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用于改善动脉粥样硬化和其它病变的G型多肽和其它剂

阅读：612发布：2020-07-19

专利汇可以提供用于改善动脉粥样硬化和其它病变的G型多肽和其它剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了新型的多肽和其它剂，其可改善动脉粥样硬化和/或其它以 炎症 反应为特征的病变的一种或多种症状。在一些 实施例 中，该多肽类似于载脂蛋白J的G*两性螺旋。该多肽高度稳定，容易通过口服途径施用。，下面是用于改善动脉粥样硬化和其它病变的G型多肽和其它剂专利的具体信息内容。

1.改善一种或多种炎症症状的肽，其中：
所述肽包括氨基酸序列LAEYHAK(SEQ ID NO：8)或KAHYEAL(SEQ ID NO：644)；且
所述肽包含至少一个D氨基酸和/或至少一个保护基团。
2.权利要求1的肽，其中所述肽包括至少一个D氨基酸。
3.权利要求2的肽，其中所述肽全部由D氨基酸构成。
4.权利要求1的肽，其中所述肽包含至少一个保护基团。
5.权利要求4的肽，其中所述肽在每个末端包含至少一个保护基团。
6.权利要求4的肽，其中所述保护基团从下面的保护基团中选择：酰胺、 3-20碳烷基、Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、 苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧三苯 甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、 4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基 (Pmc)、4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、 苯甲酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基) 乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰 基(2-Br-Z)、苄氧甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、叔-丁氧 基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、丙基、丁基、戊基、己基、N-甲基邻 氨基苯甲酰基、聚乙二醇(PEG)和三氟乙酰基(TFA)。
7.权利要求3的肽，其中所述肽包含至少一个保护基团。
8.权利要求3的肽，其中所述多肽在每个末端包含至少一个保护基团。
9.改善一种或多种炎症症状的肽，其中所述肽：
长度范围是大约3到大约10个氨基酸；
包含如下所述的氨基酸序列，该序列包含与一个或两个芳香、疏水或不 带电极性氨基酸交替出现的酸性或碱性氨基酸；
包含疏水末端氨基酸或带疏水保护基团的末端氨基酸；
不是全部由L氨基酸构成的序列LAEYHAK(SEQ ID NO：8)；其中所述 肽将促炎HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎。
10.改善一种或多种炎症症状的肽，其中所述肽包含如表3或14所示肽 的氨基酸序列或其多联体。
11.权利要求10的肽，其中所述肽包含至少一个D氨基酸。
12.权利要求11的肽，其中所述肽全部由D氨基酸构成。
13.权利要求10的肽，其中所述肽包含至少一个保护基团。
14.权利要求13的肽，其中所述肽在每个末端包含至少一个保护基团。
15.权利要求13的肽，其中所述保护基团从下面的保护基团中选择：酰 胺、3-20碳烷基、Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1- 羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲 氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基 (Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6- 磺酰基(Pmc)、4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄 基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚 环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴 苄氧羰基(2-Br-Z)、苄氧甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、 叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、丙基、丁基、戊基、己基、N- 甲基邻氨基苯甲酰基、聚乙二醇(PEG)和三氟乙酰基(TFA)。
16.根据权利要求12的肽，其中所述肽包含至少一个保护基团。
17.根据权利要求16的肽，其中所述肽在每个末端包含至少一个保护基 团。
18.改善一种或多种炎症症状的肽，其中：
所述多肽包括选自下组的氨基酸序列：DMT-Arg-Phe-Lys(SEQ ID NO：1)， DMT-Arg-Glu-Leu(SEQ ID NO：2)，Lys-Phe-Arg-DMT(SEQ ID NO：3)和 Leu-Glu-Arg-DMT(SEQ ID NO：4)，其中DMT是二甲基酪氨酸。
19.权利要求18的肽，其中所述肽包含至少一个D氨基酸。
20.权利要求19的肽，其中所述肽全部由D氨基酸构成。
21.权利要求18的肽，其中所述Arg是D氨基酸。
22.权利要求21的肽，其中所述肽在每个末端包含至少一个保护基团。
23.权利要求21的肽，其中所述保护基团从下面的保护基团中选择：酰 胺、3-20碳烷基、Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1- 羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲 氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基 (Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6- 磺酰基(Pmc)、4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄 基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚 环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴 苄氧羰基(2-Br-Z)、苄氧甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、 叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、丙基、丁基、戊基、己基、N- 甲基邻氨基苯甲酰基、聚乙二醇(PEG)和三氟乙酰基(TFA)。
24.权利要求19的肽，其中所述肽包含至少一个保护基团。
25.权利要求24的肽，其中所述肽在每个末端包含至少一个保护基团。
26.权利要求18的肽，其中所述肽从下面选择：Boc二甲基酪氨酸 -D-Arg-Phe-Lys(OtBu)(SEQ ID NO：5)及Boc二甲基酪氨酸-Arg-Glu-Leu(OtBu) (SEQ ID NO：6)。
27.权利要求9、1、10和18中任一项的肽，其中所述炎症是动脉粥样 硬化。
28.药物制剂，包含权利要求9-26任一项的肽和药学可接受的赋形剂。
29.权利要求28的药物制剂，其中该肽在经时释放制剂中。
30.权利要求28的药物制剂，其中该制剂配制为单位剂量制剂。
31.权利要求28的药物制剂，其中该制剂配制为口服施用。
32.权利要求28的药物制剂，其中该制剂配制为供通过选自下组的途径 施用：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注 射、经皮施用、吸入施用和肌肉内注射。
33.一种改善哺乳动物体内动脉粥样硬化症状的方法，所述方法包括向 所述哺乳动物施用一种或多种根据权利要求9-26中任一项的肽。
34.权利要求33的方法，其中所述肽处于药学可接受的赋形剂中。
35.权利要求33的方法，其中所述肽处于适合于口服施用的药学可接受 赋形剂中。
36.权利要求33的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
37.权利要求33的方法，其中所述施用包括通过选自下组的途径施用所 述肽：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注 射、经皮施用、吸入施用和肌肉内注射。
38.权利要求33的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有动脉粥样硬 化的一种或多种症状的哺乳动物。
39.根据权利要求33的方法，其中所述哺乳动物是被诊断具有中风或动 脉粥样硬化的危险性的哺乳动物。
40.根据权利要求33的方法，其中所述哺乳动物是人。
41.根据权利要求33的方法，其中所述哺乳动物是非人哺乳动物。
42.一种减轻或预防与哺乳动物中对炎症的急性期反应相关联的冠状动 脉并发症的方法，其中所述冠状动脉并发症是动脉粥样硬化症状，所述方法 包括向具有所述急性期反应或有所述急性期反应的危险性的哺乳动物施用一 种或多种根据权利要求9-26中任一项的肽。
43.权利要求42的方法，其中所述肽处于药学可接受的赋形剂中。
44.权利要求42的方法，其中所述肽处于适合于口服施用的药学可接受 赋形剂中。
45.权利要求42的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
46.权利要求42的方法，其中所述施用包括通过选自下组的途径施用所 述多肽：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下 注射、经皮施用和肌肉内注射。
47.权利要求42的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有动脉粥样硬 化的一种或多种症状的哺乳动物。
48.权利要求42的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有中风或动脉 粥样硬化危险性的哺乳动物。
49.权利要求42的方法，其中所述哺乳动物是人。
50.权利要求42的方法，其中所述哺乳动物是非人哺乳动物。
51.改善哺乳动物中糖尿病症状的方法，所述方法包括向所述哺乳动物 施用一种或多种权利要求9-26中任一项的肽。
52.权利要求51的方法，其中所述肽处于药学可接受的赋形剂中。
53.权利要求51的方法，其中所述肽处于适合于口服施用的药学可接受 赋形剂中。
54.权利要求51的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
55.权利要求51的方法，其中所述施用包括通过选自下组的途径施用所 述肽：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下注 射、经皮施用和肌肉内注射。
56.权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有动脉粥样硬 化的一种或多种症状的哺乳动物。
57.权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有中风或动脉 粥样硬化的危险性的哺乳动物。
58.权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是人。
59.权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是非人哺乳动物。
60.抑制哺乳动物中再狭窄的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用 表1-15所示的一种或多种肽和/或如本文所述的有机小分子。
61.权利要求60的方法，其中所述肽包含4F的氨基酸序列(SEQ ID NO：13)。
62.权利要求60的方法，其中所述肽处于药学可接受的赋形剂中。
63.权利要求60的方法，其中所述肽处于适合口服施用的药学可接受赋 形剂中。
64.权利要求60的方法，其中所述肽作为单位剂量制剂施用。
65.权利要求60的方法，其中所述施用包括通过选自下组的途径施用所 述多肽：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、皮下 注射、经皮施用和肌肉内注射。
66.权利要求60的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有一种或多种 动脉粥样硬化症状的哺乳动物。
67.权利要求60的方法，其中所述哺乳动物是被诊断为具有中风或动脉 粥样硬化的危险性的哺乳动物。
68.根据权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是人。
69.根据权利要求51的方法，其中所述哺乳动物是非人哺乳动物。
70.权利要求9-26任一项的肽，用于治疗选自下组的病症：动脉粥样硬 化、再狭窄、与哺乳动物中对炎症的急性期反应相关联的冠状动脉并发症， 和糖尿病。
71.权利要求9-26中任一项的多肽在制造用于治疗性或预防性处理选自 下组的病症的药物中的用途：动脉粥样硬化、再狭窄、与哺乳动物炎症急性 期反应相关联的冠状动脉并发症，和糖尿病。
72.一种用于递送药物到体内的血管的支架，包括：支架框，包含多个 形成于其中的储库；和位于储库内的一种或多种如表1-15所示的活性剂和/ 或如本文所述的有机小分子。
73.权利要求72的支架，其中所述活性剂是包含4F氨基酸序列(SEQ ID NO：13)的肽。
74.权利要求72的支架，其中所述活性剂包含在聚合物内。
75.权利要求72的支架，其中该支架框包含金属基材或聚合物基材之一。
76.权利要求72的支架，其中该支架框基材包含选自下组的材料：不锈 钢、镍钛金属互化物、钽、MP35N合金、铂、钛、合适的生物相容性合金、 合适的生物相容性聚合物及其组合。
77.权利要求72的支架，其中该储库包含微孔。
78.权利要求77的支架，其中该微孔的直径为大约20微米或更小。
79.权利要求77的支架，其中该微孔的直径在大约20微米到大约50微 米的范围内。
80.权利要求77的支架，其中该微孔的深度在大约10到大约50微米的 范围内。
81.权利要求77的支架，其中该微孔的深度为大约50微米。
82.权利要求77的支架，其中该微孔延伸穿过支架框，在支架的内表面 上有开口，并在支架的外表面上有开口。
83.权利要求77的支架，其进一步包括：设置在支架框内表面上的盖层， 该盖层覆盖所述通孔的至少一部分，并提供屏障特性，以控制药物聚合物中 的药物从支架框内表面洗脱的速度。
84.权利要求72的支架，其中该储库包含沿着支架框外表面的通道。
85.权利要求74的支架，其中所述聚合物包括具有第一药学特性的第一 药物聚合物的第一层，并且所述聚合物层包括具有第二药学特性的第二药物 聚合物。
86.权利要求74的支架，还包括位于包含活性剂的聚合物之间的屏障层。
87.权利要求72的支架，还包括：与支架框偶联的导管。
88.权利要求87的支架，其中该导管包括用于扩张支架的球囊。
89.权利要求87的支架，其中该导管包括可收缩而使支架得以扩张的外 壳。
90.一种制造药物-聚合物支架的方法，包括：提供支架框；在支架框内 切出多个储库；向至少一个储库施加包含一种或多种本文所述活性剂的组合 物；和干燥该组合物。
91.根据权利要求90的方法，进一步包括向干燥的组合物施加聚合物层； 和干燥该聚合物层。
92.一种用于治疗血管病症的方法，包括：
将根据权利要求72的支架定位在身体血管内；
扩张该支架；和
从支架的至少一个表面洗脱至少一种活性剂。
93.一种合成肽的方法，所述方法包括：
提供所述肽的至少3个不同的肽片段亚序列；和
在溶液相中偶联所述肽片段亚序列，以形成所述肽。
94.权利要求93的方法，其中所述肽的长度为6-37个氨基酸。
95.权利要求93的方法，其中所述肽的长度为18个残基。
96.权利要求93的方法，其中所述肽包括A类两亲性螺旋。
97.权利要求93的方法，其中所述肽包括氨基酸序列D-W-F-K- A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F(SEQ ID NO：13)。
98.权利要求97的方法，其中所有三条肽片段亚序列中每一个的长度均 为6个氨基酸。
99.权利要求97的方法，其中三条肽片段亚序列具有如下序列： D-W-F-K-A-F(SEQ ID NO：645)、Y-D-K-V-A-E(SEQ ID NO：646)和 K-F-K-E-A-F(SEQ ID NO：647)。
100.权利要求97的方法，其中所述肽全部由D氨基酸构成。

说明书全文

发明领域

本发明涉及动脉粥样硬化领域。具体地，本发明涉及鉴定一类肽，其 可口服施用，并改善动脉粥样硬化或其它以炎症反应为特征的病变的一种 或多种症状。

发明背景

他汀类药物(statins)(例如Mevacor@，立普妥(Lipito@))的引入使心脏 病发作和中风的死亡率降低到了大约三分之一。然而，心脏病发作和中风 仍然是致死或致残的主要原因，特别是在美国和西欧国家。心脏病发作和 中风是由一种称作动脉粥样硬化的慢性炎症导致的。
在心血管疾病的发生过程中涉及多种致病因素，包括疾病的遗传倾向 性、性别、生活方式因素如吸烟和饮食、年龄、高血压和高血脂，包括高 胆固醇血症。这些因素中的一些，特别是高血脂和高胆固醇血症(血胆固醇 浓度高)，是与动脉粥样硬化相关的重要危险性因素。
胆固醇以下述物质中的游离或酯化胆固醇的形式存在于血液中：脂蛋 白颗粒，一般称作乳糜微粒(chylomicron)；极低密度脂蛋白(VLDL)；低 密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。血液中总胆固醇的浓度受到如下 因素的影响：(1)从消化道吸收胆固醇，(2)由膳食成分，如碳水化合 物、蛋白质、脂肪和乙醇，合成胆固醇，和(3)通过组织，特别是肝，从 血液中移出胆固醇，之后胆固醇被转化成胆汁酸、类固醇激素和胆汁胆固 醇。
血胆固醇浓度的维持受遗传和环境因素二者的影响。遗传因素包括胆 固醇生物合成限速酶的浓度，肝中低密度脂蛋白受体的浓度，转换胆固醇 胆汁酸的限速酶的浓度，脂蛋白合成和分泌速度和人的性别。影响人体内 血胆固醇浓度稳态(hemostasis)的环境因素包括饮食结构、吸烟频率、体育 锻炼和多种药剂的使用。饮食变量包括脂肪(饱和和多聚不饱和脂肪酸)的量 和类型、胆固醇的量、纤维的量和类型、可能还有维生素，如维生素C和 D，以及矿物质如钙的量。
低密度脂蛋白(LDL)氧化与动脉粥样硬化的发病机制有着密切的关系。 已经发现，高密度脂蛋白(HDL)能够起保护作用，对抗LDL氧化，但是 在一些情况下，发现它会加速LDL氧化。动脉粥样硬化的重要起始因素包 括由LDL衍生的氧化磷脂的产生。
正常的HDL能够阻止这些氧化磷脂的形成，并且一旦形成了这些氧化 磷脂，HDL还能够使它们失活。然而，在一些环境下，HDL会从抗炎分子 转变成促炎分子，其实际上促进这些氧化磷脂的形成。
已有人提出HDL和LDL是先天免疫系统的一部分(Navab et al.(2001) Arterioscler Thromb Vasc Biol.21：481-488)。利用模拟HDL主要蛋白——载 脂蛋白A-I(apo A-I)——的A类两亲性螺旋肽已经成功生成了抗炎HDL(见 例如WO 02/15923)。
发明概述
本发明提供了新的组合物和方法来改善下述病症的症状：动脉粥样硬 化和其它炎症，例如类风湿性关节炎、红斑狼疮、结节性多动脉炎、骨质 疏松症、阿尔茨海默氏病，和病毒性疾病，如流行性感冒A。
在一些实施方案中，本发明提供了“分离的”多肽，其改善动脉粥样 硬化或其他与炎症反应有关的病变的症状，和/或包含这类多肽的组合物。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了改善一种或多种炎症症状的 肽，该肽包括氨基酸序列LAEYHAK(SEQ ID NO：2)或KAHYEAL(SEQ ID NO：638)；并且该肽包括至少一个D氨基酸和/或至少一个保护基团。 在一些实施例中，该肽包括D氨基酸和/或一个或多个保护基团(例如，在每 个末端的保护基团)。在多种实施例中，该保护基团包括一个或多个选自下 组的基团：酰胺、3-20碳烷基、Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧 基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲 基(Mtt)、4-甲氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三 甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8- 五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄 氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4- 二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧 羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰基(2-Br-Z)、苄氧甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、 叔-丁氧甲基(Bum)、叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、丙基、 丁基、戊基、己基、N-甲基邻氨基苯甲酰基(N-methyl anthranilyl)、聚乙 二醇(PEG)和三氟乙酰基(TFA)。
在一些实施方案中，本发明提供改善一种或多种炎症症状的肽，其中 该肽：长度为约3到约10个氨基酸；包括这样的氨基酸序列，该序列含有 与一个或两个芳香、疏水或不带电极性氨基酸交替出现的酸性或碱性氨基 酸；具有疏水末端氨基酸，或者带疏水保护基团的末端氨基酸；并且不是 全由L氨基酸组成的序列LAEYHAK(SEQ ID NO：2)；其中该肽将促炎 HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎。该肽可任选地包括一 个或多个D氨基酸和/或一个或多个保护基团，例如如上所述的基团。
在多种实施方案中，本发明提供的肽可改善一种或多种炎症症状，其 中该肽包括例如表3或14中的肽的氨基酸序列或者其多联体(concatamer)。 在一些实施方案中，该肽包括至少一个D氨基酸，在一些实施方案中，该 肽全部由D氨基酸组成。在多种实施例中，该肽额外地或者作为选择地包 括至少一个保护基团(例如在每个末端的保护基团)。一些合适的保护基团包 括，但不仅限于，酰胺、3-20碳烷基、Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、 9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基 三苯甲基(Mtt)、4-甲氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、 均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、 2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基 (MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基 (Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基 (2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰基(2-Br-Z)、苄氧甲基 (Bom)、环己氧基(cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基 (tBu)、乙酰基(Ac)、丙基、丁基、戊基、己基、N-甲基邻氨基苯甲酰基、 聚乙二醇(PEG)和三氟乙酰基(TFA)等。
在一些实施方案中，本发明提供可改善一种或多种炎症症状的肽，其 中该肽包括选自下组的氨基酸序列：DMT-Arg-Phe-Lys(SEQ ID NO：1)， DMT-Arg-Glu-Leu(SEQ ID NO：2)，Lys-Phe-Arg-DMT(SEQ ID NO：3)和 Leu-Glu-Arg-DMT(SEQ ID NO：4)，其中DMT是二甲基酪氨酸。同样，该肽 可以包括至少一个D氨基酸和/或至少一个保护基团，例如上文说明的基团。 在一些实施例中，该肽是Boc二甲基酪氨酸-D-Arg-Phe-Lys(OtBu)(SEQ ID NO：5)，或Boc二甲基酪氨酸-Arg-Glu-Leu(OtBu)(SEQ ID NO：6)。
本发明还考虑了药物制剂，其包括本文所述的任何活性剂(例如肽、有 机分子等)和药学可接受的赋形剂。在一些实施方案中，该活性剂是肽，并 且该肽被配制成经时释放(time release)剂型。在一些实施方案中，该制剂 被配制成单位剂量剂型。在一些实施方案中，配制该制剂以通过选自下组 的途径施用：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹膜内注射、血管内注射、 皮下注射、经皮施用和肌肉内注射。
本发明还提供了用于治疗或预防例如动脉粥样硬化、再狭窄、与哺乳 动物炎症急性期反应相关联的冠状动脉并发症、或糖尿病等病症的方法， 其中该方法包括向有需要的哺乳动物施用一种或多种本文描述的活性剂(例 如肽)。在一些实施方案中，活性剂处于药学可接受的赋形剂中(例如，适于 口服的赋形剂)，和/或可配制成单位剂量剂型。在多种实施方案中，施用包 括通过选自下组的途径施用活性剂：口服施用、鼻内施用、直肠施用、腹 膜内注射、血管内注射、皮下注射、经皮施用、吸入施用和肌肉内注射。 在多种实施方案中，该哺乳动物是被诊断为具有一种或多种动脉粥样硬化 症状的，和/或被诊断为有中风或动脉粥样硬化危险性的，和/或患有与炎症 急性期反应相关联的冠状动脉并发症或有其危险性的，和/或患有再狭窄或 具有其危险性的，和/或患有糖尿病或有其危险性的哺乳动物(例如人类)。
另外，还提供了如本文所述的活性剂(例如，肽)，用于治疗选自下 组的病症：动脉粥样硬化、再狭窄、与哺乳动物炎症急性期反应相关联的 冠状动脉并发症和糖尿病。在一些实施方案中，本发明提供如本文所述的 活性剂(例如肽)在制造用于治疗或预防选自下组的病症的药物中的用途： 动脉粥样硬化、再狭窄、与哺乳动物炎症急性期反应相关联的冠状动脉并 发症、和糖尿病。
在一些实施方案中，本发明还提供了用于将药物送递到体内血管中的 支架(stent)，其包括：其中形成多个储库的支架框，和位于储库内的一种或 多种如本文所述(例如表1-15中)的活性剂和/或如本文所述的有机小分 子。在多种实施方案中，该活性剂是包含4F的氨基酸序列(SEQ ID NO：13) 的肽。在多种实施方案中，该活性剂包含在聚合物内。在一些实施方案中， 该支架框包括金属基材或聚合物基材中的一种(例如，不锈钢、镍钛金属互 化物(nitinol)、钽、MP35N合金、铂、钛、合适的生物相容性合金、合 适的生物相容性聚合物、和其组合)。储库可任选地包含微孔，并且在一些 实施方案中，当存在微孔时，微孔的直径为大约20微米或者更小。在多种 实施方案中，当存在微孔时，微孔的直径为大约20-约50微米。在多种实 施方案中，当存在微孔时，微孔的深度为大约10-约50微米。在多种实施 方案中，微孔延伸穿过支架框，开口于支架的内表面上，并开口于支架的 外表面上。在一些实施方案中，支架进一步包括布置在支架框内表面上的 盖层(cap layer)，该盖层覆盖通孔的至少一部分，并提供屏障特性，以控 制药物聚合物中的药物从支架框内表面洗脱的速度。在一些实施方案中， 储库包括沿着支架框外表面的通道。在一些实施方案中，其中该聚合物包 括第一药物聚合物的第一层，其中该药物聚合物包括根据本发明的第一活 性剂，且该聚合物层包括具有活性剂或其它药物的第二药物聚合物。在多 种实施方案中，屏障层可定位在包含活性剂的聚合物层之间，或者位于聚 合物层的表面上。在多种实施方案中，导管与支架框偶联。该导管可任选 地包含用于扩张支架的装置，例如用于扩张支架的球囊(balloon)，可收 缩从而使支架得以扩张的外壳(sheath)等。
本发明还提供了制造药物-聚合物支架的方法，包括：提供支架框；在 支架框中切出多个储库；对至少一个储库施加包含一种或多种本文所述活 性剂的组合物；和干燥该组合物。该方法可任选地进一步包括向干燥的组 合物施加聚合物层；和干燥该聚合物层。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗血管病症的方法，包括将 支架(如本文所述)定位在身体血管内；扩张支架；并从支架的至少一个表面 洗脱至少一种活性剂。
还提供了合成本文所述多种肽的方法。在一些实施方案中，本发明提 供了合成肽的方法，其中该方法包括：提供所述肽的至少三条不同的肽片 段亚序列；和在溶液相中偶联该肽片段亚序列，从而形成该肽。在一些实 施方案中，该肽的长度为6-37个氨基酸。在一些实施方案中，该肽的长度 为18个残基。在一些实施方案中，该肽包括A类两亲性螺旋。在多种实施 方案中，该肽包括氨基酸序列 D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F(SEQ ID NO：13)。在多种实施方案 中，所有三条肽片段亚序列的每一条的长度为6个氨基酸。在一些实施方 案中，三条肽片段亚序列具有如下序列：D-W-F-K-A-F(SEQ ID NO：641)、 Y-D-K-V-A-E(SEQ ID NO：642)和K-F-K-E-A-F(SEQ ID NO：643)。在一些实 施方案中，该肽均由D氨基酸构成。
定义
在指示某种分离的多肽时，术语“分离的”、“纯化的”或“生物纯 的”是指，基本上没有通常在自然条件下与其伴随的成分的材料。对核酸 和/或多肽而言，该术语可指不再与其自然条件下侧翼连接的序列侧翼连接 的核酸或多肽。化学合成的多肽是“分离的”，因为它们不是在自然状态 下(例如，在血液、血清等等中)出现的。在一些实施方案中，术语“分离的” 说明多肽不存在于自然中。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可以互换使用，指氨基 酸残基的聚合物。该术语适用于这样的氨基酸聚合物，其中有一个或多个 氨基酸残基是相应的自然存在的氨基酸的人造化学类似物；也适用于自然 存在的氨基酸聚合物。
术语“两亲性螺旋肽”(amphipathic helical peptide)是指包括至少一 个两亲性螺旋(两亲性螺旋域)的肽。本发明的一些两亲性螺旋肽可包括两个 或多个(例如3、4、5个等)两亲性螺旋。
术语“A类两亲性螺旋”是指这样的蛋白质结构：其形成α-螺旋，使 极性和非极性面产生隔离，带正电荷的残基位于极性-非极性界面上，带负 电荷的残基位于极性面的中心(见例如，”Segrest et al.(1990)Proteins： Structure，Function，and genetics 8：103-117”)
“载脂蛋白J”(apo J)已知有多种名称，包括簇蛋白(clusterin)、TRPM2、 GP80和SP40，40(Fritz(1995)Pp 112 In：Clusterin；Role in Vertebrate Development，Function，and Adaptation(Harmony JAK Ed.)，R.G.Landes， Georgetown，TX)。它首先被描述为异源二聚体糖蛋白和培养的大鼠支持细 胞分泌蛋白的成分(Kissinger et al.(1982)Biol Reprod；27：233-240)。翻译产物 是单链前体蛋白，其经过细胞内切割成为二硫键连接的34kDa α亚单位和 47kDa β亚单位(Collard and Griswold(187)Biochem.，26：3297-3303)。它与细 胞损伤、脂质转运和凋亡相关，并且与清除由细胞损伤或死亡导致的细胞 碎片有关。簇蛋白已经显示能够以高亲和力与多种分子结合，包括脂类、 肽和蛋白质、以及疏水探针1-苯胺基-8-萘磺酸 (1-anilino-8-naphthalenesulfonnate)(Bailey et al.(2001)Biochem.， 40：11828-11840)。
G型两亲性螺旋存在于球蛋白中，因此称为G型。这类两亲性螺旋的 特征是，它在极性面上具有随机分布的带正电和带负电的残基，并具有窄 的非极性面。由于该窄非极性面，这类螺旋不容易和磷脂连接(见Segrest et al.(1990)Proteins：Structure，Function，and Genetics.8：103-117；另见 Erratum(1991)Protein：Structure，Function，and Genetics.9：79)。数种可以互换 的载脂蛋白的G型两亲性螺旋具有相似但不完全相同的特征。与G型两亲 性螺旋相似，该另一种类型的螺旋在极性面上也有随机分布的带正电和带 负电残基。然而，与具有窄非极性面的G型两亲性螺旋相反，这种类型具 有宽非极性面，从而使这种类型容易结合磷脂，因此这种类型被称作G*， 以与G型两亲性螺旋相区别(见Segrest et al.(1992)J.Lipid Res.，33：141-166； 另见Anantharamaiah et al.(1993)Pp.109-142，其在《The Amphipathic Helix》 (Epand，R.M.Ed CRC Press，Boca Raton，Florida)中)。Jones等((1992)J.Lipid Res.33：287-296)说明了用于识别和分类两亲性螺旋域的计算机程序，其包括 但不仅限于螺旋轮程序(helical wheel program)(WHEEL或 WHEEL/SNORKEL)、螺旋网程序(helical net program)(HELNET， HELNET/SNORKEL，HELNET/Angle)、用于添加螺旋轮的程序(program for addition of helical wheels)(COMBO或COMBO/SNORKEL)、用于添加螺旋网 的程序(program for addition of helical nets)(COMNET，COMNET/SNORKEL， COMBO/SELECT，COMBO/NET)、共有轮程序(consensus wheel program)(CONSENSUS，CONSENSUS/SNORKEL)等。
当用于“改善一种或多种动脉粥样硬化症状”时，术语“改善”是指 减少、防止或消除动脉粥样硬化和/或相关病变的一种或多种症状特征。这 种减少包括，但不仅限于，减少或消除氧化磷脂，减少动脉粥样硬化斑块 (plaque)的形成和破裂(rupture)，减少临床事件，例如心脏病发作、心 绞痛(angina)或中风，降低高血压，降低炎性蛋白质合成，减少血浆胆固 醇等。
术语“对映体氨基酸”是指以至少两种彼此呈不可重叠的镜像的形式 存在的氨基酸。大多数氨基酸(甘氨酸除外)是对映异构体，以所谓的L 型(L氨基酸)或D型(D氨基酸)存在。大多数自然存在的氨基酸是“L” 氨基酸。术语“D氨基酸”和“L氨基酸”用于指示氨基酸的绝对构型，而 不是平面偏振光的具体旋转方向。本文的使用与本领域技术人员的标准使 用一致。本文用标准1字母或3字母编码表示氨基酸，例如在《工业产品 信息和文献手册》(Handbook on Industrial Property Information and Documentation)中的标准ST.25中指定的。
术语“保护基团”是指当连接于在氨基酸的功能基团(例如侧链、α氨 基、α羧基等)上时能够阻挡(block)或掩盖(mask)该功能基团性质的化学 基团。优选的氨基端保护基团包括，但不仅限于，乙酰基或氨基。其它的 氨基端保护基团包括，但不仅限于烷基链，如脂肪酸中的烷基链、丙酰基 (propeonyl)、甲酰基等。优选的羧基端保护基团包括，但不仅限于，形 成酰胺或酯的基团。
短语“保护磷脂免受氧化剂氧化”是指化合物具有这样的能力：当磷 脂与氧化剂(例如过氧化氢、13-(S)-HPODE、15-(S)-HPETE、HPODE、HPETE、 HODE、HETE等)接触时，降低磷脂氧化速度(或氧化磷脂产生量)。
术语“低密度脂蛋白”或“LDL”是根据本领域技术人员的通常用法定 义的。一般地，LDL是指当通过超速离心分离时，在d＝1.019到d＝1.063的 密度范围发现的脂质-蛋白复合物。
术语“高密度脂蛋白”或“HDL”是根据本领域技术人员的通常用法 定义的。一般地，HDL是指当通过超速离心分离时，密度范围为d＝1.063 到d＝1.21的脂质-蛋白复合物。
术语“I族HDL”是指可减少氧化脂质(例如在低密度脂蛋白中)或保护 氧化脂质免受氧化剂氧化的高密度脂蛋白或其成分(例如apo A-I、对氧磷 酶、血小板活化因子乙酰水解酶等)。
术语“II族HDL”是指保护脂类免受氧化或者在修复(例如减少)氧化脂 类的活性降低或者没有该活性的HDL。
术语“HDL成分”是指构成高密度脂蛋白(HDL)的组分(例如分子)。 测定可保护脂类免受氧化或可修复(例如减少)氧化脂类的HDL，也包括测定 显示有这种活性的HDL组分(例如apo A-I、对氧磷酶、血小板活化因子乙 酰水解酶等)。
术语“人类apo A-I肽”是指全长的人类apo A-I肽，或其包含A类两 亲性螺旋的片段或区域。
本文使用的“单核细胞反应”是指与动脉粥样硬化斑形成相关联的“炎 症反应”的特征性单核细胞活性。单核细胞反应的特征是单核细胞粘附于 血管壁细胞(例如，血管内皮细胞)，和/或化学趋向进入内皮下间隙，和/或 单核细胞分化成巨噬细胞。
当指氧化磷脂的量时，术语“无改变”是指缺少可以检测到的改变， 更优选地，缺少统计学显著的改变(例如，至少为85％的置信度，优选地至 少为90％，更优选地至少为95％，最优选地至少为98％或99％的置信度)。 无可检测到的改变还可以指，测定中氧化磷脂的水平发生改变，但没有在 不存在本文所述蛋白质时那样多，或者没有其它阳性或阴性对照那样多。
本文使用如下的简写：PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油基-3- 磷酸胆碱；POVPC：1-棕榈酰-2-(5-氧戊酰)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；PGPC： 1-棕榈酰-2-戊二酸单酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱；PEIPC：1-棕榈酰-2-(5，6，-环氧 异前列腺烷E2)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1-palmitoyl-2-(5，6-epoxyisoprostane E2)-sn-glycero-3-phosphocholine)；ChC18:2：胆固醇亚油酸酯； ChC18:2-OOH：胆固醇亚油酸酯氢过氧化物(cholesteryl linoleate hydroperoxide)；DMPC：1，2-双十四酰(ditetradecanoyl)-消旋-甘油-3-磷酸胆 碱；PON：对氧磷酶；HPF：标准化高倍视野；PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花 生四烯酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；BL/6：C57BL/6J；C3H：C3H/HeJ。
用于蛋白质或肽的术语“保守取代”是指，不会显著改变分子的活性((例 如对脂蛋白的)特异性或(例如对脂类或脂蛋白的)结合亲和力)的氨基酸 取代。典型的保守氨基酸取代涉及用具有相似化学性质(例如电荷或疏水性) 的氨基酸取代另一种氨基酸。下面的六组分别包含通常可以互相保守取代 的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨 酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异 亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；和6)苯丙 氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
在两个或多个核酸或多肽序列中，术语“同一”或百分比“同一性” 是指，将两个或多个序列或亚序列按最大的对应度进行比较或比对，且使 用一种如下的序列比较算法或通过目测观察进行测量时，该两个或多个序 列或亚序列相同，或具有特定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸。关于本 发明的肽，序列同一性在肽的全长上确定。
对于序列比较，通常用一个序列作为参考序列，将测试序列与之比较。 当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入到计算机，如果需要的话， 指定亚序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指 定的程序参数计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。
用于比较的最优化序列比对可以通过如下手段进行：利用Smith & Waterman的局部同源性算法；Adv.Appl.Math.2：484(1981)，Needleman & Wunsch的同源性比对算法，J.Mol.Biol.48：443(1970)，Pearson & Lipman 的搜索相似性方法，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.85：2444(1988)，通过这些算 法的计算机化实现(Wisconsin的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA， Genetics Software Package，Genetic Computer Group，575 Science Dr.，Madison， WI)，或者目测检查(一般地参见Ausubel et al.，同上)。
有用算法的一个实例是PILEUP。PILEUP利用渐进(progressive)、成 对(pairwise)的比对从一组相关序列中生成一个多序列比对结果，显示关系 (relationship)和百分比序列同一性。它还描绘显示用于生成该比对结果的 聚类关系的树或树形图(dendogram)。PILEUP使用Feng & Doolittle渐进 比对方法(J.Mol.Evol.35：351-360(1987))的简化方法。所用的方法与Higgins & Sharp说明的方法(CABIOS 5：151-153(1989))相似。该程序可比对多达300 条序列，每条序列的最大长度为5,000核苷酸或氨基酸。多序列比对程序首 先成对比对两个最相似的序列，产生两条比对序列的类群(cluster)。然后将 该类群与下一条最相关的序列或已比对序列的类群进行比对。这两个序列 类群通过两条单独序列成对比对的简单扩展进行比对。最终的比对结果是 通过一系列的渐进、成对比对获得的。该程序是通过指定序列比较区的特 定序列及其氨基酸或核苷酸坐标，并指定程序参数来运行的。例如，一条 参考序列可以用如下的参数与其他测试序列进行比对，从而确定百分比序 列同一性关系：默认缺口权重(3.00)、默认缺口长度权重(0.10)和末段缺口权 重。
另一个适用于确定百分比序列同一性和序列相似度的算法实例是 BLAST算法，其说明见Altschul et al(1990)J.Mol.Biol.215：403-410。公众 可以通过国家生物技术信息中心( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)获得用于执行 BLAST分析的软件。该算法包括首先通过在查询序列中确定长度为W的短 字而确定高得分序列对(HSP)，其中该短字在与数据库序列中相同长度的字 比对时，或者匹配或者满足某个正值阈值分数T。T是指相邻字分数阈值 (Altschul et al，supra)。这些最初的命中相邻字起初始搜索种子的作用，以发 现含有它们的更长HSP。然后这些命中字沿着每条序列向两个方向一直延 伸，只要累积比对分数增加即可一直延伸。对于核苷酸序列，累积分数的 计算是使用参数M(一对匹配残基的赏分；总是＞0)和N(不匹配残基的罚分； 总是＜0)。对于氨基酸序列，使用得分矩阵计算累积分数。命中字沿每个方 向的延伸在如下情况下停止：累积比对分数与其达到过的最大值相比减少 了数量X；由于一个或多个负分残基比对结果的积累，使累积分数变为零 或者小于零；或达到序列的任一末端。BLAST算法参数W、T和X确定算 法的灵敏度和速度。BLAST程序(用于核苷酸序列)使用的默认值为：字长 度(W)为11，期望(E)为10，M＝5，N＝-4，双链比较。对于氨基酸序 列，BLASTP程序使用的默认值为：字长度(W)为3，期望(E)为10， 和BLOSUM62得分矩阵(见Henikoff & Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Aci. USA 89：10915)。
除了计算百分比序列同一性，BLAST算法还进行两个序列之间相似度 的统计分析(见例如Karlin & Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Aci.USA 90：5873-5877)。通过BLAST算法提供的一种相似度量度是最小加和概率(P (N))，其提供两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。 例如，如果比较测试核酸与参考核酸的最小加和概率小于大约0.1，更优选 地小于大约0.01，最优选地小于大约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。
附图简述
图1显示D4F(Navab，等，(2002)，Circulation，105：290-292)和由D 氨基酸制成的apoJ肽336(D-J336*)在共培养实验中对防止体外LDL诱导的 单核细胞趋化活性的效果的比较结果。该数据是在一式四份培养物 (quadruple culture)中的9个高倍视野内迁移的单核细胞数目的平均值±SD。 (D-J336＝Ac-LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE-NH2，SEQ ID NO：7)。
图2显示与用D-4F相比，用D-J336预处理动脉壁细胞来防止LDL诱 导的单核细胞趋化活性的效果。该数据是在四份培养物中的9个高倍视野 内迁移的单核细胞数目的平均值±SD。
图3显示在LDL受体缺失小鼠中，apoJ肽模拟物对HDL保护能力的 影响。该数据是在每一式四个测定孔中的9个高倍视野内迁移的单核细胞 数目的平均值±SD。
图4显示来自口服肽的apoE缺失小鼠(apoE null)的HDL针对LDL 诱导的单核细胞趋化活性的保护效果。该数据是在一式四个测定孔中的每 一个的9个高倍视野内迁移的单核细胞数目的平均值±SD。星号表示与无 肽HDL相比有显著差异(p＜0.05)。
图5显示口服apoA-I肽模拟物和apoJ肽对LDL的氧化易感性的影响。 数值是在一式四个测定孔中的每一个的9个高倍视野内迁移的单核细胞数 目的平均值±SD。星号表示与无肽mLDL相比有显著差异(p＜0.05)。
图6显示口服apoA-I肽模拟物和apoJ肽对HDL保护能力的影响。数 值是在一式四个测定孔中的每一个的9个高倍视野内迁移的单核细胞数目 的平均值±SD。星号表示与无肽mHDL相比有显著差异(p＜0.05)。
图7显示口服apoA-I肽模拟物和apoJ肽对血浆对氧磷酶活性的影响。 数值是一式四个血浆等份(aliquot)读数的平均值±SD。星号表示与无肽对照 血浆相比有显著差异(p＜0.05)。
图8显示在apoE-/-小鼠中，口服G*肽对HDL保护能力的影响。该数 值是一式四个血浆等份读数的平均值±SD。星号表示与无肽对照血浆相比 有显著差异(p＜0.05)。
图9显示在ApoE-/-小鼠中，口服G*肽，146-156，对HDL保护能力的 影响。
图10A-10C显示本发明某些肽的螺旋轮图。图10A：V2W3A5F10，17-D-4F；
图10B：W3-D-4F；图10C：V2W3F10-D-4F。
图11，向人动脉壁共培养物添加标准人LDL(“LDL”)，其中共培 养物没有(“无添加”)或者具有人HDL(+对照HDL)，或者具有来自 apoE缺失小鼠的鼠HDL，其中该小鼠或者给予食物过夜(“+食物HDL”)， 或者给予含D-4F的食物过夜(“+D4F HDL”)，或者给予含G5-D-4F的 食物过夜(“+G5 HDL”)，或者给予含G5，10-D-4F的食物过夜(“+5-10 HDL”)，或者给予G5，11-D-4F的食物过夜(“+5-11 HDL”)，并且所 产生的单核细胞趋化活性如先前所述地确定(Navab M，Anantharamaiah，GM， Hama S，Garber DW，Chaddha M，Hough G，Lallone R，Fogelman AM.Oral administration of an apo A-I mimetic peptide synthesized from D-amino acids dramatically reduces atherosclerosis in mice independent of plasma cholesterol. Circulation 2002；105：290-292)。
图12显示，本发明的肽可有效减轻糖尿病症状(例如血糖)。从26周龄 的肥胖Zucker大鼠取血，然后以每天腹膜内注射D-4F(5.0mg/kg/日)处 理。10天后，再次从大鼠取血，确定血浆葡萄糖和脂质过氧化物(LOOH)。 *p＝0.027；**p＝0.0017。
图13显示D4F对颈动脉球囊损伤的效果。16周龄肥胖Zucker大鼠用 D-4F(5mg/kg日)注射1周，此时它们已经经历了颈总动脉球囊损伤。两周 后处死大鼠，并确定内-中膜比(intimal media ratio)。
图14A-14K提供展示溶液相化学中产生的多种化合物的纯度的数据。
图15显示，溶液相合成方案的产物具有非常高的生成HDL和前βHDL 的生物活性，其中HDL和前βHDL抑制apoE缺失小鼠体内LDL诱导的单 核细胞趋化性。apo E缺失小鼠饲予5微克如上所述合成的D-4F(“片段”)， 或者给予小鼠相同量的不含D-4F的鼠粮(“食物”)。给食开始后12小时， 对小鼠取血，并在FPLC上分级血浆。向人动脉壁细胞共培养物中添加LDL (100微克LDL-胆固醇)，其中或者单独添加(“LDL”)，或者与对照人类 HDL(“对照HDL”)，或者与来自小鼠的HDL(50微克HDL-胆固醇)或 后-HDL(pHDL；前βHDL)一起添加，其中小鼠接受(“片段”)或者没有 接受(“食物”)D-4F，并确定所产生的单核细胞趋化活性。
图16显示本发明的多种肽对HDL对氧磷酶活性的影响。
图17显示LAEYHAK(SEQ ID NO：8)对单核细胞趋化活性的影响。
*p＜0.001+hHDL对hLDL；**p＜0.001+给肽后6小时猴HDL对+0时猴HDL； ***p＜0.001+给肽后6小时猴LDL对+0时猴LDL；‖p＜0.0010时+猴LDL 对hLDL。
图18A和18B显示根据本发明的支架的一个实施方案。图18A示意地 图解药物-聚合物支架1800，其包括支架框1820和在其中形成的多个储库 1830；和药物聚合物1840，其包含一种或多种本文所述的活性剂(例如4F、 D4F等)和任选的位于药物聚合物上的聚合物层。图18B示意地图解血管病 症治疗系统1850，其包括支架框1870、在支架框内形成的多个储库1890、 具有聚合物层的药物聚合物1880、和与支架框1880偶联的导管1040。导 管1860可以包括用于扩张支架的球囊，或者可收缩从而容许支架扩张的外 壳。药物聚合物1880包含一种或多种本文所描述的活性剂。药物聚合物层 可任选地包括屏障层、盖层或另一药物聚合物。聚合物层典型地为每种活 性剂提供特征性的可控药物洗脱。药物洗脱是指活性剂从药物聚合物1880 转移出去。确定药物聚合物排出的生物活性剂的总量作为洗出量，典型地 以单位重量例如微克计，或者以每支架外周面积的重量计。
发明详述
在一些实施方案中，本发明涉及鉴定多种可以有效改善动脉粥样硬化 或者其它以炎症反应为特征的病变的症状的活性剂(例如，肽和/或某些有机 小分子)。可以相信，施用一种活性剂或者组合施用两种或多种活性剂可以 有效地将促炎HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎。在一些 实施方案中，这种“转变”的特征是对氧磷酶活性升高。
一个惊人的发现是，某些两亲性螺旋肽，例如本文所述的A类和G*类 肽，以及本文所述的其它剂，具有抗炎性质，并且能够调节动脉粥样硬化 或其它以炎症反应为特征的病变(例如类风湿性关节炎、红斑狼疮、结节性 多动脉炎(polyarteritis nodosa)和骨质疏松症)的症状。
在一些实施方案中，该肽是两亲性螺旋肽类似物，该肽在极性面上分 布有带电残基(带正和/或负电的残基)，并具有宽非极性面(称为类球蛋白 (globular protein like)，G*)两亲性螺旋域。这种两亲性螺旋G*域是apo J 和某些其它载脂蛋白(apoprotein)(例如apo M，apo AI，apo AIV，apo E，apo CII，apo CIII等，但通常不包括apo A-II或apo C-I)的特征。
在一些实施方案中，本发明的肽包括或者由A类两亲性螺旋构成，且 本文说明的某些经过修饰的A类两亲性螺旋肽在分子的疏水面内有改变， 其提高了活性和/或血清半衰期。
在一些实施方案中，本发明的肽是含有至少一个二甲基酪氨酸的小肽。 另外还提供了含有或者包含氨基酸序列LAEYHAK(SEQ ID NO：8)的小肽， 该氨基酸序列含有一个或多个保护基团和/或一个或多个D残基。一些小肽 包括与芳香或疏水氨基酸交替出现的酸性或碱性氨基酸。某些前述的肽不 包括全部由L残基构成的LAEYHAK(SEQ ID NO：8)。
在多种实施方案中，本发明的肽优选的长度为大约6或10个氨基酸到 约100个氨基酸，更优选的长度为大约10到大约60或80个氨基酸，最优 选的长度为大约10、15或20个到大约40或50个氨基酸。在一些实施方 案中，肽的长度为大约6或10-大约30或40个氨基酸。本发明的一些特别 优选的肽与apo J或其片段(长度为大约10-大约40个氨基酸，例如在与所 述的肽相同长度的范围上)的序列同一性大于大约40％，优选地大于大约 50％或60％，更优选地大于大约70％或80％，最优选地大于大约90％或95％。
本发明的一个惊人发现是，这些肽，特别在包括一个或多个D型氨基 酸时，保留了相应L型肽的生物学活性。而且，这些肽显示体内活性，即 使在口服施用时也是如此。这些肽显示有更长的血清半衰期和更高的改善 或预防/抑制一种或多种动脉粥样硬化症状的能力。
我们发现，正常的HDL可抑制形成轻微氧化LDL的三个步骤。在这些 研究中(见例如WO 02/15923)，我们证实，用apo A-I或apo A-I模拟肽(37pA) 在体外处理人类LDL，可以从含HPODE和HPETE的LDL中除去种子分子。 这些种子分子是人类动脉壁细胞共培养物能够氧化LDL和LDL诱导动脉壁 细胞产生单核细胞趋化活性所必需的。我们还证实，在将apo A-I注射到小 鼠体内或者输注到人体内之后，从小鼠或者人类志愿者分离的LDL可抵抗 人类动脉壁细胞的氧化，并且不会在动脉壁细胞共培养物中诱导单核趋化 性。
不受具体理论限制，我们相信，本发明的活性剂发挥功能的方式与PCT 公开WO 2002/15923中说明的apo A-I模拟物的活性相似。特别地，可以相 信，本发明部分地通过提高HDL的抗炎性起作用。特别地，我们相信，本 发明的肽结合LDL内LDL氧化所必需的种子分子，随后将种子分子带离它 最终排出的位置。
我们证实，口服由D氨基酸合成的apo AI模拟肽可显著减轻小鼠体内 的动脉粥样硬化，与血浆或HDL胆固醇浓度的变化无关。与apo A-I模拟 物的作用相似，我们相信，由D氨基酸合成的模拟apo J两亲性螺旋域的合 成肽和其它本文所述的肽能够口服施用，或者通过其它方法施用，包括注 射，并且可改善动脉粥样硬化和其它慢性炎症。
在一些实施方案中，本发明的肽可以全部由L型氨基酸构成。然而， 包括一个或多个D型氨基酸的或者优选地全部由D型氨基酸构成的肽(全部 对映体氨基酸都是D型)可通过口服提供更有效的递送，并且在循环中更加 稳定。特别优选的肽的一个或两个末端都被封闭(例如，用N端乙酰化或 C端酰胺化)。
实例1例证了本发明肽的保护功能。新型肽阻止LDL诱导的人动脉壁 细胞的单核细胞趋化活性所需的体内浓度比apoA-I模拟物(D4F)需要的 浓度低10-25倍(图1中DJ336与D4F比较)。相似地，在预培养中，本 发明的肽阻止动脉壁细胞LDL氧化的效力高10-25倍(图2中DJ336与D4F 比较)。如图3所示，当向LDL受体缺失小鼠口服施用DJ335时，其基本 上与D4F同样有效地提高HDL防止LDL诱发的单核细胞趋化活性的保护 性。
图4显示，当添加到饮用水中时，本发明的肽(DJ336)提高apo E缺 失小鼠体内HDL保护能力的效力与D4F相同。图5显示，通过诱导单核细 胞趋化活性确定，添加到饮用水中时，本发明的肽DJ336使来自apo E缺失 小鼠的LDL对人动脉壁细胞氧化产生抗性的效力略高于D4F。图6显示， 通过测量单核细胞趋化活性的产生，确定了DJ336添加到饮用水中时，抑 制人动脉壁共培养物中的磷脂PAPC被氧化剂HPODE氧化的效力与D4F 相同(试验系统的解释见Navab et al(2001)J.Lipid.Res.42：1308-1317)。 图7证实，当添加到饮用水中时，DJ336提高apo E缺失小鼠对氧磷酶活性 的效力至少与D4F相同。
根据前文，在一个实施方案中，本发明提供了用于改善和/或防止动脉 粥样硬化和/或与炎症反应相关联的(以其为特征的)病变的一种或多种症 状的方法。该方法典型地包括向生物体，优选哺乳动物，更优选人类，施 用一种或多种根据本发明的肽或其它活性剂(或这些肽的模拟物)。这些 剂的施用方式，如本文所述的，可根据多种标准方法的任何方法，包括但 不仅限于，注射、栓剂、鼻喷雾、经时释放植入物(time-release implant)、透 皮贴(transdermal patch)等。在一个特别优选的实施方案中，所述肽通过口服 施用(例如，作为糖浆、胶囊或药片)。
尽管本发明是就人类用途进行说明的，但是它也适用于动物，例如兽 医用途。因此优选的生物体包括，但不仅限于，人类、非人类灵长动物、 犬科动物、马科动物、猫科动物、猪、有蹄动物、兔(largomorph)等。
本发明的方法不仅限于显示有一种或多种动脉粥样硬化症状(例如， 高血压、斑块形成和破裂、临床事件的减少如心脏病发作、心绞痛或中风、 高水平的血浆胆固醇、高水平的低密度脂蛋白、高水平的极低密度脂蛋白、 或炎性蛋白质等)的人类或非人类动物，还可用于预防。因此，本发明的 肽(或其模拟物)可以向生物体施用，防止一种或多种动脉粥样硬化症状 的发作/发生。这方面特别优选的对象是显示有一种或多种动脉粥样硬化危 险性因素(例如，家族史、高血压、肥胖、饮酒过多、吸烟、高血胆固醇、 高血甘油三酯、血中LDL、VLDL、IDL高、或HDL低、糖尿病或糖尿病 家族史、高血脂、心脏病发作、心绞痛或中风等)的受试者。
除了使用本发明的动脉粥样硬化抑制肽的方法之外，本发明还提供了 这些肽自身，被配制为制剂，特别是口服制剂的肽，和用于治疗和/或预防 一种或多种动脉粥样硬化症状的试剂盒。
I.处理方法
本文描述的活性剂(例如肽、有机小分子、氨基酸对等)可有效减轻 本文所述的适应症的一种或多种症状，和/或降低其发作速度(rate of onset) 和/或严重程度。特别地，本文所述的活性剂(例如肽、有机小分子、氨基 酸对等)可有效减轻一种或多种动脉粥样硬化症状。不受具体理论所限， 可以相信，这些肽与形成促炎氧化磷脂必需的“种子分子”结合，例如 Ox-PAPC、POVPC、PGPC和PEIPC。
此外，因为许多炎症和/或其他病变至少部分地受到氧化脂类的介导， 我们相信，本发明的肽可有效改善以生物活性氧化脂类的形成为特征的病 症。此外，本文所述的活性剂对于多种其他病症似乎也有效。
现在对本文所述活性剂似乎可以减轻和/或预防的多种病变进行说明。
A)动脉粥样硬化及相关病变
我们发现，正常的HDL在抑制轻微氧化LDL的形成中的三个步骤。特 别地，我们证实，通过用apo A-I或apo A-I模拟肽(37pA)体外处理人LDL， 从包含HPODE和HPETE的LDL中除去了种子分子。这些种子分子是人类 动脉壁细胞共培养物能够氧化LDL，以及LDL诱导动脉壁细胞产生单核细 胞趋化活性所必需的。我们还证实，在向小鼠注射或向人体输注apo A-I之 后，从注射/输注了apo A-I的小鼠或人志愿者分离的LDL可抵抗人动脉壁 细胞的氧化，不会在动脉壁细胞共培养物中诱导单核细胞趋化活性。
本发明多种活性剂的保护功能在多种相关应用中得到了证明(见例如， PCT公开WO2002/15923和WO2004/034977等)。WO2002/15923的图1 中，图面A、B、C和D显示了ApoE缺失小鼠体内14C-D-5F与血液组分的 结合。还证实，来自给食可导致动脉粥样化(atherogenic)的饮食并注射 PBS的小鼠的HDL不能抑制人LDL的氧化，也不能抑制人动脉壁共培养物 中LDL诱导的单核细胞趋化活性。对比地，来自给食可导致动脉粥样化的 饮食并每天注射根据本发明的肽的小鼠的HDL，与正常的人HDL一样有效 地抑制人LDL氧化并防止共培养物中LDL诱导的单核细胞趋化活性(WO 02/15923中的图2A和2B)。此外，取自给食可导致动脉粥样化的饮食并 注射PBS的小鼠的LDL与取自给食相同饮食并每天注射20μg肽5F的小鼠 的LDL相比，更加容易氧化，也更加容易诱导单核细胞趋化活性。D肽未 显示免疫原性(WO 02/15923中的图4)。
人动脉壁细胞对来自饲予可导致动脉粥样化的饮食并注射根据本发明 肽的小鼠的HLD和LDL的体外响应与这些肽的体内保护作用一致。尽管总 胆固醇、LDL-胆固醇和IDL+VLDL-胆固醇水平相似，且HDL-胆固醇占总 胆固醇的百分比较低，但是饲予可导致动脉粥样化的饮食并注射肽的动物 具有明显较低的损害评分(lesion scores)(WO 02/15923中的图5)。因此， 本发明的肽可以防止被饲予可导致动脉粥样化的饮食的小鼠体内动脉粥样 硬化损害的发展。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了通过施用一种或多种本文所 述的活性剂改善和/或防止一种或多种动脉粥样硬化症状的方法。
B)减轻与冠状动脉钙化(coronary calcification)和骨质疏松症有关的 症状或病症
血管钙化和骨质疏松症常常共存于同一个受试者中，Ouchi等((1993) Ann NY Acad Sci.，676：297-307)；Boukhris和Becker((1972)JAMA， 219：1307-1311)；Banks等((1994)Eur J Clin Invest.，24：813-817)；Laroche等 ((1994)Clin Rheumatol.，13：611-614)；Broulik和Kapitola((1993)Endocr Regul.，27：57-60)；Frye等((1992)Bone Mine.，19：185-194)；Barengolts等 ((1998)Calcif Tissue Int.，62：209-213)；Brnett和vasikaran((2002)Ann Clin Biochem.，39：203-210.)。Parhami等((1997)Arterioscl Thromb Vasc Biol.， 17：680-687)证实，轻微氧化的LDL(MM-LDL)和MM-LDL中的生物活性 脂类[也就是氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱) (Ox-PAPC)]，以及异前列腺烷(isoprostane)，8-异前列腺素E2，但不是未 氧化的磷脂(PAPC)或异前列腺烷8-异前列腺素F2α，在体外诱导钙化血 管细胞(CVC)的碱性磷酸酶活性和成骨细胞分化，但抑制MC3T3-E1骨 细胞的分化。
骨单位与动脉壁的相似之处在于，骨单位集中在内皮细胞覆盖(lined) 的内腔上，该内腔被含有基质(matrix)和类成纤维细胞(fibroblast-like cell) 的内皮下空间包围，该空间进一步被占据类似于动脉壁中平滑肌细胞位置 的前成骨细胞和成骨细胞包围(同前所引)。骨小梁成骨细胞还与骨髓内 皮下空间(同前所引)接界。Parhami等假定，脂蛋白能够穿过骨动脉的内 皮，并沉积在内皮下空间中，在那里它们被氧化，就如在冠状动脉的情况 一样(同前所引)。根据他们的体外数据，他们预测，骨动脉内皮下空间 和骨髓内的LDL氧化会导致成骨细胞分化和矿物化减少，这有助于骨质疏 松症(同前所引)。他们的假说进一步预测，LDL水平与骨质疏松症正相 关，正如与冠状动脉钙化正相关一样(Pohle et al.(2001)Circulation， 104：1927-1932)，但HDL水平与骨质疏松症负相关(Parhami et al.(1997) Arteroscl Thromb Vasc Biol.，17：680-687)。
在体外，骨髓基质细胞系M2-10B4的成骨细胞分化被MM-LDL但非天 然LDL抑制(Parhami et al.(1999)J Bone Miner Res.，14：2067-2078)。当培 养来自被饲予低脂肪饮食的动脉粥样硬化易感C57BL/6(BL6)小鼠的骨髓 基质细胞时，存在强的成骨分化(同上)。对比地，当培养来自被饲予高 脂肪、可导致动脉粥样化的饮食的小鼠的骨髓基质细胞时，它们没有经历 成骨分化(同上)。这个观察结果非常重要，因为它为在骨质疏松症的发 生中骨髓基质细胞的成骨潜力降低提供了可能的解释(Nuttall and Gimble(2000)Bone，27：177-184)。在体内，成骨潜力的降低伴随着骨质疏 松骨骼中脂肪生成增加(同上)。
发现向apoE缺失小鼠的饮水中添加D-4F6周，可以显著增加骨小梁骨 密度，并且可以相信，本发明的其它活性剂将具有相似的作用。
我们的数据表明，骨质疏松症能够看作是“骨的动脉硬化症”。其似 乎是氧化脂类作用的结果。HDL可破坏这些氧化的脂类，并促进成骨细胞 分化。我们的数据表明，向哺乳动物施用(例如，在apoE缺失小鼠的饮水 中)本发明的活性剂仅大约几周时间可显著增加骨小梁。
这表明，本文所述的活性剂可用于减轻一种或多种骨质疏松症状(例 如抑制脱钙)或者用于诱导骨质疏松骨的重新钙化。活性剂还可用作预防 药，防止哺乳动物(例如具有骨质疏松症危险性的患者)骨质疏松症的发 生。
我们相信，类似的机制也是导致冠状动脉钙化，例如钙化性主动脉狭 窄的原因。因此，在一些实施方案中，本发明考虑使用本文所述的活性剂 抑制或防止如下疾病症状，例如冠状动脉钙化、钙化性主动脉狭窄、骨质 疏松症等。
C)炎症和自身免疫适应症
慢性炎症和/或自身免疫病症也以许多活性氧类别的形成为特征，并且 可以使用本文所述的一种或多种活性剂加以治疗。因此，不为具体理论所 限，我们相信，本文所述的活性剂可用于预防或治疗性地减轻和/或抑制多 种其他病症的发作和/或其一种或多种症状，这些病症包括但不仅限于，类 风湿性关节炎、红斑狼疮、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、红斑狼疮、 多发性硬化等。
在一些实施方案中，活性剂可用于减轻一种或多种由这些病症中的炎 症反应导致的或与之相关联的症状。
另外，在一些实施方案中，活性剂可用于减轻一种或多种由与AIDS有 关的炎症反应导致的或与之有关的病症。
D)感染/创伤/移植
我们观察到，流感感染和其他感染的结果之一是HDL中对氧磷酶和血 小板激活乙酰水解酶活性的降低。不为具体理论所限，我们相信，在急性 期反应中，作为这些HDL酶活性损失的结果以及作为促氧化性 (pro-oxidant)蛋白与HDL关联的结果，HDL不再能够防止LDL氧化，也 不再能够防止内皮细胞的LDL诱导的单核细胞趋化活性的产生。
我们观察到，在感染流感病毒A之后每天注射极低剂量本发明的某些 制剂(例如，对于小鼠为20微克)的受试者体内，对氧磷酶活性没有降低， 产生的具有生物活性的氧化磷脂的产生也没有超过背景水平。这表明，4F、 D4F(和/或本发明的其他剂)可以向(包括例如，在流感感染期间已患有 冠状动脉疾病，或者会由于病毒感染、细菌感染、创伤、移植、多种自身 免疫症状等产生急性期炎症反应的)患者施用(例如口服或注射)，因此 我们能够通过这种短期治疗防止与产生这些炎症状态的病变相关联的心脏 病发作和中风发病率的增加。
此外，通过恢复和/或保持对氧磷酶的水平和/或单核细胞活性，本发明 的制剂可用于治疗感染(例如，病毒感染、细菌感染、真菌感染)和/或与 感染有关的炎症(例如脑膜炎)和/或创伤。
在一些实施方案中，由于联合了抗炎活性和抗感染活性，本文描述的 剂还可用于处理伤口或其他创伤，减轻与器官或组织移植、和/或器官或组 织移植排斥、和/或植入的假体、和/或移植动脉粥样硬化(transplant atherosclerosis)、和/或生物膜(biofilm)形成相关联的不利作用。此外，我 们相信，L-4F、D-4F和/或本文说明的其他制剂还可用于减轻脊髓损伤的影 响。
E)糖尿病及关联症状
还发现本文所述的多种活性剂具有减轻和/或防止一种或多种糖尿病关 联症状的效力。因此，在多种实施方案中，本发明提供了处理(治疗和/或 预防性)糖尿病和/或相关病变(例如I型糖尿病、II糖尿病、幼年型糖尿 病、糖尿病性肾病、肾病、糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病变等)的 方法。
F)抑制再狭窄
本文还证实，本发明的活性剂可有效抑制再狭窄，例如球囊血管成形 术(balloon angioplasty)之后的再狭窄。因此，例如图13显示了A类两亲性 螺旋肽D4F对颈动脉球囊损伤的效果。用D-4F(5mg/kg/日)注射16周龄 肥胖Zucker大鼠1周，此时对它们进行颈总动脉球囊损伤。两周后，处死 大鼠并确定内膜-中膜比。如图13所示，经过处理的动物体内再狭窄减少。
因此，在一些实施方案中，本发明考虑施用一种或多种本文所述的活 性剂，以减轻/预防再狭窄。这些制剂可以全身性施用(例如口服、注射等) 或者局部施用，例如通过使用药物洗脱支架和/或简单地通过在血管成形期 间局部施用。
G)减轻与急性炎症反应有关的动脉粥样硬化症状
本发明的活性剂还可用于多种用途。例如，我们观察到，心血管并发 症(例如动脉粥样硬化、中风等)经常伴随或者跟随急性期炎症反应的发 作，例如与复发性炎症、病毒感染(例如流行性感冒)、细菌感染、真菌 感染、器官移植、创伤或其它创伤等相关联的炎症反应。
因此，在一些实施方案中，本发明考虑向正在遭受急性炎症反应或有 急性炎症反应的危险性的，和/或具有或处于动脉粥样硬化症和/或相关病变 (例如中风)危险性的受试者施用一种或多种本文所述的活性剂。
因此，例如，具有冠状动脉疾病危险性的人在流感季节可以预防性地 施用一种或多种本发明的活性剂。患有类风湿性关节炎、多种自身免疫疾 病等复发性炎症的人(或动物)，可以用本文所述的一种或多种剂处理， 以减轻或防止动脉粥样硬化或中风的发生。患有如急性损伤、组织移植等 创伤的人(或动物)，可用本发明的多肽处理，以减轻动脉粥样硬化或中 风的发生。
在一些情况下，这些方法需要诊断急性炎症反应的出现或危险性。急 性炎症反应典型地涉及肝中代谢和基因调节的改变。它是一个动态内平衡 过程，除了免疫、心血管和中枢神经系统之外，还涉及机体所有主要系统。 通常，急性期反应只持续几天；然而，在慢性或复发性炎症情况下，急性 期反应某些方面的异常持续会促进与疾病相伴的基本组织损伤，并且还可 能导致进一步的并发症，例如心血管疾病或蛋白质沉积疾病，例如淀粉样 变。
急性期反应的一个重要方面是肝脏生物合成概况(biosynthetic profile)的 根本性改变。在正常情况下，肝脏以稳态浓度合成一组特征性的血浆蛋白 质。这些中的许多蛋白质具有重要功能，在炎症刺激之后的急性期反应期 间，需要更高血浆水平的这些急性期反应物(APR)或急性期蛋白(APP)。 尽管大多数ARP是通过肝细胞合成的，但是有一些是通过其它细胞类型合 成的，包括单核细胞、内皮细胞、成纤维细胞和脂肪细胞。大多数APR的 诱导比正常水平高50％到数倍。对比地，主要APR可增加至高于正常水平 1000倍。这些包括血清淀粉样蛋白A(SAA)和或者人体内的C反应蛋白 (CRP)或其小鼠中的同源物，血清淀粉样蛋白P组分(SAP)。在急性期 反应期间，所谓的负APR(negative APR)的血浆浓度降低，以便使肝脏合 成诱导APR的能力提高。
因此，在一些实施方案中，急性期反应或其危险性可以通过测量一种 或多种APP加以评估。测量这些标志物对于本领域技术人员而言是众所周 知的，并且有提供这种测量手段的商业公司(例如，通过Cardiotech Services， Louisville KY测量AGP)。
II.活性剂
多种活性剂可用于治疗一种或多种本文所讨论的适应症。这些剂包括， 但不仅限于，A类两亲性螺旋肽，在非极性面具有芳香或脂肪族残基的A 类两亲性螺旋肽的模拟物，小肽包括五肽、四肽、三肽、二肽和氨基酸对， Apo-J(G*肽)、和肽模拟物，例如下文所述的物质。
A)A类两亲性螺旋肽
在一些实施方案中，用于本发明方法的活性剂包括A类两亲性螺旋肽， 例如美国专利6,664,230和PCT公开WO 02/15923和WO 2004/034977中描 述的。已经发现，包含A类两亲性螺旋的肽(“A类肽”)除了能够减轻动 脉粥样硬化的一种或多种症状之外，还可用于治疗一种或多种本文所述的 其它适应症。
A类肽的特征是形成有α螺旋，其造成极性和非极性残基隔离，藉此 形成极性和非极性面，带正电的残基位于极性-非极性界面上，带负电的残 基位于极性面的中心(见例如，Anantharamaiah(1986)Meth. Enzymol，128：626-668)。注意，当折叠成3.667个残基/转角时，apo A-I的 第四个外显子(fourth exon)产生A类两亲性螺旋结构。
按照本文所述，对一个指定为18A的A类肽(见例如， Anantharamaiah(1986)Meth.Enzymol，128：626-668)进行修饰，产生可口服 施用的肽，并可高效抑制或防止动脉粥样硬化和/或本文所述其它适应症的 一种或多种症状。不限于具体理论，可以相信，本发明的肽可以在体内通 过拾取(picking up)种子分子，减轻LDL的氧化而起效。
我们确定，18A疏水面上Phe残基数目的增加理论上可以增加脂类亲和 力，这可通过Ralgunachari等(1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，& Vascular Biology 16：328-338描述的计算来确定。理论上，用Phe系统取代18A非极 性面中的残基可产生六种肽。具有额外2、3和4个Phe的肽的理论脂类亲 和力(λ)值分别为13、14和15个单位。然而，如果额外的Phe从4增加 到5，则λ值跳跃4个单位(到19个λ单位)。增加到6或7个Phe，将产 生较不显著的增加(分别到20和21个λ单位)。
我们制备了数种这样的A类肽，包括指定为4F、D4F、5F和D5F的肽 等。多种A类肽可以抑制动脉粥样硬化易感小鼠中身体损害的发生。此外， 这些肽在减轻本文所述多种病变的一种或多种症状中显示出不同但显著的 有效程度。表1列举了若干这样的肽。
表1.本发明使用的A类两亲性螺旋肽举例   肽名称                          氨基酸序列   SEQ ID   NO.  18A  2F  3F  3F14  4F  5F  6F  7F      D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     9     10     11     12     13     14     15     16     17     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     AC-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-NH2     Ac-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-L-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-NH2     Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     18     19     20     21     22     23     24     25     26     27     28     29     30     31     32     33     34     35     36     37     38     39     40     41     42     43     44     45     46     47     48     Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-L-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2     Ac-D-F-L-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH2     Ac-E-F-L-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH2     Ac-D-F-W-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-NH2     Ac-E-F-W-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-NH2     Ac-D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-NH2     Ac-D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH2     Ac-E-K-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-NH2     Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-V-D-K-F-A-E-K-F-K-E-A-Y-NH2     Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-V-Y-E-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH2     Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2     Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2     Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2     49     50     51     52     53     54     55     56     57     58     59     60     61     62     63     64     65     66     67     68     69     70     71     72     73     74     75     76     77     78     79   Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2   Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F-NH2   Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F-NH2   Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2   Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2   D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W-L   -K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F   D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F -P-D-W-L   -K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F   D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W-F   -K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F   D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F -P-D-K-L   -K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-L-K-E-A-F   D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L -P-D-K-W   -K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L   D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F -P-D-W-F   -K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F   D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F -P-D-W-L   -K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F   D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F -P-D-W-L   -K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F   Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2   Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH2     Ac-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2   Ac-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2   NMA-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2   NMA-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2   NMA-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     NMA-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2     NMA-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2   NMA-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   NMA-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   80   81   82   83   84   85   86     87     88     89     90     91     92     93     94   95     96   97   98   99   100     101     102   103   104     105     106     Ac-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   NMA-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2   Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH2   NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH2   Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NH2   NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NH2   Ac-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2   NMA-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2   Ac-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2   NMA-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2     107       108       109       110       111  
1接头用下划线标注
NMA是N-甲基邻氨基苯甲酰基(N-Methyl Anthranilyl)
在一些优选实施方案中，该肽包括4F(表1中的SEQ ID NO：13)的变 体，也称作L-4F，其中所有的残基都是L型氨基酸；或D-4F，其中有一个 或多个残基是D型氨基酸。在本文所述的任何肽中，C末端和/或N末端和 /或内部残基可以用一个或多个如本文所述的封闭基团加以封闭。
尽管表1中的多种肽都示例说明性地用乙酰基或N甲基邻氨基苯甲酰 基保护氨基末端，用酰胺基保护羧基末端，但是这些保护基团的任何一个 都可以被除去和/或用另一种本文所述的保护基团替换。在特别优选的实施 方案中，该肽包括一个或多个如本文所述的D型氨基酸。在一些实施方案 中，表1中肽的每一个氨基酸(例如每一个对映体氨基酸)都是D型氨基 酸。
还要指出，表1不是封闭性的。使用本文的教导，可以按常规制造其 它合适的A类两亲性螺旋肽(例如，通过保守或半保守取代(例如用E取 代D)、延伸、缺失等)。因此，例如，一个实施方案使用了一种或多种 本文所述的肽(例如，表1中SEQ ID NO：10-28和47-所指示的肽)的截短 形式。因此，例如，SEQ ID NO：29显示了这样一种肽，其包括14个来自 18A的C末端的氨基酸，其中包含一个或多个D氨基酸，而SEQ ID NO：30-46 显示了其它的截短形式。
更长的肽也是合适的。这种较长的肽可完全形成A类两亲性螺旋，或 者该A类两亲性螺旋(或多个螺旋)可形成该肽的一个或多个域。此外， 本发明考虑了肽的多聚体形式(例如多联体)。因此，例如，本文所述的 肽能够偶联在一起(直接地或者通过具有一个或多个插入氨基酸的接头(例 如碳接头(carbon linker)，或一个或多个氨基酸))。示例说明性的聚合 体肽包括18A-Pro-18A和SEQ ID NOs：86-93的肽，在一些实施方案中，包 括一个或多个D氨基酸，更优选地，每一个氨基酸都是如本文所述的D氨 基酸，和/或其一个或两个末端都被保护。
B)在非极性面具有芳香或脂肪族残基的apoA-I的其它A类两亲性螺 旋肽模拟物
在一些实施方案中，本发明还提供了经过修饰的A类两亲性螺旋肽。 一些优选的肽在非极性面的中心含有一个或多个芳香族残基，例如3FCπ(例 如存在于4F中)，或在非极性面的中心具有一个或多个脂肪族残基，例如 3FIπ，见例如表2。不受具体理论所限，我们相信，肽3FC非极性面上的中 心芳香族残基，由于非极性面中心π电子的存在，允许水分子渗透到肽-脂 类复合物的疏水脂类烃基链附近，这样使活性氧类别(例如脂氢过氧化物) 得以进入，使它们与细胞表面隔离。类似地，我们还相信，在非极性面中 心具有脂肪族残基的肽，例如3FIπ，可具有类似的作用，但效力不如3FCπ。
优选的肽将促炎HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎， 和/或减少LDL诱导的由动脉壁细胞产生的单核细胞趋化活性，其效果等于 或者大于D4F或者表1所示的其它肽。
表2.一些优选肽实例  名称     序列    SEQ ID NO  (3FCπ)  (3FIπ)  Ac-DKWKAVYDKFAEAFKEFL-NH2  Ac-DKLKAFYDKVFEWAKEAF-NH2     112     113
其他合适的A类肽的特征是，具有改进的疏水表面。这些肽的实例如 表3所示。
表3.具有改进疏水相的肽实例  名称                         肽  SEQ ID NO  V2W3A5F1017-D-4F    V2W3F10-D-4F    W3-D-4F                 Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Ala-Tyr-Asp-Lys-Phe-   Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Phe-Phe-NH2   Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Phe-   Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2   Ac-Asp-Phe-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-   Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2   Ac-Phe-Phe-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-Lys-   Asp-Tyr-Ala-Ala-Lys-Trp-Val-Asp-NH2   Ac-Phe-Als-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-Lys-   Asp-Tyr-Phe-Ala-Lys-Trp-Val-Asp-NH2   Ac-Phe-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-   Asp-Tyr-Phe-Ala-Lys-Trp-Phe-Asp-NH2     114       115       116       117       118       119  
本文所述的肽(V2W3A5F10，17-D-4F；V2W3F10-D-4F；W3-D-4F)可比 原本的D-4F效力更强。
C)较小的肽
另一个惊人的发现是，一些小肽，其最少由3个氨基酸构成，其中优 选地(但非必需的)有一个或多个氨基酸为其D型立体异构体，并具有疏 水域以允许脂肪蛋白相互作用，和亲水域以允许一定程度的水溶性，这样 的小肽也有显著的抗炎性质，并可用于治疗一种或多种本文所述的病变。 “小肽”典型地长度范围是2个氨基酸到大约15个氨基酸，更优选地为大 约3个氨基酸到大约10或11个氨基酸，最优选地长度范围是大约4个到 大约8个或10个氨基酸。在多种实施方案中，肽典型的特征是，具有疏水 末端氨基酸或具有通过与一个或多个疏水“保护”基团结合而称为疏水性 的末端氨基酸。多种“小肽”在共同待审的专利申请USSN 10/649,378(2003 年8月26日提出申请)和USSN 10/913,800(2004年8月6日提出申请) 和PCT专利申请PCR/US2004/026288中有说明。
在有些实施方案中，肽可以用下面的公式I表示：
X1-X2-X3n-X4    I
其中n是0或1，X1是疏水氨基酸和/或具有疏水保护基团，X4是疏水 氨基酸和/或具有疏水保护基团；并且当n为0时，X2是酸性或碱性氨基酸； 当n为1时，X2和X3是独立的酸性氨基酸、碱性氨基酸、脂肪族氨基酸或 芳香族氨基酸，其中当X2是酸性氨基酸时，X3是碱性氨基酸、脂肪族氨基 酸或芳香族氨基酸；当X2是碱性氨基酸时，X3是酸性氨基酸、脂肪族氨基 酸或芳香族氨基酸；当X2是脂肪族氨基酸或芳香族氨基酸时，X3是酸性氨 基酸或碱性氨基酸。
更长的肽(例如，长达10、11或15个氨基酸)也在本发明的范围内。 典型地，当较短的肽(例如根据公式I的肽)以酸性、碱性、脂肪族或芳香 族氨基酸为特征时，较长肽的特征是包含两个或多个相应类型氨基酸的酸 性、碱性、脂肪族或芳香族域。
1)活性小肽的功能性质
本发明的一个惊人发现是，通过许多物理性质预测本发明小肽(例如 小于10个氨基酸，优选地小于8个氨基酸，更优选地为大约3到大约5或 大约6个氨基酸)具有使HDL更加抗炎，减轻动脉粥样硬化和/或哺乳动物 中其他以炎症反应为特征的病变的能力。这些物理性质包括乙酸乙酯中的 高溶解性(例如，大于大约4mg/ml)，和在pH7.0缓冲水溶液中的溶解性。 在含水环境中，一旦与磷脂例如1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱 (DMPC)接触，特别有效的小肽可诱导或参与形成直径为大约 7.5nm(±0.1nm)的颗粒，和/或诱导或参与形成堆叠双层，双层尺寸大约为 3.4-4.1nm，堆叠双层之间的间隔为大约2nm，和/或诱导或参与形成大约 38nm的囊状结构。在一些优选实施方案中，小肽的分子量小于大约900Da。
因此，在一些实施方案中，本发明考虑了这样的小肽，其改善本文所 述适应症/病变的一种或多种症状，例如炎症，其中所述肽：长度范围是大 约3到大约8个氨基酸，优选地大约3到大约6或7个氨基酸，更优选地 大约3到大约5个氨基酸；在乙酸乙酯中以大于大约4mg/ml的浓度溶解； 在pH7.0的缓冲水溶液中可溶；当在含水环境下与磷脂接触时，形成直径 为大约7.5nm(±0.1nm)的颗粒，和/或形成双层尺寸大约为3.4-4.1nm、堆叠 双层之间的间隔为大约2nm的堆叠双层；分子量小于大约900道尔顿；可 将促炎HDL转变成抗炎HDL，或使抗炎HDL更加抗炎；不具有氨基酸序 列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO：249)，尤其是其中Lys-Arg-Asp和Ser全为L 氨基酸的序列。在一些实施方案中，这些小肽保护磷脂免受氧化剂的氧化。
尽管这些小肽不受限制，但在一些实施方案中，这些小肽能够包括如 下所述的小肽。
2)三肽
据发现，可合成一些三肽(3氨基酸肽)，其显示如本文所述的理想性 质(例如将促炎HDL转变成抗炎HDL的能力，降低LDL诱导的由动脉壁 细胞产生的单核细胞趋化活性的能力，能够增加前βHDL的能力等)。在 一些实施方案中，该肽的特征表示为式I中N为0，如下面的式II所示：
X1-X2-X4    II
其中末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，或者是因为有疏水侧链，或者 是因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封闭(例如，N末 端被Boc-，Fmoc-，烟酰基等封闭，C末端被(tBu)-OtBu等封闭)。在一些实 施方案中，X2氨基酸是酸性的(例如，天冬氨酸、谷氨酸等)或碱性的(例 如，组氨酸、精氨酸、赖氨酸等)。肽可以全部是L氨基酸，或包含一个 或多个D氨基酸，或全部都是D氨基酸。
本发明的一些优选的三肽包括，但不仅限于，表4所示的肽。
表4.具有疏水封闭基团和酸性、碱性或组氨酸中心氨基酸的一些优选 三肽实例  X1     X2   X3  X4  SEQ ID NO  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Trp  Boc-Trp  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Leu  Boc-Leu     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Glu     Glu     Asp     Asp     Arg     Arg     Glu     Glu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu     120     121     122     123     124     125     126     127     128     129     130     131     132     133   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Boc-Lys(εBoc)   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Boc-Glu   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Boc-Trp   Boc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Boc-Orn(δBoc)   烟酰Lys(εBoc)   烟酰Lys(εBoc)   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-norLeu   Fmoc-norLeu   Fmoc-norLeu   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)     Arg     Asp     Glu     Arg     Glu     Arg     Asp     Glu     Arg     Arg     Asp     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Arg     Asp     Glu     Arg     Arg     Asp     Glu     Arg     Arg  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu     134     135     136     137     138     139     140     141     142     143     144     145     146     147     148     149     150     151     152     153     154     155     156     157     158     159     160     161     162     163     164   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc))   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Trp     Glu     Glu     Asp     Asp     Glu     Arg     Arg     Glu     Glu     Asp     Asp     Arg     Glu     Asp     Asp     Arg     Glu     Glu     Asp     Asp     Arg     Glu     Asp     Arg     Glu     Asp     Glu     Asp     Asp     Glu     Arg  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Ile-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Phe-OtBu     165     166     167     168     169     170     171     172     173     174     175     176     177     178     179     180     181     182     183     184     185     186     187     188     189     190     191     192     193     194     195     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Fmoc-Trp     Boc-Phe     Boc-Phe     Fmoc-Phe     Boc-Glu     Boc-Leu     Boc-Leu     Boc-Lys(εBoc)     Boc-Lys(εBoc)     Boc-Lys(εBoc)     Boc-Lys(εFmoc)     Boc-Lys(εFmoc)     Boc-Lys(εFmoc)     Boc-Orn(δBoc)     Boc-Orn(δFmoc)     Boc-Phe     Boc-Phe     Boc-Phe     Boc-Phe     Boc-Trp     Boc-Trp     Boc-Trp     Boc-Trp     Boc-Phe     Glu     Asp     Asp     Arg     Glu     Arg     Asp     Glu     Arg     Glu     Asp     His     His     His     His     His     His     His     His     His     His     His     His     His     His     Lys     His     His     His     His     Lys  Phe-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Tyr-OtBu  Tyr-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  norLeu-OtBu  norLeu-OtBu  norLeu-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  norLeu-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Leu-OtBu     196     197     198     199     200     201     202     203     204     205     206     207     208     209     210     211     212     213     214     215     216     217     218     219     220     221     222     223     224     225     226   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-norLeu   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   烟酰Lys(εBoc)   烟酰Lys(εBoc)   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His   His  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  norLeu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu     227     228     229     230     231     232     233     234     235     236     237     238     239     240     241     242     243     244     245     246     247     248
尽管表4的肽显示具有特定的保护基团，但是需要注意，这些基团可 以用本文所述的其他保护基团替换，并且/或者可以去除一个或多个所示的 保护基团。
3)具有中心酸性和碱性氨基酸的小肽
在一些实施方案中，本发明肽的范围从4个氨基酸到大约10个氨基酸。 末端氨基酸通常是疏水的，这或者是由于疏水侧链，或者是由于末端氨基 酸具有一个或多个疏水保护基团。末端氨基酸(X1和X4)是疏水的，这或 者是由于具有疏水侧链，或者是由于侧链或C和/或N末端被一个或多个疏 水保护基团封闭(例如N末端被Boc-，Fmoc-，烟酰基等封闭，C末端被 (tBu)-OtBu等封闭)。典型地，肽的中心部分包含碱性氨基酸和酸性氨基酸 (例如，在4-mer中)，或者，在更长的分子中，包含碱性域和/或酸性域。
这些4-mer单位可用式I表示，其中X1和X4是疏水的，和/或具有如本 文所述的疏水保护基团，X2是酸性的，而X3是碱性的，或者X2是碱性的， 而X3是酸性的。肽可以全部是L-氨基酸，或者包含一个或多个D-氨基酸， 或全部都是D-氨基酸。
本发明的一些优选肽包括，但不仅限于表5所示的肽。
表5.具有中心酸性和碱性氨基酸的小肽的说明性实例  X1   X2   X3  X4   SEQ ID   NO  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Trp  Boc-trp  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Phe  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)   Arg   Arg   Arg   Arg   Arg   Arg   Arg   Arg   Arg   Asp   Glu   Asp   Arg   Glu   Asp   Glu   Glu   Glu   Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Glu  Glu  Arg  Arg  Arg  Glu  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  norLeu-OtBu  norLeu-OtBu  Ile-OtBu  Ile-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  norLeu-OtBu  norLeu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu     249     250     251     252     253     254     255     256     257     258     259     260     261     262     263     264     265     266     267   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Leu   Boc-Leu   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Boc-Lys(εBoc)   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Boc-Glu   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Boc-Trp   Boc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Boc-Orn(δBoc)   Nicotinyl Lys(εBoc)   Nicotinyl Lys(εBoc)   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu   Fmoc-Leu  Asp  Arg  Arg  Glu  Glu  Arg  Asp  Glu  Arg  Glu  Arg  Asp  Glu  Arg  Arg  Asp  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Asp  Glu  Arg  Arg  Glu  Glu  Arg  Arg  Asp  Arg  Arg  Glu  Arg  Asp  Arg  Arg  Glu  Asp  Arg  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Asp  Glu  Asp  Asp  Arg  Arg  Glu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Ile-OtBu  Leu-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Phe-OtBu  Tyr-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu   268   269   270   271   272   273   274   275   276   277   278   279   280   281   282   283   284   285   286   287   288   289   290   291   292   293   294   295   296   297   298   Fmoc-norLeu   Fmoc-norLeu   Fmoc-norLeu   Fmoc-norLeu   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εBoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc)   Fmoc-Lys(εFmoc))   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)   Boc-Lys(εFmoc)  Arg  Asp  Glu  Arg  Arg  Arg  Glu  Glu  Asp  Asp  Arg  Arg  Glu  Arg  Arg  Glu  Glu  Asp  Asp  Arg  Arg  Glu  Arg  Arg  Glu  Glu  Asp  Asp  Arg  Arg  Glu  Asp  Arg  Arg  Glu  Asp  Asp  Arg  Arg  Arg  Arg  Glu  Glu  Arg  Glu  Asp  Arg  Arg  Arg  Arg  Glu  Glu  Arg  Asp  Asp  Arg  Arg  Arg  Arg  Glu  Glu  Arg  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Leu-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Leu-OtBu   299   300   301   302   303   304   305   306   307   308   309   310   311   312   313   314   315   316   317   318   319   320   321   322   323   324   325   326   327   328   329   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Boc-Orn(δFmoc)   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Phe   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Trp   Fmoc-Phe   Arg   Glu   Arg   Asp   Asp   Arg   Glu   Arg   Asp   Arg   Glu   Asp   Arg   Glu   Asp   Arg   Glu   Asp   Arg   Glu   Arg   Arg   Glu   Asp   Arg   Glu   Arg   Asp   Arg   Glu   Arg   Glu   Arg   Asp   Arg   Arg   Asp   Arg   Glu   Arg   Glu   Arg   Arg   Glu   Arg   Arg   Glu   Arg   Arg   Glu   Arg   Asp   Glu   Arg   Arg   Glu   Arg   Asp   Arg   Glu   Arg   Asp   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Phe-OtBu   Phe-OtBu   Phe-OtBu   Tyr-OtBu   Tyr-OtBu   Tyr-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   norLeu-OtBu     330     331     332     333     334     335     336     337     338     339     340     341     342     343     344     345     346     347     348     349     350     351     352     353     354     355     356     357     358     359     360   Fmoc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Phe   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)   Boc-Lys(εBoc)     Arg     Lys     Asp     Lys     Glu     Lys     Asp     Lys     Glu     Lys     Asp     Lys     Glu     His     Asp     His     Glu     His     Asp     His     Glu     His     Asp     His     Glu     Lys     Asp     Lys     Glu     His     Asp  Glu  Asp  Lys  Glu  Lys  Asp  Lys  Glu  Lys  Asp  Lys  Glu  Lys  Asp  His  Glu  His  Asp  His  Glu  His  Asp  His  Glu  His  Asp  Lys  Glu  Lys  Asp  His   norLeu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Leu-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   Ile-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   norLeu-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   361   362   363   364   365   366   367   368   369   370   371   372   373   374   375   376   377   378   379   380   381   382   383   384   385   386   387   388   389   390   391  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)     His     Glu  Glu  His  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  392  393
尽管表5的所示的肽带有特定的保护基团，但是需要注意，这些基团 可以被其他如本文所述的保护基团替换，和/或可以消除一个或多个所示保 护基团。
4)具有中心酸性或碱性氨基酸及中心脂肪族氨基酸的小肽
在一些实施方案中，本发明肽的范围是4个氨基酸到大约10个氨基酸。 末端氨基酸典型地是疏水的，这或者是由于具有疏水侧链，或者是由于末 端氨基酸具有一个或多个疏水保护基团。末端氨基酸(X1和X4)是疏水的， 这或者是由于具有疏水侧链，或者是由于侧链或C和/或N末端被一个或多 个疏水保护基团封闭(例如N末端被Boc-，Fmoc-，烟酰基等封闭，C末端 被(tBu)-OtBu等封闭)。典型地，肽的中心部分包含碱性或酸性氨基酸和脂 肪族氨基酸(例如，在4-mer中)，或者，在更长的分子中，包含碱性域或 酸性域以及脂肪族域。
这些4-mer可用式I表示，其中X1和X4是疏水的，和/或具有如本文所 述的疏水保护基团，X2是酸性或碱性的，而X3是脂肪族的，或者X2是脂 肪族的，而X3是酸性或碱性的。肽可以全部是L-氨基酸，或者包含一个或 多个D-氨基酸，或全部都是D-氨基酸。
本发明的一些优选肽包括，但不仅限于表6所示的肽。
表6.在中心具有酸性或碱性氨基酸及中心脂肪族氨基酸的一些优选肽 的实例  X1    X2    X3  X4   SEQ ID NO  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)    Leu    Arg    Leu    Arg    Glu    Leu    Glu    Arg    Leu    Arg    Leu    Leu    Glu    Leu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu     394     395     396     397     398     399     400  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(Fmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc--Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)     Leu     Leu     Leu     Glu     Glu     Glu     Leu     Leu     Glu     Glu     Leu     Arg     Leu     Glu     Glu     Glu     Glu     Glu     Glu   Glu   Arg   Arg   Leu   Leu   Ile   Arg   Arg   Leu   Leu   Arg   Phe   Arg   Ile   Val   Ala   Gly   Leu   Leu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)   Thr(tBu)   Thr(tBu)   Thr(tBu)   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu     401     402     403     404     405     406     407     408     409     410     411     412     413     414     415     416     417     418     419
尽管表6所示的肽带有特定的保护基团，但是需要注意，这些基团可 以被其他如本文所述的保护基团替换，和/或可以消除一个或多个所示保护 基团。
5)具有中心酸性或碱性氨基酸及中心芳香族氨基酸的小肽
在一些实施方案中，本发明“小”肽的范围是4个氨基酸到大约10个 氨基酸。末端氨基酸通常是疏水的，这或者是由于具有疏水侧链，或者是 由于末端氨基酸具有一个或多个疏水保护基团。末端氨基酸(X1和X4)是 疏水的，这或者是由于具有疏水侧链，或者是由于侧链或C和/或N末端被 一个或多个疏水保护基团封闭(例如N末端被Boc-，Fmoc-，烟酰基等封闭， C末端被(tBu)-OtBu等封闭)。典型地，肽的中心部分包含碱性或酸性氨基 酸和芳香族氨基酸(例如，在4mer中)，或者，在更长的分子中，包含碱 性域或酸性域以及芳香族域。
这些4-mer可用式I表示，其中X1和X4是疏水的，和/或具有如本文所 述的疏水保护基团，X2是酸性或碱性的，而X3是芳香族的，或者X2是芳 香族的，而X3是酸性或碱性的。肽可以全部是L-氨基酸，或者包含一个或 多个D-氨基酸，或全部都是D-氨基酸。5-mer可用稍加修改的式I表示， 其中插入X5，如表7所示，并且其中X2通常是芳香族氨基酸。
本发明的一些优选肽包括，但不仅限于表7所示的肽。
表7.具有中心酸性或碱性氨基酸及中心芳香族氨基酸的一些优选肽的 实例  X1  X2   X3  X5  X4   SEQ ID   NO  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εBoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Fmoc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Lys(εFmoc)  Boc-Glu  Boc-Lys(εBoc)  Arg  Trp  Arg  Tyr  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg  Lys(εFmoc)  Arg   Trp   Arg   Tyr   Arg   Tvr   Tyr   Trp   Trp   Tyr   Tyr   Tyr   Trp   Trp   Tyr   Tyr   Tvr   Trp   Arg   Trp          Trp          Trp          Trp          Tyr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Trp-OtBu  Trp-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tbr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Trp-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Trp-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu  Tyr(tBu)-OtBu     420     421     422     423     424     425     426     427     428     429     430     431     432     433     434     435     436     437     438  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Arg  Arg  Arg  Arg  Arg   Tyr   Tyr   Tyr   Phe   Trp     Trp   Trp-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tbu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   439   440   441   442   443
尽管表7所示的肽带有特定的保护基团，但是需要注意，这些基团可 以被其他如本文所述的保护基团替换，和/或可以消除一个或多个所示保护 基团。
6)中心具有芳香族氨基酸或者被组氨酸分开的芳香族氨基酸的小肽
在一些实施方案中，本发明的肽以暴露在分子的中心的π电子为特征， 其允许粒子发生水合，从而使得肽粒子可以俘获促炎氧化脂类，例如脂肪 酸氢过氧化物和在sn-2位含有花生四烯酸氧化产物的磷脂。
在一些实施方案中，这些肽由最少4个氨基酸，最多大约10个氨基酸 组成，优选地(但非必需)，其中一个或多个氨基酸为该氨基酸的D-对映 体，末端氨基酸是疏水的，这或者是由于具有疏水侧链，或者是由于末端 氨基酸具有一个或多个疏水封闭基团(例如N末端被Boc-，Fmoc-，烟酰基等 封闭，C末端被(tBu)-OtBu等封闭)。这些肽在中心并不具有酸性或碱性氨 基酸，而是在中心一般具有芳香族氨基酸，或者被组氨酸分开的芳香族氨 基酸。
本发明的一些优选肽包括，但不仅限于表8所示的肽。
表8.具有中心芳香族氨基酸或者被一个或多个组氨酸分开的芳香族氨 基酸或芳香域的肽的实例  X1    X2  X3   X4   X5  SEQ ID NO  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)  Boc-Lys(εBoc)    Phe    Phe    Phe    Phe    Phe    Phe  Trp  Trp  Tyr  Tyr  His  His   Phe   Phe   Phe   Phe   Phe   Phe   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu   Ser(tBu)-OtBu   Thr(tBu)-OtBu     444     445     446     447     448     449  Boc-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Nicotinyl-Lys(εBoc)  Boc-Leu  Boc-Leu  Val  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Trp  Trp  Tyr  Tyr  His  His  Trp  Trp  Phe-Tyr  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Phe  Ser(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Thr(tBu)-OtBu  Ser(tBu)-OtBu  450  451  452  453  454  455  456  457  458
尽管表8所示的肽具有特定的保护基团，但是需要注意，这些基团可 以被其他如本文所述的保护基团替换，和/或可以消除一个或多个所示保护 基团。
7)三肽和四肽总结
为清晰起见，在下面表9中概括地总结了本发明的若干三肽和四肽。
表9.本发明一些肽的一般结构   X1   X2   X3   X4   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   酸性或碱性     碱性     酸性     酸性或碱性     脂肪族     酸性或碱性     芳香族   ----     酸性     碱性     脂肪族     酸性或碱性     芳香族     酸性或碱性   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团  芳香族  His芳香族   疏水保护基团   疏水侧链或   疏水保护基团
当较长的肽是理想的时候，X2和X3可代表域(例如两个或多个指定类 型氨基酸的区域)，而不是单个氨基酸。表9只是示例说明性的，而没有 限制意义。使用本文的教导，可以容易地确定其他合适的肽。
8)成对氨基酸和二肽
在一些实施方案中，本发明涉及这样的发现：某些氨基酸对在彼此联 合施用或连接形成二肽时，具有一种或多种本文所述的性质。因此，不受 具体理论所限，可以相信，当氨基酸对彼此联合施用时，如本文所述，它 们在体内能够参与或者诱导胶束形成。
类似于本文所述的其它小肽，可以相信，肽对可以在体内结合，并且 显示如下物理性质，包括在乙酸乙酯中具有高溶解性(例如大于大约 4mg/ml)，在pH7.0的缓冲水溶液中可溶。一旦在含水环境中与磷脂，例 如1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)接触，可以相信，氨基 酸对诱导或参与直径为大约7.5nm(±0.1nm)的微粒的形成，和/或诱导或参 与双层尺寸大约为3.4-4.1nm的堆叠双层的形成，该堆叠的双层之间间隔大 约2nm，和/或诱导或参与大约38nm的囊泡结构的形成。
而且，进一步相信，氨基酸对可显示一种或多种如下的生理相关性质：
1.它们将促炎HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎；
2.它们降低LDL诱导的由动脉壁细胞产生的单核细胞趋化活性；
3.它们刺激前βHDL的形成和循环；
4.它们提高HDL胆固醇；和/或
5.它们提高HDL的对氧磷酶活性。
这些氨基酸对可以作为单独的氨基酸施用(顺次或同时施用，例如以 联合制剂的形式)，或者它们能够直接地或通过接头(例如PEG接头、碳 接头、分支接头、直链接头、杂环接头、由衍生化脂类形成的接头等)) 共价偶联。在一些实施方案中，氨基酸对通过肽键共价连接，形成二肽。 在多种实施方案中，尽管二肽典型地包括两个氨基酸，其中每一个都附有 保护基团，但是本发明还试图包括如下二肽，其中只有一个氨基酸具有一 个或多个保护基团。
氨基酸对通常包括如下的氨基酸，其中每一个氨基酸与至少一个保护 基团(例如，如本文所述的疏水保护基团)连接。氨基酸可以是D或L型。 在一些实施方案中，成对的氨基酸并不彼此连接，每一个氨基酸具有两个 保护基团(例如，表10中的分子1和2)。
表10.本发明氨基酸对举例   氨基酸对/二肽   1.Boc-Arg-OtBu*   2.Boc-Glu-OtBu*   3.Boc-Phe-Arg-OtBu**   4.Boc-Glu-Leu-OtBu**   5.Boc-Arg-Glu-OtBu***
*通常与第二个氨基酸联合施用。
**在一些实施方案中，这些肽彼此联合施用。
***在一些实施方案中，这些肽或者单独施用，或者与本文所述的一种 其它肽联合施用
通过提供成对的受保护氨基酸和/或二肽，然后根据上文所述的一种或 多种物理和/或生理性质筛选氨基酸对/二肽，能够容易地鉴定合适的氨基酸 对。在一些实施方案中，本发明排除了包含天冬氨酸和苯丙氨酸的氨基酸 对和/或二肽。在一些实施方案中，本发明排除了如下的氨基酸对和/或二肽， 其中一个氨基酸是(-)-N-[(反式-4-异丙基环己烷)羰基]-D-苯丙氨酸(那格列 奈(nateglinide))。
在一些实施方案中，成对的氨基酸独立地从如下的组中选择：酸性氨 基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸等)，碱性氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、 组氨酸等)，和非极性氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、 脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸等)。在一些实施方案中，第一个 氨基酸是酸性或碱性时，第二个氨基酸是非极性，或者第二个氨基酸是酸 性或碱性时，第一个氨基酸是非极性。在一些实施方案中，第一个氨基酸 是酸性时，第二氨基酸是碱性，或者相反(见例如表11)。
通过施用二肽对，可以获得相似的组合。因此，例如在一些实施方案 中，表10中的分子3和4可以彼此联合施用。
表11.一些概括性的氨基酸对/二肽   第一氨基酸   第二氨基酸   1   2   3   4   5   6   酸性   碱性   酸性   非极性   碱性   非极性   碱性   酸性   非极性   酸性   非极性   碱性
注意，这些氨基酸对只是示例性的，而没有限制意义。使用本文的教 导，可以容易地确定其他合适的氨基酸对/二肽。
D)Apo-J(G*肽)
在一些实施方案中，本发明发现，模拟apo J两亲性螺旋域的肽(例如 多种apo-M衍生物)在保护LDL对抗动脉壁细胞氧化和降低LDL诱导的 由于人动脉壁细胞氧化LDL造成的单核细胞趋化活性方面特别有效，并且 能够减轻动脉粥样硬化和/或本文所述其它病变的一种或多种症状。
载脂蛋白J具有宽的非极性面，称作类球蛋白或G*两亲性螺旋域。G 型两亲性螺旋存在于球蛋白中，因此称作G型。这类两亲性螺旋的特征是 在极性面上随机分布带正电和带负电的残基，并具有窄的非极性面。由于 该窄非极性面，这类螺旋不容易与磷脂结合(见Segrest et al.(1990)Proteins： Structure，function，and Genetics.8：103-117；另见Erratum(1991)Protein： Structure，function，and Genetics.9：79)。有数种可以互换的载脂蛋白具有与 G两亲性螺旋相似但不相同的特征。与G型两亲性螺旋相似，这一类螺旋 在极性面上随机分布带正电和带负电的残基。然而，与具有窄非极性面的G 型两亲性螺旋相反，这类螺旋具有宽的极性面，使得这类螺旋容易与磷脂 结合，这类螺旋称作G*，以便与G型两亲性螺旋区别(见Segrest et al.(1992) J.Lipid Res.，33：141-166；另见Anantharamaiah et al.(1993)Pp.109-142，《In The Amphipathic Helix》，Epand，R.M.Ed.，CRC Press，Boca Raton，Florida)。
在如下的文献中说明了多种合适的G*两亲性螺旋：共同待审的专利申 请USSN 10/120,508，其于2002年4月5日提出申请，USSN10/520,207， 其于2003年4月1日提出申请，和PCT专利申请PCT/US03/09988，其于 2003年4月1日提出申请。此外，表12中列举了许多与apo J的G*两亲性 螺旋域相关的本发明的合适肽。
表12.本发明使用的与apo J的G*两亲性螺旋域相关的优选肽  氨基酸序列     SEQ ID NO  LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE  LLEQLNEQFNWVSRLANL  NELQEMSNQGSKYVNKEIQNAVNGV  IQNAVNGVKQIKTLIEKTNEE  RKTLLSNLEEAKKKKEDALNETRESETKLKEL  PGVCNETMMALWEECK  PCLKQTCMKFYARVCR  ECKPCLKQTCMKFYARVCR  LVGRQLEEFL  MNGDRIDSLLEN  QQTHMLDVMQD  FSRASSIIDELFQD  PFLEMIHEAQQAMDI  PTEFIREGDDD  RMKDQCDKCREILSV  PSQAKLRRELDESLQVAERLTRKYNELLKSYQ  LLEQLNEQFNWVSRLANLTEGE  DQYYLRVTTVA  PSGVTEVVVKLFDS  PKFMETVAEKALQEYRKKHRE     459     460     461     462     463     464     465     466     467     468     469     470     471     472     473     474     475     476     477     478
然而，本发明的肽并不仅限于apo J的G*变体。一般而言，基本上来 自于任何其他蛋白质，优选apo蛋白质的G*域也是合适的。利用保护活性 测定(例如，保护LDL免于氧化等)，如本文实例中的举例，能够容易地 确定这些蛋白质具体的合适度。一些特别优选的蛋白质包括如下蛋白质的 G*两亲性螺旋域或其变体(例如，保守取代等)，这些蛋白质包括但不仅 限于apo AI、apo AIV、apo E、apo CII、apo CIII等。
表13列举了本发明使用的与除apo J之外的载脂蛋白相关的G*两亲性 螺旋域相关的一些优选肽。
表13.本发明使用的与除apo J之外的载脂蛋白相关的
G*两亲性螺旋域相关的优选肽 氨基酸序列     SEQ ID NO WDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQF (与apo AI的8到33区域相关) VATVMWDYFSQLSNNAKEAVEHLQK (与AIV的7到31区域相关) RWELALGRFWDYLRWVQTLSEQVQEEL (与apo E的25到51区域相关) LSSQVTQELRALMDETMKELKELKAYKSELEEQLT (与apoE的52到83区域相关) ARLSKELQAAQARLGADMEDVCGRLV (与apoE的91到116区域相关) VRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLA (与apoE的135到160区域相关) PLVEDMQRQWAGLVEKVQA (apo E.27的267到285) MSTYTGIFTDQVLSVLK (与apo CII的60到76区域相关) LLSFMQGYMKHATKTAKDALSS (与apo CIII的8到29区域相关)     479       480       481       482       483       484       485       486       487  
E)从apo-M衍生的G*肽
其他在本发明方法中有效的G*肽包括，但不仅限于，从apo-M衍生的 G*肽。
表14.G*肽举例                                       肽     SEQ     ID     NO   Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2   Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2   Ac-Lys-Trp-Leu-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2   Ac-Lys-Trp-Val-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     488     489     490     491     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Leu-Tyr-His-Val-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Val-Tyr-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Val-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Phe-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Leu-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Ile-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-Leu-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Ser-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Thr-Ser-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Glu-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Tyr-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Val-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Ser-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Ser-Glu-Gly-NH2   492   493   494   495   496   497   498   499   500   501   502   503   504   505   506   507   508   509   510   511   512   513   514   515   516   517   518   519   520   521   522     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Ser-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Ser-Asp-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Tyr-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Phe-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Phe-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Tyr-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2     Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2     Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala     -Phe-NH2     Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala     -Phe-NH2     Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Asp-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala     -Phe-NH2     523     524     525     526     527     528     529     530     531     532     533     534     535     536     537     538     539     540     541     542     543     544     545     546     547     548     549     550     551       552       553     Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Asp-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Asp-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Ser-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Ser-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Ser-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Ile-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Leu-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2     554     555     556     557     558     559     560     561     562     563     564     565     566     567     568     569     570     571     572     573     574     575     576     577     578     579     580     581     582     583   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Ser-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Leu-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Arg-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2     Ac-Asp-Arg-Ala-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Arg-Ala-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Tyr-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Trp-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2   Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe   -Phe-NH2     584     585     586     587     588     589     590     591     592     593     594     595     596     597     598     599     600     601     602     603     604     605     606       607     608     609     610     611     612     613   Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2   Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala   -Phe-NH2     614     615
其他合适的肽包括但不仅限于表15的肽。
表15.具有改进的疏水相的肽举例  名称                                肽     SEQ ID     NO  V2W3A5F1017-D-4  F  V2W3F10-D-4F    W3-D-4F                Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Ala-Tyr-Asp-Lys-Phe-Ala-Glu-Lys  -Phe-Lys-Glu-Phe-Phe-NH2  Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Phe-Ala-Glu-Lys  -Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2  Ac-Asp-Phe-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu-Lys  -Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2  Ac-Phe-Phe-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-Lys-Asp-Tyr-Ala  -Ala-Lys-Trp-Val-Asp-NH2  Ac-Phe-Als-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-Lys-Asp-Tyr-Phe  -Ala-Lys-Trp-Val-Asp-NH2  Ac-Phe-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Asp-Tyr-Phe  -Ala-Lys-Trp-Phe-Asp-NH2     616       617       618       619       620       621  
本文所述的肽(V2W3A5F10、17-D-4F；V2W3F10-D-4F；W3-D-4F) 可以具有比原始D-4F更强效。
另外的合适肽包括，但不仅限于，P1-二甲基酪氨酸-Arg-Phe-Lys-P2(SEQ ID NO：1)和P1-二甲基酪氨酸-Arg-Glu-Leu-P2(SEQ ID NO：2)，其中P1 和P2是如本文所述的保护基团。在一些实施方案中，这些肽包括，但不仅 限于，Boc二甲基酪氨酸-D-Arg-Phe-Lys(OtBu)(SEQ ID NO：5)和Boc二甲 基酪氨酸-D-Arg-Glu-Leu(OtBu)(SEQ ID NO：6)。
在一些实施方案中，本发明的肽包括这样的肽，所述肽包含氨基酸序 列LAEYHAK(SEQ ID NO：8)或者由该序列构成，该序列包括至少一个D 氨基酸和/或至少一个或两个末端保护基团。在一些实施方案中，本发明包 括A肽，其改善一种或多种炎症症状，其中该肽：长度为大约3到大约10 个氨基酸；包含这样的氨基酸序列，该序列包含与芳香或疏水氨基酸交替 出现的酸性或碱性氨基酸；包含疏水末端氨基酸或者末端氨基酸具有疏水 保护基团；不是全部由L氨基酸构成的序列LAEYHAK(SEQ ID NO：8)； 其中该肽可以将促炎HDL转变成抗炎HDL和/或使抗炎HDL更加抗炎。
还要指出，本文表中列举的肽并未包括全部。使用本文的教导，可以 按常规制造其他合适的肽(例如通过保守或半保守取代(例如用E取代D)、 延伸、缺失等)。因此，例如，一个实施方案采用SEQ ID Nos：459-487所 指定的任何一个或多个肽的截短序列。
更长的肽也是合适的。这些更长的肽可以完全形成G或G*类两亲性螺 旋，或者G两亲性螺旋能够形成该肽的一个或多个域。此外，本发明包含 肽的多聚体形式。因此，例如，本文表中列举的肽可以偶联在一起(直接 地，或者通过具有一个或多个插入氨基酸的接头(例如碳接头，或一个或 多个氨基酸))。合适的接头包括，但不仅限于，脯氨酸(-Pro-)、Gly4-Ser3(SEQ ID NO：622)等。因此，根据本发明的一个示例说明性的多聚体肽是 (D-J336)-P-(D-J336)(即，Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q- G-E -P-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2，SEQ ID NO：623)。
本发明还试图使用“杂交”肽，其包括一个或多个G或G*两亲性螺旋 域和一个或多个A类两亲性螺旋。合适的A类两亲性螺旋肽在PCT公开 WO 02/15923中有说明。因此，作为示例，一个这样的“杂交”肽是 (D-J336)-Pro-(4F)(即， Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E -P-D-W-F-K-A- F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2，SEQ ID NO：624)，或类似物。
使用本文的教导，技术人员能够按常规修饰所示的两亲性螺旋肽，产 生本发明的其他合适的apo J变体和/或两亲性G和/或A螺旋肽。例如，可 以对现有的氨基酸进行常规的保守或半保守取代(例如用E取代D)。多 种取代物对所产生的肽的脂质亲和力的影响可以用Palgunachari等(1996)说 明的计算方法进行预测(Arteriosclerosis，Thrombosis，& Vascular Biology 16：328-338))。这些肽可以延长或缩短，只要保持类型的螺旋结构即可。 此外，可进行取代，使所得的肽与对象物种内源产生的肽更加相似。
尽管，在优选实施方案中，本发明的肽利用天然存在的氨基酸或天然 存在氨基酸的D型，非天然存在的氨基酸(例如甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸 甲基锍、正亮氨酸、ε-氨基己酸、4-氨基丁酸、四氢异喹啉-3-羧酸、8-氨基 辛酸、4-氨基丁酸、Lys(N(ε)-三氟乙酰)、α-氨基异丁酸等)的取代产物也在 本文考虑之内。
使用计算方法可以对新肽进行设计和/或评估。识别和分类两亲性螺旋 域的计算机程序对于本领域技术人员而言是众所周知的，在Jones et al.(1992) J.Lipid res.33：287-296中有描述。这些程序包括，但不仅限于，螺旋轮程序 (WHEEL或WHEEL/SNORKER)、螺旋网程序(HELNET， HELNET/SNORKEL，HELNET/Angle)、用于添加螺旋轮的程序(COMBO 或COMBO/SNORKEL)、用于添加螺旋网的程序(COMNET， COMNET/SNORKEL，COMBO/SELECT，COMBO/NET)、共有轮程序 (consensus wheel program)(CONSENSUS，CONSENSUS/SNORKEL)等。
E)封闭基团和D残基
尽管本文所述的多种肽和/或氨基酸对可能显示没有保护基团，但是在 一些实施方案中(例如，特别是用于口服施用的)，它们可具有一个、两 个、三个、四个、或更多保护基团。保护基团可以和肽的C和/或N末端连 接，和/或与构成肽的一个或多个内部残基相连(例如，可封闭组成氨基酸 上的一个或多个R基团)。因此，例如，在一些实施方案中，任何本文所 述的肽可以具有，例如，保护氨基末端的乙酰基，和/或保护羧基末端的酰 胺基。这种“双”保护肽的一个实例是 Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2(具有封闭基团的 SEQ ID NO：459)，这些保护基团的任一或两者都可被除去和/或被另一种如 本文所述的保护基团取代。
不受限于具体理论，本发明发现，封闭，特别是封闭本发明对象肽的 氨基和/或羧基末端，可大大改善口服递送，并显著提高血清半衰期。
多种保护基团均适用于本目的。这些基团包括，但不仅限于，乙酰基、 酰胺、烷基，其中乙酰基和烷基特别优选用于保护N末端，且酰胺特别优 选用于保护羧基末端。在一些特别优选的实施方案中，保护基团包括，但 不仅限于，如脂肪酸中的烷基链、丙酰基、甲酰基等。特别优选的羧基保 护基团包括酰胺、酯和成醚保护基团。在一个优选实施方案中，使用乙酰 基保护氨基末端，用酰胺基保护羧基末端。这些封闭基团提高肽的成螺旋 趋势。一些特别优选的封闭基团包括多种长度的烷基，例如具有如下表达 式的基团：CH3-(CH2)n-CO-，其中n的范围是大约1-大约20，优选地大约1 到大约16或18，更优选大约3到大约13，最优选大约3到大约10。
在一些特别优选的实施方案中，保护基团包括，但不仅限于，如脂肪 酸中的烷基链、丙酰基、甲酰基等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺、 酯和成醚保护基团。在一个优选实施方案中，使用乙酰基保护氨基末端， 用酰胺基保护羧基末端。这些封闭基团可提高肽的成螺旋趋势。一些特别 优选的封闭基团包括多种长度的烷基，例如具有下式的基团： CH3-(CH2)n-CO-，其中n的范围是大约3到大约20，优选地大约3到大约 16，更优选的大约3到大约13，最优选的大约3到大约10。
其他的保护基团包括，但不仅限于，Fmoc、叔-丁氧羰基(t-BOC)、9- 芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、 三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧 -2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二苯甲 基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4-甲基苄 基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰基(Bz)、 3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基(Dde)、2，6- 二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰基(2-Br-Z)、苄 氧甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔-丁氧甲基(Bum)、叔-丁氧基(tBuO)、叔 -丁基(tBu)、乙酰基(Ac)和三氟乙酰基(TFA)。
保护/封闭基团对于本领域技术人员而言是众所周知的，同样将这些基 团与构成本发明肽的合适残基偶联的方法也是如此(见，例如，Greene et al.， (1991)Protective Groups in Organic Synthesis，2nd ed.，John Wiley & Sons，Inc， Somerset)。在一个优选实施方案中，例如，在合成期间，当肽处于树脂上 时，用乙酸酐实现乙酰化。酰胺保护可通过为合成选择合适的树脂加以实 现。在合成本文实施例所述的肽期间，使用rink amide树脂。在合成完成之 后，同时除去酸性双功能氨基酸(例如Asp和Glu)和碱性氨基酸(Lys)， 及Tyr羟基上的全部非永久性保护基团。用酸处理从该树脂释放的肽N末 端被保护成乙酰基，羧基被保护成NH2，同时除去了所有其他的保护基团。
在一些特别优选的实施方案中，肽包含一个或多个本文所述D型(右 旋而非左旋)氨基酸。在一些实施方案中，至少有两个对映体氨基酸，更 优选地至少4个对映体氨基酸，最优选地至少8或10个对映体氨基酸是“D” 型氨基酸。在一些实施方案中，本文所述肽的每隔一个氨基酸，或者甚至 每个氨基酸(例如，每个对映体氨基酸)是D型氨基酸。
在一些实施方案中，至少50％的对映体氨基酸是“D”型，更优选地至 少80％的对映体氨基酸是“D”型，最优选地至少90％或者甚至全部对映体 氨基酸是“D”型氨基酸。
F)肽模拟物
除了本文所述的肽之外，也包括仿肽(peptidomimetics)。在制药工业 中，通常使用肽类似物作为具有类似于模板肽性质的非肽药物。这些类型 的非肽化合物称作“肽模拟物”或“仿肽”(Fauchere(1986)Adv.Drug Res. 15：29；Veber and Freidinger(1985)TINS p.392；和Evans et al.(1987)J.Med. Chem.30：1229)，并且通常是借助计算机分子建模(molecular modeling)开发 的。与治疗上有效的肽结构类似的肽模拟物可用于产生等价的治疗或疾病 预防效果。
一般而言，仿肽在结构上类似于示范多肽(paradigm polypeptide)(例 如，表1所示的SEQ ID NO：5)，但其中有一个或多个肽连接任选地被如下 的连接替代：-CH2NH-，-CH2S-，-CH2-CH2-，-CH＝CH-(顺和反)，-COCH2-， -CH(OH)CH2-，-CH2SO-等，其方法在本领域中是已知的，并且在如下文献中 有进一步的说明：Spatola(1983)p.267，Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides，and Proteins，B.Weinsterin，eds.，Marcel Dekker，New York，； Spatola(1983)Vega Data 1(3)Peptide Backbone Modifications.(综述)； Morley(1980)Trends Pharm Sci pp.463-468(综述)；Hudson et al.(1979)Int J Pept Prot Res 14：177-185(-CH2NH-和CH2CH2-)；Spatola et al.(1986)Life Sci 38：1243-1249(-CH2S-)；Hann，(1982)J Chem Soc Perkin Trans I 307-314 (-CH-CH-(顺和反))；Almquist et al.(1980)J Med Chem.23：1392-1398 (-COCH2-)；Jennings-White et al.(1982)Tetrahedron Lett.23：2533(-COCH2-)； Szelke et al.，欧洲专利申请EP 45665(1982) CA：97：39405(1982)(-CH(OH)CH2-)；Holladay et al.(1983)Tetrahedron Lett. 24：4401-4404(-C(OH)CH2-)；和Hruby(1982)Life Sci.，31：189-199(-CH2S-))。
一种特别优选的非肽连接是-CH2NH-。这种肽模拟物与多肽实施方案相 比可以具有显著的优势，包括例如：生产更加经济、化学稳定性更高、药 理性质(半衰期、吸收、效价、效能等)更高、抗原性更小等。
此外，根据本领域已知的方法(Rizo and Gierasch(1992)Ann.Rev. Biochem.61：387)可以产生本文所述肽的环状变换，或者包含共有序列或基 本上相同的共有序列变化的限制肽(constrained peptides)(包括环化肽)； 例如，通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫桥的内部半胱氨酸残基。
G)有机小分子
在一些实施方案中，本发明的活性剂包括有机小分子，例如共同待审 的专利申请USSN 60/600,925中描述的，其于2004年8月11日提出申请。 在多种实施方案中，有机小分子类似于在分别于2003年8月26日和8月 11日提出申请的共同待审专利申请USSN 10/649,378和USSN 60/494,449 中描述的四或五肽，并在一些实施方案中模拟这些它们。
本发明有机小分子的分子量通常小于大约900道尔顿。典型地，小分 子在乙酸乙酯中高度可溶(例如，浓度等于或大于4mg/ml)，并且能够溶 于pH7.0的缓冲水溶液。
在水环境中使磷脂，例如1，2-双十四酰(ditetradecanoyl)-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱(DMPC)与本发明的有机小分子接触，会形成直径大约 7.5nm(±0.1nm)的颗粒。此外，还经常形成堆叠双层，其中双层尺寸大约为 3.4-4.1nm，堆叠中双层的间隔大约2nm。还经常形成大约38nm的囊状结构。 而且，当本发明的分子向哺乳动物施用时，它们可以使HDL更加抗炎，并 减轻一种或多种动脉粥样硬化症状和/或其它以炎症反应为特征的病症。
因此，在一些实施方案中，有机小分子是可以改善哺乳动物体内以炎 症反应为特征的病变(例如动脉粥样硬化)的一种或多种症状的分子，其 中小分子在乙酸乙酯中溶解度大于4mg/ml，并且可溶于pH7.0的缓冲水溶 液，并且当在含水环境中与磷脂接触时，会形成直径大约7.5nm的颗粒， 并形成堆叠双层，其中双层尺寸大约为3.4-4.1nm，堆叠中双层的间隔大约 2nm，同时分子量小于900道尔顿。
在一些实施方案中，分子具有如下式：

其中P1、P2、P3和P4是独立选择的疏水保护基团；R1和R4是独立选择 的氨基酸R基团；n，i，x，y和z独立地为0或1，其中当n和x都是0时， R1是疏水基团，当y和i都是0时，R4是疏水基团；R2和R3在pH7.0时为 酸性或碱性基团，其中当R2是酸性时，R3是碱性，当R2是碱性时，R3是 酸性；R5，若存在的话，从如下基团中选择：芳香基、脂肪基、带正电基 团或带负电基团。在一些实施方案中，R2或R3是-(CH2)j-COOH，其中j＝1、 2、3或4，和/或-(CH2)j-NH2，其中j＝1、2、3、4或5，或-(CH2)j-NH-C(＝NH)-NH2， 其中j＝1、2、3或4。在一些实施方案中，R2、R3和R5，如果存在，是氨基 酸R基团。因此，例如，在多种实施方案中，R2和R3独立地是天冬氨酸R 基团、谷氨酸R基团、赖氨酸R基团、组氨酸R基团或精氨酸R基团(例 如，如表1所示)。
在一些实施方案中，R1选自下组：Lys R基团，Trp R基团，Phe R基团， Leu R基团，Orn R基团或norLeu R基团。在一些实施方案中，R4选自下组： Ser R基团，Thr R基团，Ile R基团，Leu R基团，norLeu R基团，Phe R基团或 Tyr R基团。
在多种实施方案中，x是1，R5是芳香基团(例如，Trp R基团)。
在多种实施方案中，n，x，y和i中至少有一个是1，P1、P2、P3和P4当 存在时是独立地选自下组：聚乙二醇(PEG)、乙酰基、酰胺、3-20碳烷基、 Fmoc，9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、呫吨 基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧三苯甲基(Mmt)、4- 甲氧-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二 苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、4- 甲基苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲 酰基(Bz)、3-硝基-2-吡啶硫基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧亚环己基)乙基 (Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧羰基 (2-Br-Z)、苄氧甲基(Bom)、叔-丁氧羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔-丁 氧甲基(Bum)、叔-丁氧基(tBuO)、叔-丁基(tBu)、丙基、丁基、戊基、己基、 和三氟乙酰基(TFA)。在一些实施方案中，P1(存在时)和/或P2(存在时) 独立地选自Boc-，Fmoc和烟酰基，且P3(存在时)和/或P4(存在时)独 立地选自tBu和OtBu。
尽管上面列举了多种保护基团(P1、P2、P3、P4)，但是这些列举只是 出于举例的目的，并不构成限制。参考本文的教导，本领域技术人员还可 以知道多种其它的保护/封闭基团。这些封闭基团的选择可以使消化最小化 (例如，用于口服药物递送)，和/或增加摄取/生物利用度(例如，在鼻腔 施用、吸入治疗、直肠施用中通过黏膜表面)，和/或增加血清/血浆半衰期。 在一些实施方案中，保护基团可以作为赋形剂或赋形剂的组分提供。
在一些实施方案中，z为0，分子具有下式：

其中P1、P2、P3、P4、R1、R2、R3、R4、n、x、y和i如上所述。
在一些实施方案中，z为0，分子具有下式：

其中R1、R2、R3和R4如上所述。
在一个实施方案中，分子具有下式：

在一些实施方案中，本发明包括具有本文所述物理和/或功能性质并具 有下式的小分子：

其中P1、P2、P3和P4是如上所述独立选择的疏水保护基团，n，x和y 独立地为0或1；j，k和l独立地为0、1、2、3、4、或5；R2和R3在pH7.0 是酸性或碱性的，其中当R2是酸性时，R3是碱性；当R2是碱性时，R3是 酸性。在一些优选实施方案中，小分子可溶于水；且小分子的分子量小于 大约900道尔顿。在一些实施方案中，n，x，y，j和l为1；k为4。
在一些实施方案中，P1和/或P2是芳香族保护基团。在一些实施方案中， R2和R3是氨基酸R基，例如上文所述的。在多种实施方案中，n，x和y中 至少有一个是1，P1、P2、P3和P4当存在时，是如上所述从下组中独立选择 的保护基团：聚乙二醇(PEG)、乙酰基、酰胺、3-20碳烷基、Fmoc，9-芴乙 酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧羰基、呫吨基(Xan)、三苯 甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧三苯甲基(Mmt)、4-甲氧-2，3，6-三甲 基-苯磺酰基(Mtr)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、4，4-二甲氧二苯甲基(Mbh)、 甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)。
III活性剂的功能分析
用于本发明方法的一些活性剂如各式(例如上面的式I)和/或特定序列 所述。在一些实施方案中，本发明优选的活性剂以一种或多种如下的功能 性质为特征：
1.它们使促炎HDL转变成抗炎HDL，或者使抗炎HDL更加抗炎；
2.它们降低LDL诱导的由动脉壁细胞产生的单核细胞趋化活性；
3.它们刺激前β-HDL的形成和循环；
4.它们提高HDL胆固醇；和/或
5.它们提高HDL对氧磷酶活性
本文所述的具体的剂和/或相应于本文所述各式的剂，可以按照期望容 易地对其一种或多种活性进行检验。
用于筛选上述每种功能性质的方法对于本领域技术人员而言是众所周 知的。特别地，需要指出，单核细胞趋化活性、HDL胆固醇和HDL对氧磷 酶活性的测定方法如PCT/US01/26497(WO 2002/15923)所述。
IV.肽制备
本发明使用的肽可以用标准化学肽合成技术化学地合成，或者特别在 肽不包含“D”氨基酸残基时，可以重组表达。在一些实施方案中，甚至含 有“D”氨基酸残基的肽也被重组表达。当重组表达多肽时，在如下环境中 培养宿主生物(例如细菌、植物、真菌细胞等)，其中一种或多种氨基酸 完全以D型提供给生物。于是，在这种系统中重组表达的肽便掺入了那些 D氨基酸。
在一些优选实施方案中，利用本领域技术人员已知的多种液相或固相 肽合成技术中的任何方法，化学地合成肽。固相合成是化学合成本发明多 肽的一种优选方法，其中序列的C端氨基酸附着在不溶载体上，随后顺次 添加序列中剩余的氨基酸。用于固相合成的技术对于本领域技术人员而言 是众所周知的，例如在如下的文献中有描述：Barany and Merrifield(1963) Solid-Phase Peptide Synthesis；pp3-284 The Peptides：Analysis，Synthesis， Biology.Vol 2：Special Methods in PeptideSynthesis，Part A.；Merrifield et al.(1963)J.Am.Chem.Soc.，85：2149-2156；和Stewart et al.(1984)Solid Phase Peptiede Synthesis，2nd ed.Pierce Chem.Co.，Rockford，III。
在一些实施方案中，肽通过固相肽合成程序，利用二苯甲胺 (benzhyderylamine)树脂(Beckman Bioproducts，0.59mmol NH2/g树脂) 作为固相载体合成。COOH末端氨基酸(例如叔-丁基羰基-Phe)通过4-(羟 甲基)苯乙酰基[4-(oxymethyl)phenacetyl]附着在固相载体上。这种连接比传 统的苄基酯连接更加稳定，然而最终的肽仍然能够用加氢反应切断。为此 目的使用甲酸作为氢供体进行转移氢化。用于肽合成和合成肽分析的详细 实验方案在Anantharamaiah等(1985) J.Biol.Chem.，260(16)：10248-10255 的附录中有说明。
需要指出，在肽，特别是含有D氨基酸的肽的化学合成中，除了期望 的全长产物之外，该合成通常还会产生若干截短的肽。纯化过程(例如 HPLC)通常会损失相当数量的全长产物。
本发明发现，在合成D肽(例如D-4)时，为了防止在纯化最长形式 的过程中造成的损失，可以进行透析并使用混合物，从而省略最后的HPLC 纯化。这种混合物损失高度纯化产物的大约50％的效价(例如，每wt蛋白 质产物)，但是混合物含有大约6倍的肽，因此总活性更大。
在一些实施方案中，肽合成只利用液相化学，或者与固相化学组合运 用。在一种方法中，最终肽的制备是通过合成两个或多个亚序列(例如用 固相或液相化学)，然后在溶液相合成中连接这些序列。在实施例中显示 了4F序列(SEQ ID NO：13)的溶液。为了制备该18氨基酸肽，首先制备3 条6氨基酸肽(亚序列)。然后，在溶液中使这些亚序列偶联，形成完整 的4F肽。
V.药物制剂和装置
A)药物制剂
为了执行本发明的方法，可以向例如被诊断患有一种或多种动脉粥样 硬化症状，或者有动脉粥样硬化危险性和/或本文所述多种其它病变的个体， 施用一种或多种本发明的活性剂。活性剂能够以“天然”形式施用，或者， 如果期望，以盐、酯、酰胺、前药或衍生物等形式施用，前提是该盐、酯、 酰胺、前药或衍生物在药理学上适合，也就是说，在本方法中有效。活性 剂的盐、酯、酰胺、前药和其它衍生物可用有机合成化学领域技术人员已 知的标准程序制备，在例如March(1992)Advanced Organic Chemistry； Reactions，Mechanisms and Structure，4th Ed.N.Y.Wiley-Interscience.
例如，用传统的方法由游离碱制备酸加成盐，其典型地涉及与合适的 酸进行反应。一般而言，将药物的碱形式溶解在极性有机溶剂中，例如甲 醇或乙醇，并向其中添加酸。所得的盐或者沉淀，或者可通过添加极性较 小的溶剂从溶液中提出来。用于制备酸加成盐的合适酸包括有机酸，例如 乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、 反丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙 磺酸、对-甲苯磺酸、水杨酸等，以及无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、 硝酸、磷酸等。通过用合适的碱处理，加酸盐可以重新转变成游离碱。本 文活性剂特别优选的酸加成盐是卤化物盐，例如用盐酸或氢溴酸制备的卤 化物盐。相反，本发明活性剂的碱式盐可以用药学可接受的碱，例如氢氧 化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、三甲胺等，以相似的方法制备。 特别优选的碱式盐包括碱金属盐，例如钠盐，和铜盐。
酯的制备通常涉及使可能存在于药物分子结构中的羟基和/或羧基官能 化。酯通常是游离醇基的酰基取代衍生物，也就是，衍生自式RCOOH的 羧酸的部分，其中R是醇，优选的是低级烷基。如果需要，通过使用常规 的氢解或水解处理可以将酯再转变成游离酸。
还可以用本领域技术人员已知的或在相关文献中说明的技术制备酰胺 和前药。例如，酰胺可用合适的胺反应剂由酯制备而成，或者可以从酸酐 或酰基氯通过与氨水或低级烷胺反应而制备。前药通常是这样制备的：共 价连接上某个部分，使得化合物在受到个体代谢系统的修饰之前没有治疗 活性。
本文鉴定的活性剂可用于肠胃外、表面、经口、经鼻(或者用吸入)、 直肠、或局部施用，例如气雾或透皮，来预防和/或治疗如本文所述的一种 或多种病变/适应症(例如，动脉粥样硬化和/或其症状)。药物组合物可以 多种单位剂型施用，这取决于施用的方法。合适的单位剂型包括，但不仅 限于，粉剂、片剂、丸剂、胶囊、锭剂、栓剂、贴剂、鼻喷雾、注射剂(injectibles)、 可植入缓释制剂、脂质复合物等。
本发明的活性剂典型地与药学可接受的载体(赋形剂)组合，形成药 物组合物。药学可接受的载体可含有一种或多种生理可接受的化合物，它 们起到，例如，稳定该组合物或者提高或降低活性剂吸收的作用。生理可 接受的化合物可包括，例如，碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗 氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；保护和摄取 促进剂，如脂质；可降低活性剂清除或水解的组合物，或赋形剂或其他稳 定剂和/或缓冲剂。
其他生理可接受的化合物包括润湿剂、乳化剂、分散剂、或特别有利 于防止微生物生长或作用的防腐剂。多种防腐剂是众所周知的，包括例如， 苯酚和抗坏血酸。本领域的技术人员可以意识到，药学可接受载体，包括 生理可接受化合物的选择取决于，例如，活性剂的施用途径和活性剂的特 定的理化特性。
赋形剂优选地是无菌的，并且通常没有非期望物质。这些化合物可以 通过传统的、众所周知的灭菌技术加以灭菌。
在治疗应用中，向患有一种或多种本文所述病变的一种或多种症状的， 或者具有本文所述一种或多种病变危险性的患者施用足以防止和/或治愈和 /或至少部分防止或抑制所述疾病和/或其并发症的剂量的本发明化合物。足 以实现这一目的的剂量定义为“治疗有效剂量”。本应用的有效剂量取决 于疾病的严重程度和患者健康的综合状态。根据患者需要和可以耐受的剂 量和频率可进行单次或多次施用。任何情况下，该组合物应当提供足够量 的本发明的制剂的活性剂，来有效地对患者进行治疗(改善一种或多种症 状)。
活性剂的浓度可以有很大变化，其主要是根据流体体积(fluid volume)、 粘度、体重等，按照所选的具体施用模式和患者的需要来选择。然而，通 常选择的浓度提供大约0.1或1mg/kg/日到大约50mg/kg/日范围的剂量，有 时可以更高。典型的剂量范围是大约3mg/kg/日到大约3.5mg/kg/日，优选 大约3.5mg/kg/日到大约7.2mg/kg/日，更优选大约7.2mg/kg/日到大约11.0 mg/kg/日，最优选大约11.0mg/kg/日到大约15.0mg/kg/日。在一些优选实施 方案中，剂量范围是大约10mg/kg/日到大约50mg/kg/日。在一些实施方案 中，剂量范围是大约20mg到大约50mg，每日口服两次。可以理解，这些 剂量可以改变，以针对特定受试者或受试者组提供最优化的治疗方案。
在一些优选实施方案中，本发明的活性剂可以根据本领域技术人员众 所周知的标准方法进行口服(例如通过药片)或注射。在其他优选实施方 案中，肽可以用常规的透皮药物送递系统，也就是，透皮“贴剂”，通过 皮肤递送，其中活性剂通常包含在一种叠层(laminated)结构内，该结构粘 贴在皮肤上充当药物递送装置。在这种结构中，药物组合物通常包含在上 衬层(upper backing layer)下面的层，又称“储库”(reservoir)内。应当意 识到，本文中术语“储库”是指最终可供递送到皮肤表面的一定量的“活 性组分”。因此，例如，“储库”可以包括贴剂衬层上的粘合剂中的活性 成分，或者本领域技术人员已知的任何基质制剂中的活性组分，这样的基 质制剂有多种。贴剂可以包含单个储库，或者可以包含多个储库。
在一个实施方案中，储库包括药学可接受接触粘合材料的聚合物基质， 用于在药物递送中将系统粘贴在皮肤上。合适的皮肤接触粘合材料的实例 包括，但不仅限于，聚乙烯、聚硅氧烷、聚异丁烯、聚丙烯酸脂、聚氨酯 等。或者，含有药物的储库和皮肤接触粘合剂以分离的且明显不同的层的 形式存在，粘合剂位于储库的下面，这里，储库可以是如上所述的聚合体 基质，或者可以是液体或水凝胶储库，或者可以采取其他形式。这些叠层 中的衬层用作装置的上表面，优选地起“贴剂”主结构元件的作用，并提 供该装置大部分的柔性。选择用于衬层的材料优选地活性剂和存在的任何 其他材料都是基本上非透过性的。
其他用于局部药物递送的优选形式包括，但不仅限于，软膏和乳膏。 软膏是半固体的制品，其典型地是基于矿脂或其他石油衍生物。含有所选 活性剂的乳膏典型地是粘性液体或半固体乳剂，通常是水包油或油包水。 乳膏基材典型是耐水洗的(water washable)，并且含有油相、乳化剂和液 相。油相有时也称作“内部”相，一般由矿脂和脂肪醇，例如十六烷醇或 十八烷醇组成；液相的体积通常但不必定超过油相，并且一般含有湿润剂。 乳膏制剂中的乳化剂一般是非离子、阳离子、阴离子或两性离子表面活性 剂。本领域技术人员可以意识到，要使用的特定软膏或乳膏可以提供最佳 的药物递送。和其他载体或介质一样，软膏基质应当是惰性的、稳定的、 无刺激性的、且非致敏的。
与典型的肽制剂不同，本发明含有D型氨基酸的肽可以在没有针对胃 酸等造成的蛋白质水解等进行保护的条件下施用，甚至口服。然而，在一 些实施方案中，通过使用保护性赋形剂可以提高肽的递送。这典型地可以 通过如下方法实现：将多聚肽与组合物复合，使其耐受酸和酶的水解；或 者将肽封装(package)在合适的抗性载体内，例如脂质体。保护用于口服 递送的肽的方法在本领域中是众所周知的(见，例如，美国专利5,391,377， 其描述了用于口服递送治疗剂的脂质成分)。
使用缓释蛋白“封装”系统可以保持高的血清半衰期。这种缓释系统 对于本领域技术人员而言是众所周知的。在一个优选实施方案中，用于蛋 白质和肽的ProLease可生物降解微球递送系统(Tracy(1998)Biotecchnol.Prog. 14：108；Johnson et al.(1996)，Nature Med.2：795；Herbert et al.(1998)， Pharmaceut.Res.15，357)，是由生物可降解聚合物微球构成的干粉，所述微 球在聚合物基质内含有活性剂，其可以配制为具有或者没有其他药剂的干 燥制剂。
ProLease微球的制造过程经过特殊的设计，以便实现高的封装效率，同 时保持活性剂的完整性。该过程由下列步骤组成：(i)通过喷射冷冻干燥含 有稳定化赋形剂的药物溶液，由总体制备冻干药物颗粒；(ii)制备药物-聚合 体悬液，随后进行超声或均质化以减小药物颗粒的尺寸；(iii)通过向液氮中 喷雾产生冻结的药物-聚合体微球；(iv)用乙醇抽提聚合物溶剂；和(v)过滤和 真空干燥，生产最终的干燥粉末产品。最终的粉末含有固体形式的活性剂， 其是均质的，并且刚性地分散在多孔聚合物颗粒内。该过程中最经常使用 的聚合物(丙交酯-乙交酯共聚物(PLG))既生物相容，又可生物降解。
封装可以在低温下(例如-40℃)实现。在封装期间，蛋白质在无水条件 下水保持固态，因此使由水诱导的蛋白质构象活动性(conformational mobility)最小化，防止以水作为反应剂的蛋白质降解反应，和避免可导致 蛋白质变性的有机-水界面的产生。优选过程使用大多数蛋白质在其中不可 溶的溶剂，因此造成高封装效率(例如，大于95％)。
在另一个实施方案中，溶液的一种或多种成分可以作为“浓缩物”提 供，例如保存在现成可稀释的存储容器内(例如具有预先测量的体积)， 或者保存在现成可添加到一定体积水中的可溶胶囊内。
前面的制剂和施用方法只是举例性的，不构成限制。应当意识到，使 用本文的教导，可以容易地设计其他合适的形式和施用模式。
B)脂基制剂(lipid-based formulations)
在一些实施方案中，本发明的活性剂与一种或多种脂质结合施用。脂 质可以配制成赋形剂，用于保护和/或提高活性剂的转移/摄取，或者它们可 以分别施用。
不受具体理论所限，本发明发现，施用(例如，口服施用)某些磷脂 可以显著提高HDL/LDL比值。此外，可以相信，某些中等长度的磷脂是通 过与一般脂类转运涉及的过程不同的过程转运的。因此，与本发明的活性 剂共同施用某些中等长度的磷脂可以提供若干优点：它们保护活性剂免于 被消化或水解，提高摄取，并且提高HDL/LDL比值。
脂类可以形成包封本发明活性剂的脂质体，和/或它们可以与活性剂复 合/混合，和/或它们能够与活性剂共价偶联。制作脂质体和包封剂的方法对 于本领域技术人员而言是众所周知的(见，例如，Martin and Papahadjopoulos(1982)J.Biol.Chem.，257：286-288；Papahadjopoulos et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：11460-11464；Huang et al.(1992) Cancer Res.，52：6774-6781；Lasic et al.(1992)FEBS Lett.，312：255-258等)。
用于这些方法的优选磷脂在sn-1和sn-2位置有大约4个碳到大约24 个碳的脂肪酸。在一些优选实施方案中，脂肪酸是饱和的。在其他优选实 施方案中，脂肪酸可以是非饱和的。表16列举了多种优选的脂肪酸。
表16.用于施用本文所述活性剂的优选磷脂在sn-1和/或sn-2位置的优 选脂肪酸     碳No.   通用名   IUPAC名     3:0     4:0     5:0     6:0     7:0     8:0     9:0     10:0     11:0       12:0       13:0       14:0       15:0       16:0       17:0       18:0     丙酰   丁酰   戊酰   己酰   庚酰   辛酰   壬酰   癸酰   十一烷酰     月桂酰     十三烷酰     肉豆蔻酰     十五烷酰     棕榈酰     十七烷酰     硬脂酰     丙酰(Trianoic)   丁酰(Tetranoic)   戊酰(Pentanoic)   己酰 Hexanoic)   庚酰(Heptanoic)   辛酰(Octanoic)   壬酰(Nonanoic)   癸酰(Decanoic)   十一烷酰   (Undecanoic)   十二烷酰   (Dodecanoic)   十三烷酰   (Tridecanoic)   十四烷酰   (Tetradecanoic)   十五烷酰   (Pentadecanoic)   十六烷酰   (Hexadecanoic)   十七烷酰   (Heptadecanoic)   十八烷酰   (Octadecanoic)   19:0     20:0     21:0     22:0     23:0     24:0     14:1   14:1   16:1   16:1   十九烷酰     花生酰     二十一烷酰     二十二烷酰     二十三烷酰     二十四烷酰     肉豆蔻烯酰(9-顺)   十四酰(9-反)   十六酰(9-顺)   十六酰(9-反)    十九烷酰    (Nonadecanoic)    二十烷酰    (Eicosanoic)    二十一烷酰    (Heniecosanoic)    二十二烷酰    (Docosanoic)    二十三烷酰    (Trocosanoic)    二十四烷酰    (Tetracosanoic)        
这些位置的脂肪酸可以相同或不同。特别优选的磷脂在sn-3位置具有 磷酸胆碱。
VI.施用
典型地，活性剂可以根据需要向哺乳动物(例如，人)施用。该哺乳 动物典型地包括患有一种或多种本文所述病变和其危险性的哺乳动物(例 如，人)。
活性剂可以使用如本文所述的多种标准方法中的任何方法施用，包括， 但不仅限于，注射、栓剂、鼻喷雾、经时释放植入、透皮贴剂等。在一个 特别优选的实施方案中，肽通过口服施用(例如，作为糖浆、胶囊或片剂)。
这些方法涉及施用本发明的单一活性剂，或者施用两种或多种不同的 活性剂。活性剂可以作为单体(例如，单独或组合的形式)，或二聚体、 寡聚体或多聚体形式提供。在一些实施方案中，多聚体形式可以包含结合 的单体(例如，离子或疏水连接的)，而一些其他的多聚体形式包含共价 连接的单体(直接连接或通过接头)。
尽管本发明是就在人类中的使用说明的，但是它也适用于动物，例如 用于兽医。因此，一些优选的生物包括，但不仅限于，人类、非人灵长类、 犬科动物(canines)、马科动物(equines)、猫科动物(felines)、猪、有 蹄类、兔等。
本发明的方法不仅限于已显示患有一种或多种本文所述病变的症状的 人类或非人动物，还可用于预防。因此，可以向生物体施用本发明的活性 剂，用于防止本文所述病变(例如，动脉粥样硬化、中风等)的一种或多 种症状的发作/发生。这里特别优选的对象是显示有病症的一种或数种危险 性因素的对象。因此，例如，动脉粥样硬化的危险性因素包括家族史、高 血压、肥胖、高酒精摄取、吸烟、高血胆固醇、高血甘油三酯、血中LDL、 VLDL、IDL过高，或HDL过低、糖尿病或糖尿病家族史、高血脂、心脏 病发作、心绞痛或中风等。
VII.药物洗脱支架
再狭窄，即先前狭窄随后经过扩张的外周或冠状血管的再封闭，具有 相当高的发病率(例如，对这些步骤而言为20-50％)，并且取决于多种临 床和形态学变量。再狭窄可以在血管成形术之后很短的时间内开始，但通 常在大约六(6)个月时结束。
一种最新开发的用于解决再狭窄问题的技术是血管内支架。支架典型 地是永久植入(扩张)在冠状和外周血管内的装置。这些支架的目的是为 患病(狭窄)的血管提供长期“支撑”(scaffolding)或支持。其理论是， 如果血管被从其内部支持，则不会关闭或再狭窄。
已知的支架设计包括，但不仅限于，单丝线圈(monofilament wire coil) 支架(见例如美国专利4,969,458)；焊接金属笼(welded metal cages)(见 例如美国专利4,733,665和4,776,337)；围绕圆周形成有轴向狭槽的薄壁 金属圆柱(见例如美国专利4,733,665、4,739,762、4,776,337等)。可用 于支架的已知结构材料包括，但不仅限于，聚合物、有机纺织品和生物相 容性金属，例如，不锈钢、金、银、钽、钛和形状记忆合金如镍钛金属互 化物。
为了进一步防止再狭窄，支架可以用一种或多种药物覆盖和/或充满， 例如，该药物制为可控释放的制剂，以抑制与再狭窄相关联的细胞增生。 最常见地，这种“药物洗脱”支架被设计成递送多种癌症药物(细胞毒素)。
然而，由于它们具有减轻炎症反应，减少和/或消除氧化脂类和/或其他 被氧化物质，抑制巨噬细胞趋化活性等活性，本文所述的活性剂也完全适 用于防止再狭窄。因此，在一些实施方案中，本发明考虑如下的支架，其 表面上涂覆有，和/或在支架表面上的空穴或微穴(microcavities)内保持有 一种或多种本文所述的活性剂(见例如图18A和18B)。
在一些实施方案中，活性剂包含在生物相容性基质内(例如生物相容 性聚合物，如聚氨酯、硅树脂(silicone)等)。合适的生物相容性材料在 例如美国专利公开20050084515、200500791991、20050070996等中有描述。 在多种实施方案中，聚合物包括，但不仅限于，硅树脂-氨基甲酸乙酯共聚 物，聚氨酯，苯氧基(phenoxy)，乙烯-乙烯乙酸，聚己内酯，丙交酯-乙 交酯共聚物，聚丙交酯，聚砜，弹性蛋白，纤维蛋白，胶原蛋白，硫酸软 骨素，生物相容性聚合物，生物稳定性聚合物，生物可降解聚合物。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了用于递送药物到机体血管内 的支架。该支架典型地包括支架框，其包括在其中形成的多个储库。这些 储库典型地包含活性剂，和/或位于储库内和/或涂覆在支架表面上的含活性 剂聚合物。在多种实施方案中，该支架是金属基或聚合物基。一些优选支 架材料包括，但不仅限于，不锈钢、镍金属互化物、钽、MP35N合金、铂、 钛、合适的生物相容性合金、合适的生物相容性聚合物、和/或其组合。
在多种实施方案中，支架含有孔(例如，储库)，该孔可包含微孔(例 如直径范围是大约10μm到大约50μm，优选地大约20μm或者更小)。在 多种实施方案中，微孔的深度范围是大约10μm到大约50μm。在多种实施 方案中，微孔延伸穿过支架框，在支架的内表面和支架的外表面上均有开 口。在一些实施方案中，支架可以任选地包括位于支架框内表面上的盖层， 该盖层覆盖通孔的至少一部分，并提供屏障特征，以控制聚合物中的活性 剂从支架框内表面洗脱的速度。在多种实施方案中，储库包含沿着支架框 外表面的沟槽。支架可以任选地具有多层聚合物，其中不同层的聚合物携 带不同的活性剂和/或其他药物。  
在一些实施方案中，支架任选地包括：位于支架框和聚合物之间的粘 合层。合适的粘合层包括，但不仅限于，聚氨酯、苯氧基、丙交酯-乙交酯 共聚物、聚丙交酯、聚砜、聚己内酯、粘合促进剂(adhesion promoter)和/ 或其组合。
除了支架之外，活性剂还可以涂覆在基本上任何可植入的医学装置上， 或者包含在其内，该医学装置可植入在血管外和/或血管内位置。
另外还提供了制造药物-聚合物支架的方法，包括：提供支架框；使用 例如高功率激光在支架框内切出多个储库；向至少一个储库施加一种或多 种活性剂和/或药物聚合物；干燥药物聚合物；向干燥的药物聚合物施加聚 合物层；和干燥该聚合物层。所述活性剂和/或聚合物可以通过常规的方法 施加，包括但不仅限于，喷(spraying)、浸(dipping)、涂(painting)、刷(brushing) 和分配(dispensing)。
还提供了用于治疗血管病症，和/或以炎症反应为特征的病症，和/或以 氧化活性类别的形成为特征的病症的方法。该方法典型地涉及如上所述地 将支架或其它可植入装置定位在机体内(例如，机体的血管内)，并从植 入物的至少一个表面洗脱至少一部分活性剂。
VIII.提高肽摄取
本发明还惊奇地发现，当全L氨基酸肽(例如，或者具有本发明肽序列 的肽)与D型(也就是，本发明的肽)联合施用时，可提高D型肽的摄取。 因此，在有些实施方案中，本发明考虑在本发明方法中使用D-型和L-型肽 的组合。D-型肽和L-型肽可以具有不同的氨基酸序列，但是，在优选的实 施方案中，它们都具有本文所描述的氨基酸序列，在更加优选的实施方案 中，它们具有相同的氨基酸序列。
本发明还发现，本发明两亲性螺旋肽的多联体也可有效减轻动脉粥样 硬化的一种或多种症状。含有该多联体的单体可以直接偶联在一起，或通 过接头连接在一起。在一些实施方案中，接头是氨基酸接头(例如脯氨酸)， 或肽接头(例如Gly4Ser3，SEQ ID NO：625)。在一些实施方案中，多联体 是2mer，更优选的是3mer，再优选的是4mer，最优选的是5mer、8mer 或10mer。如上所述，多联体可以包括如本文所述的G*相关两亲性螺旋与 如PCT公开WO2002/15923中说明的apo A-I变体的组合。
IX.附加药理活性剂
附加药理活性剂可以与主活性剂例如本发明的肽一起递送。在一个实 施方案中，这些剂包括，但不仅限于，可降低动脉粥样硬化事件和/或其并 发症的危险性的剂。这些剂包括，但不仅限于，β受体阻滞剂、β受体阻滞 剂与噻嗪类利尿剂的组合、他汀类药物(statins)、阿司匹林(aspirin)、ACE 抑制剂、ace受体抑制剂(ARB)等。
合适的β受体阻滞剂包括，但不仅限于，心选择性的(选择性β1受体 阻滞剂)，例如醋丁洛尔(acebutolol)(SectralTM)、阿替洛尔(atenolol) (TenorminTM)、倍它洛尔(betaxolol)(KerloneTM)、比索洛尔 (bisoprolol)(ZebetaTM)、美托洛尔(metoprolol)(LopressorTM)等。合适的非选择 性受体阻滞剂(同等阻滞β1和β2)包括，但不仅限于，卡替洛尔(carteolol) (CartrolTM)、纳多洛尔(nadolol)(CorgardTM)、喷布洛尔(penbutolol)(LevatolTM)、 吲哚洛尔(pindolol)(ViskenTM)、普萘洛尔(propranolol)(InderalTM)、噻马洛尔 (timolol)(BlockadrenTM)、拉贝洛尔(labetalol)(NormodyneTM，TrandateTM)等。
合适的β受体阻滞剂与噻嗪类利尿剂组合包括，但不仅限于，美多洛 尔(Lopressor)HCT、ZIAC、Tenoretic、Corzide、Timolide、普萘洛尔(Inderal) LA 40/25、Inderide、Normozide等。
合适的他汀类药物包括，但不仅限于，普伐他汀(pravastatin)(普拉固 (Pravachol)/Bristol-Myers Squibb)、辛伐他汀(simvastatin)(Zocor/Merck)、 洛伐它丁(lovastatin)(Mevacor/Merck)等。
合适的ace抑制剂包括，但不仅限于，卡托普利(captopril)(例如Squibb 生产的CapotenTM)、贝那普利(benazepril)(例如Novartis生产的LotensinTM)、 恩纳普利(enalapril)(例如Merck生产的VasotecTM)、福森普利(fosinopril) (例如Bristol-Myers生产的MonoprilTM)、赖诺普利(lisinopril)(例如Merck 生产的PrinivilTM或Astra-Zeneca生产的ZestrilTM)、喹那普利(quinapril)(例 如Parke-Davis生产的AccuprilTM)、雷米普利(ramipril)(例如Hoechst Marion Roussel，King Pharmaceuticals产的AltaceTM)、咪达普利(imidapril)，培哚 普利(perindopril)erbumine(例如Rhone-Polenc Rorer生产的aceonTM)、群 多普利(trandolapril)(例如Knoll Pharmaceutical产的MavikTM)等。合适的 ARBS(Ace受体阻滞剂)包括，但不仅限于，氯沙坦(losartan)(例如Merck 生产的CozaarTM)、厄贝沙坦(irbesartan)(例如Sanofi产的AvaproTM)、坎地沙 坦(candesartan)(例如Astra Merck产的AtacandTM)、缬沙坦(valsartan)(例 如Novartis产的DiovanTM)等。
X.用于改善一种或多种动脉粥样硬化症状的试剂盒
在另一个实施方案中，本发明提供了试剂盒，用于改善一种或多种动 脉粥样硬化症状，或者用于预防性处理具有动脉粥样硬化危险性的对象(人 或动物)，或者用于治疗或预防一种或多种本文所述其他病症。试剂盒优 选地包括含有一种或多种本发明活性剂的容器。活性剂可以以单位剂量制 剂提供(例如栓剂、片剂、胶囊、贴剂等)，和/或可以任选地与一种或多 种药学可接受的赋形剂组合。
该试剂盒可以任选地进一步包括一种或多种用于治疗心脏病和/或动脉 粥样硬化的其它制剂。这些制剂包括，但不仅限于，如上文所述的β受体 阻滞剂、血管扩张药、阿司匹林、他汀类药物、ace抑制剂或ace受体抑制 剂(ARB)等。
此外，试剂盒任选地包含标签和/或指导材料，为实现本发明的“治疗” 或“预防”方法或用途提供指导(即规程)。优选的指导材料应说明本发 明一种或多种多肽的使用，以减轻一种或多种动脉粥样硬化症状，和/或防 止具有动脉粥样硬化危险性的个体中一种或多种这些症状的发作或增加， 和/或减轻一种或多种以炎症反应为特征的病变的症状。指导材料还可以任 选地教导优选的剂量/治疗方案、禁忌症(counter indications)等。
尽管指导材料典型地包含手写或印刷的材料，但它们并不仅限于此。 任何可以存储这些指令并可以与终端用户交流这些指令的介质均在本发明 考虑的范围之内。这些介质包括，但不仅限于，电子存储介质(例如磁盘、 磁带、录音带、芯片)、光学介质(例如CD ROM)等。这些介质可以包 括可提供这些指导材料的互联网地址。
实施例
下面的实施例是用来举例说明而提出的，而不是对要求保护的本发明 构成限制。
实施例1
使用ApoJ相关肽调理动脉粥样硬化症状
A)防止LDL诱导的单核细胞趋化活性
图1显示D-4F(Circulation 2002；105：290-292)与从D氨基酸(D-J336， Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2，SEQ ID NO：13) 制得的apoJ肽在共培养中体外防止LDL诱导的单核细胞趋化活性的效果的 比较。将人类主动脉内皮细胞与单独的培养基(无添加物)、对照人LDL (200μg蛋白质/ml)、或对照人LDL+对照人HDL(350μg HDL蛋白质/ml) 一起孵育。向其它孔内加入如图所示的浓度范围的D-J336或D-4F加上对 照人LDL(200μg蛋白质/ml)。过夜孵育之后，分析上清液的单核细胞趋 化活性。如图1所示，防止LDL诱导的人动脉壁细胞的单核细胞趋化活性 的apoJ变体肽的体外浓度比D-4F肽所需的浓度低10-25倍。
B)通过D-J336预处理动脉壁细胞防止LDL诱导的单核细胞趋化活性
图2显示在预孵育中D-4F和D-J336防止LDL诱导的单核细胞趋化活 性的效果的比较。将人主动脉内皮细胞与D-J336或D-4F一起预孵育6小 时，其中D-J336的浓度为4、2和1μg/ml，D-4F的浓度为100、50、25和 12.5μg/ml。然后洗涤该培养物，并与单独的培养基(无添加物)、或与对 照人LDL(200μg蛋白质/ml)、或与对照人LDL+对照人HDL(350μgHDL 蛋白质/ml)一起孵育，作为测定对照。用肽预处理过的孔接受200μg蛋白 质/ml的对照人LDL。过夜孵育之后，分析上清液的单核细胞趋化活性。
如图2所示，在体外防止动脉壁细胞氧化LDL中，ApoJ变体肽强9-24 倍。
C)apo J肽模拟物对LDL受体缺失小鼠体内HDL保护能力的效果
向LDL受体缺失小鼠(每组4只)的饮用水中添加D-4F(表示为F)或 由D氨基酸制得的apoJ肽(D-J336，表示为J)，剂量为每毫升饮用水0.25 或0.5mg。24或48小时后，从小鼠取血，分离HDL，并测试其针对LDL 诱导的单核细胞趋化活性的保护能力。测定对照包括不加脂蛋白(无添加 物)，或只有对照人LDL(表示为LDL，200μg胆固醇/ml)，或对照LDL+ 对照人HDL(表示为+HDL，350μg HDL胆固醇)的培养孔。为了测试小鼠 HDL，将对照LDL与小鼠HDL一起添加到动脉壁细胞培养物中(+F HDL 或+J HDL)。分别按100μg胆固醇/ml添加小鼠HDL。在用D-4F或D-J336 处理之后，100μg/ml的小鼠HDL防止对照LDL诱导动脉壁细胞产生单核 细胞趋化活性的活性，与350μg/ml的对照人HDL一样。在体外和体内， D-J336肽相对D-4F所需的相对剂量的差异的原因可能与肽在水中的溶解度 有关，我们相信，当设法实现相等的溶解度时，D-J肽在体内的活性将高得 多，和它们在体外一样。
D)来自口服肽的apo E缺失小鼠的HDL针对LDL诱导的单核细胞趋 化活性的保护
图4图解了口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对HDL保护能力的影响。 在ApoE缺失小鼠(每组4只)的饮用水中给予D-4F(表示为F)50、30、 20、10、5μg/ml饮用水，或在饮用水中给予apoJ肽(表示为J)50、30或 20μg/ml饮用水。24小时后取血，用FPLC分级血浆，并分别合并含有LDL (表示为mLDL，以代表小鼠mLDL)和含有HDL(表示为mHDL)的级 分，通过确定LDL诱导的单核细胞趋化活性来确定HDL针对LDL氧化的 保护能力。对于测定对照，培养孔不接受脂蛋白(无添加物)，只接受mLDL (200μg胆固醇/ml)，或mLDL+标准正常人HDL(表示为Cont.h HDL， 350μg HDL胆固醇/ml)。
为了测试鼠HDL，将mLDL与鼠HDL(+F mHDL或+J mHDL)一起 添加到动脉壁细胞培养物中。来自没有在饮用水中接受任何肽的小鼠的 HDL称为无肽mHDL。鼠HDL的使用浓度为100μg胆固醇/ml。在接受D-4F 或D-J336之后，100μg/ml的鼠HDL的活性与350μg/ml的正常人HDL相同。 如图4所示，当添加到饮水中时，在增强apo E缺失小鼠HDL保护能力方 面，D-J肽与D-4F一样强。
E)得自于口服给予肽的apo E缺失小鼠的LDL诱导单核细胞趋化活性 的能力
图5显示了口服apo A-1肽模拟物和apoJ肽对LDL易氧化性的效果。 在饮水中向apoE缺失小鼠(每组4只)提供50、30、20、10、5μg/ml饮用 水的D-4F(表示为F)，或50、30或20μg/ml饮用水的apoJ肽(从D氨 基酸制备的D-J336，表示为J)。24小时后从小鼠收集血液，如图4所示， 用FPLC分级血浆，合并含有LDL(称为mLDL，代表鼠LDL)的级分， 并通过诱导单核细胞趋化活性确定LDL的易氧化性。对于实验对照，培养 孔不接受脂蛋白(无添加物)，只接受mLDL(200μg胆固醇/ml)，或mLDL+ 标准正常人HDL(表示为Cont.h HDL，350μg HDL胆固醇)。
将来自于接受了D-4F的小鼠的鼠LDL(F mLDL)或来自于接受了apoJ 肽的小鼠的鼠LDL(J mLDL)添加到动脉壁细胞培养物中。来自于没有从 饮用水中接受任何肽的小鼠的LDL以“无肽LDL”表示。
如图5所示，当添加到饮水中时，通过诱导单核细胞趋化活性确定， 在赋予来自apo E缺失小鼠的LDL以对人动脉壁细胞氧化的抗性方面， D-J336略强于D-4F。
F)从口服肽的apo E缺失小鼠获得的HDL针对磷脂氧化和单核细胞趋 化活性诱导的保护作用
图6表示了口服apoA-1肽模拟物和apoJ肽对HDL保护能力的影响。 在饮水中向apoE缺失小鼠(每组4只)提供50、30、20、10、5μg/ml饮水 的D-4F(表示为F)，或50、30或20μg/ml饮用水的apoJ肽(由D氨基 酸制成的D-J336，以J表示)。24小时后收集血液，用FPLC分级血浆， 并合并含有HDL(表示为mHDL)的级分，通过诱导单核细胞趋化活性确 定HDL对抗PAPC氧化的保护能力。对于测定对照，培养孔不接受脂蛋白 (无添加物)，接受磷脂PAPC 20μg/ml+HPODE 1.0μg/ml，或接受 PAPC+HPODE+标准正常人HDL(350μg HDL胆固醇/ml，表示为+Cont.h HDL)。
为了测试鼠HDL，将PAPC+HPODE与鼠HDL(+F mHDL或+J mHDL) 一起添加到动脉壁细胞培养物中。来自于没有在饮用水中接受任何肽的小 鼠的HDL以“无肽mHDL”表示。鼠HDL的使用浓度为100μg胆固醇/ml。
图6所示的数据表明，当添加到饮水中时，以单核细胞趋化活性的产 生为量度，D-J336在人动脉壁细胞共培养物中就导致HDL抑制氧化剂 HPODE对磷脂PAPC的氧化而言与D-4F一样强。
G)口服apoA-1肽模拟物和apoJ肽对小鼠血浆对氧磷酶活性的效果
图7显示，口服apoA-1肽模拟物和apoJ肽对小鼠血浆对氧磷酶活性的 影响。在饮用水中向apoE缺失小鼠(每组4只)提供50、10、5或0μg每 ml饮用水的D-4F(表示为F)，或给予50、10或5μg每ml饮用水的apoJ 肽(由D氨基酸制成的D-J336，表示为J)。24小时后收集血液，测定血 浆的PON1活性。这些数据表明，当添加到饮水中时，D-J336在提高apo E 缺失小鼠对氧磷酶活性方面至少与D-4F一样强。
实施例2
口服G*肽提高Apo E缺陷小鼠体内的HDL保护能力
用具有如下氨基酸序列的G*肽处理4月龄雌性apoE缺陷小鼠(每组 n＝4)。肽113-122＝Ac-LVGRQLEEFL-NH2(SEQ ID NO：626)，肽336-357＝ Ac-LLEQLNEQFNWVSRLANLTQGE-NH2(SEQ ID NO：627)，肽377-390＝ Ac-PSGVTEVVVKLFDS-NH2(SEQ ID NO：628)。
每只小鼠通过胃管接受200μg肽。4小时后取血，分离血浆，分级脂蛋 白，并测定HDL(25μg/ml)针对人动脉壁细胞培养物中LDL(100μg/ml) 氧化的保护能力。数据如图8所示。肽在小鼠体内提供了显著的HDL保护 能力。
在另一个实验中，用具有如下序列的11氨基酸G*肽146-156处理4月 龄雌性apoE缺陷小鼠(n＝4)：Ac-QQTHMLDVMQD-NH2(SEQ ID NO：629)。 小鼠在饮水中接受了指定浓度的肽(见图9)。18小时后获取血液，分离 血浆，分级脂蛋白，并测定HDL(50μg胆固醇/ml)针对人动脉壁细胞培养 物中PAPC(25μg/ml)+HPODE(1.0μg/ml)氧化的保护能力。测定对照包 括不含添加物，含PAPC+HPODE，及PAPC+HPODE+对照HDL(表示为 +HDL)。数据是一式三份的培养物中9个高倍视野内迁移的单核细胞数的 平均值±SD。星号表示相对水对照(0μg/ml)的显著水平p＜0.05。
实施例3
肽合成的溶液相化学
在一些实施方案中，溶液相合成化学为合成本发明的肽提供了更加经 济的手段。
在本发明之前，通常用全固相合成化学进行合成。固相合成小于9个 氨基酸的肽比固相合成大于9个氨基酸的肽经济得多。合成大于9氨基酸 的肽会由于延长中的氨基酸链从树脂物理解离而造成大量的材料损失。固 相合成含有少于9个氨基酸的肽要经济得多，因为延长中的链相对地几乎 没有从树脂损失。
在一些实施方案中，溶液相合成是这样进行的：将18个氨基酸的apoA-I 模拟物肽，即4F(和其他相关肽)的合成由全固相合成转变成全溶液相合 成，或者先固相合成三条链，每一条含有例如6个氨基酸，然后在溶液中 组装这三条链。这大大提高了整个合成的经济性。当肽的长度不是18个氨 基酸时，可以很容易地对这一过程进行修改。因此，例如，15mer的合成可 以通过固相合成三个5mer，随后在溶液中组装这三条链。14mer的合成可 以通过固相合成两个5mer和一个4mer，随后在溶液中组装这些链，等等。
A.合成方案概述
表17显示了合成肽D4F(Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F -NH2(SEQ ID NO：13))的示例性方案。(表17显示了该合成方案和合成 产率)。
表17.示例性溶液相合成方案   用于D4F合成的方法   合成     树脂   Fmoc   氨基酸   偶联试剂    树脂的最终    Wt.(gms)   粗肽的   Wt.(gms)产率   (％)     纯肽的     Wt.(mg)     产率(％)   逐步固相   逐步固相   片段偶联   (6+6+6)     RinkAmide(1mmol)     1.8gms     RinkAmide     (1mmol)1.8gms     RinkAmide     (1mmol)1.8gms*   6Equiv     2Equiv         HBTU/HOBT     DIC/HOBT     HBTU/HOBT      4      3.9      3.3      2.0    86    2.0    86    1.0    43     500     25     450     22.5     100     10   D4F片段合成                        RinkAmide树脂上的片段1 H2N-KFKEAF(SEQ ID NO：630)                                      (K和E被适当保护)   片段2   6残基逐   步固相     Cl-TrT-树脂     (5mmol)6.5gms   6Equiv   HBTU/HOBT    11    2.2    粗保护    36                                      Fmoc-Y(But)-D-(But)-K(Boc)-V-A-E(But)-COOH     片段2   6残基逐   步固相      Cl-TrT-树脂    (5mmol)6.5gms     6Equiv   (SEQ ID NO：631)   HBTU   /HOBT     10          1.8    粗保护    32                        Ac-D(But)-W-F-K(Boc)-A-F-COOH(SEQ ID NO：632)
             用通过固相方法产生的片段进行溶液相合成
片段1    Wang树脂.C端6肽(经过氨解).产率定量
         NH2-K(Boc)-F-K(Boc)-E(But)-A-F-Wang树脂(SEQ ID NO：633)
         NH2-K(Boc)-F-K(Boc)-E(But)-A-F-CO-NH2(SEQ ID NO：634)
             在DMF中用DIC/HOBT将从上面获得的片段2与片段1偶联
Fmoc-Y(But)-D(But)-K(Bpc)-V-A-E(But)-K(Boc)-F-K(Boc)-E(But)-F-CO-NH2(SEQ ID NO：635)
             在除去保护基团之后，12残基肽作为游离肽被鉴定。产率为50％
用DMF中的哌啶(20％)从上面12个残基除去Fmoc。干燥后，在DMF中用DCl/HOBT将该肽与片段3偶联 Ac-D(But)-W-F-K(Boc)-A-F-Y(But)-D(But)-K(Boc)-V-A-E(But)-K(Boc)-F-K(Boc)-E(But)-A-FCO-NH2 (SEQ ID NO：636)
被保护肽的产率是定量的。
用TFA(80％)、苯酚(5％)、茴香硫醚(5％)、水(5％)、三异丙基硅烷(TIS，5％)混合物搅拌90min除去保护基团。
用乙醚沉淀，并用C-4HPLC柱纯化。产率25％
B)合成规程细节
1)合成D-4F的片段缩合步骤
在固相上进行片段缩合的合成片段是：
片段1：Ac-D(OBut)-W-F-K(εBoc)-A-F-COOH(SEQ ID NO：637)；
片段2：Fmoc-Y(OBut)-D(OBut)-K(εBoc)-V-A-E(OBut)-COOH(SEQ ID NO：638)；和
片段3：Fmoc-K(εBoc)F-K(εBoc)-E(OBut)-A-F-Rink Amide树脂(SEQ ID NO：639)。
片段1被留在树脂上，以便在TFA处理之后获得最终的肽酰胺。
合成片段1：在DMF∶二氯甲烷(1∶1)中在6倍当量DIEA的存在下，向 氯三苯甲基树脂(Nova Biochem，1.3mMol/g取代，使用5mMol或6.5g)添加 Fmoc-Phe(1.2倍当量)，搅拌4h。树脂上多余的官能团在二氯甲烷和DIEA 的存在下用甲醇封端(capped)。除去Fmoc-之后，如上所述，用HOBt/HBTU 试剂添加Fmoc氨基酸衍生物(2倍当量)。最终的 Fmoc-D(OBut)-W-F-K(εBoc)-A-F氯三苯甲基树脂用Fmoc脱封闭剂处理，并 在二异丙基乙胺(diisoprolylethyl amine)存在下，用6当量的乙酸酐乙酰 化。所得的Ac-D(OBut)-W-F-K(εBoc)-A-F-树脂在室温用三氟乙醇-乙酸-二 氯甲烷(2∶2∶6，10ml/g树脂)的混合物处理4h。通过过滤除去树脂之后，在 真空下利用正己烷通过共沸蒸馏(aziotropic distillation)除去溶剂。残余物 (1.8g)经质谱分析确定为Ac-D(OBut)-W-F-K(εBoc)-A-F-COOH(SEQ ID NO：640)。
使用用于片段1的程序获得片段2，Fmoc-Y(OBut)-D(OBut) -K(εBoc)-V-A-E(OBut)-COOH(SEQ ID NO：641)。最终产量为2.2g。
片段3：使用0.9g(0.5mmol)Rink amide树脂(Nova Biochem)获得片段， 用二氯甲烷中20％的哌啶(pipetidine)处理Rink amide树脂，5min一次， 15min第二次(Fmoc去封闭试剂)。用缩合剂HOBt/HBTU(2当量，在数 滴二异丙基乙胺的存在下)缩合1.2当量的Fmoc-Phe(氨基酸缩合)。继 续进行其余氨基酸的去封闭和缩合，从而获得Fmoc-K(εBoc)F-K(εBoc) -E(OBut)-A-F-rink amide树脂(SEQ ID NO：642)。切除Fmoc，并使用肽树脂 K(εBoc)F-K(εBoc)-E(OBut)-A-F-rink amide树脂(SEQ ID NO：642)进行如下所 述的片段缩合。
在DIEA存在下，用HOBt-HBTU程序过夜将DMF中的片段2添加到 片段3(1.2倍当量)。在用DMF冲洗树脂并脱封闭之后，用HOBt-HBTU 程序过夜将Fmoc-片段1(1.2倍当量)添加到十二肽树脂。
最终的肽树脂(3.3g)用TFA-苯酚-三异丙基硅烷-茴香硫醚-水混合物 (80∶5∶5∶5)处理1.5h(10ml试剂/g树脂)。将树脂滤去，溶液用10倍体积乙 醚稀释。通过离心分离沉淀的肽，并用乙醚清洗2次。将1g粗肽进行HPLC 纯化，获得100mg肽。
2)肽的鉴定
肽通过质谱和分析HPLC方法加以鉴定。
图14A-14L显示了所得肽的纯度。图15显示，所得的肽在小鼠体内具 有生物活性。
实施例4
由Apo-M衍生的G*肽提高对氧磷酶活性
向4月龄雌性apoE缺失小鼠(每组n＝4)按10μg/只腹腔注射施用乱 序的(scrambled)D-4F(一种无活性对照肽)或D-4F，或按50μg/只腹腔注射 施用由L氨基酸(L-ApoM)合成的肽Ac-KWIYHLTEGSTDLRTEG-NH2(SEQ ID NO：643)。2或6小时后对小鼠采血，通过FPLC分离它们的HDL，确定 HDL中的对氧磷酶活性，并在X轴上作图。向其他4月龄雌性apoE缺失 小鼠(每组n＝4)按100μg/只灌胃施用由L氨基酸(L-ApoM)合成的肽 Ac-KWIYHLTEGSTDLRTEG-NH2(SEQ ID NO：643)(灌胃L-ApoM)。6小 时后对小鼠采血，通过FPLC分离其HDL，测定HDL中的对氧磷酶活性， 并在X轴上作图。
如图16所示，所述来自apoM，对应于残基99-115，由L-氨基酸合成， 并且N端和羧基端都被封闭的序列(SEQ ID NO：643)，无论是通过腹腔注射 还是通过胃饲施用均可提高apoE缺失小鼠体内的对氧磷酶活性。
实施例5
LAEYHAK(SEQ ID NO：8)肽的活性
通过胃管向4只猕猴(cynomologous monkey)的每一只施用5毫克溶 于2.0ml水的全部由D氨基酸合成的肽LAEYHAK(SEQ ID NO：8)，之后给 2.0ml水进行冲洗。6小时后，对猴子进行采血，用快速蛋白质液相色谱 (FPLC)分级其血浆，并在人动脉壁细胞培养物中进行试验。
如图17的A栏所示，以100μg/ml LDL胆固醇的浓度向细胞添加正常 人类LDL(hLDL)产生了单核细胞趋化活性，其绘制在图的y轴上。同样 如A栏所示，向细胞一起添加50μg/ml HDL-胆固醇浓度的正常人类HDL (hHDL)与100μg/ml LDL-胆固醇浓度的hLDL导致单核细胞趋化活性显 著降低。
如图17的B栏所示，在0时刻(也就是在施用肽之前)，向细胞一起 添加100μg/ml LDL-胆固醇浓度的hLDL和50μg/ml HDL-胆固醇浓度的猴 HDL不会降低单核细胞趋化活性。然而，亦如B栏所示，添加同样浓度的 猴HDL，但是在施用肽之后6小时添加，显著降低了单核细胞趋化活性。 如C栏所示，在施用肽之前(0时)向细胞添加100μg/ml LDL-胆固醇浓度 的猴LDL，相比于A栏中添加相同浓度的hLDL，单核细胞趋化活性显著 增加。另外C栏亦显示，在施用肽6小时后向细胞添加相同浓度的猴LDL 可显著降低单核细胞趋化活性。
可以理解，本文所述的实施例和实施方案只是出于举例说明的目的， 本领域的技术人员在它们的基础上，可以想到多种修改和变化，这些都包 含在本申请的精神和范围内以及所附的权利要求的范围内。本文将本文所 引用的全部出版物、专利和专利申请的全部内容并入用于所有目的。
相关专利申请的交叉引用
本专利申请要求2004年9月16日提交的60/610,711的优先权和利益， 本文通过引用并入其全部内容用于所有目的。
关于受联邦资助的研究和开发所取得的发明的权利声明
本工作部分地受到国家卫生研究院国家心脏血液肺研究所HL30568号 拨款的项目支持。美国政府可能拥有本发明的某些权利。
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