技术领域
[0001] 本
发明属于饲料、酶制剂和
微生物技术领域，具体涉及一种固液异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备方法。
背景技术
[0002] 近几年来，
食品安全和环境污染倍受各国各级政府广泛关注，事关百姓健康和生命安全。畜产品安全要求饲料无药残，环境保护要求饲料低污染。过去我们谈饲料是“有效、安全”，现在国家农业部一再强调'安全、有效、低污染”。众所周知，抗生素自问世以来，其用于畜禽防范
疾病和刺激生长确实收到了良好的效果。但随着时间的推移，抗生素的
缺陷暴露无遗：一是抗生素容易残留于肉、蛋和奶等畜禽产品中，造成人体肝、肾功能负担加重或发生癌变，危害人类健康；二是使畜产品
风味下降；三是造成人类自身抗药性增加，并污染了
土壤和
水源等自然环境。因此，一些国家已明令禁止使用。1974年，欧共体禁止在饲料中使用青霉素、
四环素，1998年12月禁止在饲料中使用螺旋霉素、杆菌肽锌、维吉尼亚霉素和肽乐霉素，1999年10月禁止在饲料中使用氯氟苄腺嘌呤(arprinocide)和异丙硝达唑(dinitolmide)。因此，使用柠檬酸、乳酸、延胡索酸、
益生菌、低聚糖和活性小肽来替代或减少使用抗生素，生产绿色畜产品备受各国政府关注。
[0003] 中国是人口大国，也是养殖业大国。2015年，
畜牧业产值达3.2万亿元，肉类、禽蛋、
牛奶和水产品产量分别达到8454万吨、2800万吨、3800万吨和5500万吨。伴随着养殖业的发展，饲料工业发展速度惊人。根据农业部统计数据，2015年全国商业饲料产量达到2.18亿吨。其中，全价饲料1.79亿吨，浓缩饲料2151万吨，预混料640万吨，包括猪料产量8974万吨，禽料产量9000万吨，水产饲料5300万吨，牛羊饲料850万吨，兔貉宠物等饲料350万吨。
[0004] 众所周知，饲料产品的开发、研制的难点在于乳仔猪饲料。如何提高幼龄畜禽饲料适口性、消化率和降低或减少
抗营养因子成为近年来动物营养学家积极探讨的课题。就乳仔猪而言，其代谢机能旺盛，相对生长迅速，对日粮营养物质的要求高，但其消化道的功能不健全，消化道的重量和容积较小且发肓不完全，胃酸分泌不足，胃肠道微生物区系易变，消化酶系发肓不健全，消化酶分泌不足。乳仔猪
蛋白质消化不良，蛋白质易在后肠产生一些腐败产物，尸胺、腐胺、组胺等，刺激肠粘膜，损害小肠绒毛膜，引起肠内容物渗透压升高，肠道脱水导致腹泻。对
植物蛋白过敏，8周龄以前的仔猪，对植物蛋白易过敏引起肠粘膜受损，影响对养分的吸收，细菌容易入侵导致腹泻。因此，通过
发酵、酶解等生物技术，开发营养高、易消化、适口性好、富含柠檬酸、乳酸、延胡索酸和益生菌、低聚糖、活性小肽的乳仔猪饲料是一件迫在眉睫和具有重要意义的大事。
[0005] 饲用酸化剂作为一种可降低饲料在消化道中的pH值，为动物提供最适消化道环境的新型添加剂，已在国内外得到广泛应用。酸化剂被广泛应用于
家禽、仔猪、肉牛、
奶牛、羊等动物的饲料中。饲用酸化剂可提高日粮适口性，增加仔猪采食量，早期断奶仔猪使用延胡索酸使增重率提高了5.1％，料肉比降低6.5％。常用的酸化剂有柠檬酸、延胡索酸、乳酸、异位酸等
有机酸和
甲酸、丙酸、
盐酸、
磷酸等
无机酸。不同的酸化剂各有其特点，但使用最广泛、效果较好的是柠檬酸、延胡索酸和复合酸。延胡索酸具有广谱杀菌和抑菌活性，如在饲料中加入0.2％～0.4％浓度的延胡索酸，可杀死葡萄球菌和链球菌；0.4％可杀死大肠杆菌；2％以上浓度对产毒
真菌具有杀灭和抑制作用。
[0006] 目前，国内饲用酸化剂大多是发酵液经中和、酸解、脱色、离交和结晶等精制处理后的食品级有机酸的复配产品，其有机酸单一，酸味苦涩。食品级有机酸生产均要经过中和、酸解、脱色、离交或结晶生产工艺。中和与酸解是把有机酸分离纯化出来，二者均会产生大量的
废水废液污染相当严重，耗能耗水，成本高。脱色是脱去维生素和色素等物质或营养，离交是脱去矿物元素，如
钙、磷、镁、钠、
钾、氯、硫、
铁、
铜、锌、锰、碘、钴、硒等。脱色和离交往往都会产生大量的废水、废液，污染重，成本高，并且会造成酸味苦涩。因此，饲用不中和、不酸解、不脱色、不离交的原味品将是未来发展的方向。然而，目前尚未发现不中和、不酸解、不脱色、不离交的有机酸发酵液直接复配的饲料产品。由于本
专利有机酸的生产采取固态发酵
吸附液体发酵的生产技术，发酵后无中和、酸解、脱色、离交和结晶等精制生产工艺。因此，本专利与食品级有机酸的生产工艺有着本质的区别。
[0007] 固态发酵是指没有或几乎没有自由水存在下，在有一定湿度的水不溶性固态基质中，用一种或多种微生物的一个生物反应过程。广义上讲，固态发酵是指一类使用不溶性固体基质来培养微生物的工艺过程，既包括将固态悬浮在液体中的深层发酵，也包括在没有(或几乎没有)游离水的湿固体材料上培养微生物的工艺过程。多数情况下是指在没有或几乎没有自由水存在下，在有一定湿度的水不溶性固态基质中，用一种或多种微生物发酵的一个生物反应过程。狭义上讲，固态发酵是指利用自然底物做
碳源及
能源，或利用惰性底物做固体支持物，其体系无水或接近于无水的任何发酵过程。
[0008] 目前，柠檬酸和乳酸等有机酸生产有固态发酵、液态浅盘发酵和深层发酵3种方法。柠檬酸固态发酵是以薯干粉、
淀粉粕以及含淀粉的农副产品为原料，配好培养基后，在常压下蒸煮，冷却至接种
温度，高温灭菌冷却，接入种曲，装入曲盘，在一定温度和湿度条件下发酵。采用固态发酵生产柠檬酸，设备简单，操作容易。液态浅盘发酵多以糖蜜为原料，其生产方法是将灭菌的培养液通过管道转入一个个发酵盘中，高温灭菌冷却，接入菌种，待菌体繁殖形成菌膜后添加糖液发酵产酸。发酵时要求在发酵室内通入无菌空气。柠檬酸深层发酵生产柠檬酸的主体设备是
发酵罐。微生物在这个密闭容器内繁殖与发酵。现多采用通用发酵罐。它的主要部件包括罐体、搅拌器、冷却装置、空气分布装置、消泡器，
轴封及其他附属装置。
[0009] 与固态发酵相比，柠檬酸和乳酸有机酸的液体深层发酵也有很多优点：一是发酵周期短，发酵产物有机酸含量高，发酵效率高；二是能够规模化、工业化和自动化生产；三是发酵控制简单，不容易染菌。因此，柠檬酸液体发酵将是未来有机酸规模化、工业化的方向。
[0010] 与液体发酵相比，柠檬酸和乳酸有机酸的固态发酵也有很多优点：一是固态发酵培养基
含水量少，废水废渣少，环境污染少，容易处理，消耗低，功能设备简易；二是培养基原料多为恬然基质或废渣，广泛低廉；三是设备技术简易，后处理方便。因此，柠檬酸固态发酵在实践中仍然是一种有效的生产方法。
[0011] 因此，如何将有机酸固态与液体发酵生产结合起来是一个迫在眉睫的新课题。如何将固体发酵培养基作为液体发酵菌种是一个崭新的课题，如何将液体发酵培养基作为固体发酵菌种也是一个崭新的课题。
[0012] 与乳酸发酵不同，柠檬酸既可以固体发酵高效生产，也可以液体深层发酵生产。柠檬酸固体发酵和液体发酵生产产酸率都比较高。一般来说，柠檬酸发酵比较粗放，容易染菌。如何控制染菌是一个多年困扰发酵企业的技术难题。本专利研究发现柠檬酸固液异步发酵和彼此为种的生产技术可以大幅度减少发酵染菌的难题。
[0013] 此前，本专利
申请人刘萱仪和孟龙曾经申报专利《一种果酸饲料添加剂的制备方法》(专利申请号：CN201510424595.8)和本专利申请人《一种畜禽酸化酵解饲料的制备方法》(专利申请号：CN201510997145.8)详尽阐述了酸化酵解饲料的制备方法。但这两项专利的制备方法存在如下缺陷：
[0014] 一、两项专利均是均是固体制种和液体发酵，未将液体发酵液作为固态发酵菌种，也未将固体发酵产物作为液体发酵菌种。并且此时的液体发酵液和固体发酵产物产酸率已经达到3-5％以上。
[0015] 二、两项专利固态发酵菌种均是复合菌种。在这些复合菌种中，缺乏柠檬酸发酵菌种，均是厌
氧发酵，不会产生柠檬酸等相应的有机酸，均是把有机酸浓缩液
喷涂混合到固态酶解发酵饲料上，由此致使两项专利生产的产品中有机酸含量相对都比较低。有机酸含量很难达到60％以上。
[0016] 三、两项专利培养基原料均为含淀粉类产品，难以利用
纤维和废渣废液，原料价格昂贵。
[0017] 四、两项专利最后混配工艺中均没有涉及到添加中草药和维生素技术。
[0018] 综上，柠檬酸固液异步发酵和彼此为种的发酵技术既可有效防止污染杂菌，充分利用纤维和废渣废液，具有发酵设备投资小，污染小，耗水耗电少，对发展节粮型畜牧业意义重大，又可高效利用含淀粉原料，提高发酵效率，单位容积酸含量高，大幅度提高柠檬酸含量。因此，利用固液异步产酸发酵技术来开发生产饲用酸化剂是十分必要的。
发明内容
[0019] 本发明旨在克服上述固态发酵时均没有产生相对应的有机酸、有机酸含量偏低和含有大量非营养性载体白
炭黑等不足，提供一种富含柠檬酸、蛋白质、粗纤维、粗脂肪、维生素和矿物元素等营养成分，具有抗腹泻、适口性好、营养高、易消化和抗营养因子含量低等特点的固液异步柠檬酸酸化酵解饲料。
[0020] 为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[0021] 一种固液异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备方法，所述的固液异步柠檬酸酸化酵解饲料分为两类，一类是先液后固柠檬酸酸化酵解饲料，另一类是先固后液柠檬酸酸化酵解饲料，其制备方法包括以下步骤：
[0022] (1)先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的制备：
[0023] (1.1)柠檬酸发酵液的制备
[0024] 将淀粉物质
粉碎、加水调浆，加入
液化酶、
糖化酶酶解，制得带渣糖化液，高温灭菌冷却后，接入产柠檬酸菌种发酵后制得柠檬酸发酵液；
[0025] 或将淀粉物质粉碎、加水调浆，加淀粉酶酶解液化糖化后，固液分离制得糖渣湿基和无渣糖化液，高温灭菌冷却后，在无渣糖化液中接入产柠檬酸菌种发酵制得柠檬酸发酵液；
[0026] 或将糖蜜离交脱铁，加水调浆制得糖蜜液，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸菌种发酵后制得柠檬酸发酵液；
[0027] 或将含糖产品打浆、调浆后，制得带渣糖液，高温灭菌冷却后，接入产柠檬酸菌种发酵后制得柠檬酸发酵液；
[0028] 或将含糖产品打浆、调浆后，固液分离制得糖渣湿基和无渣糖液，高温灭菌冷却后，在无渣糖液中接入产柠檬酸菌种发酵后制得柠檬酸发酵液；
[0029] (1.2)柠檬酸固态发酵培养基湿基的制备
[0030] 将淀粉物质、糖蜜糖浆中的一种或多种和果蔬、糖类产品、纤维物质、饼粕豆类产品、
食品加工副产品和营养辅料中的一种或多和干净水、柠檬酸发酵液、糖渣湿基混合，固体发酵后，制得柠檬酸固态发酵培养基湿基；
[0031] (1.3)先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的制备
[0032] 将市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的一种或多种和柠檬酸固态发酵培养基湿基混合得到先液后固柠檬酸酸化酵解饲料湿基，或混合后烘干或分别烘干后混合得到先液后固柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0033] (2)先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的制备：
[0034] (2.1)柠檬酸固态发酵培养基湿基的制备
[0035] 将淀粉物质、糖蜜糖浆中的一种或多种和果蔬、糖类产品、纤维物质、饼粕豆类产品、食品加工副产品和营养辅料中的一种或多和干净水、柠檬酸发酵液、糖渣湿基混合，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸菌种固体发酵后，制得柠檬酸固态发酵培养基湿基；
[0036] (2.2)柠檬酸液体发酵培养基浓浆的制备
[0037] 将淀粉物质粉碎、加水调浆，加淀粉酶酶解液化糖化，制得带渣糖化液，高温灭菌冷却后，加入柠檬酸固态发酵培养基湿基液体发酵后，制得柠檬酸液体发酵培养基浓浆；
[0038] 或将淀粉物质粉碎、加水调浆，加淀粉酶酶解液化糖化后，固液分离制得糖渣湿基和无渣糖化液，高温灭菌冷却后，在无渣糖化液中加入柠檬酸固态发酵培养基湿基液体发酵后，制得柠檬酸液体发酵培养基浓浆；
[0039] 或将糖蜜离交脱铁，加水调浆制得糖蜜液，高温灭菌冷却后，加入柠檬酸固态发酵培养基湿基液体发酵后，制得柠檬酸液体发酵培养基浓浆；
[0040] 或将含糖产品打浆、调浆后，制得带渣糖液，高温灭菌冷却后，加入柠檬酸固态发酵培养基湿基液体发酵后，制得柠檬酸液体发酵培养基浓浆；
[0041] 或将含糖产品打浆、调浆后，固液分离制得糖渣湿基和无渣糖液，高温灭菌冷却后，在无渣糖液中加入柠檬酸固态发酵培养基湿基液体发酵后，制得柠檬酸液体发酵培养基浓浆；
[0042] (2.3)先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的制备
[0043] 将市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的一种或多种和柠檬酸液体发酵培养基浓浆混合后得到先固后液柠檬酸酸化酵解饲料湿基，或混合后烘干或分别烘干后混合制成先固后液柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0044] 进一步地，所述淀粉物质为国家农业部饲料原料目录中淀粉物质的一种或多种，为玉米、稻谷、碎米、小麦、面粉、燕麦、
大麦、
高粱、红薯、木薯、甘薯、土豆，或者上述饲料原料的的膨化产品中的一种或多种；
[0045] 所述糖蜜为国家农业部饲料原料目录中糖蜜类产品的一种或多种，为
蔗糖糖蜜、甜菜糖蜜、大豆糖蜜中的一种或多种；
[0046] 所述果蔬为国家农业部饲料原料目录中含水果、果渣、蔬菜产品的一种或多种，为苹果、葡萄、香蕉、苹果渣、葡萄渣、香蕉渣、萝卜、西红柿中的一种或多种；
[0047] 所述含糖产品为国家农业部饲料原料目录中含糖类产品的一种或多种，为
甘蔗、甜菜中的一种或多种；
[0048] 所述糖类糖蜜糖浆为国家农业部饲料原料目录中糖类糖蜜糖浆的一种或多种，为蔗糖、
葡萄糖、果糖、葡萄糖浆、麦芽糊精浆/粉、果葡糖浆/粉、麦芽糖浆/粉、低聚糖浆/粉、蔗糖糖蜜、甜菜糖蜜、大豆糖蜜中的一种或多种；
[0049] 所述纤维物质为国家农业部饲料原料目录中纤维物质的一种或多种，为麸皮、米糠、牧草、青饲料、中草药、
农作物秸秆、树叶竹叶中的一种或多种；
[0050] 所述饼粕豆类产品为国家农业部饲料原料目录中饼粕豆类产品的一种或多种，为
豆粕、
棉粕、
菜籽粕、花生粕、芝麻粕、亚麻籽粕、葵花籽粕、大豆、豌豆、红豆，或者饼粕豆类产品的膨化产品中的一种或多种；
[0051] 所述食品加工副产品为国家农业部饲料原料目录中食品加工副产品的一种或多种，为玉米蛋白粉、小麦谷朊粉、大米蛋白粉、DDGS、
大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、大豆皮、玉米皮、糖渣、醋渣、酸渣、
酒糟、奶粉、乳糖、
乳清粉中的一种或多种，或者上述食品加工副产品的膨化产品中的一种或多种；
[0052] 所述营养辅料为石粉、非蛋白含氮物、维生素、微量元素和复合酶中的一种或多种；
[0053] 所述市售饲用非发酵源有机酸为国家农业部饲料添加剂目录中非发酵性有机酸的一种或多种，主要为甲酸、
苯甲酸、
酒石酸、富
马酸、山梨酸中的一种或多种；
[0054] 所述市售饲用无机酸为国家农业部饲料添加剂目录中无机酸的一种或多种，为磷酸、盐酸、
硫酸中的一种或多种；
[0055] 所述有机酸盐为国家农业部饲料添加剂目录中有机酸盐的一种或多种，为甲酸钙、丙酸钠、丙酸钙、丁酸钠、苯甲酸钠、山梨酸钠、山梨酸钾、
柠檬酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钙中的一种或多种；
[0056] 所述液体油脂为国家农业部饲料原料目录中液体油脂的一种或多种，为
大豆油及其乳化油、玉米油及其乳化油、
棕榈油及其乳化油、米糠油及其乳化油、
椰子油及其乳化油、鱼油和
动物油及其乳化油、
花生油及其乳化油、
菜籽油及其乳化油、茶油及其乳化油和植物精油及其提取物中的一种或多种；
[0057] 所述中草药为国家农业部中草药饲料原料和中草药兽药目录中中草药及其提取物中的一种或多种，为黄芪及其提取物、杜仲及其提取物、金
银花及其提取物、山楂及其提取物、陈皮及其提取物、红花及其提取物中的一种或多种；
[0058] 所述维生素为脂溶性维生素、维生素B和维生素C中的一种或多种。
[0059] 优选地，所述淀粉物质为玉米、稻谷、碎米、红薯、木薯、甘薯中的一种或多种；
[0060] 所述糖蜜为国家农业部饲料原料目录中糖蜜类产品的一种或多种，为蔗糖糖蜜、甜菜糖蜜、大豆糖蜜中的一种或多种；
[0061] 所述果蔬为苹果渣、葡萄渣、胡萝卜、西红柿中的一种或多种；
[0062] 所述含糖产品为甘蔗；
[0063] 所述糖类糖蜜糖浆为蔗糖、葡萄糖粉/浆、麦芽糊精浆/粉、蔗糖糖蜜、甜菜糖蜜、大豆糖蜜中的一种或多种；
[0064] 所述纤维物质为麸皮、米糠、牧草粉、作物秸秆中的一种或多种；
[0065] 所述饼粕豆类产品为豆粕、棉粕、菜籽粕、花生粕、大豆，或者上述饼粕豆类产品的膨化产品中的一种或多种；
[0066] 所述食品加工副产品为玉米蛋白粉、大米蛋白粉、DDGS、糖渣、醋渣、酸渣、酒糟，或者上述食品加工副产品的膨化产品中的一种或多种；
[0067] 所述营养辅料为石粉、非蛋白含氮物中的一种或多种；
[0068] 所述市售饲用非发酵源有机酸为甲酸、苯甲酸中的一种或多种；
[0069] 所述市售饲用无机酸为磷酸；
[0070] 所述有机酸盐为甲酸钙、丁酸钠、苯甲酸钠中的一种或多种；
[0071] 所述液体油脂为大豆油及其乳化油、玉米油及其乳化油、棕榈油及其乳化油、米糠油及其乳化油中的一种或多种；
[0072] 所述中草药为黄芪及其提取物；
[0073] 所述维生素为维生素C。
[0074] 进一步地，先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的制备条件如下：
[0075] 步骤(1.1)中制备柠檬酸发酵液的条件如下：
[0076] 发酵温度：1～60℃；
[0077] 起始发酵pH：自然；
[0078] 发酵类型：有氧发酵；
[0079] 发酵液起始糖含量：0.5-60％；
[0080] 发酵时间：3-480小时；
[0081] 步骤(1.2)中制备柠檬酸固态发酵培养基湿基的条件如下：
[0082] 干净水、柠檬酸发酵液、糖渣湿基、淀粉物质、果蔬、糖类产品、糖蜜糖浆、纤维物质、饼粕豆类产品、食品加工副产品和营养辅料的重量比为100：0～1000：0～500：0～2000：0～1000：0～1000：0～1000：0～1200：0～600：0～1000：0～100；
[0083] 产柠檬酸黑曲霉菌种发酵温度：6～60℃；
[0084] 起始发酵pH：自然；
[0085] 发酵类型：有氧发酵；
[0086] 培养基含水量：15-90％；
[0087] 发酵时间：6-480小时。
[0088] 步骤(1.3)中制备先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的条件如下：
[0089] 柠檬酸固态发酵培养基湿基、市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的重量比为100：0～1000：0～500：0～500：0～500：0～300：0～300。
[0090] 优选地，先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的制备条件如下：
[0091] 步骤(1.1)中制备柠檬酸发酵液的条件如下：
[0092] 发酵温度：24～28℃；
[0093] 起始发酵pH：自然；
[0094] 发酵类型：有氧发酵；
[0095] 发酵液起始糖含量：8-12％；
[0096] 发酵时间：12-24小时；
[0097] 步骤(1.2)中制备柠檬酸固态发酵培养基湿基的条件如下：
[0098] 干净水、柠檬酸发酵液、糖渣湿基、淀粉物质、果蔬、糖类产品、糖蜜糖浆、纤维物质、饼粕豆类产品、食品加工副产品和营养辅料的重量比为100：20～80：0～50：30～300：0～50：0～50：0～50：5～80：0～30：0～50：0.0005～2；
[0099] 产柠檬酸黑曲霉菌种发酵温度：24～28℃；
[0100] 起始发酵pH：自然；
[0101] 发酵类型：有氧发酵；
[0102] 培养基含水量：40-60％；
[0103] 发酵时间：72-120小时；
[0104] 步骤(1.3)中制备先液后固柠檬酸酸化酵解饲料的条件如下：
[0105] 柠檬酸固态发酵培养基湿基、市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的重量比为100：0～50：0～30：0～30：0～30：0～10：0～10。
[0106] 进一步地，先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的制备条件如下：
[0107] 步骤(2.1)中制备柠檬酸固态发酵培养基湿基的条件如下：
[0108] 干净水、柠檬酸菌种液、糖渣湿基、淀粉物质、果蔬、糖类产品、糖蜜糖浆、纤维物质、饼粕豆类产品、食品加工副产品和营养辅料的重量比为100：1～100：0～500：0～2000：0～1000：0～1000：0～1000：0～1200：0～600：0～1000：0～100；
[0109] 产柠檬酸黑曲霉菌种发酵温度：6～60℃；
[0110] 起始发酵pH：自然；
[0111] 发酵类型：有氧发酵；
[0112] 培养基含水量：15-90％；
[0113] 发酵时间：6-480小时；
[0114] 步骤(2.2)中制备柠檬酸液体发酵培养基浓浆的条件如下：
[0115] 发酵温度：1～60℃；
[0116] 起始发酵pH：自然；
[0117] 发酵类型：有氧发酵；
[0118] 发酵液起始糖含量：0.5-60％；
[0119] 发酵时间：3-480小时；
[0120] 步骤(2.3)中制备先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的条件如下：
[0121] 柠檬酸液体发酵培养基浓浆、市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的重量比为100：0～1000：0～500：0～500：0～500：0～300：0～300。
[0122] 优选地，先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的制备条件如下：
[0123] 步骤(2.1)中制备柠檬酸固态发酵培养基湿基的条件如下：
[0124] 干净水、柠檬酸菌种液、糖渣湿基、淀粉物质、果蔬、糖类产品、糖蜜糖浆、纤维物质、饼粕豆类产品、食品加工副产品和营养辅料的重量比为100：5～30：0～50：30～300：0～50：0～50：0～50：5～80：0～30：0～50：0.0005～2；
[0125] 产柠檬酸黑曲霉菌种发酵温度：24～28℃；
[0126] 起始发酵pH：自然；
[0127] 发酵类型：有氧发酵；
[0128] 培养基含水量：40-60％；
[0129] 发酵时间：72-120小时；
[0130] 步骤(2.2)中制备柠檬酸液体发酵培养基浓浆的条件如下：
[0131] 发酵温度：24～28℃；
[0132] 起始发酵pH：自然；
[0133] 发酵类型：有氧发酵；
[0134] 发酵液起始糖含量：8-12％；
[0135] 发酵时间：12-24小时；
[0136] 步骤(2.3)中制备先固后液柠檬酸酸化酵解饲料的条件如下：
[0137] 柠檬酸液体发酵培养基浓浆、市售饲用无机酸、有机酸盐、糖类糖蜜糖浆、液体油脂、中草药和维生素中的重量比为100：0～50：0～30：0～30：0～30：0～10：0～10。
[0139] 本发明的有益效果在于：本专利提供的固液异步柠檬酸酸化酵解饲料富含柠檬酸、蛋白质、粗纤维、粗脂肪、维生素和矿物元素等营养成分，具有抗腹泻、适口性好、营养高、易消化和抗营养因子含量低等特点。
具体实施方式
[0141] 一种先液后固异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备，包括以下步骤：
[0142] 将80kg玉米和10kg碎米粉碎，加300kg水调浆后，加入0.08-0.12kg液化酶和糖化酶酶解，制得376-378kg带渣糖化液和18kg糖渣湿基。在376-378kg无渣糖化液中，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸的黑曲霉菌种孢子10kg，在温度26-28℃、起始发酵pH自然的条件下，通入氧气，开展有氧发酵12小时，制得374-376kg柠檬酸发酵液。
[0143] 将80kg玉米、80kg稻谷、20kg糖蜜、80kg麸皮、18kg糖渣湿基和2kg石粉、1.8kg
硝酸铵混合后，高温灭菌、冷却后制得固态发酵培养基，高温灭菌冷却，接入374-376kg柠檬酸发酵液，在22-26℃、发酵pH自然和持续补充20kg无菌水的条件下，通入氧气，开展有氧发酵84-96小时，制得624-626kg柠檬酸固态发酵培养基湿基。
[0144] 将624-626kg柠檬酸固态发酵培养基湿基烘干后，生产365-373kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0145] 或将624-626kg檬酸固态发酵培养基湿基、100kg苯甲酸、50kg乳酸混合后，烘干生产515-523kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0146] 实施例2
[0147] 一种先固后液异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备，包括以下步骤：
[0148] 将120kg干净水、150kg玉米、50kg稻谷、30kg糖蜜、50kg麸皮、和1kg石粉、1.2kg硝酸铵混合后，高温灭菌、冷却后制得固态发酵培养基，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸的黑曲霉菌种18kg，在22-28℃、发酵pH自然和持续补充20kg无菌水的条件下，通入氧气，开展有氧发酵16小时，制得390-395kg柠檬酸固态发酵培养基湿基。
[0149] 将90kg碎米和10kg玉米粉碎后、加300kg水调浆，升温至95℃时加0.08-0.12kg液化酶和糖化酶酶解，制得400kg带渣糖液，高温灭菌冷却，接入390-395kg柠檬酸固态发酵培养基湿基，在22-28℃条件下有氧发酵60-72小时，制得775-780kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆。
[0150] 将775-780kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆烘干后，生产359-365kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0151] 或将775-780kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆、100kg苯甲酸、50kg磷酸和10kg黄芪提取物混合后，烘干生产519-526kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0152] (10kg黄芪提取物就是中草药。)
[0153] 实施例3
[0154] 一种先液后固异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备，包括以下步骤：
[0155] 将100kg碎米粉碎，加400kg水调浆后，加0.10-0.12kg液化酶和糖化酶酶解，制得500kg带渣糖化液。经固液分离制得18kg糖渣湿基和482kg无渣糖化液。
[0156] 在482kg无渣糖化液中，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸的黑曲霉菌种孢子10kg，在温度26-28℃、起始发酵pH自然的条件下，通入氧气，开展有氧发酵15小时，制得485kg柠檬酸发酵液。
[0157] 将100kg玉米、60kg稻谷、20kg糖蜜、80kg麸皮、18kg糖渣湿基和2kg石粉、1.8kg硝酸铵混合后，高温灭菌、冷却后制得固态发酵培养基，高温灭菌冷却，接入485kg柠檬酸发酵液，在22-26℃、发酵pH自然和持续补充20kg无菌水的条件下，通入氧气，开展有氧发酵84-96小时，制得760-765kg柠檬酸固态发酵培养基湿基。
[0158] 将760-765kg柠檬酸固态发酵培养基湿基烘干后，生产368-375kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0159] 或将760-765kg柠檬酸固态发酵培养基湿基、100kg苯甲酸、50kg磷酸混合后，烘干生产518-525kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0160] 实施例4
[0161] 一种先固后液异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备，包括以下步骤：
[0162] 将120kg干净水、100kg木薯、100kg玉米、30kg糖蜜、50kg麸皮、和1.5kg石粉、1.5kg硝酸铵混合后，高温灭菌、冷却后制得固态发酵培养基，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸的黑曲霉菌种20kg，在22-28℃、发酵pH自然和持续补充20kg无菌水的条件下，通入氧气，开展有氧发酵16小时，制得392-397kg柠檬酸固态发酵培养基湿基。
[0163] 将150kg碎米和10kg木薯粉碎后、加300kg水调浆，升温至95℃时，加入0.08-0.12kg液化酶和糖化酶酶解，制得400kg带渣糖液，高温灭菌冷却，接入392-397kg柠檬酸固态发酵培养基湿基，在22-28℃条件下有氧发酵60-72小时，制得826-832kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆。
[0164] 将826-832kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆烘干后，生产412-417kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0165] 或将826-832kg柠檬酸液体发酵培养基浓浆、100kg苯甲酸、50kg甲酸钙混合后，烘干生产462-467kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0166] 实施例5
[0167] 一种先液后固异步柠檬酸酸化酵解饲料的制备，包括以下步骤：
[0168] 将50kg玉米粉碎，加200kg离交脱铁糖蜜和150kg水调浆后，制得350kg带渣糖液。在390kg带渣糖液中，高温灭菌冷却，接入产柠檬酸的黑曲霉菌种孢子15kg，在温度26-28℃、起始发酵pH自然的条件下，通入氧气，开展有氧发酵12小时，制得395kg柠檬酸发酵液。
[0169] 将60kg玉米、20kg稻谷、20kg麸皮和2kg石粉、1.8kg硝酸铵混合后，高温灭菌、冷却后制得固态发酵培养基，高温灭菌冷却，接入395kg柠檬酸发酵液，在22-26℃、发酵pH自然和持续补充20kg无菌水的条件下，通入氧气，开展有氧发酵84-96小时，制得490-495kg柠檬酸固态发酵培养基湿基。
[0170] 将490-495kg柠檬酸固态发酵培养基湿基烘干后，生产258-265kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0171] 或将490-495kg柠檬酸固态发酵培养基湿基、100kg苯甲酸、50kg乳酸和15kg维生素C混合后，烘干生产423-430kg异步柠檬酸酸化酵解饲料干基。
[0172] 一、实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料中主要活性物质含量，见下表1。
[0173] 表1、实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料产品中营养物质含量
[0174]项目 指标 项目 指标 项目 指标
色泽 黄褐色或浅黄色 粗脂肪/％ ≥1.0 苯甲酸/％ -
水分/％ ≤12.0 柠檬酸/％ ≥30.0 总酸/％ ≥30.0
粗蛋白/％ ≥8.0 L-乳酸/％ - 益生菌总数cfu/g ≥0.03×106
粗纤维/％ ≥2.0 富马酸/％ -
水溶性物质 ≥30.0
[0175] 二、实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料的饲喂断奶仔猪效果。
[0176] 为探讨实施例2制备的柠檬酸酸化酵解饲料对断奶仔猪的饲喂效果，选取体重6±0.5kg杜长大三元杂交健康断奶仔猪300头，按体重、胎次相近，性别各半的原则随机分成5组，每组6个重复，每个重复10头猪。对照组不添加酸化剂，酸化剂组添加市售酸化剂6kg/吨，柠檬酸组添加柠檬酸10kg/吨，乳酸组添加柠檬酸12kg/吨，试验组添加柠檬酸酸化酵解饲料20kg/吨，配制出生长猪料。各组饲料蛋白质和
能量相近。预试期5天，正试期30天。
[0177] 日粮中添加市售酸化剂6kg/吨、柠檬酸10kg/吨、乳酸12kg/吨和柠檬酸酸化酵解饲料20kg/吨后，断奶仔猪的日增重分别比对照组提高5.19％、5.74％、9.81％和13.15％；采食量分别比对照组提高3.73％、4.28％、7.54％和10.82％；料肉比分别比对照组降低
13.79％、13.79％、20.69％和20.69％；腹泻率分别比对照组明显降低了62.52％、75.00％、
87.52％和93.76％。结果表明：柠檬酸酸化酵解饲料能够明显提高断奶仔猪的生产性能。
[0178] 表2.柠檬酸酸化酵解饲料对断奶仔猪生产性能的影响
[0179]
[0180] 三、实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料的饲喂肉仔鸡效果。
[0181] 为探讨实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料对肉仔鸡的饲喂效果，选取1日龄肉仔鸡900只，随机分成3组，每组6个重复，1个重复50只肉仔鸡，即对照组、酸化剂组、柠檬酸酸化酵解饲料组。对照组不添加酸化剂，酸化剂组添加市售酸化剂5kg/吨，试验组添加柠檬酸酸化酵解饲料10kg/吨。
[0182] 日粮中添加添加市售酸化剂5kg/吨和柠檬酸酸化酵解饲料10kg/吨后，肉鸡日增重分别比对照组提高12.60％和20.23％，采食量分别比对照组提高4.60％和8.63％，料肉比分别比对照组降低7.11％和9.64％。结果表明：柠檬酸酸化酵解饲料能够明显提高肉仔鸡的生产性能。
[0183] 表3.柠檬酸酸化酵解饲料对肉鸡生产性能的影响
[0184]
[0185] 四、实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料的饲喂鲤鱼效果。
[0186] 为探讨实施例1制备的柠檬酸酸化酵解饲料对鲤鱼的饲喂效果，选取体重600±0.5g鲤鱼1200尾，随机分成4组，每组6个重复，1个重复50尾，即对照组、酸化剂组、柠檬酸组、柠檬酸酸化酵解饲料组。对照组不添加酸化剂，酸化剂组添加市售酸化剂6kg/吨，柠檬酸组添加柠檬酸10kg/吨，试验组添加柠檬酸酸化酵解饲料20kg/吨。
[0187] 日粮中添加100、200和300ppm柠檬酸酸化酵解饲料11周后，鲤鱼增重率分别比对照组提高25.41％、30.67.99％和38..03％，
摄食量分别比对照组提高23.35％、37.38％和39.30％，饵料系数分别比对照组降低10.43％、12.32％和14.22％。结果表明：柠檬酸酸化酵解饲料能够明显提高鲤鱼的生长性能。
[0188] 表4.柠檬酸酸化酵解饲料对鲤鱼生长性能的影响
[0189]
[0190] 以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属
本技术领域的技术人员对所描
