用于治疗雄激素非依赖性癌症的组合物和方法
阅读：107发布：2020-10-29
专利汇可以提供用于治疗雄激素非依赖性癌症的组合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文提供了用于 预防 和 治疗 癌症的组合物和方法，所述癌症包括 前列腺癌 、 乳腺癌 和雄 激素 非依赖性癌症。在一个方面，本 发明 提供了包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合物。在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法抑制雄激素受体的突变体或剪接变体。在具体的实施方案中，本文提供的组合物和方法降低了癌症的雄激素非依赖性。本文还提供了 试剂 盒 。，下面是用于治疗雄激素非依赖性癌症的组合物和方法专利的具体信息内容。
1.包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
2
R选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及其中每个X是独立选择的卤素。
2.如权利要求1所述的组合物，其中R1是CX3或NO2。
3.如权利要求1所述的组合物，其中R2是H或X。
4.如权利要求1所述的组合物，其中R3是X。
5.如权利要求1所述的组合物，其中R5是C2烷基或C2烯基。
6.如权利要求1所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
7.如权利要求1所述的组合物，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
8.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
10.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。
11.如权利要求10所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及它们的组合。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
14.如权利要求11所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
15.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
17.如权利要求15所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势抵抗性癌细胞以及它们的组合。
18.如权利要求1所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
19.预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
2
R选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及其中每个X是独立选择的卤素。
20.如权利要求19所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
21.如权利要求19所述的方法，其中R2是H或X。
22.如权利要求19所述的方法，其中R3是X。
23.如权利要求19所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
24.如权利要求19所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
25.如权利要求19所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
26.如权利要求19所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
27.如权利要求26所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
28.如权利要求19所述的方法，其中抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及它们的组合。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
32.如权利要求29所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
33.如权利要求19所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
34.如权利要求19所述的方法，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症以及它们的组合。
35.如权利要求34所述的方法，其中降低或逆转所述癌症的雄激素非依赖性、去势抵抗性或激素抵抗性。
36.如权利要求19所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。
37.如权利要求19所述的方法，其中同时给予所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物。
38.如权利要求19所述的方法，其中依序给予所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物。
39.如权利要求19所述的方法，其中所述个体未患有癌症。
40.如权利要求19所述的方法，其中治疗所述个体导致所述癌症的一种或多种症状的改善。
41.如权利要求19所述的方法，其中在将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从所述个体中获得测试样品。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述测试样品包含组织、血液或它们的组合。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述测试组织样品包含癌组织。
44.如权利要求41所述的方法，其中在所述测试样品中测定一种或多种生物标志物的水平。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗原(PSA)。
46.如权利要求44所述的方法，其中将所述测试样品中的一种或多种生物标志物的水平与参考样品中的所述一种或多种生物标志物的水平进行比较。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述参考样品是在将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从相同个体中获得的正常血液或组织。
48.如权利要求46所述的方法，其中所述参考样品获自不同个体或个体群体。
49.如权利要求46所述的方法，其中所述测试样品中的PSA水平高于所述参考样品中的PSA水平，并且其中在将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体之前获得所述测试样品。
50.如权利要求45所述的方法，其中将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体导致与在施用前从所述个体获得的测试样品相比，在施用后从所述个体获得的测试样品中的所述PSA水平降低。
51.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄激素受体或所述细胞与治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物接触：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且其中每个X是独立选择的卤素。
52.如权利要求51所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
2
53.如权利要求51所述的方法，其中R是H或X。
54.如权利要求51所述的方法，其中R3是X。
55.如权利要求51所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
56.如权利要求51所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
57.如权利要求51所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
58.如权利要求51所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
60.如权利要求51所述的方法，其中抑制雄激素受体反式激活。
61.如权利要求51所述的方法，其中抑制雄激素受体表达。
62.如权利要求51所述的方法，其中抑制雄激素受体介导的转录活性。
63.如权利要求51所述的方法，其中抑制雄激素受体变体的表达和/或活性。
64.如权利要求63所述的方法，其中抑制所述雄激素受体变体对前列腺特异性抗原(PSA)启动子的募集。
65.如权利要求63所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及它们的组合。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。
67.如权利要求66所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
68.如权利要求65所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
69.如权利要求51所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述癌细胞是转移性癌细胞。
71.如权利要求69所述的方法，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
72.如权利要求69所述的方法，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、激素抵抗性癌细胞以及它们的组合。
73.如权利要求72所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞的雄激素非依赖性、去势抵抗性和/或激素抵抗性。
74.如权利要求69所述的方法，其中使所述癌细胞对所述抗雄激素药物再敏化。
75.如权利要求69所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞对所述抗雄激素药物的耐药性。
76.如权利要求69所述的方法，其中抑制所述癌细胞的浸润能力和/或所述癌细胞的迁移能力。
77.如权利要求69所述的方法，其中抑制所述癌细胞的生长和/或形成集落的能力。
78.如权利要求51所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。
79.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含抗雄激素药物和通式(I)化合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且其中每个X是独立选择的卤素。
1
80.如权利要求79所述的试剂盒，其中R是CX3或NO2。
81.如权利要求79所述的试剂盒，其中R2是H或X。
82.如权利要求79所述的试剂盒，其中R3是X。
83.如权利要求79所述的试剂盒，其中R5是C2烷基或C2烯基。
84.如权利要求79所述的试剂盒，其中X独立地选自F和Cl。
85.如权利要求79所述的试剂盒，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
86.如权利要求79所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
87.如权利要求86所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
88.如权利要求79所述的试剂盒，还包含药学上可接受的载体。
89.如权利要求79所述的试剂盒，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
90.如权利要求79所述的试剂盒，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症以及它们的组合。
91.如权利要求79所述的试剂盒，还包含使用说明书。
92.如权利要求79所述的试剂盒，还包含用于将所述抗雄激素药物和/或所述通式(I)化合物施用于所述个体的用具和/或一种或多种试剂。
93.如权利要求79所述的试剂盒，还包含用于从所述个体中获得样品的用具和/或一种或多种试剂。
94.如权利要求93所述的试剂盒，还包含用于测定所述样品中的一种或多种生物标志物的水平的用具和/或一种或多种试剂。
95.如权利要求94所述的试剂盒，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗原(PSA)。
96.如权利要求79所述的试剂盒，还包含阴性和/或阳性对照样品。
97.包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物：
其中：
R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R8选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R9选自H和C(O)R10，
其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及其中每个X是独立选择的卤素。
98.如权利要求97所述的组合物，其中R6和/或R7是CX3。
99.如权利要求97所述的组合物，其中R8是X。
100.如权利要求97所述的组合物，其中R9是H。
101.如权利要求97所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
102.如权利要求97所述的组合物，其中所述通式(II)化合物为
103.如权利要求97所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
104.如权利要求103所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
105.如权利要求97所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。
106.如权利要求105所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及它们的组合。
107.如权利要求106所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。
108.如权利要求107所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
109.如权利要求106所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
110.如权利要求97所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。
111.如权利要求110所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
112.如权利要求110所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势抵抗性癌细胞以及它们的组合。
113.如权利要求97所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
114.用于预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向个体施用治疗有效量的权利要求97所述的组合物。
115.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄激素受体或所述细胞与治疗有效量的权利要求97所述的组合物接触。
116.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含权利要求97所述的组合物。
用于治疗雄激素非依赖性癌症的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年1月19日提交的美国临时申请第62/448,094号的优先权，其公开内
容通过引用整体并入本文以用于所有目的。
背景技术
前列腺癌是癌症相关死亡的第二大主要原因，也是男性最常诊断的癌症，仅在美国每
年估计有220,800例新病例。前列腺癌的一线治疗旨在通过使用雄激素剥夺疗法(ADT)来降
低循环雄激素水平。虽然ADT最初有效减少前列腺癌的生长，但经过两到三年的治疗后，大
多数患者会进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，即使存在去势雄激素水平，肿瘤也会继续
发展。在疾病进展的这一点上，治疗选择的数量变得非常有限。
CRPC的治疗目前包括施用紫杉烷类，例如多西紫杉醇和卡巴他赛，其通过破坏微管功
能中断快速分裂细胞的生长，或下一代抗雄激素药物如恩杂鲁胺和阿比特龙。不幸的是，估
计大约三分之一的患者服用阿比特龙，约四分之一的患者服用恩杂鲁胺不能对这些药物的
初始治疗产生反应。此外，在开始治疗的12-24个月内，即使最初对药物有反应的人也经常
产生耐药性。因此，本领域需要更有效的治疗雄激素非依赖性癌症，例如CRPC。本发明满足
了这种需要，并且也提供了相关的优点。
年估计有220,800例新病例。前列腺癌的一线治疗旨在通过使用雄激素剥夺疗法(ADT)来降
低循环雄激素水平。虽然ADT最初有效减少前列腺癌的生长，但经过两到三年的治疗后，大
多数患者会进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，即使存在去势雄激素水平，肿瘤也会继续
发展。在疾病进展的这一点上，治疗选择的数量变得非常有限。
CRPC的治疗目前包括施用紫杉烷类，例如多西紫杉醇和卡巴他赛，其通过破坏微管功
能中断快速分裂细胞的生长，或下一代抗雄激素药物如恩杂鲁胺和阿比特龙。不幸的是，估
计大约三分之一的患者服用阿比特龙，约四分之一的患者服用恩杂鲁胺不能对这些药物的
初始治疗产生反应。此外，在开始治疗的12-24个月内，即使最初对药物有反应的人也经常
产生耐药性。因此，本领域需要更有效的治疗雄激素非依赖性癌症，例如CRPC。本发明满足
了这种需要，并且也提供了相关的优点。
发明内容
在一个方面，本发明提供了包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自：
及它们的组合。
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。在具体的实施
方案中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-
V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。
在其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自
K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在其他实施方案中，组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。在一些情况下，癌细胞是前列
腺癌细胞或乳腺癌细胞。在其他情况下，癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞，转移性癌细
胞，去势抵抗性癌细胞，去势复发性癌细胞，激素抵抗性癌细胞，转移性去势抵抗性癌细胞
及其组合。
在第二方面，本发明提供了预防或治疗个体的癌症的方法。在一些实施方案中，该方法
包括向个体施用治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
在特定实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基，任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，雄激素受体或其变体的表达和/或活性被抑制。在具体的实施方案
中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-V1、
AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。在
其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自
K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌或乳腺癌。在其他实施方案中，癌症选自雄激素非
依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势
抵抗性癌症和它们的组合。在一些情况下，癌症的雄激素非依赖性、去势抵抗性或激素抵抗
性降低或逆转。
在其他实施方案中，同时给予抗雄激素药物和通式(I)化合物。在一些其他实施方案
中，顺序给予抗雄激素药物和通式(I)化合物。在特定的实施方案中，个体没有患癌症。在一
些实施方案中，治疗个体导致癌症的一种或多种症状的改善。
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自：
及它们的组合。
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。在具体的实施
方案中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-
V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。
在其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自
K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在其他实施方案中，组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。在一些情况下，癌细胞是前列
腺癌细胞或乳腺癌细胞。在其他情况下，癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞，转移性癌细
胞，去势抵抗性癌细胞，去势复发性癌细胞，激素抵抗性癌细胞，转移性去势抵抗性癌细胞
及其组合。
在第二方面，本发明提供了预防或治疗个体的癌症的方法。在一些实施方案中，该方法
包括向个体施用治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
在特定实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基，任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，雄激素受体或其变体的表达和/或活性被抑制。在具体的实施方案
中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-V1、
AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。在
其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自
K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌或乳腺癌。在其他实施方案中，癌症选自雄激素非
依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势
抵抗性癌症和它们的组合。在一些情况下，癌症的雄激素非依赖性、去势抵抗性或激素抵抗
性降低或逆转。
在其他实施方案中，同时给予抗雄激素药物和通式(I)化合物。在一些其他实施方案
中，顺序给予抗雄激素药物和通式(I)化合物。在特定的实施方案中，个体没有患癌症。在一
些实施方案中，治疗个体导致癌症的一种或多种症状的改善。
[0001] 在一些实施方案中，在将抗雄激素药物和通式(I)化合物施用于个体之前和/或之后，从所述个体中获得测试样品。在一些情况下，测试样品包括组织、血液或它们的组合。在
特定情况下，测试组织样品包括癌组织。在一些实施方案中，在样品中测定一种或多种生物
标志物的水平。在一些情况下，一种或多种生物标志物包括前列腺特异性抗原(PSA)。
在一些实施方案中，将测试样品中的一种或多种生物标志物的水平与参考样品中的一
种或多种生物标志物的水平进行比较。在一些情况下，参考样品是在将抗雄激素药物和通
式(I)化合物施用于个体之前和/或之后从相同个体中获得的正常血液或组织。在其他情况
下，参考样品获自不同的个体或个体群体。在一些实施方案中，测试样品中的PSA水平高于
参考样品中的PSA水平，并且在将抗雄激素药物和通式(I)化合物施用于个体之前获得该测
试样品。在其他实施方案中，向个体施用抗雄激素药物和通式(I)化合物导致在施用后从个
体获得的测试样品中的PSA水平与施用前从该个体获得的测试样品相比降低。
在第三方面，本发明提供了抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法。在一些
实施方案中，该方法包括使雄激素受体或细胞与治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式
(I)化合物的组合物接触：
在特定的实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3 4 5 5
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自H和C(O)R ，其中R选自H、任选取代的C1-18烷基、任选
取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I) 化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，雄激素受体反式激活被抑制。在一些实施方案中，雄激素受体表达
被抑制。在一些实施方案中，雄激素受体介导的转录活性被抑制。
在一些实施方案中，雄激素受体变体的表达和/或活性被抑制。在特定实施方案中，雄
激素受体变体向前列腺特异性抗原(PSA)启动子的募集被抑制。在一些实施方案中，雄激素
受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-
V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。在一些情况
下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、
T878A、V716M及其组合的突变。
在一些实施方案中，细胞是癌细胞。在特定实施方案中，癌细胞是转移性癌细胞。在其
他实施方案中，癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞选自雄激
素非依赖性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、激素抵抗性癌细胞及其组合。在一些情况下，癌细
胞的雄激素非依赖性、去势抵抗性和/或激素抵抗性被减少、降低或逆转。在一些实施方案
中，癌细胞对抗雄激素药物重新敏化。在其他实施方案中，癌细胞对抗雄激素药物的抵抗性
减少、降低或逆转。在一些实施方案中，癌细胞的浸润能力和/或癌细胞的迁移能力被抑制。
在其他实施方案中，癌细胞生长和/或形成集落的能力被抑制。
另一方面，本发明提供了用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒。在一些实施方案中，试
剂盒包含抗雄激素药物和通式(I)化合物：
在特定的实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，试剂盒还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌或乳腺癌。在其他实施方案中，癌症选自雄激素非
依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势
抵抗性癌症和它们的组合。
在一些其他实施方案中，试剂盒还包括使用说明书。在一些实施方案中，所述试剂盒还
包括用于将抗雄激素药物和/或通式(I)化合物施用于个体的用具和/或一种或多种试剂。
在其他实施方案中，所述试剂盒还包括用于从个体中获得样品的用具和/或一种或多种试
剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括用于测定样品中的一种或多种生物标志物的水平的
用具和/或一种或多种试剂。在一些情况下，一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗原
(PSA)。在一些实施方案中，试剂盒还包括阴性和/或阳性对照样品。
另一方面，本发明提供包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物：
在特定实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在一些实施方案中，R6和/或R7是CX3。
在一些实施方案中，R8是X。在一些实施方案中，R9是H。在特定实施方案中，X独立地选自F和
Cl。
在一些实施方案中，通式(II)化合物是
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，所述组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。在具体的
实施方案中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体
是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接
变体。在其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个
选自K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在其他实施方案中，所述组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。在一些情况下，癌细胞是
前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。在其他情况下，癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转移性癌
细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势-抵抗性癌细
胞及其组合。
在一些实施方案中，组合物还包含药学上可接受的载体。
在另一方面，本发明提供了预防或治疗个体的癌症的方法，该方法包括向该个体施用
治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物。
另一方面，本发明提供了抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，该方法包
括使雄激素受体或细胞与包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物接触。
另一方面，本发明提供了包含含有抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物的试剂
盒。
从以下详细说明和附图中，本发明的其他目的、特征和优点对于本领域技术人员而言
是显而易见的。
附图的简要说明
图1A-1C显示了氯硝柳胺类似物的化学结构和合成途径。图1A显示化合物7和化合物30
的合成途径。图1B显示氯硝柳胺和化合物5、7、11、30和31的结构。图1C显示氯硝柳胺和化合
物1、2、5、7、8、11、17、29、30、31、34和35的结构。
图2A和2B显示氯硝柳胺类似物抑制AR和AR-V7表达。图2A显示用氯硝柳胺或所示化合
物之一处理的CWR22Rv1细胞的裂解物的蛋白质印迹。图2B显示用递增剂量的所示化合物处
理的CWR22Rv1细胞的裂解物的蛋白质印迹。“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图3显示氯硝柳胺类似物抑制PSA表达。在存在或不存在恩杂鲁胺(MDV)的情况下，用氯
硝柳胺或所示化合物之一处理C4-2 V7细胞(即，过表达AR-V7的C4-2细胞)。通过ELISA测定
确定PSA蛋白表达。*表示p<0.05。
图4显示氯硝柳胺类似物抑制AR-V7介导的转录活性。用或不用AR-V7的情况下，使
LNCaP细胞与PSA-luc报告基因共转染，然后用恩杂鲁胺、氯硝柳胺或所示的氯硝柳胺类似
物处理所转染的细胞。然后测定荧光素酶活性。*表示p<0.05。
图5A-5F显示氯硝柳胺类似物抑制突变的AR反式激活。用编码相应的突变的AR和雄激
素响应性荧光素酶报告基因构建体的表达载体瞬时转染HEK 293细胞。用指定的抗雄激素
药物或氯硝柳胺类似物处理细胞。然后测定荧光素酶活性。图5A显示野生型AR的激活。图5B
显示AR-V7的激活。图5C显示T878A变体的激活。图5D显示K581R变体的激活。图5E显示V716M
变体的激活。图5F显示L702H变体的激活。*表示p<0.05。
图6A-6D显示氯硝柳胺类似物在体外抑制细胞生长。用阿比特龙、恩杂鲁胺、ARN509或
增加剂量的氯硝柳胺或化合物7和化合物31之一处理CWR22Rv1和C4-2B MDVR细胞48小时，
在此时间后计数细胞数。图6A显示使用CWR22Rv1细胞的细胞生长测定的结果。图6B显示使
用C4-2B MDVR细胞的细胞生长测定的结果。图6C显示CWR22Rv1细胞随时间的细胞生长。图
6D显示C4-2B MDVR细胞随时间的细胞生长。*表示p<0.05。
图7A-7D显示氯硝柳胺类似物在体外抑制细胞生长。在存在或不存在恩杂鲁胺(MDV)的
情况下，用DMSO或0.5μM氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物之一处理CWR22Rv1、C4-2B MDVR、C4-2B
AbiR和C4-2-V7细胞48小时，在此时间后测定细胞数。图7A显示使用CWR22Rv1细胞的细胞生
长测定的结果。图7B显示使用C4-2B MDVR细胞的细胞生长测定的结果。图7C显示C4-2B
AbiR细胞的细胞生长测定的结果。图7D显示C4-2-V7细胞的细胞生长测定的结果。*表示p<
0.05。
图8显示氯硝柳胺类似物诱导细胞凋亡。在有或没有恩杂鲁胺(MDV)的情况下，用氯硝
柳胺或所指定的类似物之一处理C4-2BMDVR细胞，并测量细胞凋亡。*表示p<0.05。
图9A-9D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物协同作用以抑制
CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁胺(20μM)或阿比特龙(5μ
M)单独地或相组合地处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0天、第3天和第5天
计数总细胞数。图9A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测定结果。图9B显示当
氯硝柳胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图9C显示当氯硝柳胺类似物是化合物
30时的细胞生长测定结果。图9D显示当氯硝柳胺类似物是化合物31时的细胞生长测定结
果。化合物30和31，但不是化合物1和34，能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协同作用。*表示p<
0.05。
图10A-10D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物恩杂鲁胺和阿
比特龙协同作用以抑制C4-2BMDVR癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁
胺(20μM)或阿比特龙(5μM)单独或组合处理C4-2BMDVR细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0
天、第3天和第5天计数总细胞数。图10A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测
定结果。图10B显示当氯硝柳胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图10C显示当氯
硝柳胺类似物是化合物30时的细胞生长测定结果。图10D显示当氯硝柳胺类似物是化合物
31时的细胞生长测定结果。化合物30和31，但不是化合物1和34，能够与恩杂鲁胺和阿比特
龙协同作用。*表示p<0.05。
图11A-11D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物恩杂鲁胺和阿
比特龙协同作用以抑制CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁
胺(20μM)或阿比特龙(5μM)单独或组合处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0
天、第3天和第5天计数总细胞数。图11A显示当氯硝柳胺类似物是化合物7时的细胞生长测
定结果。图11B显示当氯硝柳胺类似物是化合物11时的细胞生长测定结果。图11C显示当氯
硝柳胺类似物是化合物2时的细胞生长测定结果。图11D显示当氯硝柳胺类似物是化合物17
时的细胞生长测定结果。化合物7和11，但不是化合物2和17，能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协
同作用。*表示p<0.05。
图12A-12D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物比卡鲁胺协同
作用以抑制CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、比卡鲁胺(20μM)或
它们的组合处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0天、第3天和第5天计数总细
胞数。图12A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测定结果。图12B显示当氯硝柳
胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图12C显示当氯硝柳胺类似物是化合物31时
的细胞生长测定结果。图12D显示当氯硝柳胺类似物是化合物30时的细胞生长测定结果。化
合物30和31，但不是化合物1和34，能够与比卡鲁胺协同作用。*表示p<0.05。
图13A-13D显示氯硝柳胺类似物在体内抑制肿瘤生长和AR-V7表达。用氯硝柳胺或化合
物7处理CWR22Rv1肿瘤异种移植物。测量肿瘤体积、肿瘤重量和体重。从肿瘤中分离蛋白质
裂解物，并通过蛋白质印迹分析AR和AR-V7的表达。图13A显示作为时间函数的CWR22Rv1肿
瘤异种移植物体积的图。图13B显示三组中每一组的体重的图。图13C显示了治疗结束时肿
瘤的图片。图13D显示了描绘全长AR(AR-FL)和AR-V7表达的蛋白质印迹。“AR变体”代表所有
形式的AR的组合。*表示p<0.05。
图14A-14F显示在胎牛血清中氯硝柳胺及其类似物抑制雄激素受体(AR)及其变体的转
录活性，如使用PSA-luc测定所评估的。图14A显示pcDnA的数据。图14B显示AR-V1的数据。图
14C显示AR-V3的数据。图14D显示AR-V7的数据。图14E显示AR-V9的数据。图14F显示AR-V12
的数据。缩写：NIC，氯硝柳胺；AA，阿比特龙；ENZA，恩杂鲁胺；ARN，阿帕鲁胺，#7，化合物7；#
31，化合物31.*表示p<0.05。
图15A-15C显示氯硝柳胺及其类似物在CWR22Rv1细胞中通过蛋白酶体-泛素化系统活
化降解AR变体。图15A显示了蛋白质印迹(左)的结果，其描绘了CWR22Rv1细胞中AR变体蛋白
质降解和相对蛋白质水平(右)。图15B显示CWR22Rv1全细胞裂解物的蛋白质印迹。图15C显
示用抗AR抗体免疫沉淀CWR22Rv1全细胞裂解物后的蛋白质印迹。缩写：NIC，氯硝柳胺；#7，
化合物7；#31，化合物31.“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图16A-16C显示氯硝柳胺及其类似物在C4-2B MDVR细胞中通过蛋白酶体-泛素化系统
活化降解AR变体。图16A显示蛋白质印迹(左)的结果，其描绘了C4-2B MDVR细胞中AR变体蛋
白质降解和相对蛋白质水平(右)。图16B显示C4-2B MDVR全细胞裂解物的蛋白质印迹。图
16C显示用抗AR抗体免疫沉淀C4-2B MDVR全细胞裂解物后的蛋白质印迹。缩写：NIC，氯硝柳
胺；#7，化合物7；#31，化合物31.“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图17A和17B显示化合物7在抵抗性前列腺癌中增强阿比特龙和阿帕鲁胺(ARN509)治
疗。图17A显示用阿帕鲁胺(ARN)和/或化合物7(#7)处理CWR22Rv1细胞的结果。图17B显示用
阿比特龙(ABI)和/或化合物7处理CWR22Rv1细胞的结果。*表示p<0.05。
图18显示当口服给药时，化合物7(#7)和化合物31(#31)均显示出比氯硝柳胺好的生物
利用度。
图19A-19D显示化合物7(#7)抑制LuCaP35CRPDX异种移植肿瘤生长，并且当口服给药时
表现出比氯硝柳胺(NIC)好的抗肿瘤活性。图19A显示肿瘤体积数据(左)和肿瘤图像(右)。
图19B显示肿瘤重量数据。图19C显示体重数据。图19D显示小鼠血清样品中PSA水平的数
据。*表示p<0.05。
图20A和20B显示化合物7(#7)和化合物31(#31)抑制乳腺癌细胞生长。图20A显示MDA-
MB-468细胞的数据。图20B显示MCF-7细胞的数据。
发明的详细描述
I.引言
鉴于存在耐药性发展的几种潜在途径，癌症对诸如恩杂鲁胺和阿比特龙等抗雄激素药
物的耐药性实际上会不可避免地发展。最近的研究已将雄激素受体(AR)可变剪接(特别是
剪接变体AR-V7)与癌症对抗雄激素药物的耐药性的发展联系起来。AR剪接变体也与多西紫
杉醇耐药性相关。此外，已经显示出与不表达AR-V7的患者相比，用恩杂鲁胺或阿比特龙治
疗的癌症患者中的AR-V7表达与显著更低的PSA响应、更短的无进展时间和更低的总存活时
间相关。
本发明部分基于以下发现：氯硝柳胺类似物可以抑制癌细胞生长，包括表达雄激素受
体变体AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12的雄激素非依赖性前列腺癌细胞。此外，本发明
部分基于以下令人惊讶的发现：本发明的氯硝柳胺类似物可以与抗雄激素药物协同抑制癌
细胞生长。本发明的组合物和方法可用于治疗许多癌症，包括前列腺癌。此外，本文提供的
组合物和方法可用于治疗雄激素非依赖性癌症和表达诸如AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和
AR-V12的雄激素受体剪接变体的癌症，或表达许多的雄激素受体的突变变体的癌症。
II.定义
除非另外特别指明，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域
的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。另外，与本文描述的方法或材料类似或等同
的任何方法或材料可用于实践本发明。出于本发明的目的，定义了以下术语。
本文使用的术语“a”、“an”或“该/所述”不仅包括具有一个成员的方面，还包括具有多
于一个成员的方面。例如，单数形式的“a”、“an”或“该/所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“a细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“该/所述试剂”包
括对本领域技术人员已知的一种或多种试剂的引用，等等。
本文使用的术语“约”和“近似”通常意指鉴于测量的性质或精确度，所测量的量的可接
受的误差度。典型的示例性的误差度在给定的数值或数值范围的20％(％)内、优选在10％
内、更优选在5％内。或者，特别是在生物系统中，术语“约”和“近似”可以意指在给定值的数量级内的值，优选在给定值的5倍内，更优选在给定值的2倍内。除非另有说明，否则本文给
出的数值是近似值，意指当未明确说明时可以推断出术语“约”或“近似”。
本文使用的术语“个体(subject)”、“个体(individual)”和“患者”在本文中可互换使
用，指脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。哺乳动物包括但不限于鼠科动物、大鼠、猿猴、
人、农场动物、运动动物和宠物。还包括体内获得的或体外培养的生物实体的组织、细胞及
其后代。
如本文所用，术语“治疗有效量”包括足以产生关于所指定的病症、病况或精神状态的
所期望的结果的剂量。所期望的结果可以包括剂量接受者的主观或客观改善。例如，有效量
的氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁
胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)包括足以减轻癌症如前列腺癌或乳腺癌
的体征、症状或原因的量。作为另一个实例，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的
有效量包括足以减轻耐药性、复发性或晚期癌症的体征、症状或原因的量，例如，雄激素非
依赖性、转移性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性或转移性去势抵抗性癌症。作为另一
个实例，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩
杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的有效量包括足以预防癌症发展的
量。
因此，治疗有效量可以是减缓、逆转或阻止肿瘤生长，增加平均存活时间，抑制肿瘤进
展或转移，或使癌细胞对其已变得耐药或正在耐药的癌症药物(例如，抗雄激素药物，例如
恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或比卡鲁胺)再敏化的量。另外，例如，氯硝柳胺类似物
和抗雄激素药物的组合的有效量包括当施用于患有癌症的个体时足以引起该个体的实质
性改善的量。有效量可随着所治疗的癌症的类型和阶段、所施用的一种或多种组合物的类
型和浓度以及还施用的其他药物的量而变化。
例如，所述量可以根据所治疗的癌症的类型、癌症的进展阶段、所施用的一种或多种组
合物的类型和浓度以及还施用于个体的其他药物的量而变化。有效量的氯硝柳胺类似物
(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)可以包括有效增强抗雄激素药物如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸
阿比特龙或比卡鲁胺的抗癌治疗活性的量。
如本文所用，术语“治疗”包括但不限于产生接受者的健康状况(例如患者的癌症状态)
的有益变化的方法和操作。这些变化可以是主观的或客观的，并且可以与诸如所治疗的癌
症的症状或体征等特征相关。例如，如果患者注意到疼痛减轻，则发生疼痛的成功治疗。例
如，如果发生肿胀量减少，则发生炎症的有益治疗。类似地，如果临床医生注意到客观变化，
例如降低癌细胞的数量、癌细胞的生长、癌症肿瘤的大小或癌细胞对另一种癌症药物(例
如，抗雄激素药物，例如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或比卡鲁胺)的耐药性，那么癌
症的治疗也是有益的。该术语还包括阻止接受者状态恶化。如本文所用，治疗还包括将氯硝
柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕
鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的组合施用于患有癌症的患者(例如，前列腺癌、
乳腺癌、雄激素非依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性
癌症或转移性去势抵抗性癌症)。
如本文所用，术语“施用/给药”包括与向患者提供一定量的(例如治疗有效量的)本文
所述化合物或组合物(例如氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合)相关的活动。给药包括
向有此需要的患者提供单位剂量的本文所述的组合物。给药包括将有效量的本文所述的化
合物或组合物提供所指定的时间段，例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、60、90、120或更多天，或以所规定的顺序提供，例如，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)的给药，随后抗雄激素药
物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的给药，或反之亦然。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指有助于向细胞、有机体或个体施用活性
剂的物质。“药学上可接受的载体”是指可以包含在本发明的组合物中并且不会对个体引起
显著的不良的毒理作用的载体或赋形剂。药学上可接受的载体的非限制性实例包括水、
NaCl、生理盐水溶液、乳酸林格氏液、正规的蔗糖、正规的葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、
润滑剂、包衣、甜味剂、矫味剂和着色剂、脂质体、分散介质、微囊、阳离子脂质载体、等渗剂
和吸收延迟剂等。载体还可以是用于向制剂提供稳定性、无菌性和等渗性的物质(例如抗微
生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂)，用于防止微生物的作用的物质(例如抗微生物剂
和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)，或用于向制剂提供具有可
食用香料的物质，等等。本领域技术人员将认识到其他药物载体可用于本发明。
如本文所用，术语“共同给药”包括顺序或同时施用两种或更多种结构不同的化合物。
例如，两种或更多种结构不同的药物活性化合物可以通过施用适于口服给药的含有两种或
更多种结构不同的活性药物活性化合物的药物组合物来共同给药。作为另一个实例，两种
或更多种结构不同的化合物可以通过施用一种化合物然后施用另一种化合物来共同给药。
两种或更多种结构不同的化合物可以包含氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或
其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)。
在某些情况下，共同给药的化合物通过相同的途径给药。在其他情况下，共同给药的化合物
通过不同途径给药。例如，一种化合物可以口服给药，另一种化合物可以例如通过静脉内或
腹膜内注射依序或同时给药。可以施用同时或依序施用的化合物或组合物，使得至少一种
氯硝柳胺类似物和一种抗雄激素药物以有效浓度同时存在于个体或细胞中。
如本文所用，术语“癌症”旨在包括以异常细胞的不受控制的生长为特征的一类疾病中
的任何成员。该术语包括所有已知的癌症和肿瘤性病况，无论其特征为恶性的、良性的、复
发的、软组织的还是实体的，以及所有阶段和等级的癌症，包括晚期的、复发的、转移前的和
转移后的癌症。此外，该术语包括雄激素非依赖性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性、
耐药性和转移性去势抵抗性癌症。不同类型的癌症的实例包括但不限于前列腺癌(例如，前
列腺腺癌)；乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌、原位导管癌、浸润性导管癌、小管癌、髓样癌、粘液
癌、乳头状癌、筛状癌、浸润性小叶癌、炎性乳腺癌、原位小叶癌、佩吉特病、Phyllodes肿
瘤)；妇科癌症(例如，卵巢癌、子宫颈癌、子宫癌、阴道癌和外阴癌)；肺癌(例如，非小细胞肺
癌、小细胞肺癌、间皮瘤、类癌瘤、肺腺癌)；消化道和胃肠道癌症、例如胃癌(例如胃癌)、结
肠直肠癌、胃肠道间质瘤(GIST)、胃肠道类癌瘤、结肠癌、直肠癌、肛门癌、胆管癌、小肠癌和
食道癌；甲状腺癌；胆囊癌；肝癌；胰腺癌；阑尾癌；肾癌(例如肾细胞癌)；中枢神经系统的癌
症(例如，胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤)；皮肤癌(例如黑色素瘤)；骨和软组织肉瘤(例如，
尤因氏肉瘤)；淋巴瘤；绒毛膜癌；泌尿系统癌症(例如尿路上皮膀胱癌)；头颈癌；和骨髓癌
和血癌(例如，慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤)。如本文所用、“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。
如本文所用，术语“前列腺癌”和“前列腺癌细胞”是指存在于前列腺组织中或源自前列
腺组织的癌细胞。前列腺癌可以是良性的、恶性的或转移性的。前列腺癌可以是雄激素不敏
感的、激素抵抗性的或去势抵抗性的。前列腺癌可以是“晚期阶段的前列腺癌”或“晚期前列
腺癌”。晚期阶段的前列腺癌包括一类进展已经超出该疾病的早期阶段的前列腺癌。通常，
晚期阶段的前列腺癌与不良预后相关。晚期阶段的前列腺癌的类型包括但不限于转移性前
列腺癌、耐药性前列腺癌、例如对抗雄激素耐药的前列腺癌(例如，抗恩杂鲁胺前列腺癌、抗
阿帕鲁胺前列腺癌、抗阿比特龙前列腺癌、抗比卡鲁胺前列腺癌等)、抗紫杉烷前列腺癌、激
素难治性前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、转移性去势抵抗性前列腺癌及其组合。在一些情
况下，晚期阶段的前列腺癌通常不会对采用一种或多种的以下常规的前列腺癌疗法的治疗
产生响应或对它们具有耐药性：恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺或阿帕鲁胺。提供本发明的
化合物、组合物和方法以用于治疗前列腺癌，例如晚期阶段的前列腺癌，包括任何一种或多
种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多)类型的本文公开的晚期阶段的前列腺癌。
如本文所用，短语“增强治疗效果”包括许多主观或客观因素中的任何一个，表明如本
文所讨论的正在治疗的病况的有益应答或改善。例如，增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、
阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的治疗效果包括使对抗雄激素耐药的癌症
(例如，抗雄激素耐药性前列腺癌或乳腺癌)对抗雄激素疗法再敏化。此外，例如，增强抗雄
激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的治疗效果包括
改变对抗雄激素耐药的癌细胞(例如，对抗雄激素耐药的前列腺或乳腺癌细胞)，以至于该
细胞不对抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)耐
药。而且，例如，增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或
其组合)的治疗效果包括加和或协同地改善或增加抗雄激素药物的活性。在一些实施方案
中，增强包括或至少包括约一倍、两倍、三倍、四倍、五倍、十倍、二十倍、五十倍、百倍或千倍的用于治疗癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)的抗雄激素药物的治疗活性的增加。在一些实
施方案中，所述增强包括或至少包括用于治疗癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)的抗雄激素
药的治疗活性(例如，功效)增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或
100％。
如本文所用，术语“逆转癌细胞对化合物或药物的耐药性”、“降低癌细胞对化合物或药
物的耐药性”或“使对化合物或药物耐药的癌细胞再敏化”包括改变或修饰对诸如抗雄激素
疗法(例如，恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺或阿帕鲁胺)等治疗耐药的癌细胞，使得该细胞
不再对抗雄激素疗法耐药，或者对抗雄激素疗法较不耐药。因此，如本文所用，短语“逆转前
列腺癌细胞对抗雄激素的耐药性”包括改变或修饰对抗雄激素(例如，恩杂鲁胺、阿比特龙、
比卡鲁胺或阿帕鲁胺)疗法耐药的前列腺癌细胞，使得该细胞不再对抗雄激素疗法耐药，或
者对抗雄激素疗法较不耐药。
如本文所用，短语“抗雄激素药物”或“抗雄激素”包括抗雄激素化合物，其通过阻断雄
激素受体、竞争细胞表面上的结合位点、或影响或介导雄激素产生来改变雄激素途径。抗雄
激素可用于治疗多种疾病，包括但不限于癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)。抗雄激素药物包
括但不限于非甾体类雄激素受体(AR)拮抗剂和CYP17A1抑制剂(即，作为细胞色素P450
17A1抑制剂的雄激素合成抑制剂)。作为非限制性实例，非甾体类AR拮抗剂包括第一代药物
(例如比卡鲁胺、氟他胺和尼鲁米特)、第二代药物(例如，阿帕鲁胺、多拉米胺
(darolutamide)和恩杂鲁胺)以及其他例如西咪替丁和托匹鲁胺(topilutamide)。通常，非
甾体类AR拮抗剂是选择性AR拮抗剂，几乎没有抗促性腺激素活性。CYP17A1抑制剂的非限制
性实例包括醋酸阿比特龙、酮康唑和seviteronel。
如本文所用，术语“AR变体”包括全长AR的剪接变体或突变变体。人AR的同种型1的氨基
酸序列在NCBI参考序列NP_000035.2(SEQ ID NO:1)中列出。已知各种AR剪接变体。参见，
Guo et al.,Cancer Res.2009Mar 15；69(6):2305-13。示例性的AR剪接变体包括但不限于
AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12，以及缺少功能性配体结合域(LBD)的变体。缺少LBD的
AR剪接变体的实例是AR-V7。“AR-V7”包括雄激素受体剪接变体7，其是缺少功能性LBD的AR
的组成型活性变体。参见，例如，Hu et al.,Cancer Research,69(1):16-22(2009)。各种AR
突变变体也是已知的。参见，例如，Marcelli et al.,Cancer Research 60(4):944-949
(2000)和Brooke et al.,Curr.Genomics,10(1):18-25(2009)。AR突变可以导致辅因子结
合的改变和/或配体特异性降低，这两者都可以赋予癌细胞生长优势。突变可以发生在AR内
的许多位置。AR突变变体的非限制性实例包括相对于SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，在
位置K581、L702、V716、T878或其任何组合具有氨基酸取代的变体。给定位置处的野生型氨
基酸可以用任何其他氨基酸替换。在一些情况下，AR突变变体包含一个或多个选自K581R、
L702H、V716M和T878A的氨基酸取代。
AR-V1、AR-V3、AR-V7和AR-V12的人氨基酸序列的非限制性实例分别在NCBI参考序列
ACN39560.1、ACN39563.1、ACN39559.1和ACZ81436.1下列出。AR-V9氨基酸序列的非限制性
实例SEQ ID NO:2下列出。
如本文所用，术语“烷基”是指具有所示碳原子数的直链或支链的饱和脂族基团。烷基
可包括任何数量的碳，例如C1-2、C1-3、C1-4、C1-5、C1-6、C1-7、C1-8、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C3-4、C3-5、C3-6、C4-5、C4-6和C5-6。例如，C1-6烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。烷基可以指具有至多20个碳原子的烷基，例如但不限
于庚基、辛基、壬基、癸基等。烷基可以被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧
基、卤代烷基、羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“烯基”是指具有至少2个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃。烯
基可包括任何数量的碳，例如C2、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C2-7、C2-8、C2-9、C2-10、C3、C3-4、C3-5、C3-6、C4、C4-5、C4-6、C5、C5-6和C6。烯基可具有任何合适数量的双键，包括但不限于1、2、3、4、5或更多个。烯基的实例包括但不限于乙烯基(乙烯基)、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异
丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、异戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯
基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基或1,
3,5-己三烯基。烯基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤代烷基、羧
基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“炔基”是指具有至少2个碳原子和至少一个叁键的直链或支链烃。炔
基可包括任何数量的碳，例如C2、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C2-7、C2-8、C2-9、C2-10、C3、C3-4、C3-5、C3-6、C4、C4-5、C4-6、C5、C5-6和C6。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、丁二炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、异戊炔基、1,3-戊二炔基、1,4-戊二炔
基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、1,3-己二炔基、1,4-己二炔基、1,5-己二炔基、2,4-己二
炔基或1,3,5-己三炔基。炔基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤
代烷基、羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“卤代”和“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
如本文所用，术语“烷氧基”是指具有将烷基与连接点连接的氧原子的烷基：即，烷基-
O-。至于烷基，烷氧基可具有任何合适数量的碳原子，例如C1-6或C1-4.。烷氧基包括，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧
基、己氧基等。烷氧基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤代烷基、
羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
特定情况下，测试组织样品包括癌组织。在一些实施方案中，在样品中测定一种或多种生物
标志物的水平。在一些情况下，一种或多种生物标志物包括前列腺特异性抗原(PSA)。
在一些实施方案中，将测试样品中的一种或多种生物标志物的水平与参考样品中的一
种或多种生物标志物的水平进行比较。在一些情况下，参考样品是在将抗雄激素药物和通
式(I)化合物施用于个体之前和/或之后从相同个体中获得的正常血液或组织。在其他情况
下，参考样品获自不同的个体或个体群体。在一些实施方案中，测试样品中的PSA水平高于
参考样品中的PSA水平，并且在将抗雄激素药物和通式(I)化合物施用于个体之前获得该测
试样品。在其他实施方案中，向个体施用抗雄激素药物和通式(I)化合物导致在施用后从个
体获得的测试样品中的PSA水平与施用前从该个体获得的测试样品相比降低。
在第三方面，本发明提供了抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法。在一些
实施方案中，该方法包括使雄激素受体或细胞与治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式
(I)化合物的组合物接触：
在特定的实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3 4 5 5
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自H和C(O)R ，其中R选自H、任选取代的C1-18烷基、任选
取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，组合物还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I) 化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，雄激素受体反式激活被抑制。在一些实施方案中，雄激素受体表达
被抑制。在一些实施方案中，雄激素受体介导的转录活性被抑制。
在一些实施方案中，雄激素受体变体的表达和/或活性被抑制。在特定实施方案中，雄
激素受体变体向前列腺特异性抗原(PSA)启动子的募集被抑制。在一些实施方案中，雄激素
受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-
V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接变体。在一些情况
下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、
T878A、V716M及其组合的突变。
在一些实施方案中，细胞是癌细胞。在特定实施方案中，癌细胞是转移性癌细胞。在其
他实施方案中，癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞选自雄激
素非依赖性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、激素抵抗性癌细胞及其组合。在一些情况下，癌细
胞的雄激素非依赖性、去势抵抗性和/或激素抵抗性被减少、降低或逆转。在一些实施方案
中，癌细胞对抗雄激素药物重新敏化。在其他实施方案中，癌细胞对抗雄激素药物的抵抗性
减少、降低或逆转。在一些实施方案中，癌细胞的浸润能力和/或癌细胞的迁移能力被抑制。
在其他实施方案中，癌细胞生长和/或形成集落的能力被抑制。
另一方面，本发明提供了用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒。在一些实施方案中，试
剂盒包含抗雄激素药物和通式(I)化合物：
在特定的实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。在特定实施方案中，试剂盒还包含药学上可接
受的载体。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌或乳腺癌。在其他实施方案中，癌症选自雄激素非
依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势
抵抗性癌症和它们的组合。
在一些其他实施方案中，试剂盒还包括使用说明书。在一些实施方案中，所述试剂盒还
包括用于将抗雄激素药物和/或通式(I)化合物施用于个体的用具和/或一种或多种试剂。
在其他实施方案中，所述试剂盒还包括用于从个体中获得样品的用具和/或一种或多种试
剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括用于测定样品中的一种或多种生物标志物的水平的
用具和/或一种或多种试剂。在一些情况下，一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗原
(PSA)。在一些实施方案中，试剂盒还包括阴性和/或阳性对照样品。
另一方面，本发明提供包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物：
在特定实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在一些实施方案中，R6和/或R7是CX3。
在一些实施方案中，R8是X。在一些实施方案中，R9是H。在特定实施方案中，X独立地选自F和
Cl。
在一些实施方案中，通式(II)化合物是
在其他实施方案中，抗雄激素药物选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及
其组合。在一些情况下，抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙及
其组合。
在一些实施方案中，所述组合物抑制雄激素受体或其变体的表达和/或活性。在具体的
实施方案中，雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体及其组合。在一些情况下，剪接变体
是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在特定情况下，剪接变体是AR-V7剪接
变体。在其他情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，突变变体包含一个或多个
选自K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在其他实施方案中，所述组合物是癌细胞增殖的有效抑制剂。在一些情况下，癌细胞是
前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。在其他情况下，癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转移性癌
细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势-抵抗性癌细
胞及其组合。
在一些实施方案中，组合物还包含药学上可接受的载体。
在另一方面，本发明提供了预防或治疗个体的癌症的方法，该方法包括向该个体施用
治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物。
另一方面，本发明提供了抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，该方法包
括使雄激素受体或细胞与包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物接触。
另一方面，本发明提供了包含含有抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物的试剂
盒。
从以下详细说明和附图中，本发明的其他目的、特征和优点对于本领域技术人员而言
是显而易见的。
附图的简要说明
图1A-1C显示了氯硝柳胺类似物的化学结构和合成途径。图1A显示化合物7和化合物30
的合成途径。图1B显示氯硝柳胺和化合物5、7、11、30和31的结构。图1C显示氯硝柳胺和化合
物1、2、5、7、8、11、17、29、30、31、34和35的结构。
图2A和2B显示氯硝柳胺类似物抑制AR和AR-V7表达。图2A显示用氯硝柳胺或所示化合
物之一处理的CWR22Rv1细胞的裂解物的蛋白质印迹。图2B显示用递增剂量的所示化合物处
理的CWR22Rv1细胞的裂解物的蛋白质印迹。“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图3显示氯硝柳胺类似物抑制PSA表达。在存在或不存在恩杂鲁胺(MDV)的情况下，用氯
硝柳胺或所示化合物之一处理C4-2 V7细胞(即，过表达AR-V7的C4-2细胞)。通过ELISA测定
确定PSA蛋白表达。*表示p<0.05。
图4显示氯硝柳胺类似物抑制AR-V7介导的转录活性。用或不用AR-V7的情况下，使
LNCaP细胞与PSA-luc报告基因共转染，然后用恩杂鲁胺、氯硝柳胺或所示的氯硝柳胺类似
物处理所转染的细胞。然后测定荧光素酶活性。*表示p<0.05。
图5A-5F显示氯硝柳胺类似物抑制突变的AR反式激活。用编码相应的突变的AR和雄激
素响应性荧光素酶报告基因构建体的表达载体瞬时转染HEK 293细胞。用指定的抗雄激素
药物或氯硝柳胺类似物处理细胞。然后测定荧光素酶活性。图5A显示野生型AR的激活。图5B
显示AR-V7的激活。图5C显示T878A变体的激活。图5D显示K581R变体的激活。图5E显示V716M
变体的激活。图5F显示L702H变体的激活。*表示p<0.05。
图6A-6D显示氯硝柳胺类似物在体外抑制细胞生长。用阿比特龙、恩杂鲁胺、ARN509或
增加剂量的氯硝柳胺或化合物7和化合物31之一处理CWR22Rv1和C4-2B MDVR细胞48小时，
在此时间后计数细胞数。图6A显示使用CWR22Rv1细胞的细胞生长测定的结果。图6B显示使
用C4-2B MDVR细胞的细胞生长测定的结果。图6C显示CWR22Rv1细胞随时间的细胞生长。图
6D显示C4-2B MDVR细胞随时间的细胞生长。*表示p<0.05。
图7A-7D显示氯硝柳胺类似物在体外抑制细胞生长。在存在或不存在恩杂鲁胺(MDV)的
情况下，用DMSO或0.5μM氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物之一处理CWR22Rv1、C4-2B MDVR、C4-2B
AbiR和C4-2-V7细胞48小时，在此时间后测定细胞数。图7A显示使用CWR22Rv1细胞的细胞生
长测定的结果。图7B显示使用C4-2B MDVR细胞的细胞生长测定的结果。图7C显示C4-2B
AbiR细胞的细胞生长测定的结果。图7D显示C4-2-V7细胞的细胞生长测定的结果。*表示p<
0.05。
图8显示氯硝柳胺类似物诱导细胞凋亡。在有或没有恩杂鲁胺(MDV)的情况下，用氯硝
柳胺或所指定的类似物之一处理C4-2BMDVR细胞，并测量细胞凋亡。*表示p<0.05。
图9A-9D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物协同作用以抑制
CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁胺(20μM)或阿比特龙(5μ
M)单独地或相组合地处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0天、第3天和第5天
计数总细胞数。图9A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测定结果。图9B显示当
氯硝柳胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图9C显示当氯硝柳胺类似物是化合物
30时的细胞生长测定结果。图9D显示当氯硝柳胺类似物是化合物31时的细胞生长测定结
果。化合物30和31，但不是化合物1和34，能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协同作用。*表示p<
0.05。
图10A-10D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物恩杂鲁胺和阿
比特龙协同作用以抑制C4-2BMDVR癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁
胺(20μM)或阿比特龙(5μM)单独或组合处理C4-2BMDVR细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0
天、第3天和第5天计数总细胞数。图10A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测
定结果。图10B显示当氯硝柳胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图10C显示当氯
硝柳胺类似物是化合物30时的细胞生长测定结果。图10D显示当氯硝柳胺类似物是化合物
31时的细胞生长测定结果。化合物30和31，但不是化合物1和34，能够与恩杂鲁胺和阿比特
龙协同作用。*表示p<0.05。
图11A-11D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物恩杂鲁胺和阿
比特龙协同作用以抑制CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、恩杂鲁
胺(20μM)或阿比特龙(5μM)单独或组合处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0
天、第3天和第5天计数总细胞数。图11A显示当氯硝柳胺类似物是化合物7时的细胞生长测
定结果。图11B显示当氯硝柳胺类似物是化合物11时的细胞生长测定结果。图11C显示当氯
硝柳胺类似物是化合物2时的细胞生长测定结果。图11D显示当氯硝柳胺类似物是化合物17
时的细胞生长测定结果。化合物7和11，但不是化合物2和17，能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协
同作用。*表示p<0.05。
图12A-12D显示一些但不是所有的氯硝柳胺类似物能够与抗雄激素药物比卡鲁胺协同
作用以抑制CWR22Rv1癌细胞生长。用指定的氯硝柳胺类似物(0.25μM)、比卡鲁胺(20μM)或
它们的组合处理CWR22Rv1细胞。DMSO处理用作阴性对照。在第0天、第3天和第5天计数总细
胞数。图12A显示当氯硝柳胺类似物是化合物1时的细胞生长测定结果。图12B显示当氯硝柳
胺类似物是化合物34时的细胞生长测定结果。图12C显示当氯硝柳胺类似物是化合物31时
的细胞生长测定结果。图12D显示当氯硝柳胺类似物是化合物30时的细胞生长测定结果。化
合物30和31，但不是化合物1和34，能够与比卡鲁胺协同作用。*表示p<0.05。
图13A-13D显示氯硝柳胺类似物在体内抑制肿瘤生长和AR-V7表达。用氯硝柳胺或化合
物7处理CWR22Rv1肿瘤异种移植物。测量肿瘤体积、肿瘤重量和体重。从肿瘤中分离蛋白质
裂解物，并通过蛋白质印迹分析AR和AR-V7的表达。图13A显示作为时间函数的CWR22Rv1肿
瘤异种移植物体积的图。图13B显示三组中每一组的体重的图。图13C显示了治疗结束时肿
瘤的图片。图13D显示了描绘全长AR(AR-FL)和AR-V7表达的蛋白质印迹。“AR变体”代表所有
形式的AR的组合。*表示p<0.05。
图14A-14F显示在胎牛血清中氯硝柳胺及其类似物抑制雄激素受体(AR)及其变体的转
录活性，如使用PSA-luc测定所评估的。图14A显示pcDnA的数据。图14B显示AR-V1的数据。图
14C显示AR-V3的数据。图14D显示AR-V7的数据。图14E显示AR-V9的数据。图14F显示AR-V12
的数据。缩写：NIC，氯硝柳胺；AA，阿比特龙；ENZA，恩杂鲁胺；ARN，阿帕鲁胺，#7，化合物7；#
31，化合物31.*表示p<0.05。
图15A-15C显示氯硝柳胺及其类似物在CWR22Rv1细胞中通过蛋白酶体-泛素化系统活
化降解AR变体。图15A显示了蛋白质印迹(左)的结果，其描绘了CWR22Rv1细胞中AR变体蛋白
质降解和相对蛋白质水平(右)。图15B显示CWR22Rv1全细胞裂解物的蛋白质印迹。图15C显
示用抗AR抗体免疫沉淀CWR22Rv1全细胞裂解物后的蛋白质印迹。缩写：NIC，氯硝柳胺；#7，
化合物7；#31，化合物31.“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图16A-16C显示氯硝柳胺及其类似物在C4-2B MDVR细胞中通过蛋白酶体-泛素化系统
活化降解AR变体。图16A显示蛋白质印迹(左)的结果，其描绘了C4-2B MDVR细胞中AR变体蛋
白质降解和相对蛋白质水平(右)。图16B显示C4-2B MDVR全细胞裂解物的蛋白质印迹。图
16C显示用抗AR抗体免疫沉淀C4-2B MDVR全细胞裂解物后的蛋白质印迹。缩写：NIC，氯硝柳
胺；#7，化合物7；#31，化合物31.“AR-变体”代表所有形式的AR的组合。
图17A和17B显示化合物7在抵抗性前列腺癌中增强阿比特龙和阿帕鲁胺(ARN509)治
疗。图17A显示用阿帕鲁胺(ARN)和/或化合物7(#7)处理CWR22Rv1细胞的结果。图17B显示用
阿比特龙(ABI)和/或化合物7处理CWR22Rv1细胞的结果。*表示p<0.05。
图18显示当口服给药时，化合物7(#7)和化合物31(#31)均显示出比氯硝柳胺好的生物
利用度。
图19A-19D显示化合物7(#7)抑制LuCaP35CRPDX异种移植肿瘤生长，并且当口服给药时
表现出比氯硝柳胺(NIC)好的抗肿瘤活性。图19A显示肿瘤体积数据(左)和肿瘤图像(右)。
图19B显示肿瘤重量数据。图19C显示体重数据。图19D显示小鼠血清样品中PSA水平的数
据。*表示p<0.05。
图20A和20B显示化合物7(#7)和化合物31(#31)抑制乳腺癌细胞生长。图20A显示MDA-
MB-468细胞的数据。图20B显示MCF-7细胞的数据。
发明的详细描述
I.引言
鉴于存在耐药性发展的几种潜在途径，癌症对诸如恩杂鲁胺和阿比特龙等抗雄激素药
物的耐药性实际上会不可避免地发展。最近的研究已将雄激素受体(AR)可变剪接(特别是
剪接变体AR-V7)与癌症对抗雄激素药物的耐药性的发展联系起来。AR剪接变体也与多西紫
杉醇耐药性相关。此外，已经显示出与不表达AR-V7的患者相比，用恩杂鲁胺或阿比特龙治
疗的癌症患者中的AR-V7表达与显著更低的PSA响应、更短的无进展时间和更低的总存活时
间相关。
本发明部分基于以下发现：氯硝柳胺类似物可以抑制癌细胞生长，包括表达雄激素受
体变体AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12的雄激素非依赖性前列腺癌细胞。此外，本发明
部分基于以下令人惊讶的发现：本发明的氯硝柳胺类似物可以与抗雄激素药物协同抑制癌
细胞生长。本发明的组合物和方法可用于治疗许多癌症，包括前列腺癌。此外，本文提供的
组合物和方法可用于治疗雄激素非依赖性癌症和表达诸如AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和
AR-V12的雄激素受体剪接变体的癌症，或表达许多的雄激素受体的突变变体的癌症。
II.定义
除非另外特别指明，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域
的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。另外，与本文描述的方法或材料类似或等同
的任何方法或材料可用于实践本发明。出于本发明的目的，定义了以下术语。
本文使用的术语“a”、“an”或“该/所述”不仅包括具有一个成员的方面，还包括具有多
于一个成员的方面。例如，单数形式的“a”、“an”或“该/所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“a细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“该/所述试剂”包
括对本领域技术人员已知的一种或多种试剂的引用，等等。
本文使用的术语“约”和“近似”通常意指鉴于测量的性质或精确度，所测量的量的可接
受的误差度。典型的示例性的误差度在给定的数值或数值范围的20％(％)内、优选在10％
内、更优选在5％内。或者，特别是在生物系统中，术语“约”和“近似”可以意指在给定值的数量级内的值，优选在给定值的5倍内，更优选在给定值的2倍内。除非另有说明，否则本文给
出的数值是近似值，意指当未明确说明时可以推断出术语“约”或“近似”。
本文使用的术语“个体(subject)”、“个体(individual)”和“患者”在本文中可互换使
用，指脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。哺乳动物包括但不限于鼠科动物、大鼠、猿猴、
人、农场动物、运动动物和宠物。还包括体内获得的或体外培养的生物实体的组织、细胞及
其后代。
如本文所用，术语“治疗有效量”包括足以产生关于所指定的病症、病况或精神状态的
所期望的结果的剂量。所期望的结果可以包括剂量接受者的主观或客观改善。例如，有效量
的氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁
胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)包括足以减轻癌症如前列腺癌或乳腺癌
的体征、症状或原因的量。作为另一个实例，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的
有效量包括足以减轻耐药性、复发性或晚期癌症的体征、症状或原因的量，例如，雄激素非
依赖性、转移性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性或转移性去势抵抗性癌症。作为另一
个实例，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩
杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的有效量包括足以预防癌症发展的
量。
因此，治疗有效量可以是减缓、逆转或阻止肿瘤生长，增加平均存活时间，抑制肿瘤进
展或转移，或使癌细胞对其已变得耐药或正在耐药的癌症药物(例如，抗雄激素药物，例如
恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或比卡鲁胺)再敏化的量。另外，例如，氯硝柳胺类似物
和抗雄激素药物的组合的有效量包括当施用于患有癌症的个体时足以引起该个体的实质
性改善的量。有效量可随着所治疗的癌症的类型和阶段、所施用的一种或多种组合物的类
型和浓度以及还施用的其他药物的量而变化。
例如，所述量可以根据所治疗的癌症的类型、癌症的进展阶段、所施用的一种或多种组
合物的类型和浓度以及还施用于个体的其他药物的量而变化。有效量的氯硝柳胺类似物
(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)可以包括有效增强抗雄激素药物如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸
阿比特龙或比卡鲁胺的抗癌治疗活性的量。
如本文所用，术语“治疗”包括但不限于产生接受者的健康状况(例如患者的癌症状态)
的有益变化的方法和操作。这些变化可以是主观的或客观的，并且可以与诸如所治疗的癌
症的症状或体征等特征相关。例如，如果患者注意到疼痛减轻，则发生疼痛的成功治疗。例
如，如果发生肿胀量减少，则发生炎症的有益治疗。类似地，如果临床医生注意到客观变化，
例如降低癌细胞的数量、癌细胞的生长、癌症肿瘤的大小或癌细胞对另一种癌症药物(例
如，抗雄激素药物，例如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或比卡鲁胺)的耐药性，那么癌
症的治疗也是有益的。该术语还包括阻止接受者状态恶化。如本文所用，治疗还包括将氯硝
柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕
鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的组合施用于患有癌症的患者(例如，前列腺癌、
乳腺癌、雄激素非依赖性癌症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性
癌症或转移性去势抵抗性癌症)。
如本文所用，术语“施用/给药”包括与向患者提供一定量的(例如治疗有效量的)本文
所述化合物或组合物(例如氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合)相关的活动。给药包括
向有此需要的患者提供单位剂量的本文所述的组合物。给药包括将有效量的本文所述的化
合物或组合物提供所指定的时间段，例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、60、90、120或更多天，或以所规定的顺序提供，例如，氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组合)的给药，随后抗雄激素药
物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的给药，或反之亦然。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指有助于向细胞、有机体或个体施用活性
剂的物质。“药学上可接受的载体”是指可以包含在本发明的组合物中并且不会对个体引起
显著的不良的毒理作用的载体或赋形剂。药学上可接受的载体的非限制性实例包括水、
NaCl、生理盐水溶液、乳酸林格氏液、正规的蔗糖、正规的葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、
润滑剂、包衣、甜味剂、矫味剂和着色剂、脂质体、分散介质、微囊、阳离子脂质载体、等渗剂
和吸收延迟剂等。载体还可以是用于向制剂提供稳定性、无菌性和等渗性的物质(例如抗微
生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂)，用于防止微生物的作用的物质(例如抗微生物剂
和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)，或用于向制剂提供具有可
食用香料的物质，等等。本领域技术人员将认识到其他药物载体可用于本发明。
如本文所用，术语“共同给药”包括顺序或同时施用两种或更多种结构不同的化合物。
例如，两种或更多种结构不同的药物活性化合物可以通过施用适于口服给药的含有两种或
更多种结构不同的活性药物活性化合物的药物组合物来共同给药。作为另一个实例，两种
或更多种结构不同的化合物可以通过施用一种化合物然后施用另一种化合物来共同给药。
两种或更多种结构不同的化合物可以包含氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或
其组合)和抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)。
在某些情况下，共同给药的化合物通过相同的途径给药。在其他情况下，共同给药的化合物
通过不同途径给药。例如，一种化合物可以口服给药，另一种化合物可以例如通过静脉内或
腹膜内注射依序或同时给药。可以施用同时或依序施用的化合物或组合物，使得至少一种
氯硝柳胺类似物和一种抗雄激素药物以有效浓度同时存在于个体或细胞中。
如本文所用，术语“癌症”旨在包括以异常细胞的不受控制的生长为特征的一类疾病中
的任何成员。该术语包括所有已知的癌症和肿瘤性病况，无论其特征为恶性的、良性的、复
发的、软组织的还是实体的，以及所有阶段和等级的癌症，包括晚期的、复发的、转移前的和
转移后的癌症。此外，该术语包括雄激素非依赖性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性、
耐药性和转移性去势抵抗性癌症。不同类型的癌症的实例包括但不限于前列腺癌(例如，前
列腺腺癌)；乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌、原位导管癌、浸润性导管癌、小管癌、髓样癌、粘液
癌、乳头状癌、筛状癌、浸润性小叶癌、炎性乳腺癌、原位小叶癌、佩吉特病、Phyllodes肿
瘤)；妇科癌症(例如，卵巢癌、子宫颈癌、子宫癌、阴道癌和外阴癌)；肺癌(例如，非小细胞肺
癌、小细胞肺癌、间皮瘤、类癌瘤、肺腺癌)；消化道和胃肠道癌症、例如胃癌(例如胃癌)、结
肠直肠癌、胃肠道间质瘤(GIST)、胃肠道类癌瘤、结肠癌、直肠癌、肛门癌、胆管癌、小肠癌和
食道癌；甲状腺癌；胆囊癌；肝癌；胰腺癌；阑尾癌；肾癌(例如肾细胞癌)；中枢神经系统的癌
症(例如，胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤)；皮肤癌(例如黑色素瘤)；骨和软组织肉瘤(例如，
尤因氏肉瘤)；淋巴瘤；绒毛膜癌；泌尿系统癌症(例如尿路上皮膀胱癌)；头颈癌；和骨髓癌
和血癌(例如，慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤)。如本文所用、“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。
如本文所用，术语“前列腺癌”和“前列腺癌细胞”是指存在于前列腺组织中或源自前列
腺组织的癌细胞。前列腺癌可以是良性的、恶性的或转移性的。前列腺癌可以是雄激素不敏
感的、激素抵抗性的或去势抵抗性的。前列腺癌可以是“晚期阶段的前列腺癌”或“晚期前列
腺癌”。晚期阶段的前列腺癌包括一类进展已经超出该疾病的早期阶段的前列腺癌。通常，
晚期阶段的前列腺癌与不良预后相关。晚期阶段的前列腺癌的类型包括但不限于转移性前
列腺癌、耐药性前列腺癌、例如对抗雄激素耐药的前列腺癌(例如，抗恩杂鲁胺前列腺癌、抗
阿帕鲁胺前列腺癌、抗阿比特龙前列腺癌、抗比卡鲁胺前列腺癌等)、抗紫杉烷前列腺癌、激
素难治性前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌、转移性去势抵抗性前列腺癌及其组合。在一些情
况下，晚期阶段的前列腺癌通常不会对采用一种或多种的以下常规的前列腺癌疗法的治疗
产生响应或对它们具有耐药性：恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺或阿帕鲁胺。提供本发明的
化合物、组合物和方法以用于治疗前列腺癌，例如晚期阶段的前列腺癌，包括任何一种或多
种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多)类型的本文公开的晚期阶段的前列腺癌。
如本文所用，短语“增强治疗效果”包括许多主观或客观因素中的任何一个，表明如本
文所讨论的正在治疗的病况的有益应答或改善。例如，增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、
阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的治疗效果包括使对抗雄激素耐药的癌症
(例如，抗雄激素耐药性前列腺癌或乳腺癌)对抗雄激素疗法再敏化。此外，例如，增强抗雄
激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)的治疗效果包括
改变对抗雄激素耐药的癌细胞(例如，对抗雄激素耐药的前列腺或乳腺癌细胞)，以至于该
细胞不对抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或其组合)耐
药。而且，例如，增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙、比卡鲁胺或
其组合)的治疗效果包括加和或协同地改善或增加抗雄激素药物的活性。在一些实施方案
中，增强包括或至少包括约一倍、两倍、三倍、四倍、五倍、十倍、二十倍、五十倍、百倍或千倍的用于治疗癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)的抗雄激素药物的治疗活性的增加。在一些实
施方案中，所述增强包括或至少包括用于治疗癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)的抗雄激素
药的治疗活性(例如，功效)增加约10％、20％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或
100％。
如本文所用，术语“逆转癌细胞对化合物或药物的耐药性”、“降低癌细胞对化合物或药
物的耐药性”或“使对化合物或药物耐药的癌细胞再敏化”包括改变或修饰对诸如抗雄激素
疗法(例如，恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺或阿帕鲁胺)等治疗耐药的癌细胞，使得该细胞
不再对抗雄激素疗法耐药，或者对抗雄激素疗法较不耐药。因此，如本文所用，短语“逆转前
列腺癌细胞对抗雄激素的耐药性”包括改变或修饰对抗雄激素(例如，恩杂鲁胺、阿比特龙、
比卡鲁胺或阿帕鲁胺)疗法耐药的前列腺癌细胞，使得该细胞不再对抗雄激素疗法耐药，或
者对抗雄激素疗法较不耐药。
如本文所用，短语“抗雄激素药物”或“抗雄激素”包括抗雄激素化合物，其通过阻断雄
激素受体、竞争细胞表面上的结合位点、或影响或介导雄激素产生来改变雄激素途径。抗雄
激素可用于治疗多种疾病，包括但不限于癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)。抗雄激素药物包
括但不限于非甾体类雄激素受体(AR)拮抗剂和CYP17A1抑制剂(即，作为细胞色素P450
17A1抑制剂的雄激素合成抑制剂)。作为非限制性实例，非甾体类AR拮抗剂包括第一代药物
(例如比卡鲁胺、氟他胺和尼鲁米特)、第二代药物(例如，阿帕鲁胺、多拉米胺
(darolutamide)和恩杂鲁胺)以及其他例如西咪替丁和托匹鲁胺(topilutamide)。通常，非
甾体类AR拮抗剂是选择性AR拮抗剂，几乎没有抗促性腺激素活性。CYP17A1抑制剂的非限制
性实例包括醋酸阿比特龙、酮康唑和seviteronel。
如本文所用，术语“AR变体”包括全长AR的剪接变体或突变变体。人AR的同种型1的氨基
酸序列在NCBI参考序列NP_000035.2(SEQ ID NO:1)中列出。已知各种AR剪接变体。参见，
Guo et al.,Cancer Res.2009Mar 15；69(6):2305-13。示例性的AR剪接变体包括但不限于
AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12，以及缺少功能性配体结合域(LBD)的变体。缺少LBD的
AR剪接变体的实例是AR-V7。“AR-V7”包括雄激素受体剪接变体7，其是缺少功能性LBD的AR
的组成型活性变体。参见，例如，Hu et al.,Cancer Research,69(1):16-22(2009)。各种AR
突变变体也是已知的。参见，例如，Marcelli et al.,Cancer Research 60(4):944-949
(2000)和Brooke et al.,Curr.Genomics,10(1):18-25(2009)。AR突变可以导致辅因子结
合的改变和/或配体特异性降低，这两者都可以赋予癌细胞生长优势。突变可以发生在AR内
的许多位置。AR突变变体的非限制性实例包括相对于SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列，在
位置K581、L702、V716、T878或其任何组合具有氨基酸取代的变体。给定位置处的野生型氨
基酸可以用任何其他氨基酸替换。在一些情况下，AR突变变体包含一个或多个选自K581R、
L702H、V716M和T878A的氨基酸取代。
AR-V1、AR-V3、AR-V7和AR-V12的人氨基酸序列的非限制性实例分别在NCBI参考序列
ACN39560.1、ACN39563.1、ACN39559.1和ACZ81436.1下列出。AR-V9氨基酸序列的非限制性
实例SEQ ID NO:2下列出。
如本文所用，术语“烷基”是指具有所示碳原子数的直链或支链的饱和脂族基团。烷基
可包括任何数量的碳，例如C1-2、C1-3、C1-4、C1-5、C1-6、C1-7、C1-8、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C3-4、C3-5、C3-6、C4-5、C4-6和C5-6。例如，C1-6烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。烷基可以指具有至多20个碳原子的烷基，例如但不限
于庚基、辛基、壬基、癸基等。烷基可以被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧
基、卤代烷基、羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“烯基”是指具有至少2个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃。烯
基可包括任何数量的碳，例如C2、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C2-7、C2-8、C2-9、C2-10、C3、C3-4、C3-5、C3-6、C4、C4-5、C4-6、C5、C5-6和C6。烯基可具有任何合适数量的双键，包括但不限于1、2、3、4、5或更多个。烯基的实例包括但不限于乙烯基(乙烯基)、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异
丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、异戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯
基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基或1,
3,5-己三烯基。烯基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤代烷基、羧
基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“炔基”是指具有至少2个碳原子和至少一个叁键的直链或支链烃。炔
基可包括任何数量的碳，例如C2、C2-3、C2-4、C2-5、C2-6、C2-7、C2-8、C2-9、C2-10、C3、C3-4、C3-5、C3-6、C4、C4-5、C4-6、C5、C5-6和C6。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、丁二炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、异戊炔基、1,3-戊二炔基、1,4-戊二炔
基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、1,3-己二炔基、1,4-己二炔基、1,5-己二炔基、2,4-己二
炔基或1,3,5-己三炔基。炔基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤
代烷基、羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
如本文所用，术语“卤代”和“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
如本文所用，术语“烷氧基”是指具有将烷基与连接点连接的氧原子的烷基：即，烷基-
O-。至于烷基，烷氧基可具有任何合适数量的碳原子，例如C1-6或C1-4.。烷氧基包括，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧
基、己氧基等。烷氧基可被一个或多个选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、烷氧基、卤代烷基、
羧基、酰氨基、硝基、氧代和氰基的部分任选地取代。
[0002] 如本文所用，术语“氧代”是指与化合物双键键合的氧原子(即O＝)。如本文所用，术语“卤代烷基”是指被至少一个卤素原子取代的如上定义的烷基部分。
如本文所用，术语“羧基”是指-C(O)OH部分。羧基部分可以被离子化以形成羧酸根阴离
子。
如本文所用，术语“氨基”是指-NR3部分，其中每个R基团是H或烷基。
如本文所用，术语“酰氨基”是指–NRC(O)R或–C(O)NR2部分，其中每个R基团是H或烷基。
术语“协同”或“协同作用”是指由两种或更多种化合物(例如，抗雄激素药物或氯硝柳
胺类似物)产生的作用大于由单个化合物的作用的总和产生的作用(即，作用大于累加效
应)。有几种方法可用于确定药物的组合是否产生协同作用。作为非限制性实例，Highest
Single Agent方法简单地反映了药物的组合的所得效果(EAB)大于单独药物(EA和EB)的效
果的事实。组合指数(CI)可以根据公式计算：
作为另一个非限制性实例，根据响应可加性方法(Response Additivity Approach)，
当EAB大于所预期的单个药物(EA和EB)的累加效应时，发生协同药物组合作用。这里，使用以
下公式计算CI：
作为另一个非限制性实例，Bliss Independence模型是基于药物作用是概率进程的结
果的原理，并且假设药物独立地起作用以使它们彼此不相互干扰(即，不同的作用位点)。行
动)。然而，该模型还假设每种药物有助于产生共同的结果。根据该方法，所观察到的组合效
应被表示为概率((0≤EAB≤1)，并与表示为如下的所预期的累加效应进行比较。
EA+EB(1-EA)＝EA+EB–EAEB，
其中0≤EA≤1并且0≤EB≤1。使用以下公式计算此方法的CI：
鉴定协同作用的方法在Foucquier J.and Guedj M.Pharmacology Research&
Perspectives(2015)(3)3:e00149中进一步讨论，出于所有目的通过引用整体并入本文。
III.实施方案的描述。
A.组合物
本发明提供了包含抗雄激素药物和氯硝柳胺类似物的组合物。氯硝柳胺((5-氯-N-2-
氯-4-硝基-苯基)-2-羟基苯甲酰胺)是食品药品管理局(FDA)批准的有效对抗人类绦虫的
药物。氯硝柳胺的化学结构如下：
如本文所用，术语“氯硝柳胺类似物”包括结构类似物(即，与氯硝柳胺具有结构相似性
的化合物)。氯硝柳胺的结构类似物可以在一个或多个原子、官能团或亚结构方面与氯硝柳
胺不同。该术语还包括氯硝柳胺类似物的衍生物，以及转化为氯硝柳胺类似物及其衍生物
的前药。还包括盐，例如氯硝柳胺类似物的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3
4 5 5
选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自H和C(O)R ，其中R 选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
1 2 1
在一些实施方案中，R是CX3(例如CF3)并且R 是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
2 3 4 1 1
在一些实施方案中，当R是Cl、R是Cl并且R是H时，R不是NO2。在一些实施方案中，当R
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实 施方案中 ，通式(I)的化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种氯硝柳胺类似物，其浓度为约0.1
μM至10μM(例如约0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM、1μM、1.1μM、1.2μM、1.3μM、1.4μM、1.5μM、1.6μM、1.7μM、1.8μM、1.9μM、2μM、2.1μM、2.2μM、2.3μM、2.4μM、2.5μM、2.6μM、2.7μM、2.8μM、2.9μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.5μM、6μM、6.5μM、7μM、
7.5μM、8μM、8.5μM、9μM、9.5μM或10μM)。在特定实施方案中，所述浓度为约0.1μM、0.11μM、
0.12μM、0.13μM、0.14μM、0.15μM、0.16μM、0.17μM、0.18μM、0.19μM、0.2μM、0.21μM、0.22μM、
0.23μM、0.24μM、0.25μM、0.26μM、0.27μM、0.28μM、0.29μM、0.3μM、0.31μM、0.32μM、0.33μM、
0.34μM、0.35μM、0.36μM、0.37μM、0.38μM、0.39μM或0.4μM。在其他实施方案中，一种或多种氯硝柳胺类似物以如下浓度存在：约10μM至1,000μM(例如约10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、
15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM、45μM、50μM、55μM、60μM、65μM、70μM、75μM、80μM、85μM、90μM、95μM、100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、350μM、400μM、450μM、
500μM、550μM、600μM、650μM、700μM、750μM、800μM、850μM、900μM、950μM或1,000μM)。在一些情况下，氯硝柳胺类似物或其组合以约0.25μM的浓度存在于组合物中。在一些其他情况下，
氯硝柳胺类似物或其组合以约0.5μM的浓度存在于组合物中。在其他情况下，氯硝柳胺类似
物或其组合以约1.0μM的浓度存在于组合物中。在一些其他情况下，氯硝柳胺类似物或其组
合以约1.5μM的浓度存在于组合物中。
本发明的组合物包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物。抗雄激素药包括非甾体类雄激
素受体(AR)拮抗剂和CYP17A1抑制剂。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康
士得)、Cosudex、Calutide、Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-
56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1
抑制剂包括醋酸阿比特龙(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用
于本发明的组合物中。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含一种或多种抗雄激素药物，其浓度为约0.1μM
至10μM(例如约0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM、1μM、1.1μM、
1.2μM、1.3μM、1.4μM、1.5μM、1.6μM、1.7μM、1.8μM、1.9μM、2μM、2.1μM、2.2μM、2.3μM、2.4μM、
2.5μM、2.6μM、2.7μM、2.8μM、2.9μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.5μM、6μM、6.5μM、7μM、7.5μM、8μM、8.5μM、9μM、9.5μM或10μM)。在其它实施方案中，所述一种或多种抗雄激素药物以约
10μM至100μM的浓度存在(例如约10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM、45μM、50μM、55μM、60μM、65μM、70μM、75μM、80μM、85μM、90μM、
95μM或100μM)。在一些其他实施方案中，所述一种或多种抗雄激素药物以约100μM至1,000μ
M的浓度存在于组合物中。(例如约100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、350μM、400μM、450μM、
500μM、550μM、600μM、650μM、700μM、750μM、800μM、850μM、900μM、950μM或1,000μM)。在一些情况下，抗雄激素药物或其组合以约5μM的浓度存在。在其他情况下，抗雄激素药物或其组
合以约20μM的浓度存在。
本发明的组合物可用于抑制雄激素受体(AR)变体，包括突变变体和剪接变体。特别地，
许多AR剪接变体和突变变体与雄激素非依赖性癌症和激素抵抗性癌症相关。在AR突变变体
中，本发明的组合物可用于抑制T878A、K581R、L702H和V716M AR突变变体以及它们的组合。
在AR剪接变体中，本发明的组合物可用作AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12剪接变体抑
制剂。在本发明的一个方面，AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12的抑制可以使耐药性
癌细胞(例如前列腺癌细胞)对癌症药物例如抗雄激素药物(例如，比卡鲁胺、恩杂鲁胺、阿
帕鲁胺和醋酸阿比特龙)再敏化。在本发明的另一个方面，AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12的抑制可以增强抗雄激素药物(例如，比卡鲁胺、恩杂鲁胺、阿帕鲁胺和醋酸阿比特
龙)及其组合的有效性。
本发明化合物可以抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12的转录、翻译、稳定性
或活性。抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、
AR-V9和/或AR-V12对雄激素反应元件(AREs)的募集。在一些实施方案中，抑制AR-V1、AR-
V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12对
PSA启动子的募集。在一些实施方案中，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可
包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12诱导的PSA启动子的激活。在一些实施方
案中，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、
AR-V9和/或AR-V12诱导的PSA产生。例如，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12可包
括在不存在DHT的情况下抑制PSA的产生。
本发明还提供了这样的组合物，其适合于患有晚期癌症的患者，例如耐药性癌症、转移
性癌症、去势抵抗性癌症或其组合。在一些情况下，晚期癌症是晚期前列腺癌，例如耐药性
前列腺癌、转移性前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌或其组合。在其他情况下，晚期癌症是晚
期乳腺癌，例如耐药性乳腺癌、转移性乳腺癌或其组合。
B.药物组合物
本发明的药物组合物包括含有氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组
合)，抗雄激素药物(例如比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)的组合物
和药学上可接受的载体和/或赋形剂或稀释剂。此类组合物适用于动物或人的药物用途。
本发明的药物组合物可以通过药学领域中熟知的任何方法制备。适用于本发明的药学
上可接受的载体包括任何标准的药物载体、缓冲剂和赋形剂，包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水
和乳液(例如油/水或水/油乳液)和各种类型的润湿剂和/或辅料。合适的药物载体及其制
剂描述于Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,19th
ed.1995)中。优选的药物载体取决于活性剂的预期给药方式。
本发明的药物组合物可包括药物或其任何药学上可接受的盐的组合(例如，氯硝柳胺
类似物，例如化合物5、7、11、30和/或31，和抗雄激素药物，例如恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺和/或阿帕鲁胺)作为活性成分和药学上可接受的载体和/或赋形剂或稀释剂。药物组合
物可任选地含有其他治疗成分。
根据常规的药物混配技术，本发明的组合物(即，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组
合)可以作为紧密混合物中的活性成分与合适的药物载体和/或赋形剂组合。考虑将适合于
用于给药的所需制剂形式的任何载体和/或赋形剂与本文公开的化合物一起使用。
药物组合物包括适用于局部、肠胃外、肺部、鼻腔、直肠或口服给药的那些药物组合物。
在任何给定的情况下，最合适的给药途径将部分取决于癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)病
况的性质和严重性，并且还任选地取决于癌症的阶段。
其他药物组合物包括适合全身(肠内或肠胃外)给药的那些。全身给药包括口服、直肠、
舌下或唇下给药。肠胃外给药包括例如静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内
和颅内。其他递送模式包括但不限于脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂等的使用。在特定
实施方案中，本发明的药物组合物可以在肿瘤内给药。
用于肺部给药的组合物包括但不限于由本文所述化合物或其盐的粉末以及合适的载
体和/或润滑剂的粉末组成的干粉组合物。用于肺部给药的组合物可以从本领域技术人员
已知的任何合适的干粉吸入器装置中吸入。
用于全身给药的组合物包括但不限于由本文所述组合物和合适的载体和/或赋形剂的
粉末组成的干粉组合物。用于全身给药的组合物可以由但不限于片剂、胶囊、丸剂、糖浆、溶
液和悬浮液来表示。
在一些实施方案中，本发明提供了进一步包含药物表面活性剂的组合物。在其他实施
方案中，本发明提供了进一步包含冷冻保护剂的组合物。在一些实施方案中，所述冷冻保护
剂选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、谷氨酸钠、PVP、HPβCD、CD、甘油、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。
用于本发明的药物组合物或药物可通过标准技术并使用一种或多种生理学上可接受
的载体或赋形剂来配制。合适的药物载体在本文和Remington:The Science and Practice
of Pharmacy,21st Ed.,University of the Sciences in Philadelphia,Lippencott
Williams&Wilkins(2005)中有所描述。
本发明组合物的控释肠胃外制剂可以制成植入物、油性注射剂或颗粒系统。对于递送
系统的广泛综述，参见Banga,A.J.,THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS:FORMULATION,
PROCESSING,AND DELIVERY SYSTEMS,Technomic Publishing Company,Inc.,Lancaster,
PA,(1995)，在此通过引用并入本文。颗粒系统包括微球、微粒、微囊、纳米囊、纳米球和纳米
颗粒。
聚合物可用于本发明组合物的离子控制释放。用于受控的药物递送的各种可降解的和
不可降解的聚合物基质是本领域已知的(Langer R.,Accounts Chem.Res.,26:537-542
(1993))。例如，嵌段共聚物，泊洛沙姆407在低温下作为粘性的但可流动的液体存在，但在
体温下形成半固体凝胶。它已显示出作为用于配制和缓释重组白细胞介素2和脲酶的有效
媒介物(Johnston et al.,Pharm.Res.,9:425-434(1992)；和Pec et al.,
J.Parent.Sci.Tech.,44(2):58 65(1990))。或者，羟基磷灰石已用作控制释放蛋白质的微
载体(Ijntema et al.,Int.J.Pharm.,112:215-224(1994))。在另一方面，脂质体用于控制
释放以及脂质包封药物的药物靶向(Betageri et al.,LIPOSOME DRUG DELIVERY
SYSTEMS,Technomic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,PA(1993))。用于控制递送治疗性
蛋白质的许多其他系统是已知的。参见，例如，美国专利号5,055,303、5,188,837、4,235,
871、4,501,728、4,837,028、4,957,735和5,019,369、5,055,303；5,514,670；5,413,797；5,
268,164；5,004,697；4,902,505；5,506,206、5,271,961；5,254,342和5,534,496；每一个都
通过引用并入本文。
C.预防和治疗癌症的方法
在一些实施方案中，本发明提供了预防或治疗患者的癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌或
雄激素非依赖性癌症)的方法，其中该方法包括向该患者施用有效量的氯硝柳胺类似物和
抗雄激素药物。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
2 3 5
CX3或NO2。在其他情况下，R 是H或X。在一些其他情况下，R 是X。在其他情况下，R是C2烷基或
C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实施方案中 ，通式(I)的化合物选自：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
F、R8是Cl并且R9是H时，R7不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物为非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组
合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、
Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺
(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是晚期癌症。在这些实施方案的一些实施方
案中，癌症是耐药性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是对抗雄激素药物耐药的
或雄激素非依赖性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是转移性的。在这些实施方
案的一些实施方案中，癌症是转移性和耐药性的(例如，对抗雄激素药物耐药性)。在这些实
施方案的一些实施方案中，癌症是去势抵抗性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症
是转移性和去势抵抗性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺耐药性的。
在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺和阿比特龙耐药性的。在这些实施方
案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺、阿比特龙和比卡鲁胺耐药性的。在这些实施方案的
一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺和阿帕鲁胺耐药性的。在其他实施
方案中，癌症是耐药性的(例如，多西紫杉醇、卡巴他赛、紫杉醇)。癌症(例如，前列腺癌或乳
腺癌)可以对这些药物的任何组合具有耐药性。
在一些实施方案中，治疗包括抑制癌细胞(例如前列腺或乳腺癌细胞)生长、抑制癌细
胞增殖、抑制癌细胞迁移、抑制癌细胞浸润、改善癌症症状、减少癌肿瘤的大小、减少癌肿瘤
的数量、减少癌细胞的数量、诱导癌细胞坏死、细胞焦亡、细胞胀亡、细胞凋亡、自噬或其他
细胞死亡、或增强包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合物或药物组合物的治疗效
果。在特定情况下，个体未患有癌症。
在本文所述的治疗癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌、雄激素非依赖性癌症或耐药性癌症)
的特定方法中，治疗包括增强抗雄激素药物(例如，非甾体类雄激素受体拮抗剂或CYP17A1
抑制剂)的治疗效果。在某些实施方案中，治疗包括增强恩杂鲁胺的治疗效果。在某些其他
实施方案中，治疗包括增强阿比特龙的治疗效果。在其他实施方案中，治疗包括增强阿帕鲁
胺的治疗效果。在一些其他实施方案中，治疗包括增强比卡鲁胺的治疗效果。增强可以是协
同的或叠加的。
在本文所述方法的某些实施方案中，治疗包括逆转、减少或降低癌细胞(例如，前列腺
癌细胞或乳腺癌细胞)对抗雄激素药物的耐药性。在本文所述方法的某些实施方案中，治疗
包括使癌细胞(例如前列腺癌细胞或乳腺癌细胞)对抗雄激素药物再敏化。在本文所述方法
的任何方法中，抗雄激素药物是选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及其组合
的化合物。在某些实施方案中，抗雄激素药物是恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺和/或醋酸阿
比特龙。
在任何上述方法中，治疗可包括逆转癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄激素
药物(例如，非甾体类雄激素受体拮抗剂或CYP17A1抑制剂)的耐药性；减少或降低癌细胞对
抗雄激素药物的耐药性；或使癌细胞对抗雄激素药物再敏化。在一些实施方案中，治疗包括
逆转癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细胞)对恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特
龙或其组合的耐药性。在一些其他实施方案中，治疗包括减少或降低癌细胞对恩杂鲁胺、阿
帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合的耐药性。在本发明的其他实施方案中，治疗包
括使癌细胞对恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合再敏化。
在本文所述方法的任何方法中，癌症选自去势抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症、晚
期癌症、耐药性癌症、抗雄激素耐药性癌症、比卡鲁胺耐药性癌症、恩杂鲁胺耐药性癌症、醋
酸阿比特龙耐药性癌症、阿帕鲁胺耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-
V12-诱导的耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的抗雄激素耐
药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的恩杂鲁胺耐药性癌症、AR-
V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的醋酸阿比特龙耐药性癌症、AR-V1-、AR-
V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的阿帕鲁胺耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、
AR-V9-和/或AR-V12-诱导的比卡鲁胺耐药性癌症及它们的组合。
在特定实施方案中，从个体获得测试样品。可以在将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物
施用于个体之前和/或之后获得测试样品。合适样品的非限制性实例包括血液、血清、血浆、
脑脊髓液、组织、唾液和尿液。在一些情况下，样品包含正常组织。在其他情况下，样品包含
癌组织。样品也可以由正常细胞和癌细胞的组合构成。
在一些实施方案中，获得参考样品。参考样品可以例如从个体中获得并且可以包含正
常组织。参考样品也可以从不同的个体和/或个体群体中获得。在一些情况下，参考样品在
将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物施用于个体之前和/或之后从个体、不同个体或个体群
体中获得，并且包含正常组织。然而，在一些情况下，参考样品包含癌症组织并且从个体和/
或从不同个体或个体群体中获得。
在一些实施方案中，在测试样品和/或参考样品中测定一种或多种生物标志物的水平。
合适的生物标志物的非限制性实例包括前列腺特异性抗原(PSA)、α-甲基酰基-CoA消旋酶
(AMACR)、内皮糖蛋白(CD105)、Engrailed-2(EN-2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、小窝蛋
白-1、白细胞介素-6(IL-6)、CD147、S100蛋白家族的成员(例如，S100A2、S100A4、S100A8、
S100A9、S100A11)、膜联蛋白A3(ANXA3)、人激肽释放酶-2(KLK2)、TGF-β1、β-微精原蛋白
(MSMB)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)、HER2、Ki67、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E。
前列腺特异性抗原(PSA)是主要由前列腺细胞产生的蛋白质。大多数PSA被释放到精液
中，但是一些PSA也被释放到血液中。在血液中，PSA以未结合的和复合的(cPSA)形式存在。
传统的实验室测试可以测量未结合的和/或总的(未结合的和复合的)PSA。升高的PSA水平
可由良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎症引起，但也可由前列腺癌引起。测定PSA水平还可
包括PSA速度(即PSA水平随时间的变化)、PSA倍增时间(即PSA水平加倍的速度)、PSA密度
(即PSA浓度和前列腺体积的比较(可以例如通过超声评估)和年龄特异性PSA范围的一种或
多种测定。
通常，将一种或多种测试样品中的一种或多种生物标志物的水平与一种或多种参考样
品中的一种或多种生物标志物的水平进行比较。取决于生物标志物，相对于正常对照或参
考样品的增加或减少可指示癌症的存在或癌症的更高风险。作为非限制性实例，将氯硝柳
胺类似物和抗雄激素药物施用于个体之前和之后的测试样品中的一种或多种生物标志物
的水平与参考样品中的一种或多种生物标志物的水平进行比较，该参考样品或者是从该个
体获得的正常组织，或从不同个体或个体群体获得的正常组织。在一些情况下，生物标志物
是血清，并且在向个体施用氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物之前从该个体获得的测试样品
中的PSA水平高于参考样品中的PSA水平。在其他情况下，相对于给药前获得的测试样品中
的PSA水平，在给予氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物后从该个体获得的测试样品中的PSA水
平降低。或者，作为另一个非限制性实例，在给药后从个体获得的样品与参考样品之间的
PSA水平差异小于在给药前从该个体获得的样品与参考样品之间的PSA水平差异(即，给药
导致测试样品中PSA降低，使得测试样品中测量的水平与参考样品中测量的水平之间的差
异减小或消除)。
参考样品或值与测试样品之间的差异仅需要足以被检测出。在一些实施方案中，当与
阴性对照相比生物标志物水平至少例如高约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，确定测试样品中生物标志物(例如，PSA)的水平增加，并因此确定癌症的存在或癌症风险增加。在其他实施方案中，
当与阴性对照相比生物标志物水平至少例如低约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9
倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，确定测试样品中生物标志物的水平降低，并因此确定癌症的存在或癌症风险增加。
可以使用本领域已知的任何方法检测生物标志物水平，包括使用对生物标志物特异的
抗体。示例性方法包括但不限于PCR、蛋白质印迹法、斑点印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、
放射免疫测定(RIA)、免疫沉淀、免疫荧光、FACS分析、电化学发光和多重珠测定(multiplex
bead assay)(例如，使用Luminex或荧光微珠))。在某些情况下，使用核酸测序。
在某些实施方案中，在免疫测定或PCR反应(例如，定量PCR)中通过可检测的信号(例如
印迹、荧光、化学发光、颜色、放射性)指示一种或多种生物标志物的水平降低或增加的存
在。可以将该可检测信号与来自对照样品的信号或阈值进行比较。在一些实施方案中，检测
到降低的存在，并且当测试样品中生物标志物的可检测信号与参考样品中的抗体信号或预
定阈值相比至少例如低约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，指示癌症存在或癌症风险增加。在其他实
施方案中，检测到增加的存在，并且当测试样品中生物标志物的可检测信号与参考样品中
的抗体信号或预定阈值相比至少例如大约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、
11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，指示癌症存在或癌症风险增加。
在一些实施方案中，生物标志物水平测定的结果记录在有形媒介中。例如，可以例如在
纸上或电子媒体上(例如，录音带、计算机磁盘、CD，闪存驱动器等)记录诊断测定的结果(例
如，一种或多种生物标志物的存在或减少的存在或增加的存在的观察结果)以及是否存在
增加的癌症风险或存在癌症的诊断。
在其他实施方案中，所述方法还包括向患者(即个体)和/或治疗结果提供诊断的步骤。
D.抑制癌细胞的方法
在一些实施方案中，本发明提供了抑制细胞中雄激素受体(例如，全长雄激素受体、野
生型雄激素受体、雄激素受体变体、雄激素受体突变变体或雄激素受体剪接变体)的表达
和/或活性的方法，其中所述方法包括使细胞或雄激素受体与本文所述的氯硝柳胺类似物
和本文所述的抗雄激素药物的组合(例如，包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合物)
接触。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实施方案中，通式(I) 化合物选自：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
6 7 8
在一些实施方案中，R 和R独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
F、R8是Cl并且R9是H时，R7不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药是非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组合。
合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、Kalumid)、
氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺(Xtandi(安可
坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙(Zytiga)，酮康唑和
seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在某些实施方案中，所述变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在
一些情况下，变体是AR-V7剪接变体。在某些其他实施方案中，变体是突变变体，相对于SEQ
ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、
V716M的突变。在某些实施方案中，所述量是有效量或治疗有效量。在某些实施方案中，细胞
是癌细胞，例如去势抵抗性癌细胞，雄激素非依赖性癌细胞或抗雄激素耐药性(例如，恩杂
鲁胺-、阿帕鲁胺-、比卡鲁胺-或醋酸阿比特龙-耐药性)癌细胞，或其组合。癌细胞可以是前
列腺癌细胞、乳腺癌细胞或其他相关癌细胞。
在一些实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)生长的方
法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和
本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些其他实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)迁移的
方法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31
和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)浸润的方
法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和
本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些实施方案中，本发明提供了逆转癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄
激素药物(例如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)的耐药性的方法，
其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本
文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在某些
实施方案中，该量是有效量或治疗有效量。
在一些实施方案中，本发明提供了使癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、比卡鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合再敏化的方法，其中该方法
包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗
雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在某些实施方案中，
该量是有效量或治疗有效量。
在一些实施方案中，本发明提供了减少或降低癌细胞(例如前列腺癌细胞)对抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、比卡鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合的耐药性的方法，其中该方
法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的
抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在本文所述的一些实施方案中，减少、逆转或降低癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细
胞)对抗雄激素药物的耐药性或使该癌细胞对抗雄激素药物再敏化发生在患有癌症(例如，
前列腺癌或乳腺癌)的患者中，尽管包括雄激素非依赖性癌症在内的许多的其他易受影响
的癌症都适用于本发明的方法。
在一些实施方案中，本发明还提供了增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比
卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)在患有癌症(例如前列腺癌或乳腺癌)的患者中的治疗作
用的方法，其中所述方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30
和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺
接触或向患者施用本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的
抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺。
在其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素受体(AR)剪接变体的方法，其包括使AR剪
接变体与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在这些实施方案的一些实
施方案中，AR剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12。在一些情况下，AR剪接变
体是AR-V7。
在其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素受体(AR)突变变体的方法，其包括使AR突
变变体与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在一些实施方案中，相对于
SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，AR突变变体在选自K581、L7602、T878、V716及其组合的
位置处包含一个或多个突变。在一些情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，AR
突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在某些其他实施方案中，本发明提供抑制AR反式激活、抑制AR表达(例如，mRNA表达和/
或蛋白质表达)、抑制AR介导的转录活性、抑制AR介导的细胞迁移、抑制AR介导的癌细胞的
细胞浸润、抑制癌细胞集落形成以及抑制AR变体对前列腺特异性抗原(PSA)启动子的募集
的方法。在某些情况下，这种抑制方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合
物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/
或比卡鲁胺接触。
本发明还提供了抑制AR全长、AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12表达(例如，mRNA
和/或蛋白质表达)的方法，其中该方法包括使AR或癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如
化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁
胺和/或比卡鲁胺接触。
本发明还提供了抑制AR全长、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-介导的转
录活性的方法，其中该方法包括使AR或癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、
11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡
鲁胺接触。
在某些其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素非依赖性或抗雄激素药物耐药性CRPC
细胞生长、迁移或浸润的方法，其中该方法包括使前列腺癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类
似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、
阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在一些实施方案中，前列腺癌细胞是CRPC细胞。
E.给药
在本发明的一些实施方案中，将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合施用于患有癌
症的患者。癌症可以是任何易感的癌症。在一些情况下，癌症是雄激素非依赖性癌症、前列
腺癌或乳腺癌。在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物具有通式(I)：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
2 3 5
CX3或NO2。在其他情况下，R 是H或X。在一些其他情况下，R 是X。在其他情况下，R是C2烷基或
C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
3 4 1 4
Cl)，R是X(例如Cl)并且R是H。在一些实施方案中，R是NO2并且R是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
4
是X(例如Cl)并且R是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3
1 2 3 4
不是Cl。在一些实施方案中，当R是NO2、R是Cl并且R是Cl时，R不是H。
在特定实施 方案中 ，氯硝柳胺类 似物选自
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物是非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组
合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、
Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺
(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在本文所述的治疗前列腺癌的某些方法中，所述方法包括首先向患有癌症的患者施用
氯硝柳胺类似物，然后向该患者施用抗雄激素药物。在本文所述的治疗癌症的某些方法中，
所述方法包括首先向患有癌症的患者施用抗雄激素药物，然后向该患者施用氯硝柳胺类似
物。
在一些实施方案中，本发明提供了向患有癌症的患者递送有效量或治疗有效量的氯硝
柳胺类似物和抗雄激素药物的方法。
本发明的氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物制剂可用于制备药物组合物或药物。药物组
合物或药物可以施用于有需要的个体，例如，患有癌症或处于患有癌症风险的患者。
在任何上述实施方案中，癌症选自去势抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症、晚期癌
症、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症、例如抗雄激素耐药性前列腺癌(例如，恩杂鲁胺耐药
性癌症、阿比特龙耐药性癌症、比卡鲁胺耐药性癌症、醋酸阿比特龙耐药性癌症等)、AR-
V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的抗雄激素耐药性癌症、如AR-V1-、AR-V3-、
AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的恩杂鲁胺-、阿帕鲁胺-、比卡鲁胺-、或醋酸阿比特龙-
耐药性癌症及其组合。
用于本发明的药物组合物或药物可通过标准技术使用一种或多种生理学上可接受的
载体或赋形剂配制。合适的药物载体在本文和E.W.Martin的"Remington's
Pharmaceutical Sciences"中有所描述。本发明的化合物和药剂及其生理学上可接受的盐
和溶剂化物可以被配制用于通过任何合适的途径进行给药，包括通过吸入、局部、经鼻、口
服、静脉内、肠胃外、直肠或肿瘤内给药。
1.给药途径
用于局部给药的典型制剂包括乳膏剂、软膏剂、喷雾剂、洗剂和贴剂。然而，药物组合物
可以被配制用于任何类型的给药，例如皮内、皮下、静脉内、肌内、鼻内、脑内、气管内、动脉
内、腹膜内、膀胱内、胸膜内、冠状动脉内或肿瘤内注射，使用注射器或其他装置。还考虑用
于通过吸入(例如气溶胶)给药或用于口服给药或直肠给药的制剂。
用于透皮应用的合适制剂包括有效量的一种或多种本文所述的化合物，任选地含有载
体。优选的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂以帮助通过宿主的皮肤。例如，透皮装
置是绷带的形式，其包括背衬构件、含有化合物和任选的载体的储库、任选的速率控制屏障
以将化合物在很长的一段时间内以受控的预定的速率递送至宿主的皮肤、以及将该装置固
定在皮肤上的手段。也可使用基质透皮制剂。
对于口服给药，药物组合物或药物可以采取例如片剂或胶囊的形式，其通过常规方法
用药学上可接受的载体或赋形剂制备。本发明提供了片剂和明胶胶囊，其包含氯硝柳胺类
似物和抗雄激素药物或这些药物的干燥固体粉末，以及(a)稀释剂或填充剂，例如乳糖、右
旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素(例如，乙基纤维素、微晶纤维素)、甘氨酸、果胶、聚丙烯酸酯和/或磷酸氢钙、硫酸钙，(b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、镁盐或钙盐、金属
硬脂酸盐、胶体二氧化硅、氢化植物油、玉米淀粉、苯甲酸钠、乙酸钠和/或聚乙二醇；对于片
剂，还包含(c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或羟丙基甲基纤维素；如果需要，(d)崩解剂，例如淀粉(例如马铃薯淀
粉或淀粉钠)、乙醇酸盐/酯、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；(e)润湿剂，例如十二烷
基硫酸钠；和/或(f)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。用于口服给药的液体制剂
可以采取例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或者它们可以作为在使用前用水或其它合适的
介质构建的干燥品存在。这些液体制剂可以通过常规方法用药学上可接受的添加剂制备，
所述添加剂例如为助悬剂，例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪；乳化剂，例
如卵磷脂或阿拉伯胶；非水性载体，例如杏仁油、油性酯、乙醇或分级植物油；和防腐剂，例
如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸。制剂还可以适当地含有缓冲盐、矫味
剂、着色剂和/或甜味剂。如果需要，可以适当配制用于口服给药的制剂以控制释放活性化
合物。
本文所述的组合物和制剂可以被配制用于通过注射、例如通过推注或连续输注进行肠
胃外给药。用于注射的制剂可以以单位剂型存在，例如，在安瓿中或在多剂量容器中，含有
添加的防腐剂。可注射组合物优选是等渗水溶液或悬浮液，栓剂优选由脂肪乳剂或悬浮液
制备。组合物可以是灭菌的和/或含有辅料，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促
进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。或者，活性成分可以是粉末形式，其在使用前用合
适的载体(例如无菌无热原水)构建。此外，它们还可含有其他有治疗价值的物质。该组合物
分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备。
对于通过吸入给药，本发明的组合物可以以来自加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾呈现
形式方便地递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧
化碳或其他合适的气体。在加压的气溶胶的情况下，可以通过提供阀门来递送计量的量来
确定剂量单位。可以配制用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒，其含有化合物和
合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
本文所述的组合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，其例如含有常
规栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。
此外，活性成分可以被配制成储库制剂。这种长效制剂可以通过植入(例如，皮下或肌
肉内)或通过肌内注射来给药。因此，例如，本文所述的一种或多种化合物可以用合适的聚
合物材料或疏水材料(例如作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂来配制，或配制成微溶
衍生物，例如，作为微溶盐。
在具体的实施方案中，本发明的药物组合物或药物可包含(i)有效量的氯硝柳胺类似
物，和(ii)抗雄激素药物。治疗剂可以依序使用或同时使用。给药可以通过相同或不同的给
药途径或在同一药物制剂中一起给药。
2.剂量
药物组合物或药物可以以治疗有效剂量施用于个体，以预防、治疗、重新敏化或控制如
本文所述的癌症。将药物组合物或药物以足以在个体中引起有效治疗反应的量施用于个
体。
在一些实施方案中，施用的活性剂的剂量取决于个体的体重、年龄、个人条件、待治疗
的区域的表面积或体积以及给药形式。剂量的大小还可以通过在具体个体中伴随具体制剂
给药的任何副作用的存在、性质和程度来确定。用于向约50kg至约70kg的哺乳动物口服给
药的单位剂量可含有约5mg至约500mg、约25mg至约200mg、约100mg至约1000mg、约200mg至
约2000mg、约500mg至约5000mg或约1000mg至约2000mg的一种或多种活性成分。用于向约
50kg至约70kg的哺乳动物口服给药的单位剂量可含有约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、
35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、
120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、
240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、
600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1,000mg、1,050mg、1,100mg、1,
150mg、1,200mg、1,250mg、1,300mg、1,350mg、1,400mg、1,450mg、1,500mg、1,550mg、1,
600mg、1,650mg、1,700mg、1,750mg、1,800mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,950mg、2,
000mg、2,050mg、2,100mg、2,150mg、2,200mg、2,250mg、2,300mg、2,350mg、2,400mg、2,
450mg、2,500mg、2,550mg、2,600mg、2,650mg、2,700mg、2,750mg、2,800mg、2,850mg、2,
900mg、2,950mg、3,000mg、4,000mg、4,500mg、5,000、5,500mg、6,000mg、6,500mg、7,000mg、
7,500mg、8,000mg、8,500mg、9,000mg、9,500mg、10,000mg或更多的一种或多种活性成分(例
如氯硝柳胺类似物、抗雄激素药物或其他活性成分)。通常，本发明的活性化合物的剂量是
足以达到所需效果的剂量。可以根据个体体内活性剂积累的测量值来计算最佳给药方案。
通常，剂量可以每天、每周或每月给予一次或多次。本领域普通技术人员可以容易地确定最
佳剂量、给药方法学和重复频率。
在一些实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)氯硝柳胺类似物。
在其他实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)抗雄激素药物。
在其他实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合。
单位剂量可含有约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、
60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、
160mg、170mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、
270mg、280mg、290mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、
750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1,000mg、1,050mg、1,100mg、1,150mg、1,200mg、1,
250mg、1,300mg、1,350mg、1,400mg、1,450mg、1,500mg、1,550mg、1,600mg、1,650mg、1,
700mg、1,750mg、1,800mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,950mg、2,000mg、2,050mg、2,
100mg、2,150mg、2,200mg、2,250mg、2,300mg、2,350mg、2,400mg、2,450mg、2,500mg、2,
550mg、2,600mg、2,650mg、2,700mg、2,750mg、2,800mg、2,850mg、2,900mg、2,950mg、3,
000mg、4,000mg、4,500mg、5,000、5,500mg、6,000mg、6,500mg、7,000mg、7,500mg、8,000mg、
8,500mg、9,000mg、9,500mg、10,000mg或更多的一种或多种活性成分。
在某些情况下，单位剂量含有至少约1mg至约2,000mg(例如，约1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、
6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、
30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、
110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、225mg、250mg、
275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、
575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、
875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1,000mg、1,025mg、1,050mg、1,075mg、1,100mg、1,
125mg、1,150mg、1,175mg、1,200mg、1,225mg、1,250mg、1,275mg、1,300mg、1,325mg、1,
350mg、1,375mg、1,400mg、1,425mg、1,450mg、1,475mg、1,500mg、1,525mg、1,550mg、1,
575mg、1,600mg、1,625mg、1,650mg、1,675mg、1,700mg、1,725mg、1,750mg、1,775mg、1,
800mg、1,825mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,925mg、1,950mg、1,975mg或2,000mg或更多)
氯硝柳胺类似物。多剂量可以每天一次或多于一次给予(例如，每天1、2、3、4、5、6、7、8、9或
10次给药)，或每周一次或多于一次给予(例如，每周1、2、3、4、5、6或7次)，每天给予一次或
多次剂量。
在某些情况下，单位剂量含有至少约1mg至约2,000mg(例如，约1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、
6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、
30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、
110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、225mg、250mg、
275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、
575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、
875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1,000mg、1,025mg、1,050mg、1,075mg、1,100mg、1,
125mg、1,150mg、1,175mg、1,200mg、1,225mg、1,250mg、1,275mg、1,300mg、1,325mg、1,
350mg、1,375mg、1,400mg、1,425mg、1,450mg、1,475mg、1,500mg、1,525mg、1,550mg、1,
575mg、1,600mg、1,625mg、1,650mg、1,675mg、1,700mg、1,725mg、1,750mg、1,775mg、1,
800mg、1,825mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,925mg、1,950mg、1,975mg或2,000mg或更多)
抗雄激素药物。多剂量可以每天一次或多于一次给予(例如，每天1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次给药)，或每周一次或多于一次给予(例如，每周1、2、3、4、5、6或7次)，每天给予一次或多
次剂量。
从例如动物研究(例如啮齿动物和猴子)中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范
围。本发明化合物的剂量优选在包括ED50的循环浓度范围内，毒性很小或没有毒性。剂量可
在此范围内变化，这取决于所用的剂型和给药途径。对于用于本发明方法的任何组合物，最
初可以从细胞培养测定中估计治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量以达到循环血浆
浓度范围，其包括在细胞培养中测定的IC50(测试化合物实现症状的半数最大抑制时的浓
度)。这些信息可用于更准确地确定人体中的有用剂量。例如，可以通过高效液相色谱法
(HPLC)测量血浆中的水平。
还应理解，组合物的适当剂量取决于组合物相对于要实现的所需效果的效力。当将一
种或多种这些组合物施用于哺乳动物时，医师、兽医或研究人员可以例如首先开出相对低
的剂量，随后增加剂量直至获得适当的反应。此外，应理解，任何特定哺乳动物个体的具体
剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定组合物的活性、个体的年龄、体重、一般健康状
况、性别和饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、任何药物组合以及待调节的表达或活性的
程度。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物同时给药。在其他实施方案中，氯
硝柳胺类似物和抗雄激素药物不是同时给药，但是每天给药相同的次数、或每周给药相同
的次数、或每月给药一些次数(例如，两者都是每天给药一次、每天给药两次、每周给药一
次、每周给药两次，等等)。在一些其他实施方案中，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物在不同
的给药方案中给出。作为非限制性实例，氯硝柳胺类似物每天给药一次，并且抗雄激素药物
每天给药两次，或反之亦然。作为另一个非限制性实例，氯硝柳胺类似物每天给药一次，并
且抗雄激素药物每2、3、4、5、6天或更多天给药一次，或反之亦然。技术人员还将理解，某些
因素可能影响有效治疗个体所需的剂量和时间设置，包括但不限于疾病或恶性病况的严重
程度、先前的治疗、个体的一般健康状况和/或年龄和存在的其他疾病。此外，用治疗有效量
的组合物治疗个体可包括单次治疗，或者优选地，可包括一系列治疗。
本发明组合物的最佳剂量、毒性和治疗功效可以根据所施用的组合物的相对效力而变
化，并且可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来测定，例如通过测定LD50(对
50％的群体致死的剂量)和ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的
剂量比是治疗指数，并且可以表示为LD50/ED50的比率。表现出大治疗指数的药剂是优选的。
虽然可以使用表现出毒副作用的药剂，但应注意设计将这些药剂靶向受影响的组织部位的
递送系统，以最小化对正常细胞的潜在损害，从而减少副作用。
可以根据个体体内活性成分积累的测量值来计算最佳给药方案。通常，剂量为约1ng/
kg体重至约1,000mg/kg体重，并且可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次。本领域普
通技术人员可以容易地确定最佳剂量、给药方法学和重复频率。本领域技术人员将能够根
据本领域已知的已建立的方案和本文的公开内容来确定将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药
物的组合施用于人的最佳剂量。
在本发明的一些实施方案中，以治疗有效剂量向患者施用药物组合物或药物以预防、
治疗或控制癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症)。将药物组合
物或药物以足以在患者中引起有效的治疗或诊断反应的量施用于患者。有效的治疗或诊断
反应是至少部分地阻止或减缓癌症的症状或并发症的反应。足以实现此目的的量被定义为
“治疗有效剂量”。
在成功治疗后，可能需要使个体进行维持治疗以预防癌症的复发(例如，前列腺癌、乳
腺癌、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症)。
有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文提供的详细公开
内容。通常，通过首先施用低剂量或少量组合物，然后逐渐增加所施用的量或剂量，直至在
治疗的个体中观察到所需的效果(具有最小毒副作用或没有毒副作用)来确定组合物的药
效量或有效量。
根据患者所需的和耐受的剂量和频率施用组合物的单次或多次给药。无论如何，应提
供足够量的本发明组合物以有效治疗患者。通常，剂量足以预防、治疗或改善疾病的症状或
体征，而不会对患者产生不可接受的毒性。
F.试剂盒
另一方面，本发明提供了用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒。该试剂盒可用于治疗
任何癌症，其一些非限制性实例包括前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、
胰腺癌、肺癌(例如、间皮瘤、肺腺癌)、食道癌、头颈癌、肉瘤、黑素瘤、甲状腺癌、CNS癌症(例如神经母细胞瘤、成胶质细胞瘤)、慢性淋巴细胞白血病和本文所述的任何其他癌症。该试
剂盒还适用于治疗雄激素非依赖性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性、耐药性和转移
性去势抵抗性癌症。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物。在一些其他实
施方案中，试剂盒还包含药学上可接受的载体。在特定实施方案中，氯硝柳胺类似物是根据
通式(I)的化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取
1
代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R 是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
3 4 1 4
Cl)，R是X(例如Cl)并且R是H。在一些实施方案中，R是NO2并且R是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是根据通式(II)的化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物是非甾体类雄激素受体(AR)拮抗剂、CYP17A1抑制剂
或它们的组合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、
Calutide、Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩
杂鲁胺(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的试剂盒中。
可以在试剂盒中提供用于实施本发明的各种方法的材料和试剂以便于实施所述方法。
如本文所用，术语“试剂盒”包括促进过程、测定、分析或操作的制品的组合。特别地，本发明
的试剂盒可在广泛的应用中具有实用性，包括例如诊断、预后、治疗等。
试剂盒可包含化学试剂以及其他组分。此外，本发明的试剂盒可包括但不限于试剂盒
使用者的说明书、用于样品采集和/或纯化的装置和试剂、用于产物收集和/或纯化的装置
和试剂、用于施用氯硝柳胺类似物和/或抗雄激素药物的装置和试剂、用于测定生物标志物
水平的装置和试剂、样品管、支撑物、托盘、支架、盘子、板、溶液、缓冲液或其他化学试剂，用于标准化、归一化和/或对照样品的合适的样品。也可以将本发明的试剂盒包装以便于储存
和安全运输，例如，包装在具有盖子的盒子中。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于检测生物标志物的阴性和阳性对照样品。
合适的生物标志物的非限制性实例包括前列腺特异性抗原(PSA)、α-甲基酰基-CoA消旋酶
(AMACR)、内皮糖蛋白(CD105)、Engrailed-2(EN-2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、小窝蛋
白-1、白细胞介素-6(IL-6)、CD147、S100蛋白家族的成员(例如，S100A2、S100A4、S100A8、
S100A9、S100A11)、膜联蛋白A3(ANXA3)、人激肽释放酶-2(KLK2)、TGF-β1、β-微精原蛋白
(MSMB)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)、HER2、Ki67、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E。
在一些情况下，一种或多种生物标志物包含PSA。在一些实施方案中，阴性对照样品获自未
患癌症的个体或个体群。在其他实施方案中，阳性对照样品获自患有癌症的个体或个体群。
在一些实施方案中，试剂盒包含用于制备样品中的一种或多种生物标志物的滴定曲线的样
品，以帮助评估测试生物样品中的一种或多种生物标志物的定量水平。
实施例
将通过具体实施例更详细地描述本发明。提供以下实施例仅用于示例性说明目的，并
不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易认识到可以改变或修改各种非关键
参数以产生基本相同的结果。
实施例1.雄激素受体变体的小分子抑制剂
该实施例描述了几种作为小分子雄激素受体(AR)调节剂起作用的氯硝柳胺类似物的
鉴定。所述化合物在体外和体内显著抑制AR-V7表达并抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤
生长并诱导耐药性前列腺癌细胞的凋亡。此外，一些化合物阻断了突变的AR的活性，所述突
变的AR包括K581R、L702H、T878A和V716M变体，这些变体赋予了对抗雄激素疗法如恩杂鲁胺
的耐药性。此外，一些化合物能够与恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺协同作用并改善它们的
治疗活性。
引言
前列腺癌是与癌症相关的死亡的第二大主要原因，也是男性中最常诊断的癌症，仅在
美国每年估计有220,800例新增病例(1,2)。前列腺癌的一线治疗旨在通过使用雄激素阻断
疗法(ADT)来降低循环雄激素水平。这是通过两种方法之一实现的：外科双侧睾丸切除术，
其抑制睾丸的雄激素合成，或使用去势诱导药物来降低雄激素水平和雄激素受体(AR)激
活。虽然ADT最初有效减少前列腺癌生长，但经过两到三年的治疗后，大多数患者会发展为
去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，即使存在去势水平的雄激素，肿瘤生长也会继续进行。在疾病
进展的这个阶段，治疗选择的数量目前是有限的，但是大量研究的焦点是改善患者的结果
(3)。
临床上，CRPC被定义为在存在去势水平的循环睾酮的情况下前列腺癌的进展(4,5)。通
常，AR过度表达、过度活化或两者都导致下游靶基因的转录，尽管患者具有可忽略的雄激素
水平，但该靶基因最终促进肿瘤进展。从激素敏感的前列腺癌导致CRPC发展的机制被广泛
研究。鉴定的机制包括AR扩增和突变、AR共激活因子和共抑制因子修饰、异常激活和/或翻
译后修饰、AR剪接变体和改变的类固醇生成，其中每一种都导致AR激活和信号传导的增加。
这可能是由于增加的雄激素量、增强的对现有雄激素的反应以及通过非经典配体或根本不
通过配体的AR的激活，以及其他方法(6-10)。
目前通过施用紫杉烷(例如多西紫杉醇和卡巴他赛)或通过用下一代抗雄激素疗法(包
括恩杂鲁胺和阿比特龙)来实现CRPC的治疗，紫杉烷通过破坏微管功能来中断快速分裂细
胞的生长。抗雄激素的主要机制是通过拮抗受体直接抑制AR激活，或通过阻断雄激素合成
间接抑制AR激活。不幸的是，据估计三分之一给予阿比特龙的患者和四分之一给予恩杂鲁
胺的患者对使用这些药物的初始治疗没有反应(11,12)。此外，在开始治疗的12-24个月内，
即使最初对所述药物有反应的人也经常产生耐药性。
鉴于几种潜在的耐药途径，对抗雄激素药物如恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性的发展实
际上是不可避免的(13,14)。最近的研究已将AR可变剪接、特别是剪接变体AR-V7与恩杂鲁
胺/阿比特龙耐药性的发展联系起来(15-18)。AR剪接变体可以通过基因组重排和涉及剪接
因子如hnRNPAs的可变剪接来形成(19,20)。最常见的是，AR变体缺乏C-末端配体结合结构
域，这些截短版的AR通常是配体非依赖性的，并导致组成型激活和不受控制的下游AR信号
传导(21-25)。这些AR变体的表达与对阿比特龙和恩杂鲁胺的耐药性强烈相关，尽管没有充
分的研究，但也与多西紫杉醇耐药性相关。在变体中，AR-V7似乎特别重要。已经显示，与不
表达AR-V7的男性相比，用恩杂鲁胺或阿比特龙治疗的患者中的AR-V7表达与显著更低的
PSA反应、更短的无进展时间和更低的总体存活相关(26)。靶向AR信号传导，尤其是靶向AR
变体，将改善目前的针对晚期前列腺癌的抗雄激素疗法。
小分子调节剂的合成：氯硝柳胺类似物
以前已经确定氯硝柳胺(由FDA批准用于治疗绦虫感染的驱虫剂)抑制AR变体如AR-V7
表达并克服对恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性(27)。在这项工作中，合成了几种氯硝柳胺的
类似物以鉴定用于治疗晚期前列腺癌的更有效的AR变体抑制剂。
化合物7和30的合成显示于图1A中。使用一步反应合成两种化合物。对于化合物7的合
成，使用2M三氯化磷的二氯甲烷溶液，将市售的5-氯水杨酸与2-氯-4-三氟甲基苯胺偶联。
使用二甲苯作为反应溶剂，将反应混合物回流5小时(或直至反应物消失)。转移热溶液并使
其降至室温，使产物从溶液中沉淀出。然后将沉淀物重新溶解在乙酸乙酯中并重结晶，得到
纯的化合物7。
对于化合物30的合成，将氯硝柳胺溶解在无水CH3CN中。在-10℃下加入DIPEA(N,N-二
异丙基乙胺)和DMAP(4-二甲基氨基吡啶)。搅拌30分钟后，加入丙酰氯，将反应混合物在0℃
下搅拌2小时。然后将水加入反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物。然后合并有机相，依次
用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后减压蒸发，得到淡黄色固体。用柱色谱法纯化化合物，
得到化合物30。用与化合物7相同的程序合成化合物5和11，以与化合物30类似的方式得到
化合物31。新合成的化合物的化学结构显示于图1B和1C中。
小分子调节剂作为AR变体的有效抑制剂的鉴定
测定了合成的小分子调节剂对AR和AR变体表达的作用。用不同化合物处理CWR22Rv1前
列腺癌细胞。关于AR和AR变体表达，分析蛋白质裂解物。图2A显示化合物5、7、11、30和31抑
制AR和AR-V7表达。相反，化合物1、2、8、17、29、34和35对AR和AR变体的表达水平没有作用。
进一步的研究表明化合物7、30和31以剂量依赖性方式抑制AR和AR-V7表达(图2B)。
小分子调节剂抑制AR-V7介导的转录活性
为了确定这些化合物对AR-V7转录活性的作用，在用氯硝柳胺类似物处理的过量表达
AR-V7的C4-2前列腺癌细胞(C4-2-V7)中测量PSA蛋白质表达水平。如图3所示，化合物7、30
和31抑制PSA表达，化合物31显示出最强的作用。此外，化合物7、30和31还增强了恩杂鲁胺
介导的PSA抑制(图3)。此外，使用PSA-luc作为报道分子确定对AR转录活性的作用。将LNCaP
细胞与或不与AR-V7一起用PSA-luc共转染，并用化合物处理。如图4所示，在不存在AR-V7的
情况下，恩杂鲁胺和各种氯硝柳胺类似物抑制雄激素(DHT)诱导的PSA-luc活性。然而，仅化
合物7、30和31而非恩杂鲁胺抑制AR-V7介导的PSA-luc活性。这些数据显示化合物7、30和31
但不是恩杂鲁胺抑制AR-V7介导的转录活性。
小分子调节剂阻断突变的AR转录活性
AR中的突变的出现已经显示出驱动对抗雄激素疗法的耐药性。在HEK293细胞中在反式
激活测定中研究了抗雄激素和氯硝柳胺类似物对突变的AR的作用，该HEK293细胞用编码相
应的突变的AR和雄激素响应性荧光素酶报告基因构建体的表达载体瞬时转染。比卡鲁胺
(Bica)、恩杂鲁胺(Enza)、ARN509(ARN)、氯硝柳胺(Nic)和化合物7和31阻断野生型AR反式
激活。T878A、K581R、L702H和V716M AR突变将比卡鲁胺从拮抗剂转换为激动剂，而恩杂鲁胺
和ARN509对阻断这些突变的AR的转录活性没有作用。然而，氯硝柳胺和化合物7和31显著阻
断了所有测试的突变的AR和AR-V7的反式激活(图5)。
氯硝柳胺类似物在体外抑制前列腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡
为了检查这些所鉴定的小分子调节剂对耐药性前列腺癌细胞生长的作用，用阿比特
龙、恩杂鲁胺、ARN509或增加剂量的氯硝柳胺、化合物7或化合物31处理CWR22Rv1和C4-2B
MDVR细胞48小时，之后计算细胞数。如图6所示，阿比特龙(AA)、恩杂鲁胺(Enza)和ARN509
(ARN)不抑制任一细胞系中的细胞生长。然而，氯硝柳胺(NIC)和化合物7和31能够以剂量依
赖性方式抑制细胞生长。下图显示了阿比特龙、恩杂鲁胺、ARN509、氯硝柳胺和化合物7和31
的时间依赖性生长作用。
为进一步检查这些化合物是否影响前列腺癌细胞生长，CWR22Rv1、C4-2B MDVR、C4-2B
AbiR和C4-2-V7细胞用DMSO或0.5μM氯硝柳胺或其中一种氯硝柳胺类似物处理48小时，随后
测定细胞数。如图7所示，0.5μM氯硝柳胺和氯硝柳胺类似物显著抑制前列腺癌细胞的细胞
生长。此外，恩杂鲁胺(MDV)与氯硝柳胺或类似物化合物7、30和31的组合进一步抑制细胞增
殖。为了进一步检查这些化合物的抗癌作用，进行了ELISA细胞死亡测定。如图8所示，氯硝
柳胺显著诱导前列腺癌细胞的细胞凋亡，化合物7、30和31进一步增强了细胞凋亡的诱导。
恩杂鲁胺(MDV)与这些化合物的组合进一步增加了凋亡细胞死亡。总之，这些结果显示化合
物7、30和31抑制前列腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡，并进一步增强恩杂鲁胺在耐药性前列
腺癌细胞中的活性。
鉴定与抗雄激素药物协同作用的氯硝柳胺类似物
由于AR-V7严重参与了驱动对抗雄激素如恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性，因此假设具
有抑制AR-V7能力的化合物将与抗雄激素协同作用并改善其在耐药性前列腺癌中的治疗活
性。为了验证这一假设，测定了氯硝柳胺类似物与抗雄激素如恩杂鲁胺和阿比特龙组合时
对细胞生长的作用。将化合物30和31(二者均抑制AR-V7表达)与化合物1和34(二者均未抑
制AR-V7表达)比较它们对耐药性前列腺癌细胞生长的作用。如图9所示，CWR22Rv1细胞对恩
杂鲁胺和阿比特龙都有耐药性。单独的化合物1和单独的化合物34都不能抑制CWR22Rv1细
胞的细胞生长，这些化合物与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合也不能抑制CWR22Rv1细胞的生
长。相反，化合物30或31与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合显著抑制CWR22Rv1细胞的生长(图
9)。用恩杂鲁胺在耐药性C4-2BMDVR细胞中观察到类似的结果，其中化合物30和化合物31而
不是化合物1和化合物34能够与恩杂鲁胺或阿比特龙协同作用(图10)。这些结果表明化合
物30和31可以特异性地用于与抗雄激素药物(例如恩杂鲁胺、阿比特龙)组合以克服对抗雄
激素疗法的耐药性。还在恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性CWR22Rv1细胞中，与恩杂鲁胺或阿比特
酮组合测试了化合物7和11(两者都抑制AR-V7表达)vs化合物2和17(二者均未抑制AR-V7表
达)。如图11所示，单独的化合物2和单独的化合物17都不能抑制CWR22Rv1细胞的生长，这些
化合物中的任何一个与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合也不能抑制CWR22Rv1细胞的生长。相
反，化合物7或11与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合能够显著抑制CWR22Rv1细胞的生长。总的来
说，证明了具有抑制AR-V7表达能力的化合物(例如，化合物7、11、30和31)可以与恩杂鲁胺
或阿比特龙协同作用，而不能抑制AR-V7表达的化合物(例如，化合物1、2、17和34)不能与恩
杂鲁胺或阿比特龙协同作用。
接下来确定能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协同作用的选择性化合物是否也可以与比卡
鲁胺协同作用。单独的化合物1、7、30、31或34都不能抑制CWR22Rv1细胞生长(图12)。化合物
1和34与比卡鲁胺的组合不能抑制细胞生长。然而，化合物7、30或31与比卡鲁胺的组合能够
显著抑制CWR22Rv1细胞的生长(图12)。这些结果表明，选择性化合物可与比卡鲁胺联合用
于治疗晚期耐药性前列腺癌细胞。
氯硝柳胺类似物体内抑制前列腺癌肿瘤生长
为了确定氯硝柳胺类似物是否能够在体内抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤细胞生
长，用化合物7处理CWR22Rv1肿瘤异种移植物。如图13A-13C所示，化合物7显著抑制肿瘤生
长而不抑制体重。分离蛋白质裂解物并通过蛋白质印迹分析AR和AR-V7表达。如图13D所示，
与对照相比，用化合物7处理显著抑制AR和AR-V7蛋白质表达。这些结果表明化合物7通过抑
制AR和AR-V7表达来抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤生长。
小结
这些实验鉴定了几种氯硝柳胺类似物，其作为AR和AR-V7的小分子调节剂起作用并且
抑制耐药性前列腺癌肿瘤生长和诱导细胞凋亡。此外，化合物30和31被鉴定为能够与恩杂
鲁胺、阿比特龙和比卡鲁胺协同作用并改善它们对晚期前列腺癌的治疗活性。
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实施例2.氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物对全长雄激素受体和雄激素受体变体的抑
制
该实施例描述了所进行的一系列实验以进一步表征氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物
抑制全长雄激素受体(AR-FL)和各种雄激素受体(AR)变体(ARV)的表达和活性的能力。
小分子调节剂抑制全长雄激素受体(AR-FL)介导的和雄激素受体变体(ARV)介导的转
录活性
使用PSA-luc作为报道分子，评价氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物对AR-FL和几种ARV
(即AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12)的转录活性的作用。在有或没有AR-V1、AR-V3、AR-
V7、AR-V9或AR-V12的情况下，将C4-2B细胞与pcDNA共转染，以及在FBS条件下与PSA-E/P-荧
光素酶质粒共转染。在用DMSO、10μM阿比特龙(Abi)、20μM恩杂鲁胺(Enza)、20μM阿帕鲁胺
(ARN)、1μM氯硝柳胺(Nic)、1μM化合物7或1μM化合物31过夜处理后，检查PSA荧光素酶活性。
如图14所示，氯硝柳胺、化合物7和化合物31抑制ARV-介导的PSA-luc活性。特别地，这
些数据显示氯硝柳胺及其类似物抑制AR-FL-介导的和ARV-介导的转录活性二者。
小分子调节剂降低AR-V7蛋白质表达
为了确定小分子调节剂是否通过蛋白质降解来影响AR-V7蛋白质表达，用放线菌酮
(CHX)处理CWR22Rv1和C4-2B MDVR细胞，并测量AR-V7蛋白质的半衰期。
如图15A中所示的数据，在用或不用氯硝柳胺(Nic)、化合物7或化合物31的情况下，用
50μg/mL放线菌酮(CHX)处理CWR22Rv1细胞。在0、2、4和8小时后，收集全细胞裂解物并进行
蛋白质印迹法。然后计算AR-V7的半衰期。
如图15B中所示的数据，在用或不用蛋白酶体抑制剂MG132的情况下，用氯硝柳胺、化合
物7或化合物31处理CWR22Rv1细胞。随后，收集全细胞裂解物并进行蛋白质印迹法。
如图15C所示的数据，用Nic、化合物7或化合物31处理CWR22Rv1细胞。随后，用AR抗体免
疫沉淀全细胞裂解物，并用泛素和AR抗体进行印迹。
如图16A中所示的数据，在用或不用含氯硝柳胺、化合物7或化合物31的情况下，用50μ
g/mL放线菌酮处理C4-2B MDVR细胞。在0、2、4和8小时后，收集全细胞裂解物并进行蛋白质
印迹法。然后计算AR-V7的半衰期。
如图16B中所示的数据，在用或不用MG132的情况下，用氯硝柳胺、化合物7或化合物31
处理C4-2B MDVR细胞。随后收集全细胞裂解物并进行蛋白质印迹法。
如图16C中所示的数据，用氯硝柳胺、化合物7或化合物31处理C4-2B MDVR细胞。用AR抗
体免疫沉淀全细胞裂解物并用泛素和AR抗体进行印迹。
如图15和图16所示，氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31通过蛋白酶体-泛素化系
统降解AR变体。
小分子调节剂在耐药性前列腺癌中增强阿比特龙和阿帕鲁胺(ARN509)治疗
为了确定氯硝柳胺及其类似物是否增强阿比特龙和阿帕鲁胺治疗，在存在或不存在化
合物7的情况下，用阿比特龙或阿帕鲁胺的组合处理CWR22Rv1细胞。如图17A中所示的数据，
用DMSO、20μM阿帕鲁胺(ARN)、0.5μM化合物7或阿帕鲁胺和化合物7的组合处理CWR22Rv1细
胞。在第3天、第5天测定细胞生长。如图17B中所示的数据，用DMSO、5μM阿比特龙(ABI)、0.5μM化合物7或阿比特龙和化合物7的组合处理CWR22Rv1细胞。在第3天、第5天测定细胞生长。
如图17所示，化合物7显著增强阿比特龙和阿帕鲁胺治疗。
小分子调节剂在大鼠中口服给药后表现出比氯硝柳胺好的生物利用度
为了比较化合物7和化合物31与氯硝柳胺的生物利用度，以200mg/kg的剂量向体重为
约300克至约350克的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠口服施用(p.o.)氯硝柳胺、化合物7或
化合物31。在图18中所示的时间点(0分钟、15分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时)获得血液样品，并分离血浆用于LC-MS分析。如图18所示，与氯硝柳胺
的Cmax为1556nM相比，化合物7和化合物31的Cmax值分别达到9038nM和2685nM。化合物7、化合
物31和氯硝柳胺的药代动力学(PK)分析结果显示于表1中。这些数据表明化合物7和化合物
31显示出比氯硝柳胺更好的生物利用度。
表1.在大鼠血浆中小分子AR抑制剂的非房室PK分析
小分子调节剂通过口服给药体内抑制前列腺癌肿瘤生长
为了确定氯硝柳胺及其类似化合物7通过口服给药是否抑制肿瘤生长，用氯硝柳胺或
化合物7口服处理携带有前列腺癌患者来源的异种移植物(PDX)模型(LuCaP 35CR)肿瘤的
小鼠。
对于图19A中所示的数据，在雄性的去势SCID小鼠中建立LuCaP 35CR PDX模型。当肿瘤
体积达到约50-100mm3时，将小鼠随机分成三组，并口服施用对照(0.5％重量/体积(w/v)
Methocel(美多秀)A4M)、氯硝柳胺(Nic；150mg/kg)或化合物7(150mg/kg)，持续4周，在此期
间监测肿瘤生长。肿瘤和体重分别显示在图19B和19C中。测定小鼠血清中的PSA水平并显示
在图19D中。
如图19所示，化合物7显著抑制肿瘤生长而不抑制体重。从小鼠获得的血清中的PSA分
析显示PSA蛋白质表达被化合物7抑制。
小分子调节剂抑制乳腺癌细胞的生长
为了确定氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31是否抑制乳腺癌细胞的生长，用氯
硝柳胺、化合物7或化合物31处理MDA-MB-468和MCF-7细胞三天并测定细胞生长。如图20所
示，两种类似物均抑制乳腺癌细胞生长。
总之，氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31抑制AR-FL和AR变体的蛋白质表达，以
及AR-FL-介导的和ARV-介导的转录活性。然而，与氯硝柳胺相比，类似物表现出优异的生物
利用度，并且在抑制肿瘤细胞生长方面更有效。特别地，化合物7比氯硝柳胺更大程度地减
少PDX模型中的肿瘤体积和血清PSA水平，并且与抗雄激素药物极大地协同作用以抑制肿瘤
细胞生长。
V.示例性实施方案
根据当前公开的主题提供的示例性实施方案包括但不限于权利要求书和以下实施方
案：
1.包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及
其中每个X是独立选择的卤素。
1
2.如实施方案1所述的组合物，其中R是CX3或NO2。
3.如实施方案1或2所述的组合物，其中R2是H或X。
4.如实施方案1至3中任一项所述的组合物，其中R3是X。
5.如实施方案1至4中任一项所述的组合物，其中R5是C2烷基或C2烯基。
6.如实施方案1至5中任一项所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
7.如实施方案1至6中任一项所述的组合物，其中所述通式(I)化合物选自：
及其组合。
8.如实施方案1至7中任一项所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激
素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
9.如实施方案8所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂
鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
10.如实施方案1至9中任一项所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或其变
体的表达和/或活性。
11.如实施方案10所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以
及它们的组合。
12.如实施方案11所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/
或AR-V12剪接变体。
13.如实施方案12所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
14.如实施方案11所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述
突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
15.如实施方案1至14中任一项所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有效抑
制剂。
16.如实施方案15所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
17.如实施方案15或16所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转
移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势抵抗
性癌细胞以及它们的组合。
18.如实施方案1至17中任一项所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
19.预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的包含
抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及
其中每个X是独立选择的卤素。
20.如实施方案19所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
21.如实施方案19或20所述的方法，其中R2是H或X。
22.如实施方案19至21中任一项所述的方法，其中R3是X。
23.如实施方案19至22中任一项所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
24.如实施方案19至23中任一项所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
25.如实施方案19至24中任一项所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
26.如实施方案19至25中任一项所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄
激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
27.如实施方案26所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩
杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
28.如实施方案19至27中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体或其变体的表达和/
或活性。
29.如实施方案28所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及
它们的组合。
30.如实施方案29所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12剪接变体。
31.如实施方案30所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
32.如实施方案29所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突
变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
33.如实施方案19至32中任一项所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
34.如实施方案19至33中任一项所述的方法，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌症、
转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症
以及它们的组合。
35.如实施方案34所述的方法，其中降低或逆转所述癌症的雄激素非依赖性、去势抵抗
性或激素抵抗性。
36.如实施方案19至35中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的
载体。
37.如实施方案19至36中任一项所述的方法，其中同时给予所述抗雄激素药物和所述
通式(I)化合物。
38.如实施方案19至36中任一项所述的方法，其中依序给予所述抗雄激素药物和所述
通式(I)化合物。
39.如实施方案19至38中任一项所述的方法，其中所述个体未患有癌症。
40.如实施方案19至38中任一项所述的方法，其中治疗所述个体导致所述癌症的一种
或多种症状的改善。
41.如实施方案19至40中任一项所述的方法，其中在将所述抗雄激素药物和所述通式
(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从所述个体中获得测试样品。
42.如实施方案41所述的方法，其中所述测试样品包含组织、血液或它们的组合。
43.如实施方案42所述的方法，其中所述测试组织样品包含癌组织。
44.如实施方案41至43中任一项所述的方法，其中在所述测试样品中测定一种或多种
生物标志物的水平。
45.如实施方案44所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗
原(PSA)。
46.如实施方案44或45所述的方法，其中将所述测试样品中的一种或多种生物标志物
的水平与参考样品中的所述一种或多种生物标志物的水平进行比较。
47.如实施方案46所述的方法，其中所述参考样品是在将所述抗雄激素药物和所述通
式(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从相同个体中获得的正常血液或组织。
48.如实施方案46所述的方法，其中所述参考样品获自不同个体或个体群体。
49.如实施方案46或48所述的方法，其中所述测试样品中的PSA水平高于所述参考样品
中的PSA水平，并且其中在将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体之前
获得所述测试样品。
50.如实施方案45至49中任一项所述的方法，其中将所述抗雄激素药物和所述通式(I)
化合物施用于所述个体导致与在施用前从所述个体获得的测试样品相比，在施用后从所述
个体获得的测试样品中的所述PSA水平降低。
51.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄激
素受体或所述细胞与治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物接触：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
4 5
R选自H和C(O)R ，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且
其中每个X是独立选择的卤素。
52.如实施方案51所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
53.如实施方案51或52所述的方法，其中R2是H或X。
54.如实施方案51至53中任一项所述的方法，其中R3是X。
55.如实施方案51至54中任一项所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
56.如实施方案51至55中任一项所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
57.如实施方案51至56中任一项所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
58.如实施方案51至57中任一项所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄
激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
59.如实施方案58所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂
鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
60.如实施方案51至59中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体反式激活。
61.如实施方案51至60中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体表达。
62.如实施方案51至61中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体介导的转录活性。
63.如实施方案51至62中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体变体的表达和/或活
性。
64.如实施方案63所述的方法，其中抑制所述雄激素受体变体对前列腺特异性抗原
(PSA)启动子的募集。
65.如实施方案63或64所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体
以及它们的组合。
66.如实施方案65所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12剪接变体。
67.如实施方案66所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
68.如实施方案65所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突
变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
69.如实施方案51至68中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
70.如实施方案69所述的方法，其中所述癌细胞是转移性癌细胞。
71.如实施方案69或70所述的方法，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
72.如实施方案69至71中任一项所述的方法，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌
细胞、去势抵抗性癌细胞、激素抵抗性癌细胞以及它们的组合。
73.如实施方案72所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞的雄激素非依赖性、
去势抵抗性和/或激素抵抗性。
74.如实施方案69至73中任一项所述的方法，其中使所述癌细胞对所述抗雄激素药物
再敏化。
75.如实施方案69至73中任一项所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞对所述
抗雄激素药物的耐药性。
76.如实施方案69至75中任一项所述的方法，其中抑制所述癌细胞的浸润能力和/或所
述癌细胞的迁移能力。
77.如实施方案69至76中任一项所述的方法，其中抑制所述癌细胞的生长和/或形成集
落的能力。
78.如实施方案51至77中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的
载体。
79.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含抗雄激素药物和通式(I)化合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且
其中每个X是独立选择的卤素。
1
80.如实施方案79所述的试剂盒，其中R是CX3或NO2。
81.如实施方案79或80所述的试剂盒，其中R2是H或X。
82.如实施方案79至81中任一项所述的试剂盒，其中R3是X。
83.如实施方案79至82中任一项所述的试剂盒，其中R5是C2烷基或C2烯基。
84.如实施方案79至83中任一项所述的试剂盒，其中X独立地选自F和Cl。
85.如实施方案79至84中任一项所述的试剂盒，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
86.如实施方案79至85中任一项所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类
雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
87.如实施方案86所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩
杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
88.如实施方案79至87中任一项所述的试剂盒，还包含药学上可接受的载体。
89.如实施方案79至88中任一项所述的试剂盒，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
90.如实施方案79至89中任一项所述的试剂盒，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌
症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌
症以及它们的组合。
91.如实施方案79至90中任一项所述的试剂盒，还包含使用说明书。
92.如实施方案79至91中任一项所述的试剂盒，还包含用于将所述抗雄激素药物和/或
所述通式(I)化合物施用于所述个体的用具和/或一种或多种试剂。
93.如实施方案79至92中任一项所述的试剂盒，还包含用于从所述个体中获得样品的
用具和/或一种或多种试剂。
94.如实施方案93所述的试剂盒，还包含用于测定所述样品中的一种或多种生物标志
物的水平的用具和/或一种或多种试剂。
95.如实施方案94所述的试剂盒，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性
抗原(PSA)。
96.如实施方案79至95中任一项所述的试剂盒，还包含阴性和/或阳性对照样品。
97.包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物：
其中：
R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R8选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R9选自H和C(O)R10，
其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以
及
其中每个X是独立选择的卤素。
6 7
98.如实施方案97所述的组合物，其中R和/或R是CX3。
99.如实施方案97或98所述的组合物，其中R8是X。
100.如实施方案97至99中任一项所述的组合物，其中R9是H。
101.如实施方案97至100中任一项所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
102.如实施方案97至101中任一项所述的组合物，其中所述通式(II)化合物为
103.如实施方案97至102中任一项所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体
类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
104.如实施方案103所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、
恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
105.如实施方案97至104中任一项所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或
其变体的表达和/或活性。
106.如实施方案105所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体
以及它们的组合。
107.如实施方案106所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9
和/或AR-V12剪接变体。
108.如实施方案107所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
109.如实施方案106所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所
述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
110.如实施方案97至109中任一项所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有
效抑制剂。
111.如实施方案110所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
112.如实施方案110或111所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细
胞、转移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势
抵抗性癌细胞以及它们的组合。
113.如实施方案97至112中任一项所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
114.用于预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向个体施用治疗有效量的实施
方案97至113中任一项所述的组合物。
115.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄
激素受体或所述细胞与治疗有效量的实施方案97至113中任一项所述的组合物接触。
116.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含实施方案97至113中任一项所述的
组合物。
应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于示例性说明目的，并且可以建议本领
域技术人员对其进行各种修改或改变，并且所述各种修改或改变包括在本申请的精神和权
限内以及所附权利要求的范围内。出于所有目的，本文引用的所有出版物/公开、专利、专利
申请和序列登录号均通过引用以它们的整体并入本文。
非正式的序列表
如本文所用，术语“羧基”是指-C(O)OH部分。羧基部分可以被离子化以形成羧酸根阴离
子。
如本文所用，术语“氨基”是指-NR3部分，其中每个R基团是H或烷基。
如本文所用，术语“酰氨基”是指–NRC(O)R或–C(O)NR2部分，其中每个R基团是H或烷基。
术语“协同”或“协同作用”是指由两种或更多种化合物(例如，抗雄激素药物或氯硝柳
胺类似物)产生的作用大于由单个化合物的作用的总和产生的作用(即，作用大于累加效
应)。有几种方法可用于确定药物的组合是否产生协同作用。作为非限制性实例，Highest
Single Agent方法简单地反映了药物的组合的所得效果(EAB)大于单独药物(EA和EB)的效
果的事实。组合指数(CI)可以根据公式计算：
作为另一个非限制性实例，根据响应可加性方法(Response Additivity Approach)，
当EAB大于所预期的单个药物(EA和EB)的累加效应时，发生协同药物组合作用。这里，使用以
下公式计算CI：
作为另一个非限制性实例，Bliss Independence模型是基于药物作用是概率进程的结
果的原理，并且假设药物独立地起作用以使它们彼此不相互干扰(即，不同的作用位点)。行
动)。然而，该模型还假设每种药物有助于产生共同的结果。根据该方法，所观察到的组合效
应被表示为概率((0≤EAB≤1)，并与表示为如下的所预期的累加效应进行比较。
EA+EB(1-EA)＝EA+EB–EAEB，
其中0≤EA≤1并且0≤EB≤1。使用以下公式计算此方法的CI：
鉴定协同作用的方法在Foucquier J.and Guedj M.Pharmacology Research&
Perspectives(2015)(3)3:e00149中进一步讨论，出于所有目的通过引用整体并入本文。
III.实施方案的描述。
A.组合物
本发明提供了包含抗雄激素药物和氯硝柳胺类似物的组合物。氯硝柳胺((5-氯-N-2-
氯-4-硝基-苯基)-2-羟基苯甲酰胺)是食品药品管理局(FDA)批准的有效对抗人类绦虫的
药物。氯硝柳胺的化学结构如下：
如本文所用，术语“氯硝柳胺类似物”包括结构类似物(即，与氯硝柳胺具有结构相似性
的化合物)。氯硝柳胺的结构类似物可以在一个或多个原子、官能团或亚结构方面与氯硝柳
胺不同。该术语还包括氯硝柳胺类似物的衍生物，以及转化为氯硝柳胺类似物及其衍生物
的前药。还包括盐，例如氯硝柳胺类似物的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3
4 5 5
选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自H和C(O)R ，其中R 选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
1 2 1
在一些实施方案中，R是CX3(例如CF3)并且R 是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
2 3 4 1 1
在一些实施方案中，当R是Cl、R是Cl并且R是H时，R不是NO2。在一些实施方案中，当R
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实 施方案中 ，通式(I)的化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，本发明的组合物包括一种或多种氯硝柳胺类似物，其浓度为约0.1
μM至10μM(例如约0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM、1μM、1.1μM、1.2μM、1.3μM、1.4μM、1.5μM、1.6μM、1.7μM、1.8μM、1.9μM、2μM、2.1μM、2.2μM、2.3μM、2.4μM、2.5μM、2.6μM、2.7μM、2.8μM、2.9μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.5μM、6μM、6.5μM、7μM、
7.5μM、8μM、8.5μM、9μM、9.5μM或10μM)。在特定实施方案中，所述浓度为约0.1μM、0.11μM、
0.12μM、0.13μM、0.14μM、0.15μM、0.16μM、0.17μM、0.18μM、0.19μM、0.2μM、0.21μM、0.22μM、
0.23μM、0.24μM、0.25μM、0.26μM、0.27μM、0.28μM、0.29μM、0.3μM、0.31μM、0.32μM、0.33μM、
0.34μM、0.35μM、0.36μM、0.37μM、0.38μM、0.39μM或0.4μM。在其他实施方案中，一种或多种氯硝柳胺类似物以如下浓度存在：约10μM至1,000μM(例如约10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、
15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM、45μM、50μM、55μM、60μM、65μM、70μM、75μM、80μM、85μM、90μM、95μM、100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、350μM、400μM、450μM、
500μM、550μM、600μM、650μM、700μM、750μM、800μM、850μM、900μM、950μM或1,000μM)。在一些情况下，氯硝柳胺类似物或其组合以约0.25μM的浓度存在于组合物中。在一些其他情况下，
氯硝柳胺类似物或其组合以约0.5μM的浓度存在于组合物中。在其他情况下，氯硝柳胺类似
物或其组合以约1.0μM的浓度存在于组合物中。在一些其他情况下，氯硝柳胺类似物或其组
合以约1.5μM的浓度存在于组合物中。
本发明的组合物包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物。抗雄激素药包括非甾体类雄激
素受体(AR)拮抗剂和CYP17A1抑制剂。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康
士得)、Cosudex、Calutide、Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-
56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1
抑制剂包括醋酸阿比特龙(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用
于本发明的组合物中。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含一种或多种抗雄激素药物，其浓度为约0.1μM
至10μM(例如约0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM、1μM、1.1μM、
1.2μM、1.3μM、1.4μM、1.5μM、1.6μM、1.7μM、1.8μM、1.9μM、2μM、2.1μM、2.2μM、2.3μM、2.4μM、
2.5μM、2.6μM、2.7μM、2.8μM、2.9μM、3μM、3.5μM、4μM、4.5μM、5μM、5.5μM、6μM、6.5μM、7μM、7.5μM、8μM、8.5μM、9μM、9.5μM或10μM)。在其它实施方案中，所述一种或多种抗雄激素药物以约
10μM至100μM的浓度存在(例如约10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM、17μM、18μM、19μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM、45μM、50μM、55μM、60μM、65μM、70μM、75μM、80μM、85μM、90μM、
95μM或100μM)。在一些其他实施方案中，所述一种或多种抗雄激素药物以约100μM至1,000μ
M的浓度存在于组合物中。(例如约100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、350μM、400μM、450μM、
500μM、550μM、600μM、650μM、700μM、750μM、800μM、850μM、900μM、950μM或1,000μM)。在一些情况下，抗雄激素药物或其组合以约5μM的浓度存在。在其他情况下，抗雄激素药物或其组
合以约20μM的浓度存在。
本发明的组合物可用于抑制雄激素受体(AR)变体，包括突变变体和剪接变体。特别地，
许多AR剪接变体和突变变体与雄激素非依赖性癌症和激素抵抗性癌症相关。在AR突变变体
中，本发明的组合物可用于抑制T878A、K581R、L702H和V716M AR突变变体以及它们的组合。
在AR剪接变体中，本发明的组合物可用作AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12剪接变体抑
制剂。在本发明的一个方面，AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12的抑制可以使耐药性
癌细胞(例如前列腺癌细胞)对癌症药物例如抗雄激素药物(例如，比卡鲁胺、恩杂鲁胺、阿
帕鲁胺和醋酸阿比特龙)再敏化。在本发明的另一个方面，AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12的抑制可以增强抗雄激素药物(例如，比卡鲁胺、恩杂鲁胺、阿帕鲁胺和醋酸阿比特
龙)及其组合的有效性。
本发明化合物可以抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12的转录、翻译、稳定性
或活性。抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、
AR-V9和/或AR-V12对雄激素反应元件(AREs)的募集。在一些实施方案中，抑制AR-V1、AR-
V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12对
PSA启动子的募集。在一些实施方案中，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可
包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12诱导的PSA启动子的激活。在一些实施方
案中，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12活性可包括抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、
AR-V9和/或AR-V12诱导的PSA产生。例如，抑制AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12可包
括在不存在DHT的情况下抑制PSA的产生。
本发明还提供了这样的组合物，其适合于患有晚期癌症的患者，例如耐药性癌症、转移
性癌症、去势抵抗性癌症或其组合。在一些情况下，晚期癌症是晚期前列腺癌，例如耐药性
前列腺癌、转移性前列腺癌、去势抵抗性前列腺癌或其组合。在其他情况下，晚期癌症是晚
期乳腺癌，例如耐药性乳腺癌、转移性乳腺癌或其组合。
B.药物组合物
本发明的药物组合物包括含有氯硝柳胺类似物(例如，化合物5、7、11、30、31或其组
合)，抗雄激素药物(例如比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)的组合物
和药学上可接受的载体和/或赋形剂或稀释剂。此类组合物适用于动物或人的药物用途。
本发明的药物组合物可以通过药学领域中熟知的任何方法制备。适用于本发明的药学
上可接受的载体包括任何标准的药物载体、缓冲剂和赋形剂，包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水
和乳液(例如油/水或水/油乳液)和各种类型的润湿剂和/或辅料。合适的药物载体及其制
剂描述于Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,19th
ed.1995)中。优选的药物载体取决于活性剂的预期给药方式。
本发明的药物组合物可包括药物或其任何药学上可接受的盐的组合(例如，氯硝柳胺
类似物，例如化合物5、7、11、30和/或31，和抗雄激素药物，例如恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺和/或阿帕鲁胺)作为活性成分和药学上可接受的载体和/或赋形剂或稀释剂。药物组合
物可任选地含有其他治疗成分。
根据常规的药物混配技术，本发明的组合物(即，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组
合)可以作为紧密混合物中的活性成分与合适的药物载体和/或赋形剂组合。考虑将适合于
用于给药的所需制剂形式的任何载体和/或赋形剂与本文公开的化合物一起使用。
药物组合物包括适用于局部、肠胃外、肺部、鼻腔、直肠或口服给药的那些药物组合物。
在任何给定的情况下，最合适的给药途径将部分取决于癌症(例如，前列腺癌或乳腺癌)病
况的性质和严重性，并且还任选地取决于癌症的阶段。
其他药物组合物包括适合全身(肠内或肠胃外)给药的那些。全身给药包括口服、直肠、
舌下或唇下给药。肠胃外给药包括例如静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内
和颅内。其他递送模式包括但不限于脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂等的使用。在特定
实施方案中，本发明的药物组合物可以在肿瘤内给药。
用于肺部给药的组合物包括但不限于由本文所述化合物或其盐的粉末以及合适的载
体和/或润滑剂的粉末组成的干粉组合物。用于肺部给药的组合物可以从本领域技术人员
已知的任何合适的干粉吸入器装置中吸入。
用于全身给药的组合物包括但不限于由本文所述组合物和合适的载体和/或赋形剂的
粉末组成的干粉组合物。用于全身给药的组合物可以由但不限于片剂、胶囊、丸剂、糖浆、溶
液和悬浮液来表示。
在一些实施方案中，本发明提供了进一步包含药物表面活性剂的组合物。在其他实施
方案中，本发明提供了进一步包含冷冻保护剂的组合物。在一些实施方案中，所述冷冻保护
剂选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、谷氨酸钠、PVP、HPβCD、CD、甘油、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。
用于本发明的药物组合物或药物可通过标准技术并使用一种或多种生理学上可接受
的载体或赋形剂来配制。合适的药物载体在本文和Remington:The Science and Practice
of Pharmacy,21st Ed.,University of the Sciences in Philadelphia,Lippencott
Williams&Wilkins(2005)中有所描述。
本发明组合物的控释肠胃外制剂可以制成植入物、油性注射剂或颗粒系统。对于递送
系统的广泛综述，参见Banga,A.J.,THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS:FORMULATION,
PROCESSING,AND DELIVERY SYSTEMS,Technomic Publishing Company,Inc.,Lancaster,
PA,(1995)，在此通过引用并入本文。颗粒系统包括微球、微粒、微囊、纳米囊、纳米球和纳米
颗粒。
聚合物可用于本发明组合物的离子控制释放。用于受控的药物递送的各种可降解的和
不可降解的聚合物基质是本领域已知的(Langer R.,Accounts Chem.Res.,26:537-542
(1993))。例如，嵌段共聚物，泊洛沙姆407在低温下作为粘性的但可流动的液体存在，但在
体温下形成半固体凝胶。它已显示出作为用于配制和缓释重组白细胞介素2和脲酶的有效
媒介物(Johnston et al.,Pharm.Res.,9:425-434(1992)；和Pec et al.,
J.Parent.Sci.Tech.,44(2):58 65(1990))。或者，羟基磷灰石已用作控制释放蛋白质的微
载体(Ijntema et al.,Int.J.Pharm.,112:215-224(1994))。在另一方面，脂质体用于控制
释放以及脂质包封药物的药物靶向(Betageri et al.,LIPOSOME DRUG DELIVERY
SYSTEMS,Technomic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,PA(1993))。用于控制递送治疗性
蛋白质的许多其他系统是已知的。参见，例如，美国专利号5,055,303、5,188,837、4,235,
871、4,501,728、4,837,028、4,957,735和5,019,369、5,055,303；5,514,670；5,413,797；5,
268,164；5,004,697；4,902,505；5,506,206、5,271,961；5,254,342和5,534,496；每一个都
通过引用并入本文。
C.预防和治疗癌症的方法
在一些实施方案中，本发明提供了预防或治疗患者的癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌或
雄激素非依赖性癌症)的方法，其中该方法包括向该患者施用有效量的氯硝柳胺类似物和
抗雄激素药物。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
2 3 5
CX3或NO2。在其他情况下，R 是H或X。在一些其他情况下，R 是X。在其他情况下，R是C2烷基或
C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实施方案中 ，通式(I)的化合物选自：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
F、R8是Cl并且R9是H时，R7不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物为非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组
合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、
Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺
(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是晚期癌症。在这些实施方案的一些实施方
案中，癌症是耐药性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是对抗雄激素药物耐药的
或雄激素非依赖性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是转移性的。在这些实施方
案的一些实施方案中，癌症是转移性和耐药性的(例如，对抗雄激素药物耐药性)。在这些实
施方案的一些实施方案中，癌症是去势抵抗性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症
是转移性和去势抵抗性的。在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺耐药性的。
在这些实施方案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺和阿比特龙耐药性的。在这些实施方
案的一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺、阿比特龙和比卡鲁胺耐药性的。在这些实施方案的
一些实施方案中，癌症是恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺和阿帕鲁胺耐药性的。在其他实施
方案中，癌症是耐药性的(例如，多西紫杉醇、卡巴他赛、紫杉醇)。癌症(例如，前列腺癌或乳
腺癌)可以对这些药物的任何组合具有耐药性。
在一些实施方案中，治疗包括抑制癌细胞(例如前列腺或乳腺癌细胞)生长、抑制癌细
胞增殖、抑制癌细胞迁移、抑制癌细胞浸润、改善癌症症状、减少癌肿瘤的大小、减少癌肿瘤
的数量、减少癌细胞的数量、诱导癌细胞坏死、细胞焦亡、细胞胀亡、细胞凋亡、自噬或其他
细胞死亡、或增强包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合物或药物组合物的治疗效
果。在特定情况下，个体未患有癌症。
在本文所述的治疗癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌、雄激素非依赖性癌症或耐药性癌症)
的特定方法中，治疗包括增强抗雄激素药物(例如，非甾体类雄激素受体拮抗剂或CYP17A1
抑制剂)的治疗效果。在某些实施方案中，治疗包括增强恩杂鲁胺的治疗效果。在某些其他
实施方案中，治疗包括增强阿比特龙的治疗效果。在其他实施方案中，治疗包括增强阿帕鲁
胺的治疗效果。在一些其他实施方案中，治疗包括增强比卡鲁胺的治疗效果。增强可以是协
同的或叠加的。
在本文所述方法的某些实施方案中，治疗包括逆转、减少或降低癌细胞(例如，前列腺
癌细胞或乳腺癌细胞)对抗雄激素药物的耐药性。在本文所述方法的某些实施方案中，治疗
包括使癌细胞(例如前列腺癌细胞或乳腺癌细胞)对抗雄激素药物再敏化。在本文所述方法
的任何方法中，抗雄激素药物是选自非甾体类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂及其组合
的化合物。在某些实施方案中，抗雄激素药物是恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺和/或醋酸阿
比特龙。
在任何上述方法中，治疗可包括逆转癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄激素
药物(例如，非甾体类雄激素受体拮抗剂或CYP17A1抑制剂)的耐药性；减少或降低癌细胞对
抗雄激素药物的耐药性；或使癌细胞对抗雄激素药物再敏化。在一些实施方案中，治疗包括
逆转癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细胞)对恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特
龙或其组合的耐药性。在一些其他实施方案中，治疗包括减少或降低癌细胞对恩杂鲁胺、阿
帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合的耐药性。在本发明的其他实施方案中，治疗包
括使癌细胞对恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合再敏化。
在本文所述方法的任何方法中，癌症选自去势抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症、晚
期癌症、耐药性癌症、抗雄激素耐药性癌症、比卡鲁胺耐药性癌症、恩杂鲁胺耐药性癌症、醋
酸阿比特龙耐药性癌症、阿帕鲁胺耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-
V12-诱导的耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的抗雄激素耐
药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的恩杂鲁胺耐药性癌症、AR-
V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的醋酸阿比特龙耐药性癌症、AR-V1-、AR-
V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的阿帕鲁胺耐药性癌症、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、
AR-V9-和/或AR-V12-诱导的比卡鲁胺耐药性癌症及它们的组合。
在特定实施方案中，从个体获得测试样品。可以在将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物
施用于个体之前和/或之后获得测试样品。合适样品的非限制性实例包括血液、血清、血浆、
脑脊髓液、组织、唾液和尿液。在一些情况下，样品包含正常组织。在其他情况下，样品包含
癌组织。样品也可以由正常细胞和癌细胞的组合构成。
在一些实施方案中，获得参考样品。参考样品可以例如从个体中获得并且可以包含正
常组织。参考样品也可以从不同的个体和/或个体群体中获得。在一些情况下，参考样品在
将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物施用于个体之前和/或之后从个体、不同个体或个体群
体中获得，并且包含正常组织。然而，在一些情况下，参考样品包含癌症组织并且从个体和/
或从不同个体或个体群体中获得。
在一些实施方案中，在测试样品和/或参考样品中测定一种或多种生物标志物的水平。
合适的生物标志物的非限制性实例包括前列腺特异性抗原(PSA)、α-甲基酰基-CoA消旋酶
(AMACR)、内皮糖蛋白(CD105)、Engrailed-2(EN-2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、小窝蛋
白-1、白细胞介素-6(IL-6)、CD147、S100蛋白家族的成员(例如，S100A2、S100A4、S100A8、
S100A9、S100A11)、膜联蛋白A3(ANXA3)、人激肽释放酶-2(KLK2)、TGF-β1、β-微精原蛋白
(MSMB)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)、HER2、Ki67、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E。
前列腺特异性抗原(PSA)是主要由前列腺细胞产生的蛋白质。大多数PSA被释放到精液
中，但是一些PSA也被释放到血液中。在血液中，PSA以未结合的和复合的(cPSA)形式存在。
传统的实验室测试可以测量未结合的和/或总的(未结合的和复合的)PSA。升高的PSA水平
可由良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎症引起，但也可由前列腺癌引起。测定PSA水平还可
包括PSA速度(即PSA水平随时间的变化)、PSA倍增时间(即PSA水平加倍的速度)、PSA密度
(即PSA浓度和前列腺体积的比较(可以例如通过超声评估)和年龄特异性PSA范围的一种或
多种测定。
通常，将一种或多种测试样品中的一种或多种生物标志物的水平与一种或多种参考样
品中的一种或多种生物标志物的水平进行比较。取决于生物标志物，相对于正常对照或参
考样品的增加或减少可指示癌症的存在或癌症的更高风险。作为非限制性实例，将氯硝柳
胺类似物和抗雄激素药物施用于个体之前和之后的测试样品中的一种或多种生物标志物
的水平与参考样品中的一种或多种生物标志物的水平进行比较，该参考样品或者是从该个
体获得的正常组织，或从不同个体或个体群体获得的正常组织。在一些情况下，生物标志物
是血清，并且在向个体施用氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物之前从该个体获得的测试样品
中的PSA水平高于参考样品中的PSA水平。在其他情况下，相对于给药前获得的测试样品中
的PSA水平，在给予氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物后从该个体获得的测试样品中的PSA水
平降低。或者，作为另一个非限制性实例，在给药后从个体获得的样品与参考样品之间的
PSA水平差异小于在给药前从该个体获得的样品与参考样品之间的PSA水平差异(即，给药
导致测试样品中PSA降低，使得测试样品中测量的水平与参考样品中测量的水平之间的差
异减小或消除)。
参考样品或值与测试样品之间的差异仅需要足以被检测出。在一些实施方案中，当与
阴性对照相比生物标志物水平至少例如高约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，确定测试样品中生物标志物(例如，PSA)的水平增加，并因此确定癌症的存在或癌症风险增加。在其他实施方案中，
当与阴性对照相比生物标志物水平至少例如低约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9
倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，确定测试样品中生物标志物的水平降低，并因此确定癌症的存在或癌症风险增加。
可以使用本领域已知的任何方法检测生物标志物水平，包括使用对生物标志物特异的
抗体。示例性方法包括但不限于PCR、蛋白质印迹法、斑点印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、
放射免疫测定(RIA)、免疫沉淀、免疫荧光、FACS分析、电化学发光和多重珠测定(multiplex
bead assay)(例如，使用Luminex或荧光微珠))。在某些情况下，使用核酸测序。
在某些实施方案中，在免疫测定或PCR反应(例如，定量PCR)中通过可检测的信号(例如
印迹、荧光、化学发光、颜色、放射性)指示一种或多种生物标志物的水平降低或增加的存
在。可以将该可检测信号与来自对照样品的信号或阈值进行比较。在一些实施方案中，检测
到降低的存在，并且当测试样品中生物标志物的可检测信号与参考样品中的抗体信号或预
定阈值相比至少例如低约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，指示癌症存在或癌症风险增加。在其他实
施方案中，检测到增加的存在，并且当测试样品中生物标志物的可检测信号与参考样品中
的抗体信号或预定阈值相比至少例如大约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、
11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍时，指示癌症存在或癌症风险增加。
在一些实施方案中，生物标志物水平测定的结果记录在有形媒介中。例如，可以例如在
纸上或电子媒体上(例如，录音带、计算机磁盘、CD，闪存驱动器等)记录诊断测定的结果(例
如，一种或多种生物标志物的存在或减少的存在或增加的存在的观察结果)以及是否存在
增加的癌症风险或存在癌症的诊断。
在其他实施方案中，所述方法还包括向患者(即个体)和/或治疗结果提供诊断的步骤。
D.抑制癌细胞的方法
在一些实施方案中，本发明提供了抑制细胞中雄激素受体(例如，全长雄激素受体、野
生型雄激素受体、雄激素受体变体、雄激素受体突变变体或雄激素受体剪接变体)的表达
和/或活性的方法，其中所述方法包括使细胞或雄激素受体与本文所述的氯硝柳胺类似物
和本文所述的抗雄激素药物的组合(例如，包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合物)
接触。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
Cl)，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是NO2并且R4是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在特定的实施方案中，通式(I) 化合物选自：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
6 7 8
在一些实施方案中，R 和R独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
F、R8是Cl并且R9是H时，R7不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药是非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组合。
合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、Kalumid)、
氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺(Xtandi(安可
坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙(Zytiga)，酮康唑和
seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在某些实施方案中，所述变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12剪接变体。在
一些情况下，变体是AR-V7剪接变体。在某些其他实施方案中，变体是突变变体，相对于SEQ
ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、
V716M的突变。在某些实施方案中，所述量是有效量或治疗有效量。在某些实施方案中，细胞
是癌细胞，例如去势抵抗性癌细胞，雄激素非依赖性癌细胞或抗雄激素耐药性(例如，恩杂
鲁胺-、阿帕鲁胺-、比卡鲁胺-或醋酸阿比特龙-耐药性)癌细胞，或其组合。癌细胞可以是前
列腺癌细胞、乳腺癌细胞或其他相关癌细胞。
在一些实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)生长的方
法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和
本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些其他实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)迁移的
方法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31
和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些实施方案中，本发明提供抑制癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)浸润的方
法，其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和
本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在一些实施方案中，本发明提供了逆转癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄
激素药物(例如恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)的耐药性的方法，
其中该方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本
文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在某些
实施方案中，该量是有效量或治疗有效量。
在一些实施方案中，本发明提供了使癌细胞(例如前列腺癌或乳腺癌细胞)对抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、比卡鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合再敏化的方法，其中该方法
包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗
雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在某些实施方案中，
该量是有效量或治疗有效量。
在一些实施方案中，本发明提供了减少或降低癌细胞(例如前列腺癌细胞)对抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、比卡鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合的耐药性的方法，其中该方
法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的
抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。
在本文所述的一些实施方案中，减少、逆转或降低癌细胞(例如，前列腺癌或乳腺癌细
胞)对抗雄激素药物的耐药性或使该癌细胞对抗雄激素药物再敏化发生在患有癌症(例如，
前列腺癌或乳腺癌)的患者中，尽管包括雄激素非依赖性癌症在内的许多的其他易受影响
的癌症都适用于本发明的方法。
在一些实施方案中，本发明还提供了增强抗雄激素药物(例如，恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比
卡鲁胺、醋酸阿比特龙或其组合)在患有癌症(例如前列腺癌或乳腺癌)的患者中的治疗作
用的方法，其中所述方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30
和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺
接触或向患者施用本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的
抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺。
在其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素受体(AR)剪接变体的方法，其包括使AR剪
接变体与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在这些实施方案的一些实
施方案中，AR剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12。在一些情况下，AR剪接变
体是AR-V7。
在其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素受体(AR)突变变体的方法，其包括使AR突
变变体与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素
药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在一些实施方案中，相对于
SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，AR突变变体在选自K581、L7602、T878、V716及其组合的
位置处包含一个或多个突变。在一些情况下，相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，AR
突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M及其组合的突变。
在某些其他实施方案中，本发明提供抑制AR反式激活、抑制AR表达(例如，mRNA表达和/
或蛋白质表达)、抑制AR介导的转录活性、抑制AR介导的细胞迁移、抑制AR介导的癌细胞的
细胞浸润、抑制癌细胞集落形成以及抑制AR变体对前列腺特异性抗原(PSA)启动子的募集
的方法。在某些情况下，这种抑制方法包括使癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合
物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/
或比卡鲁胺接触。
本发明还提供了抑制AR全长、AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或AR-V12表达(例如，mRNA
和/或蛋白质表达)的方法，其中该方法包括使AR或癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如
化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁
胺和/或比卡鲁胺接触。
本发明还提供了抑制AR全长、AR-V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-介导的转
录活性的方法，其中该方法包括使AR或癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类似物如化合物5、7、
11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、阿帕鲁胺和/或比卡
鲁胺接触。
在某些其他实施方案中，本发明提供抑制雄激素非依赖性或抗雄激素药物耐药性CRPC
细胞生长、迁移或浸润的方法，其中该方法包括使前列腺癌细胞与本文所述的氯硝柳胺类
似物如化合物5、7、11、30和/或31和本文所述的抗雄激素药物如恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙、
阿帕鲁胺和/或比卡鲁胺接触。在一些实施方案中，前列腺癌细胞是CRPC细胞。
E.给药
在本发明的一些实施方案中，将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合施用于患有癌
症的患者。癌症可以是任何易感的癌症。在一些情况下，癌症是雄激素非依赖性癌症、前列
腺癌或乳腺癌。在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物具有通式(I)：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R1是
2 3 5
CX3或NO2。在其他情况下，R 是H或X。在一些其他情况下，R 是X。在其他情况下，R是C2烷基或
C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
3 4 1 4
Cl)，R是X(例如Cl)并且R是H。在一些实施方案中，R是NO2并且R是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
4
是X(例如Cl)并且R是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3
1 2 3 4
不是Cl。在一些实施方案中，当R是NO2、R是Cl并且R是Cl时，R不是H。
在特定实施 方案中 ，氯硝柳胺类 似物选自
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(II)化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物是非甾体类AR拮抗剂、CYP17A1抑制剂或它们的组
合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、Calutide、
Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩杂鲁胺
(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的方法中。
在本文所述的治疗前列腺癌的某些方法中，所述方法包括首先向患有癌症的患者施用
氯硝柳胺类似物，然后向该患者施用抗雄激素药物。在本文所述的治疗癌症的某些方法中，
所述方法包括首先向患有癌症的患者施用抗雄激素药物，然后向该患者施用氯硝柳胺类似
物。
在一些实施方案中，本发明提供了向患有癌症的患者递送有效量或治疗有效量的氯硝
柳胺类似物和抗雄激素药物的方法。
本发明的氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物制剂可用于制备药物组合物或药物。药物组
合物或药物可以施用于有需要的个体，例如，患有癌症或处于患有癌症风险的患者。
在任何上述实施方案中，癌症选自去势抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症、晚期癌
症、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症、例如抗雄激素耐药性前列腺癌(例如，恩杂鲁胺耐药
性癌症、阿比特龙耐药性癌症、比卡鲁胺耐药性癌症、醋酸阿比特龙耐药性癌症等)、AR-
V1-、AR-V3-、AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的抗雄激素耐药性癌症、如AR-V1-、AR-V3-、
AR-V7-、AR-V9-和/或AR-V12-诱导的恩杂鲁胺-、阿帕鲁胺-、比卡鲁胺-、或醋酸阿比特龙-
耐药性癌症及其组合。
用于本发明的药物组合物或药物可通过标准技术使用一种或多种生理学上可接受的
载体或赋形剂配制。合适的药物载体在本文和E.W.Martin的"Remington's
Pharmaceutical Sciences"中有所描述。本发明的化合物和药剂及其生理学上可接受的盐
和溶剂化物可以被配制用于通过任何合适的途径进行给药，包括通过吸入、局部、经鼻、口
服、静脉内、肠胃外、直肠或肿瘤内给药。
1.给药途径
用于局部给药的典型制剂包括乳膏剂、软膏剂、喷雾剂、洗剂和贴剂。然而，药物组合物
可以被配制用于任何类型的给药，例如皮内、皮下、静脉内、肌内、鼻内、脑内、气管内、动脉
内、腹膜内、膀胱内、胸膜内、冠状动脉内或肿瘤内注射，使用注射器或其他装置。还考虑用
于通过吸入(例如气溶胶)给药或用于口服给药或直肠给药的制剂。
用于透皮应用的合适制剂包括有效量的一种或多种本文所述的化合物，任选地含有载
体。优选的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂以帮助通过宿主的皮肤。例如，透皮装
置是绷带的形式，其包括背衬构件、含有化合物和任选的载体的储库、任选的速率控制屏障
以将化合物在很长的一段时间内以受控的预定的速率递送至宿主的皮肤、以及将该装置固
定在皮肤上的手段。也可使用基质透皮制剂。
对于口服给药，药物组合物或药物可以采取例如片剂或胶囊的形式，其通过常规方法
用药学上可接受的载体或赋形剂制备。本发明提供了片剂和明胶胶囊，其包含氯硝柳胺类
似物和抗雄激素药物或这些药物的干燥固体粉末，以及(a)稀释剂或填充剂，例如乳糖、右
旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素(例如，乙基纤维素、微晶纤维素)、甘氨酸、果胶、聚丙烯酸酯和/或磷酸氢钙、硫酸钙，(b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、镁盐或钙盐、金属
硬脂酸盐、胶体二氧化硅、氢化植物油、玉米淀粉、苯甲酸钠、乙酸钠和/或聚乙二醇；对于片
剂，还包含(c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或羟丙基甲基纤维素；如果需要，(d)崩解剂，例如淀粉(例如马铃薯淀
粉或淀粉钠)、乙醇酸盐/酯、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；(e)润湿剂，例如十二烷
基硫酸钠；和/或(f)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。用于口服给药的液体制剂
可以采取例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或者它们可以作为在使用前用水或其它合适的
介质构建的干燥品存在。这些液体制剂可以通过常规方法用药学上可接受的添加剂制备，
所述添加剂例如为助悬剂，例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪；乳化剂，例
如卵磷脂或阿拉伯胶；非水性载体，例如杏仁油、油性酯、乙醇或分级植物油；和防腐剂，例
如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸。制剂还可以适当地含有缓冲盐、矫味
剂、着色剂和/或甜味剂。如果需要，可以适当配制用于口服给药的制剂以控制释放活性化
合物。
本文所述的组合物和制剂可以被配制用于通过注射、例如通过推注或连续输注进行肠
胃外给药。用于注射的制剂可以以单位剂型存在，例如，在安瓿中或在多剂量容器中，含有
添加的防腐剂。可注射组合物优选是等渗水溶液或悬浮液，栓剂优选由脂肪乳剂或悬浮液
制备。组合物可以是灭菌的和/或含有辅料，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促
进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。或者，活性成分可以是粉末形式，其在使用前用合
适的载体(例如无菌无热原水)构建。此外，它们还可含有其他有治疗价值的物质。该组合物
分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备。
对于通过吸入给药，本发明的组合物可以以来自加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾呈现
形式方便地递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧
化碳或其他合适的气体。在加压的气溶胶的情况下，可以通过提供阀门来递送计量的量来
确定剂量单位。可以配制用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒，其含有化合物和
合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
本文所述的组合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，其例如含有常
规栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。
此外，活性成分可以被配制成储库制剂。这种长效制剂可以通过植入(例如，皮下或肌
肉内)或通过肌内注射来给药。因此，例如，本文所述的一种或多种化合物可以用合适的聚
合物材料或疏水材料(例如作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂来配制，或配制成微溶
衍生物，例如，作为微溶盐。
在具体的实施方案中，本发明的药物组合物或药物可包含(i)有效量的氯硝柳胺类似
物，和(ii)抗雄激素药物。治疗剂可以依序使用或同时使用。给药可以通过相同或不同的给
药途径或在同一药物制剂中一起给药。
2.剂量
药物组合物或药物可以以治疗有效剂量施用于个体，以预防、治疗、重新敏化或控制如
本文所述的癌症。将药物组合物或药物以足以在个体中引起有效治疗反应的量施用于个
体。
在一些实施方案中，施用的活性剂的剂量取决于个体的体重、年龄、个人条件、待治疗
的区域的表面积或体积以及给药形式。剂量的大小还可以通过在具体个体中伴随具体制剂
给药的任何副作用的存在、性质和程度来确定。用于向约50kg至约70kg的哺乳动物口服给
药的单位剂量可含有约5mg至约500mg、约25mg至约200mg、约100mg至约1000mg、约200mg至
约2000mg、约500mg至约5000mg或约1000mg至约2000mg的一种或多种活性成分。用于向约
50kg至约70kg的哺乳动物口服给药的单位剂量可含有约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、
35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、
120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、
240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、
600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1,000mg、1,050mg、1,100mg、1,
150mg、1,200mg、1,250mg、1,300mg、1,350mg、1,400mg、1,450mg、1,500mg、1,550mg、1,
600mg、1,650mg、1,700mg、1,750mg、1,800mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,950mg、2,
000mg、2,050mg、2,100mg、2,150mg、2,200mg、2,250mg、2,300mg、2,350mg、2,400mg、2,
450mg、2,500mg、2,550mg、2,600mg、2,650mg、2,700mg、2,750mg、2,800mg、2,850mg、2,
900mg、2,950mg、3,000mg、4,000mg、4,500mg、5,000、5,500mg、6,000mg、6,500mg、7,000mg、
7,500mg、8,000mg、8,500mg、9,000mg、9,500mg、10,000mg或更多的一种或多种活性成分(例
如氯硝柳胺类似物、抗雄激素药物或其他活性成分)。通常，本发明的活性化合物的剂量是
足以达到所需效果的剂量。可以根据个体体内活性剂积累的测量值来计算最佳给药方案。
通常，剂量可以每天、每周或每月给予一次或多次。本领域普通技术人员可以容易地确定最
佳剂量、给药方法学和重复频率。
在一些实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)氯硝柳胺类似物。
在其他实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)抗雄激素药物。
在其他实施方案中，所述组合物含有约0.1mg/kg至约500mg/kg或更多的(例如，约
0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、
0.9mg/kg、1mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/
kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg.6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/
kg 10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、
55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、
100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、
180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、210mg/kg、220mg/kg、230mg/kg、240mg/kg、250mg/kg、
260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、
340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、
420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、
500mg/kg或更多)氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物的组合。
单位剂量可含有约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、
60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、
160mg、170mg、170mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、
270mg、280mg、290mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、
750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1,000mg、1,050mg、1,100mg、1,150mg、1,200mg、1,
250mg、1,300mg、1,350mg、1,400mg、1,450mg、1,500mg、1,550mg、1,600mg、1,650mg、1,
700mg、1,750mg、1,800mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,950mg、2,000mg、2,050mg、2,
100mg、2,150mg、2,200mg、2,250mg、2,300mg、2,350mg、2,400mg、2,450mg、2,500mg、2,
550mg、2,600mg、2,650mg、2,700mg、2,750mg、2,800mg、2,850mg、2,900mg、2,950mg、3,
000mg、4,000mg、4,500mg、5,000、5,500mg、6,000mg、6,500mg、7,000mg、7,500mg、8,000mg、
8,500mg、9,000mg、9,500mg、10,000mg或更多的一种或多种活性成分。
在某些情况下，单位剂量含有至少约1mg至约2,000mg(例如，约1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、
6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、
30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、
110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、225mg、250mg、
275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、
575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、
875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1,000mg、1,025mg、1,050mg、1,075mg、1,100mg、1,
125mg、1,150mg、1,175mg、1,200mg、1,225mg、1,250mg、1,275mg、1,300mg、1,325mg、1,
350mg、1,375mg、1,400mg、1,425mg、1,450mg、1,475mg、1,500mg、1,525mg、1,550mg、1,
575mg、1,600mg、1,625mg、1,650mg、1,675mg、1,700mg、1,725mg、1,750mg、1,775mg、1,
800mg、1,825mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,925mg、1,950mg、1,975mg或2,000mg或更多)
氯硝柳胺类似物。多剂量可以每天一次或多于一次给予(例如，每天1、2、3、4、5、6、7、8、9或
10次给药)，或每周一次或多于一次给予(例如，每周1、2、3、4、5、6或7次)，每天给予一次或
多次剂量。
在某些情况下，单位剂量含有至少约1mg至约2,000mg(例如，约1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、
6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、
30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、
110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、225mg、250mg、
275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、
575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、
875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1,000mg、1,025mg、1,050mg、1,075mg、1,100mg、1,
125mg、1,150mg、1,175mg、1,200mg、1,225mg、1,250mg、1,275mg、1,300mg、1,325mg、1,
350mg、1,375mg、1,400mg、1,425mg、1,450mg、1,475mg、1,500mg、1,525mg、1,550mg、1,
575mg、1,600mg、1,625mg、1,650mg、1,675mg、1,700mg、1,725mg、1,750mg、1,775mg、1,
800mg、1,825mg、1,850mg、1,875mg、1,900mg、1,925mg、1,950mg、1,975mg或2,000mg或更多)
抗雄激素药物。多剂量可以每天一次或多于一次给予(例如，每天1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次给药)，或每周一次或多于一次给予(例如，每周1、2、3、4、5、6或7次)，每天给予一次或多
次剂量。
从例如动物研究(例如啮齿动物和猴子)中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范
围。本发明化合物的剂量优选在包括ED50的循环浓度范围内，毒性很小或没有毒性。剂量可
在此范围内变化，这取决于所用的剂型和给药途径。对于用于本发明方法的任何组合物，最
初可以从细胞培养测定中估计治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量以达到循环血浆
浓度范围，其包括在细胞培养中测定的IC50(测试化合物实现症状的半数最大抑制时的浓
度)。这些信息可用于更准确地确定人体中的有用剂量。例如，可以通过高效液相色谱法
(HPLC)测量血浆中的水平。
还应理解，组合物的适当剂量取决于组合物相对于要实现的所需效果的效力。当将一
种或多种这些组合物施用于哺乳动物时，医师、兽医或研究人员可以例如首先开出相对低
的剂量，随后增加剂量直至获得适当的反应。此外，应理解，任何特定哺乳动物个体的具体
剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定组合物的活性、个体的年龄、体重、一般健康状
况、性别和饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、任何药物组合以及待调节的表达或活性的
程度。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物同时给药。在其他实施方案中，氯
硝柳胺类似物和抗雄激素药物不是同时给药，但是每天给药相同的次数、或每周给药相同
的次数、或每月给药一些次数(例如，两者都是每天给药一次、每天给药两次、每周给药一
次、每周给药两次，等等)。在一些其他实施方案中，氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物在不同
的给药方案中给出。作为非限制性实例，氯硝柳胺类似物每天给药一次，并且抗雄激素药物
每天给药两次，或反之亦然。作为另一个非限制性实例，氯硝柳胺类似物每天给药一次，并
且抗雄激素药物每2、3、4、5、6天或更多天给药一次，或反之亦然。技术人员还将理解，某些
因素可能影响有效治疗个体所需的剂量和时间设置，包括但不限于疾病或恶性病况的严重
程度、先前的治疗、个体的一般健康状况和/或年龄和存在的其他疾病。此外，用治疗有效量
的组合物治疗个体可包括单次治疗，或者优选地，可包括一系列治疗。
本发明组合物的最佳剂量、毒性和治疗功效可以根据所施用的组合物的相对效力而变
化，并且可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来测定，例如通过测定LD50(对
50％的群体致死的剂量)和ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的
剂量比是治疗指数，并且可以表示为LD50/ED50的比率。表现出大治疗指数的药剂是优选的。
虽然可以使用表现出毒副作用的药剂，但应注意设计将这些药剂靶向受影响的组织部位的
递送系统，以最小化对正常细胞的潜在损害，从而减少副作用。
可以根据个体体内活性成分积累的测量值来计算最佳给药方案。通常，剂量为约1ng/
kg体重至约1,000mg/kg体重，并且可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次。本领域普
通技术人员可以容易地确定最佳剂量、给药方法学和重复频率。本领域技术人员将能够根
据本领域已知的已建立的方案和本文的公开内容来确定将氯硝柳胺类似物和抗雄激素药
物的组合施用于人的最佳剂量。
在本发明的一些实施方案中，以治疗有效剂量向患者施用药物组合物或药物以预防、
治疗或控制癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症)。将药物组合
物或药物以足以在患者中引起有效的治疗或诊断反应的量施用于患者。有效的治疗或诊断
反应是至少部分地阻止或减缓癌症的症状或并发症的反应。足以实现此目的的量被定义为
“治疗有效剂量”。
在成功治疗后，可能需要使个体进行维持治疗以预防癌症的复发(例如，前列腺癌、乳
腺癌、雄激素非依赖性癌症、耐药性癌症)。
有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文提供的详细公开
内容。通常，通过首先施用低剂量或少量组合物，然后逐渐增加所施用的量或剂量，直至在
治疗的个体中观察到所需的效果(具有最小毒副作用或没有毒副作用)来确定组合物的药
效量或有效量。
根据患者所需的和耐受的剂量和频率施用组合物的单次或多次给药。无论如何，应提
供足够量的本发明组合物以有效治疗患者。通常，剂量足以预防、治疗或改善疾病的症状或
体征，而不会对患者产生不可接受的毒性。
F.试剂盒
另一方面，本发明提供了用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒。该试剂盒可用于治疗
任何癌症，其一些非限制性实例包括前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、
胰腺癌、肺癌(例如、间皮瘤、肺腺癌)、食道癌、头颈癌、肉瘤、黑素瘤、甲状腺癌、CNS癌症(例如神经母细胞瘤、成胶质细胞瘤)、慢性淋巴细胞白血病和本文所述的任何其他癌症。该试
剂盒还适用于治疗雄激素非依赖性、去势抵抗性、去势复发性、激素抵抗性、耐药性和转移
性去势抵抗性癌症。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物。在一些其他实
施方案中，试剂盒还包含药学上可接受的载体。在特定实施方案中，氯硝柳胺类似物是根据
通式(I)的化合物：
在一些实施方案中，R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R4选自H和C(O)R5，其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取
1
代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R 是
CX3或NO2。在其他情况下，R2是H或X。在一些其他情况下，R3是X。在其他情况下，R5是C2烷基或C2烯基。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)并且R2是H或X(例如Cl)。在一些实施方案中，R1
是CX3，R3是X(例如Cl)并且R4是H。在一些实施方案中，R1是CX3(例如CF3)，R2是H或X(例如
3 4 1 4
Cl)，R是X(例如Cl)并且R是H。在一些实施方案中，R是NO2并且R是
在一些实施方案中，R2是X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R3是
X(例如Cl)并且R4是 在一些实施方案中，R1是NO2，R2是X(例如Cl)，R3
是X(例如Cl)并且R4是
在一些实施方案中，当R2是Cl、R3是Cl并且R4是H时，R1不是NO2。在一些实施方案中，当R1
是NO2、R3是Cl并且R4是H时，R2不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R4是H时，R3不是Cl。在一些实施方案中，当R1是NO2、R2是Cl并且R3是Cl时，R4不是H。
在一些实施方案中，通式(I)化合物选自 ：
及其组合。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是根据通式(II)的化合物：
在一些实施方案中，R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；R8选自X、CX3、NO2、OH
和烷氧基；R9选自H和C(O)R10，其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和
任选取代的C2-18炔基；其中每个X是独立选择的卤素。在某些情况下，R6和/或R7是CX3。在一
些其他情况下，R8是X。在一些情况下，R9是H。在特定情况下，X独立地选自F和Cl。
在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)
并且R8是X(例如Cl)。在一些实施方案中，R6和R7是CX3(例如CF3)并且R9是H。在一些实施方案
中，通式(II)化合物是
在一些实施方案中，当R7是F、R8是Cl并且R9是H时，R6不是F。在一些实施方案中，当R6是
8 9 7
F、R是Cl并且R是H时，R不是F。
在一些实施方案中，通式(I)化合物或通式(II)化合物不是氯硝柳胺和化合物1、2、8、
17、29、34或35。
在一些实施方案中，氯硝柳胺类似物是通式(I)化合物和通式(II)化合物。
在一些实施方案中，抗雄激素药物是非甾体类雄激素受体(AR)拮抗剂、CYP17A1抑制剂
或它们的组合。合适的非甾体类AR拮抗剂包括比卡鲁胺(Casodex(康士得)、Cosudex、
Calutide、Kalumid)、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺(ARN-509、JNJ-56021927)、多拉米胺、恩
杂鲁胺(Xtandi(安可坦))、西咪替丁和托匹鲁胺。合适的CYP17A1抑制剂包括醋酸阿比特龙
(Zytiga)，酮康唑和seviteronel。抗雄激素药物的任何组合可用于本发明的试剂盒中。
可以在试剂盒中提供用于实施本发明的各种方法的材料和试剂以便于实施所述方法。
如本文所用，术语“试剂盒”包括促进过程、测定、分析或操作的制品的组合。特别地，本发明
的试剂盒可在广泛的应用中具有实用性，包括例如诊断、预后、治疗等。
试剂盒可包含化学试剂以及其他组分。此外，本发明的试剂盒可包括但不限于试剂盒
使用者的说明书、用于样品采集和/或纯化的装置和试剂、用于产物收集和/或纯化的装置
和试剂、用于施用氯硝柳胺类似物和/或抗雄激素药物的装置和试剂、用于测定生物标志物
水平的装置和试剂、样品管、支撑物、托盘、支架、盘子、板、溶液、缓冲液或其他化学试剂，用于标准化、归一化和/或对照样品的合适的样品。也可以将本发明的试剂盒包装以便于储存
和安全运输，例如，包装在具有盖子的盒子中。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于检测生物标志物的阴性和阳性对照样品。
合适的生物标志物的非限制性实例包括前列腺特异性抗原(PSA)、α-甲基酰基-CoA消旋酶
(AMACR)、内皮糖蛋白(CD105)、Engrailed-2(EN-2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、小窝蛋
白-1、白细胞介素-6(IL-6)、CD147、S100蛋白家族的成员(例如，S100A2、S100A4、S100A8、
S100A9、S100A11)、膜联蛋白A3(ANXA3)、人激肽释放酶-2(KLK2)、TGF-β1、β-微精原蛋白
(MSMB)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)、HER2、Ki67、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E。
在一些情况下，一种或多种生物标志物包含PSA。在一些实施方案中，阴性对照样品获自未
患癌症的个体或个体群。在其他实施方案中，阳性对照样品获自患有癌症的个体或个体群。
在一些实施方案中，试剂盒包含用于制备样品中的一种或多种生物标志物的滴定曲线的样
品，以帮助评估测试生物样品中的一种或多种生物标志物的定量水平。
实施例
将通过具体实施例更详细地描述本发明。提供以下实施例仅用于示例性说明目的，并
不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易认识到可以改变或修改各种非关键
参数以产生基本相同的结果。
实施例1.雄激素受体变体的小分子抑制剂
该实施例描述了几种作为小分子雄激素受体(AR)调节剂起作用的氯硝柳胺类似物的
鉴定。所述化合物在体外和体内显著抑制AR-V7表达并抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤
生长并诱导耐药性前列腺癌细胞的凋亡。此外，一些化合物阻断了突变的AR的活性，所述突
变的AR包括K581R、L702H、T878A和V716M变体，这些变体赋予了对抗雄激素疗法如恩杂鲁胺
的耐药性。此外，一些化合物能够与恩杂鲁胺、阿比特龙、比卡鲁胺协同作用并改善它们的
治疗活性。
引言
前列腺癌是与癌症相关的死亡的第二大主要原因，也是男性中最常诊断的癌症，仅在
美国每年估计有220,800例新增病例(1,2)。前列腺癌的一线治疗旨在通过使用雄激素阻断
疗法(ADT)来降低循环雄激素水平。这是通过两种方法之一实现的：外科双侧睾丸切除术，
其抑制睾丸的雄激素合成，或使用去势诱导药物来降低雄激素水平和雄激素受体(AR)激
活。虽然ADT最初有效减少前列腺癌生长，但经过两到三年的治疗后，大多数患者会发展为
去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，即使存在去势水平的雄激素，肿瘤生长也会继续进行。在疾病
进展的这个阶段，治疗选择的数量目前是有限的，但是大量研究的焦点是改善患者的结果
(3)。
临床上，CRPC被定义为在存在去势水平的循环睾酮的情况下前列腺癌的进展(4,5)。通
常，AR过度表达、过度活化或两者都导致下游靶基因的转录，尽管患者具有可忽略的雄激素
水平，但该靶基因最终促进肿瘤进展。从激素敏感的前列腺癌导致CRPC发展的机制被广泛
研究。鉴定的机制包括AR扩增和突变、AR共激活因子和共抑制因子修饰、异常激活和/或翻
译后修饰、AR剪接变体和改变的类固醇生成，其中每一种都导致AR激活和信号传导的增加。
这可能是由于增加的雄激素量、增强的对现有雄激素的反应以及通过非经典配体或根本不
通过配体的AR的激活，以及其他方法(6-10)。
目前通过施用紫杉烷(例如多西紫杉醇和卡巴他赛)或通过用下一代抗雄激素疗法(包
括恩杂鲁胺和阿比特龙)来实现CRPC的治疗，紫杉烷通过破坏微管功能来中断快速分裂细
胞的生长。抗雄激素的主要机制是通过拮抗受体直接抑制AR激活，或通过阻断雄激素合成
间接抑制AR激活。不幸的是，据估计三分之一给予阿比特龙的患者和四分之一给予恩杂鲁
胺的患者对使用这些药物的初始治疗没有反应(11,12)。此外，在开始治疗的12-24个月内，
即使最初对所述药物有反应的人也经常产生耐药性。
鉴于几种潜在的耐药途径，对抗雄激素药物如恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性的发展实
际上是不可避免的(13,14)。最近的研究已将AR可变剪接、特别是剪接变体AR-V7与恩杂鲁
胺/阿比特龙耐药性的发展联系起来(15-18)。AR剪接变体可以通过基因组重排和涉及剪接
因子如hnRNPAs的可变剪接来形成(19,20)。最常见的是，AR变体缺乏C-末端配体结合结构
域，这些截短版的AR通常是配体非依赖性的，并导致组成型激活和不受控制的下游AR信号
传导(21-25)。这些AR变体的表达与对阿比特龙和恩杂鲁胺的耐药性强烈相关，尽管没有充
分的研究，但也与多西紫杉醇耐药性相关。在变体中，AR-V7似乎特别重要。已经显示，与不
表达AR-V7的男性相比，用恩杂鲁胺或阿比特龙治疗的患者中的AR-V7表达与显著更低的
PSA反应、更短的无进展时间和更低的总体存活相关(26)。靶向AR信号传导，尤其是靶向AR
变体，将改善目前的针对晚期前列腺癌的抗雄激素疗法。
小分子调节剂的合成：氯硝柳胺类似物
以前已经确定氯硝柳胺(由FDA批准用于治疗绦虫感染的驱虫剂)抑制AR变体如AR-V7
表达并克服对恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性(27)。在这项工作中，合成了几种氯硝柳胺的
类似物以鉴定用于治疗晚期前列腺癌的更有效的AR变体抑制剂。
化合物7和30的合成显示于图1A中。使用一步反应合成两种化合物。对于化合物7的合
成，使用2M三氯化磷的二氯甲烷溶液，将市售的5-氯水杨酸与2-氯-4-三氟甲基苯胺偶联。
使用二甲苯作为反应溶剂，将反应混合物回流5小时(或直至反应物消失)。转移热溶液并使
其降至室温，使产物从溶液中沉淀出。然后将沉淀物重新溶解在乙酸乙酯中并重结晶，得到
纯的化合物7。
对于化合物30的合成，将氯硝柳胺溶解在无水CH3CN中。在-10℃下加入DIPEA(N,N-二
异丙基乙胺)和DMAP(4-二甲基氨基吡啶)。搅拌30分钟后，加入丙酰氯，将反应混合物在0℃
下搅拌2小时。然后将水加入反应混合物中，用乙酸乙酯萃取混合物。然后合并有机相，依次
用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后减压蒸发，得到淡黄色固体。用柱色谱法纯化化合物，
得到化合物30。用与化合物7相同的程序合成化合物5和11，以与化合物30类似的方式得到
化合物31。新合成的化合物的化学结构显示于图1B和1C中。
小分子调节剂作为AR变体的有效抑制剂的鉴定
测定了合成的小分子调节剂对AR和AR变体表达的作用。用不同化合物处理CWR22Rv1前
列腺癌细胞。关于AR和AR变体表达，分析蛋白质裂解物。图2A显示化合物5、7、11、30和31抑
制AR和AR-V7表达。相反，化合物1、2、8、17、29、34和35对AR和AR变体的表达水平没有作用。
进一步的研究表明化合物7、30和31以剂量依赖性方式抑制AR和AR-V7表达(图2B)。
小分子调节剂抑制AR-V7介导的转录活性
为了确定这些化合物对AR-V7转录活性的作用，在用氯硝柳胺类似物处理的过量表达
AR-V7的C4-2前列腺癌细胞(C4-2-V7)中测量PSA蛋白质表达水平。如图3所示，化合物7、30
和31抑制PSA表达，化合物31显示出最强的作用。此外，化合物7、30和31还增强了恩杂鲁胺
介导的PSA抑制(图3)。此外，使用PSA-luc作为报道分子确定对AR转录活性的作用。将LNCaP
细胞与或不与AR-V7一起用PSA-luc共转染，并用化合物处理。如图4所示，在不存在AR-V7的
情况下，恩杂鲁胺和各种氯硝柳胺类似物抑制雄激素(DHT)诱导的PSA-luc活性。然而，仅化
合物7、30和31而非恩杂鲁胺抑制AR-V7介导的PSA-luc活性。这些数据显示化合物7、30和31
但不是恩杂鲁胺抑制AR-V7介导的转录活性。
小分子调节剂阻断突变的AR转录活性
AR中的突变的出现已经显示出驱动对抗雄激素疗法的耐药性。在HEK293细胞中在反式
激活测定中研究了抗雄激素和氯硝柳胺类似物对突变的AR的作用，该HEK293细胞用编码相
应的突变的AR和雄激素响应性荧光素酶报告基因构建体的表达载体瞬时转染。比卡鲁胺
(Bica)、恩杂鲁胺(Enza)、ARN509(ARN)、氯硝柳胺(Nic)和化合物7和31阻断野生型AR反式
激活。T878A、K581R、L702H和V716M AR突变将比卡鲁胺从拮抗剂转换为激动剂，而恩杂鲁胺
和ARN509对阻断这些突变的AR的转录活性没有作用。然而，氯硝柳胺和化合物7和31显著阻
断了所有测试的突变的AR和AR-V7的反式激活(图5)。
氯硝柳胺类似物在体外抑制前列腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡
为了检查这些所鉴定的小分子调节剂对耐药性前列腺癌细胞生长的作用，用阿比特
龙、恩杂鲁胺、ARN509或增加剂量的氯硝柳胺、化合物7或化合物31处理CWR22Rv1和C4-2B
MDVR细胞48小时，之后计算细胞数。如图6所示，阿比特龙(AA)、恩杂鲁胺(Enza)和ARN509
(ARN)不抑制任一细胞系中的细胞生长。然而，氯硝柳胺(NIC)和化合物7和31能够以剂量依
赖性方式抑制细胞生长。下图显示了阿比特龙、恩杂鲁胺、ARN509、氯硝柳胺和化合物7和31
的时间依赖性生长作用。
为进一步检查这些化合物是否影响前列腺癌细胞生长，CWR22Rv1、C4-2B MDVR、C4-2B
AbiR和C4-2-V7细胞用DMSO或0.5μM氯硝柳胺或其中一种氯硝柳胺类似物处理48小时，随后
测定细胞数。如图7所示，0.5μM氯硝柳胺和氯硝柳胺类似物显著抑制前列腺癌细胞的细胞
生长。此外，恩杂鲁胺(MDV)与氯硝柳胺或类似物化合物7、30和31的组合进一步抑制细胞增
殖。为了进一步检查这些化合物的抗癌作用，进行了ELISA细胞死亡测定。如图8所示，氯硝
柳胺显著诱导前列腺癌细胞的细胞凋亡，化合物7、30和31进一步增强了细胞凋亡的诱导。
恩杂鲁胺(MDV)与这些化合物的组合进一步增加了凋亡细胞死亡。总之，这些结果显示化合
物7、30和31抑制前列腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡，并进一步增强恩杂鲁胺在耐药性前列
腺癌细胞中的活性。
鉴定与抗雄激素药物协同作用的氯硝柳胺类似物
由于AR-V7严重参与了驱动对抗雄激素如恩杂鲁胺和阿比特龙的耐药性，因此假设具
有抑制AR-V7能力的化合物将与抗雄激素协同作用并改善其在耐药性前列腺癌中的治疗活
性。为了验证这一假设，测定了氯硝柳胺类似物与抗雄激素如恩杂鲁胺和阿比特龙组合时
对细胞生长的作用。将化合物30和31(二者均抑制AR-V7表达)与化合物1和34(二者均未抑
制AR-V7表达)比较它们对耐药性前列腺癌细胞生长的作用。如图9所示，CWR22Rv1细胞对恩
杂鲁胺和阿比特龙都有耐药性。单独的化合物1和单独的化合物34都不能抑制CWR22Rv1细
胞的细胞生长，这些化合物与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合也不能抑制CWR22Rv1细胞的生
长。相反，化合物30或31与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合显著抑制CWR22Rv1细胞的生长(图
9)。用恩杂鲁胺在耐药性C4-2BMDVR细胞中观察到类似的结果，其中化合物30和化合物31而
不是化合物1和化合物34能够与恩杂鲁胺或阿比特龙协同作用(图10)。这些结果表明化合
物30和31可以特异性地用于与抗雄激素药物(例如恩杂鲁胺、阿比特龙)组合以克服对抗雄
激素疗法的耐药性。还在恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性CWR22Rv1细胞中，与恩杂鲁胺或阿比特
酮组合测试了化合物7和11(两者都抑制AR-V7表达)vs化合物2和17(二者均未抑制AR-V7表
达)。如图11所示，单独的化合物2和单独的化合物17都不能抑制CWR22Rv1细胞的生长，这些
化合物中的任何一个与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合也不能抑制CWR22Rv1细胞的生长。相
反，化合物7或11与恩杂鲁胺或阿比特龙的组合能够显著抑制CWR22Rv1细胞的生长。总的来
说，证明了具有抑制AR-V7表达能力的化合物(例如，化合物7、11、30和31)可以与恩杂鲁胺
或阿比特龙协同作用，而不能抑制AR-V7表达的化合物(例如，化合物1、2、17和34)不能与恩
杂鲁胺或阿比特龙协同作用。
接下来确定能够与恩杂鲁胺和阿比特龙协同作用的选择性化合物是否也可以与比卡
鲁胺协同作用。单独的化合物1、7、30、31或34都不能抑制CWR22Rv1细胞生长(图12)。化合物
1和34与比卡鲁胺的组合不能抑制细胞生长。然而，化合物7、30或31与比卡鲁胺的组合能够
显著抑制CWR22Rv1细胞的生长(图12)。这些结果表明，选择性化合物可与比卡鲁胺联合用
于治疗晚期耐药性前列腺癌细胞。
氯硝柳胺类似物体内抑制前列腺癌肿瘤生长
为了确定氯硝柳胺类似物是否能够在体内抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤细胞生
长，用化合物7处理CWR22Rv1肿瘤异种移植物。如图13A-13C所示，化合物7显著抑制肿瘤生
长而不抑制体重。分离蛋白质裂解物并通过蛋白质印迹分析AR和AR-V7表达。如图13D所示，
与对照相比，用化合物7处理显著抑制AR和AR-V7蛋白质表达。这些结果表明化合物7通过抑
制AR和AR-V7表达来抑制恩杂鲁胺/阿比特龙耐药性肿瘤生长。
小结
这些实验鉴定了几种氯硝柳胺类似物，其作为AR和AR-V7的小分子调节剂起作用并且
抑制耐药性前列腺癌肿瘤生长和诱导细胞凋亡。此外，化合物30和31被鉴定为能够与恩杂
鲁胺、阿比特龙和比卡鲁胺协同作用并改善它们对晚期前列腺癌的治疗活性。
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实施例2.氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物对全长雄激素受体和雄激素受体变体的抑
制
该实施例描述了所进行的一系列实验以进一步表征氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物
抑制全长雄激素受体(AR-FL)和各种雄激素受体(AR)变体(ARV)的表达和活性的能力。
小分子调节剂抑制全长雄激素受体(AR-FL)介导的和雄激素受体变体(ARV)介导的转
录活性
使用PSA-luc作为报道分子，评价氯硝柳胺类似物和抗雄激素药物对AR-FL和几种ARV
(即AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和AR-V12)的转录活性的作用。在有或没有AR-V1、AR-V3、AR-
V7、AR-V9或AR-V12的情况下，将C4-2B细胞与pcDNA共转染，以及在FBS条件下与PSA-E/P-荧
光素酶质粒共转染。在用DMSO、10μM阿比特龙(Abi)、20μM恩杂鲁胺(Enza)、20μM阿帕鲁胺
(ARN)、1μM氯硝柳胺(Nic)、1μM化合物7或1μM化合物31过夜处理后，检查PSA荧光素酶活性。
如图14所示，氯硝柳胺、化合物7和化合物31抑制ARV-介导的PSA-luc活性。特别地，这
些数据显示氯硝柳胺及其类似物抑制AR-FL-介导的和ARV-介导的转录活性二者。
小分子调节剂降低AR-V7蛋白质表达
为了确定小分子调节剂是否通过蛋白质降解来影响AR-V7蛋白质表达，用放线菌酮
(CHX)处理CWR22Rv1和C4-2B MDVR细胞，并测量AR-V7蛋白质的半衰期。
如图15A中所示的数据，在用或不用氯硝柳胺(Nic)、化合物7或化合物31的情况下，用
50μg/mL放线菌酮(CHX)处理CWR22Rv1细胞。在0、2、4和8小时后，收集全细胞裂解物并进行
蛋白质印迹法。然后计算AR-V7的半衰期。
如图15B中所示的数据，在用或不用蛋白酶体抑制剂MG132的情况下，用氯硝柳胺、化合
物7或化合物31处理CWR22Rv1细胞。随后，收集全细胞裂解物并进行蛋白质印迹法。
如图15C所示的数据，用Nic、化合物7或化合物31处理CWR22Rv1细胞。随后，用AR抗体免
疫沉淀全细胞裂解物，并用泛素和AR抗体进行印迹。
如图16A中所示的数据，在用或不用含氯硝柳胺、化合物7或化合物31的情况下，用50μ
g/mL放线菌酮处理C4-2B MDVR细胞。在0、2、4和8小时后，收集全细胞裂解物并进行蛋白质
印迹法。然后计算AR-V7的半衰期。
如图16B中所示的数据，在用或不用MG132的情况下，用氯硝柳胺、化合物7或化合物31
处理C4-2B MDVR细胞。随后收集全细胞裂解物并进行蛋白质印迹法。
如图16C中所示的数据，用氯硝柳胺、化合物7或化合物31处理C4-2B MDVR细胞。用AR抗
体免疫沉淀全细胞裂解物并用泛素和AR抗体进行印迹。
如图15和图16所示，氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31通过蛋白酶体-泛素化系
统降解AR变体。
小分子调节剂在耐药性前列腺癌中增强阿比特龙和阿帕鲁胺(ARN509)治疗
为了确定氯硝柳胺及其类似物是否增强阿比特龙和阿帕鲁胺治疗，在存在或不存在化
合物7的情况下，用阿比特龙或阿帕鲁胺的组合处理CWR22Rv1细胞。如图17A中所示的数据，
用DMSO、20μM阿帕鲁胺(ARN)、0.5μM化合物7或阿帕鲁胺和化合物7的组合处理CWR22Rv1细
胞。在第3天、第5天测定细胞生长。如图17B中所示的数据，用DMSO、5μM阿比特龙(ABI)、0.5μM化合物7或阿比特龙和化合物7的组合处理CWR22Rv1细胞。在第3天、第5天测定细胞生长。
如图17所示，化合物7显著增强阿比特龙和阿帕鲁胺治疗。
小分子调节剂在大鼠中口服给药后表现出比氯硝柳胺好的生物利用度
为了比较化合物7和化合物31与氯硝柳胺的生物利用度，以200mg/kg的剂量向体重为
约300克至约350克的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠口服施用(p.o.)氯硝柳胺、化合物7或
化合物31。在图18中所示的时间点(0分钟、15分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时)获得血液样品，并分离血浆用于LC-MS分析。如图18所示，与氯硝柳胺
的Cmax为1556nM相比，化合物7和化合物31的Cmax值分别达到9038nM和2685nM。化合物7、化合
物31和氯硝柳胺的药代动力学(PK)分析结果显示于表1中。这些数据表明化合物7和化合物
31显示出比氯硝柳胺更好的生物利用度。
表1.在大鼠血浆中小分子AR抑制剂的非房室PK分析
小分子调节剂通过口服给药体内抑制前列腺癌肿瘤生长
为了确定氯硝柳胺及其类似化合物7通过口服给药是否抑制肿瘤生长，用氯硝柳胺或
化合物7口服处理携带有前列腺癌患者来源的异种移植物(PDX)模型(LuCaP 35CR)肿瘤的
小鼠。
对于图19A中所示的数据，在雄性的去势SCID小鼠中建立LuCaP 35CR PDX模型。当肿瘤
体积达到约50-100mm3时，将小鼠随机分成三组，并口服施用对照(0.5％重量/体积(w/v)
Methocel(美多秀)A4M)、氯硝柳胺(Nic；150mg/kg)或化合物7(150mg/kg)，持续4周，在此期
间监测肿瘤生长。肿瘤和体重分别显示在图19B和19C中。测定小鼠血清中的PSA水平并显示
在图19D中。
如图19所示，化合物7显著抑制肿瘤生长而不抑制体重。从小鼠获得的血清中的PSA分
析显示PSA蛋白质表达被化合物7抑制。
小分子调节剂抑制乳腺癌细胞的生长
为了确定氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31是否抑制乳腺癌细胞的生长，用氯
硝柳胺、化合物7或化合物31处理MDA-MB-468和MCF-7细胞三天并测定细胞生长。如图20所
示，两种类似物均抑制乳腺癌细胞生长。
总之，氯硝柳胺及其类似物化合物7和化合物31抑制AR-FL和AR变体的蛋白质表达，以
及AR-FL-介导的和ARV-介导的转录活性。然而，与氯硝柳胺相比，类似物表现出优异的生物
利用度，并且在抑制肿瘤细胞生长方面更有效。特别地，化合物7比氯硝柳胺更大程度地减
少PDX模型中的肿瘤体积和血清PSA水平，并且与抗雄激素药物极大地协同作用以抑制肿瘤
细胞生长。
V.示例性实施方案
根据当前公开的主题提供的示例性实施方案包括但不限于权利要求书和以下实施方
案：
1.包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及
其中每个X是独立选择的卤素。
1
2.如实施方案1所述的组合物，其中R是CX3或NO2。
3.如实施方案1或2所述的组合物，其中R2是H或X。
4.如实施方案1至3中任一项所述的组合物，其中R3是X。
5.如实施方案1至4中任一项所述的组合物，其中R5是C2烷基或C2烯基。
6.如实施方案1至5中任一项所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
7.如实施方案1至6中任一项所述的组合物，其中所述通式(I)化合物选自：
及其组合。
8.如实施方案1至7中任一项所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄激
素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
9.如实施方案8所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂
鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
10.如实施方案1至9中任一项所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或其变
体的表达和/或活性。
11.如实施方案10所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以
及它们的组合。
12.如实施方案11所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/
或AR-V12剪接变体。
13.如实施方案12所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
14.如实施方案11所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述
突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
15.如实施方案1至14中任一项所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有效抑
制剂。
16.如实施方案15所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
17.如实施方案15或16所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细胞、转
移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势抵抗
性癌细胞以及它们的组合。
18.如实施方案1至17中任一项所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
19.预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的包含
抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以及
其中每个X是独立选择的卤素。
20.如实施方案19所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
21.如实施方案19或20所述的方法，其中R2是H或X。
22.如实施方案19至21中任一项所述的方法，其中R3是X。
23.如实施方案19至22中任一项所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
24.如实施方案19至23中任一项所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
25.如实施方案19至24中任一项所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
26.如实施方案19至25中任一项所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄
激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
27.如实施方案26所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩
杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
28.如实施方案19至27中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体或其变体的表达和/
或活性。
29.如实施方案28所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体以及
它们的组合。
30.如实施方案29所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12剪接变体。
31.如实施方案30所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
32.如实施方案29所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突
变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
33.如实施方案19至32中任一项所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
34.如实施方案19至33中任一项所述的方法，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌症、
转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌症
以及它们的组合。
35.如实施方案34所述的方法，其中降低或逆转所述癌症的雄激素非依赖性、去势抵抗
性或激素抵抗性。
36.如实施方案19至35中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的
载体。
37.如实施方案19至36中任一项所述的方法，其中同时给予所述抗雄激素药物和所述
通式(I)化合物。
38.如实施方案19至36中任一项所述的方法，其中依序给予所述抗雄激素药物和所述
通式(I)化合物。
39.如实施方案19至38中任一项所述的方法，其中所述个体未患有癌症。
40.如实施方案19至38中任一项所述的方法，其中治疗所述个体导致所述癌症的一种
或多种症状的改善。
41.如实施方案19至40中任一项所述的方法，其中在将所述抗雄激素药物和所述通式
(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从所述个体中获得测试样品。
42.如实施方案41所述的方法，其中所述测试样品包含组织、血液或它们的组合。
43.如实施方案42所述的方法，其中所述测试组织样品包含癌组织。
44.如实施方案41至43中任一项所述的方法，其中在所述测试样品中测定一种或多种
生物标志物的水平。
45.如实施方案44所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性抗
原(PSA)。
46.如实施方案44或45所述的方法，其中将所述测试样品中的一种或多种生物标志物
的水平与参考样品中的所述一种或多种生物标志物的水平进行比较。
47.如实施方案46所述的方法，其中所述参考样品是在将所述抗雄激素药物和所述通
式(I)化合物施用于所述个体之前和/或之后从相同个体中获得的正常血液或组织。
48.如实施方案46所述的方法，其中所述参考样品获自不同个体或个体群体。
49.如实施方案46或48所述的方法，其中所述测试样品中的PSA水平高于所述参考样品
中的PSA水平，并且其中在将所述抗雄激素药物和所述通式(I)化合物施用于所述个体之前
获得所述测试样品。
50.如实施方案45至49中任一项所述的方法，其中将所述抗雄激素药物和所述通式(I)
化合物施用于所述个体导致与在施用前从所述个体获得的测试样品相比，在施用后从所述
个体获得的测试样品中的所述PSA水平降低。
51.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄激
素受体或所述细胞与治疗有效量的包含抗雄激素药物和通式(I)化合物的组合物接触：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R3选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
4 5
R选自H和C(O)R ，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且
其中每个X是独立选择的卤素。
52.如实施方案51所述的方法，其中R1是CX3或NO2。
53.如实施方案51或52所述的方法，其中R2是H或X。
54.如实施方案51至53中任一项所述的方法，其中R3是X。
55.如实施方案51至54中任一项所述的方法，其中R5是C2烷基或C2烯基。
56.如实施方案51至55中任一项所述的方法，其中X独立地选自F和Cl。
57.如实施方案51至56中任一项所述的方法，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
58.如实施方案51至57中任一项所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类雄
激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
59.如实施方案58所述的方法，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩杂
鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
60.如实施方案51至59中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体反式激活。
61.如实施方案51至60中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体表达。
62.如实施方案51至61中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体介导的转录活性。
63.如实施方案51至62中任一项所述的方法，其中抑制雄激素受体变体的表达和/或活
性。
64.如实施方案63所述的方法，其中抑制所述雄激素受体变体对前列腺特异性抗原
(PSA)启动子的募集。
65.如实施方案63或64所述的方法，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体
以及它们的组合。
66.如实施方案65所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9和/或
AR-V12剪接变体。
67.如实施方案66所述的方法，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
68.如实施方案65所述的方法，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所述突
变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
69.如实施方案51至68中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
70.如实施方案69所述的方法，其中所述癌细胞是转移性癌细胞。
71.如实施方案69或70所述的方法，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
72.如实施方案69至71中任一项所述的方法，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌
细胞、去势抵抗性癌细胞、激素抵抗性癌细胞以及它们的组合。
73.如实施方案72所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞的雄激素非依赖性、
去势抵抗性和/或激素抵抗性。
74.如实施方案69至73中任一项所述的方法，其中使所述癌细胞对所述抗雄激素药物
再敏化。
75.如实施方案69至73中任一项所述的方法，其中降低、减少或逆转所述癌细胞对所述
抗雄激素药物的耐药性。
76.如实施方案69至75中任一项所述的方法，其中抑制所述癌细胞的浸润能力和/或所
述癌细胞的迁移能力。
77.如实施方案69至76中任一项所述的方法，其中抑制所述癌细胞的生长和/或形成集
落的能力。
78.如实施方案51至77中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的
载体。
79.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含抗雄激素药物和通式(I)化合物：
其中：
R1选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R2选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
3
R选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R4选自H和C(O)R5，
其中R5选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；并且
其中每个X是独立选择的卤素。
1
80.如实施方案79所述的试剂盒，其中R是CX3或NO2。
81.如实施方案79或80所述的试剂盒，其中R2是H或X。
82.如实施方案79至81中任一项所述的试剂盒，其中R3是X。
83.如实施方案79至82中任一项所述的试剂盒，其中R5是C2烷基或C2烯基。
84.如实施方案79至83中任一项所述的试剂盒，其中X独立地选自F和Cl。
85.如实施方案79至84中任一项所述的试剂盒，其中所述通式(I)化合物选自：
以及它们的组合。
86.如实施方案79至85中任一项所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自非甾体类
雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
87.如实施方案86所述的试剂盒，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、恩
杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
88.如实施方案79至87中任一项所述的试剂盒，还包含药学上可接受的载体。
89.如实施方案79至88中任一项所述的试剂盒，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。
90.如实施方案79至89中任一项所述的试剂盒，其中所述癌症选自雄激素非依赖性癌
症、转移性癌症、去势抵抗性癌症、去势复发性癌症、激素抵抗性癌症、转移性去势抵抗性癌
症以及它们的组合。
91.如实施方案79至90中任一项所述的试剂盒，还包含使用说明书。
92.如实施方案79至91中任一项所述的试剂盒，还包含用于将所述抗雄激素药物和/或
所述通式(I)化合物施用于所述个体的用具和/或一种或多种试剂。
93.如实施方案79至92中任一项所述的试剂盒，还包含用于从所述个体中获得样品的
用具和/或一种或多种试剂。
94.如实施方案93所述的试剂盒，还包含用于测定所述样品中的一种或多种生物标志
物的水平的用具和/或一种或多种试剂。
95.如实施方案94所述的试剂盒，其中所述一种或多种生物标志物包含前列腺特异性
抗原(PSA)。
96.如实施方案79至95中任一项所述的试剂盒，还包含阴性和/或阳性对照样品。
97.包含抗雄激素药物和通式(II)化合物的组合物：
其中：
R6和R7独立地选自H、X、CX3、NO2、OH和烷氧基；
R8选自X、CX3、NO2、OH和烷氧基；并且
R9选自H和C(O)R10，
其中R10选自H、任选取代的C1-18烷基、任选取代的C2-18烯基和任选取代的C2-18炔基；以
及
其中每个X是独立选择的卤素。
6 7
98.如实施方案97所述的组合物，其中R和/或R是CX3。
99.如实施方案97或98所述的组合物，其中R8是X。
100.如实施方案97至99中任一项所述的组合物，其中R9是H。
101.如实施方案97至100中任一项所述的组合物，其中X独立地选自F和Cl。
102.如实施方案97至101中任一项所述的组合物，其中所述通式(II)化合物为
103.如实施方案97至102中任一项所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自非甾体
类雄激素受体拮抗剂、CYP17A1抑制剂以及它们的组合。
104.如实施方案103所述的组合物，其中所述抗雄激素药物选自比卡鲁胺、阿帕鲁胺、
恩杂鲁胺、醋酸阿比特龙以及它们的组合。
105.如实施方案97至104中任一项所述的组合物，其中所述组合物抑制雄激素受体或
其变体的表达和/或活性。
106.如实施方案105所述的组合物，其中所述雄激素受体变体选自剪接变体、突变变体
以及它们的组合。
107.如实施方案106所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V1、AR-V3、AR-V7、AR-V9
和/或AR-V12剪接变体。
108.如实施方案107所述的组合物，其中所述剪接变体是AR-V7剪接变体。
109.如实施方案106所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列，所
述突变变体包含一个或多个选自K581R、L702H、T878A、V716M以及它们的组合的突变。
110.如实施方案97至109中任一项所述的组合物，其中所述组合物是癌细胞增殖的有
效抑制剂。
111.如实施方案110所述的组合物，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞或乳腺癌细胞。
112.如实施方案110或111所述的组合物，其中所述癌细胞选自雄激素非依赖性癌细
胞、转移性癌细胞、去势抵抗性癌细胞、去势复发性癌细胞、激素抵抗性癌细胞、转移性去势
抵抗性癌细胞以及它们的组合。
113.如实施方案97至112中任一项所述的组合物，还包含药学上可接受的载体。
114.用于预防或治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向个体施用治疗有效量的实施
方案97至113中任一项所述的组合物。
115.用于抑制细胞中的雄激素受体的表达和/或活性的方法，所述方法包括使所述雄
激素受体或所述细胞与治疗有效量的实施方案97至113中任一项所述的组合物接触。
116.用于预防或治疗个体的癌症的试剂盒，其包含实施方案97至113中任一项所述的
组合物。
应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于示例性说明目的，并且可以建议本领
域技术人员对其进行各种修改或改变，并且所述各种修改或改变包括在本申请的精神和权
限内以及所附权利要求的范围内。出于所有目的，本文引用的所有出版物/公开、专利、专利
申请和序列登录号均通过引用以它们的整体并入本文。
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