食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
专利汇可以提供食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了食品中麸质过敏原的胶体金 免疫层析 试纸 条及其制备方法，该层析试纸条包括依次连接的吸 水 垫、 硝酸 纤维 素膜、金标垫和样品垫，还可以包括承载 底板 ；硝酸 纤维素 膜上设有检测线、 抗原 线和质控线，金标垫上固定一种抗麸质蛋白单克隆 抗体 -胶体金标记物，硝酸纤维素膜的检测线上包被另一种捕获麸质蛋白的单克隆抗体，抗原线包被麸质蛋白，质控线包被羊抗鼠IgG；当试纸条出现一条质控线、一条抗原线是阴性，出现检测线（不管有没有抗原线）都是阳性，与现有麸质蛋白过敏原检测技术相比，灵敏度高，特异性强，还可以对过敏原的浓度做出直观的评价，可直接用于食品检测。，下面是食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法专利的具体信息内容。
1.食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，包括依次组装的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫，所述的金标垫上固定一种抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上依次包被有与胶体金标记的抗麸质蛋白单克隆抗体配对的另一种抗麸质蛋白单克隆抗体检测线、抗原线和羊抗鼠IgG质控线。
2.如权利要求1所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，还包括承载吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫的底板。
3.如权利要求1或2所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫之间相互交叠连接。
4.如权利要求1或2所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，
其特征在于，所述的一种抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物中单克隆抗体的浓度为2-30μg/mL。
5.如权利要求1或2 所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的检测线中另一种抗麸质蛋白单克隆抗体的浓度为0.5-3.0mg /mL。
6.如权利要求1或2所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗原线是由pH为5.0-7.0，浓度为0.01-0.2 mol/L的含有麸质蛋白的CPBS溶液作为包被液划膜得到，其中麸质蛋白的浓度为500-5000ppm。
7.如权利要求1或2所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的质控线中羊抗鼠IgG的浓度为0.5-3.0mg/mL。
8.如权利要求1-7任一所述的食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将抗麸质蛋白单克隆抗体中的一种作为标记抗体，与胶体金按照（0.02-0.30）：1的体积比例混匀，经纯化、浓缩后得一种抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物；
（2）将步骤（1）制备的胶体金标记物喷涂固定到金标垫上，在硝酸纤维素膜上包被检测线、抗原线、质控线，处理完毕后用37-65℃干燥1-24h，放入防潮柜中储存备用；
（3）试纸条的组装：
将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次组装或承载在底板上，即得所述的用于检测食品中麸质过敏原胶体金免疫层析纸条。
食品中麸质过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
（2）将步骤（1）制备的胶体金标记物喷涂固定到金标垫上，在硝酸纤维素膜上包被检测线、抗原线、质控线，处理完毕后用37-65℃干燥1-24h，放入防潮柜中储存备用；
（3）试纸条的组装：
将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次连接组装或承载在底板上，即得所述的用于检测食品中麸质过敏原胶体金免疫层析纸条。
图3为实施例1制备的麸质试纸条重复性测定结果图。
具体实施方式
（1）溶液配制：
柠檬酸三钠的配制：准确称取 0.1g 柠檬酸三钠，用超纯水溶解，并定容至 10mL，0.22μm滤膜过滤，现配现用；
氯金酸溶液配制：准确称取 1.0g 柠檬酸三钠，用超纯水溶解，并定容至 100mL，0.22μm滤膜过滤，棕色试剂瓶储存于4℃备用；
碳酸钾溶液的配制：准确称取1.38g碳酸钾，用超纯水溶解，并定容至 50mL，0.22μm滤膜过滤，4℃储存备用；
5％牛血清白蛋白 (BSA) 溶液的配制：准确称取0.5g碳酸钾，用超纯水溶解，并定容至
10mL，0.22μm滤膜过滤，4℃储存备用；
（2）胶体金的制备：
取250mL锥形瓶，加入99mL超纯水，再加入1mL1%氯金酸溶液，将其放在磁力搅拌器上，加热搅拌至沸腾，迅速加入1mL现配制的1%柠檬酸三钠溶液，继续加热至酒红色出现，颜色稳定后继续加热搅拌10min，冷却后用超纯水定容到100mL，4℃棕色瓶保存备用；
（3）一种抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物的制备及纯化：
取2ml胶体金溶液，加入8μL 0.2mol/L 的碳酸钾溶液，水平摇床上低速混匀；
将一对检测麸质蛋白的单克隆抗体中的一种作为标记抗体，取 12μg至胶体金溶液中，混匀30min，然后加入5％牛血清白蛋白 (BSA)至浓度为1%，混匀30min，得一种抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物；
将制得的抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物分装到2ml离心管中，在4℃、9000rpm条件下离心30min，接着加入等体积的Tris-HCl，在4℃，9000rpm条件下离心30min，除去上清，加入复溶液，浓缩至原体积的1/10倍，4℃保存备用；
（4）将抗麸质蛋白单克隆抗体-胶体金标记物固定到金标垫上，处理完毕后用37℃干燥
2h，放入防潮柜中储存备用；
（5）硝酸纤维素膜的制备：
硝酸纤维素膜选自密理博公司，层压仪组装好后，分别划THC线；其中T线划浓度为
2.0mg/mL的另一种抗麸质蛋白单克隆抗体，H线划浓度为2000ppm的抗原液，该抗原液的溶剂为pH=6.2、0.1mol/L CPBS溶液， C线划2.0mg/mL的羊抗鼠IgG。包被后的硝酸纤维素膜送入干燥箱，37℃干燥3h，防潮柜中储存备用。
100ppm、10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0ppm，用实施例1制备的试纸进行检测，用样品稀释液作为阴性对照（0ppm），5min后观察结果，检测结果如图1所示。结果显示，1000000ppm为高浓度阳性，C线显色；100000-1000ppm为较高浓度阳性，TC 线显色；1-100ppm为阳性，THC显色；0ppm是阴性对照，HC线显色。该试纸条的灵敏度为1ppm。
1制备的试纸条进行检测，5min后观察结果，检测结果如图2所示。结果显示，碧根果、巴西坚果、花生、核桃、杏仁、榛子、鸡蛋在100ppm处均显示C线，该试纸与碧根果、巴西坚果、花生、核桃、杏仁、榛子、鸡蛋无交叉反应，显示出本试纸条具有良好的特异性。
100000ppm、10000ppm、1000ppm、100ppm、10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0ppm，分别用2个批次的试纸条进行检测，5min后观察结果，检测结果如图3所示。结果显示，2个批次的试纸条对比没有显著批间差异。
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