一种抗肿瘤生物制品及其制备方法
专利汇可以提供一种抗肿瘤生物制品及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种抗 肿瘤 生物 制品及其制备方法，采用了猪血和猪脾取代人的血和脾等淋巴组织，通过分离淋巴细胞，再用鸡新城疫病毒或仙台病毒诱导培养，经过纯化除菌等方法制成抗肿瘤细胞因子。本发明的复合细胞因子能够通过改变淋巴因子诱导细胞毒细胞作用，使其具有强大的抗肿瘤作用。，下面是一种抗肿瘤生物制品及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种抗肿瘤生物制品及其制备方法，其特征在于：取新鲜猪血、猪脾，无菌操作制成细胞悬液；经分离淋巴细胞，加RPMI1640的培养基、接种鸡新城疫病毒或仙台病毒，诱导培养72～96小时，收集诱导培养液经超滤纯化，除菌制成细胞因子。
2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物制品及其制备方法，其特征在于经检疫新鲜的猪脾600g，立即放入抗菌素溶液浸泡2小时；在超净台中无菌操作，用研磨器将脾研碎制成细胞悬液，按1∶5比例加生理盐水稀释，200目细胞筛过滤，沿管壁将滤液小心倒入离心
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管中，1500转/分离心30分钟，计数细胞数量，按6×10 浓度加入RPM1640培养基，按4000单位/ml加入抗菌素，再加入鸡新城疫病毒(NDV)或仙台病毒。培养瓶中培养，5～7％CO2，
37℃，CO2培养箱中培养48小时，取培养上清液，4000转/分，离心30分钟，弃沉渣，取上清，获400ml上清液。
3.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物制品及其制备方法，其特征在于经检疫新鲜的猪血800ml，在超净台中无菌操作，1500转/分离心30分钟，取白细胞悬液加入RPM1640
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培养基，调节细胞浓度为6×10 浓度，再加入鸡新城疫病毒(NDV)或仙台病毒，培养瓶中培养，5～7％CO2，37℃，CO2培养箱中培养48小时，取培养上清液，4000转/分，离心30分钟，弃沉渣，取上清，获上清液900ml。
4.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物制品及其制备方法，其特征在于上述上清液在超滤器中经300Kd超滤膜超滤，取300Kd超滤膜的膜以下部分，再在超滤器中经5Kd超滤膜超滤，取5Kd超滤膜的膜以上部分，即为白细胞介素为主的复合细胞因子。
一种抗肿瘤生物制品及其制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
滤，将滤液倒入离心管中，1500转/分离心30分钟，计数细胞数量，按6×10 浓度加入到RPM1640培养基中，按4000单位/ml加入庆大霉素，再加入鸡新城疫病毒(NDV)或仙台病毒各10ml于培养瓶中培养；
节细胞浓度为6×10 浓度，再加入鸡新城疫病毒或仙台病毒各10ml于培养瓶中培养；
具体实施方式
沿管壁将滤液小心倒入离心管中，1500转/分离心30分钟，计数细胞数量，按7×10 浓度加入RPM1640培养基。按5000单位/ml加入抗菌素，再加入鸡新城疫病毒54ml。培养瓶中培养，5～7％CO2，37℃，CO2培养箱中培养58小时。取培养上清，4000转/分，离心30分钟，弃沉渣，取上清，获500ml上清液。
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量，以RPMI1640培养基稀释淋巴细胞为5×10/ml，加庆大霉素(4000单位/ml)加仙台病毒34ml，注入培养瓶中，在CO2培养箱中，5～7％CO2，37℃培养4小时。取培养上清，1500转/分，离心30分钟，取上清，获450ml，在超滤器中经分子量300Kd滤膜超滤，取300Kd以下部分，再经5Kd滤膜超滤，取5Kd以上部分，得50ml浓缩液，用国产紫外可见分光光度计检测，280nm波长，取蛋白质部分。得100ml白细胞介素-2细胞因子。CTLL细胞MTT法测白细胞介素-2活性为3100单位/ml。0.2μm孔径滤膜，除菌过滤，4000单位/支，分装，低温保存。
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子12000单位3次，异体LAK细胞三次总量2.0×10。二个月腹水不仅未增加而且减少为腹围92.5cm。维持生命近半年，延长生存期3个月，注药后无皮疹，无发烧，无急性或迟发型过敏反应，无肝肾功能障碍。
沿管壁将滤液小心倒入离心管中，1500转/分离心30分钟，计数细胞数量，按6×10 浓度加入RPM1640培养基。按5000单位/ml加入抗菌素，再加入仙台病毒674ml。培养瓶中培养，5～7％CO2，37℃，CO2培养箱中培养48小时。取培养上清，3400转/分，离心30分钟，弃沉渣，取上清，获4000ml上清液。
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