一种血涂片白细胞染液及制备方法
专利汇可以提供一种血涂片白细胞染液及制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种血涂片白细胞染液，其特征是主要由季胺盐阳离子 表面活性剂 的一种或两种以上、吐温或曲拉通或聚乙烯吡咯烷 酮 或聚乙二醇中的一种或两种以上、常规白细胞染液组成，各组份占总溶液的百分比浓度分别为0.0001％－0.04％、0.0125％－2.5％和30％－75％，本 发明 可以大大缩短血涂片 染色 时间，通常情况下，染色时间只需11秒左右，可以有效的去除红细胞及残杂，从而可以适当增加涂片上的血的厚度，使每个 视野 范围内的白细胞数目增加，而且白细胞的形态不发生变化，其结构清晰、胞浆 颜色 区别明显，有利于人工显微计数、或者显微照像计数，更便于计算机进行 图像识别 ，从而可以加快自动化分析血涂片的 进程 。，下面是一种血涂片白细胞染液及制备方法专利的具体信息内容。
1、一种血涂片白细胞染液，其特征是主要由季胺盐阳离子表面活性剂的一种或两 种以上、吐温或曲拉通或聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇中的一种或两种以上、常规白细 胞染液组成。
2、根据权利要求1所述的染液，其特征是所述的季胺盐阳离子表面活性剂为十二 烷基三甲基溴化铵或十二烷基三甲基氯化铵或十六烷基三甲基溴化铵或十八烷基三甲 基氯化铵或十八烷基二甲基苄基氯化铵中的一种或两种以上。
3、根据权利要求1所述的染液，其特征是所述的常规白细胞染液为瑞士染液或快 速染液或姬姆萨染液或瑞士-姬姆萨染液。
4、根据权利要求3所述的染液，其特征是所述的常规白细胞染液为瑞士-姬姆萨 染液。
5、根据权利要求1、2、3所述的染液，其特征是各组份占总溶液的百分比浓度为 季胺盐类阳离子表面活性剂为0.0001％-0.04％，吐温或曲拉通或聚乙烯吡咯烷酮或 聚乙二醇为0.0125％-2.5％，常规白细胞染液为30％-75％。
6、一种权利要求1所述血涂片白细胞染液的制备方法，其特征是：
(1)取季胺盐阳离子表面活性剂的一种或两种以上，溶于蒸馏水中，加热，搅拌， 得到浓度范围为0.0005％-0.05％的A溶液；
(2)取吐温或曲拉通或聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇中的一种或两种以上溶于甲醇 中，配成浓度为0.5％-5％的B溶液。
(3)取A溶液与B溶液相混合，再加入常规白细胞染液，混匀，使各组份占总溶 液的百分比浓度为季胺盐类阳离子表面活性剂为0.0001％-0.04％，吐温或曲拉通或 聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇为0.0125％-2.5％，常规白细胞染液为30％-75％。
技术领域
本发明涉及白细胞分类计数，特别是涉及血涂片的白细胞染液及其制备方法。
背景技术
对血涂片白细胞进行染色，进而，通过人工显微计数、或者显微照像计数，是目 前白细胞分类计数的方式之一。
目前在进行血涂片人工显微观察或显微照像白细胞计数时，主要存在下面几个问 题：(1)由于红细胞数目是白细胞的500-1000倍，红细胞的大量存在，使得涂片必须 很薄，这样在显微镜下观察时每个视野范围内的白细胞数目大大减少。而且，在传统 的血涂片中，有的情况下，红细胞堆积在白细胞上会导致白细胞无法辨认甚至根本看 不见白细胞，这样给白细胞的计数造成较大的误差。(2)由于每个视野范围内白细胞 数较少，则需要根据很多视野范围才能进行白细胞数目统计，这样使得每张血涂片进 行白细胞数目统计的时间很长。(3)常规的白细胞血涂片染色所用的染液有瑞士染液、 快速染液、姬姆萨染液、瑞士-姬姆萨染液等，但染色时间过长，每张血涂片染色时间 至少达到一分钟以上，有的甚至多达十五分钟以上，不利于大批量血涂片的分析，更 不利于实现仪器的自动化分析。
发明内容
本发明所述的血涂片白细胞染液，主要由季胺盐阳离子表面活性剂、吐温(Tween)， 或曲拉通(Triton)，或聚乙烯吡咯烷酮，或聚乙二醇等非离子表面活性剂、常规白细 胞染液组成。
更具体的说，本发明所述的血涂片白细胞染液，主要由季胺盐阳离子表面活性剂 水溶液、吐温(Tween)，或曲拉通(Triton)，或聚乙烯吡咯烷酮，或聚乙二醇等非离 子表面活性剂的甲醇溶液、常规白细胞染液组成。
本发明所述的血涂片白细胞染液各组份占总溶液的百分比浓度为：
季胺盐阳离子表面活性剂为： 0.0001％-0.04％
上述非离子表面活性剂为： 0.0125％-2.5％
常规白细胞染液为： 30％-75％
本发明所说的季胺盐阳离子表面活性剂以十二烷基三甲基溴化铵、十二烷基三甲 基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十八烷基三甲基氯化铵、十八烷基二甲基苄基氯 化铵为最佳。
本发明所说的常规白细胞染液可以是瑞士染液、快速染液、姬姆萨染液、瑞士- 姬姆萨染液等现有的常规白细胞染液，以瑞士-姬姆萨染液为最佳。
本发明所述的季胺盐阳离子表面活性剂占总溶液的百分比浓度并非极限浓度，当 季胺盐阳离子表面活性剂的百分比浓度低于本发明所述的浓度范围时，在使用本发明 的染液时，可以通过适当提高染液的温度或延长染色时间，同样可以达到本发明所述 的效果；当季胺盐阳离子表面活性剂的百分比浓度高于本发明所述的浓度范围时，在 使用本发明的染液时，可以通过适当降低染液的温度或缩短染色时间，也同样可以达 到本发明所述的效果。
本发明所述的染液制备方法如下：
首先，取一定量的季胺盐阳离子表面活性剂的一种或两种以上，溶于蒸馏水中， 加热，搅拌，得到浓度范围为0.0005％-0.05％的A溶液。
再取一定量的吐温，或曲拉通，或聚乙烯吡咯烷酮，或聚乙二醇等非离子表面活 性剂中的一种或两种以上溶于甲醇中，配成浓度为0.5％-5％的B溶液。
然后，取A溶液与B溶液相混合，再滴加常规白细胞染液，与AB混合液混匀，使 各组份占总溶液的百分比浓度为季胺盐类阳离子表面活性剂为0.0001％-0.04％，吐 温或曲拉通或聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇为0.0125％-2.5％，常规白细胞染液为30 ％-75％。即制备成本发明所述的白细胞染液产品。
本发明通过以下与常规的白细胞染液的染色实验对比，说明本发明的优点和实际 效果。
通常，每升血液中白细胞含量常有以下几个数量级：①＜2.0×109个/升；②2.0-3.0 ×109个/升；③＞3.0×109个/升。
取白细胞含量＜2.0×109个/升的血液4ul进行瑞士-姬姆萨染色，染色时间为十五 分钟，然后，滴加瑞士-姬姆萨染液的缓冲液，水洗、烘干，在显微镜下观察发现：在 有白细胞的视野范围内常伴红细胞堆积，致使有的白细胞无法辨认，从而造成白细胞 计数难以进行。另外，由于每个视野范围内白细胞数目少，给白细胞的计数带来很大 的麻烦。如图1所示。用本发明的染液对同一份血液进行血涂片染色，染色时间只需 11秒，滴加瑞士-姬姆萨染液的缓冲液后，水洗、烘干，在显微镜下观察发现：每个 视野范围内的白细胞数目明显增多，白细胞形态结构完整，颜色也可区分。如图2所 示。
本发明对2.0-3.0×109个/升数量级白细胞的血涂片进行染色对比，得到用常规 的姬姆萨染液的染色结果如图3所示，用本发明的染液对同一份血液进行血涂片染色 的结果如图4所示。
本发明取白细胞含量为5.5×109个/升数量级的血液进行血涂片染色，得到常规 瑞士染液的染色结果如图5所示，用本发明的染液对同一份血液进行血涂片染色的结 果如图6所示。
本发明的有益效果是：可以大大缩短血涂片染色时间，通常情况下，染色时间只 需11秒左右，因为红细胞及残杂可以得到有效的去除，所以可以适当增加涂片上的血 的厚度，从而可以使每个视野范围内的白细胞数目增加，而且白细胞的形态不发生变 化，其结构清晰、胞浆颜色区别明显，有利于人工显微计数、或者显微照像计数，更 便于计算机进行图像识别，从而可以加快自动化分析血涂片的进程。
附图说明
图1是取白细胞含量＜2.0×109个/升的血液，用瑞士-姬姆萨染色液进行染色的结 果图片。
图2是取白细胞含量＜2.0×109个/升的血液，用本发明染液染色的结果图片。
图3是对2.0-3.0×109个/升数量级白细胞的血涂片，用姬姆萨染色液进行染色 的结果图片。
图4是对2.0-3.0×109个/升数量级白细胞的血涂片，用本发明染液染色的结果 图片。
图5是对白细胞含量为5.5×109个/升数量级的血涂片，用瑞士染色液进行染色 的结果图片。
图6是对白细胞含量为5.5×109个/升数量级的血涂片，用本发明染液染色的结 果图片。
具体实施方式
取0.1g十二烷基三甲基溴化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到浓度 为0.1％的十二烷基三甲基溴化铵溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为0.001％的 A溶液。
取15ml的吐温-80溶于500ml的甲醇中，配成浓度为3％的B溶液。
取A溶液80ml和B溶液10ml相混合，然后再滴加75ml的瑞士-姬姆萨染液，与 AB混合液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例2
取2g十六烷基三甲基溴化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到浓度为 2％的十六烷基三甲基溴化铵溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为0.01％的A溶 液。
取20ml的TritonX-100溶于500ml的甲醇中，配成浓度为4％的B溶液。
取A溶液60ml和B溶液10ml相混合，然后再滴加80ml的瑞士-姬姆萨染液，与 AB混合液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例3
取2.5g十八烷基三甲基氯化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到浓度 为2.5％的十八烷基三甲基氯化铵溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为0.05％的 A溶液。
取10ml的TritonX-80溶于2000ml的甲醇中，配成浓度为0.5％的B溶液。
取A溶液100ml和B溶液20ml相混合，然后再滴加100ml的瑞士染液，与AB混 合液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例4
取0.2g十八烷基二甲基苄基氯化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到 浓度为0.2％的十八烷基二甲基苄基氯化铵溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为 0.002％的A溶液。
取30ml的聚乙烯吡咯烷酮溶于1000ml的甲醇中，配成浓度为3％的B溶液。
取A溶液50ml和B溶液10ml相混合，然后再滴加70ml的姬姆萨染液，与AB混 合液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例5
取0.2g十二烷基三甲基溴化铵、0.2g十八烷基三甲基氯化铵，先溶于100ml蒸 馏水中，加热，搅拌，得到浓度为0.4％的混合溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓 度为0.006％的A溶液。
取30ml的聚乙烯吡咯烷酮溶于800ml的甲醇中，配成浓度为3.75％的B溶液。
取A溶液55ml和B溶液10ml相混合，然后再滴加75ml的快速染液，与AB混合 液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例6
取0.1g十六烷基三甲基氯化铵、0.1g十八烷基二甲基苄基氯化铵，先溶于100ml 蒸馏水中，加热，搅拌，得到浓度为0.2％的混合溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到 浓度为0.002％的A溶液。
取15ml的聚乙烯吡咯烷酮、15ml土温-60溶于750ml的甲醇中，配成浓度为4％ 的B溶液。
取A溶液65ml和B溶液15ml相混合，然后再滴加85ml的姬姆萨染液，与AB混 合液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例7
取0.4g十八烷基二甲基苄基氯化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到 浓度为0.4％的混合溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为0.003％的A溶液。
取15ml的聚乙烯吡咯烷酮、15mlTritonX-100溶于1000ml的甲醇中，配成浓度 为3％的B溶液。
取A溶液70ml和B溶液15ml相混合，然后再滴加90ml的快速染液，与AB混合 液混匀，即得本发明所述的产品。
实施例8
取5g十八烷基二甲基苄基氯化铵，先溶于100ml蒸馏水中，加热，搅拌，得到浓 度为5％的混合溶液，然后再用蒸馏水稀释，得到浓度为0.004％的A溶液。
取5ml的聚乙烯吡咯烷酮、10mlTritonX-100、5ml聚乙二醇溶于400ml的甲醇中， 配成浓度为5％的B溶液。
取A溶液75ml和B溶液20ml相混合，然后再滴加75ml的瑞士-姬姆萨染液，与 AB混合液混匀，即得本发明所述的产品。
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