一种卵母细胞体外成熟培养液及培养方法
专利汇可以提供一种卵母细胞体外成熟培养液及培养方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种卵母细胞体外成熟培养液及利用其培养卵母细胞的方法，涉及一种卵母细胞培养液及利用其培养卵母细胞的方法。解决了现有卵母细胞体外培养发育能 力 低的问题。卵母细胞体外成熟培养液由卵母细胞常规培养液和维生素B12、胎 牛 血清、FSH、LH、17β-雌二醇、丙 酮 酸 钠、EGF、青霉素及 硫酸 链霉素 组成。将卵母细胞放入预热的卵母细胞体外成熟培养液中，然后置于CO2体积浓度为5％的环境内成熟培养20～24小时，即获得成熟的卵母细胞。本 发明 卵母细胞体外成熟培养液能够减少外界环境带来的应激损伤，促进卵母细胞的 细胞质 成熟，提高了体外成熟的卵母细胞孤雌激活和受精后的胚胎发育能力。，下面是一种卵母细胞体外成熟培养液及培养方法专利的具体信息内容。
1.一种卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于卵母细胞体外成熟培养液由卵母细胞常规培养液和维生素B12、胎牛血清、FSH、LH、17β-雌二醇、丙酮酸钠、EGF、青霉素及硫酸链霉素组成；卵母细胞体外成熟培养液中维生素B12的浓度为2mg/ml、血清的浓度为0.1ml/ml、卵泡刺激素的浓度为0.05IU/ml、黄体生成素的浓度为0.05IU/ml、17β-雌二醇的浓度为
1μg/ml、丙酮酸钠的浓度为24.2mg/L、表皮生长因子的浓度为10ng/ml、青霉素的浓度为
100IU/ml、硫酸链霉素的浓度为100μg/ml。
2.根据权利要求1所述的卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于卵母细胞常规培养液为DMEM培养液、TCM199培养液或MEM培养液。
3.根据权利要求1所述的卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于血清为小牛血清、胎牛血清或新生牛血清。
4.利用权利要求1卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于卵母细胞用卵母细胞体外成熟培养液按以下步骤培养：
将卵母细胞放入预热的卵母细胞体外成熟培养液中，然后置于CO2体积浓度为5％的环境内成熟培养20～24小时，即获得成熟的卵母细胞。
5.根据权利要求4所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于卵母细胞为GV期卵母细胞。
6.根据权利要求4所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于卵母细胞体外成熟培养液预热1～3小时。
7.根据权利要求4或6所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于卵母细胞体外成熟培养液置于35～40℃的环境中预热。
8.根据权利要求7所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于培养牛卵母细胞，卵母细胞体外成熟培养液置于38.5℃的环境中预热和培养。
9.根据权利要求7所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于培养小鼠卵母细胞，卵母细胞体外成熟培养液置于37℃的环境中预热和培养。
10.根据权利要求4所述的卵母细胞体外成熟培养液培养卵母细胞的方法，其特征在于3μl的卵母细胞体外成熟培养液中放入1枚卵母细胞。
一种卵母细胞体外成熟培养液及培养方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
再将hCG后12小时或IVM后14小时的卵母细胞在受精液(T6+20mg/mlBSA)中洗3次，移入
6
已经平衡过夜的受精滴(20枚/40μl)中，加入适量体积的获能精子，使精子密度在1×10左右。培养6小时后，用无糖CZB液洗去卵母细胞周围附着精子，选取含两原核和第二极体的受精卵，置于无糖CZB中培养；
6
使终浓度达到×10/ml。用精子悬浮液做受精小滴(100μl)，每小滴放入15枚成熟培养后的卵母细胞；受精6～7h后去除卵丘，将受精卵转入发育培养液；发育培养液采用SOF+6％BSA，每40μl发育培养液小滴放入15～20枚受精卵进行培养。
再将IVM后14小时的卵母细胞在受精液(T6+20mg/mlBSA)中洗3次，移入已经平衡过夜的
6
受精滴(20枚/40μl)中，加入适量体积的获能精子，使精子密度在1×10左右。培养6小时后，用CZB液洗去卵母细胞周围附着精子，选取含两原核和第二极体的受精卵，置于CZB中培养；
(BO+3mg/mLBSA+8μl/ml肝素)制成精子悬浮液，光镜下细胞计数，使终浓度达到×10/ml。用精子悬浮液做受精小滴(100μl)，每小滴放入15枚成熟培养后的卵母细胞；受精
6～7h后去除卵丘，将受精卵转入发育培养液；发育培养液采用SOF+6％BSA，每40μl发育培养液小滴放入15～20枚受精卵进行培养。
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