乳头瘤假病毒及其制备方法
专利汇可以提供乳头瘤假病毒及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种能通过口服途径产生免疫反应的 乳头 瘤假病毒及其制备方法。其特点，是将人乳头瘤病毒样颗粒(HPV-VLP)或 牛 乳头瘤病毒样颗粒(BPV-VLP)，解离，掺入质粒(plasmids或DNA 疫苗 )，从新组合成人或牛乳头瘤假病毒，通过口服送入人体的粘膜和系统性淋巴组织，激活人体的免疫反应，起到防病治病的作用，此假病毒可以诱导出比基因疫苗更强的免疫反应。之外，此假病毒可以将基因送到体内淋巴组织，可以用于 基因 治疗 。，下面是乳头瘤假病毒及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种乳头瘤假病毒的制备方法，其特征在于：
(1)首先将人乳头瘤病毒样颗粒或牛乳头瘤病毒样颗粒与解离缓冲液1∶ 1体积混合，解离缓冲液为：乙二醇二(β-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)20mM，二 硫苏糖醇(DTT)40mM，氯化钠(NaCl)300mM，三(羟甲基)氨基甲烷盐酸 盐(Tris-HCl)(PH8.0)100mM；
(2)加入1/10体积的质粒：0.5-1μg/μl的质粒；
(3)逐渐加入终止缓冲液，终止缓冲液为：氯化钙(CaCl2)25mM，二 甲基亚砜(DMSO)20％体积百分比；
(4)混合好的混合液放在4℃过夜。
2.根据权利要求1所述的乳头瘤假病毒的制备方法，其特征在于：可将抗原 基因插入质粒合成假病毒来制作疫苗。
3.根据权利要求1所述的乳头瘤假病毒的制备方法所制备的一种乳头瘤假病 毒，其特征在于：它是由人乳头瘤病毒样颗粒或牛乳头瘤病毒样颗粒解离 然后参入质粒，重新组合而成的人或牛乳头瘤假病毒。
本发明涉及一种能通过口服途径产生免疫反应的乳头瘤假病毒及 其制备方法。此假病毒可以用于疫苗来预防和治疗粘膜致病菌感染或 粘膜肿瘤，此假病毒也可用于基因治疗。
我们都知道病原微生物和人体免疫机能缺陷是导致许多疾病的根 源，人体经常遭受病原微生物的侵袭及人体内部暗藏的肿瘤的破坏。 因此，人体也需要一种机体抵抗力或免疫力来抵抗病原微生物的入侵 感染和机体内部的病变。目前临床使用的疫苗是通过皮下或肌肉注 射，从而产生特异的免疫反应，导致对这种疾病的抵抗能力，使以后 不再得这种病。但是，这些疫苗往往是皮下或肌肉注入人体后，只能 产生系统性免疫反应，而不能产生粘膜免疫反应。这样的疫苗往往不 能预防和治疗粘膜传染的致病菌。但是，许多致病菌是由粘膜传染的， 比如：艾兹病。
本发明的目的就是研究出一种不会致病的类似病毒的假病毒，将 用于治疗和预防疾病的基因或DNA疫苗注入病毒外壳内，通过口服 的途径送入人体的粘膜和系统性淋巴组织，激活人体的免疫反应，起 到防病治病的作用。
本发明所说的乳头瘤假病毒是将人乳头瘤病毒样颗粒(HPV- VLP)或牛乳头瘤病毒样颗粒(BPV-VLP)，解离，掺入质粒(plasmids)， 从新组合成人或牛乳头瘤假病毒。正常病毒是由一个外壳和壳内的 DNA构成，而发明所说的这个乳头瘤假病毒只有一个病毒的外壳，而 无壳内的病毒的DNA。如果将DNA疫苗放入这个病毒外壳内，就可 以通过口服送入人体内。本发明所述的DNA疫苗只是一段DNA片段， 不是病毒的DNA，若把这个DNA片段皮下或肌肉注射人体内，就可以 诱导系统免疫反应。含有DNA疫苗的病毒外壳就是本发明所述的假 病毒。此假病毒的制备方法如下：
(1)将乳头瘤病毒样颗粒与解离缓冲液混合，体积混合比为1∶1， 培养60min，室温；解离缓冲液：乙二醇二(β-氨基乙醚)四乙酸 (EGTA)20mM，二硫苏糖醇(DTT)40mM，氯化钠(NaCl)300mM，三(羟 甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(PH8.0)100mM；
(2)加入1/10体积的质粒：0.5-1μg/μl的质粒；
(3)逐渐加入终止缓冲液，终止缓冲液为：氯化钙(CaCl2)25mM，二 甲基亚砜(DMSO)20％体积百分比；
(4)混合好的混合液放在4℃过夜。
此假病毒不致病，可用于基因治疗，即将所要表达的基因插入质 粒，装入病毒样颗粒，此假病毒即可将此基因经口服送入肠粘膜及系 统淋巴组织，还有粘膜上皮组织。更重要的是此假病毒可以用作疫苗， 将抗原的基因装入质粒，然后合成假病毒，经口服，可产生保护性的 免疫反应。这一点与其他疫苗不同，是因为许多疫苗只能皮下或肌肉 注射而不能口服。只能产生系统性免疫反应但不能产生粘膜免疫反 应。因为许多致病菌是通过粘膜传染，所以只有此假病毒才可能产生 有效的免疫反应来防止或治疗粘膜的致病菌的感染。这些致病菌包括 细菌，比如沙门氏菌等。还有病毒，比如HIV(人免疫缺陷病毒)等。 同时此病毒还可以用于诱导抗肿瘤免疫反应来治疗肿瘤，特别是粘膜 肿瘤，比如结肠肿瘤。假病毒能诱导比基因疫苗更强的免疫反应。
实施例1 首先将人乳头瘤病毒的外壳与解离缓冲液按1∶1体积混合、培养 60min，室温，解离缓冲液为：乙二醇二(β-氨基乙醚)四乙酸 (EGTA)20mM，二硫苏糖醇(DTT)40mM，氯化钠(NaCl)300mM，三 (羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(PH8.0)100mM；然后加入1/10 体积的质粒：0.51μg/μl的PCI-GLP-LCMV质粒，再将终止缓冲 液逐步加入，终止缓冲液为：氯化钙(CaCl2)25mM，二甲基亚砜 (DMSO)20％体积百分比，将混合好的混合液放在4℃过夜。用假病毒 对C57BL6小鼠做免疫试验，用皮下注射方式注入小鼠体内，同时也 将此种质粒直接注入其他小鼠的体内与其作对比试验，用Cr51释放 试验，或r干扰素分泌试验(Elispot)。测出假病毒可以诱导出比质 粒诱导出更多的特异性细胞毒细胞。因此在诱导细胞免疫反应上，假 病毒疫苗比基因疫苗效用高。
实施例2
首先将牛乳头瘤病毒的外壳与解离缓冲液按1∶1体积混合、培 养60min，室温，解离缓冲液为：乙二醇二(β-氨基乙醚)四乙酸 (EGTA)20mM，二硫苏糖醇(DTT)40mM，氯化钠(NaCl)300mM，三 (羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(PH8.0)100mM，然后加入1/10 体积的1.0μg/μl的携带绿色荧光蛋白GLP的基因的质粒，再将终止 缓冲液逐步加入，终止缓冲液为：氯化钙(CaCl2)25mM，二甲基亚 砜(DMSO)20％体积百分比，将混合好的混合液放在4℃过夜。用此假 病毒让小鼠口服(使用胃管)，然后检测GLP的表达。我们可以在 肠粘膜、肠粘膜淋巴结，脾脏检测出GLP.此假病毒可以携带基因到 粘膜及系统淋巴系统。因此，可以用于基因治疗。若用质粒本身口服 则测不到GLP.
实施例3
用与实施例1同样的方法制备含有HPV16E7质粒的假病毒经口 服来免疫动物，可诱导出粘膜及系统E7特异性的细胞毒细胞，然而 直接用此质粒本身，则诱导不出免疫反应。因此此假病毒可以用于诱 导粘膜及系统免疫反应。
实施例4
用于实施例1、2同样的方法制备含有HPV和BPV质粒的假病毒， 然后用含有HPV的假病毒经口服免疫小鼠，然后用含有BPV的假病 毒来感染小鼠，发现HPV假病毒可以防止BPV假病毒的感染。此假 病毒可以用于提供免疫保护。
实施例5
用实施例1或实施例2的方法制备含有白介素-II的假病毒，用 于提高粘膜反应的效率。经过口服进入肠粘膜淋巴组织和其他淋巴组 织，提高对粘膜免疫诱导的效率。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 用于在体基因治疗的基因编辑组合物或试剂盒 | 2020-05-13 | 6 |
| 治疗血友病的治疗产品以及利用其治疗血友病的方法 | 2021-02-04 | 6 |
| 一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法 | 2020-10-17 | 5 |
| 细菌耐药基因检测方法、基因芯片和试剂盒 | 2020-08-12 | 1 |
| PCDH17基因的应用 | 2020-07-30 | 6 |
| 基于高通量测序技术确定肺癌基因突变位点的引物、试剂盒及方法 | 2021-09-22 | 0 |
| 一种功能化聚酰胺-胺树状大分子及其纳米复合物用于基因转染的方法 | 2021-10-18 | 0 |
| 一种CpG寡核苷酸及其应用 | 2020-08-28 | 2 |
| 一种端粒酶启动基因表达方法及其应用 | 2021-11-22 | 5 |
| 一种靶向survivin基因的siRNA的结构及其抗肿瘤用途 | 2022-11-08 | 3 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
