一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法
专利汇可以提供一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种生鲜乳中功能性 乳蛋白 连续分离制备的方法，主要步骤为：1）采用离心法分离回收乳脂肪；2） 凝乳酶 沉淀法结合酸沉法分离 酪蛋白 ；3）将溶液离心后上清液即为 乳清 蛋白，经微滤除菌后回收透过液备用；3）采用等电点法回收乳 铁 蛋白粗品；4） 超滤 法回收截留液获得免疫球蛋白粗品；5）超滤透过液除去乳糖组分后得到α-乳 白蛋白 粗品；6）将蛋白粗品经层析纯化，得到高纯度蛋白。本发明采用凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白，可以提升乳清蛋白得率，有利于后续分离三种不同的功能性乳蛋白，可分别得到蛋白粗品及高纯度蛋白，满足食品行业对不同原料的需求。，下面是一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法专利的具体信息内容。
1.一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法，其特征在于包括步骤如下：
（1）分离乳脂：生鲜乳经巴氏灭菌后迅速降至40-42℃，利用乳脂分离机以3000-7000r/min的转速离心，去除脂肪；
（2）凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白：在脱脂乳中加入0.01-0.2%（w/w）的凝乳酶，在35-37℃条件下反应0.5-1小时后，用酸溶液将乳液的pH调节至4.6-4.8，将溶液以7000-
10000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用；
（3）微滤除菌：将步骤（2）所得乳清蛋白经0.1μm或0.45μm微滤膜除菌，取透过液备用；
（4）乳铁蛋白的分离纯化：采用等电点沉淀法回收乳铁蛋白粗品，用可食氢氧化钠溶液液将步骤（3）所得乳清的pH调节至8.0-8.5，加入60-80%（w/w）硫酸铵进一步盐析，经离心回收沉淀，冷冻干燥后即为乳铁蛋白粗品；将沉淀溶于超纯水中，加酸溶液调节pH为6.8-
6.85，使沉淀复溶，经CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱柱进一步纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24-48小时后得到高纯度乳铁蛋白；
（5）免疫球蛋白的分离纯化：取步骤（4）盐析后离心得到的上清液，经50kDa超滤膜超滤浓缩至原体积的30-50%后，用超纯水将截留液稀释稀释到原体积，再进行超滤，此步骤重复三次，冷冻干燥24-48小时后即为免疫球蛋白粗品；利用Q Sepharose Fast Flow将50kDa超滤截留液进一步分离纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24-48小时后得高纯度免疫球蛋白；
（6）α-乳白蛋白的分离纯化：将步骤（5）中50kDa超滤膜的四次透过液合并后，经10kDa超滤膜浓缩至原体积的30-50%，得到α-乳白蛋白粗品经色谱纯化后进行喷雾干燥，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃；将α-乳白蛋白的粗品用DEAE Sepharose Fast Flow进一步分离纯化，喷雾干燥后得到高纯度α-乳白蛋白，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃，即得。
2.根据权利要求1所述的一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法，其特征在于：
所述的2）中所述的凝乳酶可使用动物源凝乳酶、植物源凝乳酶和微生物源凝乳酶。
3.根据权利要求1所述的一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法，其特征在于：
所述的2）中所述的酸溶液可使用乳酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸以及食用盐酸。
4.根据权利要求1所述的一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法，其特征在于：
所述的4）中所述的酸溶液可使用乳酸、柠檬酸、醋酸、酒石酸以及食用盐酸。
5.如权利要求1至权利要求4所述方法分离的生鲜乳中功能性乳蛋白，其特征在于：纯度可达90%以上，回收率可达85%以上。
一种生鲜乳中功能性乳蛋白连续分离制备的方法
技术领域
背景技术
发明内容
（2）凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白：在脱脂乳中加入0.01-0.2%（m/m）的凝乳酶，在35-37℃条件下反应0.5-1小时后，用酸溶液将乳液的pH调节至4.6-4.8，将溶液以7000-
10000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用；
（3）微滤除菌：将步骤（2）所得乳清蛋白经0.1μm或0.45μm微滤膜除菌，取透过液备用；
（4）乳铁蛋白的分离纯化：采用等电点沉淀法回收乳铁蛋白粗品，用可食氢氧化钠溶液液将步骤（3）所得乳清的pH调节至8.0-8.5，加入60-80%（w/w）硫酸铵进一步盐析，经离心回收沉淀，冷冻干燥后即为乳铁蛋白粗品；将沉淀溶于超纯水中，加酸溶液调节pH为6.8-
6.85，使沉淀复溶，经CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱柱进一步纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24-48小时后得到高纯度乳铁蛋白；
（5）免疫球蛋白的分离纯化：取步骤（4）盐析后离心得到的上清液，经50kDa超滤膜超滤浓缩至原体积的30-50%后，用超纯水将截留液稀释稀释到原体积，再进行超滤，此步骤重复三次，冷冻干燥24-48小时后即为免疫球蛋白粗品；利用Q Sepharose Fast Flow将50kDa超滤截留液进一步分离纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24-48小时后得高纯度免疫球蛋白；
（6）α-乳白蛋白的分离纯化：将步骤（5）中50kDa超滤膜的四次透过液合并后，经10kDa超滤膜浓缩至原体积的30-50%，得到α-乳白蛋白粗品经色谱纯化后进行喷雾干燥，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃；将α-乳白蛋白的粗品用DEAE Sepharose Fast Flow进一步分离纯化，喷雾干燥后得到高纯度α-乳白蛋白，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃。
具体实施方式
3000r/min的转速离心，去除脂肪；
（2）凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白：在脱脂乳中加入0.1g的凝乳酶，在35℃条件下反应0.5小时后，用乳酸溶液将乳液的pH调节至4.8，将溶液以7000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用；
（3）微滤除菌：将步骤（2）所得乳清蛋白经0.1μm微滤膜除菌，取透过液备用；
（4）乳铁蛋白的分离纯化：采用等电点沉淀法回收乳铁蛋白粗品，用可食氢氧化钠溶液液将步骤（3）所得乳清的pH调节至8.0，加入60%（w/w）硫酸铵进一步盐析，经离心回收沉淀，冷冻干燥后即为乳铁蛋白粗品；将沉淀溶于超纯水中，加乳酸溶液调节pH为6.8，使沉淀复溶，经CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱柱进一步纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24小时后得到高纯度乳铁蛋白；
（5）免疫球蛋白的分离纯化：取步骤（4）盐析后离心得到的上清液，经50kDa超滤膜超滤浓缩至原体积的30%后，用超纯水将截留液稀释稀释到原体积，再进行超滤，此步骤重复三次，冷冻干燥24小时后即为免疫球蛋白粗品；利用Q Sepharose Fast Flow将50kDa超滤截留液进一步分离纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥24小时后得高纯度免疫球蛋白；
（6）α-乳白蛋白的分离纯化：将步骤（5）中50kDa超滤膜的四次透过液合并后，经10kDa超滤膜浓缩至原体积的30%，得到α-乳白蛋白粗品经色谱纯化后进行喷雾干燥，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃；将α-乳白蛋白的粗品用DEAE Sepharose Fast Flow进一步分离纯化，喷雾干燥后得到高纯度α-乳白蛋白，其进料口的温度为135℃，出料口温度为
70℃；
（7）对比实验：取1000g新鲜的牛乳重复步骤（1），将步骤（2）更改为在脱脂乳中加入
0.1g的凝乳酶，在35℃条件下反应0.5小时后，将溶液以7000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用，后面的步骤同（3）-（6），比较两种方法分离酪蛋白的效果以及制备得到的免疫球蛋白、乳铁蛋白和α-乳白蛋白的回收率。
78±0.2510%，综上所述，本发明提出的凝乳酶沉淀法结合酸沉法在分离酪蛋白方面更具优势。
5000r/min的转速离心，去除脂肪；
（2）凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白：在脱脂乳中加入2g的凝乳酶，在36℃条件下反应0.8小时后，用柠檬酸溶液将乳液的pH调节至4.7，将溶液以8000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用；
（3）微滤除菌：将步骤（2）所得乳清蛋白经0.45μm微滤膜除菌，取透过液备用；
（4）乳铁蛋白的分离纯化：采用等电点沉淀法回收乳铁蛋白粗品，用可食氢氧化钠溶液液将步骤（3）所得乳清的pH调节至8.3，加入70%（w/w）硫酸铵进一步盐析，经离心回收沉淀，冷冻干燥后即为乳铁蛋白粗品；将沉淀溶于超纯水中，加柠檬酸溶液调节pH为6.83，使沉淀复溶，经CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱柱进一步纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥36小时后得到高纯度乳铁蛋白；
（5）免疫球蛋白的分离纯化：取步骤（4）盐析后离心得到的上清液，经50kDa超滤膜超滤浓缩至原体积的40%后，用超纯水将截留液稀释稀释到原体积，再进行超滤，此步骤重复三次，冷冻干燥36小时后即为免疫球蛋白粗品；利用Q Sepharose Fast Flow将50kDa超滤截留液进一步分离纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥36小时后得高纯度免疫球蛋白；
（6）α-乳白蛋白的分离纯化：将步骤（5）中50kDa超滤膜的四次透过液合并后，经10kDa超滤膜浓缩至原体积的40%，得到α-乳白蛋白粗品经色谱纯化后进行喷雾干燥，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃；将α-乳白蛋白的粗品用DEAE Sepharose Fast Flow进一步分离纯化，喷雾干燥后得到高纯度α-乳白蛋白，其进料口的温度为135℃，出料口温度为
70℃；
（7）对比实验：取2000g新鲜的羊乳重复步骤（1），将步骤（2）更改为用柠檬酸溶液将乳液的pH调节至4.7，将溶液以7000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用，后面的步骤同（3）-（6），比较两种方法分离酪蛋白的效果以及制备得到的免疫球蛋白、乳铁蛋白和α-乳白蛋白的回收率。
79±0.1461%，综上所述，本发明提出的凝乳酶沉淀法结合酸沉法在分离酪蛋白方面更具优势。
7000r/min的转速离心，去除脂肪；
（2）凝乳酶沉淀法结合酸沉法分离酪蛋白：在脱脂乳中加入6g的凝乳酶，在37℃条件下反应1小时后，用醋酸溶液将乳液的pH调节至4.6，将溶液以10000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用；
（3）微滤除菌：将步骤（2）所得乳清蛋白经0.1μm微滤膜除菌，取透过液备用；
（4）乳铁蛋白的分离纯化：采用等电点沉淀法回收乳铁蛋白粗品，用可食氢氧化钠溶液液将步骤（3）所得乳清的pH调节至8.5，加入80%（w/w）硫酸铵进一步盐析，经离心回收沉淀，冷冻干燥后即为乳铁蛋白粗品；将沉淀溶于超纯水中，加醋酸溶液调节pH为6.85，使沉淀复溶，经CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱柱进一步纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥48小时后得到高纯度乳铁蛋白；
（5）免疫球蛋白的分离纯化：取步骤（4）盐析后离心得到的上清液，经50kDa超滤膜超滤浓缩至原体积的50%后，用超纯水将截留液稀释稀释到原体积，再进行超滤，此步骤重复三次，冷冻干燥48小时后即为免疫球蛋白粗品；利用Q Sepharose Fast Flow将50kDa超滤截留液进一步分离纯化，将目标峰收集的溶液冷冻干燥48小时后得高纯度免疫球蛋白；
（6）α-乳白蛋白的分离纯化：将步骤（5）中50kDa超滤膜的四次透过液合并后，经10kDa超滤膜浓缩至原体积的50%，得到α-乳白蛋白粗品经色谱纯化后进行喷雾干燥，其进料口的温度为135℃，出料口温度为70℃；将α-乳白蛋白的粗品用DEAE Sepharose Fast Flow进一步分离纯化，喷雾干燥后得到高纯度α-乳白蛋白，其进料口的温度为135℃，出料口温度为
70℃；
（7）对比实验：取3000g新鲜的牛乳重复步骤（1），将步骤（2）更改为用醋酸溶液将乳液的pH调节至4.6，将溶液以10000r/min转速离心，得到酪蛋白沉淀和上清液，上清液为乳清蛋白，将上清液回收备用，后面的步骤同（3）-（6），比较两种方法分离酪蛋白的效果以及制备得到的免疫球蛋白、乳铁蛋白和α-乳白蛋白的回收率。
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