缓冲剂用于放射性核素络合的用途
阅读：310发布：2020-05-12
专利汇可以提供缓冲剂用于放射性核素络合的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种用于将 放射性 核素，有利地是镓，与 螯合物 进行络合的方法，所述络合有利的是在环境 温度 无需加热下通过将所述 放射性核素 加入到在缓冲剂溶液中的螯合物中来进行的，这种溶液的缓冲剂包括用于与所述放射性核素配位的二个到五个之间的官能团，每个配位官能团独立地选自 羧酸 官能团以及羟基官能团，其条件是所述缓冲剂包含至少一个羧酸官能团以及至多两个羧酸官能团。本发明还涉及得到的可注射的溶液。，下面是缓冲剂用于放射性核素络合的用途专利的具体信息内容。
1.一种用于将放射性核素，有利地是镓，与螯合物进行络合的方法，所述络合有利的是在环境温度无需加热下通过将所述放射性核素加入到在缓冲剂溶液中的螯合物中来进行的，这种溶液的缓冲剂包括用于与所述放射性核素配位的二个到五个之间的官能团，每个配位官能团独立地选自羧酸官能团以及羟基官能团，其条件是所述缓冲剂包含至少一个羧酸官能团以及至多两个羧酸官能团。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述缓冲剂包含至少一个羟基官能团。
3.根据权利要求1和2之一所述的方法，其中所述放射性核素是镓，有利地是Ga68。
4.根据权利要求1至3中任何一项所述的方法，其中所述缓冲剂选自乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、碳酸盐和磷酸盐缓冲剂、以及它们的混合物，有利的选自乳酸盐、酒石酸盐和碳酸盐缓冲剂，以及它们的混合物。
5.根据权利要求1至4中任何一项所述的方法，其中所述螯合物是载体化的螯合物，有利的是用一种用于靶向诊断感兴趣的病理学区域的试剂进行载体化的，所述试剂选自氨基酸、肽、多肽、维生素、单糖或多糖、抗体、核酸、双环拉胺或适体。
6.根据权利要求1至5中任何一项所述的方法，其中所述载体化的螯合物选自载体化的NOTA、载体化的PCTA、载体化的AAZTA以及载体化的DOTA，有利的是二脱氮-NOTA、NOTA叶酸盐、二脱氮PCTA或PCTA叶酸盐。
7.一种可注射的溶液，所述溶液包括缓冲剂以及与放射性核素络合的螯合物，所述缓冲剂包括用于与所述放射性核素进行配位的二个到五个之间的官能团，每个配位官能团独立地选自羧酸官能团以及一个羟基官能团，其条件是所述缓冲剂包括至少一个羧酸官能团以及至多两个羧酸官能团。
8.根据权利要求7所述的溶液，其中所述放射性核素是镓。
9.根据权利要求7和8之一所述的溶液，其中所述缓冲剂选自乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、碳酸盐和磷酸盐缓冲剂、以及它们的混合物，有利的选自乳酸盐、酒石酸盐和碳酸盐缓冲剂，以及它们的混合物。
10.根据权利要求7至9中任何一项所述的溶液，其中所述螯合物是载体化的螯合物，有利的是用一种用于靶向诊断感兴趣的病理学区域的试剂进行载体化的，所述试剂选自氨基酸、肽、多肽、维生素、单糖或多糖、抗体、核酸、双环拉胺或适体。
11.根据权利要求7至10中任何一项所述的溶液，其中所述载体化的螯合物选自载体化的NOTA、载体化的PCTA、载体化的AAZTA以及载体化的DOTA，有利的是二脱氮-NOTA、NOTA叶酸盐、二脱氮PCTA或PCTA叶酸盐。
12.一种仪器，所述仪器有利地是自动的、无需加热的装置，所述仪器包括用于混合由放射性核素发生器更具体地Ga68发生器提供的放射性核素的溶液、未络合的螯合物的溶液、以及缓冲剂溶液的至少一个区室，所述缓冲剂选自乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、碳酸盐和磷酸盐以及它们的混合物。
缓冲剂用于放射性核素络合的用途
技术领域
[0001] 本发明涉及改进的造影剂的组合物并且涉及用于制备此类组合物的方法。本发明具体涉及用于PET(正电子发射断层摄影术)成像的产品，并且特别是包含用于PET成像的放射性核素(优选镓68)的产品。
背景技术
[0002] 文件WO 2007/042504以申请人的名义详细说明了特别是用镓68(Ga68)的PET成像的优点，镓68是非常有利的，因为它不需要使用在医院附近或在医院内的非常庞大并且昂贵的回旋加速器。将通过小的专用发生器产生的Ga68偶联到尚未标记的“载体化的螯合物”(在本申请中没有差异地称为“冷盒”(″cold kit″))上，配位反应(通过冷盒来络合所述放射性核素)提供了Ga68-“放射性标记的载体化螯合物”(在本申请中没有差别地称为“络合的载体化螯合物”)，将它给予患者用于PET成像。
[0003] 更确切地说，非常有利的是，载体化的螯合物包括“靶向部分”(在本申请中没有差别地称为“靶向剂”或“生物载体”)用于靶向具体的生物靶(例如细胞受体)特别是具有诊断兴趣的病理性区域，所述靶向部分典型地通过化学接头(linker)(通过任何合适的键合基团的共价键)被连接到构成信号部分的螯合物上。这种螯合物能够络合所述放射性核素(例如，大环螯合物，如DOTA、NOTA或PCTA)。
[0004] 更确切地说，将放射性Ga68的溶液(镓发生器洗出液)在医院的专用的并且受保护的区域(表示放射药物学的区域)内与预先制备的载体化的螯合物溶液(所述冷盒)(它是由造影产品的制造厂家提供的)进行混合。
[0005] 有利地，这种混合是在自动化装置中进行的，向所述装置中一方面引入发生器洗出液Ga68的剂量并且另一方面引入载体化的螯合物(尚未用Ga68进行放射性标记)的剂量。
[0006] 考虑到临床实践中的放射性核素的短半衰期(对于镓68是68分钟)，始终的意图是改进用于制备放射性标记的造影剂的条件特别是获得非常快速而简单的与高纯度放射性标记的螯合物的络合。更确切地说，意图是在非常短的时间内获得对于放射性标记的螯合物具有至少90％、优选至少95％的产率和纯度的络合。
[0007] 对于镓技术，现有技术首先描述了通过在75℃至95℃等级的温度下加热至少15分钟来进行的镓络合。在这些温度下使用HEPES(磺酸衍生物)或乙酸盐缓冲剂达到了令人满意的纯度。然而另一方面，与镓68同位素的短寿命相比，该加热时间是相对长的，并且要求适当的设备。
[0008] 对于申请人的知识，这些缓冲剂直到现在被认为是被镓络合领域的普通技术人员所使用的唯一的缓冲剂，这可能是由于它们的在对于这种络合所希望的物理化学条件下(特别是获得3.5与4.5之间的pH)被证明的有效性，以及它们在PET-化合物生物化学上的普通用途。
[0009] 然而，这些缓冲剂具有以下缺点：
[0010] -它们的使用要求非常特定的物理化学条件(特别是浓度和pH)。因此，它们不能使之能够获得用于络合的宽泛的工作pH范围，这对于使用者是非常限制的。特别地，这使工作条件固定了，具有不顺应调节的风险，这对于药物产品当然是主要问题。例如，如果从发生器得到的Ga68洗出液的溶液是更具酸性的，所使用的缓冲剂可能不再具有所需要的缓冲能力，这可能中断络合和/或损害生物载体，并且因此表示所述产品不符合为了被注入患者体内它必须满足的规范；
[0011] -所述HEPES缓冲剂并不出现在药典中，由此在人类中的临床使用方面提出了络合物药物管理问题。
[0012] 为了改进络合过程，现有技术研究没有涉及可以使用的缓冲剂溶液，但是涉及了加热的方法以及对于这种加热的需要。
[0013] 因此，随后现有技术在文件WO2004/089425中描述了一种更加快速的微波配位方法，旨在避免加热步骤然而同时仍使用了相同的缓冲剂。然而，这种微波步骤同样导致了对于使用者的约束，并且表现出载体化螯合物的损害和/或降解的风险，药理学生物载体事实上通常对于这种处理是敏感的，特别是肽、有机药效团、维生素以及蛋白质。
[0014] 为了避免这些困难，出版物Velikyan等人，Bioconjugate Chem，2008，19，569-573描述了一种在环境温度下的并且不使用微波但是使用以前已经使用的缓冲剂、更准确地是HEPES或醋酸钠缓冲剂(在某些非常特定的浓度和pH值下)的配位方法。更确切地说，所述HEPES缓冲剂被描述为在4.6-4.8的pH和1M下有效，并且所述乙酸盐缓冲剂被描述为在4.6-4.8的pH和0.4M下有效。
[0015] 因此，总体上，现有技术教导了特别是在环境温度下的络合，要求仅使用某些缓冲剂(HEPES、乙酸盐)并且在非常特殊的物理化学条件下。
[0016] 因此，由现有技术看来，仅仅某些非常特定的、相当严格的物理化学条件使得能够在环境温度下使用这些缓冲剂。本发明针对解决获得缓冲剂的问题，所述缓冲剂对于镓络合有效的、并且可以在各种的化学条件下使用。
发明内容
[0017] 令人惊讶地，对于络合反应，通过使用某些适当的药典缓冲剂(除了HEPES和乙酸盐之外)，在比现有技术更不严格和限制的物理化学络合条件(特别是浓度和pH)下，本申请人已经注意到特别是在环境温度下(不用加热步骤也不用微波)成功地获得了络合，特别是在络合的快速性(在小于15分钟内、优选在小于10分钟内、更优选在3至10分钟内，例如5至8分钟)以及放射性标记的螯合物的质量方面。在一些螯合物(特别是NOTA和PCTA)的情况下以及在一些已经观察到的缓冲剂的情况下，由本申请人特别地获得了非常令人满意的结果，以具有可比较的物理化学特征。甚至已经可能在环境温度下、不使用加热或微波而获得这些结果，从现有技术来看这是特别令人惊讶的。更有理由指明的是，由于这些缓冲剂可以在环境温度下使用，本申请人的药典缓冲剂可以用加热或微波来进行使用，这对于例如某些生物载体可能是所希望的(或如果自动进行络合的自动化装置包括这种程序设计)。
[0018] 本申请人的这些缓冲剂使得能够进行令人满意的络合，所述络合具有合适的络合程度(有利地是至少92％、95％、97％)以及足够的纯度(至少92％、95％、97％)并且优选地没有形成有待消除的沉淀。
[0019] 更确切地说，用包括以下所述的并且如在详细实施例中描述的至少两个镓-68配位官能团的缓冲剂，本申请人已经获得了非常有利的结果。
[0020] 为了这种效应，根据第一方面，本发明涉及用于将螯合物与放射性核素(有利地是镓)进行络合的方法(在本申请中没有差别地称为“放射性标记方法”)，所述络合是通过将放射性核素加入到在缓冲剂溶液中的螯合物有利地在环境温度没有加热下进行的，这种溶液的缓冲剂包括用于与所述放射性核素进行配位的在二个与五个之间的官能团，每个配位官能团独立地选自羧酸官能团和羟基官能团，条件是所述缓冲剂包括至少一个羧酸官能团和至多两个羧酸官能团。
[0021] 因此，本申请人已经以这样的方式对缓冲剂作出了明智的选择，从而使得络合动力学是充分快速的以允许变化的和灵活的使用条件(特别是pH和加热条件)。
[0022] 在本申请中，表述“羧酸配位官能团”旨在表示任何羧酸官能团COOH和从Ga68络合的观点来看等同于COOH的官能团，并且具体是：
[0023] -包括在环中的酸官能团，例如具有以下化学式：
[0024] -同型空间配位的(isoteric)官能团，例如PO3H2(如特别是用磷酸进行示例)。
[0025] 官能团磺酸被排除在羧酸官能团的定义之外。
[0026] 在本申请中，这些缓冲剂可以直接在羧酸官能团的C＝O基团的碳上(如在碳酸盐缓冲剂的情况下)或在P＝O基团的P上(如在磷酸盐缓冲剂的情况下)、要不然在碳链的另一个碳上(因此为α、β等、Ω羟基羧酸)携带羟基官能团。
[0028] 而且，当在其中所述缓冲剂包含两个羧酸官能团、它还包含至少一个羟基官能团的情况下，这种络合甚至是更好的(更好的络合，在络合之后不需要过滤出沉淀)。因此，优选地，本发明涉及一种放射性标记方法，其特征在于所述缓冲剂还包括羟基官能团。
[0029] 根据实施方案，所使用的缓冲剂有利地包括两个羧酸官能团以及至少一个羟基官能团，并且特别地是一个或两个羟基官能团。
[0030] 根据实施方案，所使用的这些缓冲剂有利地包括至少一个羧酸官能团和至少一个羟基官能团。
[0032] (在本申请中，术语“磷酸盐缓冲剂”和“磷酸缓冲剂”是无差别地使用的)。有利地，所述缓冲剂是C1-C10的一元羧酸，所述一元羧酸是单羟基化的、任选地是二、三、或四羟基化的，并且任选地是不饱和的(特别是具有至少一个双键)，或C1-C10的二羧酸，所述二羧酸是单、二或三羟基化的，并且任选地是不饱和的(特别是具有至少一个双键)。
[0033] 因此这些缓冲剂非常有利地属于药典。
[0034] 非常有利地，所述缓冲剂选自以下缓冲剂：乳酸盐、酒石酸盐和苹果酸盐，或它们的混合物。
[0035] 在此回顾：
[0036] -酒石酸盐具有两个羧酸官能团和两个羟基官能团；
[0037] -乳酸盐具有一个羧酸官能团和一个羟基官能团。
[0038] 回顾HEPES和乙酸对应地包括零和单个的羧酸官能团。
[0039] 表1回顾了没有包括在所要求的发明中的缓冲剂的化学式。
[0040]
[0041] 表2回顾了根据本发明的缓冲剂的化学式
[0042]
[0043]
[0044] 使用本发明的缓冲剂用于络合的溶液的pH有利地是在1与14之间、典型地在3与11之间、有利地在3与7之间。
[0045] 更确切地说，回顾到缓冲能力是pKa值+/-1，这表明例如对于乙酸盐是3.75-5.75。由于本申请人的缓冲剂的范围宽得多，例如对于酒石酸盐是[2.04-5.37]，对于碳酸盐是[5.35-11.33]，并且对于磷酸盐是[1.12-13.67]。还有可能将若干缓冲剂组合进行结合(缓冲剂混合物)，特别是为了优化缓冲容量范围以及螯合物和生物载体的选择，规定了并不是所有的螯合物都必然具有相同的螯合作用，这取决于在考虑中的缓冲剂。因此，例如NOTA对于乳酸盐、碳酸盐或酒石酸盐缓冲剂是特别有利的。
[0046] 确切的机制是未知的，但是为了归纳地解释这些结果，本申请人提出了假设，即非常有效的缓冲剂是包含以下的那些：
[0047] -具有足够数目的以充分络合镓的配位基团：仅包含一个官能团的乙酸盐将不会充分络合从而对于变化的络合条件(浓度、pH)是有效的；包含一个磺酸盐官能团和一个羟基基团的HEPES同样不会充分地络合；
[0048] -但是没有太多的配位基团从而没有太多地络合镓：发现了包含三个羧酸官能团的柠檬酸盐是过多络合的。
[0049] 再则，本发明涉及这样的缓冲剂的情况，使得log K Ga68值是在3与6之间，优选在3与5之间。
[0050] 本申请人了解到，用缓冲剂的Ga68络合的常数(包括在2个与4个之间的配位官能团的缓冲剂的log K Ga68)是非常有利地在2与6之间，并且非常有利地是在3与5之间，优选等级4(特别是在3.5与4.5之间)。
[0052] 根据实施方案，所述缓冲剂是至少两种上述指出的缓冲剂的组合，例如乳酸盐和酒石酸盐缓冲剂的混合物。例如，所有使用本发明的缓冲剂之间的以下比例的组合都是可能的：对于两种缓冲剂是90/10、80/20、60/40、50/50，并且对于三种缓冲剂是80/10/10、60/20/20。例如，还可以使用根据本发明的乳酸盐型缓冲剂的混合物，所述混合物对于一种给定的螯合物以及缓冲剂(对于这种螯合物不太有效)是非常有效的。同样有可能使用(不太有利地)根据本发明的非常有效的缓冲剂(例如乳酸盐)与在单独的情况下无效的缓冲剂(特别是柠檬酸盐)的混合物，但条件是在使用足够小比例的单独时无效的缓冲剂以免损害络合。
[0053] 可以在本发明的背景下使用的螯合物是游离的(即非载体化的)螯合物或载体化的螯合物，这种络合物能够络合放射性核素。有利地，它是载体化的螯合物。出于本发明的目的，术语“载体化的螯合物”旨在表示在其上结合(通过化学接头)用于靶向特定的生物目标(特别是诊断上感兴趣的区域)的部分的任何螯合物。因此，有利的是，所述螯合物用一种试剂进行载体化，所述试剂用于靶向特定的生物目标特别是诊断上感兴趣的区域。
[0054] 有利地，所述载体化的螯合物的螯合物部分对于本领域技术人员是已知的，并且优选是对于Ga68的螯合优选的螯合物中的一种，如NOTA及其衍生物、PCTA及其衍生物、AAZTA及其衍生物。
[0055] 因此，所述载体化的螯合物是有利地选自载体化的NOTA、载体化的PCTA、载体化的DOTA、载体化的AAZTA，有利地是二脱氮-NOTA、二脱氮PCTA、NOTA叶酸盐、PCTA叶酸盐、AAZTA叶酸盐。
[0056] 本申请人已经对于以下各项获得了特别有利的结果：
[0057] -用于NOTA的乳酸、酒石酸或碳酸缓冲剂；
[0058] -用于PCTA的乳酸或碳酸缓冲剂。
[0059] 对于所述产品的螯合物部分，可以使用很多螯合物，特别是
[0060] a)具有以下通式的大环螯合物：
[0061]
[0062] 其中：
[0063] M-M1-M2形成吡啶核，
[0064] 或M1和M2是不存在的并且M代表一个键，
[0065] 或M是N-R并且M1和M2代表氢原子或甲基，其中R独立地选自CH2CO2-或H或CHX-CO2-，其中至少一个R是CHXCO2-并且X是L(接头)-B(生物载体)；
[0066] b)线性螯合物，特别是选自以下的线性螯合物：EDTA、DTPA二亚乙基三胺五乙酸、N-[2-[双(羧甲基)氨基]-3-(4-乙氧基苯基)丙基]-N-[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-L-甘氨酸(EOB-DTPA)、N，N-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-L-谷氨酸(DTPA-GLU)、N，N-双[2-[双(羧甲基)氨基]乙基]-L-赖氨酸(DTPA-LYS)、DTPA的单酰胺或双酰胺衍生物，如N，N-双[2-[羧甲基[(甲基氨基甲酰基)甲基]氨基]乙基]甘氨酸(DTPA-BMA)、
4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸(BOPTA)。
4-羧基-5，8，11-三(羧甲基)-1-苯基-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸(BOPTA)。
[0067] 特别地，使用物可以由大环螯合物制成，大环螯合物来自1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸(DO3A)、10-(2-羟丙基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸(HPDO3A)、2-甲基-1，4，7，
10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(MCTA)、(α，α′，α″，α″′)-四甲基-1，4，
7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTMA)以及3，6，9，15-四氮杂二环[9.3.1]十五-1(15)，11，13-三烯-3，6，9-三乙酸(PCTA)。
10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(MCTA)、(α，α′，α″，α″′)-四甲基-1，4，
7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTMA)以及3，6，9，15-四氮杂二环[9.3.1]十五-1(15)，11，13-三烯-3，6，9-三乙酸(PCTA)。
[0068] 使用物还可以由衍生物制成，其中一种或多种羧基基团是处于相应的盐、酯或酰胺的形式；或相应的化合物，其中一种或多种羧基基团被膦酸和/或次膦酸基团所代替，如4-羧基-5，11-双(羧甲基)-1-苯基-12-[(苯基甲氧基)甲基]-8-(膦酰基甲基)-2-氧
杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸、N，N′-[(膦酰基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(羧甲基)甘氨酸]、N，N′-[(膦酰基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(膦酰基甲基)甘氨酸]、N，N′-[(膦基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(羧甲基)甘氨酸]、
1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四[亚甲基(甲基膦)]酸、或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四[亚甲基(甲基次膦)]酸。
杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酸、N，N′-[(膦酰基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(羧甲基)甘氨酸]、N，N′-[(膦酰基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(膦酰基甲基)甘氨酸]、N，N′-[(膦基甲基亚氨基)二-2，1-乙二基]双[N-(羧甲基)甘氨酸]、
1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四[亚甲基(甲基膦)]酸、或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四[亚甲基(甲基次膦)]酸。
[0069] 使用物还可以由来自以下的螯合物制成：HOPO以及已知的衍生物、AAZTA、DOTA全氟化合物(DOTA gadofluorine)、DO3A、HPDO3A、TETA、TRITA、HETA、DOTA-NHS、M4DOTA、M4DO3A、PCTA以及它们的2-苄基-DOTA-α-(2-苯乙基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-乙酸-4，7，10-三(甲基乙)酸、2-苄基-环己基二乙烯三胺五乙酸、2-苄基-6-甲基-DTPA、6，6″-双[N，N，N″，N″四(羧甲基)氨甲基)-4′-(3-氨基-4-甲氧苯基)-2，2′:6′，
2″-三联吡啶、N，N′-双(吡哆醛-5-磷酸盐)乙二胺-N，N′-二乙酸(DPDP)以及乙
烯二腈四(甲基膦)酸(EDTP)衍生物。
2″-三联吡啶、N，N′-双(吡哆醛-5-磷酸盐)乙二胺-N，N′-二乙酸(DPDP)以及乙
烯二腈四(甲基膦)酸(EDTP)衍生物。
[0070] 更广泛地，形成信号实体的螯合物可以对应于文件WO2007/042504(通过引用化学式以及有关定义的方式进行并入)以及文件WO01/60416中的化学式，它们如下：
[0071]
[0072]
[0073] 其中X是能够配位金属阳离子的基团(优选O-、OH、NH2、OPO3-、NHR，其中R是脂肪族链)，并且Y是能够被连接到生物载体上的连接基团(例如Y是(CH2)n-CO2H，其中n是1至5，有利地是n＝2)。
[0074] 使用物还可以有利地由NOTA化合物制成，这些NOTA化合物被表示为C-功能化的NOTA化合物(至少一个基团Y接枝到NOTA的碳原子上，使得能够偶联所述生物载体)以及在环中携带至少一个另外的CH2基团的NOTA化合物。有利的是，它是具有以下化学式的NOTA衍生物
[0075]
[0076] 使用物还可以由表示为P730或同样是DOTA-GA的本申请人的螯合物制成，具体是文件EP661279(US 5 919 432)的具有化学式V和VI的化合物，特别是
[0077]
[0078] 它的制备精确地具体描述于这个文件的第26至32页，以及具有PCTA主链(backbone)的螯合物，特别在US 6 440 956中由本申请人所描述的。
[0079] 使用物还可以由NOTA衍生物、NODA衍生物、NODA-GA制成。
[0080] 使用物还可以由以下螯合物制成：
[0081]
[0082]
[0083] 对于DIP-LICAM螯合物或衍生物(DIP-LICAMS和TIP-LICAMS)，磺酸官能团的存在可以引起向肾脏而不是向肝脏排泄的改变。
[0084]
[0085]
[0086] 一般而言，使用物还可以由能够在Ga3+周围形成充分稳定的笼(cage)的任何螯合物制成，特别是任何脂肪族、大环或线性的胺，或具有叔胺的大环胺。
[0087] 有利地，所述载体化的螯合物靶向部分是用于靶向诊断上感兴趣的病理区域的生物载体，所述生物载体有利的是氨基酸、有利地包括4到15个或4到10个氨基酸的肽、多肽、维生素、单糖或多糖、抗体、核酸、双环拉胺或适体。它还可以是靶向细胞受体(特别是以下描述的所有受体)的生物载体、药效团(具有药理活性的有机分子)、血管生成靶向生物载体、MMP靶向生物载体、酪氨酸激酶靶向肽、粥样斑块靶向肽或淀粉样斑块靶向生物载体、VCAM靶向生物载体(肽的或非肽的)。
[0088] 更广泛地，生物载体是例如选自如下清单(括号间的这些文件和参考是实例而不是限制性清单)：
[0089] 1)靶向血管生成素和VEGF受体的生物载体(在WO 01/97850中描述)、聚合物(例如聚组氨酸(US 6,372,194))、纤维蛋白靶向多肽(WO 2001/9188)、整合蛋白靶向肽(对于αvβ3的WO 01/77145、WO 02/26776，WO 02/081497，例如RGDWXE)、用于靶向金属蛋白酶MMP的伪肽和肽(WO 03/062198、WO 01/60416)、靶向例如KDR/Flk-1受体或Tie-1和2受体的肽(例如WO 99/40947)、唾液酸化的路易斯糖苷(WO 02/062810和Müller等人，Eur.J.Org.Chem，2002，3966-3973)、抗氧化剂(例如抗坏血酸(WO 02/40060))、吞噬刺激素靶向生物载体(例如US 6,524,554)、用于靶向G蛋白受体GPCRs(特别是胆囊收缩素)的生物载体(WO 02/094873)、整合蛋白拮抗剂和胍模拟物之间的缔合物(US 6 489333)，αvβ3靶向或αvβ5靶向喹诺酮(US 6,511,648)、靶向整合蛋白的苯并二氮卓和类似物(US A 2002/0106325、WO 01/97861)、咪唑和类似物(WO 01/98294)、RGD肽类(WO
01/10450)、抗体或抗体片段(FGF、TGFβ、GV39、GV97、ELAM、VCAM，它们可以被TNF或IL诱导(US 6,261,535))，被与目标的互相作用修饰的靶向分子(US 5,707,605)、用于靶向淀粉样蛋白沉积的试剂(例如WO 02/28441)、切割的组织蛋白酶肽(WO 02/056670)、米托蒽醌或苯醌(US 6,410,695)、上皮细胞靶向多肽(US 6,391,280)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(WO 99/54317)、以及描述于US 6,491,893(GCSF)、US 2002/0128553、WO 02/054088、WO 02/32292、WO 02/38546、WO 20036059、US 6,534,038、WO 0177102、EP 1 121 377、Pharmacological Reviews(52，No.2，179：growth factors PDGF，EGF，FGF，etc.)，Topics in Current Chemistry(222，W.Krause，Springer)，Bioorganic & Medicinal Chemistry(11，2003，1319-1341；αvβ3-targeting tetrahydrobenzazepinone
derivatives)中的生物载体。
01/10450)、抗体或抗体片段(FGF、TGFβ、GV39、GV97、ELAM、VCAM，它们可以被TNF或IL诱导(US 6,261,535))，被与目标的互相作用修饰的靶向分子(US 5,707,605)、用于靶向淀粉样蛋白沉积的试剂(例如WO 02/28441)、切割的组织蛋白酶肽(WO 02/056670)、米托蒽醌或苯醌(US 6,410,695)、上皮细胞靶向多肽(US 6,391,280)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(WO 99/54317)、以及描述于US 6,491,893(GCSF)、US 2002/0128553、WO 02/054088、WO 02/32292、WO 02/38546、WO 20036059、US 6,534,038、WO 0177102、EP 1 121 377、Pharmacological Reviews(52，No.2，179：growth factors PDGF，EGF，FGF，etc.)，Topics in Current Chemistry(222，W.Krause，Springer)，Bioorganic & Medicinal Chemistry(11，2003，1319-1341；αvβ3-targeting tetrahydrobenzazepinone
derivatives)中的生物载体。
[0090] 2)血管生成抑制剂，特别是在临床试验中测试过或已经市场化的那些，特别是：
[0091] -包括FGFR或VEGFR受体的血管生成抑制剂，如SU101、SU5416、SU6668、ZD4190、PTK787、ZK225846、氮杂环化合物(WO 00244156、WO 02059110)；
[0092] -包括MMPs的血管生成抑制剂，如BB25-16(马立马司他)、AG3340(普啉司他)、索利司他、BAY12-9566、BMS275291、美他司他、新伐司他；
[0093] -包括整合蛋白的血管生成抑制剂，如SM256、SG545、阻断EC-ECM的粘附分子(例如EMD 121-974、或维它新(vitaxin))；
[0094] -具有抗血管生成作用的更间接的机制的药剂，如羧胺三唑、TNP470、角鲨胺、ZD0101；
[0095] -在文件WO 99/40947中描述的抑制剂、非常选择性地用于结合到KDR受体、生长抑素类似物(WO 94/00489)、选择蛋白结合肽(WO 94/05269)、生长因子(VEGF、EGF、PDGF、TNF、MCSF、白细胞介素)的单克隆抗体；在Nuclear Medicine Communications，1999，20中描述的VEGF靶向生物载体；
[0096] -文件WO 02/066512的抑制肽。
[0097] 3)能够靶向受体的生物载体：CD36、EPAS-1、ARNT、NHE3、Tie-1、1/KDR、Flt-1、Tek、神经粘连因子1(neuropilin-1)、内皮因子(endoglin)、多效生长因子(pleiotropin)、内涎蛋白(endosialin)、Axl.、alPi、a2ssl、a4P1、a5pl、eph B4(蝶素(ephrin))、层粘连蛋白A受体、中蛋白受体65、来普汀受体OB-RP、趋化因子受体CXCR-4(以及文件WO 99/40947中提到的其他受体)、铃蟾肽/GRP、以及胃泌素、VIP、CCK的受体。
[0098] 4)酪氨酸激酶抑制剂型的生物载体。
[0099] 5)已知的GPIIb/IIIa受体抑制剂，选自：(1)针对GPIIb/IIIa受体的单克隆抗体、阿昔单抗的fab片段，(2)由静脉注入的小肽和模拟肽分子，如依替巴肽和替罗非班。
[0100] 6)纤维蛋白原受体拮抗剂肽(EP 425 212)、IIb/IIIa受体配体肽、纤维蛋白原配体、凝血酶配体、能够靶向粥样斑块的肽、血小板、纤维蛋白、水蛭素基肽、靶向IIb/IIIa受体的鸟嘌呤基衍生物。
[0101] 7)对本领域普通技术人员已知作为药剂的其他生物载体或生物载体的生物活性片段，具有抗血栓形成、抗血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗再狭窄或抗凝作用。
[0102] 8)在与专利US 6 537 520中的DOTA有关联的描述的其他生物载体或靶向αvβ3的生物载体的生物活性片段，这些DOTA选自以下各项：丝裂霉素、维甲酸、盐酸苯达莫司汀、吉西他滨、长春新碱、依托泊苷、克拉屈滨、二溴甘露醇、甲氨喋呤、阿霉素、卡波醌、喷司他丁、二胺硝吖啶、净司他丁、西曲瑞克、来曲唑、雷替曲塞、柔红霉素、法倔唑、福替目丁、胸腺法新、索布佐生、奈达铂、阿糖胞苷、比卡鲁胺、长春瑞滨、维司力农、氨鲁米特、安吖啶、丙谷胺、醋酸羟哔咔唑、酮舍林、去氧氟尿苷、依曲替酯、异维甲酸、链佐星、嘧啶亚硝脲、长春地辛、氟他米特、氟他米特、甘氨硫嘌呤、卡莫氟、雷佐生、裂裥多糖、卡铂、二溴卫矛醇、替加氟、异磷酰胺、泼尼莫司汀、毕西巴尼、左旋咪唑、替尼泊苷、英丙舒凡、依诺他滨、麦角乙脲、羟甲烯龙、他莫昔芬、黄体酮、环戊缩环硫雄烷、环硫雄醇、福美坦、干扰素-α、干扰素-2α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子-1、集落刺激因子-2、地尼白介素(denileukin diftitox)、白介素-2、黄体生成素释放因子。
[0103] 9)某些靶向特殊类型的癌症的生物载体，例如靶向与结肠直肠癌有关的ST受体、或速激肽受体的肽。
[0104] 10)使用磷化氢类型的化合物的生物载体。
[0105] 11)用于靶向P-选择蛋白、E-选择蛋白的生物载体；例如由Morikawa等人，1996，951描述的8个氨基酸的肽，以及还有各种的糖。
[0106] 12)靶向凋亡过程的膜联蛋白V或生物载体。
[0107] 13)通过靶向技术(如噬菌体展示、任选地用非天然氨基酸修饰(http//chemlibrary.bri.nrc.ca))获得的任何肽，例如衍生自噬菌体展示文库的肽：RGD、NGR、KGD、RGD-4C。
[0108] 14)用于靶向粥样斑块的已知的其他肽生物载体，特别是在文件WO 2003/014145中提到的。
[0109] 15)维生素，特别是叶酸和它的已知能够靶向叶酸盐受体的衍生物。
[0110] 16)激素受体的配体，包括激素和类固醇。
[0111] 17)阿片受体靶向生物载体。
[0112] 18)靶向激酶(例如酪氨酸激酶)的生物载体。
[0113] 19)LB4和VnR拮抗剂。
[0114] 20)硝基咪唑和苄基胍化合物。
[0115] 21)在Current Chemistry，vol.222，260-274，Fundamentals of Receptor-based Diagnostic Metallopharmaceuticals中的主题(Topics)中概述的生物载体，具体是：
[0116] -靶向在肿瘤中过表达的肽受体(例如LHRH受体、铃蟾肽/GRP、VIP受体、CCK受体、速激肽受体)的生物载体，特别是生长抑素类似物或铃蟾肽类似物，任选地糖基化的奥曲肽(octreotide)肽衍生物、VIP肽、α-MSH类、CCK-B肽；
[0117] -肽类，其选自：RGD环肽、纤维蛋白靶向肽、吞噬刺激素靶向肽、fMLF肽(受体：层粘连蛋白)。
[0118] 22)寡糖、多糖、以及单糖的衍生物、靶向Glut受体(单糖受体)或谷氨酰胺转运蛋白的衍生物。
[0119] 23)用于智能型(smart)产品的生物载体。
[0120] 24)心肌活力标记(例如替曲膦和六(2-甲氧基-2-甲基丙基异腈))。
[0121] 25)糖和脂肪代谢示踪物。
[0122] 26)神经递质受体(D、5HT、Ach、GABA、NA、NMDA受体)的配体。
[0123] 27)寡核苷酸和适体。
[0124] 28)组织因子。
[0125] 29)在WO 03/20701中描述的生物载体，特别是针对外周型苯并二氮卓受体的PK11195配体。
[0126] 30)纤维蛋白结合肽，特别是在WO 03/11115中描述的肽序列。
[0127] 31)例如在WO 02/085903中描述的淀粉样斑块聚集抑制剂。
[0128] 32)用于靶向阿尔茨海默病的化合物，特别是包括苯并噻唑、苯并呋喃、苯乙烯基苯噁唑/噻唑/咪唑/喹啉、苯乙烯基吡啶类型、以及它们已知的衍生物的化合物。
[0129] 33)用于靶向趋化因子受体、并且特别是用于靶向CXCR4的试剂。
[0130] 特别有兴趣地使用的是任何RGD肽。
[0131] 在一个具体的实施方案中，所述生物载体是用于靶向趋化因子受体、并且特别是用于靶向CXCR4的试剂。
[0132] 为了靶向CXCR4，使用物将特别有利地由双环拉胺(例如在WO2006032704中描述的所有衍生物)和肽类(特别是环肽类)(特别是3至10个氨基酸，优选是3至8个氨基酸，例如4至6个氨基酸的肽类)制成。有利地，使用物将由如下之中的肽制成：
[0133] a)环(D-Tyr-X-Arg-Nal-Gly)
[0134]
[0135] b)环(D-Tyr-Orn-Arg-Nal-Gly)
[0136] c)环(D-Tyr-Arg-Arg-X-Gly)
[0137]
[0138] 其中Bth是：
[0139]
[0140] d)环(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-Ala)：IC50＝11nM
[0141] e) 环 (D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-Asp)、 环 (D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-Glu)、 环(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-D-Lys)、环(D-Tyr-Arg-Arg-Nal-Gly)
[0142]
[0143] 化合物a)至e)被用作生物载体，并且偶联到络合镓的螯合物，这在现有技术中是未知的形式(或者在本发明的缓冲溶液内，亦或在现有技术的其他缓冲液
[0144] (特别是乙酸盐))。使用物可以由用于靶向CXCR4的伪肽或非肽类型的任何已知化合物制成，例如：
[0145]
[0146] 根据有利的实施方案，所述生物载体是叶酸盐受体靶向生物载体，例如叶酸或任何已知的叶酸的衍生物，并且特别是具有在文件WO2004112839中的化学式的衍生物。
[0147]
[0148] 其中：
[0149] *代表所述生物载体连接到所述螯合物上的位点；
[0150] a)G1独立地选自：卤素、Rf2、ORf2、SRf3以及NRf4Rf5；优选地，G1选自NH2或OH；
[0151] b)G2独立地选自：卤素、Rf2、ORf2、SRf3以及NRf4Rf5；
[0152] c)G3、G4代表独立地选自-(Rf6′)C＝、-N＝、-(Rf6′)C(Rf7′)-、-N(Rf4′)-的二价基团；
[0153] 优选地，当包括G3的环是芳香族时，G3是-N＝(叶酸)或-CH-(以下描述的化合物：CB3717、雷替曲塞、MAI)，并且当包括G3的环是非芳香族时，G3是-NH-或-CH2-(以下描述的多种化合物：AG-2034、洛美曲索)；
[0154] 优选地，当包括G3的环是芳香族时，G4是-CH-或-C(CH3)-，并且当包括G3的环是非芳香族时，G4是-CH2-或-CH(CH3)-；
[0155] e)G5是不存在的(培美曲塞化合物)或选自-(Rf6′)C＝、-N＝、-(Rf6′)C(Rf7′)-、-N(Rf4′)-；
[0156] f)J是5-或6-元杂环或非杂环的芳环，所述环的原子可能是C、N、O、S；
[0157] g)G6是N或C(以下描述的化合物：3-脱氮-ICI-198,583)；
[0158] h)K1和K2独立地选自-C(Zf)-、-C(Zf)O-、-OC(Zf)-、-N(Rf4″)-、-C(Zf)-N(Rf4)、-N(Rf4″)-C(Zf)、-O-C(Zf)-N(Rf4″)-、-N(Rf4″)-C(Zf)-O-、N(Rf4″)-C(Zf)-N(Rf5″)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Rf4″)S(O)2-、-C(Rf6″)(Rf7″)-、-N(C≡CH)-、-N(CH2-C≡CH)-、C1-C12烷基和C1-C12烷氧基；其中Zf是O或S；优选地，K1是-N(Rf4‘’)-或-C(Rf6″)(Rf7″)-，其中Rf4”、Rf6″和Rf7”是H；A2被任选地共价结合到氨基酸上；
[0159] i)Rf2、Rf3、Rf4、Rf4’、Rf4”、Rf5、Rf5”’、Rf6”和Rf7”独立地选自：H、卤素、C1-C12烷基、C1-C12烷氧基、C1-C12链烷酰基、C2-C12链烯基、C2-C12炔基、(C1-C12烷氧基)羧基、以及(C，-C，2烷氨基)羰基；
[0160] h)Rf6′和Rf7′独立地选自：H、卤素、C1-C12烷基和C1-C12烷氧基；或Rf6′和Rf7′一起形成O＝；
[0161] i)Lf是包括(在适当时)天然氨基酸或天然聚氨基酸的二价接头，经由它的α-氨基、经由酰胺键连接到K2或K1上；
[0162] j)p、r和s独立地是0或1；
[0163] k)x是一个在1和5之间的整数，有利地等于1。
[0164] 化学式(E)包括互变异构的形式，例如其中G1是OH、SH或NH的化合物。
[0165] 对于本发明的化合物，其中这些基团K1、K2、Rf1、Rf2、Rf3、Rf4、Rf4′、Rf4″、Rf5、Rf5″、Rf6、Rf7″、Rf6、Rf7、Rf6′和Rf7′中的至少一个包括烷基、烷氧基、烷氨基、链烷酰基、链烯基、炔基、烷氧基羰基或烷氨基羰基基团，所述基团优选地包含1至6个碳原子(C1-C6)，更优选地包含1至4个碳原子(C1-C4)。
[0166] 在以上陈述的这些化合物中，本发明人已经特别关注这些衍生物
[0167]
[0168]
[0169] 因此，有利地，所述生物载体是叶酸盐或叶酸盐衍生物。
[0170] 因此这些叶酸盐衍生物包括以下化合物：蝶聚谷氨酸(pteropolyglutamic acid)、能够靶向到叶酸盐受体的蝶啶(特别是四氢蝶啶、四氢叶酸、二氢叶酸)。
[0171] 这些叶酸盐衍生物还包括以下化合物：氨蝶呤、氨甲喋呤(甲氨喋呤)、N-甲基叶酸、2-氨基羟基叶酸；以及它们的脱氮衍生物，如1-脱氮氨甲喋呤或3-脱氮氨甲喋呤、以及3′，5′-二氯-4-氨基-4-脱氧-N-甲基蝶酰谷氨酸(二氯甲氨蝶呤)。
[0172] 这些叶酸盐衍生物包括脱氮或二脱氮化合物。术语“脱氮”和“二脱氮”是指已知的不具有叶酸的氮原子G3、G5、G6的衍生物。例如，这些脱氮衍生物包括1-脱氮、3-脱氮、5-脱氮、8-脱氮和10-脱氮衍生物。
[0173] 通过本申请人在专利WO2007042504和WO2004112839(通过引用的方式并入本文)说明了在各种生物载体和各种螯合物之间的化学偶合的多个实例(典型地通过化学接头的方式)。通过举例，将提到如下接头：
[0174] 1)氨基酸。
[0175] 2)能够与至少一种生物载体官能团以及至少一种螯合物官能团相互作用的接头L。L特别包括取代的或未取代的、饱和的或不饱和的、以及直链的或支链的烷基链，肽，聚乙二醇，以及聚氧乙烯。特别要提及：
[0176] 3)a.1)(CH2)2-苯基-NH、(CH2)3-NH、NH-(CH2)2-NH、NH-(CH2)3-NH、什么也没有或一个单键、(CH2)n、(CH2)n-CO-、-(CH2)nNH-CO(其中n＝2至10)，(CH2CH2O)q(CH2)r-CO-、(CH2CH2O)q(CH2)r-NH-CO-(其中q＝1-10并且r＝2-10)，(CH2)n-CONH-、(CH2)n-CONH-PEG、(CH2)n-NH-、 (其中n＝1至5并且有利的n＝4或5)，HOOC-CH2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-COOH；HOOC-(CH2)2-CO2-(CH2)2-OCO-(CH2)2-COOH；HOOC-CH(OH)-CH(OH)-COOH；HOOC-(CH2)n-COOH；NH2-(CH2)n-NH2(其中n＝0-20)；NH2-(CH2)n-CO2H；NH2-CH2-(CH2-O-CH2)n-CO2H(其中n＝1至10，接头表示在文件WO 2006/095234，第104和105页的A8至A32)。
[0177] a.2)P1-l-P2，它们可以是相同的或不同的，P1和P2选自O、S、NH、什么也没有、CO2、NHCO、CONH、NHCONH、NHCSNH、SO2NH-、NHSO2-以及方酸酯(squarate)
[0178] 其中l＝烷基、烷氧基烷基、聚烷氧基烷基(PEG)、被一个或多个方酸酯或一个或多个芳基间断的烷基，有利地是被一个或多个选自-NH-、-O-、-CO-、-NH(CO)-、-(CO)NH-，、-O(CO)-、或-(OC)O-的基团间断的苯基、链烯基、炔基、烷基
[0179] L将例如具有在300和2000g/mol之间的分子量，特别是在300和1000g/mol之间。
[0180] P1和P2因此是用于将所述接头一方面与所述螯合物(另一方面，与所述生物载体)偶联。
[0181] 4)在专利US 6 264 914中描述的接头能够与(所述生物载体和所述螯合物的)氨基、羟基、巯基、羧基、羰基、碳水化合物、硫醚、2-氨基醇、2-氨基硫醇、胍基、咪唑基、以及酚官能团反应；并且具有WO 2007/042504的定义总结。
[0182] 5)在专利US 6 537 520中描述的、具有化学式(Cr6r7)g-(W)h-(Cr6ar7a)g′-(Z)k-(W)h′-(Cr8r9)g″-(W)h″-(Cr8ar9a)g”’的某些接头具有这个文件的定义。
[0183] 6)在文件WO 02/085908中描述的某些接头，例如直链的或者支链的接头，选自：
[0184] -CR6″′R7″′-、-(R6″′)C＝C(R7″′)＝、-CC-、-C(O)-、-O-、-S-、-SO2-、-N(R3″′)-、-(R6″′)C＝N-、-C(S)-、-P(OO(OR3″′))-、-P(O)-(OR3″′)O-，其中R″′3是能够与氮或氧反应的基团，
[0185] -环状区域(二价环烷基、二价杂环)
[0186] -聚亚烷基、聚亚烷基二醇。
[0187] 7)文件WO 03/011115第124-125页的接头，特别是
[0188]
[0189] 特别是可以这样的方式做出这些接头的选择(结构和大小)，以特别地控制电荷，所述产物的亲油性和/或亲水性根据所希望的诊断指示，从而优化生物靶向和/或生物分布。可以特别地使用在体内可生物降解的接头、PEG接头或微型-PEG接头。
[0190] 通过举例，在使用本申请人的缓冲剂(特别是乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐)的缓冲溶液中被载体化和放射性标记、并且溶解的这些产物形成具有以下化学式的镓金属络合物：
[0191]
[0192] 其中术语接头和生物载体具有以上所示的先前的定义。
[0193] 这些缓冲剂典型地是在缓冲剂溶液的形式下使用的，所述缓冲剂溶液包括至少一种反离子(conter-ion)，特别是钠或铵或有机碱(有利地是有机多碱，如葡甲胺、乙二胺、二亚乙基三胺、四甲基乙二胺、三亚乙基四胺)的离子。例如，使用所述乳酸盐缓冲剂，如乳酸钠或乳酸铵，其中本申请人已经示出了它们的效能。
[0194] 本发明还涉及一种用于制备放射性标记的造影产品的方法，包括以下步骤：
[0195] -制备放射性核素有利的是镓68的溶液，
[0196] -制备载体化的螯合物，
[0197] -在根据本发明的缓冲溶液中，有利地在环境温度并且不加热并且不用微波下将放射性核素的的溶液和载体化的螯合物的溶液混合小于15分钟，优选地小于10分钟，更优选地小于7分钟。
[0198] 有利地，所述缓冲剂选自：乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、碳酸盐和磷酸盐缓冲液、以及它们的混合物，甚至更有利地选自乳酸盐、酒石酸盐和碳酸盐缓冲剂、以及它们的混合物。
[0199] 本领域技术人员应当理解的是，在常规的实践中，可能将不同的变体(variant)用于本混合物。典型地，在引入缓冲剂溶液以及Ga68的酸洗出液(pH值约2)之前，以浓缩的水溶液的形式而提供所述载体化的螯合物(仍未放射性标记)。例如，如以下所示，将体积为0.4ml的0.6nM Ga68溶液添加到包含1ml的缓冲剂溶液和20μl的1.2M载体化的螯合物溶液的反应器中。然而，应当理解的是，对于所述络合而言给出相等的结果的所有变体都包括在本发明中。例如，可以提供在适当的稀释下的更大量的Ga68溶液。例如，鉴于生物载体储存的原因，将所述标记的螯合物提供于缓冲溶液中而不是在不同于所述缓冲剂的水溶液中。
[0200] 本发明还涉及各种适用于在本发明的缓冲溶液中络合的中间产物，并且特别是：
[0201] -在98％的丙酮、0.05MHCl的溶液中的Ga68的洗出液(所述洗出液通过Ga68发生器而产生)
[0202] -选自本申请的缓冲剂的缓冲剂溶液，优选地是乳酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸、磷酸、和碳酸的缓冲剂，以及它们的组合；
[0203] -在缓冲溶液中或在水中的载体化的螯合物(仍未与Ga68放射性核素络合)，所述缓冲剂选自本申请的这些缓冲剂，有利地是乳酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸、磷酸和碳酸的缓冲剂，以及它们的组合。
[0204] 缓冲剂的组合还可以用作络合缓冲剂溶液，特别是至少两种上述缓冲剂的组合，例如混合的乳酸-琥珀酸或乳酸-酒石酸缓冲剂，对于两种缓冲剂的组合，按比例有利的是90/10、80/20、70/30、60/40、50/50。
[0205] 根据另一方面，本发明涉及可注射的溶液，包括缓冲剂和与放射性核素络合的螯合物，所述缓冲剂包括用于与所述放射性核素配位的在二个和五个之间的官能团，每一配位官能团都独立地选自羧酸官能团和羟基官能团，条件是所述缓冲剂包括至少一个羧酸官能团和最多两个羧酸官能团。
[0206] 这些缓冲剂和这些螯合物的这些特征如以上定义。
[0207] 有利地，就缓冲剂而言，所述缓冲剂溶液是从0.05M至1.5M的溶液，优选地是就缓冲剂而言从0.1M至1M；有利地是从0.1M至0.5M，例如0.1M至0.3M。
[0208] 有利地，在所述可注射的缓冲溶液中，所述放射性标记的载体化的螯合物的浓度是在0.1和100μM之间，例如0.5至20μM，特别是1至10μM。
[0209] 有利地，给予患者的所述溶液还包括至少一种适合用于限制辐射分解(即给予的诊断化合物的分解)的赋形剂。这是有利地，特别是当制备了在多剂量/多患者类型的诊断溶液时(这涉及能够成功存储所述产品)。对于本领域技术人员来说抗辐射分解剂是已知的，具体总结在WO2007042504和W02005009393中(实例：自由基阻断剂、二硫代氨基甲酸酯、PDTC、可溶性硒化合物(例如硒代甲硫氨酸或硒代胱氨酸)，在适当时具有抗坏血酸钠、能够还原被氧化的氨基酸(例如甲硫氨酸)的衍生物(特别是半胱氨酸的硫醇衍生物)、巯基乙醇、二硫苏糖醇)。还可以使用精氨酸或赖氨酸制剂。
[0210] 本申请人的在缓冲剂溶液中的产品具有显著的优点，即它们可以无需加热地使用，但是在适当时，如果放射药物学不时常地装备有无加热装置的络合仪器，可以用于具有加热装置的仪器中。可以使用各种自动络合仪器，例如装备有已知的阳离子树脂或阴离子树脂。
[0211] 根据另一个方面，本发明涉及一种仪器(络合系统)，所述仪器优选地是自动的、无加热的装置，所述仪器包括用来混合由放射性核素发生器，更具体地Ga68发生器提供的放射性核素的溶液、未络合的载体化的螯合物的溶液、以及缓冲剂溶液的至少一个区室(compartment)，所述缓冲剂选自乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、碳酸盐和磷酸盐以及它们的混合物。
[0212] 相应地制备了任何适合的装置。例如，所提供的Ga68是消毒溶液，通过自动化机器借助于所述自动化机器的分配装置或在所述自动化机器之前使用被引入所述自动化机器中的单次剂量容器而将所述消毒溶液分成单次剂量。所述自动化的机器包括例如混合区室，所述混合区室能够制备用于一个或多个患者的多剂量的可注射的放射性标记的产品。所述自动化的机器还可以包括数个混合亚区室(subcompartment)，特别是每个区室能够混合一个剂量的Ga68放射性核素以及一个剂量的载体化的产物。所述自动化的机器可以是自动的。
[0213] 所述自动化的机器(在适当时是可编程的)还可以用相同的或不同的生物载体、以及不同的剂量和浓度来制备数种不同的可注射产品，在适当时要随着有待产生的产品的类型及其注射的方法(手动或自动注射)而改变。另外本申请的不同产品、方法以及仪器可以与分析和成像处理方法一起用于任何适当的成像模式，特别是PET成像、多峰成像，以及适当时，产物多次注射、特别是PET/MRI、PET/扫描、PET/扫描/MRI以及光学成像。因此本发明涉及任何医学成像设施，这些设施包括如本申请中所述的络合仪器，与MRI和/或XR-扫描和/或光学设备相结合。进一步就整体而言，可以使用适合用于本发明的络合化合物和条件的现有技术的任何设备(具体地概述于WO2007/042504中)。
具体实施方式
[0214] 详细的实例如下：
[0215] -证明本申请人的缓冲剂的有效性(实施例1)
[0216] -说明了用NOTA和PCTA螯合物以及叶酸盐和肽生物载体来制备载体化的螯合物(螯合物+生物载体)(所强调的是本领域技术人员由此可以用许多其他的生物载体、许多其他的接头、以及许多其他的螯合物制备类似的化合物)。
[0217] 实施例1：比较缓冲剂的络合
[0218] 这些缓冲剂是在pH4下制备的。通过将0.1M的弱酸与0.1M的弱碱进行混合而得到它们。
[0219] 为了说明(类似的实验方案使用了其他螯合物)详述了NOTA和PCTA螯合物的步骤：
[0220] 将50mg的NOTA或PCTA(0.16mmol)溶于5ml的0.1M缓冲剂中。加入0.5ml的69
0.5M的 GaCl3(1.5eq)溶液。将所述反应介质在室温下搅拌。定时地取样持续15分钟并且通过LC/MS进行分析。
0.5M的 GaCl3(1.5eq)溶液。将所述反应介质在室温下搅拌。定时地取样持续15分钟并且通过LC/MS进行分析。
[0221] 在下表中，“完全络合”表示所述螯合物已经成功地络合了镓。
[0222] 使用钠和铵缓冲剂获得了阳性结果。
[0223] 对于柠檬酸缓冲剂(现有技术参考)，所述络合不是有效的，因为仅存在少量的络合物(镓被螯合物络合)，然而存在大量的配体(所述螯合物没有络合镓)。作为举例说明对于NOTA和PCTA提出了实例：
[0224] 对于NOTA：
[0225]
[0226] 对于PCTA：
[0227]
[0228]
[0229] 实施例2：二脱氮-NOTA的合成：
[0230]
[0231] 步骤1：
[0232] 在0.6g的K2CO3存在下，将0.5g的中间体2溶解在20ml的CH3CN中。将在20ml CH3CN中的溴化衍生物(int.1)的悬浮液加入其中。在氩气下并在强力磁搅拌下将反应介质维持回流18小时。返回到环境温度之后，将反应介质过滤。将不溶解的物质吸收于20ml水中，然后进行过滤。在压力下将滤液蒸发。将得到的残余物吸收于Et2O中，然后进行过滤。获得1.2g的产品。[M+H]+＝423.16。
[0233] 步骤2：
[0234] 将在前面步骤中得到的0.6g中间体悬浮于2.4ml乙醇中。在加入6ml 1M NaOH之后完成溶解。在70℃下将所述反应介质搅拌1小时30分钟(1H30)。返回到环境温度之后，通过加入HCl 6N将介质调到pH 1。将得到的悬浮液过滤，然后用水并且随后用乙醇进+行彻底洗涤。在干燥之后，获得0.35g的产品(产率＝80％)。[M+H] ＝311.10。
[0235] 步骤3：
[0236] 在环境温度下在干燥条件下(CaCl2途径)将Int.4(1.8mmol)和Int.5(1.8mmol)溶于DMF中。将1.4eq的HOBT(2.5mmol)并且然后将1.4eq的EDCI(2.5mmol)加入到反应介质中。在环境温度下反应过夜之后，从250ml的水中沉淀反应介质。在过滤之后，用水洗涤残余物，然后在真空下干燥；获得0.85g的黄色晶体，产率为81％。[M+H]+＝638.30。
[0237] 步骤4：
[0238] 将在前面步骤中得到的0.266mmol的中间体溶于1.8ml TFA中。在环境温度下将所述反应介质静置1小时并且然后进行蒸发。通过从25ml Et2O中结晶来获得产物。获得了180mg的黄色晶体，这些晶体在RP2硅胶上在一个开放柱中进行纯化，用水(TFA 0.05％)/+
CH3CN进行洗脱。在冷冻干燥之后，获得50mg的白色产品(产率＝31％)。BP：[M+H] ＝
2+
482.22，[M+2H] ＝241.68。
CH3CN进行洗脱。在冷冻干燥之后，获得50mg的白色产品(产率＝31％)。BP：[M+H] ＝
2+
482.22，[M+2H] ＝241.68。
[0239] 步骤5：
[0240] 活化酯的形成：
[0241] 在已经将75mg的NOTAGA(tBu)3溶于2ml的CH2Cl2中之后，加入15mg(1eq)的NHS并且然后加入28mg(1eq)的DCC。在环境温度下反应半小时之后，通过沃特曼(Whatman)纸将形成的DCU过滤并且将滤液浓缩至最终体积为约0.5ml。
[0242] 酰胺化：
[0243] 在2eq的NEt3(40μl)存在下，将在前面步骤中得到的50mg的中间体溶于2.5ml的DMSO中。将在CH2Cl2中的溶液中的活化酯加入其中。反应1小时之后，从25ml的Et2O中沉淀反应介质。在已经以50/50(含水洗脱液相(TFA pH2.8)/CH3CN)进行溶解之后，通过快速色谱法(Merck SVF D26-RP18 25-40μm-31g硅胶柱)将得到的产物用于纯化。在+ 2+冷冻干燥之后，获得了24mg的白色晶体(产率＝28.4％)。BP：[M+H] ＝1007.5，[M+2H]＝504.44。
[0244] 步骤6：
[0245] 将在前面步骤中得到的24mg的中间体溶于1ml的TFA中。在环境温度下反应6小时之后，将反应介质蒸发并且吸收于25ml的Et2O中。获得了10mg的晶体。
[0246] 步骤7：
[0247] 将20μl 1mg/ml的在步骤6处得到的化合物的水溶液和1ml的乳酸钠缓冲剂(0.5M，pH3.9)引入反应小管中。然后加入400μl的在HCl(0,05M)/丙酮的混合物中的
68
GaCl3溶液。将反应混合物在室温下孵育15分钟。用6ml的水洗涤反应小管并且将反应混合物转到C-18柱中，所述柱子用1ml乙醇和1ml超纯水进行了预处理。用1ml的50％乙醇/水溶液将最终产物从所述柱子上洗脱下来。
68
GaCl3溶液。将反应混合物在室温下孵育15分钟。用6ml的水洗涤反应小管并且将反应混合物转到C-18柱中，所述柱子用1ml乙醇和1ml超纯水进行了预处理。用1ml的50％乙醇/水溶液将最终产物从所述柱子上洗脱下来。
[0249] 类似的步骤用于乳酸盐、琥珀酸盐、磷酸盐、马来酸盐、苹果酸盐缓冲剂。
[0250] 实施例3：叶酸盐-NOTA的合成：
[0251] a)具有以下化学式的化合物：
[0252]
[0253] 将20g(91.7mmol)的Boc2O溶解在40ml的CH2Cl2中。逐滴加入22g(366.6mmol)在200ml的CH2Cl2中的二氨基乙烷溶液。将反应小管在室温下混合2小时。首先，通过用水萃取来纯化产物。在Na2SO4上将有机层干燥并且过滤。然后，用CH2Cl2/甲醇的梯度在硅胶上用快速色谱法将它纯化。得到4g的黄色油。m/z＝161(ES+)。
[0254] b)具有以下化学式的化合物：
[0255]
[0256] 将10.27g(24mmol)的Fmoc-Glu-OtBu溶解在300ml的CH2Cl2中。引入2.8g的NHS以及4.98g的DCC。在45分钟之后，将反应混合物过滤并且逐滴地加入溶于50ml的CH2Cl2中的在a)中得到的3.869g产物的溶液。在室温下2小时之后，通过用水萃取来首次纯化所述产物。在Na2SO4上将有机层干燥并且过滤。然后，用CH2Cl2/丙酮的梯度在硅胶上通过快速色谱法将它纯化。得到7g的产物。m/z＝568(ES+)。
[0257] c)具有以下化学式的化合物：
[0258]
[0259] 将b)中得到的6.5g(11.4mmol)的产物溶于91ml的乙腈中。逐滴加入用19.5ml的哌啶和78ml的乙腈得到的溶液。在室温下在氩气氛下2小时之后，将反应混合物蒸发并且用CH2Cl2/甲醇的梯度在硅胶上通过快速色谱法进行纯化。获得了3.65g的油。m/z＝346(ES+)。
[0260] d)具有以下化学式的化合物：
[0261]
[0262] 在氩气下将3.3g(10.5mmol)的蝶酸和在c)中得到的3.65g的产物溶于335ml的DMSO中。加入3.038g的EDCI和1g的HOBT。将反应混合物加热到40℃过夜，然后在水中进行沉淀。将残余物过滤并且首先用水然后用Et2O进行洗涤。获得了6g的红色粉末。
[0263] m/z＝640(ES+)。
[0264] e)具有以下化学式的化合物：
[0265]
[0266] 将在d)中获得的6g(9.3mmol)的产物溶于74ml的TFA中。在室温下1小时之后，将反应混合物沉淀于800ml的Et2O中。过滤之后，获得了4.5g的黄色粉末。m/z＝
484(ES+)。
484(ES+)。
[0267] f)具有以下化学式的化合物：
[0268]
[0269] 应用与实施例2的步骤5处所描述的相同的步骤，从以下各项开始：
[0270] -在e)中获得的85mg的化合物和
[0271] -75mg的NOTAGA(tBu)3
[0272] 获得了15mg的化合物。m/z(ES+)＝1009。
[0273] g)具有以下化学式的化合物：
[0274]
[0275] 应用与实施例2的步骤6处所描述的相同的步骤，从20mg的在f)中获得的化合物开始
[0276] 获得了4mg的化合物。m/z(ES+)＝841。
[0277] h)具有以下化学式的化合物：
[0278]
[0279] 应用与实施例2的步骤7处所描述的相同的步骤。
[0280] 实施例4：PCTA-叶酸盐(PEG接头)的合成：
[0281]
[0282] 首先的两个步骤的被描述于参考文献Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 10(2000)2133-2135中。
[0283] 步骤3：
[0284] 将1.77g的Py-cyclen和381mg的N+But4Br-溶解在8ml的水中。然后加入在4ml的乙腈中的1.63ml的三乙胺和3g的在步骤2得到的化合物。将所述反应混合物加热到50℃持续36小时。蒸发之后，引入50ml的Et2O并且将溶液过滤。将残余物溶于CH2Cl2中并且通过用水进行萃取来纯化所述产物。在Na2SO4上将有机层干燥，过滤并且蒸发。获得了1.7g的油。m/z＝483.31(ES+)。
[0285] 步骤4：
[0286] 将700mg的在步骤3得到的化合物和650mg的K2CO3溶于10ml的乙腈中。
[0287] 加入由在15ml的乙腈中的450mg的溴乙酸乙酯组成的溶液，然后在70℃下将所述混合物搅拌持续30分钟然后在50℃下持续2小时。过滤以及蒸发之后，将产物吸收于80ml的二氯甲烷中。在Na2SO4上将有机层干燥，过滤，然后蒸发。获得了0.77g的油。m/z(ES+)＝711.36。
[0288] 步骤5：
[0289] 将400mg的在步骤4得到的化合物溶于30ml的乙醇中。加入钯并且在H2气氛下在室温下将悬浮液搅拌4小时。过滤并且蒸发之后，获得了0.3g的油。用0.05％HCOOH 0水溶液和乙腈的梯度在C18改性硅胶上(25 à40μm Merck GX024090320LK)通过快速色谱法来纯化所述产物。获得了0.15g的油。m/z(ES+)＝621.65。
[0290] 步骤6：
[0291] 应用与实施例2的在步骤5处所描述的相同的步骤，从以下各项开始：
[0292] -300mg的在本专利的步骤5得到的化合物以及
[0293] -366mg的专利PCT/FR/01520的实施例11e)中得到的化合物，
[0294] 获得了50mg的化合物。m/z(ES+)＝1246.88。
[0295] 步骤7：
[0296] 使用与实施例2的在步骤6处所描述的相同的步骤，从20mg的在步骤6得到的化合物开始：
[0297] 获得了18mg的化合物。m/z(ES+)＝1078.47。
[0298] 步骤8：
[0299] 应用与实施例2的在步骤7处所描述的相同的步骤。
[0300] 实施例5：用肽载体化的螯合物
[0301] 使用了例如在WO 2007/042504第41至77页的实施例中所描述的肽偶联方法(并且通过引用并入本文)。制备了肽的生物载体，并且因此偶联到本领域已知的螯合物上(NOTA、PCTA、DOTA……)。具体地是：
[0302] 1)对于PCTA螯合物：
[0303] PCTA螯合物(WO 2007/042504第52页的实施例6步骤3的化合物，相应的分子式未被镓络合)被偶联到如WO 2007/042504第52至53页的实施例7中所示的肽上。
[0304] 2)对于NOTA螯合物：NOTA螯合物(WO 2007/042504第49页的实施例4的化合物，未被镓络合)被偶联到如WO 2007/042504第50页的实施例5中所示的肽上；WO
2007/042504第50页的这些举例说明的化合物(相应的分子式没有被镓络合)是用不同的方酸酯接头偶联到NOTA上的肽；准确地说类似地制备了许多其他的接头(例如(CH2)n，PEG)。
2007/042504第50页的这些举例说明的化合物(相应的分子式没有被镓络合)是用不同的方酸酯接头偶联到NOTA上的肽；准确地说类似地制备了许多其他的接头(例如(CH2)n，PEG)。
[0305] 得到的化合物的实例[肽(线性的或环状的)+接头+螯合物]被提供于下表中。
[0306]
[0307]
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