专利汇可以提供一种降钙素原(PCT)检测试剂盒及其制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种降 钙 素原(PCT)检测 试剂 盒 及其制备方法,包括盒体,所述盒体内腔的左端开设有样本稀释液放置槽,且样本稀释液放置槽的内腔注入有样本稀释液,所述盒体的顶端且位于样本稀释液放置槽的上端开设有凹槽,且凹槽内腔的左端通过合页活动连接有第二盖板。本发明依据双 抗体 夹心法原理,利用 免疫层析 技术定量检测人血清、 血浆 样本中降钙素原(PCT)的含量,样本中的降钙素原(PCT)与 荧光 标记抗降钙素原(PCT)抗体结合形成免疫复合物,免疫复合物自毛细管作用向上流动与测试区抗PCT抗体反应,经特定 波长 激发 光源 激发后在反应区产生荧光 信号 ,且信号的强弱与样本中降钙素原(PCT)的含量成正比。,下面是一种降钙素原(PCT)检测试剂盒及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种降钙素原(PCT)检测试剂盒,包括盒体(1),其特征在于:所述盒体(1)内腔的左端开设有样本稀释液放置槽(3),且样本稀释液放置槽(3)的内腔注入有样本稀释液(2),所述盒体(1)的顶端且位于样本稀释液放置槽(3)的上端开设有凹槽(4),且凹槽(4)内腔的左端通过合页活动连接有第二盖板(5),所述盒体(1)顶部的左端通过合页活动连接有第一盖板(9),且第一盖板(9)底部的中端嵌设有数据卡(6),所述盒体(1)内腔的右端开设有试剂卡放置槽(8),且试剂卡放置槽(8)的内腔放置有说明书(10)和试剂卡(7),所述试剂卡(7)包括试纸条(71)和塑料卡壳(72),且试纸条(71)包括底衬(714),所述底衬(714)的顶部固定连接有玻璃纤维样品垫(713)、硝酸纤维素膜(712)和吸水垫(711);所述玻璃纤维样品垫(713)和吸水垫(711)分别位于硝酸纤维素膜(712)的两侧,所述塑料卡壳(72)顶部的左端开设有加样口(721),塑料卡壳(72)顶部的右端开设有质控线口(723),塑料卡壳(72)的顶端且位于质控线口(723)的左端开设有检测线口(722),所述玻璃纤维样品垫(713)位于加样口(721)的下方,所述硝酸纤维素膜(712)位于检测线口(722)和质控线口(723)的下方。
2.根据权利要求1所述的一种降钙素原(PCT)检测试剂盒,其特征在于:所述样本稀释液(2)由0.1%Tween-20和0.05%叠氮钠的0.01MpH7.4的磷酸盐缓冲液组成。
3.根据权利要求1所述的一种降钙素原(PCT)检测试剂盒,其特征在于:所述硝酸纤维素膜(712)上有特定位置划线1.0mg/ml鼠抗降钙素原抗体和1.0mg/ml羊抗兔IgG抗体。
4.根据权利要求1所述的一种降钙素原(PCT)检测试剂盒,其特征在于:所述玻璃纤维样品垫(713)上喷有荧光微球偶联的鼠抗降钙素原包被抗体和荧光微球偶联的兔抗IgG抗体。
5.根据权利要求1所述的一种降钙素原(PCT)检测试剂盒,其特征在于:所述加样口(721)用“S”标识,质控线口(723)用“C”标识,检测线口(722)用“T”标识。
6.根据权利要求1至5任一项所述的一种降钙素原(PCT)检测试剂盒的制备方法,其特征在于:其制备方法包括以下步骤:
A、样品垫的前处理:将全血过滤膜样品垫浸泡在含有2%蔗糖、0.5%PVP10000的pH7.5
20mmol/L硼酸-硼砂缓冲液中进行处理,室温干燥后,按照每1.5×30cm2均匀喷洒150μL由
1%阻断剂、0.5%Tetronic1307和2%BSA水溶液组成的混合液,再次干燥后,在密封袋中干燥保存;
B、微球探针偶联液的制备:用10mg/mlEDC和50mg/mlNHS对荧光微球活化后,离心去除EDC和NHS,用pH6.0~7.0的50mMMES100W超声重悬,按照10μg~50μg/0.1mg量,向荧光微球分别加入PCT单克隆抗体、IgG单克隆抗体,然后将上述两种加入抗体后的荧光微球混匀后室温涡旋搅拌1h,离心洗涤2~3次,沉淀用荧光微球复溶液100W超声处理30s复溶,4℃保存;
C、微球探针样品垫的制备:用荧光微球复溶液分别稀释标记PCT单克隆抗体的荧光微球(Eu3+的聚苯乙烯乳胶微球),以及标记IgG单克隆抗体的荧光微球(Eu3+的聚苯乙烯乳胶微球),将这两种荧光微球混匀,喷到样品垫上,制备免疫层析试纸结合物垫,其中每毫克荧光微球标记的PCT克隆抗体和荧光微球标记的IgG克隆抗体均0.20mg,荧光复溶液中含有
2%BSA、0.1%PEG4000、5%海藻糖、5%蔗糖的pH8.010mmol/LTris-HCl缓冲液;
D、检测线和质控线的制备:用包被缓冲液稀释能与待测抗原PCT特异性结合的另一株单克隆抗体、以及羊抗兔IgG多克隆抗体,并将稀释后的两种抗体在所述的硝酸纤维素膜上依次平行地划线形成PCT检测线、质控线;抗体的浓度均为1.0mg/ml,用量为30μl/30cm;包被液中含有5%海藻糖,0.01MpH7.4的PBS;
E、试纸条(71)的组装:在底衬(714)上方粘贴玻璃纤维样品垫(713)、硝酸纤维素膜(712)及吸水垫(711);
F、试剂卡(7)的组装:将组装好的试纸条(71)切割成长条,并将其安装在塑料卡壳(72)底部卡槽中,盖上卡壳即成;
G、样本稀释液(2):含0.1%Tween-20和0.05%叠氮钠的0.01MpH7.4的磷酸盐缓冲液;
H、样本检测:①、使用合适量程的移液器吸取血清/血浆样本30μl或全血样本45μl,另取样本稀释液(2)适量与待测样本漩涡震荡混合5~10s,以使样本与样本稀释液(2)充分混匀;②、吸取混合后样本80μl,加入到试剂卡(7)的加样口(721)中,吸取及加样时注意不要产生明显气泡;③、将试剂卡(7)插入检测仪的检测槽,按“定时检测”键,检测仪将自动对试剂卡(7)进行扫描(严格控制时间15min);④、从检测仪上读取/打印检测结果;⑤、取出试剂卡(7),并按照具有潜在生物危害性废弃物进行处理。
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