[0002] 本申请要求受益于2009年5月5日提交的美国临时申请案61/215,419。上述申请内容在此全文引入以供参考。
[0003] 技艺领域
[0004] 本
发明揭露一种可调控表皮生长因子受体(EGFR)，包括Her-激酶及此化合物可用于治疗各种失调、
疾病或症状的新颖的嘧啶、吡咯并嘧啶、吡咯并吡啶、吡啶、嘌呤及三嗪化合物。
[0005] 背景技艺
[0006] 表皮生长因子受体(EGFR、Erb-B1)属于一种与正常及恶性
细胞增殖有关的
蛋白质家族(Artega、C.L.、J.Clin Oncol 19、2001、32-40)。表皮生长因子受体的过度表现出现在至少70％的人类癌症(Seymour、L.K.、Curr Drug Targets 2，2001，117133)例如，非小细胞
肺癌、乳癌(breast cancer)、神经胶质瘤(glioma)、头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma)及
前列腺癌(prostate cancer)(Raymond et al.、Drugs 60 Suppl 1、2000、discussion 41-2；Salomon et al.、Crit Rev Oncol Hematol 19、1995、183-232；Voldborg et al.、Ann Oncol 8、1997、1197-1206)。因此EGFR-TK广泛被认可为开发及设计化合物之受到注目的标靶，所述化合物可以特异性结合且抑制酪
氨酸激酶的活性以及其于癌细胞中的
信号传导路径，也因此可做为
诊断剂或治疗药剂。举例来说，EGFR酪TM
氨酸激酶(EGFR-TK)的可逆抑制剂(reversible inhibitor)，TARCEVAR ，为FDA核准用于治疗NSCLC及晚期胰腺癌(pancreatic cancer)。经过核准的其它抗-EGFR标靶分子包括TM TM
拉帕替尼(LAPATINIBR )及
艾瑞莎膜衣锭(IRESSAR )。
[0007] 阨洛替尼(erlotinib)及吉非替尼(gefitinib)对所有患肺癌(lung cancer)的病人的疗效是有限的。当厄洛替尼(erlotinib)或吉非替尼(gefitinib)用于治疗所有的肺癌(lung cancer)患者(并非选自存在/不存在活化的(突变的)EGFR)，患者
肿瘤收缩(tumor shrinkage)的可能性(反应率)为8-10％及肿瘤恶化的平均时间为约2个月{Shepherd et al NEJM 2004、Thatcher et al.Lancet 2005}。2004年发现与EGFR的
体细胞突变有关的肺癌以吉非替尼(gefitinib)及阨洛替尼(erlotinib)治疗后伴随着剧烈的临床反应{Paez et al.Science 20004；Lynch et al.NEJM 2004；Pao et al PNAS 2004}。截至目前的体细胞突变包括点突变，其中被表现的蛋白质上单一氨基酸残基改变(例如：
L858R、G719S、G719C、G719A、L861 Q)，以及外显子(exon)19的小的框缺失或外显子20的小的框插入。EGFR的体细胞突变(somatic mutations)发生在NSCLC患者白人(Caucasian)为10-15％及在亚洲人(Asian)为30-40％。EGFR的突变越来越频繁的发生于不吸烟者、女性、罹患腺癌(adenocarcinoma)以及东亚人种患者{Shigematsu et al JNCI 2005}。
在相同族群的患者在先前的临床诊断上最可能受益于吉非替尼(gefitinib)或阨洛替尼(erlotinib)。至今已有六种潜在的临床试验单纯 化疗的EGFR突变病人都以吉非
替尼(gefitinib)或阨洛替尼(erlotinib)有效{Inoue et al JCO 2006、Tamura et al Hr.J Cancer 2008；Asahina et al.、Hr.J.Cancer 2006；Sequist et aI.、JCO 2008}。累积地，这些研究能前瞻性的诊断或治疗超过200位EGFR突变病人。以吉非替尼(gefitinib)及阨洛替尼(erlotinib)治疗的患者他们共同表现出放射线反应率(response rate)范围从60至82％及其恶化(progression)的平均时间为9.4至13.3个月。这些结果相较于晚期NSCLC铂类药物化疗(platin-based chemotherapy)(分别为20-30％及3-4月)为
3到4倍大{Schiller、et al JCO 2002}。最近刚完成了第III级临床试验，以吉非替尼(gefitinib)治疗相较于传统化疗(conventional chemotherapy)，单纯EGFR突变的
化学治疗NSCLC患者有显着的延长(危害率(hazard ratio)＝0.48(95％CI；0.36-0.64)；P＜0.0001)无恶化存活期(progression free survival)(PFS)及肿瘤反应率(response rate)(71.3对47.2％，p＝0.0001){Mok et al.ESMO meeting 2008}。相反的，对于NSCLC晚期患者相较于作为其起初治疗的化疗，当EGFR野生型的NSCLC患者接收到吉非替尼(gefitinib)有一个更坏的结果{Mok et al ESMO meeting 2008}。因此，EGFR突变提供了一个比传统全身化疗更有效重要的选择方法(EGFR TKIs)给NSCLC患者。在许多临床中心经常以EGFR突变来评估NSCLC患者。
[0008] 尽管，带有EGFR突变NSCLC患者，在最初临床使用吉非替尼(gefitinib)/阨洛替尼(erlotinib)是有益的，大部分不是所有的患者接受所述治疗剂仍在最终逐步发展为癌症。复发样本的初步研究指出次要的EGFR突变(secondary mutation)，T790M，呈现吉非替尼(gefitinib)及阨洛替尼(erlotinib)无法有效的抑制EGFR激酶的活性{Kobayashi et al NEJM 2005及Pao et al PLOS Medicien 2005}。随后的研究证明EGFR T790M突变在约50％的肿瘤(24/48)患者发现已经产生对吉非替尼(gefitinib)或阨洛替尼(erlotinib)的抗药性{Kosaka et al CCR 2006；Balak et al CCR 2006及Engelman et al Science
2007}。所述二次基因改变是发生在”卡口”残基(gatekeeper residue)及以激酶抑制剂治疗的疾病的其它二次抗药性对偶基因的类似
位置(举例来说伊
马替尼(imatinib)抗药性的CML中ABL的T315I)。
[0009] EGFRT790M的初步证明也决定不可逆的EGFR抑制剂，CL-387，785，即使其具有T790M突变仍然可以抑制EGFR。而后的研究证明其它的不可逆EGFR抑制剂，EKB-569及HKI-272，也可抑制磷
酸化的EGFR T790M及带有T790M突变的EGFR突变体的NSCLC细胞株生长{Kwak et al PNAS 2005；Kobayashi et al NEJM 2005}。所述不可逆EGFR抑制剂的结构与可逆抑制剂吉非替尼及厄洛替尼相似，但不同之处为所述不可逆EGFR抑制剂含有可与EGFR中Cys797共价结合的麦克受体(Michael acceptor)。所述T790M的突变并不妨碍其与不可逆抑制剂(irreversible inhibitor)的结合，相反的，其部份通过增加酶对ATP的
亲和性，至少于L858R/T790M突变的EGFR赋予可逆抑制剂抗性{Yun et aI.、PNAS2008}。不可逆抑制剂可克服此抗药机制，因为只要其共价结合后便不再与ATP竞争。此观察已导致使用不可逆EGFR抑制剂(inhibitors)，在临床上患者发展出对吉非替尼或厄洛替尼的获得性抗药性。三类似制剂(HKI-272、BIBW2992及PF00299804)目前仍在临床开发阶段。然而，目前为止临床前的研究显示，这些药物对于带有T790M突变的变异体并非最理想的EGFR抑制剂。
[0010] 最近在EGFR L858R1T790M媒介肺癌的小鼠模型的研究证明，这些小鼠的癌症子集(支气管肿瘤)对HKI-272单独不具敏感性{Li et al Caneer Cell 2007}。因此尽管在如此单纯的EGFR-驱动模型中，HKI-272单独仍无法将肿瘤消退。相较于单独投以厄洛替尼(erlotinib)于仅含有EGFR活化突变的肺癌小鼠模型的显着的效果为一鲜明的对比{Ji et al Cancer Cell 2006}，且提出HKI-272可能也对一些具有EGFRT790M之NSCLC患者无效。类似的发现被公布于BIBW 2992(Li et at.Oncogene 2008)。此外，HKI-272的IC50必需去抑制带有与不同外显子19突变相连结的EGFR T790M的Ba/F3细胞的生长所需的HKI-272的IC50范围从200-800nM，而试验中第一期(Phase I)的平均Cmax仅约200nM{Yuza et al Cancer BioI Ther 2007；Wong et al CCR 2009 in press}。因此，仍然需要开发一种更能有效抑制EGFR T790M的EGFR标靶药物。
[0011] 目前所有的EGFR抑制剂最主要的限制为其对正常组织的毒害情况。由于EGFR T790M的ATP亲合性与WT EGFR相似，抑制EGFR T790M所需的不可逆EGFR抑制剂的浓度也对WT EGFR具有抑制效果。目前EGFR激酶抑制剂的群组-特异性毒性(specific toxicity)，皮疹(skin rash)及腹泻(diarrhea)，为于非癌症组织的抑制WT EGFR的结果。这种毒性，抑制WT EGFR的结果，目前药剂剂量增减以防止其影响
血浆浓度又能有效抑制EGFR T790M。主要进步为具辨识突变株特异性的EGFR抑制剂，可减少药剂对野生型EGFR的效果。这种药剂可能在临床上更有效果，而在癌症患者对治疗药剂的耐受性更具潜
力。
发明内容
[0012] 本发明是提供一化合物，是相较于野生型EGFR对L858Rff790M或Del/T790M EGFR表现出更大的抑制性。在某些
实施例中，本发明是针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少大于2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍的化合物。在不同的实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少高达1000倍的化合物。在不同的实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少高达10000倍的化合物。
[0013] 在不同实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果约2倍至约10倍的化合物。在不同实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果约10倍至约100倍的化合物。在不同实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果约100倍至约1000倍的化合物。在不同实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M的抑制效果约1000倍至约10000倍的化合物。
[0014] 在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少2倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少3倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少5倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少10倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少25倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果至少50倍的化合物。在某些实施例中，本发明针对一种相较于野生型EGFR表现出对L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制效果大于100倍的化合物。
[0015] 在一些实施例中，所述化合物会共价修饰(covalently modifie)EGFR上第797位置的半胱氨酸。
[0016] 在一方面，本发明提供一化合物是包括不可逆激酶抑制剂，其中，所述化合物相较于野生型EGFR为更有效力的药物-抗性表皮生长因子受体(EGFR)突变株抑制剂。举例来说，相较于所述化合物的抑制野生型EGFR激酶活性，所述化合物在抑制药物-抗性EGFR突变株激酶活性可以至少约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍更高的效力。在一些实施例中，药物-抗性EGFR突变株会对吉非替尼(gefitinib)、阨洛替尼(erlotinib)及拉帕替尼(lapatinib)的一或多种具有抗性。在一些实施例中，药物-抗性EGFR突变株包括活化性突变(activating mutation)。
[0017] 在另一方面，本发明提供一化合物是包括一不可逆激酶抑制剂，其中，相较于带有活化性突变但不带有药物-抗性突变的EGFR突变株，所述化合物抑制带有活化性突变与药物-抗性突变的药物-抗性EGFR突变株的激酶活性小于10倍的效力不同。在一些实施例中，不同的效力少于约9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍或2倍。
[0018] 在另一方面，本发明提供一化合物是包括不可逆激酶抑制剂，其中所述化合物比吉非替尼、HKI-272及CL387，785更具抑制EGFR T790M激酶活性的效果。举例来说，所述化合物可以抑制EGFR T790M突变株的激酶活性比吉非替尼、HKI-272及CL-387，785效果大于约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍。在一些实施例中，所述化合物也比吉非替尼、HKI-272及CL-387，在抑制野生型EGFR785激酶活性弱。举例来说，所述化合物可以抑制野生型EGFR激酶活性比吉非替尼、HKI-272及CL-387，785效果至少弱约2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或约100倍。
[0019] 抑制剂的药效可以以IC50的值来判定。在实质上相似的条件下判定，所述化合物有较低的IC50数值相较于较高的IC50数值的化合物效果更强。在一些实施例中，实质上相似的条件包括测定表现野生型EGFR的3T3细胞、突变株EGFR，或其中任意所述的
片段中EGFR依赖性
磷酸化的程度。
[0020] 活化性突变是包括但不限制于L858R、G719S、G719C、G719A、L861Q、外显子(exon)19的缺失及/或外显子(exon)20的插入。药物-抗性EGFR突变可能为但不限制于药物的抗药性突变是包括T790M、T854A或0761Y。
[0021] 野生型EGFR及L858R/T790M或外显子(exon)19缺失IT790M EGFR突变株之间的任选地可利用细胞增殖分析而测量，其中细胞增殖完全依赖于激酶活性。举例来说，鼠类Ba/F3细胞以各种适合的野生型EGFR(例如VIII，包括WT EGFR激酶功能域)
转染，或可利用经以L858R/T790M或外显子19缺失/T790M转染的Ba/F3细胞。增殖分析在预设的抑制剂浓度范围内(10uM、3uM、1.1uM、330nM、110nM、33nM、11nM、3nM、1nM)及计算EC50。
[0022] 另一种测量EGFR活性效果的方法是分析EGFR磷酸化。野生型或突变株(L858R/T790M或De119/T790M)EGFR可转染至NIH-3T3细胞(通常不表现内源性EGFR)及能分析抑制剂(用上述的浓度)抑制EGFR磷酸化的能力。细胞暴露于增加浓度的抑制剂6小时及以EGF刺激10分钟。用磷酸根特异性(YI068)EGFR
抗体以西方点墨法分析EGFR磷酸化效果。
[0023] 在某方面，如上所述化合物为式I化合物。
[0024] 在一方面本发明提供一如下式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0025]
[0026] 其中，
[0027] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0028] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0029] X为O、S或NR6；
[0030] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0031] 每个R6独立为H或烷基；
[0032] 环A为芳香基、杂芳基、
碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0033] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0034] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、NR3R4、SR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烷
氧基、烯基、炔基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0035] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、NR3R4、SR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0036] 或RA及RB，连同其中每个所联结的
原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0037] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0038] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6员的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0039] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0040]
[0041] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0042] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0043] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0044] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0045] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0046] m为1、2或3；及
[0047] n为0、1或2；
[0048] 其中若X为S，Z2为CR5，及R5为卤基(hal)，则环A不为R1对位取代的苯基；
[0049] 或若Y为S，及RA为卤基(hal)，则环B不为以R2对位-取代的苯基；
[0050] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0051] 另一方面，本发明提供一医药组成物，包含式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药及药学上可接受载体。
附图说明
[0052] 图1-NSCLC细胞及Ba/F3细胞的生长分析
[0053] A.显示NSCLC细胞株经过增加浓度的
指定药物(范围1nM至3.3μM)治疗及测量治疗72小时后存活细胞。每一细胞株的IC50数值以柱状图表示。B.具有不同EGFR基因型的Ba/F3细胞以增加浓度的指定药物(范围1nM至3.3μM)治疗，及测量治疗72小时后存活细胞。每一细胞株的IC50数值以柱状图表示。Ba/F3细胞对应的EGFR基因型显示于图A。
[0054] 图2-H1975(L858RJT790M)细胞的生长及EGFR讯号的检验A.H1975细胞以指定浓度的不同药剂治疗及测量治疗72小时后存活细胞。存活细胞的百分比以相较于未治疗控制组显示。B.H1975细胞经过WZ3146、WZ4002或CL-287，785增加浓度(范围1nM至3.3μM)治疗16小时。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。WZ3146及WZ4002的EGFR受抑制且因此Akt及ERK 1/2磷酸化相较于CL-387，785显着的低。
[0055] 图3-PC9GR细胞的生长及EGFR讯号的检验(E76A750/T790M)A.PC9GR细胞以指定浓度的不同药剂治疗及测量治疗72小时后存活细胞。存活细胞的百分比以相较于未治疗控制组显示。B.PC9GR细胞经过增加浓度的WZ3146、WZ4002或CL-287，785治疗。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。WZ3146及WZ4002的EGFR受抑制且因此Akt及ERK 1/2磷酸化相较于CL-387，785显着的低浓度。
[0056] 图4-C797S突变的影响对WZ4002效果的影响
[0057] C797S以定点突变(site directed mutagenesis)插入L858R/T790M(顶端)或Del E746_A750/T790M Ba/F3细胞。Ba/F3细胞在不同药物的指定浓度下，及测量治疗72小时后存活细胞。存活细胞的百分比以相较于未治疗控制组显示。导入C797S的突变显着的减弱WZ4002的效果。
[0058] 图5-WZ4002对WT EGFR的抑制效果较现有的EGFR抑制剂来的少。使表现野生型EGFR的NIH3T3细胞在增加浓度的WZ4002、CL-387，785、吉非替尼(gefitinib)或HKI-272暴露16小时。细胞紧接着以EGF(10ng/ml)刺激15分钟后将细胞分解。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。抑制EGFR磷酸化所需的WZ4002浓度相较于CL-387，785、吉非替尼、或HKI-272为显着的高。
[0059] 图6-在L858R/T790M NIH-3T3细胞中EGFR磷酸化的抑制表现野生型EGFR的NIH3T3细胞在增加浓度的WZ4002、CL-387，785、吉非替尼或HKI-272暴露16小时。细胞紧接着以EGF(10ng/ml)刺激15分钟后将细胞分解。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。抑制EGFR磷酸化所需的WZ4002浓度实质上低于CL-387，785或吉非替尼较低，与HKI-272相比稍微低。
[0060] 图7-WZ4002对带有EGFR T790M的基转小鼠的药动评估。基转小鼠以MRI确定罹患肺肿瘤并且具有特定EGFR基因型，以指定浓度的载体单独或含有两种剂量的WZ4002(24小时1次)以经口胃管灌食法(oral gavage)治疗。第二次
给药六小时后，牺牲小鼠，并且将肺脏充分地
切除及分解。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。两基因型皆以25mg/kg剂量治疗导致EGFR、Akt及ERK 1/2磷酸化实质上受到抑制。
[0061] 图8-具有不同EGFR及ERRS2基因型的细胞株的效果
[0062] 图9-若具有不同基因型的Ba/F3细胞株的效果
[0063] 图10-统整所有WZ-4002及WZ-3146范围接合数据。是所选激酶的Kds同样显示于WZ-4002。
[0064] 图11-统整所有对表现稠合激酶的Ba/F3细胞的WZ-4002及WZ-3146的抑制活性稠。
[0065] 图12-WZ4002的药动学参数。
[0066] 图13-一次口服20mg/kg的WZ4002随着时间的平均血浆浓度。所有的PK研究是从二实验动物的平均值。
[0067] 图14-显示目前正在临床开发的不可逆EGFR抑制剂的IC50比率。每个药物，有及无T790M指定基因型(例如，(L858R/T790M)/L858R)Ba/F3细胞中的IC50率。
[0068] 图15-T790M EGFR被WZ3146修饰后的质谱分析。
[0069] (A)完整的无抑制剂接合及抑制剂接合的ESI质谱图谱。左图显示原始荷质比数据及质谱单独显示图谱在右。显示每个蛋白质未修饰及修饰量测及理论分子重量。在转型质谱图谱，波峰对应指定为磷酸化。
[0070] (B)转型的胃蛋白酶消化肽T790M未经
修改(上图)和WZ3146经修改(下图)的ESI-MS图谱。。在908.44及1372.59Da的波峰为指定的消化酶791-798其Cys797经WZ3416化合物共价修饰(下图)。所有的离子的质谱图经共价为单电荷状态。质谱图出现的其它波峰对应于其它消化酶并不显着故本段不讨论之。
[0071] (C)消化酶791-798单独(上图)及经共价修饰(下图)的MS/MS图谱。片段离子b6及b7(蓝色)以及y1y2(绿色)的质谱差异，指示Cys797为T790M中WZ3146共价连接的位置。
[0072] 图16-在H1975细胞中WZ-3146、WZ-4002及CL-387，785的EGFR讯号的比较。细胞经过指定浓度的每种药物治疗6小时。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。
[0073] 图17-EGFR抑制剂在表现L858R/T90M的3T3细胞中抑制EGFR磷酸化的能力比较。细胞株以指定浓度不同药物治疗16小时以EGF(10ng/ml)刺激15分钟后分解。细胞萃取物以免疫点墨检法测特定蛋白质。
[0074] 图18-在以载体及以WZ4002连续两星期治疗delE746_A750/T790M小鼠的WBC(A.)及血清肌酸酐(serum creatinine)(B.)的评估。每个实验条件使用6只小鼠获得数据。并绘制平均值及标准差。
具体实施方式
[0075] 定义
[0076] 下面列出的是本发明用来描述的各种术语的定义。这些定义适用的术语，除非另有限制的独立或群组中一部分特定情况下，所述术语用于整个
说明书及
权利要求。
[0077] 此处所使用的术语″烷基″，是指饱和、直链或支链的
烃基，在某些实施例中，分别含有介于1至6或1至8个碳原子。C1-C6烷基的实例包括，但不仅限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基基团及C1-C8烷基的实例包括，但不仅限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基、辛基基团。
[0078] 此处所使用的术语″烯基″，是指烃基团衍生出的单价基，在某些实施例中，含有介于2至6或2至8个碳原子且至少含有一碳-碳双键。双键可为或可不为与其它的群组连结的位点。烯基包括，但不仅限于，举例来说，乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基及其类似基团。
[0079] 此处所使用的术语″炔基″，是指烃基团衍生出的单价基，在某些实施例中，含有介于2至6或2至8个碳原子且至少含有一碳-碳三键。三键可为或可不为与其它的群组连结的位点。炔基包括，但不仅限于，举例来说，乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基及其类似基团。
[0080] 此处所使用的术语″烷氧基″，是指-O-烷基。
[0081] 此处所使用的术语″芳香基″，是指具有一或多个芳香环，稠环或非稠环的单环或多环的碳环系统，包括，但不仅限于、苯基、
萘基、四氢萘基、二氢茚基(indanyl)、茚基(indenyl)及其类似基团。
[0082] 此处所使用的术语″芳烷基″，是指附接至芳香基的烷基。实例包括，但不仅限于苄基、苯乙基及其类似基团。
[0083] 此处所使用的术语″环烷基″，是指由单环或多环的饱和或部分未饱和的碳环环状化合物衍生的单价基。C3-C8-环烷基的实例包括，但不仅限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基及环辛基，以及C3-C12-环烷基的实例包括，但不仅限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基、及双环[2.2.2]辛基。也须考虑一由单环或多环的碳环环状化合物通过移除单一氢原子具有至少一个碳-碳双键所衍生的单价基。举例来说，所述基包括，但不仅限于，环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基及其类似基团。
[0084] 此处所使用的术语″杂芳基″，是指由具有至少一芳香环的单环或多环(例如，双-、三-或更多)稠合或非稠合，自由或环状系统，具有5到10个环原子，其中，一个环原子是选自S、O及N；0、1或2个环原子独立为选自S、O及N的额外的杂原子；以及其余环原子为碳。杂芳基包括，吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、噻二唑基(thiadiazolyl)、恶二唑基(oxadiazolyl)、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并恶唑基、喹恶啉基及其类似基团。
[0085] 此处所使用的术语″杂芳烷基″，是指附接至杂芳环的烷基残基。实例包括，但不仅限于，吡啶基甲基、嘧啶乙基及其类似基团。
[0086] 此处所使用的术语″杂环烷基″，是指非芳香族的3-、4-、5-、6-或7-元环或双-或三-环基的稠环或非稠环系统，其中，(i)每个环含有独立选自氧、硫及氮的介于1至3个杂原子，(ii)每个5元环有0至1个双键且每个6元环具有0至2个双键，(iii)氮及硫杂原子可任选被氧化，(iv)氮杂原子可任选被季氨化(quaternized)，以及(v)或上述环的任何者可稠环至苯环。典型的杂环烷基包括，但不仅限于，[1，3]二氧戊环(dioxolane)、吡咯啶基、吡唑啉基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、哌啶基、六氢吡嗪基、恶唑啶基、异恶唑啶基、吗啉基、四氢噻唑基、异四氢噻唑基及四氢糠基(tetrahydrofuryl)。
[0087] 此处所使用的术语″烷氨基″，是指有--NH(C1-C12烷基)结构的基，C1-C12烷基如同前述所定义。
[0088] 此处所使用的术语″酰基″，是指自酸类衍生的残基，所述酸类包括，但不仅限于，
羧酸、氨
甲酸、碳酸、磺酸及
亚磷酸。实例包含脂肪族羰基、芳香族羰基、脂肪族磺酰基(aliphatic sulfonyl)、芳香族亚磺酰基(aromatic sulfinyl)、脂肪族亚磺酰氨基(aliphatic sulfinyl)、芳香族
磷酸盐及脂肪族磷酸盐。举例来说，脂肪族羰基包括，但不仅限于，乙酰、丙酰基、2-氟乙酰、丁酰基、2-羟基乙酰及其类似基团。
[0089] 依据本发明，在此所述的任何的芳香基、经取代芳香基、杂芳基及经取代杂芳基，可以为任一芳香基。芳香基团为经取代或未经取代。
[0090] 此处所使用的术语″卤基(hal)″、″卤基(halo)″及″卤素(halogen)″，是指选自氟、氯、溴及碘的原子。
[0091] 正如本文所述，本发明的化合物可任选的被单或多取代，如说明书所述一般实例，或发明的特殊类(particular class)、子类及种。
鉴别此短语″任选取代″，是可与短语″取代或未取代″交替使用。一般情况下，术语″取代″，无论前面是否有″任选″，是指氢自由基在特定结构中可自由被指定取代基置换。除非另有说明，任选取代基团可能在基团中任何可取代位置，及在结构中有多于一个位置可被一或多个特定基团取代，而每个位置的所述取代基可能相同或不同。此处所使用的术语″任选取代″、″任选取代烷基″、″任选取代″、″任选取代烯基″、″任选取代炔基″、″任选取代环烷基″、″任选取代环烯基″、″任选取代芳香基″、″任选取代杂芳基″、″任选取代芳烷基″、″任选取代杂芳烷基”、″任选取代杂环烷基″及其它在本文描述的任选取代基团，是指一或、二、三或更多氢原子上以取代基独立置换的取代或未取代的基团，在此所述的取代包括，但不仅限于：
[0092] -F、-CI、-Br、-I、
[0093] -OH、被保护羟基(protected hydroxy)、
[0094] -NO2、-CN、
[0095] -NH2，被 保 护 氨 基 (protected amino)、-NH-C1-C12- 烷 基、-NH-C2-C12- 烯基、-NH-C2-C12烯基、-NH-C3-C12-环烷基、-NH-芳香基、-NH-杂芳基、-NH-杂环烷基、二烷氨、-二芳氨基、-二杂芳氨基、
[0096] -O-C1-C12-烷基、-O-C2-C12-烯基、-O-C2-C12-烯基、-O-C3-C12-环烷基、-O-芳香基、-O-杂芳基、-O-杂环烷基、
[0097] -C(O)-C)-C12-烷基、-C(O)-C2-C12-烯基、-C(O)-C2-C12-烯基、-C(O)-C3-C12环烷基、-C(O)-芳香基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-杂环烷基、
[0098] -CONH2、-CONH-C1-C12- 烷 基、-CONH-C2-C12- 烯 基、-CONH-C2-C12- 烯 基、CONH-C3-C12-环烷基、-CONH-芳香基、-CONH-杂芳基、-CONH-杂环烷基、
[0099] -OCO2-C1-C12-烷 基、-OCO2-C2-C12- 烯 基、-OCO2-C2-C12- 烯 基、-OCO2-C3-C12 环烷基、-OCO2-芳 香基、-OCO2-杂芳 基、-OCO2- 杂环 烷基、-OCONH2、-OCONHC1-C12- 烷基、-OCONH-C2-C12-烯 基、-OCONH-C2-C12- 烯 基、-OCONH-C3-C12 环 烷 基、-OCONH-芳 香基、-OCONH-杂芳基、-OCONH-杂环烷基、
[0100] -NHC(O)-C1-C12- 烷 基、-NHC(O)-C2-C12- 烯 基、-NHC(O)-C2-C12- 烯 基、NHC(O)-C3-C12- 环 烷 基、-NHC(O)-芳 香 基、-NHC(O)- 杂 芳 基、-NHC(O)- 杂 环 烷基、-NHCO2-C1-C12-烷基、-NHCO2-C2-C12-烯基、-NHCO2-C2-C12-烯基、-NHCO2-C3-C12-环烷基、-NHCO2-芳香基、-NHCO2-杂芳基、-NHCO2杂环烷基、NHC(O)NH2、-NHC(O)NH-C1-C12-烷基、-NHC(O)NH-C2-C12-烯基、-NHC(O)NH-C2-C12-烯基、-NHC(O)NH-C3-C12-环烷基、-NHC(O)NH-芳香基、-NHC(O)NH-杂芳基、NHC(O)NH-杂环烷基、NHC(S)NH2、-NHC(S)NH-C1-C12-烷基、-NHC(S)NH-C2-C12-烯基、-NHC(S)NH-C2-C12-烯基、-NHC(S)NH-C3-C12-环烷基、-NHC(S)NH-芳香基、-NHC(S)NH-杂芳基、-NHC(S)NH-杂环烷基、-NHC(NH)NH2、-NHC(NH)NH-C1-C12-烷基、-NHC(NH)NH-C2-C12- 烯 基、-NHC(NH)NH-C2-C12- 烯 基、-NHC(NH)NH-C3-C12 环 烷基、-NHC(NH)NH-芳香基、-NHC(NH)NH-杂芳基、-NHC(NH)NH杂环烷基、-NHC(NH)-C1-C12-烷基、-NHC(NH)-C2-C12-烯基、-NHC(NH)-C2-C12烯基、-NHC(NH)-C3-C12-环烷基、-NHC(NH)-芳香基、-NHC(NH)-杂芳基、-NHC(NH)杂环烷基、
[0101] -C(NH)NH-C1-C12-烷 基、-C(NH)NH-C2-C12-烯 基、-C(NH)NH-C2-C12烯 基、C(NH)NH-C3-C12-环烷基、-C(NH)NH-芳香基、-C(NH)NH-杂芳基、-C(NH)NH杂环烷基、
[0102] -S(O)-C1-C12- 烷 基、-S(O)-C2-C12- 烯 基、-S(O)-C2-C12- 烯 基，-S(O)-C3-C12环烷基、-S(O)-芳香基、-S(O)-杂芳基、-S(O)-杂环烷基-SO2NH2、-SO2NH-C1C12-烷基、-SO2NH-C2-C12-烯 基、-SO2NH-C2-C12- 烯 基、-SO2NH-C3-C12- 环 烷 基、-SO2NH- 芳 香基、-SO2NH-杂芳基、-SO2NH-杂环烷基、
[0103] -NHSO2-C1-C12-烷基、-NHSO2-C2-C12-烯基、-NHSO2-C2-CJ2-烯基、-NHSO2-C3-C12-环烷基、-NHSO2-芳香基、-NHSO2-杂芳基、-NHSO2-杂环烷基、
[0104] -CH2NH2、-CH2SO2CH3、-芳 香 基、-芳 烷 基、-杂 芳 基、-杂 芳 基 烷 基、杂环烷基、-C3-C12-环烷基、多烷氧烷基、多烷氧基、-甲氧基甲氧基、-甲氧乙氧基、-SH、-S-C1-C12-烷基、-S-C2-C12-烯基、-S-C2-C12-烯基、-S-C3-C12-环烷基、-S-芳香基、-S-杂芳基、-S-杂环烷基或甲硫甲基。
[0105] 应了解，芳香基、杂芳基、烷基、及其类似基团可进一步被取代。
[0106] 术语″癌症″包括，但不仅限于，下述癌症：表皮口的：颊腔、唇、舌、口、咽；心脏的：肉瘤(sarcoma)(血管肉瘤、
纤维肉瘤、横纹肌肉瘤(rhabdomyo sarcoma)、脂肉瘤(lipo sarcoma)、黏液瘤(myxoma)、横纹肌瘤(rhabdomyoma)、纤维瘤(fibroma)、脂瘤(lipoma)及畸胎瘤(teratoma)；肺：支气管癌(鳞状上皮细胞(squamous cell)或表皮的、未分化(undifferentiated)小细胞、未分化大细胞、腺癌(adenocarcinoma))、肺泡的(小支气管(bronchiolar))
恶性肿瘤(carcinoma)、支气管腺瘤(bronchial adenoma)、肉瘤(sarcoma)、淋巴瘤(lymphoma)、软骨
缺陷瘤(chondromatous hamartoma)、中皮瘤(mesothelioma)；消化道：食道(鳞状上皮细胞瘤(squamous cell carcinoma)、喉(larynx)、腺癌(adenocarcinoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、淋巴瘤(lymphoma))、胃癌(癌(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma))、胰脏((
导管腺癌(adenocarcinoma))、胰岛瘤(insulinoma)、升糖素瘤(glucagonoma)、胃泌素瘤(gastrinoma)、类癌瘤(carcinoid tumor)、VIP瘤(vipoma))、小肠(small bowel)或小肠(small intestine)腺癌、淋巴瘤(lymphoma)、类癌瘤(carcinoid tumor)、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、平滑肌瘤(Leiomyoma)、血管瘤(hemangioma)、脂瘤(lipoma)、神经纤维瘤(neurofibroma)、纤维瘤(fibroma))、大肠(large bowel)or大肠(large intestine)(腺癌(adenocarcinoma)、管状腺瘤(tubular adenoma)、绒毛腺瘤(villous adenoma)、错构瘤(hamartoma)、平滑肌瘤(Leiomyoma))、结肠、结肠-直肠、大肠癌(colorectal)，直肠；生殖泌尿道(Genitourinary tract)，肾(腺癌(adenocarcinoma))、肾母细胞瘤(Wilm’s tumor)(肾母细胞瘤(Nephroblastoma))、淋巴瘤(lymphoma)、白血病(leukemia))，膀胱及尿道(鳞状上皮细胞(squamous cell)瘤、转移细胞恶性肿瘤、腺癌(adenocarcinoma)、摄护腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原细胞瘤、畸胎瘤(teratoma)、胚瘤、畸形癌(teratocarcinoma)、绒毛膜恶性肿瘤(carcinoma)、肉瘤(sarcoma)、间质细胞瘤、纤维瘤(fibroma)、纤维腺瘤(fibroadenoma)、腺瘤样肿瘤(adenomatoid tumor)、脂瘤(lipoma)；肝：肝肿瘤(hepatoma)(
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma))、胆管瘤(cholangio carcinoma)、肝母细胞瘤(hepatoblastoma)、血管肉瘤、肝细胞腺瘤(hepatocellular adenoma)、血管瘤(hemangioma)、胆道(biliary passage)；骨：骨原肉瘤(osteogenic sarcoma)(骨肉瘤(osteosarcoma))、纤维肉瘤、恶性纤维组织球瘤(malignant fibrous histiocytoma)、软骨肉瘤、尤因氏瘤(Ewing’s sarcoma)(内皮细胞性骨髓瘤)、恶性淋巴瘤(lymphoma)(网织细胞瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤(malignant giant cell tumor chordoma)、骨软骨瘤(osteochondroma)(骨软骨外生性骨疣(osteocartilaginous exostosis))、良性软骨瘤、软骨胚细胞瘤(blastoma)、软骨粘液纤维瘤、骨瘤(osteoid osteoma)及巨细胞瘤(giant cell tumor)；神经系统：头骨(骨瘤、血管瘤(hemangioma)、肉芽肿(granuloma)、黄瘤(xanthoma)、畸形性骨炎(osteitis deforman))、脑膜(meninges)(脑脊髓膜瘤(meningioma)、脑膜肉瘤(sarcoma)、神经胶质瘤、脑(星细胞瘤(astrocytoma)、髓胚细胞瘤(medulloblastoma)、神经胶质瘤(glioma)、室管膜瘤(ependymoma)、胚细胞瘤(germinoma)(松果体瘤(pinealoma))、多形神经胶胚细胞瘤(glioblastoma multiform)、寡树突神经胶细胞瘤(oligodendro glioma)、神经鞘瘤(schwannoma)、网膜芽细胞瘤(retino blastoma)、先天瘤(congenital tumors))、脊髓(神经纤维瘤(neurofibroma)、脑脊髓膜瘤(meningioma)、神经胶质瘤(glioma)、肉瘤(sarcoma))；妇科：子宫(子宫内膜恶性肿瘤)、子
宫颈(子宫颈恶性肿瘤、潜伏期子宫颈上皮分化不良癌)、卵巢(卵巢恶性肿瘤(浆囊腺癌(serous cystadenocarcinoma)、粘液囊腺癌、未分类恶性肿瘤(carcinoma))、滤泡膜细胞瘤(granulosa-thecal cell tumor)、男性母细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、恶性胚胎瘤(dysgerminoma)、恶性畸胎瘤(malignant teratoma))、阴唇(鳞状上皮细胞瘤、内上皮肿瘤(皮膜瘤)、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、
阴道(透亮细胞(clear cell)瘤、鳞状上皮细胞瘤、葡萄形肉瘤(botryoid sarcoma)(胚瘤横纹肌肉瘤(横纹肌肉瘤(rhabdomyo sarcoma)))，输卵管(恶性肿瘤(carcinoma))、乳房；血液：血(髓白血病(leukemia)(急性及慢性)、急性淋巴胚白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性增生疾病(myeloproliferative disease)、多发性骨髓瘤、骨髓化生不良症候群(Myelodysplastic Syndrome))、何杰金氏病(Hodgkin’s disease)、非-何杰金氏(non-Hodgkin’s)淋巴瘤、发样细胞(hairy cell)(恶性淋巴瘤)；淋巴失调；
皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、
角质棘皮瘤(keratoacanthoma)、黑痣(moles dysplastic nevi)、脂瘤(lipoma)、血管瘤(angioma)、皮肤纤维瘤、疤痕增长症(Keloid)、
牛皮癣(psoriasis)、甲状腺：乳突性甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma)、滤泡性甲状腺癌(follicular thyroid carcinoma)；甲状腺髓质癌(medullary thyroid carcinoma)、未分化甲状腺癌(undifferentiated thyroid cancer)、2A型多发性内分泌瘤病(multiple endocrine neoplasia)、2B型多发性内分泌瘤病、遗传性甲状腺髓质癌(Familial medullary thyroid carcinoma)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、随性嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)；以及肾上腺：神经芽细胞瘤(neuroblastoma)。因此，此处所使用的术语″癌细胞″，包括任何能有效造成指定症状的细胞。
[0107] 此处所使用的术语″EGFR激酶″，是指表皮生长因子受体激酶。
[0108] 此处所使用的术语″HER″或″Her″，是指人类表皮生长因子受体激酶。
[0109] 此处所使用的术语″目标对象″，是指
哺乳动物。此处所述目标对象是指，例如，狗、猫、马、牛、猪、天竺鼠等。最好的目标对象为人。若目标对象为人，此处称目标对象为患者。
[0110] ″治疗(Treat)″、″治疗(treating)″and″治疗(treatment)″，是指减轻或缓和疾病及/或其症状的方法。
[0111] 此处所使用的术语″药学上可接受盐″，是指本发明的化合物在形成过程中的盐类，其中，合乎医学判断的范围、适用于人类组织
接触且对低等动物没有过度的毒性、刺激性、过敏性反应等，且合乎合理的效益/
风险比率。药学上可接受盐为已知的技艺。举例来说，S.M.Berge、et al.在J.Pharmaceutical Sciences、66：1-19(1977)中深入的介绍药学上可接受盐。所述盐类可用于原位本发明的化合物经过最后的分离及纯化，或分别以自由
碱功能与
有机酸反应。举例来说，药学上可接受盐包括，但不仅限于，无毒
酸加成盐是由氨基与
无机酸，如
盐酸、
氢溴酸、磷酸、
硫酸及高氯酸或与有机酸，如
醋酸、马来酸、
酒石酸、
柠檬酸、
琥珀酸或
丙二酸或使用其它方法技艺，如离子交换所成的盐。其它药学上可接受盐包括，但不仅限于，
己二酸盐、海藻酸盐、
抗坏血酸盐、天
门冬氨酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、苯
甲酸盐、硫酸氢盐、
硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐(camphorate)、樟脑磺酸盐(camphorsulfonate)、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、
葡萄糖酸盐、十二烷
硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、
葡萄糖酸盐、脲硫酸盐、庚酸盐、已酸盐、
氢碘酸盐、2-羟乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐盐、尼古丁盐、
硝酸盐、油酸盐、
草酸盐、棕榈酸盐、羟萘酸(pamoate)盐、果冻酸盐(pectinate)盐、
过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、
硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、
对甲苯磺酸盐、十一酸睾
酮盐、戊酸盐等。典型的碱或碱金属包括钠、锂、
钾、
钙、镁等。此外药学上可接受盐包括，当适合时，使用如卤化物、氢氧化物、羧酸、硫酸化物、磷酸化物、硝酸化物、1至6个碳原子的烷基、磺酸化物和芳香磺酸化物的相对离子以形成无毒铵、季铵盐、氨阳离子。
[0112] 此处所使用的术语″药学上可接受酯″，是指通过本发明的方法在活体中
水解所形成化合物的酯，及包括人体容易分解及排出的亲体化合物(parent compound)或其盐类等。适合的酯基团包括，举例来说，那些从药学上可接受脂肪的羧酸，特别是烷酸，烯酸，环烷酸和链烷二酸衍生而来者，其中每个烷基或烯基部分有利地不超过6个碳原子。特别的酯的实例包括，但不仅限于，甲酸酯、醋酸酯、丙酸酯、丁酸酯、
丙烯酸酯及乙基琥珀酸酯。
[0113] 此处所使用的术语″药学上可接受前药″，是指通过本发明的方法所形成的化合物的前药，其中，合乎医学判断的范围、适用于人类组织接触且对低等动物没有过度的毒性、刺激性、过敏性反应等，本发明的化合物合乎合理的效益/风险比率可达到预期的效果，以及在可能的情况下具有两性离子的型态。此所描述的″前药″，是指在活体中可经代谢(如水解)转化提供含有本发明所界定化学式的化合物。前药的各种型态为已知技艺，举例来说，Bundgaard、(ed.)已有描述，，前药的设计，Elsevier(1985)；Widder、et al.(ed.)、酵素学方法、vol.4、Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen、et al.、(ed)。″前药的设计及应用，药物设计及开发的教科书，Chapter 5、113-191(1991)；Bundgaard、et aI.、一般药物输送Reviews、8：1-38(1992)；Bundgaard、1.药物科学、77：285 et seq.(1988)；Higuchi and Stella(eds.)以前药作为新的药物输送系统，American Chemical Society(1975)；and Bernard Testa & Joachim Mayer、″水解药物及前药代谢：化学、生化及酵素学″John Wiley and Sons、Ltd.(2002)。
[0114] 本发明也涵盖一种医药组成物包括，及藉由投以本发明化合物的药学上可接受前药治疗疾病的方法。举例来说，具有自由的氨基、氨基、羟基或羧基团的本发明化合物可转换为前药。前药所包含的化合物，其中，氨基酸残基或二或多个(如二、三或四)氨基酸残基的多肽链与本发明化合物的自由氨基、羟基或羧基共价结合形成酰氨键或酯键。所述氨基酸残基包括，但不仅限于20个自然存在的氨基酸通常以三个字母组成表示且也可包含4-羟补氨酸、羟离氨酸、
锁链素(demosine)、异锁链素(isodemosine)、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、
鸟氨酸及乙砜甲硫氨酸。
也包含前药的额外其它的类型。举例来说，自由的羧基可衍生为酰氨类或烷基酯。Advanced Drug Delivery Reviews、1996、19、1 15中概述，可能衍生出自由的羟基的基团包括，但不仅限于，半琥珀酸、磷酸酯、二甲氨乙酸酯及磷酸甲氧羰基(phosphoryloxymethyloxy)。具有羟基及氨基的氨甲酸酯前药包括，如碳酸酯前药，羟基团的磺酸酯及硫酸酯。如(酰氧基)甲基及(酰氧基)乙醚羟基团衍生，其中所述酰基可为烷基酯，任选取代的基团包括但不仅限于氨及羧官能基，或所述酰基也包含如上所述氨基酸酯。所述前药的类型在J.Med.Chern.1996，39、10有描述。自由氨可衍生自酰氨、磺酰氨或磷酰氨。所有所述前药部分可并入基团包括，但不仅限于氨及羧酸官能基。
[0115] 本发明的取代基组合及多变的想象但仅显示稳定态化合物。在此所述术语″稳定″，是指化合物具有稳定足以在生产制造时保持化合物的完整，且具有足够时间用至如下详述的情况(例如，目标对象给药以治疗或
预防)。
[0116] 本发明的化合物
[0117] 在一方面，本发明提供一式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0118]
[0119] 其中，
[0120] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0121] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0122] X为O、S或NR6；
[0123] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0124] 每个R6独立为H或烷基；
[0125] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0126] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0127] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0128] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0129] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0130] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0131] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0132] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0133]
[0134] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0135] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0136] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0137] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0138] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0139] m为1、2或3；及
[0140] n为0、1或2；
[0141] 其中若X为S，Z2为CR5，及R5为卤基(hal)，则环A不为R1对位取代的苯基；
[0142] 或若Y为S，及RA为卤基(hal)，则环B不为以R2对位-取代的苯基；
[0143] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0144] 在某些实施例中，Z1及Z2为，Z3及Z4为C。
[0145] 在另一实施例中，Z1、Z2及Z4为，Z3为C。
[0146] 在某些实施例中，RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3或NO2；及RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3或NO2。
[0147] 在各种实施例中，RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代。
[0148] 在某些实施例中本发明提供式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0149]
[0150] 其中，
[0151] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0152] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0153] X为O、S或NR6；
[0154] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0155] 每个R6独立为H或烷基；
[0156] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0157] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0158] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0159] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0160] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0161] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、烷基、卤烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0162] 每个R2独立为可任选取代的卤基(hal)、
[0163]
[0164] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0165] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0166] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0167] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；m为1、2或3；及
[0168] n为0、1或2；
[0169] 在各种实施例中Z1及Z2为N，Z3及Z4为C。
[0170] 在更进一步的实施例中，RA为H、Cl、Br或CF3，及RB为H。
[0171] 另外更进一步的实施例中，X为NH。
[0172] 在另一实施例中，Y为O、S、NH或NMe。
[0173] 在某些实施例中，环A及环B为分别独立为苯基或吡啶基。
[0174] 在第一实施例中，本发明提供式II-a化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0175]
[0176] 其中，
[0177] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0178] R6为H或烷基；
[0179] 环A为苯基或吡啶基；
[0180] RA为H、Cl、Br或CF3；每个R1独立为NH(R3)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、SO2R3、烷基、卤烷基、烷氧基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；；
[0181] 每个R2独立为烷基或卤基(hal)，
[0182]
[0183] 每个R3及R4独立为为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0184] R5，每次出现时，独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0185] R5A，每次出现时，独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0186] W，每次出现时，独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0187] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0188] m为1、2或3；及
[0189] n为1或2其中，
[0190] 在一实施例中，每个R1独立为N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、烷基、卤烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代。
[0191] 在另一实施例中，每个R1独立为N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、甲基、三氟甲基、氟甲基、甲氧基、乙氧基、环己基、吡啶基、吡咯啶基、吗啉基、哌啶基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0192] 在另一实施例中，每个R1独立为甲基、氟甲基、甲氧基、
[0193]
[0194]
[0195] 在某些实施例中，每个R2独立为甲基、F、Cl、
[0196]
[0197] 在更进一步的实施例中，每个R2独立为
[0198]
[0199] 在第二实施例中，本发明提供式II-b化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，其中，
[0200]
[0201] 其中，
[0202] X为O、S或NR6；
[0203] Y为不存在、O、S或NR6；
[0204] 每个R6独立为H或烷基；
[0205] 环B为杂环；
[0206] RA为H、Cl、Br或CF3；
[0207] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3或NO2。
[0208] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、SO2R3、烷基、卤烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代；
[0209] 每个R2独立为卤基(hal)，
[0210]
[0211] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0212] 每个R5独立为H、烷基、卤基(hal)或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0213] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0214] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；m为1、2或3；及
[0215] n为1或2。
[0216] 在一实施例中，环B为吲哚啉基、吡咯啶基、吗啉基、哌啶基、六氢吡嗪基或咪唑基。
[0217] 在另一实施例中，每个R1独立为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、烷基、卤烷基、烷氧基、或杂环；每个R3及R4独立为H或烷基，其中可任选取代。
[0218] 在其它实施例中，R1独立为甲基、氟甲基、甲氧基、
[0219]
[0220] 在某些实施例中，R2独立为
[0221]
[0222] 在第三实施例中，本发明提供式II-c化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0223]
[0224] 其中，
[0225] 环A为芳香基或杂芳基；
[0226] X为O、S或NR6；
[0227] Y为不存在、O、S或NR6；
[0228] 每个R6独立为H或烷基；
[0229] R1独立为NH(R3)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、C(O)NH(R3)、SO2R3、烷基、卤烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代；
[0230] 每个R2独立为
[0231]
[0232] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0233] 每个R5独立为H、烷基、卤基(hal)或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0234] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0235] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0236] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0237] m为1、2或3；及
[0238] n为1或2。
[0239] 在某些实施例中，每个R5独立为的甲基、氟甲基、甲氧基、
[0240]
[0241] 在各种实施例中，每个R2独立为的
[0242]
[0243] 在第四实施例中，本发明提供式Ⅲ化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0244]
[0245] 其中，
[0246] Z5为N或CH；
[0247] Z6为N或CH，其中，Z5与Z6的其中一个为N；
[0248] X为O、S或NR6；
[0249] Y为不存在、O、S或NR6；
[0250] 每个R6独立为H或烷基；
[0251] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0252] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0253] 每个R1独立为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代；
[0254] 每个R2独立为
[0255]
[0256] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0257] 每个R5独立为H、烷基、卤基(hal)或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0258] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0259] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0260] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0261] R8为H、烷基或芳香基，其中每个可任选取代；
[0262] m为1、2或3；及
[0263] n为1或2。
[0264] 在某些实施例中，Z5为N及Z6为CH。
[0265] 在更进一步的实施例中，X为NR6，Y为O、NR6或不存在。
[0266] 在其它实施例中，环A为芳香基、碳环或杂环。在更进一步的实施例中，环A为苯基、萘基、哌啶基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基，其中每个可任选取代。
[0267] 在另一实施例中，环B为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环B为苯基、萘基、哌啶基、吡咯啶基、吗啉基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0268] 在其它实施例中，每个R1独立为的甲基、甲氧基、
[0269]
[0270] 仍有其它的实施例中，每个R2独立为为
[0271]
[0272] 在另外一些实施例中，R8为H、甲基、异丙基或苯基，其中每个可任选取代。
[0273] 在某些实施例中，Z5为CH及Z6为N。
[0274] 在另一实施例中，X为NR6；及Y为O、NR6或不存在。
[0275] 在其它实施例中，环A为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环A为苯基、萘基或哌啶基，其中每个可任选取代。
[0276] 仍有其它的实施例中，环B为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环B为苯基、萘基、哌啶基、吡咯啶基、吗啉基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0277] 在其它实施例中，R1为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代。
[0278] 在更进一步的实施例中R1独立为的甲基、甲氧基、
[0279]
[0280] 在另一实施例中，每个R2独立为为卤基、
[0281]
[0282] 在各种实施例中，R8为H、甲基、异丙基或苯基，其中每个可任选取代。
[0283] 在第五实施例中，本发明提供式IV化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0284]
[0285] 其中，
[0286] Y为O、S、及NR6；
[0287] 每个R6独立为H或烷基；
[0288] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0289] 环D为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0290] 每个R2独立为
[0291]
[0292] 每个R7独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0293] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0294] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0295] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0296] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0297] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0298] n为1或2；以及
[0299] q为0、1或2。
[0300] 在某些实施例中，Y为O。
[0301] 在另一实施例中，环B为芳香基。在更进一步的实施例中，环B为苯基或萘基，其中每个可任选取代。
[0302] 在其它实施例中，环D为芳香基或杂芳基。在更进一步的实施例中，环D为苯基、萘基、吡啶基或喹啉基，其中每个可任选取代。
[0303] 在某些实施例中，每个R2独立为为
[0304]
[0305] 更佳为
[0306] 在其它实施例中，R7为烷基或烷氧基。
[0307] 在第六实施例中，本发明提供式V化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0308]
[0309] 其中，
[0310] Z1为N或CR6；
[0311] X为O、S或NR6；
[0312] Y为O、S或NR6；
[0313] 每个R6独立为H或可任选取代的烷基；
[0314] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0315] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0316] 每个R1独立为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代；
[0317] 每个R2独立为卤基，
[0318]
[0319] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0320] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可进一步取代；
[0321] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0322] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0323] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0324] R9为H或可任选取代的芳香基；
[0325] m为1、2或3；及
[0326] n为1或2；
[0327] 其中 的其中一个不存在。
[0328] 在某些实施例中，环A为芳香基或碳环。在更进一步的实施例中，环A为苯基、萘基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基，其中每个可任选取代。
[0329] 在另一实施例中，环B为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环B为苯基、萘基、哌啶基、吡咯啶基、吗啉基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0330] 在其它实施例中，每个R1独立为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代。在更进一步的实施例中，R1独立独立为的甲基、甲氧基、[0331]
[0332] 在某些实施例中，R2独立为
[0333]
[0334] 在第七实施例中，本发明提供式VI化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0335]
[0336] 其中，
[0337] Z3为N或CRB；
[0338] Z4为N或CRA；其中Z3或Z4的其中一个为N；
[0339] X为O、S或NR6；
[0340] Y为O、S或NR6；
[0341] 每个R6独立为H或烷基；
[0342] RA为H、Cl、Br或CF3；
[0343] RB为H、卤基、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3或NO2；
[0344] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0345] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0346] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0347] 每个R2独立为卤基，
[0348]
[0349] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0350] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0351] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0352] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0353] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0354] m为1、2或3；及
[0355] n为1或2。
[0356] 在某些实施例中，X为X为O或NR6；及Y为O或NR6。
[0357] 在各种实施例中，环A为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环A为苯基、萘基、哌啶基、吡咯啶基、吗啉基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可进一步取代。
[0358] 在其它实施例中，环B为芳香基或杂环。在更进一步的实施例中，环B为苯基、萘基、哌啶基、吡咯啶基、吗啉基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0359] 在其它实施例中，每个R1独立为N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、C(O)R3、烷基、烷氧基或杂环，其中每个可任选取代。在更进一步的实施例中，每个R1独立为甲基、甲氧基、[0360]
[0361] 在各种实施例中，每个R2独立为卤基、
[0362]
[0363] 在某些实施例中，每个RB为H、卤基、OH、NH2、NHR3或卤烷基。
[0364] 仍有其它的实施例中，RA为H或Cl。
[0365] 在第八实施例中，本发明提供式VII化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0366]
[0367] 其中，
[0368] Y为O或NR6；
[0369] R6为H或烷基；
[0370] 环A为苯基或吡啶基；
[0371] RA为H、Cl、Br或CF3；
[0372] 每个R1独立为N(R3)CO(R4)、C(O)NH(R3)、烷基、卤烷基、烷氧基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0373] 每个R2独立为烷基、卤基、
[0374]
[0375] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0376] R5，每次出现时，独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0377] R5A，每次出现时，独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0378] W，每次出现时，独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0379] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0380] m为1、2或3；及
[0381] n为0、1或2。
[0382] 在某些实施例中，每个R1独立为甲基、三氟甲基、氟甲基、甲氧基、乙氧基、环己基、吡啶基、吡咯啶基、吗啉基、哌啶基、六氢吡嗪基或咪唑基，其中每个可任选取代。
[0383] 在各种实施例中，每个R1独立为甲基、氟甲基、甲氧基、
[0384]
[0385] 在其它实施例中，每个R2独立为
[0386]
[0387] 在另一方面，本发明提供一可共价修饰EGFR中的第797个半胱氨酸797的化合物，其中所述化合物相较于野生型EGFR显示L858R/T790M或Del/T790M EGFR的抑制更大。在某些实施例中，现在所述的发明是针对一化合物，所述化合物相较于野生型EGFR显示在L858R/T790M或Del/T790M EGFR大于至少2倍、3倍、5倍、10倍、25倍、50倍或100倍的抑制效果。在某些实施例中，现在所述的发明是针对一化合物，所述化合物较于野生型EGFR显示在L858R/T790M或Del/T790M EGFR至少100倍的抑制效果。
[0388] 在某些实施例中，所述化合物为式I的化合物。
[0389] 在某些实施例中，本发明提供一化合物是选自表1、表2、表3、表4、表5或表6。本发明典型的化合物包括，但不仅限于表1至6所述化合物。
[0390] 表1
[0391]
[0392]
[0393]
[0394]
[0395]
[0396] 表2
[0397]
[0398]
[0399]
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404]
[0405] 表3
[0406]
[0407]
[0408] 表4
[0409]
[0410]
[0411] 表5
[0412]
[0413]
[0414]
[0415]
[0416]
[0417]
[0418] 表6
[0419]
[0420]
[0421]
[0422]
[0423]
[0424]
[0425]
[0426]
[0427]
[0428] 本发明也提供一种医药组成物，包含根据权利要求1所述化合物其药学上可接受盐、酯或前药，与药学上可接受的载体。
[0429] 在另一方面，本发明提供一
试剂盒，是包括选自一或多种式I化合物的可抑制EGFR活性的化合物，及用于
癌症治疗的用法说明。
[0430] 在另一方面，本发明提供一方法，所述方法为合成式I化合物的方法。
[0431] 本发明所述的化合物的合成，可见于下述实例。
[0432] 另一实施方式为一合成任何含本文所述化学式的化合物的方法，其中是使用任一或结合本文所界定的反应方式。所述方法包括利用本文所界定的一或多种中间产物或化学试剂。
[0433] 在另一方面，本文所述的化学式包含其同位素标定化合物。如上所述化合物可能3 2 14 13 18 35 32 125 131
有或没有
放射性的一或多个放射性同位素(如 H、H、C、C、F、S、P、I及 I)导入所述化合物。所述化合物在药物代谢研究及诊断是有用的，进而应用于治疗。
[0434] 本发明化合物可通过将所述化合物的自由碱形式与药学上可接受无机或有机酸化合物反应制备为药学上可接受酸加成盐。此外，本发明化合物的药学上可接受碱加成盐类，可通过将所述化合物的自由酸形式与药学上可接受无机或有机碱反应制备。
[0435] 此外，本发明化合物的盐形式可利用起始材料的或中间产物的盐类制备。
[0436] 本发明化合物的自由酸或自由碱形式可分别由相对应的碱加成盐或酸加成盐形式制备。举例来说，在以适合的碱(如
氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)进行治疗时，本发明化合物酸加成盐形式可转换为对应自由碱。在以适合的酸(如氢氯酸等)进行治疗时，本发明化合物碱加成盐形式可转换为对应自由酸。
[0437] 本发明化合物的前药衍
生物可通过该领域技艺人员及具通常知识者皆知的方法(更深入详见Saulnier et al.、(1994)，
微生物及药物化学短篇，4卷、p.1985)制备。举例来说，合适的前药可通过将非-衍生性本发明自化合物，与适合的氨甲酸化(carbamylating)试剂(如，1，1-酰氧基烷碳酸氯、碳酸对-苯氨酯及其类似)反应制备。
[0438] 本发明化合物的保护性衍生物可通过该领域技艺人员及具通常知识者皆知的方法制备。应用于保护基团及其转移的技艺皆可见于下文，T.W.Greene、″保护
有机化学基团″、3版、John Wiley and Sons、Inc.、1999。
[0439] 本发明化合物可方便的制备或在本发明的
制造过程中形成为以
溶剂化物(如，水合物)。本发明化合物的水合物可以方便地利用有机化合物溶剂如戴奥辛、四氢呋喃或甲醇，自水性/
有机溶剂混合物中再结晶而制备。
[0440] 所述方法中所使用的酸及碱为已知于此项技艺领域。酸催化剂是任何酸性化学物质，其可本质为无机的(如，氢氯酸、硫酸、硝酸、三氯化
铝)或有机化合物(如，樟脑磺酸、对甲苯磺酸、醋酸、三氟甲磺酸镱(ytterbium triflate))。酸无论是催化量或化学计量皆有用于促进化学反应。碱为任何碱性化学物质，其可本质为无机的(如，
碳酸氢钠、氢氧化钾)或有机的(如，三乙氨、吡啶)。碱无论是催化量或化学计量皆有用于促进化学反应。
[0441] 此外，有些本发明化合物具有一或多个双键，或具有一或多个不对称中心。所述化合物可能为可以绝对立体化学术语定义的消旋物、消旋混合物、单镜像异构物、个别的非镜像异构物、非镜像异构物混合物，及顺-或反-或E-或Z-双异构性型态，及其它立体异构的型态，如(R)-、(S)-或(D)-、(L)-氨基酸。如此揭示的所有化合物的异构形式皆包括于本发明。光学异构物可由其个别的光学活性前驱物通过上述方法或通过解析消旋混合物制得。解析可于解析剂存在下通过层析或通过重复结晶获通过已知于此项技艺领域的技艺组合而进行。更进一步细节有关事项显示于Jacques、et al.，镜像异构物、消旋物及解析(John Wiley & Sons、1981)。本发明化合物可表示多种互变异构形式，在这种情况下，本发明明确包括此所描述(如，烷基化环状结构可能有多端烷基化，本发明明确的包括所有如此反应的产物)的互变异构形式。在本文所述化合物包含烯烃双键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，化合物包括E及Z几何异构物。同样的，所有互变异构形式也包括在内。除非说明书中述明否则本文所述出现的碳-碳双键的配置，仅为了方便而非一个指定的配置，因此在此描述的任一碳-碳双键可能为顺、反式或以任何比例混合。如此揭示的所有化合物的异构形式皆包括于本发明。如此揭示的所有化合物的晶体形式皆包括于本发明。
[0442] 所述合成化合物可由反应混合物分离以及通过例如管柱层析、高压液相层析或再结晶进一步纯化。可为此项技艺领域者所知，更进一步合成所述含式一化合物的方法为该技艺领域人员所知方法。此外，各种合成步骤也可依替代顺序或次序进行以提供所描述的化合物。此外，溶剂、
温度、反应持续时间等，依本说明所描述的仅于一普通技艺可得知反应条件的变化可制造本发明所述桥接的大环产物。本文所述用于合成本文所述化合物的合成化学转换型态及保护基团方法学(保护及非保护)为皆知技艺包括，举例来说，那些描述于R.Larock，全方位有机化合物转换型态，VCH Publishers(1989)，T.W.Greene及P.G.M.Wuts、有机化合物合成中的保护基团、2d.Ed.、John Wiley and Sons(1991)；L.Fieser and M.Fieser、Fieser及有机化合物合成的Fieser’s试剂、John Wiley and Sons(1994)；and L.Paquette、ed.、有机化合物合成药剂百科全书、John Wiley and Sons(1995)，及其而后的版本。
[0443] 本发明化合物可经由任何合成方法添加各种官能基做修饰，以提高本文所定义的生物学特性。此种修饰为已知的技艺且包括增加特定生物系统的生物穿透性(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)、增加口服可利用性、增加
溶解度以允许注射给药、改善代谢及排泄率。
[0444] 本发明化合物于本文通过其化学结构及/或化学命名定义。若一个化合物被称以化学结构及化学名称，化学结构和化学名称相矛盾，则以化学结构定义所述化合物。
[0445] 上列复述任何定义化学基团包括上列复述的各种单一或上述基团的组合。在此描述的各种复述的实施例是包括，实施例为单一实施力或结合其它实施例或部分的其组合。
[0446] 本发明的方法
[0447] 在另一方面，本发明提供一种抑制激酶的方法，包括使激酶接触式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0448]
[0449] 其中，
[0450] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0451] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0452] X为O、S或NR6；
[0453] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0454] 每个R6独立为H或烷基；
[0455] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0456] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0457] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0458] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0459] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0460] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0461] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0462] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0463]
[0464] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0465] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0466] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0467] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0468] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0469] m为1、2或3；及
[0470] n为0、1或2；
[0471] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0472] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0473] 在一实施例中，所述激酶是包括半胱氨酸残基。
[0474] 在更进一步的实施例中，所述半胱氨酸残基在EGFR的位置是位于或接近Cys 797的相对位置，包括Jak3、Rlk、Bmx、Btk、HER2(ErbB2)、HER4(ErbB4)、Itk、Tec及Txk的位置。
[0475] 在另一方面，本发明提供于目标对象抑制激酶的方法，包括给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0476]
[0477] 其中，
[0478] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0479] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0480] X为O、S或NR6；
[0481] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0482] 每个R6独立为H或烷基；
[0483] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0484] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0485] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0486] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0487] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0488] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0489] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0490] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0491]
[0492] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0493] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0494] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0495] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0496] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0497] m为1、2或3；及
[0498] n为0、1或2；
[0499] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0500] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0501] 在一实施例中，所述激酶是包括半胱氨酸残基。
[0502] 在更进一步的实施例中，所述半胱氨酸残基在EGFR的位置是位于或接近Cys 797的相对位置，包括Jak3、Rlk、Bmx、Btk、HER2(ErbB2)、HER4(ErbB4)、Itk、Tec及Txk的位置。
[0503] 在另一方面，本发明提供于在目标对象抑制表皮生长因子受体(EGFR)的方法，包括给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0504]
[0505] 其中，
[0506] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0507] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0508] X为O、S或NR6；
[0509] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0510] 每个R6独立为H或烷基；
[0511] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0512] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0513] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0514] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0515] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0516] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0517] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0518] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0519]
[0520] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0521] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0522] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0523] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0524] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0525] m为1、2或3；及
[0526] n为0、1或2；
[0527] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0528] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。
[0529] 在一实施例中，所述EGFR为Her-激酶。
[0530] 还有另一方面，本发明提供于目标对象治疗疾病的方法，包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0531]
[0532] 其中，
[0533] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0534] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0535] X为O、S或NR6；
[0536] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0537] 每个R6独立为H或烷基；
[0538] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0539] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0540] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0541] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0542] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0543] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0544] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0545] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0546]
[0547] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0548] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0549] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0550] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0551] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0552] m为1、2或3；及
[0553] n为0、1或2；
[0554] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0555] 在某些实施例中，本发明提供一如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0556] 在一实施例中，所述疾病是由激酶所介导。
[0557] 在一实施例中，所述激酶是包括半胱氨酸残基。
[0558] 在更进一步的实施例中，所述半胱氨酸残基在EGFR的位置是位于或接近Cys 797的相对位置，包括Jak3、Blk、Bmx、Btk、HER2(ErbB2)、HER4(ErbB4)、Itk、Tec及Txk的位置。
[0559] 在其它实施例中，所述疾病是由EGFR介导。在更进一步的实施例中，所述EGFR为Her-激酶。
[0560] 在更进一步的实施例中，所述疾病是由HER1、HER2或HER4所介导。
[0561] 在某些实施例中，所述疾病为癌症或增殖疾病。
[0562] 在更进一步的实施例中，所述疾病为肺癌、结肠癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳癌、胰腺癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、头颈鳞状上皮细胞恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤及固态肿瘤。
[0563] 在其它实施例中，所述疾病为发炎、关节炎、类风湿性关节炎、僵直性脊椎神经炎、痛风性关节炎、骨关节炎、青年期类风湿性关节炎及其它关节
炎症状、全身性红斑性狼疮(Systemic Lupus Erythematosus、SLE)(SLE)，皮肤相关症状，牛皮癣、湿疹、烧伤、皮肤炎、神经发炎、过敏症，
疼痛，神经病性疼痛、发烧；肺病，肺炎、成人呼吸窘迫征候群、肺类肉瘤病、气喘、
硅肺病、慢性肺发炎性疾病及慢性阻塞性肺病(COPD)、心
血管疾病、动脉硬化、心肌梗塞(包括心肌梗塞后适应症)、血栓症、郁血性心衰竭、心再灌流伤害、以及与
高血压相关的并发症及/或如心脏衰竭血管器官受损、
再狭窄(restenosis)、心肌症，中风包括缺血性及出血性中风、再灌流伤害、肾再灌流伤害，
局部缺血包括中风及脑局部缺血及局部缺血导致心脏的/
冠状动脉绕道、神经退化性疾病，肝病及肾炎、肠胃疾病、发炎性肠病、克隆氏病、胃炎、剌激性肠症候群、溃疡性结肠炎、溃疡病、胃溃疡、病毒及细菌性感染、败血病、败血性休克、革兰氏阴性链球菌性脓毒病、疟疾、脑膜炎、HIV感染、伺机性感染、对感染或恶性肿瘤(malignancy)的次发性恶病质(cachexia)、对后天免疫不全症候群(AIDS)的次发性恶病质、AIDS、ARC(AIDS相关复合症)、肺炎、疱疹病毒、由于感染所引起的肌痛、流感、自体免疫疾病、移
植物对抗宿主疾病及异体移植体排斥、骨蚀疾病的治疗、骨质疏松症、多发性硬化症、癌症、白血病、淋巴瘤、大肠直肠癌、脑癌、骨癌、上皮细胞-衍生赘瘤(上皮肿瘤)、基底细胞癌(基细胞肿瘤)、腺癌、胃肠道癌症、唇癌、
口腔癌、食道癌、小肠癌、胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、胰脏癌、卵巢癌、子
宫颈癌、肺癌、乳癌、皮肤癌、鳞状细胞及/或基细胞癌、前列腺癌、肾细胞癌、及其它已知侵袭全身上皮细胞的癌症、慢性骨髓白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)及急性前髓细胞白血病(APL)、血管新生包括赘瘤形成、转移、中枢神经系统失调、具有发炎或细胞凋亡组成的中枢神经系统失调、阿兹海默症、帕金森氏症、亨汀顿氏舞蹈症、缩性脊髓侧索硬化症、脊髓损伤，以及周围神经系病或B细胞淋巴瘤。
[0564] 在更进一步的实施例中，所述疾病为发炎、关节炎、类风湿性关节炎、僵直性脊椎神经炎、痛风性关节炎、骨关节炎、青年期类风湿性关节炎、及其它关节炎症状、全身性红斑性狼疮(SLE)、皮肤相关症状、牛皮癣、湿疹、皮肤炎、疼痛、肺病、肺炎、成人急性呼吸窘迫症候群、肺类肉瘤病、气喘、慢性肺发炎性疾病及慢性阻塞性肺疾病(COPD)、心血管疾病、动脉硬化、心肌梗塞(包括心肌梗塞后适应症)、郁血性心脏衰竭.、心再灌流伤害、发炎性肠病、克隆氏病、胃炎、剌激性肠症候群、白血病、淋巴瘤。
[0565] 在另一方面，本发明提供在目标对象治疗激酶介导的失调的方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0566]
[0567] 其中，
[0568] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0569] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0570] X为O、S或NR6；
[0571] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0572] 每个R6独立为H或烷基；
[0573] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0574] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0575] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0576] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0577] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0578] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0579] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0580] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0581]
[0582] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0583] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0584] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0585] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0586] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0587] m为1、2或3；及
[0588] n为0、1或2；
[0589] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0590] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0591] 在一实施例中，所述化合物为HER1、HER2或HER4的抑制剂。
[0592] 在另一实施例中，所述目标对象给药额外的治疗剂。
[0593] 在其它实施例中，所述化合物及额外的治疗剂是同时或依序给药。
[0594] 在另一方面，本发明提供于目标对象治疗疾病的方法，其中所述疾病为对EGFR标靶疗法具抗性，包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0595]
[0596] 其中，
[0597] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0598] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0599] X为O、S或NR6；
[0600] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0601] 每个R6独立为H或烷基；
[0602] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0603] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0604] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0605] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0606] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0607] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0608] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0609] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0610]
[0611] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0612] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0613] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0614] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0615] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0616] m为1、2或3；及
[0617] n为0、1或2；
[0618] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0619] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0620] 在一实施例中，所述EGFR标靶疗法包括以吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、XL-647、HKI-272、BIBW2992、AV-412、C1-I033、PF00299804、BMS 690514、西妥昔单抗、帕尼单抗或马妥珠单抗治疗。
[0621] 在另一实施例中，所述疾病包括EGFR突变。
[0622] 在更进一步的实施例中，所述EGFR突变为EGFR T790M、T854A或0761Y抗性突变。
[0623] 在另一实施例中，所述疾病为癌症。在更进一步的实施例中，所述疾病为肺癌、结肠癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌(gastric cancer)、乳癌、胰腺癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、头颈鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或固态肿瘤。
[0624] 在另一方面，本发明提供于目标对象治疗癌症的方法，其中所述癌症包括EGFR活化的肿瘤，所述治疗方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0625]
[0626] 其中，
[0627] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0628] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0629] X为O、S或NR6；
[0630] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0631] 每个R6独立为H或烷基；
[0632] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0633] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0634] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0635] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0636] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0637] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0638] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0639] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0640]
[0641] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0642] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0643] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0644] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0645] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0646] m为1、2或3；及
[0647] n为0、1或2；
[0648] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0649] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0650] 在某些实施例中，所述EGFR活化是选自EGFR的突变，EGFR扩增、EGFR表现及EGFR配体介导活化。
[0651] 在更进一步的实施例中，所述EGFR突变是位于G719S、G719C、G719A、L858R、L861Q、外显子19的缺失突变或外显子20的插入突变。
[0652] 在某些实施例中，所述疾病为肺癌、结肠癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳癌、胰腺癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、鳞状上皮细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或固态肿瘤。
[0653] 在另一方面，所述发明提供于目标对象治疗癌症的方法，其中所述目标对象被诊断为需要EGFR抑制以治疗癌症，所述治疗方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0654]
[0655] 其中，
[0656] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0657] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0658] X为O、S或NR6；
[0659] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0660] 每个R6独立为H或烷基；
[0661] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0662] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0663] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0664] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0665] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0666] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0667] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0668] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0669]
[0670] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0671] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0672] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0673] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0674] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0675] m为1、2或3；及
[0676] n为0、1或2；
[0677] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0678] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0679] 在某些实施例中，所述目标对象经诊断为必需对吉非替尼或厄洛替尼具有抗性的EGFR抑制剂。在某些实施例中，需执行诊断测试用来判断目标对象是否于EGFR具有活化性突变。在某些实施例中，执行诊断测试以确定目标对象是否具有带活化性突变与药物抗性突变的EGFR。活化性突变包括但不限于L858R、G719S、G7I9C、G719A、L861Q、外显子19缺失及/或外显子20插入。药物抗性EGFR突变可以无限制的抗药性突变，包括T790M、T854A或D761Y。所述诊断测试可包括定序、焦磷酸测序、PCR、RT-PCR或该领域技艺人员皆知可以检测核苷酸序列的技艺。
[0680] 在另一方面，所述发明提供于目标对象治疗癌症的方法，其中所述癌症包括ERBB2活化肿瘤，所述治疗方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0681]
[0682] 其中，
[0683] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0684] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0685] X为O、S或NR6；
[0686] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0687] 每个R6独立为H或烷基；
[0688] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0689] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0690] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0691] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0692] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0693] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0694] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0695] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0696]
[0697] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0698] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0699] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0700] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0701] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0702] m为1、2或3；及
[0703] n为0、1或2；
[0704] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0705] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0706] 在某些实施例中，所述ERBB2活化是选自下列ERBB2突变，ERBB2表现及ERBB2扩增。
[0707] 在更进一步的实施例中，所述突变为ERBB2外显子20的突变。
[0708] 在更进一步的实施例中，所述疾病为肺癌、结肠癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳癌、胰腺癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、头颈鳞状上皮细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或固态肿瘤。
[0709] 在另一方面，所述发明提供于目标对象治疗癌症的方法，其中所述目标对象被诊断为需要ERBB2抑制以治疗癌症，所述治疗方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，
[0710]
[0711] 其中，
[0712] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0713] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0714] X为O、S或NR6；
[0715] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0716] 每个R6独立为H或烷基；
[0717] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0718] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0719] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0720] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0721] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0722] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0723] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0724] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0725]
[0726] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0727] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0728] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0729] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0730] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0731] m为1、2或3；及
[0732] n为0、1或2；
[0733] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0734] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0735] 本发明也提供一预防疾病对吉非替尼(gefitinib)或阨洛替尼(erlotinib)产生抗性的方法，所述方法包括向目标对象给药式I化合物或其药学上可接受盐、酯或前药，[0736]
[0737] 其中，
[0738] Z1及Z2分别独立为N或CR5；Z3及Z4分别独立为N或C，
[0739] 其中RA及RB在Z3或Z4为N时不存在，其中，Z1、Z2、Z3或Z4的至少一个为N；
[0740] X为O、S或NR6；
[0741] Y为不存在、CO、O、S或NR6；
[0742] 每个R6独立为H或烷基；
[0743] 环A为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0744] 环B为芳香基、杂芳基、碳环或杂环；或稠环的8-14元双环芳香基、杂芳基、碳环或杂环；
[0745] RA为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0746] RB为H、卤基(hal)、OH、NH2、NHR3、卤烷基、CN、N3、NO2；烷基、烯基、芳香基、芳烷基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0747] 或RA及RB，连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环或杂环，其中每个可任选取代；
[0748] 每个R1独立为NH(R3)、N(R3)(R4)、N(R3)CO(R4)、N(R3)SO2(R4)、N(R3)SO(R4)、N(R3)SO(R4)、CO2H、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)NH2、C(O)NH(R3)、C(O)N(R3)(R4)、SO2R3、SOR3、SR3、SO2NR3R4、SONR3R4、OR3、氰基、硝基、卤基、烷基、烯基、炔基、卤烷基、芳香基、芳烷基、烷氧基、杂芳基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0749] 或若m为2或3，则至少两个R1可一起与每个所连结的原子形成5或6元的碳环、杂环、芳香基或杂芳基，其中每个可任选取代；
[0750] 每个R2独立为可任选取代的烷基、卤基(hal)、
[0751]
[0752] 每个R3及R4独立为H、烷基、烯基、乙烯基、杂环或碳环，其中每个可任选取代；
[0753] 每个R5独立为H、烷基、卤基或卤烷基，其中每个可任选取代；
[0754] 每个R5A独立为卤基或OS(O)pR’，其中，p为0、1或2及R’为烷基或芳香基；
[0755] 每个W独立为不存在、CH2、CH2CH2、(CH2)3、(CH2)4、O、S或NR3；
[0756] 环C为具有1、2或3个氮原子的5-6元杂环或杂芳基；
[0757] m为1、2或3；及
[0758] n为0、1或2；
[0759] 其中，若RA及RB连同其中每个所联结的原子形成稠环芳香基、杂芳基、碳环、杂环，则 可不存在。
[0760] 在某些实施例中，本发明提供如上所述的方法，其中所述化合物为式II-a、II-b、II-c、III、IV、V、VI或VII的化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法，其中所述化合物为选自表1-6所述化合物。在某些实施例中，本发明提供所述的方法其中，所述化合物为WZ3146、WZ4002或WZ8040。
[0761] 在某些实施例中，所述疾病为肺癌、结肠癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、皮肤癌、骨癌、胃癌、乳癌、胰腺癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、头颈鳞状上皮细胞瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或固态肿瘤。
[0762] 在某些实施例中，本发明提供治疗本文所述任何失调疾病的方法，其中所述目标对象为人类。
[0763] 作为Her激酶抑制剂，本发明化合物及组成物对于治疗或减轻疾病、症状或失调的严重程度特别有用，所述疾病为蛋白激酶牵连引起的症状、控制或失调。在一方面，本发明提供治疗及减轻、症状或失调的严重程度的方法，所述疾病受蛋白激酶牵连的疾病状态。在另一方面，本发明提供一种用于治疗及减轻激酶疾病、症状或失调的严重程度的方法，所述酵素活性的抑制牵连疾病的治疗。在另一方面，本发明提供一种以与蛋白激酶结合以抑制酵素活性的化合物治疗或减轻疾病、症状或失调的严重程度的方法。再另一方面，为利用蛋白激酶抑制剂抑制酵素活性的治疗或减轻激酶疾病、症状或失调的严重程度的方法。
[0764] 在一些实施例中，所述方法适用于治疗或预防选自下列的病情，自体免疫疾病、发炎疾病、增生性及高增生性疾病、免疫-介导疾病、骨疾病、代谢疾病、神经及神经退化性疾病、心血管疾病、费洛蒙相关疾病、过敏、气喘及阿兹海默症。在其它实施例中，所述病情是选自增生性疾病及神经退化性疾病。
[0765] 一方面本发明提供可用于治疗疾病、失调及症状的化合物，所述疾病特征为细胞过度或异常增殖。所述疾病包括，增生或高度增生疾病及神经退化性疾病。举例来说，增生性及高增生性疾病包括，而非限制于癌症。所述术语″癌症″包括，但不仅限于下述癌症：乳房；卵巢；子宫颈；摄护腺；睪丸、生殖泌尿道；食道；喉、神经胶母细胞瘤；神经芽细胞瘤；胃；皮肤、角质棘皮瘤(keratoacanthoma)；肺、表皮瘤、大细胞恶性肿瘤、小细胞恶性肿瘤、肺腺癌；骨；结肠；大肠；腺瘤；胰脏，腺癌；甲状腺、滤泡肿瘤、未分化恶性肿瘤(carcinoma)、
乳头状恶性肿瘤；精原细胞瘤；黑色素瘤；肉瘤；膀胱瘤；肝肿瘤及胆道；肾瘤；髓失调；淋巴失调、何杰金氏淋巴瘤、发样细胞白血病；颊腔及咽(口的)、唇、舌、口、咽；小肠；结肠直肠、大肠、直肠、脑及中枢神经系统；慢性髓白血病(CML)及白血病(leukemia)。所述术语″癌症″是包括，但不仅限于下述癌症：骨髓癌、淋巴瘤或选自下列癌症，胃、肾或及下述癌症：头及颈、口咽(oropharangeal)、非-小细胞肺癌(NSCLC)、子宫内膜、肝瘤、非何杰金氏淋巴瘤及肺。
[0766] 所述术语″癌症″是指任何因增生或恶性肿瘤细胞导致的癌症，如肿瘤、瘤、恶性肿瘤、肉瘤、白血病、淋巴瘤及其类似病症。举例来说，癌包括，但不仅限于中皮瘤、白血病及淋巴瘤，例如皮肤的T-细胞淋巴瘤(CTCL)、非皮肤的末梢的T细胞淋巴瘤、由人类嗜T细胞淋巴病毒(HTLV)所引起的淋巴瘤，如T-细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、B-细胞淋巴瘤、急性非淋巴球性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤、非-何杰金氏淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤、伯奇氏淋巴瘤、成人T-细胞白血淋巴瘤、急性-髓白血病(AML)、慢性髓白血病(CML)或肝细胞癌。更多实例包括骨髓化生不良症候群(myelodysplastic syndrome)、幼童固态肿瘤，如脑瘤、神经芽细胞瘤、网膜芽细胞瘤、肾畸胎瘤、骨瘤及软组织肉瘤、成人的通常性固态肿瘤，如头颈癌(如，口的、喉肿瘤、鼻咽癌及食道癌)、泌尿生殖系统癌(如，摄护腺、膀胱、肾、子宫、卵巢、睾丸)、肺癌(如，小-细胞及非-小细胞)、乳癌、胰腺癌、黑色素瘤及其它皮肤癌、胃癌、脑瘤、相关于戈兰综合症(Gorlin’s syndrome；基底细胞班综合症)的肿瘤(如，髓胚细胞瘤、脑脊髓膜瘤等)及肝癌。另外在目标对象可以所述化合物治疗的癌症典型形式包含，但不仅限于，骨架或平滑肌癌症、胃癌、小肠的癌症、直肠瘤、唾腺的癌症、子宫内膜癌、肾癌、肛门癌、直肠癌、副甲状腺癌及垂体肿瘤。
[0767] 本文所述化合物可用于治疗、预防及研究额外的癌症，举例来说、结肠恶性肿瘤(carcinoma)、家族性结直肠瘜肉综合瘤(familial adenomatous polyposis carcinoma)及遗传性非息肉症大肠直肠癌或黑色素瘤。进一步地，癌包括、但不仅限于，唇瘤、喉肿瘤、咽肿瘤、舌肿瘤、唾腺瘤、胃瘤、腺癌、甲状腺癌(髓性及乳突性甲状腺癌)、肾瘤、肾薄壁组织瘤、子宫颈瘤、子宫黄体肿瘤、子宫内膜肿瘤、绒毛膜恶性肿瘤、睪丸恶性肿瘤、膀胱瘤、黑色素瘤、脑瘤，如神经胶母细胞瘤、星细胞瘤、脑脊髓膜瘤、髓胚细胞瘤及末梢的神经外胚层母细胞瘤、胆膀胱恶性肿瘤、支气管瘤、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤(Basalioma)、畸胎瘤、网膜芽细胞瘤、脉胳膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、颅咽瘤(craniopharyngioma)、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤、尤因肉瘤及浆细胞。本发明在一方面，本发明提供使用一或多个化合物制造用于治疗癌症的药物，在此所述癌症不限制为任一种类型癌症。
[0768] 在一些实施例中，本发明化合物可用于治疗癌症，例如大肠癌(colorectal)、甲状腺、胸及肺癌；以及骨髓增生性失调，如红血球增多症、血小板增多症、髓上皮的骨髓纤维化、慢性髓性白血病、慢性骨髓白血病、嗜伊红性白血球增高、青年的骨髓白血病及系统性肥大细胞疾病。
[0769] 在一些实施例中，本发明化合物能有效治疗下述疾病，造血失调，特别是急性-髓性白血病(AMLi)、慢性-髓性白血病(CML)、急性-前骨髓球白血病及急性淋巴球性白血病(ALL)。
[0770] 本发明进一步涵盖治疗或预防细胞增生性失调，如过度增生、发育不良及癌前期病变。发育不良是癌前期病变最早形成的，病理学家可藉由活检得知。所述目标化合物可经给药以达到预防过度增生、发育不良或癌前期病变的继续扩大或癌变的目的。举例来说，癌前期病变可能发生在皮肤、食道组织、胸及子宫颈内-皮膜组织。
[0771] 举例来说，神经退化性疾病包括，而非限制于，肾上皮脑白质失养(Adrenoleukodystrophy)(ALD)、亚历山大氏病(Alexander’s disease)、亚尔培氏症(Alper’s disease)、阿兹海默症(Alzheimer’s disease)、缩性脊髓侧索硬化症(
肌萎缩性脊髓侧索硬化症)(Lou Gehrig’s Disease)、
共济失调微血管扩张症候群(Ataxia telangiectasia)、巴登氏病(Batten disease)(也是一般皆知的施皮尔迈耶-伏格特巴登氏病(Spielmeyer-Yogt-Sjogren-Batten disease))、牛海绵
状脑病(bovine spongiform encephalopathy)(BSE)、脑白质海绵状变性(Canavan disease)、柯凯因氏症候群(Cockayne syndrome)、皮质基底核退化症(Corticobasal degeneration)、库贾氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、致死性家族
失眠症(Fatal familial insomnia)、额颞叶退化症(frontotemporal lobar degeneration)、亨汀顿氏舞蹈症(Huntington’s disease)、爱滋相关神经认知失调、肯尼迪病(Kennedy’s Disease)、克拉伯病(Krabbe’s disease)、路易体痴呆(Lewy body dementia)、神经病变、马查多-约瑟夫病(Machado-Joseph disease)(第三型小脑脊髓运动失调症候群(脊髓小脑萎缩症(Spinocerebellar Ataxia)type 3))、多发性系统萎缩症(Multiple system atrophy)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、猝睡症(Narcolepsy)、尼曼匹克症(Niemann-Pick disease)、帕金森氏症(Parkinson’s disease)、慢性儿童型脑硬化症(Pelizaeus-Merzbacher Disease)、皮克病(Pick’s disease)、原发性侧索硬化症(Primary lateral sclerosis)、传染性蛋白颗粒(Prion disease)、进行性核上眼神经麻痹症(Progressive Supranuclear Palsy)、雷弗素姆氏病(Refsum’s disease)、山德霍夫氏病(Sandhoff disease)、希德氏病(Schilder’s disease)、脊髓二次感染导致恶性贫血的亚急性合并退化症(subacute combined degeneration)、施皮尔迈耶-伏格特巴登氏病(Spielmeyer-Yogt-Sjogren-Batten disease)(一般皆知的巴登氏病(Batten disease))、脊髓小脑萎缩症(Spinocerebellar Ataxia)(multiple types with不同的特征)、脊髓肌肉萎缩症(Spinal muscular atrophy)、进行性核上性麻痹症(Steele-Richardson-Olszewski disease)、脊髓痨(Tabes dorsalis)、and中毒性脑病变(Toxic encephalopathy)。
[0772] 另一方面，本发明提供治疗或减轻疾病严重程度，所述疾病选自增生性、高度增生性疾病或神经退化性疾病，包括向有需要的目标对象投予有效剂量组成物或含有所述化合物的药学上可接受组成物。
[0773] 作为Her激酶的抑制剂，本发明化合物及其组成物在生物样本上是有用的。一方面，本发明与生物样本中抑制蛋白激酶活性有关，所述抑制方法包括将所述生物样本与本发明化合物或包含所述化合物的组成物接触。在此所述的″生物样本″，表示在试管中或在体外实验的样本，包括但非限制于细胞培养物或其萃取物；
生物材料的取自哺乳动物或其萃取物；以及血、唾液、尿液、
粪便、精液、流泪、其它体液或其萃取物。在各种已知的技艺中，于生物样本抑制蛋白激酶活性是有用于各种用途。举例来说所述用途包括，但不仅限于输血、器官移植及生物样品保存。
[0774] 本发明另一方面与有关Her激酶生理、病理现象；所述蛋白质激酶在细胞内讯号介导路径媒介研究；以及比较评估新蛋白激酶抑制剂。举例来说，所述包含但不仅限于，生物分析例如酵素分析或细胞分析试剂。
[0775] 所述化合物作为Her激酶抑制剂的活性可藉由试管中、活体或细胞株实验得知。所述试管中的分析包括侦测抑制激酶活性或所述活化的激酶ATP酶活性的分析。替换试管中的分析法，定量抑制剂与蛋白激酶结合量的结合能力以及可通过结合前放射性标识，分离抑制剂/激酶复合物及侦测其放射性标定结合量，或以新抑制剂为与结合智已知放射性配体结合的激酶培养而进行竞争试验而测定。利用本发明化合物作为各种激酶抑制剂详细的症状分析每个已列明在下述实例。
[0776] 根据上述情况，本发明更进一步的提供一种预防或治疗疾病或如上所述失调的方法，所述治疗为目标对象所必需接受的治疗，所述方法包括向目标对象给药能达到治疗效果有效剂量的本发明化合物或其药学上可接受盐等。对于任何上述的用法，所需的剂量根据不同模型的给药方式有所不同，如治疗特殊的条件及期望的效果。
[0777] 医药组成物
[0778] 在另一方面，本发明提供一医药组成物是包括式I的化合物，或其药学上可接受酯、盐或前药等，与药学上可接受载体。
[0779] 本发明化合物可以医药组成物型态依常规的途径给药，特别是内服(enterally)，如，口服，如锭剂或胶囊的形式，或非经口服的方式，如注射液或悬浮液，外用，如乳液、凝胶、
软膏或霜剂，或经鼻或栓剂型态。包括游离形式的本发明化合物或其药学上可接受盐型式，与至少一药学上可接受载体或稀释剂的医药组成物可以常规制造方式，如混合、制粒或包覆方法。举例来说，经口的组成物可为锭剂或明胶胶囊其中包含活性成分及a)稀释剂，如乳糖、葡萄糖、
蔗糖、甘露醇、山梨醇、
纤维素及/或甘氨酸；b)
润滑油，如
二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐及/或聚乙二醇；对于锭剂，c)
粘合剂，如镁铝
硅酸盐、
淀粉糊、明胶、特拉卡甘胶、甲基纤维素、羧甲织维素钠及或聚乙烯吡咯啶酮；若要求可加入d)裂解剂，如淀粉、洋菜、海藻酸、海藻酸钠盐或
沸腾混合物；及/或e)吸收剂、
着色剂、调味料及
甜味剂。可注射的组成物可为液态等张溶液或悬浮液及栓塞剂，可经由脂肪乳液或悬浮制备。所述组成物可为灭菌的及/或包含佐剂，如保存、安定、湿润或乳化剂、溶液促进剂、用于调控渗透压的盐类及/或缓冲溶液。此外，其还可包括其它有治疗价值的物质。适合应用于透过皮肤的化学式包括本发明化合物的有效剂量与载体。所述载体可包括可吸收的药学上可接受溶剂以助于经穿透通过宿主皮肤。举例来说，透过皮肤吸收装置以绷带的形式包括衬件(backing member)，所述化合物任选地与载体一起的储存器，依控制的及预定的速率历时一段延长时期将所述化合物输送至宿主皮肤的任选地控制速率屏障以及固定所述装置与皮肤的工具。也可能使用透过皮肤吸收基材的方式敷用。局部施用的适合制剂，如施用于皮肤及眼睛，优选为如众所皆知的水溶液、软膏、霜剂或凝胶态。此类可含有增溶剂、稳定剂、
张力加强剂、缓冲溶液及
防腐剂。
[0780] 本发明化合物可以
治疗有效量与一或多种治疗剂组合(医药组合物)给药。举例来说，加乘效应可发生于含有其它抗-增生性、抗-癌、免疫调节或抗-发炎反应的物质。凡本发明化合物皆与其它治疗剂一起给药，共-给药化合物的剂量会会共-给药化合物、受特殊的药剂或正在治疗的条件等型态而改变。
[0781] 合并疗法包括目标化合物进一步与其它
生物活性成分(例如，但不仅限于第二种及不同的抗肿瘤药剂)及非-药物治疗(如，但不仅限于手术或
辐射治疗)的组合。举例来说，本发明化合物可与其它药学上活性化合物组合，优选为能增加本发明化合物效果的化合物。本发明化合物可与其它治疗药剂同时给药(单一配制或分开配制)或依序给药。一般情况下，所述合并疗法预想在可于经由单一循环或连续治疗的给药二或多种药剂。
[0782] 在一方面，本发明化合物可能以一或多种分开的药剂组合给药以在各种复杂的疾病情况调控蛋白激酶。举例来说，如激酶可包括，但不仅限于：丝氨酸/苏氨酸特异性激酶，受体型酪氨酸激酶及非-受体型酪氨酸激酶。丝氨酸/苏氨酸激酶包括有丝分裂剂活化蛋白酶(MAPK)、细胞分裂原蛋白激酶(MEK)、RAF及
极光激酶(aurora kinase)。举例来说受体型激酶家族包括表皮生长因子受体(EGFR)(如HER2/neu、HER3、HER4、ErbB、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Xmrk、DER、Let23)；纤维母细胞生长/散布因子受体(FGF)(如FGF-RI、GFF-R2/BEK/CEK3、FGF-R3/CEK2、FGF-R4/TKF、KGF-R)；肝细胞生长/散布因子受体(HGFR)(e.g、MET、RON、SEA、SEX)；胰岛素受体(如IGFI-R)；Eph(如CEK5、CEK8、EBK、ECK、EEK、EHK-I、EHK-2、ELK、EPH、ERK、HEK、MDK2、MDK5、SEK)；Axl(如Mer/Nyk、Rse)；RET；以及血小板衍生性生长因子受体(PDGFR)(如PDGF.α.-R、PDG.β.-R、CSF1-R/FMS、SCF-R/C-KIT、VEGF-R/FLT、NEK/FLK 1、FLT3/FLK2/STK-1)。非-受体型酪氨酸激酶家族包括，非限制于BCR-ABL(如p43.sup.abl、ARG)；BTK(如ITK/EMT、TEC)；CSK、FAK、FPS、JAK、SRC、BMX、FER、CDK及SYK。
[0783] 本发明另一方面，所述目标化合物可与调控非-激酶生物标靶或方法的一或多种药剂组合给药。所述标靶包括组蛋白去乙酰酶(HDAC)、DNA甲基转移酵素(DNMT)、热休克蛋白(如HSP90)及蛋白体(proteosomes)。
[0784] 在优选的实施例中，所述化合物可与抑制一或多种生物标靶药的抗肿瘤药剂(如小分子团、单元抗体、反向RNA及稠合蛋白质)组合，如伏立诺他(Zolinza)、得舒缓(Tarceva)、易瑞沙(Iressa)、泰嘉锭(Tykerb)、基利克(Gleevec)、纾癌特(Sutent)、达沙替尼(Sprycel)、蕾莎瓦(Nexavar)、蕾莎瓦(Sorafinib)、CNF2024、RG 108、BMS387032、艾菲尼替(Affinitak)、安维汀(Avastin)、贺癌平(Herceptin)、尔必得舒(Erbitux)、AG24322、PD325901、ZD6474、PD184322、厄贝妥大(Obatodax)、ABT737及AEE788。所述组合可提升治疗效果超过任何单一种药物的实际治疗效果，及可防止或延迟转型的抗性突变变异体的出现。
[0785] 在首选的实施例中，本发明化合物可与化疗药剂组合给药。所述化疗药剂包括在临床癌症上治疗范围广泛的治疗剂。所述药剂可在疾病的各种时期给药以达到缩小肿瘤、破坏手术后残余的癌细胞的目的，包括缓解、持续缓解及/或减轻与癌症相关的症状或其治疗。举例来说，所述药剂包括，但不仅限于，烷化剂如芥子气衍生物(二氯甲基二乙氨(mechlorethamine)、癌德星注射剂(cylophosphamide)、瘤克宁锭(Chlorambucil)、美法仑(Melphalan)、好克癌注射剂(Ifosfamide))，次乙亚氨(Ethylenimine)(噻替哌(thiotepa)、六甲蜜氨(hexa methylmelamine))、
烷基磺酸(补束克注射剂(Busulfan))、联氨(hydrazine)及三嗪(阿草特氨(Altretamine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、达卡巴仁注射剂(Dacarbazine)及帝盟多胶囊(Temozolomide))、亚硝基尿素(nitrosourea)(卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)及链脲菌素(Streptozocin))、好克癌注射剂(Ifosfamide)及金属盐类(佳铂帝(Carboplatin)、
顺铂(Cisplatin)、及益乐铂(Oxaliplatin))；植物碱类(Plant Alkaloids)such as鬼臼毒素类(podophyllotoxins)(灭必治软(Etoposide)及替尼泊甙(Tenisopide))、紫杉类(taxanes)(太平洋紫杉醇(Paclitaxel)及多西紫杉醇(Docetaxel))、长春花生物碱类(Vinca alkaloids)(长春新碱(Vincristine)、长春花碱(Vinblastine)、长春花碱酰氨(Vindesine)及温诺平(Vinorelbine))，及喜树碱类似物(Camptothecan analogs)(爱莱诺迪肯(irinotecan)及癌康定(Topotecan))；抗肿瘤抗生素如色霉素(chromomycins)(可美净(放线菌素(Actinomycin))及普卡霉素(Plicamycin))、蒽环霉素(Anthracyclines)(多柔比星(Doxorubicin)、唐霉素(Daunorubicin)、泛艾霉(Epirubicin)、双羟蒽醌(Mitoxantrone)、戊柔比星(valrubicin)及艾达霉素(Idarubicin))，及混杂的抗生素，如排多癌(Mitomycin)、放线菌素(Actinomycin)及扑类恶(Bleomycin)；抗-代谢剂，如叶酸拮抗剂(灭杀除癌锭(Methotrexate)、爱宁达(Pemetrexed)、雷替曲塞(Raltitrexed)、氨基蝶呤(aminopterin))、嘧啶拮抗剂(pyrimidine antagonists)(5-氟尿嘧啶、氟脲脱氧核苷(Floxuridine)、赛德萨(Cytarabine)、截瘤达(Capecitabine)及健择(Gemcitabine))、嘌呤拮抗剂(6-疏基嘌呤及6-硫代鸟嘌呤)及腺核苷去氨酶抑制剂(乐司他丁(Cladribine)、福达乐(Fludarabine)、巯基嘌呤、氯法拉滨(clofarabine)、硫鸟嘌呤(Thioguanine)、奈拉滨(nelarabine)及喷司他丁(pentostatin))；拓朴异构脢抑制剂，如拓朴异构脢I抑制剂(爱莱诺迪肯(irinotecan)、癌康定(Topotecan))及拓朴异构脢II抑制剂(安吖啶(Amsacrine)、灭必治(Etoposide)、磷酸依托泊甙(Etoposide phosphate)、替尼泊苷注射液(teniposide))；单抗(阿来组单抗(Alemtuzumab)、吉妥单抗(Gemtuzumab ozogamicin)、利妥昔单抗(Rituximab)、妥珠单抗(Trastuzumab)、替伊莫单抗(Ibritumomab Tioxetan)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、托西莫单抗(Tositumomab)、癌思停(Bevacizumab))；以及混杂的抗-肿瘤如核糖核苷酸还原酶抑制剂(爱治胶囊(Hydroxyurea))；肾上腺皮质类固醇抑制剂(米托坦(Mitotane))；酵素(乐拿舒(Asparaginase)及培门冬酶(pegaspargase))；抗-微管蛋白剂(雌莫司汀磷酸钠(Estracyte))；以及维生素A酸(Retinoids)(蓓萨罗丁(Bexarotene)、罗可坦(Iso全反维生素A酸(Tretinoin))、全反维生素A酸(Tretinoin)(ATRA).
[0786] 在首选的实施例中，本发明化合物是与
化学防治剂(chemoprotective agent)组合给药。所述化学防治剂是为了保护身体将化疗的
副作用减到最少。举例来说，所述药剂包括，但非限于氨磷汀(amfostine)、美司那(mesna)及右雷佐生(dexrazoxane)。
[0787] 在另一方面，本发明化合物也可与放射线治疗配合给药。辐射通常传送至内部(在癌症细胞附近注入放射性物质)或外部由机器使用
光子(
X射线或γ射线)或粒子辐射。其中所述组合治疗进一步包括辐射治疗，所述辐射治疗，可在任何适合的时间进行只要配合治疗药剂及辐射治疗就能从共同作用实现有利的疗效。举例来说，在适当情况下，在辐射治疗临时的停止给药治疗药剂几天甚至是几周，仍然有实现帮助治疗的效果。
[0788] 本发明化合物也被察觉，与免疫治疗剂组合使用也是有效过的。免疫治疗的一种形式是通过于染离肿瘤的位置给药
疫苗组成物而产生源自宿主的活性化系统性癌特异性免疫应答。疫苗的各种类型已经被提出，包括单离的肿瘤-
抗原疫苗及抗-个体遗传型疫苗。另一种方法是利用目标对象的肿瘤细胞或所述细胞的衍生物进行治疗(reviewed by Schirrmacher et al.(1995)J.Cancer Res.Clin.Oncol.121：487)。在美国
专利第5,484,596，号Hanna Jr.et al.权利要求书所述一可切除恶性肿瘤的治疗方法，以防止复发或转移，其中包括以手术去除肿瘤、以
胶原蛋白酶分散、辐射照射细胞及患者接踵至少连
7
续三剂量约10 细胞数的疫苗。
[0789] 本发明化合物可有地利与一或多种辅佐治疗剂联合使用。举例来说，适合的辅佐治疗药剂包括5HT1促进剂，如翠普登(triptan)(如舒马曲坦(Sumatriptan)或那拉曲坦(naratriptan))；腺苷酸A1促进剂；EP配位子；NMDA调节器，如甘氨酸拮抗剂；钠通道阻断剂(如乐命达(Lamotrigine))；物质P拮抗剂(如NK1拮抗剂)；大麻素(cannabinoid)；乙酰氨基酚(acetaminophen)或非那西丁(phenacetin)；5-脂氧合酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；DMARD(如灭杀除癌(Methotrexate))；加巴喷丁(gabapentin)及相关化合物；三环类抗抑郁药(tricyclic antidepressant)(如阿米替林(amitriptyl ine))；神经元稳定抗
癫痫药物；单-氨属摄取抑制剂(如速悦(venlafaxine))；基质的金属蛋白酵素(Matrix MetalloProteinase)抑制剂；一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase)(NOS)抑制剂，例如iNOS或nNOS抑制剂；肿瘤
坏死因子α(Tumor necrosis factor α)释放、活化的抑制剂；抗体疗法，如单抗疗法；抗病毒剂，如核苷抑制剂(如拉脉优(lamivudine))或免疫系统调节器(如干扰素(Interferon))；阿片类止痛剂(opioid analgesic)；局部麻醉剂；刺激物，包括咖啡因；H2-拮抗剂(如雷尼替丁(ranitidine))；
氢离子帮浦抑制剂(如奥美拉唑(omeprazole))；制酸剂(Antacid)(如氢氧化铝或镁；抗肠胃气胀药(如西甲硅油(simeticone))；减充血剂(如苯肾上腺素(phenylephrine)、苯丙醇氨盐酸盐(phenylpropanolamine)、柔他益(pseudoephedrine)、羟甲唑啉
(oxymetazoline)、肾上腺素、鼻眼净(naphazoline)、丁苄唑啉(xylometazoline)、六氢脱氧麻黄碱(propylhexedrine)或左旋-脱氧麻黄碱(levo-desoxyephedrine))；
镇咳(如可待因(Codeine)、氢可待因(hydrocodone)、卡腊米芬(carmiphen)、咳必清(carbetapentane)或右美沙芬(Dextromethorphan))；利尿剂；镇定、非-镇定抗组织氨药物(anti-histamine)。
[0790] 本发明所述医药组成物包括治疗有效量的本发明化合物以及一或多种药学上可接受载体。本文所述的术语″药学上可接受载体″是指非-毒性、惰性固体、半固体或液体填充物、稀释剂、密封材料或任何形式的辅助剂。本发明所述医药组成物可以经口、直肠、肠道外、内脑池(intracisternally)、内阴道、
腹腔、局部(如粉末，软膏，或下降)、口腔腺、经口的或喷鼻剂给药人类或其它动物。
[0791] 用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶剂、悬浮剂、糖浆及酏剂。除活性化合物之外，所述液体剂型可包括此技艺常用的惰性稀释剂，举例来说，水或其它溶剂、溶解剂和乳化剂，如酒精、异丙基酒精、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、
苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰氨，油(特别是，
棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻、芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、山梨醇
脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂外，口服组成物还可包括佐剂，如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、调味料、香料剂。
[0792] 可注射制剂，举例来说，灭菌的可注射水性或油性悬浮液可根据先前已知的技艺使用稳定、分散或湿润剂以及悬浮药剂加以调制。所述灭菌可注射制剂可为于无毒性肠道外可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶剂、悬浮液或乳化液，举例来说，如1，3-丁二醇溶液。可应用的所述可接受载体(vehicle)及溶剂中，可为水、林格氏液(Ringer’s solution)、U.S.P.及等张
氯化钠水溶液。此外，灭菌、固定油为通常用来作为溶剂及悬浮剂的介质。为了此目，可应用任何的混合的固定油包括单-或双甘油酯。此外，脂肪酸如油酸可用于可注射制剂。
[0793] 为了延长药物的效果，通常期望延缓由皮下或肌肉注射的药物吸收。此可能透过使用
水溶性差的结晶或非结晶材料制成的悬浮液型态实现。所述药物的吸收速率取决于其溶出率，换言之，可取决于晶体大小及晶体的形式。另外，肠道外给药药物的吸收延迟通常是透过溶解或悬浮所述药物在油载体中。
[0794] 所述组成物若以直肠或阴道给药优选使用栓塞剂，所述栓塞剂可由本发明化合物与适合的非刺激性的赋形剂或载体混合制备，如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡固体，所述赋形剂或载体在常温下为固体，但在体温下为液体，故可于直肠或阴道内稠化释出活化性合物。
[0795] 相似类型的固体组成物可以如乳糖或奶糖的赋形剂及超高分子量聚乙烯乙二醇及其类似物应用于软式或硬式明胶胶囊作为充填剂
[0796] 所述活化性合物也可用一或多种如上述赋形剂制成微胶囊的形式。所述固体药剂，如锭剂、糖衣丸剂、胶囊、丸剂及颗粒等形式可以包覆及包壳制备，如肠包覆，药剂包覆及其它包覆的释放率市众所皆知的技艺。在这样的固体药剂形式中所述活性化合物可能掺有至少如蔗糖、乳糖或淀粉的惰性稀释剂。通常实施的这种剂型可能还包括，惰性稀释剂以外的其它添加物，如片剂润滑油及其它片剂辅助剂，如硬脂酸镁及微晶纤维素。于胶囊、锭剂及丸剂的情况，剂量型式也可能包括缓冲药剂。
[0797] 本发明化合物用于局部或
透皮给药的剂量型式，包括软膏、糊状物、霜剂、乳液、凝胶、粉末状、溶剂、喷雾、吸入剂或贴片(patches)。所述活性化合物在无菌条件下与药学上可接受载体及任何所需的防腐剂及缓冲溶液混合。眼用制剂、
耳滴剂、眼药膏、粉末及溶液也涵盖在本发明解释的范围内。
[0798] 除了本发明的活性化合物，所述软膏、糊状物、霜剂及凝胶更包括赋形剂，如动物及植物脂肪、油、蜡、
石蜡、淀粉、特拉卡甘胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅
树脂、
膨润土、偏硅酸、滑石及氧化锌或其混合物。
[0799] 除本发明化合物外，粉末及喷雾可包括赋形剂如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、钙硅酸盐及聚酰氨粉末或所述物质的混合物。喷雾通常还添加氯氟烃作为推进剂。
[0800] 穿皮贴片(药膏)提供一个附加的优势在于使所述化合物输送至身体可受控制。所述剂量型式可通过将所述化合物溶解或分散于适当的介质而制得。吸收促进剂可全面性的增加所述化合物通过皮肤的量。所述速率可藉由聚合材料或凝胶提供膜控制速率以控制给药速率。
[0801] 据本发明所述治疗方法，治疗或预防目标对象的失调，所述目标对象如人类或动物，藉由对目标对象投以本发明化合物的治疗的有效剂量，所述有效量及治疗时间为为达到期望的治疗效果所必需的量。描述本发明化合物的术语″治疗剂的有效剂量″，指所述化合物减轻目标对象疾病症状的足够剂量。为了使此医疗技艺能被理解，以本发明化合物治疗的有效剂量的合理的效益/风险比率可用于任何一种医疗治疗上。
[0802] 一般情况下，本发明化合物可经由任何通常技艺给药，无论是单一或与一或多种治疗剂组合给药皆可达到治疗有效剂量。所述治疗的有效剂量，取决于疾病严重程度、目标对象的年龄及相对身体健康程度、使用的化合物的效果及其它因素，因此所述治疗的有效剂量可能会有很大的差距。一般情况下，理想的效果显示全身每日可获得约0.03至2.5毫克/每公斤体重。在每日指示用量较大的哺乳类动物，如人类给药的浓度范围约为0.5至100毫克，如一天剂量可分为最多四次或延迟给药。适合的口服单位剂量包括从ca.1至50毫克活性成分。
[0803] 在某些实施例中，本发明化合物的治疗量或剂量范围从约0.1毫克/公斤至约500毫克/公斤，或者从约1至约50毫克/公斤。一般情况下，根据本发明所述治疗疗法，包括必需治疗病人每天单一或多次给药本发明化合物量从约10毫克至约1000毫克。治疗量或剂量也会依据给药途径及与其它药物共同使用的可能性而有所不同。
[0804] 一旦所述目标对象条件改善，若必需则可给药本发明的化合物、组成物或组合的维持剂量。紧接着，依据症状的情况改善至一定水平，给药的剂量或
频率或两者皆可减少，而症状减轻至目标程度则应停止治疗。然而，基于疾病症状复发的可能性，所述目标对象可能需要长时间的周期性治疗。
[0805] 这可以被了解，然而，本发明化合物及组成物的每日总用量会明确的经过主治医师精确的判定而给药。所述特异性抑制剂可针对任何特殊的患者多变的因素包括治疗所述病症及所述病症的严重程度；使用具特异性活性的化合物；使用所述特异性组成物；病人的年龄、体重、基本健康状况、性别及饮食习惯；给药的时间、给药途径，以及所使用特异性化合物的释放速率；治疗的持续时间；所使用的药剂组合或特异性化合物的组合；及医学技艺皆知的类似因子。
[0806] 本发明提供一医药组成物，如试剂盒包括a)一第一药剂，是本发明揭露的化合物为自由型态或药学上可接受盐型态，以及b)至少一个协同-药剂(co-agent)。所述试剂盒可包括用于其给药方式的说明。
[0807] 所述术语″协同-给药(co-administration)″或″联合给药(combinedadministration)″或前述所使用的类似术语包括对单一患者投以所选择的治疗药剂，以及预期的治疗制度包括，所述药剂为非必需于同路径或同时间给药的药剂。
[0808] 本文所述术语″医药组合″是指一种产物，所述产物是混合或结合多于一种活性成分且包括固定及非固定两种活性成分的组合。所述术语″固定组合″的意思为所述活性成分，患者同时地以单一型态实体或剂量给药本发明化合物及协同药剂。所述术语″非-固定组成物″意指所述活性成分，患者同时给药本发明化合物及协同药剂，以分开的实体无限制时间可同时或相继给药，其中，所述给药方法可提供两种不同层级的化合物对病人身体的治疗效果。后者也可应用于鸡尾酒疗法(cocktail therapy)，如给药三种或多种所述活性成分。
[0809] 在某些实施例中，所述组成物任选地进一步包括一或多种额外的治疗剂。举例来说，化疗药剂或其它抗增生性药剂可能与本发明化合物结合用以治疗增生性疾病及癌TM症。举例来说已知化疗药剂包括，但非限制于，基利克(Gleevec) 、阿霉素(adriamycin)、地塞米松(dexamethasone)、长春新碱(Vincristine)、环磷酸氨、氟尿嘧啶、癌康定(Topotecan)、紫杉醇(taxol)、干扰素(Interferon)及铂衍生物。
[0810] 其它可与本发明化合物结合的药剂实例包括，非限制于：治疗阿兹海默症如Aricept18及Excelon(R)；治疗帕金森氏症例如L-DOPA/卡比多巴(carbidopa)、恩他卡朋(entacapone)、罗匹尼罗(ropinrole)、普拉克索(pramipexole)、溴麦角环肽(bromocriptine)、培高利特(Pergolide)、苯海索(trihexyphenidyl)及金刚氨(Amantadine)；治疗多发性硬化症(MS)药剂例如β干扰素(Interferon)(如，爱莫奈(R)(Avonex(R))及立比扶(Rebif(R)))、可舒松(Copaxone)及双羟蒽醌(Mitoxantrone)；治疗气喘，如沙丁氨醇(Albuterol)及欣流(Singulair)；治疗
精神分裂症药剂，如津普速(zyprexa)、理斯必妥(risperdal)、思乐康(seroquel)及易宁优锭(haloperidol)；
抗-发炎反应药剂如类固醇药(cortico’s teroids)、TNF阻断剂(TNF blockers)、IL-I RA、硫唑嘌呤(azathioprine)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；免疫调节及免疫抑制剂如环孢素(cyclo-sporin)、普乐可复(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)、干扰素(Interferon)、类固醇药(Corticosteroids)、环磷酸氨、硫唑嘌呤(azathioprine)及柳氮磺吡啶；神经因子如乙酰胆碱酯酶抑制剂(inhibitors)、MAO抑制剂、干扰素(Interferon)、抗痉挛剂、离子通道阻断剂、力如太(riluzole)及抗帕金森氏症制剂；治疗心血管疾病药剂(cardiovascular disease)如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿、硝酸盐、钙离子通道阻断剂及史他汀(statins)；治疗肝病药剂，如类固醇药(Corticosteroids)、可利舒散(cholestyramine)、干扰素(Interferon)及抗-病毒药剂；治疗血失调药剂，如类固醇药(Corticosteroids)、抗白血病药剂、及生长因子；以及治疗免疫失调药剂如γ球蛋白。根据调制者的判断，有些材料可适用于药学上可接受载体，举例来说包括，但不仅限于，离子交换树脂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白、如人血清
白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸，或山梨酸钾、饱和植物性脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或
电解质、如鱼精蛋白硫酸、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、镁三硅酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡，聚乙烯-聚氧丙烯
块聚合物、羊毛脂肪、糖等乳糖、葡萄糖、蔗糖；淀粉如玉米淀粉与马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物如
羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素醋酸酯；粉特拉卡甘胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂如可可脂和栓蜡、油如
花生油、
棉籽油；红花油；芝麻油；
橄榄油；玉米油和
大豆油；二醇；
丙二醇或聚乙二醇；纸类如油酸乙酯及月桂酸乙酯，洋菜；缓冲溶剂(例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热
原水，等渗盐水；林格氏溶液；乙基醇及磷酸盐缓冲溶剂、以及其它无毒的可相容的
润滑剂、如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁、以及着色剂、释放剂、包覆剂、甜味剂、
调味品和
香味剂、防腐剂和抗
氧化剂也可以存在于所述组成物中。所述蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受盐可调制为医药组成物用以给药于动物或人类。所述医药组成物，包括有效于治疗或预防蛋白激酶介导的疾病的蛋白抑制剂的量以及药学上可接受载体为本发明的其它实施例。
[0811] 在另一方面，本发明提供一试剂盒包括能抑制激酶活性的化合物，所述化合物是选自一或多种式I化合物以及用于癌症治疗的说明。在某些实施例中，所述试剂盒进一步包括进行测试的组件，以确定所述目标对象的EGFR以产生活性及/或抗性突变(mutations)。
[0812] 实施例
[0813] 下面的实例将使本发明化合物及其制程更容易了解，其目的再于使本发明容易了解而非限制本发明。所揭露的各种改变及修饰实施例皆明显的经修改或修饰与先前技艺包括(非限制)，这些相关化学结构式、取代基、衍生物、通式及/或本发明所述方法，所述方法不违背本发明的精神且不超出权利要求范围。
[0814] 方案1
[0815]
[0816] 实施例1
[0817] N-(4-(6-(1-丙烯酰基哌啶-3-基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-甲基丙酰氨的合成
[0818]
[0819] 步骤1：N-(4-硝基苯基)丙酰氨的合成
[0820]
[0821] 在0℃条件下，将丙酰基氯添加至4-硝基苯氨(1.0g，7.25mmol)、DMAP(40mg)及吡啶(0.70mL)的CH2Cl2(30ml)溶剂中，且搅拌反应4小时。所述溶剂以0.1N HCl，H2O溶液清洗，以Na2SO4干燥，浓缩得到黄色固体1.37g。1H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ10.21(s，1H)、8.10(d，J＝9.0Hz，2H)、7.90(d，J＝9.0Hz，2H)、2.38(t，J＝7.2Hz，2H)、1.04(q，J＝
7.8Hz，7.2Hz，3H)。
[0822] 步骤2：N-甲基-N-(4-硝基苯基)丙酰氨的合成
[0823]
[0824] N-(4-硝基苯基)丙酰氨(1.37g)溶解于DMF(20mL)以及冷却至0℃。依序加入氢化钠(0.84g)及碘甲烷(1.32mL)。搅拌反应1小时。以水淬火后，以醋酸乙酯萃取粗1
产物，紧接着以快速层析法以3∶1正己烷-乙酸乙酯得到目标化合物(1.17g)。H NMR
600MHz(DMSO-d6)δ8.24(d，J＝9.0Hz，2H)、7.40(d，J＝9.0Hz，2H)、3.31(s，3H)、2.20(t，J＝7.2Hz，2H)、1.10(q，J＝7.8Hz，7.2Hz，3H)。
[0825] 步骤3：N-(4-氨基苯基)-N-甲基丙酰氨的合成
[0826]
[0827] 添加钯及碳(10％)至含N-甲基-N-(4-硝基苯基)丙酰氨(1.17g)的甲醇(30mL)溶剂中。在氢气下搅拌反应4小时。所述溶剂透过硅钙石过滤且不经过纯化使用于下一步骤。MS m/z：179.23(M+1)。
[0828] 步骤4：2，6-二氯-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H-嘌呤的合成
[0829]
[0830] 在含2，6-二氯嘌呤(2.0g)CH2Cl2(30mL)溶液中添加对-甲苯磺酸(0.22g)及3，4-二氢-2H-哌喃。搅拌反应4小时。以碳酸钠水溶液及水清洗溶液，干燥且浓缩至得
1
到2.7g白色固体。H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ8.98(s，1H)、5.72(m，101H)、4.00(m，1H)、
3.72(m，1H)、2.24(m，1H)、1.96(m，2H)、1.74(m，1H)、1.56(m，3H)。MS m/z：274.12(M+1)。
[0831] 步骤5：叔丁基-3-(2-氯-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)哌啶-1-羧酸酯的合成
[0832]
[0833] 2，6-二氯-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H-嘌呤(0.27g)、NBoc-3-哌啶氨(0.21g)、二异丙基乙氨(0.20mL)添加至正-BuOH(5mL)溶剂可引起剧烈反应。所述反应加热至90℃搅拌4小时。去除溶剂后，残余物以30∶1 CH2Cl2-MeOH经过快速层析纯化，并得
1
到0.36g白色固体。H NMR600MHz(DMSO-d6)δ8.40(s，1H)、5.60(m，1H)、4.00(d，J＝8.4Hz，
2H)、3.65(m，2H)、3.4(m，2H)、2.75(m，1H)、2.20(m，2H)、1.98(m，2H)、1.70(m，2H)、1.58(m，
2H)、1.39(m，11H)。MS m/z：437.93(M+1)。
[0834] 步骤6：叔丁基-3-(2-(4-(N-甲基丙酰氨基)苯基氨基)-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)哌啶-1-羧酸酯
[0835]
[0836] 在封闭试管内装入N-(4-苯基氨基)-N-甲基丙酰氨(62mg)、Pd2(dba)3(12mg)、叔丁基3-(2-氯-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)哌啶-I-羧酸酯(110mg)、1，3-双(2，6-二异苯丙醇)咪唑铵氯(10mg)以及叔丁醇钾(120mg)溶于二氧陆圜(4.0mL)。以90℃搅拌反应2小时。反应期间以醋酸乙酯稀释，及以
硅藻土过滤。以40∶1
1
CH2Cl2-MeOH快速层析纯化粗残余物接着得到亮黄色固体(115mg)。H NMR 600MHz(CDCb)δ7.78(s，1H)、7.70(d，J ＝ Hz，102H)、7.10(d，J ＝ Hz，2H)、7.0(s，1H)、5.60(m，1H)、
4.11(m，2H)、3.24(s，3H)、2.11(m，6H)、1.80(m，4H)、1.62(m，3H)、1.46(s，9H)、1.27(m，6H)、
1.04(t，J＝Hz，3H)。MS m/z：579.72(M+1)。
[0837] 步骤7：N-甲基-N-(4-(6-(哌啶-3-基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)丙酰氨的合成
[0838]
[0839] 叔丁基-3-(2-(4-(N-甲基乙酰氨基)苯基氨基)-9-(四氢-2H-哌喃-2-基)-9H嘌呤-6-基氨基)哌啶-1-羧酸酯(115mg)溶解于含EtOH(2mL)，添加4N HCI的二氧陆圜(2mL)。搅拌反应1小时。去除溶剂后，所述残留物在
真空条件下干燥且不经过纯化使用于下一步骤。MS m/z：395.47(M+1)。
[0840] 步骤8：N-(4-(6-(1-丙烯酰基哌啶-3-基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-甲基丙酰氨的合成
[0841]
[0842] N-甲基-N-(4-(6-(哌啶-3-基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)乙酰氨可溶于DMF(2mL)及CH2Cl2(6mL)。在0℃将二异丙基乙氨(0.17mL)及丙烯酰氯(16μL)依序加入。搅拌反应1小时。去除溶剂后，残余物可溶解于DMSO(3mL)及以Prep-HPLC纯化可得45mg的目标化合物以TFA盐型态。1H NMR 600MHz(MeOD)δ7.86(s，1H)、7.82(d，J＝9.6Hz，
2H)、7.12(d，J＝9.6Hz，2H)、6.25(d，J＝16.2Hz，1H)、6.04(d，J＝16.2Hz，1H)、5.78(d，J＝9.6Hz，1H)、3.92(m，1H)、3.41(m，2H)、3.21(m，5H)、2.15(m，4H)、1.94(m，2H)、1.02(t，J＝7.8Hz，3H)。MS m/z：449.51(M+1)。
[0843] 表1所述化合物是以实施例1方法制成而得。
[0844] 方案2
[0845]
[0846] 实施例2
[0847] N-(4-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4基氧基)苯基)丙烯酰氨的合成
[0848]
[0849] 步骤1：2，5-二氯-4-(4-硝基苯氧基)嘧啶的合成
[0850]
[0851] 将碳酸钾(0.96g)及2，4，5-三氯嘧啶(0.40ml)添加至溶有3-硝基酚(0.485g)的DMF(8.0mL)中。反应在加热至60℃下进行2小时。将混合的反应物过滤。并以醋酸乙酯稀释，以清水洗净。得到所述有机化合物层摊开并以Na2SO4干燥并浓缩至得到0.80g亮黄色固体。1
[0852] H NMR 600MHz(DMSO d6)δ8.84(s，1H)，8.38(d，J ＝ 6.6Hz，2H)，7.80(d，J ＝6.6Hz，2H)。
[0853] 步骤2：5-氯-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(4-硝基苯氧基)嘧啶-2-氨的合成
[0854]
[0855] 烧瓶中装入2，5-二氯-4-(4-硝苯氧基)嘧啶(200mg)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氨(134mg)、TFA(54uL)及2-BuOH(3mL)。所述反应加热至100℃后反应2h。反应后混合物以饱和碳酸氢钠水溶液碱化，接着以醋酸乙酯萃取。将所得粗产物以30∶1∶0.31
CH2Cl2-MeOH-三乙氨快速层析纯化得到0.17g棕色固体。H NMR 600MHz(CDCl3)δ8.28(s，
1H)、8.30(s，1 ＝ 7.2Hz，2H)、7.39(d，1 ＝ 7.2Hz，2H)、7.14(m，2H)、6.84(m，2H)、3.10(m，
4H)、2.62(m，2H)、2.38(s，3H)。MS m/z：441.88(M+1)。
[0856] 步骤3：4-(4-氨基苯氧基)-5-氯-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-氨的合成
[0857]
[0858] 氧化铂(IV)(50mg)添加至含5-氯-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(4-硝基苯氧基)嘧啶-2-氨的甲醇(10mL)溶液。在氢气环境下搅拌反应1小时。反应混合物以硅藻土过滤得到100mg油。MS m/z：411.9(M+1)。
[0859] 步骤4：N-(4-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氨基)嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨的合成
[0860]
[0861] 在0℃将丙烯酰氯(9.2uL)添加至含有4-(4-氨基苯氧基)-5-氯-N-(4-(4-甲哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-氨(50mg)及二异丙基乙氨(25uL)的溶液中。搅拌反应11
小时。目标化合物以逆相HPLC(10mgs)纯化获得。H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ10.18(s，
1H)、8.53(dd，J＝1.2，J＝8.4Hz，1H)、7.92(dd，J＝1.2Hz，J＝8.4Hz，1H)、7.38(dt，J＝1.8HZ，J＝8.4Hz，1H)、7.35(dt，J＝1.2Hz，J＝7.2Hz，1H)、3.21(m，1H)、1.31(d，J＝
6.6Hz，6H)。MS m/z：465.94(M+1)。
[0862] 表2所述的化合物是根据描述于实施例2的方法制成。
[0863] 方案3
[0864]
[0865] 实施例3
[0866] 4-氯-5-碘-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-5d]嘧啶的合成
[0867] 步骤1
[0868]
[0869] 4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.90g)溶解于DMF(10mL)。在0℃时添加氢化钠(0.13g)。搅拌混合物5分钟。将SEM Cl滴添加入反应，并于产生棕色混合物后搅拌15分钟。反应物以醋酸乙酯(50mL)稀释并以水淬火。分离有机化合物层后，将粗产物以含
5％醋酸乙酯的二氯甲烷溶剂以快速层析纯化得到1.20g灰色固体。1H NMR 600MHz(CDCl3)δ8.68(s，1H)、7.58(s，1H)、5.66(s，2H)、3.57(t，J ＝ 7.8Hz，2H)、0.96(J ＝ 7.8Hz，2H)、
0(s，6H)。MS m/z：410.72(M+1)。
[0870] 步骤2：叔丁基-3-(5-碘-7-2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)苯基氨甲酸酯的合成
[0871]
[0872] 4-氯-5-碘-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.30g)溶解于DMSO(3.0mL)。并且添加K2CO3(0.202g)及3-氢氧苯氨甲酸叔丁酯(0.175g)，使反应混合加热至100℃隔夜。以醋酸乙酯(20mL)稀释反应物且以清水清洗三次。得到的粗产物以含5％醋酸乙酯的二氯甲烷溶剂以快速层析纯化出得到0.38g白色
1
固体。H NMR 600MHz(CDCl3)δ8.45(s，1H)、7.54(s，1H)、7.42(s，1H)、7.38(t，J＝7.8Hz，
1H)、7.17-7.15(dd，J ＝7.8Hz，J ＝ 1.2Hz，1H)、6.98(dd，J ＝ 7.8Hz，J ＝ 1.2Hz，1H)、
6.59(s，1H)、5.63(s，2H)、3.57(t，J＝7.8Hz，2H)、0.96(t，J＝7.8Hz，2H)、0(s，6H)。MS m/z：583.50(M+1)。
[0873] 步骤3：叔丁基-3-(5-(吡啶-3-基)-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)苯基氨甲酸酯合成
[0874]
[0875] 将3-(5-碘-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-氧基)苯基氨甲酸叔丁酯(0.136g)、Na2CO3(1N，1.2mL)及二氧陆圜(0.4mL)混合物脱气处理10分钟。Pd(dppf)Cl2(19mg)添加至上述混合物且加热至100℃并维持1小时。将混合物以醋酸乙酯(10mL)稀释，及以硅藻土过滤。分离有机化合物层后，粗产物以20∶1二氯甲
1
烷-甲醇经快速层析分离得到0.10g亮黄色油状产物。H NMR 600MHz(CDCl2)δ8.97(s，
1H)、8.55(d，J＝4.8Hz，1H)、8.51(s，1H)、8.10(m，1H)、7.49(s，1H)、7.46(，s，1H)、7.37(m，
2H)、7.10(dd，J＝7.8Hz，J＝2.4Hz，1H)、6.90(dd，J＝7.8Hz，J＝2.4Hz，1H)、6.58(s，
1H)、5.73(s，2H)、3.64(t，J＝7.8Hz，2H)、1.50(s，9H)、0.98(t，J＝7.8Hz，2H)、0(s，6H)。
MS m/z：534.69(M+1)。
[0876] 步骤4：(4-(3-氨基苯氧基)-5-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶7-基)甲醇的合成
[0877]
[0878] 添加TFA(5mL)至含3-(5-(吡啶-3-基)-7-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)苯基氨甲酸叔丁酯(0.12g)的二氯甲烷(10mL)溶剂。将溶液搅拌混合1小时。将溶剂
蒸发。最后的残留物在真空条件下干燥且不需进一步纯化即使用。MS m/z：334.34(M+1)。
[0879] 步骤5：N-(3-(7-(羟基甲基)-5-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨的合成
[0880]
[0881] 将(4-(3-氨苯氧基)-5-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)甲醇溶解于二氯甲烷(4mL)。将DIEA(0.20mL)及丙烯酰氯(20uL)依序加入。搅拌1小时后，将所述溶剂以二氯甲烷(20mL)稀释及以饱和水合碳酸氢钠溶液清洗。待有机化合物层干燥后，浓缩且不需进一步纯化即使用。MS m/z：388.39(M+1)。
[0882] 步骤6：N-(3-(5-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨的合成
[0883]
[0884] 将N-(3-(7-(羟甲基)-5-(吡啶-3-基)-7H-吲哚并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨溶解于THF(3mL)。添加NaHCO3(1N，3mL)后搅拌2小时。去除THF，残余物1
经过逆相HPLC纯化得到40mg白色固体。H NMR600MHz(CH30D)δ8.85(s，1H)、8.43(m，1H)、
8.30(d，J＝13.8Hz，1H)、8.20(m，1H)、7.68(m，2H)、7.47(m，2H)、7.38(m，1H)、6.97(m，1H)、
6.40(m，2H)、5.77(m，1H)。MS m/z：358.36(M+1)。
[0885] 表3所述的化合物是根据描述于实施例3的方法制成。
[0886] 实施例4
[0887] 卤化化合物的合成方案
[0888]
[0889] 2，5-二氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶
[0890] 添加碳酸钾(2.42g，17.5mmol)及2，4，5-三氯嘧啶(1.0mL，8.72mmol)至含有3-硝基酚(1.21g，8.72mmol)的DMF(20mL)溶液。此反应在60℃反应2小时。将反应后混合物过滤，且过滤液以醋酸乙酯稀释且以清水(20mL)清洗3次。有机化合物层迭以无水硫酸钠干燥，浓缩后得到2.24g(90％)亮黄色固体，其可不进一步纯化即使用。1H NMR 600MHz(DMSO d6)δ8.87(s，1H)、8.28(m，1H)、8.21(m，1H)、7.84(m，2H)；MS m/z：
287.07(M+1)。
[0891]
[0892] 5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶-2-氨
[0893] 烧瓶中装入2，5-二氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶(1.56g，5.45mmol)、2-甲氧基-4-(4-甲 基哌 嗪-1-基) 苯氨(1.21g，5.45mmol)、TFA(0.42mL，5.45mmol uL) 及2-BuOH(30mL)。将浆体加热至100℃维持2小时。反应后混合物可置冷至室温，且以饱和碳酸氢钠水溶液中和混合物。水相混合物以醋酸乙酯(50mL)萃取3次。粗萃产物以
30∶1∶0.3(v/v/v)二氯甲烷-甲醇-三乙氨经快速层析分离纯化得到2.07g棕色固体
1
(81％)。H NMR 600MHz(DMSO d6)δ8.38(s，1H)、8.28(s，1H)、8.16(m，2H)、7.76(m，2H)、
7.08(s，1H)、6.46(m，1H)、6.14(m，1H)、3.72(s，3H)、3.33(m，4H)、3.05(m，4H)、2.28(s，3H)；
MS m/z：471.91(M+1)。
[0894]
[0895] 4-(3-氨基苯氧基)-5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-氨
[0896] 5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)4-(3-硝基苯氧基)嘧啶-2-氨(2.00g，4.25mmol)溶解于THF(50mL)且添加水(50mL)。并且添加
铁粉(1.19g，
21.25mmol)及氯化氨(1.18g，21.25mmol)，接着混合物在65℃反应4小时。反应后混合物置冷至室温且以硅藻土过滤。抽真空去除THF，且残余物以碳酸氢钠碱化并且以醋酸乙酯(50mL)萃取3次。分离有机化合物层及以无水硫酸钠干燥，浓缩后以20∶1 二氯甲烷-甲醇经快速层析分离纯化得到1.42g亮黄色固体(76％)：MS m/z：441.93(M+1)。
[0897]
[0898] N-(3-(5-氯-2-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨
[0899] 在 0 ℃ 滴 加 丙 烯 酰 氯 (0.257mL，3.18mmol) 至 含 4-(3- 氨 基 苯 氧基)-5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-嘧啶-2-氨(1.40g，3.18mmol)及二异丙基乙氨(0.56mL，3.18mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液。搅拌反应1小时。以20∶1(v/v)二氯甲烷-甲醇经快速层析纯化得到1.10g的目标化合。1H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ8.32(s，I H)、7.38(m，2H)、7.26(m，2H)、6.96(m，1H)、6.48(m，2H)、6.35(dd，1＝10.2Hz，17.4Hz，1H)、6.21(m，1H)、5.75(d，J ＝ 9.6Hz，1H)、3.80(s，3H)、3.61(m，4H)、3.11(m，4H)、
2.38(s，3H)；MS m/z：495.97(M+1)。
[0900]
[0901] N-(3-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨
[0902] 目标化合物比照如上所述的方法制备，以4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氨将嘧1
啶C2氨 化。H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ10.35(s，1H)、9.60(s，1H)、8.40(s，1H)、7.62(s，
1H)、7.50(m，1H)、7.42(t，J ＝ 7.8Hz，17.4Hz，1H)、7.28(s，2H)、6.95(m，1H)、6.70(s，2H)、
6.42(dd，J＝10.2Hz，16.8Hz，1H)、6.26(dd，J＝1.8Hz，16.8Hz，1H)、5.77(dd，J＝1.8Hz，
10.2Hz，1H)、3.49(m，4H)、3.11(m，4H)、2.84(s，3H)；MS m/z：465.95(M+1)。
[0903]
[0904] N-(3-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)嘧啶-4-基硫基)苯基)丙烯酰氨
[0905] 目标化合物以3-硝基苯硫酚及4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氨比照如上所述的方1
法制备。H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ10.50(s，I H)、10.08(5，1H)、9.59(s，1H)、8.26(s，1H)、
8.19(d，J ＝6.6Hz，IH)、7.50(t，J ＝7.8Hz，1H)、7.32(d，J ＝7.8Hz，1H)、7.00(s，2H)、
6.58(s，1H)、6.45(m，1H)、6.29(dd，J＝1.8Hz，17.4Hz，1H)、5.76(dd，J＝1.8Hz，17.4Hz，
1H)、3.50(m，4H)、3.12(m，4H)、2.83(s，3H)；MS m/z：482.01(M+1)。
[0906] 实施例5
[0907]
[0908] 4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
[0909] 将2-硝基-5-氟苯甲醚(2.0g，11.7mmol)、N-Boc哌嗪(2.18g，11.7mmol)及碳酸钾(3.2g，23.4mmol)溶于DMF(30mL)的混合物加热至70℃维持12小时。所得溶液以醋酸乙酯(100mL)稀释并以清水清洗3次。所得有机化合物层以过硫酸钠干燥解浓缩后得到目标化合物。MS(M+1)：338.3。
[0910]
[0911] 4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
[0912] 添加Pd/C(40mg)至4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.90g，11.6mmol)溶于(100mL)MeOH的溶液中。在氢气下悬浮搅拌2小时。并将混合物以硅藻土过滤。将溶剂浓缩得到目标化合物。MS(M+1)：308.3。
[0913]
[0914] 2，5-二氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶
[0915] 将碳酸钾(2.42g，17.5mmol)及2，4，5-三氯嘧啶(1.0mL，8.72mmol)添加至含3-硝基酚(1.21g，8.72mmol)的DMF(20mL)溶液。反应在60℃下进行2小时。将混合后反应物过滤；过滤液以醋酸乙酯溶剂稀释并以清水(20mL)清洗3次。所得有机化合物层迭以无水硫酸钠干燥且浓缩得到2.24g(90％)亮黄色固体，其不进一步纯化即使用。
1
H NMR600MHz(DMSO d6)δ8.87(s，1H)、8.28(m，1H)、8.21(m，1H)、7.84(m，2H)；MS m/z：
287.07(M+1)。
[0916]
[0917] 4-(4-(5-氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶-2-基氨基)-3甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
[0918] 烧瓶中装入2，5-二氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶(200mg，0.7mmol)、4-(4-氨基-3甲氧苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(215mg，0.7mmol)、Pd2(dba)3(64mg，0.07mmol))、X-Phos(33mg，0.07mmol)及碳酸钾(200mg，1.4mmol)于2-BuOH(10mL)溶液中。将溶剂中的气体去除后于90℃加热2小时。所得浆体以硅藻土过滤且以醋酸乙酯清洗。经浓缩的残留物以快速层析法纯化得到目标化合物。MS(M+1)：558.0。
[0919]
[0920] 4-(4-(4-(3-氨基苯氧基)-5-氯嘧啶-2-基氨基)-3甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
[0921] 烧瓶中装入4-(4-(5-氯-4-(3-硝基苯氧基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.36mmol)及PtO2(20mg)溶于MeOH溶剂。混合物于氢气下搅拌2小时，且以硅藻土过滤。所得溶液经浓缩得到目标化合物。
[0922]
[0923] 4-(4-(4-(3-丙烯酰基氨基苯氧基)-5-氯嘧啶-2-基氨基)-3甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
[0924] 4-(4-(4-(3-氨基苯氧基)-5-氯嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.34mmol)溶解于CH2Cl2(10mL)。以
冰浴将溶液冷却。并依序加入DIEA(60uL，0.34mmol)及丙烯酰氯(30uL，0.34mmol)。搅拌反应1小时。混合后溶液经快速层析法纯化得到目标化合物。
[0925]
[0926] N-(3-(5-氯-2-(4-(4-(2-氟乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基氨基)嘧啶-4-基氧基)苯基)丙烯酰氨
[0927] 对4-(4-(4-(3-丙烯酰基氨基苯氧基)-5氯嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg，0.034mmol)溶于EtOH(2mL)的溶液添加HCI(4M溶于二氧陆圜，2mL)。搅拌反应1小时。将溶剂去除。将残余物溶于DMF(2mL)。将Cs2CO3(27mg，0.068mmol)及2-氟溴乙烷(5.3mg，0.034mmol)添加至上述溶液。于70℃进行反应4小时。混合物经PREP HPLC纯化得到目标化合物。
[0928] 实施例6
[0929] 生物学实验
[0930] 细胞培养及试剂
[0931] EGFR突变的NSCLC细胞株HCC827(del E746_A750)、H3255(L858R)、HCC827 GR(del E746_A750/MET amplified)、H1975(L858R/T790M)及PC9(del E746_A750)其特征已被揭露于(Amann，J.et al.Cancer Res 65，226-35(2005)；Engelman，J.A.et al.Science 316，1039-43(2007)；Ono，M.et al.Mol Cancer Ther 3，465-72(2004)；Ogino，A.et al.Cancer Res 67，7807-14(2007))。制造PC9 GR(del E746_A750ff790M)细胞株且证实含有del E746_A750的顺端T790M。自ATCC取得ERBB2扩增(Calu-3及H1819)及突变(H1781)的突变株。所有细胞株每个保存于辅以10％FBS、100单元/mL青霉素、100单元/mL炼霉素及2mM麸酰氨酸的RPMI 1640(Cellgro；Mediatech Inc.，Herndon，CA)。H3255保存于辅以5％FBS、100单元/mL青霉素、100单元/mL炼霉素及2mM麸酰氨酸的ACL-4培养基中(Invitrogen，Carlsbad，CA)。
[0932] 所述EGFR及ERBB2突变株Ba/F3细胞及所述NIH-3T3细胞株于(Engelman，1.A.et at.Cancer Res 67，11924-32(2007)；Yuza，Y.et al.Cancer BioI Ther 6(2007))。所述EGFR C797S及ERBB2 T798I突变的插入是以快速转换
定位点突变试剂组(Quick Change Site-Directed Mutagenesis kit)(Stratagene；La Jolla，CA)根据制造商的说明书(Mukohara，T.et at.J Natl Cancer Inst 97，1185-94(2005))造成定位点突变。可依所TM需提供寡核苷酸序列。所有结构物皆经过DNA定序。以BD Creator 系统(BD生物科学)将结构物送入反转录病毒载体JP1540。NIH-3T3细胞的Ba/F3以反转录病毒根据先前技艺的标准步骤殖入(Engelman，J.A.et at.Proc Natl Acad Sci USA 102，3788-93(2005)；
Zhao，1.J.et al.Cancer Cell 3，483-95(2003))。以嘌霉素(2μg/ml)筛选获得稳定的细胞株。
[0933] 激酶抑制剂
[0934] 吉非替尼(gefitinib)是由商业来源获得且经由醋酸乙酯萃取而纯化。所得产物以液相层析质谱仪(LC-MS)图谱验证。CL-387，785获得自EMD(Gibbstown，NJ)。HKI-2721 13
获得自Medicilon Inc.(Shanghai，China)。HKI-272的结构经由LC-MS及 H及 C
核磁共振(NMR)证实。以LC-MS确定HKI-272的纯度＞95％。所有药品的源料溶剂以DMSO制备并保存于-20℃。
[0935] 细胞增殖及生长分析
[0936] 生长及生长的抑制以MTS分析来分析。此分析，是以比色法确定存活细胞数，基于3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯齑)-2四唑鎓盐(MTS)通过细胞对可溶于细胞培养基中的甲潜(formazan)的生物还原反应，可用先前建立的方法及以分光光度计侦测(Mukohara，T.et al.J Natl Cancer Inst 97，1185-94(2005)；Paez，J.G.et al.Science 304，1497-500(2004)；Engelman，J.A.et at.J Clin Invest
116，2695-2706(2006)。NSCLC或Ba/F3细胞暴露于治疗剂下72小时且以先前建立的方法以经验决定每个实验的细胞数量。所有的实验点分别设置在6至12孔盘且每个实验至少重复三次。得到的数据以数据分析和作图软体(Graph Pad Prism version5.0)于视窗
操作系统下(GraphPad Software；www.graphpad.com)作图显示。用非-线性回归模型以S型模拟剂量反应曲线。
[0937] 抗体及西方点墨法
[0938] 细胞在预设的条件下生长，并以下述的裂解缓冲溶液裂解：20mM托立斯缓冲液(Tris)、pH 7.4/150mM NaCl/1％乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40)/10％甘油/1 mM EDTA/1mM EGTA/5mM焦磷酸钠/50mM NaF/10nM β-甘油磷酸/1 mM
钒酸钠/0.5mM DTT/4μg/ml亮肽素 (Leupeptin)/4μg/ml抑肽素(pepstatin)/4μg/ml 载脂蛋 白(apoprotein)/1 mM PMSF。细胞溶解后，将裂解液于4℃下以16,000x g离心5分钟。取上清液用于后续步骤。西方点墨法分析，是将上清液经SDS/PAGE
电泳分析分离后再转印至硝基纤维素膜上。免疫点墨是根据抗体制造商的建议进行。抗体的结合是以增强型
化学发光系统(New England Nuclear Life Science Products Inc.)来侦测。抗-磷酸-Akt(Ser-473)、抗-全部Akt，以及抗-EGFR抗体自Cell Signaling Technology取得。磷酸-特异性EGFR(pYL068)、全部ERK1/2、磷酸-ERK1/2(pT185/pY187)的抗体均购自Biosource International公司。
[0939] 质谱图谱分析
[0940] 对于完整蛋白质的质谱分析，T790M单独以及与小分子量的蛋白质结合的蛋白质，注射进POROS 20 R2蛋白质井及以流速为100μL/min的0.05％三氟醋酸(TFA)去盐。蛋白质进入质谱仪以线性15％-75％(v/v)浓度梯度乙腈以50μL/min流速流经岛津高效液相色谱系统(Shimadzu HPLC system)(LC-10ADvp)超过4分钟，将蛋白质分离洗下。以LCT-Premier instrument(Waters Corp.，Milford，MA，USA)，透过标准的电喷雾源进行完整的蛋白质分析经过完整的分析。毛细管
电压为3.2kV以及样品锥电压(cone voltage)为35V。以氮气作为脱溶剂的气体。应用离子源的温度为175℃，脱溶剂的温度为80℃。注入500fmol/μL肌红蛋白溶液作为仪器的校正，所述仪器的侦测极限小于10ppm。
[0941] 胃蛋白酶的分解及胜肽分析
[0942] 为清楚显示修饰的位置，所有三种蛋白质(各50pmol)酶切脱下的胃蛋白酶∶受质比为1∶1。胃蛋白酶分解是在磷酸钾缓冲溶液(75mM KH2PO4/75mM K2HPO4)pH 2.5下进行。反应进行5分钟后就置于冰上。将处理后的胜肽注射至纳升级超高效液相色谱系统(Waters nanoAcquity UPLC)(Waters，Milford，MA)及捕获分离且以100μL/min脱盐3分钟，然后再以40μL/min流速通以8％-40％乙腈∶水梯度进行分离60分钟。分离管柱为1.0x 100.0mm ACQUITY UPLC C18 BEH(水相)包括1.7μm粒子。
[0943] 以装有标准ESI源的Waters QTOF Premier(Waters Corp.，Milford，MA，USA)获得质谱分析结果。仪器配置内容如下：毛细管3.5KV，蛋白质井的碰撞
能量为6V，样品锥电压为37V，源温度为100℃，脱溶剂温度为250℃。质谱分析的捕获范围为m/z 100至2000。质谱经过100fmol/μL GFP的校正以确保其准确度，所有实验的精确度小于10ppm。透过精确的
质量分析组合及Waters公司提供的自定义标示软体完成分解片段鉴定。为确保LC系统中所有的胜肽皆分散为适合大小的碎片，MSE藉由各种由低到高的碰撞能量从5-25V渐升执行。
[0944] 同属性群小鼠的生成及以WZ-4002治疗
[0945] EGFR-TL(T790M/L858R)小鼠生成以前述方法生成(Li，D.et al.Cancer Cell 12，81-93(2007))。EGFR外显子19缺失-T790M(TD)诱导双基因基转小鼠(bitransgenic mice)类似的产生及特征。简要地，外显子19的缺失，会诱导人类EGFR基因的透过定点导致所经区域的pTRE2-hyg-EGFR-T790M的突变。建构此基因，是经过XhoI酶切释出完整的对偶基因包括Tet-op-EGFR TD-β-球蛋白PolyA。基转小鼠是将建构的基因注射至FVB/N受精卵生成。子代的基因型经PCR却认为完全相同的基因型。创始人是交叉CCSP-rtTA基因型的小鼠及可诱导的双基因基转小鼠高度及诱导转殖基因突变hEGFR的表现经确定放大以进行后续的分析及实验。所有小鼠皆饲养在哈佛大学公共卫生学院无病源体的环境，且依实验室动物福利办公室所定义提供良好的动物照护，且所有动物实验皆经过Dana-Farber癌症研究所IACUC的批准。
[0946] EGFR TL/CCSP-rtTA及EGFR TD/CCSP-rtTA的同属性群在第5周岁时以喂食方式施加多西环素，以诱导突变EGFR的表现。在做各种治疗的同属性群研究之前，这些小鼠喂食多西环素后6至8周接受MRI以纪录及量化肺癌负担。每一治疗组别最少3只小鼠。小鼠单独以载体(NMP(10％1-甲基-2吡咯烷酮：90％PEG-300)治疗或配合每日25mg/kg灌胃给予WZ4002。治疗两周后，这些小鼠接受第二次的MRI纪录其治疗反应效果。MRI及肿瘤负荷测量方法如前所描述(Li，D.et at.Cancer Cell 12，81-93(2007)；Ji，H.et al.Cancer Cell 9，485-95(2006))。
[0947] MRI扫描及肿瘤体积测量
[0948] 小鼠以混合氧气/空气的1％异氟醚混合物麻醉。麻醉后小鼠的呼吸及心跳速率使用Biotrig软体加以监控。动物的反映图像以快速采集弛缓增强(rapid acquisition with relaxation enhancement)(RARE)
磁共振成像序列分析(TR＝2000ms，TE效果＝25ms)撷取，其冠状及轴面覆以1mm薄片及可足够
覆盖整个肺。基质的大小为128×128且
2
所有成像的
视野(FOV)为2.5cm×2.5cm。以相同的几何结构且如上所描述，所述小鼠也一个梯度回讯快速成像(GEFI)序列分析(TR＝180ms，TE effect＝2.2ms)呼吸及心脏闸(gating)，两者的冠状面和轴面。MRI扫描的详细描述已被描述于先前的技艺中(Li，D.et al.Cancer Cell 12，81-93(2007)；Ji，H.et al.Cancer Cell 9，485-95(2006))。
[0949] 免疫组织化学分析
[0950] 以苏木紫-伊红
染色法(Hematoxylin and eosin staining)筛选癌症细胞在布里格姆妇女医院病理部执行。免疫组织化学的进行以正规的固定石腊包覆肿瘤部分。所述抗体用于：总EGFR、磷酸化-EGFR YL068(细胞讯号介导技艺)及Ki67。细胞凋亡的测量方法是以H&E染色片段的核粒计数，再藉由原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl-transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling)(TUNEL)检测。
[0951] 药动学分析
[0952] 给药剂量：在投以药剂前所有小鼠随机的掂估其重量。静脉给药，新鲜配制的WZ-4002溶液，以剂量平均为1mg/kg经由尾巴静脉缓慢稳定的速度注射。静脉给药的加药量皆为5mL/kg。新鲜配制WZ-4002悬浮液经口给药的剂量为10mg/kg，经内脏
插管给药是使用16号口的喂养针。经口给药的加药量皆为10mL/kg。
[0953] 血样本：自每只老鼠的隐静脉
采血，定期收集血样本(0.06mL)。每个
采样点期间，所收集的血样本放置于含有抗凝血剂K2EDTA的标记微试管中。样品在4±2℃，离心4000转10分钟(离心机型号：久保田3500)。将每个样品回收血浆中的量转移至标记好的微试管中。在生物分析前所述血浆样品存放于-70℃。
[0954] 样品的生物分析：测定小鼠血浆中WZ-4002的生物分析方法使用LC-MS/MS仪器。所述方法是在部分样品验证之前分析。
[0955] 药动学的分析：WZ-4002的药动学参数，例如小鼠血浆中Tmax、Cmax、AUC、CL、Yd、Tv及生物可利用度侦测以浓度-时间数以非-区隔分析(WinNonlin Enterprise version5.2，Pharsight Corporation，USA)。
[0956] 血清肌酸酐(serum creatinine)及白血细胞数的分析
[0957] 血收集自载体及WZ-4002治疗小鼠，放置于适当的试管及在波士顿儿童医院的临床实验室进行分析。
[0958] 统计分析
[0959] 统计分析根据两尾测定法(two tailed Student’s t-test)测定。p值小于0.05表示有显着差异性。
[0960] 介于野生型EGFR及L858R/T790M或外显子19缺失/T790M EGFR突变株的选择性是以细胞增殖分析方法测定，所述细胞增殖完全依赖激酶的活性。举例来说，鼠类Ba/F3
细胞转染至野生型EGFR的适合形式(如VIII；包括WT EGFR激酶功能域)或以L858R/T790M或外显子19缺失/T790M转染Ba/F3细胞。增殖分析在抑制剂浓度(10uM、3uM、1.1uM、330nM、110nM、33nM、11nM、3nM、1nM)下执行且计算其EC50。举例来说，化合物2-2(WZ4002)相较于野生型EGFR(EC50＝157nM)，表现出约20倍选择性抑制L858R/T790M突变的Ba/F3的增殖(IC50＝8nM)，相较于野生型EGFR(EC50＝157nM)外显子-19缺失/T790M突变(EC50＝2nM)为80倍。
[0961] 另一种测量对EGFR活性效果的分析方法为EGFR磷酸化检测。分析野生型或突变(L858R/T790M或Del 19/T790M)EGFR转移入NIH-3T3细胞(没有正常表现内生性EGFR)及抑制剂(以如上所述的浓度)能抑制EGFR磷酸化。细胞暴露于增加浓度的抑制剂6小时且以EGF刺激10分钟。EGFR磷酸化影响是以磷酸-特异性(Y1068)EGFR抗体用西方点墨法分析。举例来说，需要化合物2-2(WZ4002)的浓度约为10-100nM完全抑制3T3细胞的L858R/T790M EGFR磷酸化，然而抑制野生型EGFR需要1-10uM。于此所述选择性的比率为10-100倍。
[0962] 参考文献提及的部分
[0963] 所有参考的内容(包括参考文献、公布的专利、申请公开的专利、并合作专利申请)，整个应用程序的引用，特此明确其整体并入本参考文献。除了文中另外定义外，本文所述的所有技艺及科学术语是根据通常知识所知的普通技艺之一。
[0964] 等效的
[0965] 该领域技艺人员可认出，或能确定使用不超过30例行实验，即可证明本发明此处所述等效的特异性实施例。所述等效是为了将下述权利要求书范围包括在内。
