抗PD-1抗体及组合物
阅读：320发布：2021-12-05
专利汇可以提供抗PD-1抗体及组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 关于抗PD-1 抗体 和使用它们以 治疗 与PD-1活性相关的 疾病 和病况(例如癌症)的方法。，下面是抗PD-1抗体及组合物专利的具体信息内容。
1.一种抗PD-1抗体或其抗原结合部分，其中该抗体和以下者竞争与人类PD-1的结合，或和以下者与相同的人类PD-1的表位结合：抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、
18250、18325、18366、18400、18413或18483。
2.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29-31的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:32-34的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29-34的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体；
和
l)其HC包含SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的抗体。
3.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:35-37的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38-40的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:35-40的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体；
和
l)其HC包含SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的抗体。
4.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:41-43的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:44-46的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:41-46的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体；
和
l)其HC包含SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的抗体。
5.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、47和48的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:49-51的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、47、48和49-51的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体；
和
l)其HC包含SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的抗体。
6.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:52-54的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38、45和55的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:52-54和38、45和55的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的抗体。
7.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、56和48的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和51的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、56和48和57、33和51的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的抗体。
8.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:58-60的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和34的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:58-60和57、33和34的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的抗体。
9.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:61、62和43的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:44-46的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:61、62和43和44-46的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的抗体。
10.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:63-65的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:32-34的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:63-65和32-34的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的抗体。
11.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:66-68的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38、45和55的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:66-68和38、45和55的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的抗体。
12.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:69-71的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:72、45和73的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:69-71和72、45和73的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的抗体。
13.根据权利要求1的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:74-76的氨基酸序列的抗体；
b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的抗体；
d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列的抗体；
e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和34的氨基酸序列的抗体；
f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗体；
h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:74-76和57、33和34的氨基酸序列的抗体；
j)其VH在序列上与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
k)其VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗体；和
l)其HC包含SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的抗体。
14.根据权利要求2的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，其中：
位于位置35的X是S，及/或
位于位置84的X是N。
15.根据权利要求2或14的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是D；
且视需要地其中：
位于位置40的X是A，及/或
位于位置55的X是Y。
16.根据权利要求3的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
17.根据权利要求3或16的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是D，且
位于位置3的X是Q；
且视需要地其中：
位于位置53的X是S。
18.根据权利要求4的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是E，且
位于位置5的X是V；
且视需要地其中：
位于位置13的X是Q，
位于位置35的X是S，
位于位置46的X是E，
位于位置50的X是A，
位于位置77的X是N，
位于位置80的X是Y，及/或
位于位置115的X是M。
19.根据权利要求4或18的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，其中：
位于位置4的X是M。
20.根据权利要求5的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，视需要地其中：
位于位置64的X是V。
21.根据权利要求5或20的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其中：
位于位置3的X是V，且
位于位置4的X是M；
且视需要地其中：
位于位置69的X是S。
22.根据权利要求6的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中：
位于位置5的X是Q；
且视需要地其中：
位于位置59的X是N，
位于位置76的X是K，及/或
位于位置83的X是L。
23.根据权利要求6或22的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是A。
24.根据权利要求7的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，视需要地其中：
位于位置10的X是G，及/或
位于位置16的X是G。
25.根据权利要求7或24的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是D，且
位于位置4的X是M；
且视需要地其中：
位于位置55的X是Y，及/或
位于位置93的X是Y。
26.根据权利要求8的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，其中：
位于位置5的X是V；
且视需要地其中：
位于位置50的X是Y，
位于位置59的X是Y，及/或
位于位置61的X是A。
27.根据权利要求8或26的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，其中：
位于位置3的X是V，且
位于位置4的X是M；
且视需要地其中：
位于位置55的X是Y。
28.根据权利要求9的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是E，
位于位置5的X是V，且
位于位置6的X是E；
且视需要地其中：
位于位置35的X是S，
位于位置49的X是S，
位于位置50的X是A，
位于位置73的X是D，及/或
位于位置78的X是T。
29.根据权利要求9或28的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是D，
位于位置3的X是Q，且
位于位置4的X是M。
30.根据权利要求10的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是E，且
位于位置6的X是E。
31.根据权利要求10或30的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是D；
且视需要地其中：
位于位置40的X是A，及/或
位于位置55的X是Y。
32.根据权利要求11的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，其中：
位于位置2的X是V；
且视需要地其中：
位于位置43的X是G，
位于位置49的X是I，
位于位置59的X是N，
位于位置70的X是I，及/或
位于位置111的X是Q。
33.根据权利要求11或32的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是A，和
位于位置3的X是Q；
且视需要地其中：
位于位置10的X是S。
34.根据权利要求12的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，视需要地其中：
位于位置48的X是V，及/或
位于位置50的X是A。
35.根据权利要求12或34的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列，其中：
位于位置4的X是M；
且视需要地其中：
位于位置12的X是S。
36.根据权利要求13的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中：
位于位置1的X是E，
位于位置5的X是V，且
位于位置6的X是E；
且视需要地其中
位于位置35的X是S。
37.根据权利要求13或36的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中：
位于位置3的X是V；
且视需要地其中：
位于位置40的X是A，及/或
位于位置55的X是Y。
38.一种抗PD-1抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含以下者的H-CDR1-3和L-CDR1-
3氨基酸序列：
a)分别为SEQ ID NO:29、30、31、32、33、和34；
b)分别为SEQ ID NO:35、36、37、38、39、和40；
c)分别为SEQ ID NO:41、42、43、44、45、和46；
d)分别为SEQ ID NO:29、47、48、49、50、和51；
e)分别为SEQ ID NO:52、53、54、38、45、和55；
f)分别为SEQ ID NO:29、56、48、57、33、和51；
g)分别为SEQ ID NO:58、59、60、57、33、和34；
h)分别为SEQ ID NO:61、62、43、44、45、和46；
i)分别为SEQ ID NO:63、64、65、32、33、和34；
j)分别为SEQ ID NO:66、67、68、38、45、和55；
k)分别为SEQ ID NO:69、70、71、72、45、和73；或
l)分别为SEQ ID NO:74、75、76、57、33、和34。
39.一种抗PD-1抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含重链可变域和轻链可变域，其中该重链可变域和轻链可变域具有以下者的氨基酸序列：
a)分别为SEQ ID NO:1和2；
b)分别为SEQ ID NO:3和4；
c)分别为SEQ ID NO:5和6；
d)分别为SEQ ID NO:7和8；
e)分别为SEQ ID NO:9和10；
f)分别为SEQ ID NO:11和12；
g)分别为SEQ ID NO:13和14；
h)分别为SEQ ID NO:15和16；
i)分别为SEQ ID NO:17和18；
j)分别为SEQ ID NO:19和20；
k)分别为SEQ ID NO:21和22；或
l)分别为SEQ ID NO:23和24。
40.一种抗PD-1抗体，其包含：
a)具有SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列的重链(HC)和具有SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的轻链(LC)；
b)具有SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的LC；
c)具有SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的LC；
d)具有SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的LC；
e)具有SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的LC；
f)具有SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的LC；
g)具有SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的LC；
h)具有SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的LC；
i)具有SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的LC；
j)具有SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的LC；
k)具有SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的LC；或
l)具有SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的LC。
41.根据前述权利要求中任一项的抗PD-1抗体，其中该抗体是IgG同型的。
42.根据权利要求41的抗PD-1抗体，其中该抗体是IgG同型IgG1亚型的。
43.根据权利要求42的抗PD-1抗体，其中该抗体于其FC区包含至少一个突变。
44.根据权利要求43的抗PD-1抗体，其中该抗体于重链氨基酸位置228、234和235之一或多者包含突变，该等位置是根据IMGT编号方案编号。
45.根据权利要求44的抗PD-1抗体，其中位于位置234和235的氨基酸残基之一或两者被突变成Ala，及/或其中位于位置228的氨基酸残基被突变成Pro。
46.根据权利要求1-45中任一项的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗体或部分具有以下特性之至少一者：
a)以4x10-8M或更低的KD与食蟹猕猴PD-1结合；
b)以2x10-8M或更低的KD与小鼠PD-1结合；
c)以3x10-9M或更低的KD与人类PD-1结合；
d)于10μg/ml的浓度抑制PD-1与PD-L1的交互作用；
e)于SEB全血分析中刺激IL-2制造；和
f)于单向混合淋巴细胞反应分析中刺激IFN-γ制造。
47.根据权利要求1-46中任一项的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗体或部分与至少一个选自抗体18366、18250、18040、18247、18113、或18483的抗体竞争与人类PD-1的结合。
48.根据权利要求1-46中之任一项的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其中该抗体或部分与至少一个选自抗体12760和13112的抗体竞争与人类PD-1的结合。
49.一种医药组合物，其包含至少一种根据权利要求1-48中之任一项的抗PD-1抗体或其抗原结合部分和医药上可接受的赋形剂。
50.根据权利要求47的医药组合物，其包含一种根据权利要求1-48中之任一项的抗PD-
1抗体或其抗原结合部分和医药上可接受的赋形剂。
51.一种经分离的核酸分子，其包含编码根据权利要求1-48中之任一项的抗PD-1抗体之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、或编码根据权利要求1-48中任一项的抗PD-1抗体之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列、或两者。
52.一种载体，其包含根据权利要求51的经分离的核酸分子，其中该载体进一步包含表达控制序列。
53.一种宿主细胞，其包含编码根据权利要求1-48中任一项的抗PD-1抗体之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、和编码根据权利要求1-48中之任一项的抗PD-1抗体之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列。
54.一种用于制造根据权利要求1-48中任一项的抗体或抗原结合部分的方法，其包含提供根据权利要求48的宿主细胞、于适用于该抗体或部分之表达的条件下培养该宿主细胞、和分离所得的抗体或部分。
55.一种双特异性结合分子，其具有任二种不同的根据权利要求1-48中任一项的抗PD-
1抗体或其抗原结合部分之结合特异性。
56.一种用于在有需要的患者中增强免疫性的方法，其包含将根据权利要求1-48中任一项的抗PD-1抗体或抗原结合部分、根据权利要求49或50的医药组合物、或根据权利要求
55的双特异性结合分子投予至该患者。
57.一种用于治疗患者之癌症的方法，其包含将根据权利要求1-48中任一项的抗体或抗原结合部分、根据权利要求49或50的医药组合物、或根据权利要求55的双特异性结合分子投予至该患者。
58.根据权利要求57的方法，其中该癌症源于选自由皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏所组成的组的组织。
59.根据权利要求57的方法，其中该癌症是选自由晚期或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、肾细胞癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、或霍奇金氏淋巴瘤所组成的组。
60.根据权利要求56-59中任一项的方法，其进一步包含将免疫刺激剂、疫苗、化学治疗剂、抗赘瘤剂、抗血管形成剂、酪氨酸激酶抑制剂、PD-1途径抑制剂、或放射线治疗投予至该患者。
61.一种根据权利要求1-48中任一项的抗PD-1抗体或抗原结合部分之用途，其是用于制造用于增强患者之免疫性或治疗患者之癌症的医药品。
62.一种根据权利要求1-48中任一项的抗体或抗原结合部分或根据权利要求55的双特异性结合分子，其是用于增强患者之免疫性或治疗患者之癌症。
63.根据权利要求62的供使用的抗体或抗原结合部分或双特异性结合分子，其中该癌症源于选自由皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏所组成的组的组织。
64.根据权利要求62的供使用的抗体或抗原结合部分或双特异性结合分子，其中该癌症选自由晚期或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、肾细胞癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、或霍奇金氏淋巴瘤所组成的组。
65.根据权利要求62-64中任一项的供使用的抗体或抗原结合部分或双特异性结合分子，其中该使用进一步包含将免疫刺激剂、疫苗、化学治疗剂、抗赘瘤剂、抗血管形成剂、酪氨酸激酶抑制剂、PD-1途径抑制剂、或放射线治疗投予至该患者。
66.一种制品，其包含根据权利要求1-48中任一项的抗体或抗原结合部分或根据权利要求55的双特异性结合分子，其中该制品适用于增强患者之免疫性或治疗患者之癌症。
抗PD-1抗体及组合物
[0001] 相关申请案的交互参照
[0004] 本申请案含有序列表，其已经以ASCII格式电子呈送且系特此以其完整内容以引用方式并入。该序列表之电子复本(于2017年11月13日建立)名称为022675_WO056_SL.txt且大小为99,158个数元组。
[0005] 发明背景
[0006] PD-1(亦以程序性细胞死亡蛋白质1和CD279为人所知)是268个氨基酸的细胞表面受体，其属于免疫球蛋白超家族。PD-1是T细胞调节子之CD28家族之成员且被表达在T细胞、B细胞和巨噬细胞上。其结合配体PD-L1(亦以B7同源物为人所知)和PD-L2(亦以B7-DC为人所知)。
[0007] PD-1是第I型膜蛋白质，其结构包括胞外IgV域、跨膜区和含有两个磷酸化位置的胞内尾部。作为免疫查核点蛋白质而为人所知，PD-1起可诱发性免疫调节性受体之作用，于(例如)对抗原刺激反应的T细胞之负向调整扮演某种角色。
[0008] PD-L1对于PD-1是优越的配体。PD-L1与PD-1之结合抑制T细胞活性、减低细胞介素制造并抑制T细胞增殖。表达PD-L1的癌症细胞能够利用此机制以通过PD-L1与PD-1受体之结合使T细胞之抗肿瘤活性失活。
[0009] 鉴于其免疫反应调整性特性，已于作为免疫治疗之有力目标方面(包括癌症和自体免疫疾病之治疗)研究PD-1。两种抗PD-1抗体(派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab))已于美国和欧洲被核准用于治疗某些癌症。
[0010] 鉴于PD-1作为免疫调节子的关键角色，存在有对于靶向PD-1受体以治疗癌症和某些免疫系统之病症的新颖且改善的免疫治疗的需求。
[0011] 发明概述
[0012] 本发明针对靶向PD-1的新颖重组抗体、以及包含此等抗体之一或多者的医药组合物、和该等抗体和医药组合物用于增强患者之免疫性、和用于治疗源自诸如皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏的组织的癌症的用途。相较于用于此等癌症的目前可得的治疗(包括抗体治疗)，设想到本发明的抗体可提供卓越的临床反应，无论是单独或与另一种癌症治疗剂(诸如靶向另一种免疫查核点蛋白质的抗体)组合。
[0013] 于一个实施方式中，本发明提供抗PD-1抗体或其抗原结合部分，其中该抗体和以下者之任一者竞争与人类PD-1的结合、或和以下者之任一者与相同的人类PD-1之表位结合：抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483。
[0014] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体和以下者竞争与人类PD-1的结合：其重链(H)CDR1-3和轻链(L)CDR1-3与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3相同或衍生自该等H-CDR1-3和L-CDR1-3的抗体。
[0015] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体和以下者与相同的人类PD-1之表位结合：其重链(H)CDR1-3和轻链(L)CDR1-3与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3相同或衍生自该等H-CDR1-3和L-CDR1-3的抗体。
[0016] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体包含分别包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3氨基酸序列的H-CDR1-3。
[0017] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有在氨基酸序列上与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或184835之重链可变域(VH)至少90％(例如至少92％、至少95％、至少98％、或至少99％)一致的VH域。
[0018] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH氨基酸序列的VH。
[0019] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH氨基酸序列、和SEQ ID NO:
26之重链恒定区氨基酸序列的重链(HC)。
26之重链恒定区氨基酸序列的重链(HC)。
[0020] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体包含分别包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之L-CDR1-3氨基酸序列的L-CDR1-3。
[0021] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有在氨基酸序列上与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之轻链可变域(VL)至少90％(例如至少92％、至少95％、至少98％、或至少99％)一致的VL域。
[0022] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VL氨基酸序列的VL。
[0023] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VL氨基酸序列、和SEQ ID NO:
28之轻链恒定区氨基酸序列的轻链(LC)。
28之轻链恒定区氨基酸序列的轻链(LC)。
[0024] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR3和L-CDR3氨基酸序列。
[0025] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3氨基酸序列。
[0026] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有在氨基酸序列上分别与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH和VL至少90％(例如至少92％、至少95％、至少98％、或至少99％)一致的VH和VL。
[0027] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH和VL氨基酸序列或分别由该等VH和VL氨基酸序列所组成的VH和VL。
[0028] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之HC和LC氨基酸序列或分别由该等HC和LC氨基酸序列所组成的HC和LC。
[0029] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有(1)包含选自由抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、和18483所组成的组的抗体之VH氨基酸序列、和SEQ ID NO:26之重链恒定区氨基酸序列的HC；和(2)包含该所选抗体之VL氨基酸序列和SEQ ID NO:28之轻链恒定区氨基酸序列的LC。
[0030] 于某些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分具有以下特性之至少一者：
[0031] a)以(例如)4x10-8M或更低的KD与食蟹猕猴PD-1结合；
[0032] b)以(例如)2x10-8M或更低的KD与小鼠PD-1结合；
[0033] c)以3x10-9M或更低的KD与人类PD-1结合；
[0034] d)于10μg/ml的浓度抑制PD-1与PD-L1的交互作用；
[0035] e)于SEB全血分析中刺激IL-2制造；和
[0036] f)于单向混合淋巴细胞反应分析中刺激IFN-γ制造。
[0037] 如此抗体之实例包括(但不限于)抗体18040、18049、18098、18113、18247、18250、18325、18366、18413、和18483(其等具有特性a)和c)-f))和抗体18201和18400(其等具有特性a)-f))。于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分具有该等特性之所有者。
[0038] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分和抗体18366、18250、18040、18247、18113、及/或18483竞争与人类PD-1的结合。于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分和抗体12760及/或13112竞争与人类PD-1的结合。
[0039] 于某些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分和派姆单抗或纳武单抗不竞争与PD-1的结合。于某些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分和派姆单抗或纳武单抗不与相同的表位结合。
[0040] 于另一个方面，本发明提供医药组合物，其包含至少一种如于本文中描述的抗PD-1抗体或其抗原结合部分和医药上可接受的赋形剂，视需要地加上另外的治疗剂，诸如抗癌症抗体治疗剂。
[0041] 本发明进一步提供经分离的核酸分子，其包含编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列、或两者。
[0042] 本发明亦提供载体，其等包含如此经分离的核酸分子，其中该等载体可进一步包含表达控制序列。
[0043] 本发明亦提供宿主细胞，其等包含编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列、或两者。
[0044] 本发明亦提供用于制造如于本文中描述的抗体或其抗原结合部分的方法，其包含提供包含编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列和编码如于本文中描述的抗PD-1抗体之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列的宿主细胞、于适用于该抗体或部分之表达的条件下培养该宿主细胞、和分离所得的抗体或部分。
[0045] 本发明亦提供多特异性(例如双特异性)结合分子，其具有本文中描述的抗PD-1抗体之结合特异性和另一种不同的抗体之结合特异性，该不同的抗体是诸如另一种抗PD-1抗体(例如如于本文中描述者)或靶向不同的蛋白质(诸如另一种免疫查核点蛋白质、癌症抗原或另一种其活性介导疾病病况(诸如癌症)的细胞表面分子)的抗体。于一些实施方式中，该多特异性(例如双特异性)结合分子包含该抗PD-1抗体和该另外的抗体之抗原结合部分(例如六个CDR)。
[0046] 本发明亦提供用于增强患者(例如人类患者)之免疫性的方法，其包含将如于本文中描述的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、医药组合物、或双特异性结合分子投予至该患者。
[0047] 本发明进一步提供用于治疗患者(例如人类患者)之癌症的方法，其包含将如于本文中描述的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、医药组合物、或双特异性结合分子投予至该患者。于一些实施方式中，该癌症源于选自皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏的组织。该癌症可以是(例如)晚期或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、肾细胞癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、或霍奇金氏淋巴瘤。
[0049] 本发明进一步提供包含如于本文中描述的抗PD-1抗体或抗原结合部分的抗体组合物之用途，其是用于制造用于治疗患者之癌症及/或增强患者之免疫性的医药品。
[0050] 本发明进一步提供如于本文中描述的抗PD-1抗体或抗原结合部分，其是用于治疗患者之癌症及/或增强患者之免疫性，例如于本文中描述的治疗方法中。
[0051] 本发明进一步提供包含如于本文中描述的抗PD-1抗体或抗原结合部分的制品，其中该制品是适用于治疗患者之癌症及/或增强患者之免疫性，例如于本文中描述的治疗方法中。
[0053] 图1A-1D显示四种展现不同的对PD-1异种同源物的反应性的抗PD-1抗体克隆之代表性流式细胞测量术点图。
[0054] 图2A-2H显示本发明的抗PD-1抗体之PD-L1细胞表达性PD-1的结合的封阻。
[0055] 图3A-3F显示十二种抗PD-1抗体于SEB全血分析中的剂量反应曲线。
[0056] 图4A-4F显示十二种抗PD-1抗体于MLR(单向混合淋巴细胞反应)分析中的剂量反应曲线。
[0057] 图5显示针对所测试的抗PD-1抗体和纳武单抗和派姆单抗类似物所鉴认的表位组(表位仓(epitope bin))之概观。以黑线连接的抗体指出交叉封阻活性。抗体是根据与其他抗PD-1抗体的竞争模式分组。Nivo：纳武单抗类似物；Pembro：派姆单抗类似物。
[0058] 发明详述
[0059] 本发明提供新颖的抗人类PD-1抗体，其等可用于增强人类患者(诸如癌症患者)之免疫系统。除非另外陈述，用于本文中，「PD-1」是论及人类PD-1。人类PD-1多肽序列可以Uniprot登录号Q15116(PDCD1_HUMAN)获得。
[0060] 用于本文中，术语「抗体」(Ab)或「免疫球蛋白」(Ig)是论及包含藉由二硫键彼此连接的两个重(H)链(约50-70kDa)和两个轻(L)链(约25kDa)的四聚体。各个重链是由重链可变域(VH)和重链恒定区(CH)构成。各个轻链是由轻链可变域(VL)和轻链恒定区(CL)构成。该等VH和VL域可被进一步细分成称为「互补性决定区」(CDR)之高度变异性区域，中间散布着较被保留的称为「框架区」(FR)之区域。各个VH和VL是由三个CDR(于本文中H-CDR称呼来自重链的CDR；且于本文中L-CDR称呼来自轻链的CDR)和四个FR构成，其等按以下顺序从氨端向羧端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链或轻链中氨基酸编号之指定可根据 定义(Lefranc等人，Dev Comp Immunol 27(1):55-77(2003))；或Kabat,
Sequences of Proteins of Immunological Interest(美国国家卫生研究院，贝什斯达，MD(1987和1991))；Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；或Chothia等人，Nature 342:878-883(1989)之定义。
Sequences of Proteins of Immunological Interest(美国国家卫生研究院，贝什斯达，MD(1987和1991))；Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；或Chothia等人，Nature 342:878-883(1989)之定义。
[0061] 术语「重组抗体」是论及一种抗体，其自包含编码该抗体的核苷酸序列之细胞或细胞株表达，其中该(等)核苷酸序列不天然与该细胞联结。
[0062] 术语「经分离的蛋白质」、「经分离的多肽」或「经分离的抗体」是论及蛋白质、多肽或抗体，其由于其衍生之根源或来源(1)不与于其天然状态下伴随其的天然联结组份联结，(2)不含来自相同物种的其他蛋白质，(3)是由来自不同物种的细胞表达，及/或(4)不于自然中存在。因此，化学合成的或在与其所天然源自的细胞不同的细胞系统中合成的多肽会是自其天然联结的组份「分离的」。蛋白质亦可藉由使用所属技术领域中广为人知的蛋白质纯化技术分离而变得实质上不含天然联结的组份。
[0063] 用于本文中，术语「种系」是论及抗体基因和基因节段之核苷酸和氨基酸序列，当其等是透过生殖细胞从亲代传递给后代时。种系序列与成熟B细胞中编码抗体的核苷酸序列(其已于B细胞成熟之过程期间被重组和超突变事件改变)有区别。「利用」特殊种系序列的抗体具有与该种系核苷酸序列排比的或相较于与任何其他种系核苷酸或氨基酸序列与其所指明的氨基酸序列更密切地排比的核苷酸或氨基酸序列。
[0064] 术语「亲和力」是论及抗原与抗体间的吸引之度量。抗体对抗原之固有吸引力典型被表达成特定抗体-抗原交互作用之结合亲和力平衡常数(KD)。当KD是≤1Mm(较佳是≤100Nm)时，抗体被认为特异性地与抗原结合。KD结合亲和力常数可(例如)藉由表面电浆子共振(SPR)(BIAcoreTM)或生物层干涉法(Bio-Layer Interferometry)(例如使用来自IBIS TM
Technologies的IBIS MX96 SPR系统、来自Bio-Rad的ProteOn XPR36 SPR系统、或来自ForteBio的OctetTM系统)测量。
Technologies的IBIS MX96 SPR系统、来自Bio-Rad的ProteOn XPR36 SPR系统、或来自ForteBio的OctetTM系统)测量。
[0065] 术语「koff」是论及特定抗体-抗原交互作用之解离速率常数。koff解离速率常数可藉由SPR或生物层干涉法(例如使用以上所列的系统之一)测量。
[0066] 术语「表位」用于本文中是论及与抗体或相关分子(诸如双特异性结合分子)特异性结合的抗原之部分(决定子)。表位决定子一般由诸如氨基酸或碳水化合物或糖侧链之分子的化学活性表面基团组成且一般具有特殊的三度空间结构特征，以及特殊的电荷特征。表位可为「线性」或「构型性」。在线性表位中，所有蛋白质(例如抗原)和交互作用分子(诸如抗体)间的交互作用之点是沿着该蛋白质之一级氨基酸序列线性发生。在构型性表位中，交互作用之点横跨在蛋白质上于一级氨基酸序列方面彼此分开的氨基酸残基发生。一旦抗原上所欲的表位被测定出，就有可能去使用所属技术领域中广为人知的技术来产生针对该表位的抗体。例如，针对线性表位的抗体可(例如)藉由使用具有该线性表位之氨基酸残基的胜肽致免疫动物来产生。针对构型性表位的抗体可(例如)藉由使用含有该构型性表位之相关氨基酸残基的迷你域致免疫动物来产生。针对特定表位的抗体亦可(例如)藉由使用所关注的目标分子(例如PD-1)或其相关部分致免疫动物、接着针对与该表位的结合作筛选来产生。
[0067] 咸可藉由使用所属技术领域中已知的方法(包括(不限于)竞争分析、表位分仓(epitope binning)、和丙氨酸扫描)测定抗体是否和本发明的抗PD-1抗体与相同的表位结合或竞争结合。于一些实施方式中，测试抗体和本发明的抗PD-1抗体与PD-1上的至少一个共同残基(例如至少二、三、四、五、或六个共同残基)结合。于进一步的实施方式中，在PD-1上的接触残基于测试抗体和本发明的抗PD-1抗体间是全然一致的。于一个实施方式中，允许本发明的抗PD-1抗体在饱和条件下与PD-1结合并接着测量测试抗体与PD-1结合的能力。若该测试抗体和参考抗PD-1抗体能够同时与PD-1结合，则该测试抗体和参考抗PD-1抗体与不同的表位结合。然而，若该测试抗体无法同时与PD-1结合，则该测试抗体与和本发明的抗PD-1抗体所结合的表位相同的表位、和该表位重迭的表位、或极接近该表位的表位结合。此实验可使用(例如)ELISA、RIA、BIACORETM、SPR、生物层干涉法或流动式细胞测量术执行。为测试抗PD-1抗体是否与另一种抗PD-1抗体交叉竞争，可以双向使用以上描述的竞争方法，即测定已知抗体是否封阻测试抗体且反之亦然。如此交叉竞争实验可(例如)使用IBIS TM
MX96SPR仪器或Octet 系统执行。
MX96SPR仪器或Octet 系统执行。
[0068] 于某些例子中，改变一或多个CDR氨基酸残基以改善对目标表位的结合亲和力亦可能是所欲的。此以「亲和力成熟」为人所知且可视需要地连结人源化(例如在其中抗体之人源化导致结合特异性或亲和力减低且无法单单藉由回复突变来充分改善结合特异性或亲和力的情况下)执行。种种亲和力成熟方法是所属技术领域中已知的(例如由Burks等人，Proc Natl Acad Sci USA,94:412–417(1997)描述的试管内扫描饱和突变诱发方法、和Wu等人，Proc Natl Acad Sci USA95:6037–6042(1998)之逐步试管内亲和力成熟方法。
[0069] 于一些实施方式中，本发明的抗体可以是嵌合的、经人源化的、或完全人类的。虽然不可能精确地预测特定抗体药物之致免疫性，非人类抗体在人类中相较于人类抗体倾向致免疫性较强。已显示嵌合抗体(其中外源(例如囓齿类或鸟类)恒定区已以人类来源的序列置换)相较于完全外源的抗体一般致免疫性较低。治疗性抗体中的趋势是朝向经人源化或完全人类的抗体。
[0070] 术语「嵌合抗体」是论及一种抗体，其包含来自两种不同动物物种的序列。例如，嵌合抗体可含有鼠类抗体(即由鼠类抗体基因编码的抗体，诸如自使用融合瘤技术致免疫的小鼠获得的抗体)之可变域，该可变域与来自另一物种(例如人类、兔、或大鼠)的抗体之恒定区连结。于嵌合抗体的例子中，其非人类部分可经历进一步改变以人源化该抗体。
[0071] 术语「人源化」是论及修改完全或部分非人类来源的抗体(例如从以所关注的抗原致免疫小鼠或鸡(分别地)获得的鼠类或鸡抗体、或基于如此鼠类或鸡抗体的嵌合抗体)，其是藉由将某些氨基酸序列(特别是在重链和轻链之框架区(FR)和恒定区中者)以相对应人类FR和恒定区氨基酸序列置换，以避免或最小化人类患者中的抗药物抗体反应。非人类来源的抗体因此可经人源化以减低人类抗药物抗体反应之风险。
[0072] 术语「人类抗体」是论及一种抗体，其中其可变域和恒定区序列是源自人类序列。该术语涵盖具有源自人类基因但已经修改(例如)以减低致免疫性、增加亲和力、及/或增加稳定性的序列的抗体。进一步地，该术语涵盖在非人类细胞(其可赋予于人类细胞中是非典型的糖化)中重组制造的抗体。该术语亦涵盖在具有人类抗体基因的基因转殖非人类生物体(例如 大鼠)中制造的抗体。
[0073] 用于本文中，术语抗体之「抗原结合部分」(或简称「抗体部分」)是论及抗体之一或多个部分或片段，其保留与抗原(例如人类PD-1、或其部分)特异性结合的能力。已显示全长抗体之某些片段可执行该抗体之抗原结合功能。术语「抗原结合部分」内包含的结合片段之实例包括(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1域所组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段：包含二个Fab片段(其等藉由位于枢纽区的二硫桥连接)的二价片段；(iii)由VH和CH1域所组成的Fd片段；(iv)由抗体之单一臂的VL和VH域所组成的Fv片段、(v)dAb片段，其由VH域组成；和(vi)能够与抗原特异性结合之分离的互补性决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段之二个域(VL和VH)是由分开的基因编码，其等可使用重组方法藉由合成性连接符连接在一起，该连接符使其等可以其中VL和VH域配对以形成单价分子(以单链Fv(scFv)为人所知)的单一蛋白质链之形式制造。亦于本发明内者是包含VH及/或VL的抗原结合分子。于VH之例子中，该分子亦可包含CH1、枢纽、CH2、或CH3区域之一或多者。如此单链抗体亦意欲被术语抗体之「抗原结合部分」涵盖。单链抗体之其他形式(诸如双体(diabody))亦被涵盖。双体是二价双特异性抗体，其中VH和VL域是在单一多肽链上表达，但使用过短而无法允许在相同链上的该二个域间之配对的连接符，藉此强迫该等域与另一个链之互补域配对并产生二个抗原结合位置。
[0074] 抗体部分(诸如Fab和F(ab')2片段)可自完整抗体使用习用技术(诸如完整抗体之木瓜酵素或胃蛋白酶消化)制备。此外，抗体、抗体部分和免疫黏附分子可使用标准重组DNA技术(例如如于本文中描述者)获得。
[0075] 抗PD-1抗体之类型(同型)和亚型可藉由任何所属技术领域中已知的方法测定。一般而言，抗体之类型和亚型可使用对抗体之特定类型和亚型有特异性的抗体测定。如此抗体是商业上可购得的。类型和亚型可藉由ELISA、西方墨渍以及其他技术测定。供选择地，类型和亚型可藉由定序整个该等抗体之重链及/或轻链之恒定区或其部分、比较其等的氨基酸序列与免疫球蛋白之种种类型和亚型之已知氨基酸序列、和确定该等抗体之类型和亚型来测定。
[0076] 当提及位于抗体序列之给定位置的特殊氨基酸残基时，(例如)「35S」的指示是论及位置和残基，即于此实例中指示丝氨酸残基(S)是存在于该序列之位置35。类似地，(例如)「13Q+35S」之指示是论及位于各自位置的二个残基。除非另加指出，本文之揭示内容中提及的所有抗体氨基酸残基编号是该等按照 编号格式者。
[0077] 抗PD-1抗体
[0078] 本发明提供针对PD-1的抗体、和其抗原结合部分。于特殊的实施方式中，于本文中揭示的抗体是人类抗体，其等是(例如)自具有人类抗体基因的基因转殖大鼠产生。于某些实施方式中，该等人类抗体可含有某些突变，(例如)以将源自引子的突变突变回种系序列(参见(例如)以下的「经Symplex修正的」变体序列)或以将框架区中的突变改变回最接近的V-或J-种系之序列(参见(例如)以下的「种系化」变体序列)。
[0079] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0080] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29-31的氨基酸序列的抗体；
[0081] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0082] c)其VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体；
[0083] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列的抗体；
[0084] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:32-34的氨基酸序列的抗体；
[0085] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0086] g)其VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体；
[0087] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的抗体；
[0088] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29-34的氨基酸序列的抗体；
[0089] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0090] k)其VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体；和
[0091] l)其HC包含SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的抗体。
[0092] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0093] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:35-37的氨基酸序列的抗体；
[0094] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0095] c)其VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体；
[0096] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列的抗体；
[0097] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38-40的氨基酸序列的抗体；
[0098] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0099] g)其VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体；
[0100] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的抗体；
[0101] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:35-40的氨基酸序列的抗体；
[0102] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0103] k)其VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体；和
[0104] l)其HC包含SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的抗体。
[0105] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0106] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:41-43的氨基酸序列的抗体；
[0107] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0108] c)其VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的抗体；
[0109] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列的抗体；
[0110] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:44-46的氨基酸序列的抗体；
[0111] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0112] g)其VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体；
[0113] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的抗体；
[0114] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:41-46的氨基酸序列的抗体；
[0115] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0116] k)其VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体；和
[0117] l)其HC包含SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的抗体。
[0118] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0119] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、47和48的氨基酸序列的抗体；
[0120] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0121] c)其VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体；
[0122] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列的抗体；
[0123] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:49-51的氨基酸序列的抗体；
[0124] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0125] g)其VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体；
[0126] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的抗体；
[0127] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、47、48和49-51的氨基酸序列的抗体；
[0128] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0129] k)其VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体；和
[0130] l)其HC包含SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的抗体。
[0131] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0132] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:52-54的氨基酸序列的抗体；
[0133] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0134] c)其VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的抗体；
[0135] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列的抗体；
[0136] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38、45和55的氨基酸序列的抗体；
[0137] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0138] g)其VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体；
[0139] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的抗体；
[0140] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:52-54和38、45和55的氨基酸序列的抗体；
[0141] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0142] k)其VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体；和
[0143] l)其HC包含SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的抗体。
[0144] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0145] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、56和48的氨基酸序列的抗体；
[0146] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0147] c)其VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的抗体；
[0148] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列的抗体；
[0149] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和51的氨基酸序列的抗体；
[0150] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0151] g)其VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的抗体；
[0152] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的抗体；
[0153] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:29、56和48和57、33和51的氨基酸序列的抗体；
[0154] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0155] k)其VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的抗体；和
[0156] l)其HC包含SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的抗体。
[0157] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0158] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:58-60的氨基酸序列的抗体；
[0159] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0160] c)其VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的抗体；
[0161] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列的抗体；
[0162] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和34的氨基酸序列的抗体；
[0163] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0164] g)其VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的抗体；
[0165] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的抗体；
[0166] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:58-60和57、33和34的氨基酸序列的抗体；
[0167] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0168] k)其VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的抗体；和
[0169] l)其HC包含SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的抗体。
[0170] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0171] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:61、62和43的氨基酸序列的抗体；
[0172] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0173] c)其VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的抗体；
[0174] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列的抗体；
[0175] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:44-46的氨基酸序列的抗体；
[0176] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0177] g)其VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的抗体；
[0178] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的抗体；
[0179] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:61、62和43和44-46的氨基酸序列的抗体；
[0180] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0181] k)其VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的抗体；和
[0182] l)其HC包含SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的抗体。
[0183] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0184] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:63-65的氨基酸序列的抗体；
[0185] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0186] c)其VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的抗体；
[0187] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列的抗体；
[0188] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:32-34的氨基酸序列的抗体；
[0189] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0190] g)其VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的抗体；
[0191] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的抗体；
[0192] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:63-65和32-34的氨基酸序列的抗体；
[0193] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0194] k)其VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的抗体；和
[0195] l)其HC包含SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的抗体。
[0196] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0197] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:66-68的氨基酸序列的抗体；
[0198] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0199] c)其VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的抗体；
[0200] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列的抗体；
[0201] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:38、45和55的氨基酸序列的抗体；
[0202] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0203] g)其VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的抗体；
[0204] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的抗体；
[0205] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:66-68和38、45和55的氨基酸序列的抗体；
[0206] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0207] k)其VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的抗体；和
[0208] l)其HC包含SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的抗体。
[0209] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0210] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:69-71的氨基酸序列的抗体；
[0211] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0212] c)其VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的抗体；
[0213] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列的抗体；
[0214] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:72、45和73的氨基酸序列的抗体；
[0215] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0216] g)其VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的抗体；
[0217] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的抗体；
[0218] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:69-71和72、45和73的氨基酸序列的抗体；
[0219] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0220] k)其VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的抗体；和
[0221] l)其HC包含SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的抗体。
[0222] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体选自由以下者所组成的组：
[0223] a)其H-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:74-76的氨基酸序列的抗体；
[0224] b)其重链可变域(VH)在序列上与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0225] c)其VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的抗体；
[0226] d)其重链(HC)包含SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列的抗体；
[0227] e)其L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:57、33和34的氨基酸序列的抗体；
[0228] f)其轻链可变域(VL)在序列上与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0229] g)其VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗体；
[0230] h)其轻链(LC)包含SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的抗体；
[0231] i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分别包含SEQ ID NO:74-76和57、33和34的氨基酸序列的抗体；
[0232] j)其VH在序列上与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％一致且其VL在序列上与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少90％一致的抗体；
[0233] k)其VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗体；和
[0234] l)其HC包含SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列且其LC包含SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的抗体。
[0235] 于其他实施方式中，该抗PD-1抗体具有在氨基酸序列上分别与抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483之任一者之VH和VL至少90％一致(例如在序列上与该等抗体之任何者之VH和VL至少92％、95％、96％、97％、
98％、或99％一致)的VH和VL。于一些实施方式中，该抗PD-1抗体之抗原结合部分具有该VH和VL。
98％、或99％一致)的VH和VL。于一些实施方式中，该抗PD-1抗体之抗原结合部分具有该VH和VL。
[0236] 于一些实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483之任一者之VH和VL氨基酸序列的VH和VL。于一些实施方式中，该抗PD-1抗体之抗原结合部分具有该VH和VL。
[0237] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分包含以下者之H-CDR1-3和L-CDR1-3氨基酸序列：
[0238] a)分别为SEQ ID NO:29、30、31、32、33、和34；
[0239] b)分别为SEQ ID NO:35、36、37、38、39、和40；
[0240] c)分别为SEQ ID NO:41、42、43、44、45、和46；
[0241] d)分别为SEQ ID NO:29、47、48、49、50、和51；
[0242] e)分别为SEQ ID NO:52、53、54、38、45、和55；
[0243] f)分别为SEQ ID NO:29、56、48、57、33、和51；
[0244] g)分别为SEQ ID NO:58、59、60、57、33、和34；
[0245] h)分别为SEQ ID NO:61、62、43、44、45、和46；
[0246] i)分别为SEQ ID NO:63、64、65、32、33、和34；
[0247] j)分别为SEQ ID NO:66、67、68、38、45、和55；
[0248] k)分别为SEQ ID NO:69、70、71、72、45、和73；或
[0249] l)分别为SEQ ID NO:74、75、76、57、33、和34。
[0250] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分包含与以下者的氨基酸序列80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％一致的VH和VL：
[0251] a)分别为SEQ ID NO:1和2；
[0252] b)分别为SEQ ID NO:3和4；
[0253] c)分别为SEQ ID NO:5和6；
[0254] d)分别为SEQ ID NO:7和8；
[0255] e)分别为SEQ ID NO:9和10；
[0256] f)分别为SEQ ID NO:11和12；
[0257] g)分别为SEQ ID NO:13和14；
[0258] h)分别为SEQ ID NO:15和16；
[0259] i)分别为SEQ ID NO:17和18；
[0260] j)分别为SEQ ID NO:19和20；
[0261] k)分别为SEQ ID NO:21和22；或
[0262] l)分别为SEQ ID NO:23和24。
[0263] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分包含具有以下者的氨基酸序列的VH和VL：
[0264] a)分别为SEQ ID NO:1和2；
[0265] b)分别为SEQ ID NO:3和4；
[0266] c)分别为SEQ ID NO:5和6；
[0267] d)分别为SEQ ID NO:7和8；
[0268] e)分别为SEQ ID NO:9和10；
[0269] f)分别为SEQ ID NO:11和12；
[0270] g)分别为SEQ ID NO:13和14；
[0271] h)分别为SEQ ID NO:15和16；
[0272] i)分别为SEQ ID NO:17和18；
[0273] j)分别为SEQ ID NO:19和20；
[0274] k)分别为SEQ ID NO:21和22；或
[0275] l)分别为SEQ ID NO:23和24。
[0276] 于一些实施方式中，该抗PD-1抗体包含：
[0277] a)具有SEQ ID NO:1和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:2和28的氨基酸序列的LC；
[0278] b)具有SEQ ID NO:3和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:4和28的氨基酸序列的LC；
[0279] c)具有SEQ ID NO:5和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:6和28的氨基酸序列的LC；
[0280] d)具有SEQ ID NO:7和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列的LC；
[0281] e)具有SEQ ID NO:9和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:10和28的氨基酸序列的LC；
[0282] f)具有SEQ ID NO:11和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:12和28的氨基酸序列的LC；
[0283] g)具有SEQ ID NO:13和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:14和28的氨基酸序列的LC；
[0284] h)具有SEQ ID NO:15和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:16和28的氨基酸序列的LC；
[0285] i)具有SEQ ID NO:17和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:18和28的氨基酸序列的LC；
[0286] j)具有SEQ ID NO:19和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:20和28的氨基酸序列的LC；
[0287] k)具有SEQ ID NO:21和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:22和28的氨基酸序列的LC；或
[0288] l)具有SEQ ID NO:23和26的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:24和28的氨基酸序列的LC。
[0289] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18040之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，其中位于位置35的X是S，及/或位于位置84的X是N。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中位于位置40的X是A，及/或位于位置55的X是Y。
[0290] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18049之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。于此实施方式中，该VL可包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位于位置1的X是D，及/或位于位置3的X是Q。于一些实施方式中，该VL于位置1包含D且于位置3包含Q。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中位于位置53的X是S。
[0291] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18098之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，其中：位于位置1的X是E，及/或位于位置5的X是V。于一些实施方式中，该VH于位置1包含E且于位置5包含V。于某些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，其中位于位置13的X是Q，位于位置35的X是S，位于位置46的X是E，位于位置50的X是A，位于位置77的X是N，位于位置80的X是Y，及/或位于位置115的X是M。该VL可包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，其中位于位置4的X是M。
[0292] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18113之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，其中位于位置64的X是V。该VL可包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其中位于位置3的X是V，及/或位于位置4的X是M。于一些实施方式中，该VL于位置3包含V且于位置4包含M。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其中位于位置69的X是S。
[0293] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18201之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中位于位置5的X是Q。于一些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中位于位置59的X是N，位于位置76的X是K，及/或位于位置83的X是L。该VL可包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中位于位置1的X是A。
[0294] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18247之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，其中位于位置10的X是G，及/或位于位置16的X是G。该VL可包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，其中：位于位置1的X是D，及/或位于位置4的X是M。于一些实施方式中，该VL于位置1包含D且于位置4包含M。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，其中位于位置55的X是Y，及/或位于位置93的X是Y。
[0295] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18250之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，其中位于位置5的X是V。于一些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，其中位于位置50的X是Y，位于位置59的X是Y，及/或位于位置61的X是A。该VL可包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，其中位于位置3的X是V，及/或位于位置4的X是M。于一些实施方式中，该VL于位置3包含V且于位置4包含M。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，其中位于位置55的X是Y。
[0296] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18325之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中位于位置1的X是E，位于位置5的X是V，及/或位于位置6的X是E。于一些实施方式中，该VH于位置1包含E，于位置5包含V且于位置6包含E。于某些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，其中位于位置35的X是S，位于位置49的X是S，位于位置50的X是A，位于位置73的X是D，及/或位于位置78的X是T。该VL可包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中位于位置1的X是D，位于位置3的X是Q，及/或位于位置4的X是M。于一些实施方式中，该VL于位置1包含D，于位置3包含Q且于位置4包含M。
[0297] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18366之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中位于位置1的X是E，及/或位于位置6的X是E。于一些实施方式中，该VH于位置1包含E且于位置6包含E。该VL可包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，其中位于位置1的X是D。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，其中位于位置40的X是A，及/或位于位置55的X是Y。
[0298] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18400之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，其中位于位置2的X是V。于某些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，其中位于位置43的X是G，位于位置49的X是I，位于位置59的X是N，位于位置70的X是I，及/或位于位置111的X是Q。该VL可包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列，其中位于位置1的X是A，及/或位于位置3的X是Q。于一些实施方式中，该VL于位置1包含A且于位置3包含Q。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列，其中位于位置10的X是S。
[0299] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18413之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，其中位于位置48的X是V，及/或位于位置50的X是A。该VL可包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列，其中位于位置4的X是M。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列，其中位于位置12的X是S。
[0300] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体具有分别包含抗体18483之VH和VL氨基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列且其VL包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。于此实施方式中，该VH可包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中位于位置1的X是E，位于位置5的X是V，及/或位于位置6的X是E。于一些实施方式中，该VL于位置1包含E，于位置5包含V且于位置6包含E。于某些实施方式中，该VH亦可包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中位于位置35的X是S。该VL可包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中位于位置3的X是V。于某些实施方式中，该VL亦可包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中位于位置40的X是A，及/或位于位置55的X是Y。
[0301] 于某些实施方式中，该抗PD-1抗体或抗原结合部分包含选自18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、和18483的抗体之H-CDR1-3和L-CDR1-3氨基酸序列，且进一步利用与所选抗体相同的重链及/或轻链种系序列。
[0302] 于某些实施方式中，该抗PD-1抗体或抗原结合部分包含选自18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、和18483的抗体之H-CDR1-3和L-CDR1-3氨基酸序列，且进一步包含与所选抗体之框架区(FR)80％、85％、90％、91％、92％、
93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％一致的FR。
93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％一致的FR。
[0303] 于一些实施方式中，本文中描述的抗PD-1抗体或抗原结合部分之任何者可抑制PD-L1或PD-L2或两者与PD-1的结合。
[0304] 于一些实施方式中，本文中描述的抗PD-1抗体或抗原结合部分之任何者可具有以下特性之至少一者：
[0305] a)以(例如)4x10-8M或更低的KD与食蟹猕猴PD-1结合；
[0306] b)以(例如)2x10-8M或更低的KD与小鼠PD-1结合；
[0307] c)以3x10-9M或更低的KD与人类PD-1结合；
[0308] d)于10μg/ml的浓度抑制PD-1与PD-L1的交互作用；
[0309] e)于SEB全血分析中刺激IL-2制造；和
[0310] f)于单向混合淋巴细胞反应分析中刺激IFN-γ制造。
[0311] 于一些实施方式中，本文中描述的抗PD1抗体或抗原结合部分之任何者可以以下KD与人类PD-1结合：5x10-9M或更低、4x10-9M或更低、3x10-9M或更低、2x10-9M或更低、1x10-9M-10 -10 -10 -10 -10或更低、9x10 M或更低、8x10 M或更低、7x10 M或更低、6x10 M或更低、5x10 M或更低、
4x10-10M或更低、3x10-10M或更低、2x10-10M或更低、或1x10-10M或更低。于某些实施方式中，该KD系使用表面电浆子共振测定。
4x10-10M或更低、3x10-10M或更低、2x10-10M或更低、或1x10-10M或更低。于某些实施方式中，该KD系使用表面电浆子共振测定。
[0312] 于一些实施方式中，本文中描述的抗PD1抗体或抗原结合部分之任何者于50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1μg/ml的浓度可抑制PD-1与PD-L1的交互作用。
[0313] 藉由本文中描述的方法获得的抗PD-1抗体之类型可以另一个类型或亚型改变或转换。于本发明之一个方面，编码VL或VH的核酸分子是使用所属技术领域中广为人知的方法分离，使得其不包括编码CL或CH的核酸序列。编码VL或VH的核酸分子接着被操作性地分别链接至编码CL或CH的核酸序列，形成不同的免疫球蛋白分子之类型。此可使用包含CL或CH链之载体或核酸分子达成，如以上描述地。例如，原来是IgM的抗PD-1抗体可被类型转换成IgG。此外，可使用类型转换以将一种IgG亚型变换成另一者，例如从IgG1变换成IgG2。κ轻链恒定区可被改变(例如)成λ轻链恒定区。用于制造具有所欲Ig同型的本发明的抗体的较佳方法包含以下步骤：分离编码抗PD-1抗体之重链的核酸分子和编码抗PD-1抗体之轻链的核酸分子，获得该重链之可变域，将该重链之可变域与所欲同型之重链之恒定区连接在一起，于细胞中表达该轻链和该经连接的重链，并收集具有所欲同型的抗PD-1抗体。
[0314] 本发明的抗PD-1抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgA、或IgD分子，但典型是IgG同型(例如是IgG亚型IgG1、IgG2a或IgG2b、IgG3、或IgG4)。于一个实施方式中，该抗体是IgG1。于另一个实施方式中，该抗体是IgG4。
[0315] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体可于其FC区包含至少一个突变。一些不同的Fc突变是已知的，其中此等突变提供经改变的效应功能。例如，于许多例子中(例如在配体/受体交互作用是非所欲的情况下或于抗体-药物缀合物之例子中)，减低或排除效应功能会是所欲的。
[0316] 于一个实施方式中，该抗PD-1抗体于其FC区包含至少一个减低效应功能的突变。可能有利于突变以减低效应功能的Fc区氨基酸位置包括位置228、233、234和235之一或多者，其中氨基酸位置是根据IMGT编号格式编号。
[0317] 于一个实施方式中，位于位置234和235的氨基酸残基之一或二者可经突变，例如自Leu至Ala(L234A/L235A)。此等突变减低IgG1抗体之Fc区之效应功能。另外地或供选择地，位于位置228的氨基酸残基可经突变，例如突变成Pro。于一些实施方式中，位于位置233的氨基酸残基可经突变，例如突变成Pro，位于位置234的氨基酸残基可经突变，例如突变成Val，及/或位于位置235的氨基酸残基可经突变，例如突变成Ala。该等氨基酸位置是根据编号格式编号。
[0318] 于一些实施方式中，于该抗体是IgG4亚型的情况下，其可包含突变S228P(即于位置228具有脯氨酸，其中该氨基酸位置是根据 编号格式编码)。已知此突变会减少非所欲的Fab臂交换。
[0319] 于某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合部分可以是更大的免疫黏附分子(其藉由该抗体或抗体部分与一或多个其他蛋白质或胜肽之共价或非共价联结形成)之部分。如此免疫黏附分子之实例包括使用链霉抗生物素蛋白核心区域以制造四聚体scFv分子(Kipriyanov等人，Human Antibodies and Hybridomas6:93-101(1995))和使用半胱氨酸残基、标志胜肽和C端聚组氨酸卷标以制造二价与经生物素化scFv分子(Kipriyanov等人，Mol.Immunol.31:1047-1058(1994))。其他实例包括其中来自抗体的一或多个CDR被共价或非共价地并入至分子中以使其变成特异性地与所关注的抗原结合的免疫黏着素。于如此实施方式中，该(等)CDR可被并入作为更大的多肽链之部分，可共价地连结至另一个多肽链，或可被非共价地并入。
[0320] 于另一个实施方式中，可制造融合抗体或免疫黏着素，其包含连结至另一个多肽的整个本发明的抗PD-1抗体或其一部分。于某些实施方式中，仅仅该抗PD-1抗体之可变域是连结至该多肽。于某些实施方式中，抗PD-1抗体之VH域是连结至第一多肽，而抗PD-1抗体之VL域是连结至第二多肽，该第二多肽与该第一多肽联结，其连结方式使得该VH和VL域可彼此交互作用以形成抗原结合位置。于另一个较佳的实施方式中，该VH域是藉由连接符与该VL域分开，使得该VH和VL域可彼此交互作用(例如单链抗体)。该VH-连接符-VL抗体接着被连结至所关注的多肽。此外，融合抗体可被创造成其中二个(或更多个)单链抗体是彼此连结。若想要在单一多肽链上创造二价或多价抗体或若想要创造双特异性抗体，此是有用的。
[0321] 为创造单链抗体(scFv)，编码VH和VL的DNA片段是操作性地链接至编码弹性连接符(例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3(SEQ ID NO:115))的另一个片段，使得该VH和VL序列可以邻接单链蛋白质之形式表达，其中该VL和VH域是藉由该弹性连接符连接。参见(例如)Bird等人，Science242:423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883(1988)；和McCafferty等人，Nature348:552-554(1990)。该单链抗体可以是单价，若仅使用单一VH和VL；二价，若使用二个VH和VL；或多价，若使用超过二个VH和VL。例如，可产生双特异性或多价抗体，其与人类PD-1以及与另一个分子特异性地结合。
[0322] 于其他实施方式中，可使用编码抗PD-1抗体的核酸分子制备其他经修饰的抗体。例如，可使用标准分子生物技术根据本说明书之教示制备「κ体」(Ill等人，Protein Eng.10:949-57(1997))、「微体(minibody)」(Martin等人，EMBO J.13:5303-9(1994))、「双体」(Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993))、或「Janusin」(Traunecker等人，EMBO J.10:3655-3659(1991)和Traunecker等人，Int.J.Cancer(补充)
7:51-52(1992))。
7:51-52(1992))。
[0323] 本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分可被衍生化或连结至另一个分子(例如另一个胜肽或蛋白质)。一般而言，该等抗体或其部分被衍生化，其方式使得PD-1结合不被该衍生化或标记不利地影响。据此，本发明的抗体和抗体部分意欲包括本文中描述的人类抗PD-1抗体之完整和经修饰形式两者。例如，本发明的抗体或抗体部分可被功能性地链接(藉由化学偶联、基因融合、非共价联结或其他)至一或多个其他分子实体，诸如另一个抗体(例如双特异性抗体或双体)、侦测剂、医药剂、及/或可介导该抗体或抗体部分与另一个分子之联结的蛋白质或胜肽(诸如链霉抗生物素蛋白核心区域或聚组氨酸标签)。
[0324] 一类经衍生化抗体是藉由交联二或更多种抗体(相同类型的或不同类型的，例如以创造双特异性抗体)制造。适合的交联剂包括该等是异双官能性者，其等具有二个藉由适当的间隔子(例如间-顺丁烯二亚酰氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚氨酯)分开之不同的反应性基团或同双官能性者(例如辛二酸二琥珀酰亚氨酯)。如此连接符可得自(例如)Pierce Chemical Company，洛克福，Il。
[0325] 抗PD-1抗体亦可以化学基团(诸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基基团、或碳水化合物基团)衍生化。此等基团可能是有用于改善该抗体之生物特征，例如以增加血清半生期。
[0326] 亦可标记根据本发明的抗体。用于本文中，术语「标记」或「经标记」是论及该抗体中另一个分子之并入。于一个实施方式中，该标记是可侦测的标志，例如并入经放射性标记的氨基酸或接附至可藉由经标志抗生物素蛋白侦测的生物素基部分之多肽(例如含有可藉由光学或比色方法侦测的荧光标志或酵素活性之链霉抗生物素蛋白)。于另一个实施方式中，该标记或标志可以是治疗性的，例如药物缀合物或毒素。种种标记多肽和糖蛋白的方法是所属技术领域中已知的且可使用其等。用于多肽的标记之实例包括(但不限于)以下者：放射性同位素或放射性核种(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光标记(例如FITC、玫瑰红、镧族元素磷光体)、酵素性标记(例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标志、生物素基基团、被第二报导子辨识之预决定的多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二抗体之结合位置、金属结合域、表位卷标)、磁性剂，诸如钆螫合物、毒素，诸如百日咳毒素、紫杉醇、细胞松弛素B、灭革兰菌素D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、伊妥普赛(etoposide)、坦尼坡赛(tenoposide)、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素、二羟基炭疽菌素二酮、双羟蒽(mitoxantrone)、光辉霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-脱氢睪固酮、糖皮质素、普罗卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普鲁泛奴洛(propranolol)、和嘌呤霉素和其等之类似物或同源物。于一些实施方式中，标记是藉由种种长度的间隔子臂接附以减少潜在的立体阻碍。
[0327] 于某些实施方式中，本发明的抗体可以中性形式(包括两性离子形式)存在或呈带正电或带负电物种。于一些实施方式中，该等抗体可与相对离子复合以形成医药上可接受的盐。
[0328] 术语「医药上可接受的盐」是论及包含一或多个抗体和一或多个相对离子的复合物，其中该等相对离子是衍生自医药上可接受的无机和有机酸和碱。
[0329] 双特异性结合分子
[0330] 于进一步的方面，本发明提供双特异性结合分子，其具有本文中描述的抗PD-1抗体之结合特异性和另一个抗PD-1抗体(例如另一个本文中描述的抗PD-1抗体)或靶向不同蛋白质的抗体(诸如另一个免疫查核点蛋白质、癌症抗原、或其活性介导诸如癌症的疾病状况的另一个细胞表面分子)之结合特异性。如此双特异性结合分子是所属技术领域中已知的，且不同类型的双特异性结合分子之实例是于本文之他处给出。
[0331] 核酸分子和载体
[0332] 本发明亦提供编码本文中描述的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之核酸分子和序列。于一些实施方式中，不同核酸分子编码该抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链和轻链氨基酸序列。于其他实施方式中，相同的核酸分子编码该抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链和轻链氨基酸序列。
[0333] 除非另加具体指明，提及核苷酸序列时涵盖其互补物。因此，提及具有特殊序列之核酸应被理解成涵盖其具有其互补序列之互补股。于本文中提及时，术语「多核苷酸」意谓长度上至少10个碱基的核苷酸之多聚形式，无论是核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型的核苷酸之经修饰形式。该术语包括单股和双股形式。
[0334] 于以上实施方式之任何者，该等核酸分子可经分离。
[0335] 于进一步的方面，本发明提供适用于表达本文中描述的抗体或其抗原结合部分之链之一的载体。用于本文中，术语「载体」意谓一种核酸分子，其能够运送其已与之连结的另一种核酸。于一些实施方式中，该载体是质粒，即另外的DNA节段可被连接至其中的DNA之环状双股片段。于一些实施方式中，该载体是病毒载体，其中另外的DNA节段可被连接至其病毒基因组中。于一些实施方式中，该载体能够在其等被导入至其中的宿主细胞内自我复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和游离基因体哺乳动物载体)。于其他实施方式中，该等载体(例如非游离基因体哺乳动物载体)可在被导入至宿主细胞后并入至宿主细胞之基因组中，并藉此随着宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指挥其等所操作性连结的基因之表达。如此载体于本文中被称作「重组表达载体」(或简称「表达载体」)。
[0336] 本发明提供包含编码本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链、本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之轻链、或本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链和轻链两者的核酸分子之载体。本发明进一步提供包含编码融合蛋白质、经修饰抗体、其抗体片段、和探针之核酸分子的载体。
[0337] 编码本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链及/或轻链的核酸分子可自任何制造如此抗体或部分的来源分离。于种种实施方式中，该等核酸分子是自表达从以人类PD-1抗原致免疫的动物分离的抗PD-1抗体的B细胞分离、或从自如此B细胞制造的永生化细胞分离。分离编码抗体的核酸之方法是所属技术领域中广为人知的。可分离mRNA并将其用于制造cDNA以用于抗体基因之聚合酶连锁反应(PCR)或cDNA选殖中。于某些实施方式中，本发明之核酸分子可被合成而非分离。
[0338] 于一些实施方式中，本发明之核酸分子可包含编码来自本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分的VH域之核苷酸序列，其符合读框地连接至编码来自任何来源的重链恒定区的核苷酸序列。类似地，本发明之核酸分子可包含编码来自本发明的抗PD-1抗体或抗原结合部分的VL域的核苷酸序列，其符合读框地连接至编码来自任何来源的轻链恒定区的核苷酸序列。
[0339] 于本发明之进一步方面，编码该重链之可变域(VH)及/或轻链之可变域(VL)的核酸分子可被「变换」成全长抗体基因。于一个实施方式中，编码该VH或VL域的核酸分子被变换成全长抗体基因，其是藉由分别插入至已编码重链恒定(CH)或轻链恒定(CL)区的表达载体中，使得该VH节段在该载体内被操作性地连结至该(等)CH节段、及/或该VL节段在该载体内被操作性地连结至该CL节段。于另一个实施方式中，编码该VH及/或VL域的核酸分子被变换成全长抗体基因，其是藉由使用标准分子生物技术将编码VH及/或VL域的核酸分子连结(例如连接)至编码CH及/或CL区的核酸分子。编码全长重链及/或轻链的核酸分子可接着从至其中该等核酸分子已被导入的细胞表达且该抗PD-1抗体被分离。
[0340] 可使用该等核酸分子以重组地表达大量的抗PD-1抗体。亦可使用该等核酸分子以制造嵌合抗体、双特异性抗体、单链抗体、免疫黏着素、双体、突变抗体和抗体衍生物，如于本文中描述的。
[0341] 于另一个实施方式中，本发明之核酸分子被用作为用于特定抗体序列的探针或PCR引子。例如，该核酸可于诊断方法中被用作为探针或被用作为PCR引子以扩增可被使用的DNA区域(特别是)以分离编码抗PD-1抗体的可变域之另外的核酸分子。于一些实施方式中，该等核酸分子是寡核苷酸。于一些实施方式中，该等寡核苷酸是来自所关注的抗体之重链和轻链之高度可变域。于一些实施方式中，该等寡核苷酸编码完整的如于本文中描述的本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之CDR之一或多者或其部分。
[0342] 于另一个实施方式中，可使用该等核酸分子和载体以制造突变抗PD-1抗体。可于重链及/或轻链之可变域中突变该等抗体，例如以改变该抗体之结合特性。例如，可于CDR之一或多者中作突变以增高或减低该抗PD-1抗体之KD、以增高或减低koff、或以改变该抗体之结合特异性。于另一个实施方式中，于本发明之单克隆抗体中，于已知相较于生殖系列被改变的氨基酸残基上作一或多个突变。可于可变域之CDR或框架区中、或于恒定区中作该等突变。于较佳的实施方式中，于可变域中作该等突变。于一些实施方式中，于本发明的抗体或其抗原结合部分之可变域之CDR或框架区中，于已知相较于生殖系列被改变的氨基酸残基作一或多个突变。
[0343] 于另一个实施方式中，突变框架区以使得所得的框架区具有相对应生殖系列基因的氨基酸序列。可于框架区或恒定区作突变以增加该抗PD-1抗体之半生期。参见(例如)PCT公开案WO 00/09560。亦可于框架区或恒定区中作突变以改变该抗体之致免疫性、及/或以提供用于与另一个分子共价或非共价结合之位置。根据本发明，单一抗体可于其可变域之CDR或框架区之任一或多者或于其恒定区具有突变。
[0344] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分是藉由以下者表达：将编码部分或全长轻链和重链的DNA(如以上描述地获得的)插入至表达载体中以使得该等基因被操作性地连结至必要的表达控制序列，诸如转录和转译控制序列。表达载体包括质粒、反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、植物病毒，诸如花椰菜镶嵌病毒、烟草镶嵌病毒、黏接质粒、YAC、衍生自EBV的游离基因体、和类似者。可将该抗体编码序列连接至载体中以使得该载体内的转录和转译控制序列发挥其等调节该抗体编码序列之转录和转译的所欲功能。可挑选该表达载体和表达控制序列以与所使用的表达宿主细胞兼容。可将该抗体轻链编码序列和该抗体重链编码序列插入至分开的载体中，且其等可操作性地连结至相同或不同的表达控制序列(例如启动子)。于一个实施方式中，将该等编码序列两者插入至相同的表达载体中且其等可操作性地连结至相同的表达控制序列(例如共同启动子)、至分开的相同的表达控制序列(例如启动子)、或至不同表达控制序列(例如启动子)。可藉由标准方法(例如该抗体基因片段和载体上的互补限制位之连接、或钝端连接，若不存在限制位)将该等抗体编码序列插入至该表达载体中。
[0345] 方便的载体是以下者：编码功能上完全的人类CH或CL免疫球蛋白序列、加上经工程设计以使得任何VH或VL序列可被轻易地插入和表达(如以上描述的)之适当的限制位。如此载体中之编码HC的基因和编码LC的基因可含有内含子序列，其会藉由稳定化相关mRNA来导致整体抗体蛋白质产量之增加。该等内含子序列两端邻接剪接供体和剪接受体位置，其等决定RNA剪接会于哪里发生。内含子序列之位置可位于该抗体链之可变区或恒定区中、或于可变区和恒定区两者中(当使用多个内含子时)。多腺苷酸化和转录终止可于该等编码区域之下游的天然染色体位置发生。该重组表达载体亦可编码促进该抗体链自宿主细胞分泌的信号肽。可将该抗体链基因选殖入该载体中以使得该信号肽被符合读框地连结至该免疫球蛋白链之氨端。该信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。
[0346] 除了该抗体链基因外，本发明之重组表达载体可携带调节序列，其等控制该抗体链基因于宿主细胞中的表达。所属技术领域中具有通常知识者会领会到该表达载体之设计(包括调节序列之挑选)可取决于诸如以下者之因子：欲转形的宿主细胞之选择、所欲的蛋白质之表达水平、等等。用于哺乳动物宿主细胞表达之较佳的调节序列包括指挥在哺乳动物细胞中的蛋白质之高水平表达的病毒组件，诸如衍生自以下者的启动子及/或增强子：反转录病毒LTR、细胞巨大病毒(CMV)(诸如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(诸如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))、多瘤和强哺乳动物启动子，诸如天然免疫球蛋白和肌动蛋白启动子。关于病毒调节组件和其序列之进一步描述，参见(例如)US专利案5,168,062、4,510,245和4,968,615。用于在植物中表达抗体的方法(包括启动子和载体之描述、以及植物之转形)系所属技术领域中已知的。参见(例如)US专利案6,517,529。在细菌细胞或真菌细胞(例如酵母菌细胞)中表达多肽的方法亦系所属技术领域中广为人知的。
[0347] 除了该抗体链基因和调节性序列外，本发明之重组表达载体可携带另外的序列(诸如调节该载体在宿主细胞中的复制之序列，例如复制起点)和可筛选标记基因。可筛选标记基因促进至其中该载体已被导入的宿主细胞之筛选(参见(例如)US专利案4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，典型地，该可筛选标记基因将对药物(诸如G418、湿霉素或氨甲喋呤)的抗性授于至其中该载体已被导入的宿主细胞。例如，可筛选标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(其用于利用氨甲喋呤筛选/扩增dhfr-宿主细胞)、neo基因(其用于G418筛选)、和谷氨酸合成酶基因。
[0348] 术语「表达控制序列」用于本文中意谓对于引起其等与之连接的编码序列之表达和加工而言系必须的多核苷酸序列。表达控制序列包括适当的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工讯息，诸如剪接和多腺苷酸化讯息；稳定细胞质mRNA的序列；增强转译效能的序列(即Kozak共通序列)；增强蛋白质稳定性的序列；和当所欲时，增强蛋白质分泌的序列。如此控制序列之性质基于宿主生物体变化；于原核生物中，如此控制序列一般包括启动子、核糖体结合位置、和转录终止序列；于真核生物中，一般，如此控制序列包括启动子和转录终止序列。术语「控制序列」系意欲(最少)包括其存在对于表达和加工而言系必须的所有组份，且亦可包括其存在系有利的其他组份，例如前导序列和融合伙伴序列。
[0349] 宿主细胞和抗体和抗体组合物制造之方法
[0350] 本发明之另外的方面系关于用于制造本发明的抗体组合物和抗体和其抗原结合部分的方法。本发明之此方面之一个实施方式系关于用于制造如于本文中界定的抗体的方法，其包含提供能够表达该抗体的重组宿主细胞、在适用于该抗体之表达的条件下培养该宿主细胞、和分离所得的抗体。藉由于如此重组宿主细胞中的如此表达制造的抗体于本文中被称作「重组抗体」。本发明亦提供如此宿主细胞之子代细胞、和由其制造的抗体。
[0351] 用于本文中，术语「重组宿主细胞」(或简称「宿主细胞」)意谓重组表达载体已被导入至其中的细胞。本发明提供可包含(例如)如以上描述的根据本发明的载体之宿主细胞。本发明亦提供包含(例如)编码本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、编码本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分之轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列、或两者之宿主细胞。应理解「重组宿主细胞」和「宿主细胞」不止意谓特别的主题细胞但亦意谓如此细胞之子代。因为某些修饰可由于突变或环境影响而在随后的世代中发生，如此子代可能(实际上)与亲代细胞不完全相同，但仍被包括在用于本文中的术语「宿主细胞」之范围内。
[0352] 可将编码抗PD-1抗体的核酸分子和包含此等核酸分子的载体用于适合的哺乳动物、植物、细菌或酵母菌宿主细胞之转染。转形可藉由任何已知用于将多核苷酸导入至宿主细胞中的方法。用于将异源性多核苷酸导入至哺乳动物细胞中的方法系所属技术领域中广为人知的且包括右旋糖聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、Polybrene介导的转染、原生质粒融合、电穿孔、将多核苷酸封胶囊于脂质粒中、和将DNA直接微注射至细胞核中。此外，可藉由病毒载体将核酸分子导入至哺乳动物细胞中。转形细胞的方法系所属技术领域中广为人知的。参见(例如)US专利案4,399,216、4,912,040、4,740,461、和4,959,455。转形植物细胞的方法系所属技术领域中广为人知的，其等包括(例如)农杆菌介导的转形、生物弹道学转形(biolistic transformation)、直接注射、电穿孔和病毒转形。转形细菌和酵母菌细胞的方法亦系所属技术领域中广为人知的。
[0353] 可作为表达宿主得到的哺乳动物细胞株系所属技术领域中广为人知的且包括许多可得自美国菌种保存中心(ATCC)的永生细胞株。此等包括(特别是)中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0细胞、SP2细胞、HEK-293T细胞、293Freestyle细胞(Invitrogen)、NIH-3T3细胞、HeLa细胞、婴儿仓鼠肾脏(BHK)细胞、非洲绿猴肾脏细胞(COS)、人类肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞、和一些其他细胞株。特别偏好的细胞株系藉由测定哪个细胞株具有高表达水平来挑选。可使用的其他细胞株系昆虫细胞株(诸如Sf9或Sf21细胞)。当将编码抗体基因的重组表达载体导入至哺乳动物宿主细胞中时，该等抗体系藉由以下者制造：培养该宿主细胞一段足以允许该抗体于该等宿主细胞中的表达或(更佳地)将该抗体分泌至该宿主细胞于其中生长的培养基之时间。可自该培养基使用标准蛋白质纯化方法回收抗体。植物宿主细胞包括(例如)烟草属、拟南芥属(Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麦、马铃薯、等等。细菌宿主细胞包括大肠杆菌和链霉菌属物种。酵母菌宿主细胞包括粟酒裂殖酵母菌、啤酒酿母菌和巴斯德毕赤酵母菌(Pichia pastoris)。
[0354] 此外，可使用一些已知技术增强本发明的抗体或其抗原结合部分自制造细胞株的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)系用于在某些条件下增强表达的常见方法。GS系统系链接EP专利案0 216 846、0 256 055、0 323 997和0 338 841完整或部分讨论。
[0355] 有可能由不同细胞株或于基因转殖动物中表达的抗体会具有彼此不同的糖化模式。然而，由本文提供的核酸分子编码或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体皆系本发明之部分，无论该等抗体之糖化状态，且更一般而言，无论转译后修饰存在或不存在。
[0356] 医药组合物
[0357] 本发明之另一个方面系医药组合物，其包含作为一个活性成分(或作为唯一的活性成分)的本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分或抗PD-1抗体组合物。该医药组合物可包含任何如本文中描述的抗PD-1抗体组合物或抗体或其抗原结合部分。于一些实施方式中，该等组合物系意欲用于改善、预防、及/或治疗与PD-1相关的病症及/或癌症。用于本文中，与PD-1相关的或由PD-1介导的病症系论及藉由PD-1活性之调节而改善、或减缓其进展的病症、疾病或病况。于一些实施方式中，该等组合物系意欲用于活化免疫系统。于某些实施方式中，该等组合物系意欲用于改善、预防、及/或治疗源于诸如皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头和颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏的组织的癌症。
[0358] 一般而言，本发明的抗体、其抗原结合部分、和双特异性结合分子系适用于以调配物的形式结合一或多种医药上可接受的赋形剂(例如如以下描述者)投予。
[0359] 本发明之医药组合物会包含一或多种本发明的抗PD-1抗体或结合部分或双特异性结合分子，例如一或二种抗PD-1抗体、结合部分、或双特异性结合分子。于一个实施方式中，该组合物包含单一种本发明的抗PD-1抗体或其结合部分。
[0360] 于另一个实施方式中，该医药组合物可包含至少一种抗PD-1抗体或其抗原结合部分，例如一种抗PD-1抗体或部分、和一或多种靶向一或多种相关的细胞表面受体(例如一或多种与癌症相关的受体)的另外的抗体。
[0361] 术语「赋形剂」用于本文中系描述本发明之化合物以外的任何成分。赋形剂之选择在很大程度上会取决于诸如以下者之因子：特殊的投予模式、赋形剂对溶解度和稳定性的效果、和剂量形式之特性。用于本文中「，医药上可接受的赋形剂」包括任何及所有生理上兼容的溶剂、分散基质、涂层、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂、和类似者。医药上可接受的赋形剂之一些实例系水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇和类似者、以及其等之组合。于许多例子中，于该组合物中包括等张剂，例如糖、多元醇，诸如甘露醇、山梨醇、或氯化钠会系较佳的。医药上可接受的物质之另外的实例系润湿剂或微量的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其等增加该抗体之保存期限或有效性。
[0362] 本发明之医药组合物和用于其等之制备的方法对所属技术领域中具有通常知识者而言会轻易地系明显的。如此组合物和用于其等之制备的方法可于(例如)Remington’s Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company,1995)中找到。医药组合物较佳系在GMP(良好作业规范)条件下制造。
[0363] 可以散装、呈单一单位剂量、或呈复数个单一单位剂量制备、包装、或贩卖本发明之医药组合物。用于本文中，「单位剂量」系个别量的该医药组合物，其包含预决定量的活性成分。活性成分之量一般等于会被投予至一对象的活性成分之剂量或如此剂量之方便的部分(诸如(例如)如此剂量之一半或三分之一)。
[0364] 所属技术领域中所接受的任何用于投予胜肽、蛋白质或抗体的方法可被合适地利用于本发明的抗体和抗原结合部分。
[0365] 本发明之医药组合物典型系适用于非经肠投予。用于本文中，医药组合物之「非经肠投予」包括任何特征在于以下者的投予途径：物理突破一对象之组织并透过该组织中的突破口投予该医药组合物，因此一般造成直接投予至血流中、至肌肉中、或至内部器官中。非经肠投予因此包括(但不限于)藉由注射该组合物、藉由透过手术切口施用该组合物、藉由透过穿透组织的非手术伤口施用该组合物、和类似者来投予医药组合物。特别地，设想到非经肠投予包括(但不限于)皮下、腹膜内、肌肉内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、室内、尿道内、颅内、肿瘤内、和滑液膜内注射或输注；和肾脏透析输注技术。亦设想到区域性灌注。
特别的实施方式包括静脉内和皮下途径。
特别的实施方式包括静脉内和皮下途径。
[0366] 适用于非经肠投予的医药组合物之调配物典型包含活性成分组合医药上可接受的载剂(诸如无菌水或无菌等张盐水)。可以适用于大剂量投予(bolus administration)或连续投予的形式制备、包装、或贩卖如此调配物。可以单位剂量形式(诸如在含有防腐剂的安瓿或多剂容器中)制备、包装、或贩卖可注射调配物。用于非经肠投予的调配物包括(但不限于)悬浮液、溶液、在油性或水性媒剂中的乳剂、糊剂、和类似者。如此调配物可进一步包含一或多种另外的成分，包括(但不限于)悬浮剂、稳定剂、或分散剂。在用于非经肠投予的调配物之一个实施方式中，该活性成分系以干燥(即粉末或粒状)形式提供以用于在非经肠投予经复水组合物前以适合的媒剂(例如无菌无热原水)复水。非经肠调配物亦包括水溶液，其可含有赋形剂，诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(较佳至3至9的pH)，但(于一些应用中)可能更适合将其等调配成无菌非水溶液或成干燥形式以结合适合的媒剂(诸如无菌、无热原水)使用。例示性非经肠投予形式包括在无菌水溶液(例如丙二醇或右旋糖水溶液)中的溶液或悬浮液。若所欲，可适当地缓冲如此剂量形式。其他有用的可亲代投予的调配物包括该等包含呈微晶质形式、或于脂质粒制剂中的活性成分者。可调配用于非经肠投予的调配物以使其等被立即及/或修饰释放。修饰释放调配物包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程序化释放。
[0367] 例如，于一个方面，可藉由以下者制备无菌可注射溶液：将所需量的该抗PD-1抗体或其抗原结合部分、双特异性结合分子、或抗PD-1抗体组合物及一种以上列举的成分或其等之组合(按需要)并入适当的溶剂中，接着过滤灭菌。一般而言，分散剂系藉由以下者制备：将活性化合物并入至含有基础分散介质和所需的来自该等以上列举者的其他成分的无菌媒剂中。于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末之例子中，较佳的制备方法系真空干燥和冷冻干燥，其产生来自其先前经无菌过滤的溶液的活性成分加上任何其他所欲成分之粉末。可藉由例如以下者维持溶液之适当的流动性：使用涂层，诸如卵磷脂、维持所需的粒子大小(于分散剂之例子中)及使用接口活性剂。可藉由以下者得到可注射组合物之延长吸收：在该组合物中包括延迟吸收的剂，例如硬脂酸盐和明胶、及/或使用修饰释放涂层(例如缓释涂层)。
[0368] 本发明的抗体亦可被鼻内地投予或藉由吸入投予，典型系以来自干燥粉末吸入器的干燥粉末(单独、呈混合物、或呈混合的组份粒子，例如与适合的医药上可接受的赋形剂混合)的形式、呈有或无使用适合的推进剂的来自加压容器、泵甫、喷雾、雾化器(较佳为使用电流体力学以制造细雾的雾化器)、或喷雾器的气溶胶喷雾、或呈鼻滴剂。
[0369] 加压容器、泵甫、喷雾、雾化器、或喷雾器一般含有本发明的抗体之溶液或悬浮液，其包含例如适用于分散、溶解、或延长释放活性物的剂、推进剂，作为溶剂。
[0370] 于以干燥粉末或悬浮液调配物使用之前，该药物产品一般被微粉化至适用于藉由吸入递送的大小(典型系小于5微米)。此可藉由任何适当的粉碎方法(诸如螺旋喷流碾磨、流体床喷射碾磨、超临界流体加工以形成奈米粒子、高压均质化、或喷雾干燥)达成。
[0371] 可将用于吸入器或吹入器的胶囊、泡壳(blister)和药筒调配成含有本发明之化合物之粉末混合物、适合的粉末基底和性能修饰剂。
[0372] 用于雾化器使用电流体力学以制造细雾之适合的溶液调配物可于每次致动含有适合剂量的本发明的抗体且致动体积可例如于1μL至100μL变化。
[0373] 可将用于吸入/鼻内投予的调配物调配成立即及/或修饰释放。修饰释放调配物包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和程序化释放。
[0374] 于干燥粉末吸入器和气溶胶之例子中，剂量单位系通过递送计量量的阀决定。典型会安排根据本发明的单位以投予定量剂量或「喷烟(puff)」的本发明的抗体。每日总剂量典型会以单剂投予或(更常)于一整天以分开的数剂投予。
[0375] 亦可调配本发明的抗体和抗体部分以用于口服途径投予。口服投予可涉及吞咽，使得该化合物进入胃肠道、及/或颊部、舌部、或舌下投予，藉其该化合物直接自口部进入血流。
[0376] 适用于口服投予的调配物包括固体、半固体和液体系统，诸如锭剂；含有多微粒(multi-particulate)或奈米微粒、液体、或粉末的软或硬胶囊；菱形锭(包括填充液体的)；咀嚼物；凝胶；快速分散剂量形式；薄膜；卵形剂(ovule)；喷雾；和颊部/黏膜黏着贴片。
[0377] 液体调配物包括悬浮液、溶液、糖浆和酏剂。可利用如此调配物作为软或硬胶囊(例如从明胶或羟丙甲基纤维素制造)中的填料且其典型包含载剂，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素、或适合的油、和一或多种乳化剂及/或悬浮剂。亦可藉由复水固体(例如从药包(sachet))制备液体调配物。
[0378] 本发明的抗体和组合物的治疗用途
[0379] 于一个方面，本发明的抗PD-1抗体和其抗原结合部分、抗PD-1组合物、和双特异性结合分子可用于在有需要的人类中增强或活化免疫系统。于一些实施方式中，该患者之免疫受抑制。例如，医师可藉由投予本发明的抗PD-1抗体、抗体结合部分、组合物、或双特异性结合分子(单独地或与其他治疗剂组合，相继地或同时地)促升患者自己之免疫系统之抗癌症活性。该抗PD-1抗体或部分、组合物、或双特异性结合分子于免疫细胞中调节PD-1之活性，导致抗癌症免疫性增强。于某些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子其系用于治疗癌症，例如源于诸如皮肤、肺脏、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾脏、软组织、造血系统、头和颈、肝脏、膀胱、乳房、胃、子宫和胰脏的组织的癌症、和任何依赖PD-1活性及/或其中患者表达或过度表达PD1、PD-L1、及/或PD-L2的癌症或其他病况。藉由本发明的抗PD-1抗体、其抗原结合部分、抗PD-1组合物、及/或双特异性结合分子治疗的癌症可包括(例如)黑色素瘤(诸如晚期黑色素瘤、或无法切除的或转移性黑色素瘤)、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈鳞状细胞癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、高度微卫星不稳定性癌症、肝细胞癌、间皮瘤、Merkel氏细胞癌、神经胶瘤、多发性骨髓瘤、弥漫性大型B细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、和肾细胞癌(RCC)。
[0380] 于一些实施方式中，藉由本发明的抗PD-1抗体、抗原结合部分、抗PD-1组合物、及/或双特异性结合分子治疗的癌症可包括(例如)晚期或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌、肾细胞癌、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、神经胶母细胞瘤、神经胶瘤、神经内分泌肿瘤、鳞状细胞肺癌、小细胞肺癌、肝细胞癌、膀胱癌、上尿路癌、食道癌、胃食道连接部癌、胃癌、肝癌、结肠癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、肉瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓化生不良症候群、鼻咽癌、慢性淋巴球性白血病、急性淋巴胚细胞性白血病、小淋巴球性淋巴瘤、卵巢癌、胃肠癌、原发性腹膜癌、输卵管癌、泌尿上皮癌、与HTLV有关的T细胞白血病/淋巴瘤、前列腺癌、生殖泌尿癌、脑脊髓膜瘤、肾上腺皮质癌、神经胶肉瘤、肾脏癌、乳癌、胰脏癌、子宫内膜癌、皮肤基底细胞癌、阑尾之癌症、胆道癌、唾腺癌、晚期Merkel氏细胞癌、泌尿学癌症、骨癌、胸部癌症、呼吸道癌症、腺样囊状癌、子宫颈癌、星状细胞瘤、索脊瘤、血液学赘瘤、神经胚细胞瘤、口腔癌、皮肤鳞状细胞癌、甲状腺癌、卡波西氏肉瘤、肛门癌、胆囊癌、胸腺癌、子宫癌、弥漫性大型B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、间皮瘤、或固态肿瘤。该癌症可系(例如)早期、中期、晚期、或转移阶段。
[0381] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体、抗原结合部分、组合物、及/或双特异性结合分子可用于治疗病毒及/或寄生生物感染，例如在病原体抑制宿主免疫反应的情况下。例如，该病原体可系(例如)HIV、肝炎(A、B、或C)、人类乳突瘤病毒(HPV)、淋巴球性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、腺病毒、黄病毒、ECHO病毒、鼻病毒、Coxsackie病毒、冠状病毒、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、德国麻疹病毒、小病毒、牛痘病毒、人类T细胞亲淋巴性病毒(HTLV)、登革热病毒、软疣病毒、小儿麻痹病毒、狂犬病病毒、John Cunningham(JC)病毒、节肢足动物携带性病毒性脑炎病毒、猿猴免疫不全病毒(SIV)、流行性感冒、疱疹、梨形鞭毛虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌、或铜绿假单胞菌。
[0382] 于一些实施方式中，本发明的抗PD-1抗体、抗原结合部分、组合物、及/或双特异性结合分子可用于治疗免疫减损患者或有免疫减损之风险的患者(例如由于化学治疗的或放射线治疗)。
[0383] 「治疗(treat)」、「治疗(treating)」和「治疗(treatment)」系论及减轻或消除生物病症及/或其伴随症状之至少一者的方法。用于本文中「，减轻」疾病、病症或病况意谓减低该疾病、病症、或病况之症状之严重性及/或发生频率。此外，本文中提及「治疗」时包括提及治愈性、缓和性和预防性治疗。
[0384] 「治疗有效量」系论及所投予的治疗剂之量，其会将所治疗的病症之症状之一或多者减轻至某种程度。治疗有效量的抗癌症治疗(例如)可导致肿瘤缩小、存活增加、癌细胞之排除、减低的疾病进展、转移之逆转、或其他保健专家所欲的临床终点。
[0385] 本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可单独投予或组合一或多种其他药物或抗体(或呈其等之任何组合)投予。本发明之医药组合物、方法和用途因此亦涵盖与其他活性剂的组合(共投予)之实施方式，如以下详细叙述的。
[0386] 用于本文中，当提及本发明的抗体和其抗原结合部分、组合物、和双特异性结合分子以及一或多种其他治疗剂时，术语「共投予」、「被共投予」和「组合」意欲意谓且系论及并包括以下者：
[0387] -将本发明的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子及一或多种治疗剂之如此组合同时投予至需要治疗的患者，当如此组份被一起调配成实质上同时将该等组份释放至该患者的单一剂量形式时，
[0388] -将本发明的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子及一或多种治疗剂之如此组合实质上同时投予至需要治疗的患者，当如此组份被彼此分开地调配成实质上同时被该患者摄取的分开的剂量形式故于是该等组份被实质上同时释放至该患者时，[0389] -将本发明的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子及一或多种治疗剂之如此组合相继投予至需要治疗的患者，当如此组份被彼此分开地调配成被该患者在连续的时间摄取且在各投予间有实质上的时间间隔的分开的剂量形式故于是该等组份于实质上不同的时间被释放至该患者时；和
[0390] -将本发明的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子及一或多种治疗剂之如此组合相继投予至需要治疗的患者，当如此组份被一起调配成以控制方式释放该等组份的单一剂量形式故于是其等于相同及/或不同的时间被同时、连续、及/或重迭地释放至该患者时，其中各部分可藉由相同或不同的途径投予。
[0391] 本发明的抗体和其抗原结合部分、抗体组合物、和双特异性结合分子可在无另外的治疗性治疗下投予(即作为单独的治疗(单一治疗))。供选择地，使用本发明的抗体和其抗原结合部分、组合物、和双特异性结合分子的治疗可包括至少一种另外的治疗性治疗(组合治疗)，例如另一种免疫刺激剂、抗癌症剂、抗病毒剂、或疫苗(例如肿瘤疫苗)。于一些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可与另一种药疗法/药物共投予或调配以用于治疗癌症。该另外的治疗性治疗可包含(例如)化学治疗剂、抗赘瘤剂、或抗血管形成剂、不同的抗癌症抗体、及/或放射性治疗。
[0392] 藉由组合本发明的抗体、抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子与已知会诱发癌细胞之最后分化的剂，可进一步改善功效。如此化合物可(例如)选自由以下者所组成的组：视黄酸、反式-视黄酸、顺式-视黄酸、苯丁酸盐、神经生长因子、二甲亚砜、活性形式维生素D3、过氧化体增殖物活化性受体γ、12-O-十四酰基佛波醇13-醋酸酯、六亚甲基-双-乙酰胺、转形生长因子β、丁酸、环AMP、和维司力农(vesnarinone)。于一些实施方式中，该化合物系选自由视黄酸、苯丁酸盐、全反式-视黄酸和活性形式维生素D所组成的组。
[0393] 包含本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子与至少一种其他剂(例如化学治疗剂、抗赘瘤剂、或抗血管形成剂)的医药制品可呈供于癌症治疗中同时、分开或相继投予的组合治疗的形式使用。该其他剂可藉由任何适用于治疗所提及的特殊癌症的剂，例如选自由以下者所组成的组的剂：烷化剂，例如铂衍生物，诸如顺铂、卡铂及/或奥沙利铂(oxaliplatin)；植物生物碱，例如太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇及/或爱莱诺迪肯(irinotecan)；抗肿瘤抗生素，例如多柔比星(阿德力霉素)、道诺霉素、表阿霉素(epirubicin)、埃达霉素(idarubicin)双羟蒽、放线菌素D、博莱霉素、放线菌素、藤黄霉素(luteomycin)、及/或丝裂霉素；拓朴异构酶抑制剂，诸如拓普替康(topotecan)；及/或抗代谢物，例如氟尿嘧啶及/或其他氟嘧啶。
[0394] 本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、抗体组合物、或双特异性结合分子亦可与诸如疫苗、细胞介素、酵素抑制剂、免疫刺激性化合物、和T细胞治疗的其他抗癌症治疗组合使用。于疫苗之例子中，其可(例如)系含有一或多种与所治疗的癌症相关的抗原的蛋白质、胜肽或DNA疫苗、或包含树突细胞加上抗原的疫苗。适合的细胞介素包括(例如)IL-2、IFN-γ和GM-CSF。一类具有抗癌症活性的酵素抑制剂之实例系吲哚胺-2,3-二氧酶(IDO)抑制剂，例如1-甲基-D-色胺酸(1-D-MT)。授受性T细胞治疗系论及种种涉及扩展或工程设计患者自身之T细胞以辨识并攻击其等之肿瘤的免疫治疗技术。
[0395] 亦设想到本发明的抗PD-1抗体或其抗原结合部分、抗体组合物、或双特异性结合分子可连结酪氨酸激酶抑制剂用于辅助治疗中。此等系合成性且主要衍生自喹唑啉的低分子量分子，其等与受体之细胞内酪氨酸激酶域交互作用并藉由竞争细胞内Mg-ATP结合位置而抑制配体诱发性受体磷酸化。
[0396] 于一些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可与包括(但不限于)调节以下者之表达或活性的剂的另一种介导免疫系统活化的药疗法/药物组合使用：A2AR、BTLA、B7-H3、B7-H4、CTLA-4、CD27、CD28、CD40、CD55、CD73、CD122、CD137、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、CTLA-3、CEACAM(例如CEACAM-1及/或CEACAM-5)、GAL-9、GITR、HVEM、ICOS、IDO、KIR、LAIR1、LAG-3、OX40、TIGIT、TIM-3、TGFR-β、VISTA、LILRB2、CMTM6及/或2B4。于某些实施方式中，该剂系与以上分子之一结合的抗体或其抗原结合片段。于某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可与CTLA-4抑制剂(例如抗CTLA-4抗体，诸如tremelimumab或伊匹单抗(ipilimumab))组合投予。于一个实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可与伊匹单抗组合投予。
[0397] 于某些方面，本发明的抗体和抗原结合部分、组合物、和双特异性结合分子可组合另一种PD-1途径之抑制剂投予，该抑制剂可靶向PD-1或其配体之一或多者。如此抑制剂之实例包括其他抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、和抗PD-L2抗体。于一些实施方式中，本发明之抗PD1抗体或其抗原结合部分、双特异性抗体、或抗体组合物可与派姆单抗及/或纳武单抗组合投予。
[0398] 应了解本发明的抗体和其抗原结合部分、抗体组合物、和双特异性结合分子可用于如本文中描述的治疗方法、可用于如本文中描述的治疗、及/或可用于制造用于如本文中描述的治疗之医药品。本发明亦提供包含本文中描述的抗体和其抗原结合部分、抗体组合物、及/或双特异性结合分子的套组和制品。
[0399] 剂量和投予途径
[0400] 本发明的抗体和其抗原结合部分、组合物、和双特异性结合分子会以对于治疗所提及的病况有效的量(即以达成所欲的结果所需的剂量和时段)投予。治疗有效量可根据诸如以下者之因子变化：所治疗的特殊病况、患者之年龄、性别和重量、和该等抗体是否系作为单独的治疗投予或与一或多种另外的抗癌症治疗组合投予。
[0401] 可调整剂量摄生法以提供最适宜的所欲反应。例如，可投予单一食团、可随时间投予数个分开的剂或可按治疗状况之急迫性所指示的成比例地减少或增加该剂。对于投予之容易性和剂量之一致性，以剂量单位形式调配非经肠组合物系特别有利的。用于本文中，剂量单位形式系论及物理上分开的单位，其适合作为用于欲治疗的患者/对象之单个剂量；各单位含有经计算以产生所欲治疗功效之预决定量的活性化合物加上所需的医药载剂。本发明之剂量单位形式之规格一般系由以下者支配且直接取决于以下者：(a)化学治疗剂之独特特征和欲达成的特殊治疗或预防功效、和(b)复合如此活性化合物以用于治疗个体之敏感性的所属技术领域中的固有限制。
[0402] 因此，基于本文中提供之揭示内容，具有通常知识者会领会到剂量和给药摄生法系根据治疗技术领域中广为人知的方法作调整。即可轻易地建立最大可容忍剂量，且亦可测定对患者提供可侦测的治疗效益的有效量，且亦可测定对患者提供可侦测的治疗效益所需的投予各剂之时序需求。因此，虽然本文中例示了某些剂量和投予摄生法，此等实例并不以任何方式限制于实现本发明中可提供给患者的剂量和投予摄生法。
[0403] 应注意剂量值可随着欲减轻的病况之类型和严重性变化，且可包括单个或多个剂。应进一步了解到对于任何特殊对象，应根据个体之需求和投予或监督该组合物之投予者的专业判断随时间调整特殊剂量摄生法，且本文中提出的剂量范围仅系例示性且非意欲限制具体实例组合物之范围或实现。此外，使用本发明之组合物的剂量摄生法可基于各种各样的因子(包括疾病之类型、患者之年龄、重量、性别、医疗状况、病况之严重性、投予途径、和所利用的特殊抗体)变化。因此，该剂量摄生法可广大地变化，但可使用标准方法例行地测定。例如，可基于药动学或药效学参数调整剂量，该等参数可包括临床功效，诸如毒性效果及/或实验室值。因此，本发明涵盖如由具有通常知识者判定的患者内剂量升高。判定适当的剂量和摄生法于相关技术领域中系广为人知的且一旦提供本文中揭示的教示后具有通常知识者会了解其被涵盖。
[0404] 设想到本发明的抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子之适合剂量会于以下范围内：0.1-100mg/kg，诸如约0.5-50mg/kg，例如约1-20mg/kg。该抗体、抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子可例如以以下剂量投予：至少0.25mg/kg，例如至少0.5mg/kg，诸如至少1mg/kg，例如至少1.5mg/kg，诸如至少2mg/kg，例如至少3mg/kg，诸如至少4mg/kg，例如至少5mg/kg；和例如至多达50mg/kg，诸如至多达30mg/kg，例如至多达20mg/kg，诸如至多达15mg/kg。投予正常会以适合的间隔重复，例如每周一次、每二周一次、每三周一次、或每四周一次，且会持续负责的医师认为适当的时间，该医师必要时可视需要增加或减少剂量。
[0405] 肿瘤治疗之有效量可藉由其在患者中稳定疾病进展及/或改善症状(且较佳系逆转疾病进展，例如藉由减小肿瘤大小)的能力测量。本发明的抗体、抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子抑制癌症的能力可藉由试管内分析(例如如于实施例中描述者)以及于对人类肿瘤中的效力有预测性的适合的动物模型中评估。会挑选适合的剂量摄生法以于各个特殊状况提供最适宜的治疗的反应，例如以单一食团或以连续输注投予，且可能调整剂量，如由各个例子之急迫性指示的。
[0406] 诊断用途和组合物
[0407] 本发明的抗体亦有用于诊断程序(例如试管内、活体外)。例如，该等抗体可用于侦测及/或测量来自患者的样本(例如组织样本、或体液样本，诸如发炎渗出物、血液、血清、肠液、唾液、或尿液)中的PD-1水平。适合的侦测和测量方法包括免疫学方法，诸如流动式细胞测量术、酵素连结免疫吸附分析(ELISA)、化学发光分析、放射性免疫分析、和免疫组织学。本发明进一步涵盖套组(例如诊断套组)，其包含本文中描述的抗体。
[0408] 除非于本文中另加界定，连结本发明使用的科学和技术术语应具有所属技术领域中具有通常知识者所一般了解的意义。以下描述例示性方法和材料，虽然于实现或测试本发明时亦可使用与该等本文中描述者类似或等同的方法和材料。若有矛盾，应以本说明书(包括定义)为准。
[0409] 一般而言，连结本文中描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、分析化学、合成有机化学、医疗和医药化学、及蛋白质和核酸化学和杂合使用的命名法和其等之技术系该等于所属技术领域中广为人知且一般使用者。酵素反应和纯化技术系根据制造商之说明书执行，如所属技术领域中或如本文中描述地一般完成的。
[0410] 此外，除非前后文另外要求，单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。在本说明书和实施方式通篇中，字词「具有(have)」和「包含(comprise)」、或变体(诸如「具有(has)」、「具有(having)」、「包含(comprises)」、或「包含(comprising)」)应被理解成意指含有所陈述的整数或整数之组但不排除任何其他整数或整数之组。
[0411] 本文中提及的所有出版品和其他文献系以其等之整体以引用方式并入。虽然本文中引用一些文件，此引用并不构成和承认此等文件之任一者形成所属技术领域中的一般通常知识。
[0412] 为了使本发明可被更好地了解，提出以下实施例。此等实施例仅系用于阐明之目的且不应被解释成以任何方式限制本发明之范围。实施例
[0413] 实施例1.抗PD-1抗体库(antibody repertoire)之产生和筛选
[0414] 材料和方法
[0415] 大鼠(Osborn等人，J Immunol.2013,190(4):1481-90)(一种来自OMT(Open Monoclonal Technology,Inc.)的能够制造人类抗体的经工程设计大鼠品系)系以人类、食蟹猕猴、或小鼠PD-1抗原致免疫。抗体基因自源自该等大鼠的经单细胞分选抗体分泌性B细胞(ASC)的选殖系藉由SymplexTM抗体发现技术(Meijer等人，J Mol Biol 2006,358(3):764-72；US 7,749,697；WO 2008/104184)执行。
[0416] 从来自经致免疫OMT大鼠的经单细胞分选B细胞制备SymplexTM抗体文库，对于各个经分选B细胞该文库含有同源的VH和VL编码对。抗体库表达构建体编码完全人类的免疫球蛋白，其呈IgG1形式且带有二个已知会减低IgG1抗体之Fc区之效应功能的突变(L234A/L235A)(Hezareh等人，J Virol.75(24):12161-8(2001))。
[0417] 使用FreeStyleTMMAX试剂(Invitrogen)，以384槽孔形式使用表达构建体转染CHO-S细胞以展示人类、食蟹猕猴或小鼠PD-1。此外，使用编码不相关的蛋白质人类VEGFR2的对照组载体转染另一个细胞族群并随后将其用作为负对照组。为允许多重筛选设置，以1x10E6个细胞每ml的密度以1:1:1的比率混合以中强度羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(CFSEinter)标记的对照组细胞、以高强度CFSE(CFSEhigh)标记的经cyno PD-1转染的细胞、和未经标记的经人类PD-1-转染的细胞。在384槽孔盘中，混合40μl的此细胞混合物与10μl的含抗体上清液，并藉由添加山羊抗人类IgG(H+L)AF647二级抗体(Molecular Probes，Cat.No.A21445)显现与细胞结合的抗体。平行地，于类似的设置中针对与人类(CFSEpos)和小鼠PD-1(CFSEneg)的结合筛选抗体。使用高通量流式细胞测量术( Screener,
Intellicyt)获得样本并使用 软件藉由作图CFSE vs.IgG结合(AF647)分析数据。
PD-1特异性初级吻合被认定为与经人类(CSFEneg)和食蟹猕猴PD-1转染的细胞(CFSEhigh)两inter
者结合但不与对照组细胞(CFSE )结合的抗体克隆，并收集盘编号和盘坐标以用于吻合挑选和随后的序列分析。亦挑选一些于第二筛选中展现针对小鼠PD-1的另外反应性的初级吻合(CFSEneg)以用于进一步的分析。
Intellicyt)获得样本并使用 软件藉由作图CFSE vs.IgG结合(AF647)分析数据。
PD-1特异性初级吻合被认定为与经人类(CSFEneg)和食蟹猕猴PD-1转染的细胞(CFSEhigh)两inter
者结合但不与对照组细胞(CFSE )结合的抗体克隆，并收集盘编号和盘坐标以用于吻合挑选和随后的序列分析。亦挑选一些于第二筛选中展现针对小鼠PD-1的另外反应性的初级吻合(CFSEneg)以用于进一步的分析。
[0418] 结果
[0419] 图1(a)–1(d)显示展现针对PD-1异种同源物的不同反应性的四个抗体克隆之代表性流式细胞测量术点图：
[0420] (a)非特异性地与CHO-S细胞结合的抗体克隆，
[0421] (b)仅特异性地与经人类PD-1-转染的细胞结合的抗体克隆，
[0422] (c)特异性地与人类和食蟹猕猴PD-1结合的抗体克隆，和
[0423] (d)与此筛选中所测试的所有三种PD-1物种结合的抗体克隆。
[0424] (a)、(b)、(c)和(d)之各者中上面的点图描绘针对与人类PD-1(huPD1)和食蟹猕猴PD-1(cynoPD1)相较于负对照组细胞(neg)的结合测试抗体的第一筛选回合。下面的点图描绘针对与小鼠PD-1(moPD1)和人类PD-1(huPD1)的结合测试抗体的第二筛选回合。x轴(水平)显示CFSE，且y轴(垂直)显示人类IgG结合。
[0425] 实施例2.抗体序列
[0426] 藉由DNA定序分析筛选吻合并抽出编码抗体的DNA序列。定序488个展现针对人类和食蟹猕猴PD-1两者的交叉反应性的初级吻合。此显示该抗PD-1吻合库含有表达140个基因簇的254个独特抗体。个别地表达所选抗体克隆并如以下描述地测试其等之功能。以下描述于试管内分析中展现功能活性的十二种抗体。该十二种抗体之VH和VL域之蛋白质序列之编号系在表1中显示。用以选殖可变VH和VL基因的免疫球蛋白恒定区(具有L234A/L235A突变的Ig重链(IgHC)和Igκ轻链(IgKV))之序列编号系在表2中显示。十二种功能性抗体之CDR之序列编号系在表3中显示。此处的CDR序列系根据针对CDR1和CDR2的 定义决定。对于重链和轻链CDR3，此处的定义包括一个位于IMGT-CDR3之氨端的额外的氨基酸残基(Cys)。
[0427] 表1.抗体可变域氨基酸序列之编号
[0428]
[0429] 表2.抗体恒定区DNA和氨基酸序列之编号
[0430]
[0431] 表3.抗PD-1抗体之重链CDR1、CDR2和CDR3和轻链CDR1和CDR3的氨基酸序列之SEQ ID NO
[0432]
[0433] 实施例3.抗体序列中的架构突变
[0434] 执行实施例2之VH和VL氨基酸序列与人类种系序列的排比以显示该等VH和VL序列所源自的种系基因。表4显示对于各个克隆之VH和VL的最接近的V-和J-种系基因之指定、以及如于以下描述的架构突变之信息。
[0435] 因为该等抗体基因系藉由RT-PCR使用SymplexTM抗体发现技术(Mejier等人，J Mol Biol 358:764-772(2006)；WO 2005/042774)以简并引子分离，开头的六个氨基酸倾向有不于该抗体序列之成熟期间发生的突变。因此，此等源自引子的突变可被突变回种系序列而无减低结合亲和力的风险。此等「经Symplex修正的」变体序列中的VH和VL之数目和特殊氨基酸取代系在表4中显示。此外，于可变域之框架区中带有体超突变(即于VH或VL中位于CDR之外的突变)的抗体可被变回最接近的V-或J-种系之序列。在此等「种系化」变体序列中可被变成种系者的抗体架构中的数目和特殊氨基酸取代亦在表4中显示。以下者会很明显：表4中指出的「种系化」变体突变(参见行「种系化变体中的VH架构突变之数目」和「种系化变体中的VH架构突变之突变」)包括任何「经Symplex修正的」突变以及位于开头的六个氨基酸位置之外的突变。
[0436] 如以上指出的，不预期于各个VH或VL序列中于开头的六个氨基酸的源自引子的简并突变之改变会恶化相较于来源抗体的结合特性。因此，较佳地，本发明的抗PD-1抗体包括以下表格中指出的「经Symplex修正的」突变。
[0437] 至于位于各个序列之开头的六个氨基酸位置之外的「种系化变体」突变，可选择此等突变之任一或多者。测定个别突变是否对一抗体之抗原结合特性具有负面效果可藉由以下者执行：制备具有所指出的突变的种系化变体VH和VL序列并比较该抗体之抗原结合特性与具有相对应的来源或经Symplex修正的序列的亲本之抗原结合特性。若观察到结合亲和力之减低或其他改变的结合特性，变体可(例如)使用2x2VH/VL矩阵使用各个抗体之重链和轻链之经Symplex修正的变体和种系化变体测试，即于此例子中对于各个抗体有四种组合。此允许测定是否种系化VH和VL序列之一者或另一者或两者对于任何观察到的改变的结合特性有贡献。供选择地或另外地，可测试其中避免单一种系化变体突变的相对应的抗体之系列以测定影响具有所有所列突变的种系化变体之结合的特殊突变。
[0438] 表5显示来源序列以及相对应的经Symplex修正的和种系化变体之VH和VL序列编号。基于表5中的编号，很明显于一些例子中于来源序列和经Symplex修正的序列间或于经Symplex修正的序列和种系化序列间无差异。对种系架构残基的突变系基于IMGT定义。于所附序列表中，所得的氨基酸取代被加底线并以粗体标记。
[0439] 表4(第1部分：VH序列架构突变)
[0440]
[0441]
[0442] 表4(第2部分：VL序列架构突变)
[0443]
[0444]
[0445] 表5.抗PD-1抗体之VH和VL的氨基酸序列，包括经Symplex修正的和种系化变体之SEQ ID NO
[0446]
[0447] 实施例4.针对PD-L1封阻活性的抗PD-1抗体之流式细胞测量术分析
[0448] 此实施例描述藉由流式细胞测量术针对PD-L1封阻活性的抗PD-1抗体之测试。
[0449] 方法
[0450] 于细胞分析中研究PD-L1配体封阻活性，于该分析中在CHO-S细胞上重组地表达人类PD-1，并藉由流式细胞测量术分析经R-PE(R-phycoerythrin)标记的人类PD-L1-Fc嵌合蛋白质之结合。使用 R-Phycoerythrin缀合套组(Innova Biosciences,UK)使商业上可购得的重组PD-L1-Fc嵌合蛋白质(R&D Systems,USA)与R-PE缀合。暂时转染CHO-S细胞以表达人类PD-1。接着在冰上以50μl的20μg/ml抗PD-1抗体培养细胞，然后添加
50μl大约3.4μg/ml的经R-PE标记的PD-L1-Fc(最终浓度16.4nM)并进一步培养另外20min(最终抗PD-1抗体浓度：10μg/ml)。使用与APC(别藻蓝蛋白)缀合的抗人类IgG轻链抗体侦测结合的抗体。藉由分别侦测R-PE和APC荧光的流式细胞测量术定量PD-L1和抗PD-1抗体之结合。
50μl大约3.4μg/ml的经R-PE标记的PD-L1-Fc(最终浓度16.4nM)并进一步培养另外20min(最终抗PD-1抗体浓度：10μg/ml)。使用与APC(别藻蓝蛋白)缀合的抗人类IgG轻链抗体侦测结合的抗体。藉由分别侦测R-PE和APC荧光的流式细胞测量术定量PD-L1和抗PD-1抗体之结合。
[0451] 结果
[0452] 此竞争实验之结果系于图2(a)-2(h)中呈现，其中X轴(水平)显示PD-L1结合，且Y轴(垂直)显示人类IgG结合。所有所测试的抗PD-1抗体于10μg/ml的最终抗体浓度皆能够抑制PD-1与PD-L1的交互作用。将PD-L1与PD-1表达性细胞于非特异性抗体之存在下的结合用作为PD-L1封阻之负对照组。此外，呈现PD-L1于非封阻性抗体之存在下的结合代表图。
[0453] 实施例5.PD-1抗体对人类和食蟹猕猴PD-1 ECD抗原的亲和力之测量
[0454] 此实施例展示十二种功能性抗PD-1抗体如何展现针对人类PD-1的强结合亲和力，具有范围在低nM至中pM的KD。相同的抗体亦以范围在中至低nM的KD与食蟹猕猴PD-1交叉反应。抗体18201和18400亦以范围在中或低nM的KD与小鼠PD-1交叉反应。
[0455] 方法
[0456] 藉由表面电浆子共振(SPR)使用连续流微点样器(CFM，Wasatch Microfluidics,US)组合Ibis MX96SPR仪器(IBIS Technologies，荷兰)执行动力学结合分析。在G-a-hu-IgG Fc SPR传感器(Ssens BV，荷兰)上执行表面电浆子共振成像分析。在PBS-T(1x PBS，具有0.05％Tween 20，pH 7.4)中将以IgG1 LALA形式(即具有突变L234A/L235A)表达的抗PD-1抗体稀释至2.5nM。使用连续流微点样器(CFM，Wasatch Microfluidics，盐湖城，US)将抗体点样至G-a-hu-IgG Fc 上共15分钟。于点样后，将 放置
在IBIS MX96生物传感器中，并使用Fix It套组(Ssens BV，荷兰)将抗体化学固定至传感器表面。动力学分析系藉由施加动力学滴定系列(Karlsson等人，Anal.Biochem.349(1):136-
47(2006))执行，其中以2nM至100nM的渐增浓度注射单体PD-1抗原且于各个抗原注射后无施用表面再生步骤。于三个分开的实验中测试与人类PD-1 ECD(Acro Biosystems cat.no.PD1-H52219)、小鼠PD-1 ECD(Sino Biological.cat.no.50124-M08H)和食蟹猕猴PD-1 ECD(Acro BioSystems cat.no.PD1-C5223)的结合。执行抗原缔合共15分钟并执行抗原解离共60分钟。于25℃下执行动力学分析。于完成后，使用Scrubber 2软件将所记录的结合反应拟合至简单朗谬1:1结合模式以用于结合速率(kon或ka)、解离速率(koff或kd)和亲和力(KD)常数之计算。
在IBIS MX96生物传感器中，并使用Fix It套组(Ssens BV，荷兰)将抗体化学固定至传感器表面。动力学分析系藉由施加动力学滴定系列(Karlsson等人，Anal.Biochem.349(1):136-
47(2006))执行，其中以2nM至100nM的渐增浓度注射单体PD-1抗原且于各个抗原注射后无施用表面再生步骤。于三个分开的实验中测试与人类PD-1 ECD(Acro Biosystems cat.no.PD1-H52219)、小鼠PD-1 ECD(Sino Biological.cat.no.50124-M08H)和食蟹猕猴PD-1 ECD(Acro BioSystems cat.no.PD1-C5223)的结合。执行抗原缔合共15分钟并执行抗原解离共60分钟。于25℃下执行动力学分析。于完成后，使用Scrubber 2软件将所记录的结合反应拟合至简单朗谬1:1结合模式以用于结合速率(kon或ka)、解离速率(koff或kd)和亲和力(KD)常数之计算。
[0457] 结果
[0458] 表面电浆子共振(SPR)结果系在以下表6中显示。大体而言，抗体有高亲和力且所有所测试的抗体皆与食蟹猕猴PD-1交叉反应。抗体18201和18400亦与小鼠PD-1交叉反应，而此指出相较于其他PD-1抗体(包括参考抗体、派姆单抗和纳武单抗(其等不与小鼠PD-1交叉反应))，被此二种抗体辨识的表位系独特的。此等特性系有利的，因为其等允许该等抗体于在人类对象中测试前在非人类灵长类动物或鼠类模型中直接测试。
[0459] 表6.抗PD-1抗体与人类、食蟹猕猴或小鼠PD-1ECD的结合之动力学，如由表面电浆子共振(SPR)测量的。(N.B.＝不结合)
[0460]
[0461]
[0462] 实施例6.抗PD-1单克隆抗体之试管内功能性评估
[0463] 此实施例展示该十二种抗PD-1抗体于以下二种不同的功能性分析中表达如何：葡萄球菌肠毒素B(SEB)全血分析和单向混合淋巴细胞反应(MLR)。该十二种抗PD-1mAb于经SEB处理的全血分析中刺激IL-2制造或于该单向MLR分析中刺激干扰素γ(IFN-γ)之制造的能力是如以下描述地评估。方法
[0464] SEB是一种与第II型MHC分子和T细胞受体(TCR)之特殊Vβ区域结合并驱动T细胞之非特异性刺激的超抗原。此造成多株T细胞活化/增殖和细胞介素释放，包括IL-2和IFN-γ。以1μg/ml将SEB加至全血，并于培养二日后，收获上清液并藉由常规ELISA测定IL-2水平。
[0465] 于单向MLR分析中，共培养自两名不同的健康捐赠者分离的树突细胞(DC)和CD4-阳性(CD4+)T细胞以诱发同种抗原特异性反应，导致细胞介素制造和T细胞活化/增殖。树突细胞系于以20ng/ml颗粒细胞-巨噬细胞集落-刺激性因子(GM-CSF)和20ng/ml介白素-4(IL-4)培养六日时自CD14+单核细胞分化，并将其以1:10的比率与从来自健康捐赠者材料的周边血液单核细胞(PBMC)分离的CD4+T细胞混合。于培养5日后，收获上清液，并使用Meso Scale电致化学发光(MSD)细胞介素分析测定IFN-γ水平。
[0466] 藉由该等抗体起始浓度为50μg/ml的二倍稀释产生剂量反应曲线。
[0467] 结果
[0468] 该十二种抗体于SEB全血分析和单向MLR分析中的剂量反应曲线是分别于图3(a)-3(f)和图4(a)-4(f)中显示。图上的各点代表三个重复之平均，而误差杠代表SEM。发现该等抗体之所有者于SEB全血分析中皆会诱发IL-2制造之剂量依赖性增加且于MLR分析中皆会诱发IFN-γ制造之剂量依赖性增加。
[0469] 实施例7.抗PD-1单克隆抗体表位分仓
[0470] 此实施例阐明抗PD-1抗体如何基于成对竞争模式分组至表位仓中。属于不同的表位仓的抗体辨识PD-1 ECD上不同的表位。
[0471] 方法
[0472] 藉由表面电浆子共振(SPR)分析使用使用连续流微点样器(CFM)(Wasatch Microfluidics，US)组合IBIS MX96SPR仪器(IBIS Technologies，荷兰)执行成对抗体竞争之研究。在G-a-hu-IgG Fc SPR传感器(Ssens BV，荷兰)上执行表面电浆子共振
成像分析。在含有0.05％Tween 20(PBS-T)，pH 7.0的PBS缓冲液中将总共十八种抗PD-1抗体(人类，IgG1)稀释至10μg/mL。藉由使用连续流微点样器点样15分钟使抗体被捕捉至抗Fc传感器表面上。于点样后，将 放置于IBIS MX96生物传感器中并藉由注射30μg/
mL非特异性人类IgG1封阻残余的抗Fc位置。使用FixIt套组(Ssens BV，荷兰)使被捕捉的抗体缀合至该表面。于传感器制备后，使用标准三明治分析执行抗体竞争分析。在HBS-EP运作缓冲液中稀释单价PD-1 ECD抗原(Sino Biological，中国)和并以50nM的浓度注射之并藉由抗PD-1抗体之缀合数组捕捉之。接着。执行被在HBS-EP运作缓冲液中稀释至100nM的该十八种PD-1抗体之各者之个别注射以建立抗体竞争模式。于各个竞争循环后，以10mM甘氨酸HCl缓冲液，pH 2.0再生传感器表面。
成像分析。在含有0.05％Tween 20(PBS-T)，pH 7.0的PBS缓冲液中将总共十八种抗PD-1抗体(人类，IgG1)稀释至10μg/mL。藉由使用连续流微点样器点样15分钟使抗体被捕捉至抗Fc传感器表面上。于点样后，将 放置于IBIS MX96生物传感器中并藉由注射30μg/
mL非特异性人类IgG1封阻残余的抗Fc位置。使用FixIt套组(Ssens BV，荷兰)使被捕捉的抗体缀合至该表面。于传感器制备后，使用标准三明治分析执行抗体竞争分析。在HBS-EP运作缓冲液中稀释单价PD-1 ECD抗原(Sino Biological，中国)和并以50nM的浓度注射之并藉由抗PD-1抗体之缀合数组捕捉之。接着。执行被在HBS-EP运作缓冲液中稀释至100nM的该十八种PD-1抗体之各者之个别注射以建立抗体竞争模式。于各个竞争循环后，以10mM甘氨酸HCl缓冲液，pH 2.0再生传感器表面。
[0473] 结果
[0474] 十八种抗PD-1抗体之竞争模式是在图5中呈现。未发现抗体12866和12807于基于细胞的分析中具有功能活性(数据未来显示)，但包括其等，因为其等辨识对于界定其他表位仓之特征有用的不同表位。所测试的抗PD1抗体可被分至两个主要的非重迭表位仓。属于表位仓1的功能性抗体皆交叉封阻彼此，且可进一步基于抗体12866和12807之封阻分至子仓中。例如，封阻mAb 12866和12807两者的抗体被分至表位仓1C。表位仓1C包括抗体18366、18483、18113、18247、18040、和18250。表位仓1D中的抗体包括纳武单抗类似物(「Nivo」)和
18049且特征在于封阻mAb 12866但非12807。属于表位仓1E的抗体之特征在于仅仅封阻mAb
12807。表位仓1E包括派姆单抗类似物(「Pembro」)和抗体18098、18201、18400、18413、和
18325。
18049且特征在于封阻mAb 12866但非12807。属于表位仓1E的抗体之特征在于仅仅封阻mAb
12807。表位仓1E包括派姆单抗类似物(「Pembro」)和抗体18098、18201、18400、18413、和
18325。
[0475] 抗体12760和13112不封阻PD-L1和PD-L2配体，且被分至分开的表位仓2，因为其等交叉封阻彼此但不封阻来自表位仓1的抗体之任何者之结合。抗体12760和13112类似地与PD-1上不与PD-L1和PD-L2配体结合位置重迭的位置结合。
[0476] 序列表
[0477] SEQ ID NO:1
[0478]
[0479] 于位置35的X是N或S
[0480] 于位置84的X是D或N
[0481] SEQ ID NO:2
[0482]
[0483] 于位置1的X是E或D
[0484] 于位置40的X是F或A
[0485] 于位置55的X是F或Y
[0486] SEQ ID NO:3
[0487] QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSDKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGGNYYGDFWGQGTLVTVSS
[0488] SEQ ID NO:4
[0489]
[0490] 于位置1的X是E或D
[0491] 于位置3的X是V或Q
[0492] 于位置53的X是N或S
[0493] SEQ ID NO:5
[0494]
[0495] 于位置1的X是Q或E
[0496] 于位置5的X是Q或V
[0497] 于位置13的X是R或Q
[0498] 于位置35的X是N或S
[0499] 于位置46的X是V或E
[0500] 于位置50的X是T或A
[0501] 于位置77的X是S或N
[0502] 于位置80的X是F或Y
[0503] 于位置115的X是T或M
[0504] SEQ ID NO:6
[0505]
[0506] 于位置4的X是L或M
[0507] SEQ ID NO:7
[0508]
[0509] 于位置64的X是A或V
[0510] SEQ ID NO:8
[0511]
[0512] 于位置3的X是Q或V
[0513] 于位置4的X是L或M
[0514] 于位置69的X是R或S
[0515] SEQ ID NO:9
[0516]
[0517] 于位置5的X是V或Q
[0518] 于位置59的X是T或N
[0519] 于位置76的X是R或K
[0520] 于位置83的X是M或L
[0521] SEQ ID NO:10
[0522]
[0523] 于位置1的X是D或A
[0524] SEQ ID NO:11
[0525]
[0526] 于位置10的X是D或G
[0527] 于位置16的X是R或G
[0528] SEQ ID NO:12
[0529]
[0530] 于位置1的X是E或D
[0531] 于位置4的X是L或M
[0532] 于位置55的X是F或Y
[0533] 于位置93的X是F或Y
[0534] SEQ ID NO:13
[0535]
[0536] 于位置5的X是Q或V
[0537] 于位置50的X是H或Y
[0538] 于位置59的X是D或Y
[0539] 于位置61的X是V或A
[0540] SEQ ID NO:14
[0541]
[0542] 于位置3的X是Q或V
[0543] 于位置4的X是L或M
[0544] 于位置55的X是S或Y
[0545] SEQ ID NO:15
[0546]
[0547] 于位置1的X是Q或E
[0548] 于位置5的X是Q或V
[0549] 于位置6的X是Q或E
[0550] 于位置35的X是N或S
[0551] 于位置49的X是A或S
[0552] 于位置50的X是T或A
[0553] 于位置73的X是G或D
[0554] 于位置78的X是M或T
[0555] SEQ ID NO:16
[0556]
[0557] 于位置1的X是E或D
[0558] 于位置3的X是V或Q
[0559] 于位置4的X是L或M
[0560] SEQ ID NO:17
[0561]
[0562] 于位置1的X是Q或E
[0563] 于位置6的X是Q或E
[0564] SEQ ID NO:18
[0565]
[0566]
[0567] 于位置1的X是E或D
[0568] 于位置40的X是L或A
[0569] 于位置55的X是F或Y
[0570] SEQ ID NO:19
[0571]
[0572] 于位置2的X是L或V
[0573] 于位置43的X是K或G
[0574] 于位置49的X是V或I
[0575] 于位置59的X是S或N
[0576] 于位置70的X是M或I
[0577] 于位置111的X是P或Q
[0578] SEQ ID NO:20
[0579]
[0580] 于位置1的X是E或A
[0581] 于位置3的X是V或Q
[0582] 于位置10的X是P或S
[0583] SEQ ID NO:21
[0584]
[0585] 于位置48的X是L或V
[0586] 于位置50的X是T或A
[0587] SEQ ID NO:22
[0588]
[0589] 于位置4的X是L或M
[0590] 于位置12的X是P或S
[0591] SEQ ID NO:23
[0592]
[0593] 于位置1的X是Q或E
[0594] 于位置5的X是Q或V
[0595] 于位置6的X是Q或E
[0596] 于位置35的X是N或S
[0597] SEQ ID NO:24
[0598]
[0599] 于位置3的X是Q或V
[0600] 于位置40的X是L或A
[0601] 于位置55的X是F或Y
[0602] 恒定抗体序列
[0603] SEQ ID NO:25(IgHC DNA序列)
[0604] GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA[0605] SEQ ID NO:26(IgHC蛋白质序列)
[0606] ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[0607] SEQ ID NO:27(IgKC DNA序列)
[0608] CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
[0609] SEQ ID NO:28(IgKC蛋白质序列)
[0610] RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[0611] SEQ ID NO:29(18040/18113/18247 H-CDR1)
[0612] GFTFSDYY
[0613] SEQ ID NO:30(18040 H-CDR2)
[0614] ISSTGSTI
[0615] SEQ ID NO:31(18040 H-CDR3)
[0616] CARATNWGSDY
[0617] SEQ ID NO:32(18040/18366 L-CDR1)
[0618] QSVLYSSNNKNY
[0619] SEQ ID NO:33(18040/18247/18250/18366/18483 L-CDR2)WAS
[0620] SEQ ID NO:34(18040/18250/18366/18483 L-CDR3)
[0621] CQQYYSTPYT
[0622] SEQ ID NO:35(18049 H-CDR1)
[0623] GFTFSNYG
[0624] SEQ ID NO:36(18049 H-CDR2)
[0625] IWYDGSDK
[0626] SEQ ID NO:37(18049 H-CDR3)
[0627] CAGGGNYYGDF
[0628] SEQ ID NO:38(18049/18201/18400 L-CDR1)
[0629] QGIRND
[0630] SEQ ID NO:39(18049 L-CDR2)
[0631] VAS
[0632] SEQ ID NO:40(18049 L-CDR3)
[0633] CLQYNSYPWT
[0634] SEQ ID NO:41(18098 H-CDR1)
[0635] GFTFSSFA
[0636] SEQ ID NO:42(18098 H-CDR2)
[0637] ITGGGTTS
[0638] SEQ ID NO:43(18098/18325 H-CDR3)
[0639] CAKWGSWSAGAFDI
[0640] SEQ ID NO:44(18098/18325 L-CDR1)
[0641] QGISSW
[0642] SEQ ID NO:45(18098/18201/18325/18400/18413 L-CDR2)
[0643] AAS
[0644] SEQ ID NO:46(18098/18325 L-CDR3)
[0645] CQQANSFPWT
[0646] SEQ ID NO:47(18113 H-CDR2)
[0647] ISSSGSTI
[0648] SEQ ID NO:48(18113/18247 H-CDR3)
[0649] CARDTNWAFDY
[0650] SEQ ID NO:49(18113 L-CDR1)
[0651] QSVFYSANNKNY
[0652] SEQ ID NO:50(18113 L-CDR2)
[0653] WTS
[0654] SEQ ID NO:51(18113/18247 L-CDR3)
[0655] CQQFYSTPRT
[0656] SEQ ID NO:52(18201 H-CDR1)
[0657] GGSISSNNW
[0658] SEQ ID NO:53(18201 H-CDR2)
[0659] IYHDGTT
[0660] SEQ ID NO:54(18201 H-CDR3)
[0661] CARGDWGSGAFDI
[0662] SEQ ID NO:55(18201/18400 L-CDR3)
[0663] CLQDYNYPRT
[0664] SEQ ID NO:56(18247 H-CDR2)
[0665] ISSSSSTI
[0666] SEQ ID NO:57(18247/18250/18483 L-CDR1)
[0667] QSVFYSSNNKNY
[0668] SEQ ID NO:58(18250 H-CDR1)
[0669] GFTFRDYY
[0670] SEQ ID NO:59(18250 H-CDR2)
[0671] ISSSGSII
[0672] SEQ ID NO:60(18250 H-CDR3)
[0673] CARDTNWALDY
[0674] SEQ ID NO:61(18325 H-CDR1)
[0675] GFTFSSHV
[0676] SEQ ID NO:62(18325 H-CDR2)
[0677] ISGSGVDT
[0678] SEQ ID NO:63(18366 H-CDR1)
[0679] GFTFSSYW
[0680] SEQ ID NO:64(18366 H-CDR2)
[0681] IKQDGSEK
[0682] SEQ ID NO:65(18366 H-CDR3)
[0683] CARDTNWGFDN
[0684] SEQ ID NO:66(18400 H-CDR1)
[0685] GGSISSSNW
[0686] SEQ ID NO:67(18400 H-CDR2)
[0687] IFHDGTT
[0688] SEQ ID NO:68(18400 H-CDR3)
[0689] CARGNWGSGALDI
[0690] SEQ ID NO:69(18413 H-CDR1)
[0691] GFTFSSFV
[0692] SEQ ID NO:70(18413 H-CDR2)
[0693] ISGGGGST
[0694] SEQ ID NO:71(18413 H-CDR3)
[0695] CAKDWDLYYFDY
[0696] SEQ ID NO:72(18413 L-CDR1)
[0697] QGISNW
[0698] SEQ ID NO:73(18413 L-CDR3)
[0699] CQQANSFPLT
[0700] SEQ ID NO:74(18483 H-CDR1)
[0701] GFTFSDYW
[0702] SEQ ID NO:75(18483 H-CDR2)
[0703] IKEDGNEK
[0704] SEQ ID NO:76(18483 H-CDR3)
[0705] CARDTNWGSDY
[0706] SEQ ID NO:77
[0707]
[0708]
[0709] SEQ ID NO:78
[0710]
[0711] SEQ ID NO:79
[0712]
[0713] SEQ ID NO:80
[0714]
[0715] SEQ ID NO:81
[0716]
[0717] SEQ ID NO:82
[0718]
[0719] SEQ ID NO:83
[0720]
[0721] SEQ ID NO:84
[0722]
[0723] SEQ ID NO:85
[0724]
[0725] SEQ ID NO:86
[0726]
[0727] SEQ ID NO:87
[0728]
[0729] SEQ ID NO:88
[0730]
[0731] SEQ ID NO:89
[0732]
[0733] SEQ ID NO:90
[0734]
[0735] SEQ ID NO:91
[0736]
[0737] SEQ ID NO:92
[0738]
[0739] SEQ ID NO:93
[0740]
[0741] SEQ ID NO:94
[0742]
[0743] SEQ ID NO:95
[0744]
[0745] SEQ ID NO:96
[0746]
[0747] SEQ ID NO:97
[0748]
[0749] SEQ ID NO:98
[0750]
[0751] SEQ ID NO:99
[0752]
[0753] SEQ ID NO:100
[0754]
[0755] SEQ ID NO:101
[0756]
[0757] SEQ ID NO:102
[0758]
[0759] SEQ ID NO:103
[0760]
[0761] SEQ ID NO:104
[0762]
[0763] SEQ ID NO:105
[0764]
[0765] SEQ ID NO:106
[0766]
[0767] SEQ ID NO:107
[0768]
[0769] SEQ ID NO:108
[0770]
[0771] SEQ ID NO:109
[0772]
[0773] SEQ ID NO:110
[0774]
[0775] SEQ ID NO:111
[0776]
[0777] SEQ ID NO:112
[0778]
[0779] SEQ ID NO:113
[0780]
[0781] SEQ ID NO:114
[0782]
[0783] SEQ ID NO:115
[0784] GGGGSGGGGSGGGGS
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