一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法
专利汇可以提供一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及干细胞制剂技术领域，特别涉及一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，提取脐带组织得到原代脐带干细胞；培育第五代原代脐带间充质干细胞，并获得细胞培养上清液进行离心，并对所述上清溶液进行过滤、 超滤 浓缩，加入冻干保护剂，并进行 真空 冷冻干燥 ，得到脐带间充质干细胞活性物冻干粉末；获得脐带血，进行传代培养；分离得到脐带血干细胞溶液，反复冻融至细胞完全 破碎 ，得到脐带血干细胞提取物溶液，冻干制得脐带血干细胞活性物冻干粉。本发明所得的制剂具有更好促进 皮肤 烫伤修复的作用，能促进皮肤烫伤的创面愈合、更好地促进其表皮的再生化、皮肤 细胞增殖 再生能 力 等作用。，下面是一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)获得脐带间充质干细胞活性物；
(1.1)提取脐带组织；
(1.2)利用所述脐带组织制备原代脐带干细胞；
(1.3)利用所述原代脐带干细胞培育第五代原代脐带间充质干细胞，并获得细胞培养上清液；
(1.4)将所述细胞培养上清液进行离心，收集上清溶液，并对所述上清溶液进行过滤；
然后进行超滤浓缩；
(1.5)超滤浓缩后加入冻干保护剂，并进行真空冷冻干燥，得到脐带间充质干细胞活性物冻干粉末；
(2)获得脐带血干细胞活性物；
(2.1)获得脐带血，放入培养箱中，恒温恒湿持续进行传代培养；
(2.2)弃去培养基，分离得到脐带血干细胞溶液；
(2.3)将脐带血干细胞溶液冻结，然后在4～8℃的温度下解冻，如此反复冻融至细胞完全破碎，采用孔径为0.22μm的过滤膜过滤，除去杂质，得到脐带血干细胞提取物溶液；
(2.4)将脐带血干细胞提取物溶液，冻干制得脐带血干细胞活性物冻干粉；
(3)脐带间充质干细胞活性物冻干粉末与脐带血干细胞活性物冻干粉混合。
2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1.2)具体包括以下步骤：在脐带组织中注射膨胀液后，用生理盐水对脐带组织进行洗涤；加入II型胶原酶溶液，进行消化后，离心消化产物，去除上层组织，保留沉淀和部分中间层溶液，得到原代原代脐带干细胞。
3.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1.3)中的第五代脐带间充质干细胞的培育方法为：将所述原代脐带干细胞接种于干细胞培养基中，在37℃、5v/v％CO2的条件下培养，在培养7天，观察到细胞集落，并继续培养；当细胞融合度达80～85％时，用生理盐水温和冲洗培养容器的底部，冲洗2次，加入4～5毫升消化液，室温放置30秒，并在显微镜下观察细胞背景变透亮，细胞间隙变大的时候加入5毫升完全培养基终止消化，并反复冲培养容器底部，将细胞悬液转移到毫升离心管中，混匀计数，按照1×105密度接种传代，培养2～4天后细胞密度达到80～85％时，重复以上操作获得第五代脐带间充质干细胞。
4.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所的步骤(1.4)的超滤浓缩包括以下步骤：在4℃的环境下对获得溶液进行超滤浓缩，用孔径0.2nm的超滤膜过滤，过滤的压力为0.35Mpa，超滤后浓缩上清液体，将10L液体超滤至500-800ml。
5.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1.5)的真空冷冻干燥包括以下步骤：冷冻干燥机设定-30℃预冷4小时；温度下降到-25℃，在-5帕压下，操作12h，将溶液成分冻干成粉末状；
温度升温到30℃，保持-5帕压力，继续干燥1小时。
6.根据权利要求5所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的冻干保护剂，由以下物质按照质量份数组成：质量浓度为1％的右旋糖苷0.01～0.02，质量浓度为0.5％的海藻糖0.5～0.8份，质量浓度为1.5％的甘露醇1.5～2.0份，质量浓度为0.5％精氨酸0.5～2.0份。
7.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2.1)传代培养，条件为：DMEM/F12培养基中加入体积比10％的胎牛血清，培养基的pH为7.0，放入培养箱中，培养温度为37℃，湿度为95％。
8.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2.4)冻干条件为，1ml/支分装冻干，冻干的温度为-20～-35℃，真空度为50～200Pa，冻干时间为24～36小时。
一种脐带间充质干细胞活性物与脐带血干细胞活性物的复合
物的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
0.5％精氨酸2.0份。
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