1,1-二氧化物(0.105g，0.866mmol)合并。添加对甲苯磺酸一水合物(1.647mg，8.66μmol)。将反应在室温下搅拌30分钟。
[0739] 将全部反应混合物通过正相快速柱色谱法(0-60％乙腈-二氯甲烷，梯度洗脱，12g二氧化硅柱，以30％乙腈-二氯甲烷进行TLC)纯化，给出呈白色固体的实例19(0.020g，
0.017mmol，19.9％产率)。
0.017mmol，19.9％产率)。
[0740] 实例19：ESIMS[M+NH4]1123.0，[M-H]1104.0。
[0741] HRMS：铵加合物C58H92N2O16SNH4的计算值-1122.6511；实测值1122.652。
[0742] 1H NMR(600MHz,氯仿-d δ6.45(dd,J＝14.7,10.9Hz,1H),6.22(dd,J＝14.7,10.7Hz,1H),6.13(dd,J＝14.9,10.6Hz,1H),5.99(d,J＝10.9Hz,1H),5.35(dd,J＝14.9,
9.8Hz,1H),5.21(d,J＝5.8Hz,1H),5.10(d,J＝9.9Hz,1H),4.73(ddd,J＝11.0,9.2,4.7Hz,
1H),4.69(d,J＝12.4Hz,1H),4.64(m,1H),4.49(s,1H),4.13(d,J＝6.5Hz,1H),3.97(t,J＝
11.3Hz,1H),3.84(dd,J＝18.5,11.4Hz,2H),3.78-3.69(m,2H),3.64(m,2H),3.56(td,J＝
13.5,3.0Hz,1H),3.43-3.31(m,4H),3.28(m,3H),3.26-3.17(m,2H),3.12-2.92(m,3H),
2.76-2.68(m,1H),2.45-2.34(m,1H),2.31-2.21(m,3H),2.20-2.10(m,3H),2.06(m,1H),
1.87(m,4H),1.75(m,3H),1.71-1.59(m,3H),1.60(s,3H),1.60-1.50(m,1H),1.48-1.39(m,
1H),1.42-1.31(m,2H),1.33-1.20(m,8H),1.11(s,3H),1.11-1.05(m,2H),1.03(dd,J＝
18.2,6.6Hz,6H),0.99-0.82(m,10H),0.79(q,J＝12.0Hz,1H)。
9.8Hz,1H),5.21(d,J＝5.8Hz,1H),5.10(d,J＝9.9Hz,1H),4.73(ddd,J＝11.0,9.2,4.7Hz,
1H),4.69(d,J＝12.4Hz,1H),4.64(m,1H),4.49(s,1H),4.13(d,J＝6.5Hz,1H),3.97(t,J＝
11.3Hz,1H),3.84(dd,J＝18.5,11.4Hz,2H),3.78-3.69(m,2H),3.64(m,2H),3.56(td,J＝
13.5,3.0Hz,1H),3.43-3.31(m,4H),3.28(m,3H),3.26-3.17(m,2H),3.12-2.92(m,3H),
2.76-2.68(m,1H),2.45-2.34(m,1H),2.31-2.21(m,3H),2.20-2.10(m,3H),2.06(m,1H),
1.87(m,4H),1.75(m,3H),1.71-1.59(m,3H),1.60(s,3H),1.60-1.50(m,1H),1.48-1.39(m,
1H),1.42-1.31(m,2H),1.33-1.20(m,8H),1.11(s,3H),1.11-1.05(m,2H),1.03(dd,J＝
18.2,6.6Hz,6H),0.99-0.82(m,10H),0.79(q,J＝12.0Hz,1H)。
[0743] 实例20：生物学测定和数据
[0744] 通过以下体外和体内方法评估根据本披露的化合物的活性。
[0745] 药理学表征
[0746] 材料和方法
[0747] 针对雷帕霉素类似物效力确定的基于细胞的测定。雷帕霉素类似物的效力使用基于MEF TSC1-/-细胞的测定来确定。MEF TSC1-/-细胞是结节性硬化蛋白-TSC1缺陷的小鼠
胚胎成纤维细胞，所述结节性硬化蛋白负调控mTORC1信号传导，因此显示出组成型mTORC1
激活，从而导致下游分子的磷酸化(激活)。这种基于细胞的测定法用于测量雷帕霉素类似
物或其他mTOR抑制剂对S6和4EBP1的抑制作用(脱磷酸化作用)。
胚胎成纤维细胞，所述结节性硬化蛋白负调控mTORC1信号传导，因此显示出组成型mTORC1
激活，从而导致下游分子的磷酸化(激活)。这种基于细胞的测定法用于测量雷帕霉素类似
物或其他mTOR抑制剂对S6和4EBP1的抑制作用(脱磷酸化作用)。
[0748] 将MEF TSC1-/-细胞铺板在聚-D-赖氨酸涂覆的384孔Griener透明底板上，并在37℃、5％CO2下孵育过夜。在第二天，将细胞用“Hard starve”溶液(1L DPBS+1g D-(+)葡萄糖+10ml 7.5％碳酸氢钠+20ml 1M HEPES)洗涤8次，并在相同溶液中再孵育2小时。接下来用
浓度降低的化合物(3.16倍稀释度时有8个点)处理细胞，并在37℃、5％CO2下孵育2小时。将细胞用4％多聚甲醛固定30min，并用TBS-EDTA洗涤5次，然后用针对pS6(Ser240/244)(细胞信号传导公司(Cell Signaling)#9468)和p4EBP1(Thr 37/46)(细胞信号传导公司#5123)
的荧光标记标记的抗体进行免疫染色。将细胞核通过Hoechst(赛默飞世尔科技公司
(ThermoFisher Scientific)#H3570)染色进行可视化。使用各自的荧光通道对细胞进行成
像(InCell 600)，并通过pS6 IC50(nM)定义mTOR抑制剂的效力。
浓度降低的化合物(3.16倍稀释度时有8个点)处理细胞，并在37℃、5％CO2下孵育2小时。将细胞用4％多聚甲醛固定30min，并用TBS-EDTA洗涤5次，然后用针对pS6(Ser240/244)(细胞信号传导公司(Cell Signaling)#9468)和p4EBP1(Thr 37/46)(细胞信号传导公司#5123)
的荧光标记标记的抗体进行免疫染色。将细胞核通过Hoechst(赛默飞世尔科技公司
(ThermoFisher Scientific)#H3570)染色进行可视化。使用各自的荧光通道对细胞进行成
像(InCell 600)，并通过pS6 IC50(nM)定义mTOR抑制剂的效力。
[0749] 动物维持、化合物处理和组织收集。所有涉及动物的程序均经过美国马萨诸塞州坎布里奇市诺华生物医学研究所的机构动物护理和使用委员会(the Institutional
Animal Care and Use Committee of the Novartis Institutes for Biomedical
Research,Cambridge,MA,USA)的批准。成年Sprague Dawley(SD)雄性大鼠购自Envigo公司
(印第安纳波利斯(Indianapolis)，美国)或查尔斯河公司(Charles River)(美国)。一旦输入，将大鼠维持在无特定病原体的设施中，温度和光照受控(22℃，12-h光照/12-h黑暗循
环：在0600h时开灯/在1800h时关灯)，并且可以随意获取食物和水。在实验开始之前，使大鼠适应至少3天。
Animal Care and Use Committee of the Novartis Institutes for Biomedical
Research,Cambridge,MA,USA)的批准。成年Sprague Dawley(SD)雄性大鼠购自Envigo公司
(印第安纳波利斯(Indianapolis)，美国)或查尔斯河公司(Charles River)(美国)。一旦输入，将大鼠维持在无特定病原体的设施中，温度和光照受控(22℃，12-h光照/12-h黑暗循
环：在0600h时开灯/在1800h时关灯)，并且可以随意获取食物和水。在实验开始之前，使大鼠适应至少3天。
[0750] 配制实例2和RAD001配制用于口服(oral、per os、p.o.)给药。将空白配制品(没有实例2或RAD001)用作媒介物对照。大鼠口服接受单一剂量的实例2、RAD001或相应的媒介物。在治疗后的预定时间，将大鼠用3.5％异氟烷麻醉并实施安乐死。收集各种器官并在液氮中冷冻。通过尾静脉或心脏穿刺(末端)收集血液，并冷冻以进行进一步的药代动力学分
析。将所有组织储存在-80℃直至分析。
析。将所有组织储存在-80℃直至分析。
[0751] 测定血液和组织中的实例2和RAD001浓度。使用HPLC/质谱测定浓度。
[0752] 蛋白质提取和免疫印迹。为了提取蛋白质，将速冻的组织在补充有完全的EDTA游离蛋白酶抑制剂和PhosSTOP磷酸酶抑制剂片剂(罗氏公司(Roche)，曼海姆(Manheim)，德
国)的MSD裂解缓冲液(MSD，Rockville，Maryland)中裂解，并在4℃下以13,000g离心20min。
所得的上清液用于免疫印迹。用BCA蛋白测定法(赛默科技公司(Thermo Scientific)，马萨诸塞州)定量蛋白质。将样品在4％-20％的CriterionTMTGXTM预制的Midi蛋白凝胶(伯乐公
司(Bio-Rad)，加利福尼亚州)上分离，并使用Trans Turbo印迹系统(伯乐公司，加利福尼亚州)转移到硝酸纤维素膜(伯乐公司，加利福尼亚州)上。使用来自细胞信号传导科技公司
(Cell Signaling Technologies)的针对p-S6和t-S6的抗体(在具有5％BSA的TBS-T中均为
1:1000)进行免疫印迹。‘p’和‘t’前缀分别表示‘磷酸化’形式和‘总’形式。针对兔的HRP偶联的二抗(#7074)来自马萨诸塞州的细胞信号传导科技公司。化学发光信号是使用
SuperSignalTM West Femto增强型化学发光底物(#34095，赛默科技公司，马萨诸塞州)或
Western Plus-ECL增强型化学发光底物(NEL103001EA，珀金埃尔默公司
(Perkin Elmer)，马萨诸塞州)生成的，并使用ChemiDoc MP成像系统(伯乐公司)捕获。将得到的数字图像转换为TIFF格式，并使用ImageJ软件进行量化。
国)的MSD裂解缓冲液(MSD，Rockville，Maryland)中裂解，并在4℃下以13,000g离心20min。
所得的上清液用于免疫印迹。用BCA蛋白测定法(赛默科技公司(Thermo Scientific)，马萨诸塞州)定量蛋白质。将样品在4％-20％的CriterionTMTGXTM预制的Midi蛋白凝胶(伯乐公
司(Bio-Rad)，加利福尼亚州)上分离，并使用Trans Turbo印迹系统(伯乐公司，加利福尼亚州)转移到硝酸纤维素膜(伯乐公司，加利福尼亚州)上。使用来自细胞信号传导科技公司
(Cell Signaling Technologies)的针对p-S6和t-S6的抗体(在具有5％BSA的TBS-T中均为
1:1000)进行免疫印迹。‘p’和‘t’前缀分别表示‘磷酸化’形式和‘总’形式。针对兔的HRP偶联的二抗(#7074)来自马萨诸塞州的细胞信号传导科技公司。化学发光信号是使用
SuperSignalTM West Femto增强型化学发光底物(#34095，赛默科技公司，马萨诸塞州)或
Western Plus-ECL增强型化学发光底物(NEL103001EA，珀金埃尔默公司
(Perkin Elmer)，马萨诸塞州)生成的，并使用ChemiDoc MP成像系统(伯乐公司)捕获。将得到的数字图像转换为TIFF格式，并使用ImageJ软件进行量化。
[0753] 产生FKPB12敲低细胞。将含有靶向FKBP12 C-末端的gRNA序列的CRISPR/CAS9载体(GCTTCTAAAACTGGAATGAC)转染到293T细胞中。用嘌呤霉素进行选择48小时，并将细胞铺板
以形成集落。通过用抗FKBP12抗体(赛默科技公司，Pierce#PA1-026A)进行免疫印迹来筛选FKBP12敲低克隆。选择具有显著降低的FKBP12的克隆(相对于未受干扰的293T细胞中的
FKBP12水平，降低大约80％)。
以形成集落。通过用抗FKBP12抗体(赛默科技公司，Pierce#PA1-026A)进行免疫印迹来筛选FKBP12敲低克隆。选择具有显著降低的FKBP12的克隆(相对于未受干扰的293T细胞中的
FKBP12水平，降低大约80％)。
[0754] FKPB12敲除细胞的产生。使用 4D-NucleofectorTM X试剂盒(龙沙公司(Lonza)，V4XC-2032)，使用CRISPR/Cas9系统将包含靶向FKBP12(GCCACTACTCACCGTCTCCT)
的指导RNA(gRNA)序列的核糖核蛋白复合物递送到293T细胞中。通过用抗FKBP12抗体(诺伟
思公司(Novus)，NB300-508)进行免疫印迹来筛选细胞克隆，并选择展示完整FKBP12敲除
(FKBP12不可测量)的单个克隆。
的指导RNA(gRNA)序列的核糖核蛋白复合物递送到293T细胞中。通过用抗FKBP12抗体(诺伟
思公司(Novus)，NB300-508)进行免疫印迹来筛选细胞克隆，并选择展示完整FKBP12敲除
(FKBP12不可测量)的单个克隆。
[0755] 用RAD001和实例2处理野生型(WT)、FKBP12敲低和FKBP12敲除的293T细胞。将WT、FKBP12敲低和FKBP12敲除的293T细胞以每孔30,000个细胞的密度铺板在聚D-赖氨酸涂覆
的96孔板(康宁公司(Corning)，#354461)中的补充有10％胎牛血清(赛默飞世尔公司，#
16140-071)的杜氏改良的伊格尔氏培养基(赛默飞世尔公司，#11995-065)中。将细胞在37
℃、5％CO2下孵育48小时，直到它们达到约80％汇合。一式两份，用RAD001和实例2以1000nM至0.0033nM的12点剂量范围在37℃下处理细胞2小时。将补充有空白二甲亚砜(DMSO)的培
养基用作这两种化合物的对照。根据制备商的方案，通过夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导
公司，#7063C)检测磷酸化的S6K1(Thr389)量。
的96孔板(康宁公司(Corning)，#354461)中的补充有10％胎牛血清(赛默飞世尔公司，#
16140-071)的杜氏改良的伊格尔氏培养基(赛默飞世尔公司，#11995-065)中。将细胞在37
℃、5％CO2下孵育48小时，直到它们达到约80％汇合。一式两份，用RAD001和实例2以1000nM至0.0033nM的12点剂量范围在37℃下处理细胞2小时。将补充有空白二甲亚砜(DMSO)的培
养基用作这两种化合物的对照。根据制备商的方案，通过夹心ELISA试剂盒(细胞信号传导
公司，#7063C)检测磷酸化的S6K1(Thr389)量。
[0756] 测定对FK506结合蛋白(FKBP)的结合亲和力的SPR测定法。
[0757] FKBP12、FKBP51和FKBP52的N-末端avi-his6标记的FKBP融合物在大肠杆菌(E.coli)中表达，并使用标准色谱法纯化。随后将每种蛋白质固定在Biacore 8K SPR仪器
(GE医疗基团(GE Healthcare))中的链霉抗生物素蛋白芯片上。使用单循环动力学，在含有
50mM Tris pH7.5/150mM NaCl/0.01％Tween 20/1mM DTT/2％DMSO的缓冲液中，使用2分钟
缔合相和30分钟解离相使复合滴定以45uL/min流经每个表面。使用低分子量(LMW)单循环
动力学拟合数据。报告了平衡解离常数(KD)。
(GE医疗基团(GE Healthcare))中的链霉抗生物素蛋白芯片上。使用单循环动力学，在含有
50mM Tris pH7.5/150mM NaCl/0.01％Tween 20/1mM DTT/2％DMSO的缓冲液中，使用2分钟
缔合相和30分钟解离相使复合滴定以45uL/min流经每个表面。使用低分子量(LMW)单循环
动力学拟合数据。报告了平衡解离常数(KD)。
[0758] 可以在不同的细胞或组织类型中实现雷帕霉素类似物的不同药理学，这取决于1)这些细胞/组织中FKBP同源物的相对丰度，和2)与这些不同的FKBP同源物结合的特异性
(Mol.Cell Biol.[分子与细胞生物学](2013)33:1357-1367)。
(Mol.Cell Biol.[分子与细胞生物学](2013)33:1357-1367)。
[0759] 结果
[0760] mTOR抑制剂的体外效力由MEF TSC1-/-细胞中的pS6 IC50(nM)定义。
[0761]
[0762]
[0763] IC50值计算为多次测定的平均值。
[0764] FKBP12、FKBP51和FKBP52的平衡解离常数(KD)。
[0765]
[0766]
[0767] 实例2在大鼠中的药代动力学曲线。将4个月大的大鼠用3mg/kg的单次口服剂量的实例2治疗，并在给药后0.25、0.5、1、2、4和7h收集血液。在此实验中，在MilliQ水中的15％聚乙二醇(PEG)300、7.5％Solutol HS15、7.5％Cremophore EL中配制实例2。通过HPLC-MS测量实例2的浓度(图3)。
[0768] 在大鼠中实例2和RAD001的比较性血液浓度和脑浓度。
[0769] 将4个月大的大鼠用3、10和30mg/kg的实例2(在MilliQ水中的15％PEG 300、7.5％Solutol HS15、7.5％Cremophor EL中配制)进行口服治疗。在另一项实验中，对8周龄的大鼠用3、10和30mg/kg的RAD001(配制成2％(w/w)的微乳液并在MilliQ水中稀释至最终浓度)
进行口服治疗。在处理后3小时(h)和24h收集血液和脑组织以确定化合物的浓度。当以相同剂量(3、10和30mg/kg)施用时，实例2的血液浓度和脑浓度高于RAD001的血液浓度和脑浓度(图4A和4B)。
进行口服治疗。在处理后3小时(h)和24h收集血液和脑组织以确定化合物的浓度。当以相同剂量(3、10和30mg/kg)施用时，实例2的血液浓度和脑浓度高于RAD001的血液浓度和脑浓度(图4A和4B)。
[0770] 为了比较实例2与RAD001在大鼠中的生物利用度，将化合物配制为溶液配制品：在PBS中的15％PEG300、7.5％Solutol HS15、7.5％Cremophore EL中配制实例1，而在PBS中的
10％PEG300、10％Solutol HS15、10％Cremophore EL中配制RAD001。对7-9周龄的大鼠(每组N＝3)口服施用3mg/kg的化合物，并静脉内(i.v)施用1mg/kg的化合物(图4C和4D)。分别
地对于实例2和RAD001，生物利用度为18％和19％，i.v.终末半衰期为9.9h和9.5h，清除率为9mL/min/kg和32mL/min/kg，并且Vdss(稳态分布体积)为4.4L/kg和18.8L/kg。
10％PEG300、10％Solutol HS15、10％Cremophore EL中配制RAD001。对7-9周龄的大鼠(每组N＝3)口服施用3mg/kg的化合物，并静脉内(i.v)施用1mg/kg的化合物(图4C和4D)。分别
地对于实例2和RAD001，生物利用度为18％和19％，i.v.终末半衰期为9.9h和9.5h，清除率为9mL/min/kg和32mL/min/kg，并且Vdss(稳态分布体积)为4.4L/kg和18.8L/kg。
[0771] 实例2抑制大鼠肝脏中的mTORC1途径。在4个月大的大鼠中确定了实例2抑制体内mTORC1途径的能力(图5A-5D)。给药后三小时，3、10和30mg/kg的单剂量的实例2导致大鼠肝脏中S6的显著脱磷酸化作用(失活)(与媒介物对照相比)(图5A和5B)。在以10(趋势p＝
0.06)和30mg/kg给药后24h，保持S6失活(图5C和5D)。
0.06)和30mg/kg给药后24h，保持S6失活(图5C和5D)。
[0772] FKBP12对于实例2的抑制作用是必需的，但对于RAD001的抑制作用不是必需的。在用RAD001或实例2处理的WT、FKBP12敲低和FKBP12敲除的293T细胞中测量磷酸化的S6K1
(Thr389)量。S6K1是mTORC1的下游靶标，并且其雷帕霉素类似物敏感的Thr389位点的磷酸
化被用作mTORC1活性的功能性读数。Lee,C.H.,Inoki,K.和Guan,K.L.(2007).mTOR
pathway as a target in tissue hypertrophy[作为组织肥大的靶标的mTOR途径]
.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.[药理学与毒理学年度评论]47,443-467。在WT 293T细胞
中，RAD001和实例2均有效抑制S6K1(Thr389)约80％(图6A)。在FKBP12敲低细胞中，实例2无法将S6K1(Thr389)磷酸化抑制到与RAD001相同的水平：RAD001对S6K1(Thr389)的最大抑制
为约70％，而实例2所达到的抑制为约40％(图6B)。在FKBP12敲除细胞中，实例2未能抑制
S6K1(Thr389)的磷酸化，而RAD001仍实现>60％的抑制(图6C)。这些结果表明实例2的药理
作用受限于FKBP12。实例2对FKBP12的这种特异性可以促进靶向具有相对较高水平的
FKBP12表达的细胞和组织，同时避免(或最小化)在弱表达FKBP12的组织中的副作用。
(Thr389)量。S6K1是mTORC1的下游靶标，并且其雷帕霉素类似物敏感的Thr389位点的磷酸
化被用作mTORC1活性的功能性读数。Lee,C.H.,Inoki,K.和Guan,K.L.(2007).mTOR
pathway as a target in tissue hypertrophy[作为组织肥大的靶标的mTOR途径]
.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.[药理学与毒理学年度评论]47,443-467。在WT 293T细胞
中，RAD001和实例2均有效抑制S6K1(Thr389)约80％(图6A)。在FKBP12敲低细胞中，实例2无法将S6K1(Thr389)磷酸化抑制到与RAD001相同的水平：RAD001对S6K1(Thr389)的最大抑制
为约70％，而实例2所达到的抑制为约40％(图6B)。在FKBP12敲除细胞中，实例2未能抑制
S6K1(Thr389)的磷酸化，而RAD001仍实现>60％的抑制(图6C)。这些结果表明实例2的药理
作用受限于FKBP12。实例2对FKBP12的这种特异性可以促进靶向具有相对较高水平的
FKBP12表达的细胞和组织，同时避免(或最小化)在弱表达FKBP12的组织中的副作用。
[0773] 等效物和范围
[0774] 在权利要求中，冠词如“一个/种(a/an)”和“所述(the)”可以意指一个/种或多于一个/种，除非有相反的指明或另外从上下文明显可见。如果组的一个、多于一个或全部成员存在于、使用于或以其他方式相关于给出的产品或方法，则在该组的一个或多个成员之间包括“或者”的权利要求或说明书被认为是满意的，除非有相反的指明或另外从上下文明显可见。本披露包括实施例，在这些实施例中组中的恰好一个成员存在于、使用于或以其他方式相关于给出的产品或方法。本披露包括实施例，在这些实施例中组中的多于一个或全
部成员存在于、使用于或以其他方式相关于给出的产品或方法。
部成员存在于、使用于或以其他方式相关于给出的产品或方法。
[0775] 此外，本披露涵盖其中将来自一个或多个所列权利要求的一个或多个限制、元素、条款和说明性术语引入另一权利要求中的所有变化、组合和排列。例如，可以对附属于另一权利要求的任何权利要求加以修改，以使其包括一个或多个在附属于同一基础权利要求的任何其他权利要求中所见的限制。在元素以列表(例如以马库什组(Markush group)格式)
呈现的情况下，还披露了元素的每个亚组，并且可以从所述组中去除任何元素。应当理解，通常，在本披露或本披露的方面被称作包含特定元素和/或特征的情况下，本披露或本披露的方面的某些实施例由此类元素和/或特征组成或基本上由其组成。还应注意，术语“包含”和“含有”旨在是开放的，并允许包括另外的元素或步骤。在给出范围的情况下，包括端点。
此外，除非另作说明或另外从上下文和本领域的普通技术人员所理解的明显可见，在本披
露的不同实施例中表示为范围的值可以采取所陈述的范围内的任何具体值或子范围至所
述范围的下限单位的十分之一，除非上下文另作清楚规定。
呈现的情况下，还披露了元素的每个亚组，并且可以从所述组中去除任何元素。应当理解，通常，在本披露或本披露的方面被称作包含特定元素和/或特征的情况下，本披露或本披露的方面的某些实施例由此类元素和/或特征组成或基本上由其组成。还应注意，术语“包含”和“含有”旨在是开放的，并允许包括另外的元素或步骤。在给出范围的情况下，包括端点。
此外，除非另作说明或另外从上下文和本领域的普通技术人员所理解的明显可见，在本披
露的不同实施例中表示为范围的值可以采取所陈述的范围内的任何具体值或子范围至所
述范围的下限单位的十分之一，除非上下文另作清楚规定。
[0776] 本申请引用了不同发布的专利、出版的专利申请、杂志文章和其他出版物，将其全部通过引用并入本文。如果在任一个并入的参考文献和本说明书之间有冲突，以本说明书为准。另外，在现有技术之内的本披露的任何具体的实施例可以从任何一个或多个权利要
求中明确排除。因为此类实施例被认为是本领域普通技术人员已知的，因此它们可以被排
除，即使该排除在本文没有被明确陈述。本披露的任何具体的实施例可以因为任何原因从
任一权利要求中排除，不管是否与存在的现有技术相关。
求中明确排除。因为此类实施例被认为是本领域普通技术人员已知的，因此它们可以被排
除，即使该排除在本文没有被明确陈述。本披露的任何具体的实施例可以因为任何原因从
任一权利要求中排除，不管是否与存在的现有技术相关。
[0777] 本领域技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文描述的具体实施例的许多等效形式。本文描述的实施例的范围不旨在限于以上说明书，而是如所附权利要求
书中所述。本领域普通技术人员应理解，在不脱离如以下权利要求书中所限定的本披露的
精神或范围下，可以对本说明书进行各种改变和修改。
书中所述。本领域普通技术人员应理解，在不脱离如以下权利要求书中所限定的本披露的
精神或范围下，可以对本说明书进行各种改变和修改。
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