从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法
专利汇可以提供从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种从 石蜡 包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法,该方法采用二 甲苯 脱蜡法或 水 浴脱蜡法,再提取核酸DNA进行基因PCR扩增,采用该方法能充分利用石蜡包埋的病理标本组织为能使 肿瘤 等 疾病 在基因水平上进行回顾性分析,做出了一个良好开端,并对进一步加强 基础 理论研究与临床的配合,深入探讨疾病的发生、演变及 预后 关系,正确评价临床 治疗 以及加深理解肿瘤 生物 学特性与临床表现的关系,都有着十分重要的现实意义。，下面是从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法专利的具体信息内容。
1、一种从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，其特征在于， 该方法采用二甲苯脱蜡法：首先将石蜡包埋组织块切成薄片，加入二甲苯 微微摇动，换液3次，时间为12小时，用浓度为100％、90％、75％、50％、25％ 的乙醇呈梯度水化，间隔30分钟浸洗一次，弃上清液，剪碎组织，加入含 有十二烷基磺酸钠和蛋白酶K配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱 和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无 水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度 计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用 氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电 泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双 蒸水溶解，经电泳检测后，用基因PCR法进行扩增。
2、一种从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，其特征在 于，该方法采用水浴脱蜡法：首先将石蜡包埋组织块切成薄片，加入生理 盐水，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后，冷却，夹去石蜡，重复5-10次， 直至无石蜡为止，再将液体(含组织)倒入离心管中离心，弃上清液，剪碎 组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶配制的溶液，置37℃恒温水浴3 天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠， 用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心，在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经 分光光度计测其含量后，加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟， 再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖 凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀 后用双蒸水溶液经电泳检测后，用基因PCR法进行扩增。
本发明涉及一种分子生物学特别是基因工程从石蜡包埋组织中提取核 酸DNA进行基因PCR扩增的方法。
自PCR技术1985年在美国问世以来，被迅速广泛地应用于分子生物学 领域，对于此项技术大都建立在(1)直接应用核酸DNA作模板进行基因PCR 扩增；(2)直接裂解微生物(如细菌、病毒、衣原体等)提取核酸DNA进行基 因PCR扩增；(3)将组织剪碎研磨，采用Saiki氏法提取核酸DNA再进行基因 PCR扩增。而对石蜡包埋组织中如何脱蜡，将这些组织中的核酸高质量的 分离纯化，最终应用于基因PCR扩增以作为对核酸结构、功能进一步分析 有价值的研究材料，是目前急待解决的问题。本发明经过多年的试验、探 索，研制出了一种从石蜡包埋组织中提取核酸DNA进行基因PCR扩增的方法。
本发明的目的在于，研制出从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增 的方法，该方法采用二甲苯脱蜡法或水浴脱蜡法，再提取核酸DNA进行基 因PCR扩增，通过试验证明，不管用二甲苯8脱蜡法还是用水浴脱蜡法都可 分离到大分子核酸DNA，基因PCR扩增效果也较好。由于石蜡包埋的病理标 本能得到长期保存，因此本发明为能使肿瘤等疾病在基因水平上进行回顾 性分析，做出了一个良好开端，该方法对进一步加强基础理论研究与临床 的配合，深入探讨疾病的发生、演变及预后关系，正确评价临床治疗以及 加深理解肿瘤生物学特性与临床表现的关系，都有着十分重要的现实意义。
本发明所述的从石蜡包埋组织中提取核酸进行基因扩增的方法，该方 法在如何脱蜡均可采用二甲苯脱蜡法或水浴脱蜡法，其中二甲苯脱蜡法是 将石蜡包埋组织块切成薄片，加入二甲苯微微摇动，换液3次，时间为12 小时，用浓度为100％、90％、75％、50％、25％的乙醇呈梯度水化，间隔30分 钟浸洗一次，弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶配 制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊 醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心， 在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量后，加入等体积的 双蒸水，经RNase37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸钠、 乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进 行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解；水浴脱蜡法是将石 蜡包埋组织块切成薄片，加入生理盐水，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后， 冷却，夹去石蜡，重复5-10次，直至无石蜡为止，再将液体(含组织)倒 入离心管中离心弃上清液，剪碎组织，加入含有十二烷基磺酸钠和蛋白酶 配制的溶液，置37℃恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异 戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心， 在TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量后，加入等体积 的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸 钠、乙醇沉淀，离心沉淀，0.8％琼脂糖凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出， 进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水溶解。
实施例1：
将石蜡包埋组织块切成5-10μm厚的薄片，置于带盖的试剂瓶中，加 入20ml二甲苯微微摇动，换液3次，总时间为12小时，用浓度为100％、90％、 75％、50％、25％的乙醇呈梯度水化，每次20ml，间隔30分钟浸洗一次，弃 上清液，剪碎组织，加入10ml含十二烷基磺酸钠和蛋白酶K溶液，置37℃ 恒温水浴3天，等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加 醋酸钠至0.3mol/l，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心15分钟，在 500μl的TE缓冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量为430μg， 加入等体积的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃 取，用醋酸钠、乙醇沉淀，离心沉淀，用200μl双蒸水溶解，0.8％琼脂糖 凝胶电泳，将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀 后用双蒸水溶解。
实施例2：
将石蜡包埋组织块切成5-10μm厚的薄片，置于一烧杯中，加入生理 盐水50ml，置65-72℃水浴，待石蜡溶化后，取出烧杯冷却，夹去石蜡， 重复5-10次，直至无石蜡为止。将液体倒入离心管中，离心弃上清液，剪 碎组织，加入10μl十二烷基磺酸钠和蛋白酶K溶液，37℃恒温水浴3天， 等体积饱和酚萃取一次，用氯仿-异戊醇24∶1萃取两次，加醋酸钠至0.3 mol/l，用两倍体积无水乙醇沉淀核酸DNA，离心15分钟，在500μl的TE缓 冲液中溶解核酸DNA，经紫外分光光度计测其含量为380μg，加入等体积 的双蒸水，经RNase 37℃水浴30分钟，再次用氯仿-异戊醇萃取，用醋酸 钠、乙醇沉淀，离心沉淀，用200μl双蒸水溶解，0.8％琼脂糖凝胶电泳， 将核酸DNA大片段切出，进行电洗脱，洗脱后的核酸DNA经沉淀后用双蒸水 溶解。
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