检测电压门控钾离子通道抗体的电化学发光试剂盒、制法
专利汇可以提供检测电压门控钾离子通道抗体的电化学发光试剂盒、制法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种从血液中检测Kv1.4（ 电压 门 控 钾 离子通道） 抗体 的电 化学发光 试剂 盒 、制法，制备的试剂盒包括：链霉亲和素偶联的 磁性 微粒工作液， 生物 素标记的Kv1.4 抗原 工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液，Kv1.4抗体的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，清洗液，试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素-生物素 信号 放大系统，检测灵敏度高、线性范围宽，检测结果重复性好，可以实现Kv1.4抗体的准确定量。，下面是检测电压门控钾离子通道抗体的电化学发光试剂盒、制法专利的具体信息内容。
1.一种检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的Kv1.4抗原工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，清洗液。
2.根据权利要求1所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述Kv1.4抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段。
3.根据权利要求1或2所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液由pH为6.8～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05～2wt％的牛血清白蛋白和/或酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05～
0.5wt％的proclin 300和/或叠氮钠。
4.根据权利要求1-3任一项所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的Kv1.4抗原以及三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、1mg/L～100mg/L的抗干扰剂A、0.5～5wt％的氯化钠、1～5wt％的蔗糖、0.05～2wt％的小牛血清、0.02～1wt％的酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05～0.5wt％的proclin 300和/或叠氮钠。
5.根据权利要求1-4任一项所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒还包括Kv1.4抗体校准品工作液和/或质控品工作液，所述Kv1.4抗体校准品和/或质控品工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～
0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液中含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、10～50wt％的人血清、0.5～3wt％的氯化钠、2～20wt％的乙二醇、0.02～1wt％的Brij 35和/或Triton X-100和/或Tween 20和/或平平加O-20、0.05～0.5 wt％的proclin 300和/或叠氮钠。
6.根据权利要求1-5任一项所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述清洗液为pH为13以上，浓度为0.1 mol/L～0.5 mol/L的KOH，所述清洗液含有0.01～2 wt％的烷基聚乙二醇类表面活性剂。
7.根据权利要求1-6任一项所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述电化学发光底物液为pH为6.0～7.2，浓度为0.05～0.4 mol/L的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，所述缓冲液含有0.05～0.4 mol/L的三丙胺、0.01～2 wt％的烷基聚乙二醇类表面活性剂、0.05～0.5 wt％的proclin 300和/或叠氮钠。
8.一种检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液的制备，生物素标记的Kv1.4抗原工作液的制备，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液的制备，清洗液的配制，电化学发光底物液的配制，将上述制备的试剂进行分装及组装。
9.根据权利要求8所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述生物素标记的Kv1.4抗原的制备方法为：将N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素与Kv1.4抗原按照1 20: 1的摩尔比在2-8℃或室温条件下混匀反应0.5-2小时，透析或过柱除去多余的~
生物素，得生物素标记的Kv1.4抗原。
10.根据权利要求8或9所述的检测Kv1.4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述三联吡啶钌标记抗人IgG抗体的制备方法为：将pH为6.5-8.0的抗人IgG抗体溶液与Ru-NHS酯溶液混合，使抗人IgG抗体与Ru-NHS酯的质量比为5-20: 1，37℃避光反应1-3小时，然后加入甘氨酸溶液终止反应，将反应液透析除去多余的Ru-NHS酯，得三联吡啶钌标记抗人IgG抗体。
检测电压门控钾离子通道抗体的电化学发光试剂盒、制法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
将链霉亲和素偶联的磁微粒悬浮液，磁分离去除上清，用pH为6.8，浓度为0.1mol/ L的PBS缓冲液重悬至浓度为0.5mg/mL，所述缓冲液含有0.5 wt％的牛血清白蛋白、0.05 wt％的Triton X-100、0.05 wt％ proclin300和0.05 wt％叠氮钠；
（2）生物素标记的Kv1.4抗原的制备
取1mg 重组Kv1.4抗原，加入适量PBS缓冲液(0.05M，pH7.0-7.6)调整抗体总浓度至1 mg/ml，并加入透析袋中进行透析，每隔3-4小时换一次透析液，更换3-4次，透析后将抗原转移至离心管或冻存管内；
准确称取1mg N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素（NHS-Biotin），加入适量水调整其浓度为2 mg/ml，得NHS-Biotin水溶液；
将NHS-Biotin水溶液加入抗原溶液中，使NHS-Biotin与抗原按照5:1的摩尔比在室温混匀反应1小时，得生物素标记的Kv1.4抗原溶液；将生物素标记的Kv1.4抗原溶液转移至透析袋进行透析（透析液为0.1M PBS，pH7.4），每隔3-4小时换一次透析液，更换3-4次，透析后收集生物素标记的Kv1.4抗原至离心管或冻存管内，≤-20℃冷冻保存备用；
（3）三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体的制备
用DMSO配制浓度为10mg/mL的Ru-NHS酯溶液；用0.1M、pH7.4的磷酸盐缓冲液配制浓度为1 mg/mL的抗人IgG抗体抗体溶液；
于1mL抗人IgG抗体溶液中加入10µL配制好的Ru-NHS酯溶液，37℃避光反应2小时，然后加入20μL、2M的甘氨酸终止反应，将反应液于0.1M、pH7.4的PBS缓冲液透析过夜，期间换液3次，回收三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体溶液，≤-20℃冷冻保存备用；
（4）生物素标记的Kv1.4抗原工作液以及三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液的制备配制pH为6.5，浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含有2 wt％的牛血清白蛋白、0.1 wt％的酪蛋白、1 wt％的氯化钠、1 wt％的蔗糖、2 wt％的小牛血清、0.5 wt％的Triton X-100、0.2 wt％的proclin 300；然后用该缓冲液配制抗体浓度为1 mg/L的生物素标记的Kv1.4抗原工作液，以及抗体浓度为10 mg/L三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液；
（5）校准品和质控品工作液的配制
配制pH为7.4，浓度为0.1mol/L的N-(2-羟乙基)哌嗪-N′(2-乙磺酸)(HEPES)缓冲液，所述缓冲液含有1 wt％的牛血清白蛋白、20 wt％的人血清、1 wt％的氯化钠、5 wt％的乙二醇、0.1 wt％的Tween-20、0.2wt％的proclin 300；然后用该缓冲液配制Kv1.4抗体校准品和质控品工作液，校准品共5个点，Kv1.4抗体的浓度分别为30pg/mL、500pg/mL、1500pg/mL、
5000pg/mL、10000pg/ml。质控品分高，低两个浓度，Kv1.4抗体的浓度分别为1000pg/mL、
8000 pg/mL；
（6）清洗液的配制
配制176 mmol/L的KOH溶液，所配清洗液中含有0.15%的十二醇乙二醇醚；
（7）化学发光底物液的配制
配制pH为6.5，0.15mol/L的三丙胺溶液，该溶液含有0.05 wt％的十二醇乙二醇醚、
0.01 wt％的proclin 300；
（8）试剂分装及组装，将链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液12 ml/瓶、生物素标记的Kv1.4抗原工作液12 ml/瓶、三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液12 ml/瓶、校准品/质控品工作液1.0 ml/瓶分装后，组装在一起，保存于2-8℃，将清洗液380 ml/瓶、化学发光底物液380 ml/瓶单独包装，保存于20℃-25℃。
于抗原-抗体-抗抗体复合物溶液中加入链霉亲和素包被的磁性微粒工作液，37℃孵育10分钟，形成磁性复合物悬浮液；
将磁性复合物悬浮液置于磁场内，清洗液流过，洗涤所述磁性复合物；向洗涤后的磁性复合物中先后注入电化学发光底物液，检测其光子强度。由光子强度和定标曲线推算出Kv1.4抗体的含量。
试剂灵敏度是根据最低检测限(LOB)来确定的，最低检测限按下述实验方法进行。检测零浓度校准品20次，得到20次测定结果的信号值(RLU)，计算其平均值M和标准差SD，得出M+
2SD所对应的RLU值，根据零浓度校准品与相邻浓度校准品(相邻浓度是30 pg/mL)之间的浓度-RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应的RLU值带入上述方程中，计算得出对应的浓度，即最低检测限(LOB)。
检测浓度为 592pg/mL、3918pg/mL两个浓度的样本，每个样本检测10次，分别计算每个样本的变异系数(CV)，结果表明该试剂盒变异系数CV均小于4％。该CV值明显小于ELISA等传统方法，主要是由磁珠法电化学发光技术的高性能带来的。
由于该指标目前尚未有国家或国际标准品，采用第三方外购标准品对试剂盒的准确度进行测定。检测浓度为137、886、5270pg/mL三个浓度的Kv1.4抗体标准品，分别计算检测值与理论值的偏差，结果表明该试剂盒检测标准品偏差均小于10％。
[2] 雷国华, 刘建军, 李尊波. 重症肌无力相关抗体及检测方法研究进展[J]. 中国现代医生, 2018, 56(5):165-168。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种VHA抑制DR5在缺氧下精子生成减少的检测方法 | 2020-05-08 | 269 |
| 一种用于保护并稳定粪便中血红蛋白的收集液及其应用 | 2020-05-12 | 771 |
| 一种牛种繁殖方法 | 2020-05-11 | 1031 |
| 一种CK-MB型肌酸激酶同工酶、制备方法及应用 | 2020-05-11 | 610 |
| 含培养肉的混合食品 | 2020-05-12 | 476 |
| 鸡源乳酸肠球菌AR及其筛选方法、应用 | 2020-05-11 | 558 |
| 一种鲫造血器官坏死病灭活疫苗及其制备方法 | 2020-05-11 | 714 |
| 一种人生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备方法 | 2020-05-12 | 231 |
| 基于3D全景的定点定位工程安装装置 | 2020-05-08 | 191 |
| 一种可分体和组合的猫抓板 | 2020-05-11 | 312 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
