治疗尿道恶性肿瘤的多特异性抗体
阅读：882发布：2021-03-31
专利汇可以提供治疗尿道恶性肿瘤的多特异性抗体专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种多特异性 抗体 或其 抗原 结合 片段 在 治疗 泌尿道赘 生物 ，尤其是治疗膀胱癌中的应用。此外，本发明还提供了包含该抗体的一种药用组合物和一种药盒。，下面是治疗尿道恶性肿瘤的多特异性抗体专利的具体信息内容。
1.一种分离的多特异性抗体或其抗原结合片段在泌尿道赘生物治疗中的应用，所述抗体或其抗原结合片段包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗癌相关和/或肿瘤相关抗原的特异性。
2.依据权利要求1的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段在全身或泌尿道局部施用，优选地采用灌注法。
3.依据权利要求1或权利要求2的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段在膀胱内部施用。
4.依据权利要求1至3任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中赘生物为一种原位赘生物或一种恶性赘生物，优选地该赘生物为一种恶性赘生物。
5.依据权利要求1至4任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物为一种膀胱上皮赘生物，优选地为膀胱上皮细胞癌。
6.依据权利要求1至5任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物选自以下所组成的组：（i）原位癌，优选地为尿道原位癌、膀胱原位癌、输尿管原位癌和/或肾盂原位癌；（ii）非肌层浸润性膀胱上皮癌，优选地位于肾盂、输尿管、尿道、膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管；（iii）肌层浸润性膀胱上皮癌，优选地位于肾盂、输尿管、尿道、膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管。
7.依据权利要求1至6任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物是一种位于泌尿道的淋巴瘤和/或肉瘤。
8.依据权利要求1至7任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物为一种下泌尿道赘生物。
9.依据权利要求8的抗体或其抗原结合片段的应用，其中下泌尿道赘生物选自以下所组成的组：（i）尿道原位癌和/或膀胱原位癌；（ii）位于尿道、膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管的非肌层浸润性膀胱上皮癌；（iii）位于尿道、膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管的肌层浸润性膀胱上皮癌。
10.依据权利要求8或9的抗体或其抗原结合片段的应用，其中下泌尿道赘生物为一种膀胱赘生物，优选地为一种膀胱原位癌或一种膀胱恶性赘生物。
11.依据权利要求10的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物选自以下所组成的组：（i）膀胱原位癌；（ii）位于膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管的非肌层浸润性膀胱上皮癌；（iii）位于膀胱三角、膀胱顶、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口和/或脐尿管的肌层浸润性膀胱上皮癌。
12.依据权利要求10或11的抗体或其抗原结合片段的应用，其中泌尿道赘生物选自：移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、小细胞癌以及一种体内其他部位的继发性癌，膀胱赘生物优选地为一种移行细胞癌。
13.依据权利要求1至12任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段为一种单克隆抗体。
14.依据权利要求1至13任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中T细胞表面抗原选自以下所组成的组：CD2，CD3，CD4，CD5，CD6，CD8，CD28，CD40L和CD44。
15.依据权利要求14的抗体或其抗原结合片段的应用，其中T细胞表面抗原为CD2或CD3，优选地T细胞表面抗原为CD3。
16.依据权利要求1至15任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中癌相关和/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，αvβ3整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30 CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2和细胞表面靶分子GC182，GT468或GT512。
17.依据权利要求1至15任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中癌相关和/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，αvβ3整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30 CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，CD133，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2和细胞表面靶分子GC182，GT468或GT512。
18.依据权利要求16或17的抗体或其抗原结合片段的应用，其中癌相关和/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19，CD20和CD33，优选地癌相关和/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：
EpCAM，HER2/neu，CEA，GD2，CD19，CD20和CD33，更优选地癌相关和/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，GD2和CD20，更优选地癌相关和/或肿瘤相关抗原是EpCAM。
19.依据权利要求18的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段含有一种抗CD3的第一特异性和一种抗癌相关和/或肿瘤相关抗原的第二特异性，所述抗癌相关和/或肿瘤相关抗原选自EpCAM，HER2/neu，CEA，GD2，CD19，CD20和CD33所组成的组。
20.依据权利要求19的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段包含选自抗EpCAM×抗CD3，抗CD20×抗CD3，抗HER2/neu×抗CD3，抗GD2×抗CD3以及抗CD19×抗CD3的两种特异性。
21.依据权利要求1至20任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段为一种双特异性抗体或其双特异性抗原结合片段。
22.依据权利要求1至21任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段为一种三功能抗体或其三功能抗原结合片段。
23.依据权利要求1至22任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段不包含一种Fc受体结合位点，尤其抗体或其抗原结合片段不包含一种Fc部分。
24.权利要求1至22任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段包含Fc受体结合位点。
25.依据权利要求24的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段包含一种Fc部分。
26.依据权利要求1至22以及权利要求24至25任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段为IgG样构型。
27.依据权利要求1至21任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段选自以下所组成的组：卡妥索单抗、lymphomun、厄妥索单抗、ektomab、博纳吐单抗和苏力图单抗，抗体优选地为卡妥索单抗。
28.依据权利要求1至27任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段在一个或多个治疗周期中施用。
29.依据权利要求28的抗体或其抗原结合片段的应用，其中一个治疗周期包含（i）一次单次剂量或（ii）一次初始剂量以及一次或多次后续剂量。
30.依据权利要求29的抗体或其抗原结合片段的应用，其中一个治疗周期包含一次初始剂量以及一次或多次后续剂量，而且其中一次初始剂量以及一次或多次后续剂量相同，或者其中一次或多次后续剂量多于初始剂量。
31.依据权利要求1至30任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段施用剂量范围为0.1μg至5000μg，优选为1μg至1000μg或者5μg至500μg，更优选为10μg至300μg，最优选为20μg至100μg。
32.依据权利要求29至31任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段的初始剂量范围为0.5μg至500μg，优选地为1μg至200μg，更优选地为5μg至100μg，更优选地为10μg至70μg。
33.依据权利要求29至32任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中首次的后续剂量超过施用的初始剂量，优选地超过1.1倍到10.0倍，更优选地超过1.2倍到5.0倍，任选地，第二次及每一次后续药剂超过初始剂量1.1倍到10.0倍，优选地超过1.5倍到5.0倍。
34.依据权利要求29至33任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中一个治疗周期内每次后续药剂都在前一药剂施用后1天至31天施用，优选地为前一药剂施用后1天至21天，更优选地为前一药剂施用后5天至10天，更优选地为前一药剂施用后7天。
35.依据权利要求1至34任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段以独立疗法进行施用。
36.依据权利要求1至34任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段与自体免疫效应细胞联合施用，优选地与外周血单个核细胞联合施用。
37.依据权利要求1至34和权利要求36任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段与抗癌药物联合施用。
38.依据权利要求37的抗体或其抗原结合片段的应用，其中所述抗癌药物为一种细胞毒性剂或一种抗癌抗体。
39.依据权利要求38的抗体或其抗原结合片段的应用，其中细胞毒性剂选自以下所组成的组：丝裂霉素、戊柔比星、多西他赛、塞替派、顺铂和吉西他滨。
40.依据权利要求38或39的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗癌抗体为一种单克隆单特异性抗癌抗体并优选地选自以下所组成的组：曲妥珠单抗、阿仑单抗、阿特朱单抗、巴文西亚、贝伐珠单抗、维汀-布仑妥昔单抗、西妥昔单抗、奥星-吉妥珠单抗、替伊莫单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、派姆单抗、利妥昔单抗和托西莫单抗。
41.依据权利要求38或39的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗癌抗体为一种单克隆单特异性抗癌抗体并优选地选自以下所组成的组：曲妥珠单抗、阿仑单抗、阿特朱单抗、巴文西亚、贝伐珠单抗、维汀-布仑妥昔单抗、西妥昔单抗、奥星-吉妥珠单抗、替伊莫单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、派姆单抗、利妥昔单抗和托西莫单抗。
42.依据权利要求37至41任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段与一种抗癌药物联合施用但不与免疫效应细胞联合施用。
43.依据权利要求37至42任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段在抗癌药物施用之前或者之后进行施用。
44.依据权利要求37至43任一项的抗体或其抗原结合片段的应用，其中抗体或其抗原结合片段以及抗癌药物（i）包含于同一组合物中，或（ii）分别施用。
45.一种药用组合物在泌尿道赘生物疾病治疗中的应用，所述药用组合物包含依据权利要求1至44任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
46.依据权利要求45的药用组合物的应用，其中抗体或其抗原结合片段为权利要求1至
27中任一项所定义。
47.依据权利要求45或46的药用组合物的应用，其中药用组合物包含一种药学上可接受的载体或赋形剂。
48.依据权利要求47的药用组合物的应用，其中药用组合物包含一种缓冲液，优选地为一种有机酸缓冲溶液，如柠檬酸盐酸缓冲液、丁二酸盐缓冲液和酒石酸盐缓冲液。
49.依据权利要求45至48任一项的药用组合物的应用，其中药用组合物包含为权利要求38至41任一项所定义的一种抗癌药物。
50.依据权利要求45至49任一项的药用组合物的应用，其中药用组合物以一种冻干粉或一种液体形态存在且优选地为一种水溶液。
51.依据权利要求45至50任一项的药用组合物的应用，其中药用组合物的酸碱值范围为6.5到8.2，优选地为7.0到7.8，更优选地为7.2到7.6，更优选地为7.4。
52.一种药盒，包含（i）权利要求1至27任一项定义的抗体或其抗原结合片段或者权利要求45至51任一项定义的药用组合物，和（ii）一种附有优选地通过泌尿道局部施用的治疗泌尿道赘生物的指导说明的包装说明书或标签。
53.依据权利要求52的药盒，其用于预防和/或治疗泌尿道赘生物。
54.一种通过施用多特异性抗体或其抗原结合片段对患有泌尿道赘生物的对象进行治疗的方法，所述抗体或其抗原结合片段包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗肿瘤相关细胞表面抗原的特异性。
55.依据权利要求54的治疗方法，其中抗体或其抗原结合片段为权利要求1至27任一项所定义。
56.依据权利要求54或55的治疗方法，其中如权利要求45至51任一项所定义的药用组合物被施用。
57.依据权利要求54至56任一项中的治疗方法，其中抗体或其抗原结合片段如权利要求28至44任一项所定义的方式被施用。
治疗尿道恶性肿瘤的多特异性抗体
[0002] 泌尿道赘生物是世界上发病率增长最快的赘生物之一，尤其因为大部分国家老年人口迅速增长。膀胱癌在泌尿道赘生物中最为常见。就美国而言，每年新增膀胱癌患者超过
70000人，其中80%为非浸润性膀胱癌。例如，据美国癌症学会数据（http://
www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/document/acspc-
047079.pdf），2016年死于膀胱癌的人数为76960，死于膀胱癌并发疾病的人数为16390。世界范围内，膀胱癌是癌症第9大病因，每年新增病例达430000人（《全球癌症报告2014》，世界卫生组织，第1章第1节）（World Cancer Report2014. World Health Organization.
2014. pp. Chapter 1.1. ISBN 9283204298），且每年新增死于膀胱癌人数约为165000。此外，膀胱癌易复发，膀胱癌患者必须接受持续观察。一般而言，膀胱癌的5年生存率为77%，过去10年来，这一数字并未产生明显变化。在此期间，美国食品及药物管理局未通过新的膀胱癌治疗药物。如果按阶段考虑，膀胱内层肿瘤患者及膀胱局部病变患者的5年生存率分别为
96%及69%。如果病变局部扩散至膀胱外部，患者生存率降至34%，而一旦癌细胞发生远端转移，患者生存率仅有6%。尽管大部分新诊断的膀胱癌并未浸润肌肉层，高级别肿瘤患者仍有很大风险死于癌症。即使对于低级别病变患者，肿瘤复发也是一大担忧，需要全面的后续观察。
70000人，其中80%为非浸润性膀胱癌。例如，据美国癌症学会数据（http://
www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/document/acspc-
047079.pdf），2016年死于膀胱癌的人数为76960，死于膀胱癌并发疾病的人数为16390。世界范围内，膀胱癌是癌症第9大病因，每年新增病例达430000人（《全球癌症报告2014》，世界卫生组织，第1章第1节）（World Cancer Report2014. World Health Organization.
2014. pp. Chapter 1.1. ISBN 9283204298），且每年新增死于膀胱癌人数约为165000。此外，膀胱癌易复发，膀胱癌患者必须接受持续观察。一般而言，膀胱癌的5年生存率为77%，过去10年来，这一数字并未产生明显变化。在此期间，美国食品及药物管理局未通过新的膀胱癌治疗药物。如果按阶段考虑，膀胱内层肿瘤患者及膀胱局部病变患者的5年生存率分别为
96%及69%。如果病变局部扩散至膀胱外部，患者生存率降至34%，而一旦癌细胞发生远端转移，患者生存率仅有6%。尽管大部分新诊断的膀胱癌并未浸润肌肉层，高级别肿瘤患者仍有很大风险死于癌症。即使对于低级别病变患者，肿瘤复发也是一大担忧，需要全面的后续观察。
[0003] 大部分膀胱癌源于组成膀胱衬里的移行上皮细胞（膀胱上皮，又称尿路上皮）。此类肿瘤不断增大后会浸润周围的结缔组织及肌肉。在病变晚期阶段，肿瘤扩散至膀胱外部，到附近的淋巴结或骨盆器官，或转移至更远端的器官，如肺部、肝脏或骨骼。膀胱上皮作为一种移行上皮细胞，分布在泌尿道的大部分区域，包括肾盂、输尿管、膀胱及部分尿道。最常见的膀胱癌及泌尿道癌症类型是影响膀胱上皮（尿路上皮）的癌，即“移行细胞癌”（简称TCC，又称膀胱上皮细胞癌）。约有90%的膀胱癌病例被归为移行细胞癌，而其余10%则主要为鳞状上皮细胞或腺癌（Fair WR，Fuks ZY，Fuks ZY，《癌：肿瘤学原理和实践（第4版）》，利平科特出版公司，1993:1052-1072）（Fair WR, Fuks ZY, Scher HI. Cancer: Principles & Practice of Oncology, 4th ed. (ed. DeVita VT, Hellman S Rosenberg SA). J.B Lippincott Co., Philadelphia, PA. 1993:1052-1072.）。初次诊断时，75%的肿瘤是“表面的”，即它们尚未进入肌肉层，一般会根据“恶性肿瘤的TNM分类法”将其分为pTa，pT1或pTIS。其中，50%至80%的肿瘤将会有一次或多次复发，15%至25%的肿瘤会发展为浸润性肿瘤（Messing EM，《膀胱尿路上皮肿瘤》，《坎贝尔-沃尔什泌尿外科学》，爱思维尔出版公司，
2007; 1445）（Messing EM. Urothelial tumors of the bladder. In: Wein AJ, et al. Campbell-Walsh Urology. Philadelphia, Pa.: Saunders Elsevier; 2007; 1445.）。
2007; 1445）（Messing EM. Urothelial tumors of the bladder. In: Wein AJ, et al. Campbell-Walsh Urology. Philadelphia, Pa.: Saunders Elsevier; 2007; 1445.）。
[0004] 泌尿道赘生物的治疗，尤其是膀胱癌的治疗，取决于赘生物浸润尿道壁的深度。
[0005] 肌层浸润性膀胱癌患者的标准治疗方式包括顺铂化疗，后续通过手术切除膀胱或接受放射治疗及同期化疗。治疗复发的膀胱癌应使用联合化疗，包括健择联合顺铂（GC）或氨甲蝶呤、长春花碱、阿霉素及顺铂（MVAC）。
[0006] 非肌层浸润性膀胱癌患者的标准治疗方式包括手术切除肿瘤，后续进行一次化疗，通常为膀胱内施用丝裂霉素C（膀胱内化疗）。癌切除可使部分早期患者痊愈。然而，这一方式并不适用于所有患者，或者说，癌并不一定能在足够早期时被检测到。另外有时也采取局部化疗。浅表性肿瘤（约占移行细胞癌的75%）可利用膀胱镜电烙术“刮除”，也即经尿道前列腺切除器。这一过程被称为经尿道（前列腺）切除术（TUR），主要用于病理分期。非肌层浸润性膀胱癌的治疗方法为经尿道（前列腺）切除术，但在许多情况下，如肌层浸润性癌症，这一操作不适合作为最后阶段疗法（《欧洲泌尿外科协会——指南——在线指南》，泌尿外科网，2015年5月7日修订版）（“European Association of Urology(EAU)–Guidelines–
Online Guidelines”. Uroweb. Org. Retrieved 2015-05-07）。
Online Guidelines”. Uroweb. Org. Retrieved 2015-05-07）。
[0007] 术后康复后，病情发展风险较小的患者可以接受观察或进行辅助膀胱内化疗。然而，同样是在早期阶段，膀胱癌可能具有侵入性，比如原位癌（CIS）。原位癌是非肌层浸润性膀胱癌中最具侵入性的阶段，且现有疗法对其疗效并不明显。中级及高级别病变患者常接
受卡介苗（BCG）的膀胱内免疫疗法。卡介苗是一种经弱化的活菌。
受卡介苗（BCG）的膀胱内免疫疗法。卡介苗是一种经弱化的活菌。
[0008] 卡介苗是美国食品及药物管理局最早通过的免疫疗法，能通过刺激专门针对细菌及其它膀胱癌细胞的免疫反应，帮助减少膀胱癌复发。由此，卡介苗（BCG）灌注这一形式的免疫疗法已经成为移行细胞癌及预防浅表性肿瘤复发的替代疗法（Bohle，《浅表性膀胱癌治疗中卡介苗作用机制的最新研究进展》，国际巴西泌尿外科杂志，26:488 (2000)；Burger等，《非肌层浸润性膀胱癌治疗中辅助性自体膀胱巨噬细胞疗法与卡介苗应用比较：多中心随机试验》，转化医学杂志，8:54 (2010)）（Bohle. Recent knowledge on BCG’s
mechanism of action in the treatment of superficial bladder cancer. Braz J
Urol 26:488 (2000); Burger et al. The application of adjuvant autologous
intravesical macrophage cell therapy vs. BCG in non-muscle invasive bladder
cancer: a multicenter randomized trial. J Transl Med 8:54 (2010)）。对于移行细
胞癌等浅表性膀胱癌，卡介苗甚至成为了膀胱等局部治疗最常用药物，也被证明是目前治
疗此类浅表性膀胱癌的最有效药物。卡介苗疗法显示其可延迟（尽管不一定能阻止）肿瘤扩增至更晚期，减少后续膀胱切除术的需要，同时提升患者总体生存率。目前，卡介苗是美国食品及药物管理局通过的作为膀胱原位癌主要疗法的唯一药物。应用卡介苗后，15年内特
定疾病患者生存率为63%，这一结果与在疾病早期接受膀胱切除术的患者生存率相比毫不
逊色。卡介苗若要发挥效用，宿主必须具备免疫能力，肿瘤负荷必须小，卡介苗必须与肿瘤直接接触，且诱导抗肿瘤反应的剂量必须充足。研究持续表明，若原位癌患者满足上述条
件，则卡介苗治疗可以帮助70%的患者根除其体内肿瘤。为防止肿瘤复发，此诱导期结束后，患者仍有必要接受长期的维持治疗。
mechanism of action in the treatment of superficial bladder cancer. Braz J
Urol 26:488 (2000); Burger et al. The application of adjuvant autologous
intravesical macrophage cell therapy vs. BCG in non-muscle invasive bladder
cancer: a multicenter randomized trial. J Transl Med 8:54 (2010)）。对于移行细
胞癌等浅表性膀胱癌，卡介苗甚至成为了膀胱等局部治疗最常用药物，也被证明是目前治
疗此类浅表性膀胱癌的最有效药物。卡介苗疗法显示其可延迟（尽管不一定能阻止）肿瘤扩增至更晚期，减少后续膀胱切除术的需要，同时提升患者总体生存率。目前，卡介苗是美国食品及药物管理局通过的作为膀胱原位癌主要疗法的唯一药物。应用卡介苗后，15年内特
定疾病患者生存率为63%，这一结果与在疾病早期接受膀胱切除术的患者生存率相比毫不
逊色。卡介苗若要发挥效用，宿主必须具备免疫能力，肿瘤负荷必须小，卡介苗必须与肿瘤直接接触，且诱导抗肿瘤反应的剂量必须充足。研究持续表明，若原位癌患者满足上述条
件，则卡介苗治疗可以帮助70%的患者根除其体内肿瘤。为防止肿瘤复发，此诱导期结束后，患者仍有必要接受长期的维持治疗。
[0009] 通常，卡介苗每周施用一次，持续6周。如果膀胱镜复查后发现肿瘤仍存在或复发，则可再进行为期6周的疗程。最新研究表明，患者若能接受每周一次、持续3周的治疗，并做到每6个月一次且坚持1至3年，那么此维持疗法将会产生更持久的疗效。定期的活组织检查通常也是必要的，便于分析反应。尽管卡介苗的效用一般被认为是充分的，它在低等风险和中等风险患者中的应用存在争议，限制要素就在于其毒性（Babjuk M等《，欧洲泌尿外科协会非肌层浸润性膀胱癌指南》，欧洲泌尿外科学，54(2):303(2008); Denzinger S等，《初期高危pT1G3膀胱上皮癌的膀胱延期切除：危险系数是否决定膀胱保留方法的可行性 》，欧洲泌尿外科学，53(1):146 (2008)；Witjes，《浅表性膀胱癌卡介苗接种失败的处理：述评》，欧洲泌尿外科学，49(5):790(2006)）（Babjuk M， at al. EAUGuidelines on Non-Muscle-Invasive Urothelial Carcinoma of the Bladder. Eur Urol54(2):303 (2008); Denzinger S, et al. Versus deferred cystectomy for initialhigh-risk pT1G3
urothelial carcinoma of the bladder: do risk factors definefeasibility of
bladdersparing approach Eur Urol 53(1):146 (2008); Witjes. Management of BCG
failures in superficial bladder cancer: a review. Eur Urol 49(5):790 (2006)）。
urothelial carcinoma of the bladder: do risk factors definefeasibility of
bladdersparing approach Eur Urol 53(1):146 (2008); Witjes. Management of BCG
failures in superficial bladder cancer: a review. Eur Urol 49(5):790 (2006)）。
[0010] 卡介苗的不良反应与其作用方式有关。卡介苗刺激免疫反应，局部及全身的炎症应答由此出现。免疫疗法引起的最常见的不良反应包括一系列类似流感及膀胱炎的症状。
全身毒性反应，即发烧，会在高达20%的患者身上出现。由于不良反应，相当大一部分患者中断对卡介苗的应用，许多泌尿科医师也减少对其的应用（Herr，《卡介苗维持疗法是否确实必要 》，欧洲泌尿外科学，54(5):971-3 (2008)）（Herr.Is maintenance Bacillus
Calmette-Guerin really necessary Eur Urol 54(5):971-3 (2008)）。卡介苗通过各种
细胞因子刺激T细胞介导的局部免疫反应，在复杂且多样的机制下产生作用（Zlotta AR等，《浅表性膀胱癌治疗中卡介苗的免疫活性成分是什么 》，国际癌症杂志，87(6):844
(2000)；Luo Y等，《Th1刺激细胞因子在抗小鼠膀胱癌MBT-2细胞的卡介苗诱导的巨噬细胞毒性中的作用》，临床与实验免疫学杂志，146(1):181 (2006)）（Zlotta AR, et al. What are the immunologically activecomponents of bacille Calmette-Guerin in
therapy of superficial bladder cancer Int J Cancer 87(6):844 (2000); Luo Y
et al. Role of Th1-stimulating cytokines in bacillus Calmette-Guerin(BCG)-
induced macrophage cytotoxicity against mouse bladder cancer MBT-2 cells.
Clin Exp Immunol 146(1):181 (2006)）。这一过程由此引发粒细胞相关的抗肿瘤反应以
及巨噬细胞的细胞毒性（Ayari C等，《膀胱肿瘤对成熟树状细胞及巨噬细胞的浸润预测其对卡介苗疗法的应答》，欧洲泌尿外科学，55(6):1386 (2009)；de Reijke，《编辑评论：膀胱肿瘤对成熟树状细胞及巨噬细胞的浸润预测其对卡介苗疗法的应答》，欧洲泌尿外科学，55(6):1395 (2009)；Takayama H等，《肿瘤相关巨噬细胞的增强浸润与卡介苗膀胱灌注后膀胱原位癌的不良预后有关》，泌尿学杂志，181(4):1894 (2009)；Brandau，《肿瘤相关巨噬细胞：预测卡介苗疗效》，泌尿学杂志，181(4):1532 (2009)；Siracusano S等，《膀胱内卡介苗预防后粒细胞的作用》，欧洲泌尿外科学，51(6):1589-99 (2007)）（Ayari C et al.
Bladder tumor infiltrating mature dendritic cells and macrophages as
predictors of response to bacillus Calmette-Guerin immunotherapy. Eur Urol 55
(6):1386 (2009); de Reijke. Editorial comment on: Bladder tumor infiltrating
mature dentritic cells and macrophages as predictors of response to bacillus
Calmette-Guerin immunotherapy. Eur Urol 55(6):1395 (2009); Takayama H, et al.
Increased infiltration of tumor associated macrophages is associated with
poor prognosis of bladder carcinoma in situ after intravesical bacillus
Calmette-Guerin instillation. J Urol 181(4):1894 (2009); Brandau. Tumour-
associated macrophages: predicting bacillus Calmette-Guerin immunotherapy
outcomes. J Urol 181(4):1532 (2009); Siracusano S, et al. The role of
granulocytes following intravesical BCG prophylaxis. Eur Urol 51(6):1589
(2007); Brandau S, et al. The role of granulocytes following intravesical BCG
prophylaxis. Eur Urol 51(6):1589-99 (2007)）。
全身毒性反应，即发烧，会在高达20%的患者身上出现。由于不良反应，相当大一部分患者中断对卡介苗的应用，许多泌尿科医师也减少对其的应用（Herr，《卡介苗维持疗法是否确实必要 》，欧洲泌尿外科学，54(5):971-3 (2008)）（Herr.Is maintenance Bacillus
Calmette-Guerin really necessary Eur Urol 54(5):971-3 (2008)）。卡介苗通过各种
细胞因子刺激T细胞介导的局部免疫反应，在复杂且多样的机制下产生作用（Zlotta AR等，《浅表性膀胱癌治疗中卡介苗的免疫活性成分是什么 》，国际癌症杂志，87(6):844
(2000)；Luo Y等，《Th1刺激细胞因子在抗小鼠膀胱癌MBT-2细胞的卡介苗诱导的巨噬细胞毒性中的作用》，临床与实验免疫学杂志，146(1):181 (2006)）（Zlotta AR, et al. What are the immunologically activecomponents of bacille Calmette-Guerin in
therapy of superficial bladder cancer Int J Cancer 87(6):844 (2000); Luo Y
et al. Role of Th1-stimulating cytokines in bacillus Calmette-Guerin(BCG)-
induced macrophage cytotoxicity against mouse bladder cancer MBT-2 cells.
Clin Exp Immunol 146(1):181 (2006)）。这一过程由此引发粒细胞相关的抗肿瘤反应以
及巨噬细胞的细胞毒性（Ayari C等，《膀胱肿瘤对成熟树状细胞及巨噬细胞的浸润预测其对卡介苗疗法的应答》，欧洲泌尿外科学，55(6):1386 (2009)；de Reijke，《编辑评论：膀胱肿瘤对成熟树状细胞及巨噬细胞的浸润预测其对卡介苗疗法的应答》，欧洲泌尿外科学，55(6):1395 (2009)；Takayama H等，《肿瘤相关巨噬细胞的增强浸润与卡介苗膀胱灌注后膀胱原位癌的不良预后有关》，泌尿学杂志，181(4):1894 (2009)；Brandau，《肿瘤相关巨噬细胞：预测卡介苗疗效》，泌尿学杂志，181(4):1532 (2009)；Siracusano S等，《膀胱内卡介苗预防后粒细胞的作用》，欧洲泌尿外科学，51(6):1589-99 (2007)）（Ayari C et al.
Bladder tumor infiltrating mature dendritic cells and macrophages as
predictors of response to bacillus Calmette-Guerin immunotherapy. Eur Urol 55
(6):1386 (2009); de Reijke. Editorial comment on: Bladder tumor infiltrating
mature dentritic cells and macrophages as predictors of response to bacillus
Calmette-Guerin immunotherapy. Eur Urol 55(6):1395 (2009); Takayama H, et al.
Increased infiltration of tumor associated macrophages is associated with
poor prognosis of bladder carcinoma in situ after intravesical bacillus
Calmette-Guerin instillation. J Urol 181(4):1894 (2009); Brandau. Tumour-
associated macrophages: predicting bacillus Calmette-Guerin immunotherapy
outcomes. J Urol 181(4):1532 (2009); Siracusano S, et al. The role of
granulocytes following intravesical BCG prophylaxis. Eur Urol 51(6):1589
(2007); Brandau S, et al. The role of granulocytes following intravesical BCG
prophylaxis. Eur Urol 51(6):1589-99 (2007)）。
[0011] 总而言之，卡介苗是一种由弱化的结核分支杆菌组成的未表现出明显特征的产品，也因此显示了较差的安全性。此外，卡介苗免疫治疗只在30%的非浸润性肿瘤阶段病例中发挥效用。卡介苗治疗后肿瘤复发的患者治疗难度更大。许多医生建议此类患者接受膀
胱切除术。这一建议与欧洲泌尿外科协会以及美国泌尿学会的官方指南一致。然而，仍有许多患者拒绝这一足以改变他们人生的手术，在不得不接受这一根治性方法前，倾向尝试那
些新出现的保守疗法。
胱切除术。这一建议与欧洲泌尿外科协会以及美国泌尿学会的官方指南一致。然而，仍有许多患者拒绝这一足以改变他们人生的手术，在不得不接受这一根治性方法前，倾向尝试那
些新出现的保守疗法。
[0012] 未经治疗的浅表性癌可能会逐渐开始浸润膀胱肌肉层或泌尿道其他部分。因此，浸润了膀胱的癌症需要更多根治性手术。其中，在膀胱切除术中，部分膀胱会被切除，尿线再定向，被引入单独的肠袢。治疗由非浸润性病变的不当治疗引起的浸润性肿瘤时，也需要借助放射治疗及化学治疗的联合应用。此种强刺激性化疗会引起严重的副作用，应该尽量
避免。此外，由膀胱癌引起的微转移病变可能会出现，对患者的长期生存产生影响。因此，也是为了解决后一个问题，需要采取新的治疗方式。此类新的疗法包括浅表性膀胱癌的初期
治疗。
避免。此外，由膀胱癌引起的微转移病变可能会出现，对患者的长期生存产生影响。因此，也是为了解决后一个问题，需要采取新的治疗方式。此类新的疗法包括浅表性膀胱癌的初期
治疗。
[0013] 此类新出现的治疗初期病变的方式可以有效避免外科手术以及化学治疗。因此，为治疗泌尿道赘生物，比如膀胱肿瘤，尤其是非浸润性膀胱尿路上皮癌，提供合适的活性剂是当务之急。目前治疗膀胱尿路上皮癌的方式主要限于卡介苗和外科手术。
[0014] 因此，除卡介苗疗法外，仍需要其它膀胱癌免疫疗法。在此情况下，免疫检查点抑制剂的应用是一种较有潜力的方式。此类治疗方式通过阻断抑制分子或通过激活刺激分子，释放或增强已有的抗癌免疫反应。比如，PD-1的配体PD-L1由12%的膀胱肿瘤细胞及27%的肿瘤浸润免疫细胞表达，且在高达50%的原位癌恶性膀胱上皮细胞中得以表达。此外，95%已浸润膀胱肿瘤的淋巴细胞也表达了PD-1 受体。PD-L1的尿路上皮表达也可预测局部器官
病变患者在膀胱切除术后的死亡率。相应地，PDL1/PD-1信号通路被认为是可能的膀胱癌治疗靶点，正如在肾细胞癌、肺癌以及黑素瘤等其它上皮细胞瘤中的发现一样。一项已经进行到二期的试验正在测试MPDL3280A作为面向未接受含顺铂疗法的晚期膀胱癌患者的一线治
疗方案或二线治疗方案（NCT02108652）的可行性。CTLA-4阻断作为膀胱上皮癌另一种免疫疗法的研究也在积极进行中。CTLA-4在肿瘤细胞介导的免疫抑制中发挥重要作用，且单克
隆抗体伊匹单抗（ipilimumab）对其的阻断增强了T淋巴细胞的机能，引发有用的黑素瘤、肾细胞癌、以及非小细胞肺癌的肿瘤应答。局部膀胱癌患者在接受膀胱切除术前的伊匹单抗
治疗显示了此疗法的可行性与安全性（Carthon BC，Wolchok JD，Yuan J，Kamat A，Ng Tang DS，Sun J等，《术前CTLA-4阻断：术前临床试验环境中的耐受性及免疫监测》，临床癌症研究，2010; 16(10):2861-71）（Carthon BC, Wolchok JD, Yuan J, Kamat A, Ng Tang DS, Sun J, et al.: Preoperative CTLA-4 blockade: tolerability and immune
monitoring in the setting of a presurgical clinical trial. Clin Cancer Res
2010; 16(10):2861-71）。在这些结论的支撑下，一项已经进行到二期的试验
（NCT01524991）正在分析吉西他滨、顺铂及伊匹单抗的联合应用作为膀胱上皮癌一线治疗方案的可行性。此外，鉴于临床前研究已经展示了各种免疫疗法（如：抗PD-1药物，抗CTLA-4药物及疫苗）的联合应用能增强抗肿瘤活性的可能性，正在进行中的临床试验
（NCT02205333）开始研究抗PD-L1、抗CTLA-4及OX-40促效药的联合应用在包括膀胱癌在内的晚期实体瘤治疗中的安全性和有效性。
病变患者在膀胱切除术后的死亡率。相应地，PDL1/PD-1信号通路被认为是可能的膀胱癌治疗靶点，正如在肾细胞癌、肺癌以及黑素瘤等其它上皮细胞瘤中的发现一样。一项已经进行到二期的试验正在测试MPDL3280A作为面向未接受含顺铂疗法的晚期膀胱癌患者的一线治
疗方案或二线治疗方案（NCT02108652）的可行性。CTLA-4阻断作为膀胱上皮癌另一种免疫疗法的研究也在积极进行中。CTLA-4在肿瘤细胞介导的免疫抑制中发挥重要作用，且单克
隆抗体伊匹单抗（ipilimumab）对其的阻断增强了T淋巴细胞的机能，引发有用的黑素瘤、肾细胞癌、以及非小细胞肺癌的肿瘤应答。局部膀胱癌患者在接受膀胱切除术前的伊匹单抗
治疗显示了此疗法的可行性与安全性（Carthon BC，Wolchok JD，Yuan J，Kamat A，Ng Tang DS，Sun J等，《术前CTLA-4阻断：术前临床试验环境中的耐受性及免疫监测》，临床癌症研究，2010; 16(10):2861-71）（Carthon BC, Wolchok JD, Yuan J, Kamat A, Ng Tang DS, Sun J, et al.: Preoperative CTLA-4 blockade: tolerability and immune
monitoring in the setting of a presurgical clinical trial. Clin Cancer Res
2010; 16(10):2861-71）。在这些结论的支撑下，一项已经进行到二期的试验
（NCT01524991）正在分析吉西他滨、顺铂及伊匹单抗的联合应用作为膀胱上皮癌一线治疗方案的可行性。此外，鉴于临床前研究已经展示了各种免疫疗法（如：抗PD-1药物，抗CTLA-4药物及疫苗）的联合应用能增强抗肿瘤活性的可能性，正在进行中的临床试验
（NCT02205333）开始研究抗PD-L1、抗CTLA-4及OX-40促效药的联合应用在包括膀胱癌在内的晚期实体瘤治疗中的安全性和有效性。
[0015] 然而，尽管有重要的临床优势，能够“释放”免疫应答的检查点抑制会引起一系列特殊且严重的免疫相关不良事件（irAEs），或者有时会引起特殊利益不良事件（Naidoo J，Page DB，Li BT，Connell LC，Schindler K，Lacouture ME，Postow MA，Wolchok JD，《抗PD-1及抗PD-L1免疫检查点抗体的毒性》，肿瘤学年鉴，2015; 26(12):2375；Champiat S，
Lambotte O，Barreau E，Belkhir R，Berdelou A，Carbonnel F，Cauquil C，Chanson P，Collins M，Durrbach A，Ederhy S，Feuillet S，Francois H，Lazarovici J，Le Paves J，De Martin E，Mateus C，Michot JM，Samuel D，Soria JC，Robert C，Eggermont A，
Marabelle A，《免疫检查点阻断免疫异常毒性的处理：合作意见书》，肿瘤学年鉴，2015 年
12月28日，Pii: mdv623 [电子优先出版]）(Naidoo J, Page DB, Li BT, Connell LC,
Schindler K, Lacouture ME, Postow MA, Wolchok JD: Toxicities of the anti-PD-1
and anti-PD-L1 immune checkpoint antibodies. Ann Oncol. 2015; 26(12):2375;
Champiat S, Lambotte O, Barreau E, Belkhir R, Berdelou A, Carbonnel F,
Cauquil C, Chanson P, Collins M, Durrbach A, Ederhy S, Feuillet S, Francois
H, Lazarovici J, Le Paves J, De Martin E, Mateus C, Michot JM, Samuel D,
Soria JC, Robert C, Eggermont A, Marabelle A: Management of immune checkpoint
blockade dysimmune toxicities: a collaborative position paper. Ann Oncol.
2015 Dec 28. Pii: mdv623. [Epub ahead of print])。
Lambotte O，Barreau E，Belkhir R，Berdelou A，Carbonnel F，Cauquil C，Chanson P，Collins M，Durrbach A，Ederhy S，Feuillet S，Francois H，Lazarovici J，Le Paves J，De Martin E，Mateus C，Michot JM，Samuel D，Soria JC，Robert C，Eggermont A，
Marabelle A，《免疫检查点阻断免疫异常毒性的处理：合作意见书》，肿瘤学年鉴，2015 年
12月28日，Pii: mdv623 [电子优先出版]）(Naidoo J, Page DB, Li BT, Connell LC,
Schindler K, Lacouture ME, Postow MA, Wolchok JD: Toxicities of the anti-PD-1
and anti-PD-L1 immune checkpoint antibodies. Ann Oncol. 2015; 26(12):2375;
Champiat S, Lambotte O, Barreau E, Belkhir R, Berdelou A, Carbonnel F,
Cauquil C, Chanson P, Collins M, Durrbach A, Ederhy S, Feuillet S, Francois
H, Lazarovici J, Le Paves J, De Martin E, Mateus C, Michot JM, Samuel D,
Soria JC, Robert C, Eggermont A, Marabelle A: Management of immune checkpoint
blockade dysimmune toxicities: a collaborative position paper. Ann Oncol.
2015 Dec 28. Pii: mdv623. [Epub ahead of print])。
[0016] 另一种治疗方案则是在靶向治疗中利用抗肿瘤相关抗原的单一特异性抗体。此疗法的一个例子是ALT-801（Altor生物科技公司）。ALT-801是一种双功能融合蛋白，包含连接于可溶的单链T细胞受体结构域的白细胞介素-2（IL-2）。可溶的单链T细胞受体结构域可识别HLA-A*0201(p53+/HLA-A*0201)中癌细胞上显示的人p53抗原肽表位（aa264-272）。因此，IL-2成为癌细胞的治疗靶点，免疫系统活性得以增强。目前进行中的一期和二期试验正在
测试ALT-801与吉西他滨的联合应用对卡介苗疗法失败后的非肌层浸润性膀胱癌患者的疗
效（NCT01625260），及ALT-801与吉西他滨、顺铂的联合应用对肌层浸润性膀胱癌患者的疗效（NCT01326871）。然而，这一靶向免疫疗法被建议只限特定HLA类型的患者应用。
测试ALT-801与吉西他滨的联合应用对卡介苗疗法失败后的非肌层浸润性膀胱癌患者的疗
效（NCT01625260），及ALT-801与吉西他滨、顺铂的联合应用对肌层浸润性膀胱癌患者的疗效（NCT01326871）。然而，这一靶向免疫疗法被建议只限特定HLA类型的患者应用。
[0017] 另一靶向疗法利用与假单胞菌外毒素A（“oportuzumab monatox”，也被称作VB4-845）结合的抗肿瘤相关抗原的抗体EpCAM（Kowalski等，2012，《一项关于oportuzumab
monatox的二期研究：针对已接受过卡介苗治疗的非浸润性膀胱上皮原位癌患者的免疫毒
素疗法》，泌尿学杂志，188:1712）（Kowalski et al., 2012: A phase II study of
oportuzumab monatox: an immunotoxin therapy for patients with noninvasive
urothelial carcinoma in situ previously treated with bacillus Calmette-
Guerin. J Urol 188:1712）。若要实现有效治疗，每位患者需要几百毫克抗体药物。如此大剂量的抗体药物通常有免疫副作用的风险，且的确会在93.5%的患者中引起副作用。其中，至少有65%患者的副作用与大剂量opotuzumab monatox的应用有直接关系。因此，
opotuzumab monatox在后续治疗中不再被继续应用。
monatox的二期研究：针对已接受过卡介苗治疗的非浸润性膀胱上皮原位癌患者的免疫毒
素疗法》，泌尿学杂志，188:1712）（Kowalski et al., 2012: A phase II study of
oportuzumab monatox: an immunotoxin therapy for patients with noninvasive
urothelial carcinoma in situ previously treated with bacillus Calmette-
Guerin. J Urol 188:1712）。若要实现有效治疗，每位患者需要几百毫克抗体药物。如此大剂量的抗体药物通常有免疫副作用的风险，且的确会在93.5%的患者中引起副作用。其中，至少有65%患者的副作用与大剂量opotuzumab monatox的应用有直接关系。因此，
opotuzumab monatox在后续治疗中不再被继续应用。
[0018] 鉴于以上所述，泌尿道赘生物治疗仍需要一种改良过的免疫疗法。因此，本发明的目标是克服上述几种目前已有的膀胱癌免疫疗法的缺陷，为泌尿道赘生物治疗提供一种新型复合物，该种复合物能提高泌尿道赘生物患者，尤其是膀胱癌患者的生存率，同时降低副作用产生的风险。
[0020] 尽管本发明在下文得以具体陈述，仍需要注意本发明并不仅限于本文提及的某种特定方法论、方案或试剂，它们可能因具体情况改变。此外，本文所用术语并不为了限定本发明的适用范围，本发明的适用范围只由权利要求作出规定。除非以其他方式作出解释，否则本文所有技术及科学术语的含义与本领域普通技术人员的通常理解相同。
[0021] 下文陈述了本发明的各要素，并列举了具体实施方案。然而，需要注意的是，不同要素可以不同方式且不同次数进行组合，以产生另外的实施方案。本文陈述的各个例子及提出的实施方案不应被过度解释来将本发明局限于本文明示的实施方案。本文所作陈述证
明并包括结合了本文明示实施方案及任意次数的公开或优选要素的实施方案。此外，本请
求书中陈述的所有要素的互换和联合都应被视作由本请求书公开，除非上下文另有所指。
明并包括结合了本文明示实施方案及任意次数的公开或优选要素的实施方案。此外，本请
求书中陈述的所有要素的互换和联合都应被视作由本请求书公开，除非上下文另有所指。
[0022] 在此说明书及其后权利要求中，除非上下文另有所指，否则术语“包含”及其各种变化形态都应被视作对本文提及的构件、整数或阶段的包括，而并不意味着对任何文中未提及的构件、整数或阶段的排除。术语“组成”是术语“包含”的具体实施方案。此种情况下，任何其它未提及的构件、整数或阶段都被排除在外。就本发明而言，术语“包含”包括了术语“组成”。由此，术语“正包含”也涵盖了“正包括”及“正组成”的含义。比如，某一“包含”X的成分可能只由X组成，也有可能包括了Y，即由X与Y组成。
[0023] 描述本发明时所用术语“一个”、“这个”以及其他类似指称（尤其是在权利要求中），应被视为包括单数及复数形态，除非在文中另有所指，或与上下文明显矛盾。本文援引的值的范围仅作为指代分布在此范围的各个单独值的便捷方式。除非文中另有所指，否则每个单独值都被包括在此说明书中，将其视作单独援引。本说明书所用语言不应被解读成
其指示任何对本发明的实施至关重要却在文中并未提及的要素。
其指示任何对本发明的实施至关重要却在文中并未提及的要素。
[0024] “大体上”一词不排除“完全地”这层含义。比如，某成分“大体上”不含成分Y，可能表示这一成分完全不含Y。必要时，“大体上”一词在本发明的描述中可被省略。
[0025] 提及数值x时，术语“约”意味着数值x增加或减少10%的范围内所有数值均可接受。
[0026] 用于治疗泌尿道赘生物的多特异性抗体首先，本发明提供了一种分离的多特异性抗体或其抗原结合片段在泌尿道赘生物治疗
中的应用，所述抗体或其抗原结合片段包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗癌相关和/或肿瘤相关抗原的特异性。
中的应用，所述抗体或其抗原结合片段包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗癌相关和/或肿瘤相关抗原的特异性。
[0027] 通过提供以上两种特异性，即一种抗T细胞表面抗原的特异性及一种抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性，本发明的多特异性抗体或其抗原结合片段能够将T细胞重新指
向癌细胞。因此，“一种抗T细胞表面抗原的特异性”特别意味着本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含能够识别T细胞表面抗原表位的互补位。也就是说，“一种抗T细胞表面抗原的特异性”这一短语尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含T细胞表面抗原的
一个结合部位。相应地，“一种抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性”尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含一个能识别癌相关及/或肿瘤相关抗原表位的互补位。也就
是说，“一种抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性”这一短语尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含一个癌相关及/或肿瘤相关抗原的结合部位。
向癌细胞。因此，“一种抗T细胞表面抗原的特异性”特别意味着本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含能够识别T细胞表面抗原表位的互补位。也就是说，“一种抗T细胞表面抗原的特异性”这一短语尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含T细胞表面抗原的
一个结合部位。相应地，“一种抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性”尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含一个能识别癌相关及/或肿瘤相关抗原表位的互补位。也就
是说，“一种抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性”这一短语尤其意味着本发明所用抗体或其抗原结合片段包含一个癌相关及/或肿瘤相关抗原的结合部位。
[0028] 重要的是，与仅表现出单一特异性的常规（“普通”）抗体相比，多特异性抗体能够结合至少两种不同的表位，即癌/肿瘤细胞上的一种表位和T细胞上的一种表位，由此将T细胞“重新指向”癌/肿瘤细胞，最终实现T细胞介导的细胞杀伤。相应地，本发明的多特异性抗体展现了再定向的特点，即多特异性抗体通常能使处于无变应性状态的肿瘤特异性T细胞再活化，及/或将T细胞指向预期抗原（由抗体的抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性所实现）。
[0029] 此外，多特异性抗体或其抗原结合片段优选地能诱导肿瘤反应性补体结合抗体，进而诱导体液免疫应答。由此，T细胞介导的细胞毒性活性及免疫力都得以增强，尤其是产生了抗携带靶向癌相关及/或肿瘤相关抗原细胞的疗效。从而为泌尿道赘生物的治疗提供
有效方法。
有效方法。
[0030] 与常规的单一特异性抗体相比，小剂量的本发明的此抗体或其抗原结合片段就足以发挥效用。如实施例所示，小剂量的本发明的抗体确实足以在膀胱癌患者身上取得疗效，即在一个与血液完全不同的不利环境中取得疗效。这是惊人的，因为多特异性抗体或其抗
原结合片段（例如双特异性抗体或其抗原结合片段）与常规的单一特异性抗体相比，通常被认为更易丧失功能性，例如由于受不利的pH或电解质条件影响。其原因可能在于，与常规的单一特异性抗体相比，多特异性抗体优选地每种特异性只有一个互补位（即每种特异性刚
好只有一个互补位）。例如，就二价抗体（即含有两个互补位的抗体）而言，常规的单一特异性抗体有两个特异性完全相同的互补位，因此造成过剩，而双特异性二价抗体的每种特异
性只有一个互补位。因此，当其中一个互补位丧失其功能性时（例如因为尿液环境中不利的pH及电解质条件），单一特异性抗体仍有另一个互补位，而双特异性二价抗体则丧失了其全部功能性（比如将T细胞重新指向癌细胞）。当然，考虑到与单一特异性抗体或其抗原结合片段的常用剂量相比，多特异性抗体或其抗原结合片段的使用剂量小得多，尿液的稀释效应
并没有损害其在泌尿道治疗中需要的足够浓度就更惊人了。
原结合片段（例如双特异性抗体或其抗原结合片段）与常规的单一特异性抗体相比，通常被认为更易丧失功能性，例如由于受不利的pH或电解质条件影响。其原因可能在于，与常规的单一特异性抗体相比，多特异性抗体优选地每种特异性只有一个互补位（即每种特异性刚
好只有一个互补位）。例如，就二价抗体（即含有两个互补位的抗体）而言，常规的单一特异性抗体有两个特异性完全相同的互补位，因此造成过剩，而双特异性二价抗体的每种特异
性只有一个互补位。因此，当其中一个互补位丧失其功能性时（例如因为尿液环境中不利的pH及电解质条件），单一特异性抗体仍有另一个互补位，而双特异性二价抗体则丧失了其全部功能性（比如将T细胞重新指向癌细胞）。当然，考虑到与单一特异性抗体或其抗原结合片段的常用剂量相比，多特异性抗体或其抗原结合片段的使用剂量小得多，尿液的稀释效应
并没有损害其在泌尿道治疗中需要的足够浓度就更惊人了。
[0031] 另一方面，小剂量极大降低了副作用产生的风险。相应地，本发明的多特异性抗体或其抗原结合片段，减少了促炎细胞因子的释放。值得注意的是，促炎细胞因子的释放通常可以在癌及/或肿瘤环境中被发现。相应地，经常在癌及/或肿瘤环境中出现的慢性炎症可在本发明创造的抗体施用过程中被减少。尤其是，利用本发明的多特异性抗体或其抗原结
合片段的治疗可以减少尿液中可检测到的白细胞数量，正如实施例所示。这证明了原本泌
尿道赘生物中（尤其是在膀胱癌中）常见的炎症病征，被减少或根除了，这反过来又证明了本发明抗体的疗效。
合片段的治疗可以减少尿液中可检测到的白细胞数量，正如实施例所示。这证明了原本泌
尿道赘生物中（尤其是在膀胱癌中）常见的炎症病征，被减少或根除了，这反过来又证明了本发明抗体的疗效。
[0032] 此外，本发明的抗体疗效可持续至少若干月份，且万一病情复发，应用本发明多特异性抗体或其抗原结合片段的后续治疗周期能够帮助患者复原，无需通过手术，甚至无需进行化疗，而化疗正是卡介苗疗法处理病情复发的常用手段。
[0033] 本文中所用的术语“抗体”包含抗体的各种形态，优选为包括但不限于全抗体、抗体片段、人抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及遗传工程抗体（变异抗体或突变抗体）的单克隆抗体，只要本发明的特性得以保留。优选为人抗体或人源化单克隆抗体以及重组抗体，尤其是重组单克隆抗体。由此，本发明的抗体或其抗原结合片段，优选为一个单克隆抗体或其抗原结合片段。此外，该抗体优选为多链抗体，即包含不止一条链的抗体，以此不同于单链抗体。
[0034] 本文中所用的术语“人抗体”包括从人免疫球蛋白序列中取得的含有可变区和恒定区的抗体。人抗体在现有技术中已被大家熟知（van Dijk，M. A.，van de Winkel，J. G.，《化学生物学新见》，5 (2001) 368-374）（van Dijk, M. A., and van de Winkel, J. G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。人抗体也可从转基因动物中提取（如小
鼠），前提是转基因动物在免疫接种后，在没有内源性免疫球蛋白产生的情况下也能够产生其能形成的全部或部分丰富人抗体。在此类种系突变的小鼠体内，人类种系免疫球蛋白基
因排列的转移一旦受到抗原攻击，就会导致人抗体的形成（Jakobovits, A.等，《美国国家科学院院刊》，90 (1993) 2551-2555；Jakobovits, A.等，《自然》，362(1993) 255-258；
Bruggemann, M.等，免疫学年报，7 (1993) 3340）（Jakobovits, A., et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362
(1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 3340）。人抗体也可从噬菌体呈现文库中提取（Hoogenboom，H. R.，Winter, G，《分子生物学杂志》，227 (1992)381-388；Marks，J. D.等，《分子生物学杂志》. 222 (1991)581-597）（Hoogenboom, H. R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992)381-388; Marks, J. D., et al.,
J. Mol. Biol. 222 (1991)581-597）。Cole及Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆
抗体（Cole等，《单克隆抗体及癌症治疗》，Alan R. Liss，p. 77 (1985) ；Boerner, P.等，《免疫学杂志》，147 (1991) 86-95）（Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); and Boerner, P., et al., J. Immunol. 147
(1991) 86-95）。本文所用的“人抗体”这一术语也包含此类经过改良（如在可变区）以创造出本发明的特性的抗体。
鼠），前提是转基因动物在免疫接种后，在没有内源性免疫球蛋白产生的情况下也能够产生其能形成的全部或部分丰富人抗体。在此类种系突变的小鼠体内，人类种系免疫球蛋白基
因排列的转移一旦受到抗原攻击，就会导致人抗体的形成（Jakobovits, A.等，《美国国家科学院院刊》，90 (1993) 2551-2555；Jakobovits, A.等，《自然》，362(1993) 255-258；
Bruggemann, M.等，免疫学年报，7 (1993) 3340）（Jakobovits, A., et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362
(1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 3340）。人抗体也可从噬菌体呈现文库中提取（Hoogenboom，H. R.，Winter, G，《分子生物学杂志》，227 (1992)381-388；Marks，J. D.等，《分子生物学杂志》. 222 (1991)581-597）（Hoogenboom, H. R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992)381-388; Marks, J. D., et al.,
J. Mol. Biol. 222 (1991)581-597）。Cole及Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆
抗体（Cole等，《单克隆抗体及癌症治疗》，Alan R. Liss，p. 77 (1985) ；Boerner, P.等，《免疫学杂志》，147 (1991) 86-95）（Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); and Boerner, P., et al., J. Immunol. 147
(1991) 86-95）。本文所用的“人抗体”这一术语也包含此类经过改良（如在可变区）以创造出本发明的特性的抗体。
[0035] 本文所用的术语“重组抗体”包括所有非自然存在的抗体，尤其是通过重组方式制备、表达、创造或分离的抗体，例如从中国仓鼠卵巢（CHO）细胞或动物（如小鼠）等宿主细胞上分离的抗体，或者是利用转染宿主细胞的重组表达载体表达的抗体。与自然产生的抗体相比，此种重组抗体有重新排列过的可变区和恒定区。
[0036] 本文所用的术语“抗原结合片段”、“片段”及“抗体片段”可互换使用，均能指代本发明抗体的任何片段，只要其保留了本发明所用的抗体的特异性结合活性，尤其是抗T细胞表面抗原的特异性和抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的特异性。抗体片段的例子包括但不限于单链抗体，Fab，Fab’，F(ab’)2，Fv或scFv。本发明的抗体片段可从抗体中获取，获取方式包括酶消化法，如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶，及/或通过化学还原实现的二硫键断裂法。作为替代，抗体片段可以通过克隆及表达重链及/或轻链的部分序列来获取。 “片段”包括但不限于Fab，Fab’，F(ab’)2及Fv片段。本发明还包含从本发明抗体的重链及轻链上获取的单链Fv片段（scFv）。例如，本发明包括一种包含本发明抗体中CDRs的scFv。此外，本发明还包括重链或轻链单体及二聚体、单域重链抗体、单域轻链抗体及单链抗体，例如其中重链及轻链可变区由肽接头联结的单链Fv。本发明抗体片段可传递单价或多价交互作用，且可被包括
在上述一系列结构中。例如，scFv分子可被合成，以创造出一种三价的“三聚体”或一种四价的“四聚体”。scFv分子可包括一个Fc区结构域，形成二价微抗体。此外，本发明的序列可以是多特异性分子的一个组成部分，在此多特异性分子中，本发明序列以本发明表位为靶点，而该分子的其他区域与其他靶点结合。典型的此类分子包括但不限于双特异性Fab2、三特
异性Fab3、双特异性scFv及二聚体（Holliger，Hudson，《自然生物技术》，9:1126-1136）（Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9:1126-1136）。尽管本说明书，包括权利要求在内，在某几处可能明确指代抗原结合片段、抗体片段、抗体的变异体及/或衍生物，术语“抗体”或“本发明抗体”应被视作包括抗体的所有种类，即抗原结合片段、抗体片段、抗体的变异体和衍生物。
在上述一系列结构中。例如，scFv分子可被合成，以创造出一种三价的“三聚体”或一种四价的“四聚体”。scFv分子可包括一个Fc区结构域，形成二价微抗体。此外，本发明的序列可以是多特异性分子的一个组成部分，在此多特异性分子中，本发明序列以本发明表位为靶点，而该分子的其他区域与其他靶点结合。典型的此类分子包括但不限于双特异性Fab2、三特
异性Fab3、双特异性scFv及二聚体（Holliger，Hudson，《自然生物技术》，9:1126-1136）（Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9:1126-1136）。尽管本说明书，包括权利要求在内，在某几处可能明确指代抗原结合片段、抗体片段、抗体的变异体及/或衍生物，术语“抗体”或“本发明抗体”应被视作包括抗体的所有种类，即抗原结合片段、抗体片段、抗体的变异体和衍生物。
[0037] 本文所用的术语“多特异性”所指的是能够与至少两个位于不同抗原上的不同的表位结合的能力，例如，在T细胞表面抗原及癌/肿瘤抗原上。因此，“双特异性”、“三特异性”、”四特异性”等术语指的是抗体可结合的不同表位的数量。例如，常规的单一特异性IgG类抗体有两个完全相同的表位结合部位（互补位），由此只能与相同的表位结合（无法与不同表位结合）。相反，多特异性抗体有至少两个不同类型的互补位，因此可以与至少两个不同的表位结合。本文中所用的术语“互补位”指的是抗体的一个表位结合部位。此外，单一“特异性”也可指代在单个抗体中的一个、两个、三个或更多相同互补位（单个抗体分子中互补位的实际个数被称作“价”）。例如，一个天然IgG抗体是单一特异性且二价的，因为它有两个相同的互补位。相应地，一个多特异性抗体包含至少两个（不同的）互补位。因此，术语“多特异性抗体”指的是有不止一个互补位且能够结合两个或更多不同表位的抗体。术语“多特异性抗体”特别包含上述的双特异性抗体，但通常也包含能与三个或更多不同表位结合的
蛋白质，如支架，即有三个或更多互补位的抗体。
蛋白质，如支架，即有三个或更多互补位的抗体。
[0038] 特别地，多特异性抗体或其抗原结合片段可包含两个或更多互补位，其中某些互补位可能是相同的，由此该抗体的所有互补位至少可归为两种不同类型，也正因此，该抗体有至少两种特异性。例如，本发明的多特异性抗体或其抗原结合片段可包含四个互补位，其中每两个互补位是相同的（即有同一种特异性），因此该抗体或其片段是双特异性且四价的（两种特异性各有两个相同的互补位）。由此，“一种特异性”尤其指代展现同种特异性的一或多个互补位（通常意味着此一个或多个互补位是相同的），所以“两种特异性”可以由两个、三个、四个、五个、六个或更多互补位实现，只要他们所指的是只有两种特异性。最优选地，一个多特异性抗体的每种（至少两种中的一种）特异性只有一个互补位，即多特异性抗体总共包含至少两个互补位。例如，一个双特异性抗体的两种特异性各包含一个互补位，即此抗体总共包含两个互补位。优选地，该抗体的两种特异性各包含两种（相同的）互补位，即该抗体总共包含四个互补位。优选地，该抗体的两种特异性各包含三个（相同的）互补位，即该抗体总共包含六个互补位。
[0039] 本文所用的术语“抗原”指的是为适应性免疫应答的受体充当靶点的任何结构物质，尤其作为抗体、T细胞受体及/或B细胞受体的靶点。“表位”，又被称为“抗原决定簇”，是能被免疫系统识别的抗原部分（或片段），尤其是被抗体、T细胞受体及/或B细胞受体识别。
由此，一个抗原拥有至少一个表位，即一个抗原拥有一个或多个表位。抗原可以是（i）一种肽、多肽或蛋白质，（ii）多糖，（iii）脂类，（iv）脂蛋白质或脂肽，（v）糖脂，（vi）核苷酸，或（vii）小分子药物或毒素。由此，抗原可以是肽、蛋白质、多糖、脂类、包括脂蛋白及糖脂的结合物、核苷酸（如DNA、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、陷阱DNA、质粒），或小分子药物（如环胞素A、紫杉醇、阿霉素、氨甲蝶呤、δ-氨基-γ-酮戊酸），或其任意结合物。优选地，该抗原选自：（i）肽，多肽，或蛋白质，（ii）多糖，（iii）脂类，（iv）脂蛋白或脂肽及（v）糖脂；更优选地，抗原是肽、多肽或者蛋白质。
由此，一个抗原拥有至少一个表位，即一个抗原拥有一个或多个表位。抗原可以是（i）一种肽、多肽或蛋白质，（ii）多糖，（iii）脂类，（iv）脂蛋白质或脂肽，（v）糖脂，（vi）核苷酸，或（vii）小分子药物或毒素。由此，抗原可以是肽、蛋白质、多糖、脂类、包括脂蛋白及糖脂的结合物、核苷酸（如DNA、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、陷阱DNA、质粒），或小分子药物（如环胞素A、紫杉醇、阿霉素、氨甲蝶呤、δ-氨基-γ-酮戊酸），或其任意结合物。优选地，该抗原选自：（i）肽，多肽，或蛋白质，（ii）多糖，（iii）脂类，（iv）脂蛋白或脂肽及（v）糖脂；更优选地，抗原是肽、多肽或者蛋白质。
[0040] 本文所用的术语“癌相关及/或肿瘤相关抗原（的一个表位）”指的是癌相关抗原（的一个表位）、癌特异性抗原、肿瘤相关抗原及/或肿瘤特异性抗原。此类表位/抗体通常为某种癌/肿瘤特有或与特定癌/肿瘤相关。合适的癌/肿瘤表位及抗原可从癌/肿瘤表位数据
库中获取，例如van der Bruggen P、Stroobant V、Vigneron N、Van den Eynde B.肽数据库：《T细胞限定肿瘤抗原》，肿瘤免疫学，2013；网址：http://www.cancerimmunity.org/peptide/和数据库”Tantigen” （ANTIGEN1.0版本, 2009年12月1日; 由达纳-法伯癌症研究所癌症疫苗中心的生物资讯中心开发; 网址：http://cvc.dfci.harvard.edu/tadb/）。
在前一数据库中，依据表达模式，人肿瘤抗原被归为四大类。就本发明而言，有用的与癌有关的，尤其是与肿瘤有关的，或组织特异性抗原的具体例子包括但不限于以下抗原：Epha2，Epha4，PCDGF，HAAH，间皮素；EPCAM; NY-ESO-1，糖蛋白MUC1以及NIUC10 粘液素p5（尤其是变异版），EGFR；癌抗原125（CA125），上皮糖蛋白40（EGP40）（Kievit等《，国际癌症杂志》，71:
237-245）（Kievit et al., 1997, Int. J. Cancer 71:237-245），鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）（Lozza等，《抗癌研究》，17:525-529）（Lozza et al., 1997 Anticancer Res. 17:
525-529），组织蛋白酶E（Mota等，《美国病理学杂志》，150:1223-1229）（Mota et al.,
1997, Am. J Pathol. 150:1223-1229），CDC27（包括蛋白质的变异形态），磷酸丙糖异构酶抗原，707-AP，A60分支杆菌抗原（Macs等，《癌症研究及临床肿瘤学杂志》，122:296-300）（Macs et al.,1996, J. Cancer Res. Clin. Oncol.122:296-300），AFP，alpha(v)beta(3)整合素，ART-4，ASC，BAGE，β-连环蛋白/m，BCL-2，bcr-abl，bcr-abl p190，bcr-abl p210，BRCA-1，BRCA-2，CA 19-9（Tolliver ，O’Brien，《南方医学杂志》，90:89-90；Tsuruta等，《国际泌尿外科学》，58:20-24）（Tolliver and O’Brien，1997，South Med. J. 90:89-
90; Tsuruta et al., 1997 Urol. Int. 58:20-24），CA 125，CALLA，CAMEL，碳酸酐酶，CAP-1，CASP-8，CDC27/m，CDK-4/m，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD44v3，CD44v6，CD47，CD52，CEA （Huang等，《疫苗专家述评》，(2002)1: 49-63）（Huang et al., Exper Rev. Vaccines (2002)1: 49-63），c-erb-2，CT9，CT10，Cyp-B，Dek-cain，DAM-6 (MAGE-B2)，DAM-
10 (MAGE-B1)，EphA2（Zantek等，《细胞生长及分化》，(1999)10: 629-38; Carles-Kinch等《，癌症研究》，(2002)62:2840-7）（Zantek et al., Cell Growth Differ. (1999)10:
629-38; Carles-Kinch et al., Cancer Res. (2002)62:2840-7）, EphA4（Cheng等，《细胞因子生长因子综述》，13:75-85）（Cheng et al., 2002, Cytokine Growth Factor
Rev.13:75-85），肿瘤相关TF抗原（Dahlenborg等，《国际癌症杂志》，70: 63-71）
（Dahlenborg et al., 1997, Int. J Cancer 70: 63-71），ELF2M，ETV6-AML1，G250，GAGE-
1，GAGE-2，GAGE-3，GAGE-4，GAGE-5，GAGE-6，GAGE-7B，GAGE-8，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GnT-V，GM1，GM2，GM3，pg100（Zajac等，《国际癌症杂志》，71: 491-496）（Zajac et al., 1997, Int. J Cancer 71: 491-496），GT1b，GT3，GQ1，HAGE，HER2/neu，HLA，HLA-DR，HLA-A*0201-R1701，HPV-E7，HSP-27，HSP-70，HSP70-2M，HSP-72，HSP-90，HST-2，hTERT，hTRT，iCE，生存素等编程性细胞死亡抑制剂，KH-1腺癌抗原（Deshpande，Danishefsky，《自然》，387: 164-
166）（Deshpande and Danishefsky, 1997, Nature 387: 164-166），KIAA0205，K-ras，LAGE，LAGE-1，LDLR/FUT，Lewis Y抗原，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE-6，MAGE-A1，MAGE-A2，MAGE-A3，MAGE-A4，MAGE-A6，MAGE-A10，MAGE-A12，MAGE-B5，MAGE-B6，MAGE-C2，MAGE-C3，MAGE D，MART-1，MART-1/Melan-A（Kawakami，Rosenberg，《国际免疫学述评》，14:173-192）（Kawakami and Rosenberg, 1997, Int. Rev. Immunol. 14:173-192），MC1R，MCSP，MDM-
2，MHCII，mTOR，肌球蛋白/m，MUC1，MUC2，MUM-1，MUM-2，MUM-3，新型多聚腺苷酸聚合酶，NA88-A，NFX2，NY-ESO-1，NY-ESO-1a (CAG-3)，PAGE-4，PAP，蛋白水解酶3（Molldrem等，《血液》，(1996)88: 2450-7；Molldrem等，《血液》，(1997)90:2529-34）（Molldrem et al., Blood (1996)88: 2450-7; Molldrem et al., Blood (1997)90:2529-34），P15，p53，p97，p190，PD-L1，Pgp，PIK3CA，Pm1/RARα，PRAME，蛋白聚糖，PSA，PSM，PSMA，RAGE，RAS，RCAS1，RU1，RU2，SAGE，SART-1，SART-2，SART-3，SP17，SPAS-1，SSX2，SSX4 TEL/AML1，TPI/m，酪氨酸酶，TARP，端粒酶，TRP-1(gp75) ，TRP-2，TRP-2/INT2，VEGF，WT-1，Wue抗原，细胞表面靶点GC182、GT468或GT512，或源于NY-ESO-1和LAGE-1基因的经转化的NY-ESO-ORF2和CAMEL蛋白质。就本发明发言，有用的与癌有关的抗原（尤其是与肿瘤有关的抗原）或组织特异性抗原的更多特例还有CD133。
库中获取，例如van der Bruggen P、Stroobant V、Vigneron N、Van den Eynde B.肽数据库：《T细胞限定肿瘤抗原》，肿瘤免疫学，2013；网址：http://www.cancerimmunity.org/peptide/和数据库”Tantigen” （ANTIGEN1.0版本, 2009年12月1日; 由达纳-法伯癌症研究所癌症疫苗中心的生物资讯中心开发; 网址：http://cvc.dfci.harvard.edu/tadb/）。
在前一数据库中，依据表达模式，人肿瘤抗原被归为四大类。就本发明而言，有用的与癌有关的，尤其是与肿瘤有关的，或组织特异性抗原的具体例子包括但不限于以下抗原：Epha2，Epha4，PCDGF，HAAH，间皮素；EPCAM; NY-ESO-1，糖蛋白MUC1以及NIUC10 粘液素p5（尤其是变异版），EGFR；癌抗原125（CA125），上皮糖蛋白40（EGP40）（Kievit等《，国际癌症杂志》，71:
237-245）（Kievit et al., 1997, Int. J. Cancer 71:237-245），鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）（Lozza等，《抗癌研究》，17:525-529）（Lozza et al., 1997 Anticancer Res. 17:
525-529），组织蛋白酶E（Mota等，《美国病理学杂志》，150:1223-1229）（Mota et al.,
1997, Am. J Pathol. 150:1223-1229），CDC27（包括蛋白质的变异形态），磷酸丙糖异构酶抗原，707-AP，A60分支杆菌抗原（Macs等，《癌症研究及临床肿瘤学杂志》，122:296-300）（Macs et al.,1996, J. Cancer Res. Clin. Oncol.122:296-300），AFP，alpha(v)beta(3)整合素，ART-4，ASC，BAGE，β-连环蛋白/m，BCL-2，bcr-abl，bcr-abl p190，bcr-abl p210，BRCA-1，BRCA-2，CA 19-9（Tolliver ，O’Brien，《南方医学杂志》，90:89-90；Tsuruta等，《国际泌尿外科学》，58:20-24）（Tolliver and O’Brien，1997，South Med. J. 90:89-
90; Tsuruta et al., 1997 Urol. Int. 58:20-24），CA 125，CALLA，CAMEL，碳酸酐酶，CAP-1，CASP-8，CDC27/m，CDK-4/m，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD44v3，CD44v6，CD47，CD52，CEA （Huang等，《疫苗专家述评》，(2002)1: 49-63）（Huang et al., Exper Rev. Vaccines (2002)1: 49-63），c-erb-2，CT9，CT10，Cyp-B，Dek-cain，DAM-6 (MAGE-B2)，DAM-
10 (MAGE-B1)，EphA2（Zantek等，《细胞生长及分化》，(1999)10: 629-38; Carles-Kinch等《，癌症研究》，(2002)62:2840-7）（Zantek et al., Cell Growth Differ. (1999)10:
629-38; Carles-Kinch et al., Cancer Res. (2002)62:2840-7）, EphA4（Cheng等，《细胞因子生长因子综述》，13:75-85）（Cheng et al., 2002, Cytokine Growth Factor
Rev.13:75-85），肿瘤相关TF抗原（Dahlenborg等，《国际癌症杂志》，70: 63-71）
（Dahlenborg et al., 1997, Int. J Cancer 70: 63-71），ELF2M，ETV6-AML1，G250，GAGE-
1，GAGE-2，GAGE-3，GAGE-4，GAGE-5，GAGE-6，GAGE-7B，GAGE-8，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GnT-V，GM1，GM2，GM3，pg100（Zajac等，《国际癌症杂志》，71: 491-496）（Zajac et al., 1997, Int. J Cancer 71: 491-496），GT1b，GT3，GQ1，HAGE，HER2/neu，HLA，HLA-DR，HLA-A*0201-R1701，HPV-E7，HSP-27，HSP-70，HSP70-2M，HSP-72，HSP-90，HST-2，hTERT，hTRT，iCE，生存素等编程性细胞死亡抑制剂，KH-1腺癌抗原（Deshpande，Danishefsky，《自然》，387: 164-
166）（Deshpande and Danishefsky, 1997, Nature 387: 164-166），KIAA0205，K-ras，LAGE，LAGE-1，LDLR/FUT，Lewis Y抗原，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE-6，MAGE-A1，MAGE-A2，MAGE-A3，MAGE-A4，MAGE-A6，MAGE-A10，MAGE-A12，MAGE-B5，MAGE-B6，MAGE-C2，MAGE-C3，MAGE D，MART-1，MART-1/Melan-A（Kawakami，Rosenberg，《国际免疫学述评》，14:173-192）（Kawakami and Rosenberg, 1997, Int. Rev. Immunol. 14:173-192），MC1R，MCSP，MDM-
2，MHCII，mTOR，肌球蛋白/m，MUC1，MUC2，MUM-1，MUM-2，MUM-3，新型多聚腺苷酸聚合酶，NA88-A，NFX2，NY-ESO-1，NY-ESO-1a (CAG-3)，PAGE-4，PAP，蛋白水解酶3（Molldrem等，《血液》，(1996)88: 2450-7；Molldrem等，《血液》，(1997)90:2529-34）（Molldrem et al., Blood (1996)88: 2450-7; Molldrem et al., Blood (1997)90:2529-34），P15，p53，p97，p190，PD-L1，Pgp，PIK3CA，Pm1/RARα，PRAME，蛋白聚糖，PSA，PSM，PSMA，RAGE，RAS，RCAS1，RU1，RU2，SAGE，SART-1，SART-2，SART-3，SP17，SPAS-1，SSX2，SSX4 TEL/AML1，TPI/m，酪氨酸酶，TARP，端粒酶，TRP-1(gp75) ，TRP-2，TRP-2/INT2，VEGF，WT-1，Wue抗原，细胞表面靶点GC182、GT468或GT512，或源于NY-ESO-1和LAGE-1基因的经转化的NY-ESO-ORF2和CAMEL蛋白质。就本发明发言，有用的与癌有关的抗原（尤其是与肿瘤有关的抗原）或组织特异性抗原的更多特例还有CD133。
[0041] 就移行细胞癌等膀胱癌而言，Jones等人在1997年出版的《抗癌研究》第17卷第685至687页中（Jones et al., 1997, Anticancer Res. 17:685-687）描述的抗原是优选。许多其他癌抗原在此技术中也被熟知。特别地，膀胱上皮细胞可包含若干（表面）结构，这些结构在赘生物中被过量表达，可作为癌及/或肿瘤特异性抗原。相应地，与膀胱上皮细胞赘生物有关的此类抗原是优选。
[0042] 本文所用的术语“T细胞表面抗原（的一个表位）”指的是T细胞表面相关抗原或T细胞表面特异性抗原（也被称作“T细胞表面标记”）（的一个表位）。这些是T细胞特有的“CD”（分化抗原簇）分子。CD分子是能用于识别鉴定白细胞的细胞表面标记。CD这一术语由始于1982年的HLDA（人白细胞分化抗原）工作坊提出并沿用至今。本领域专业人员可通过检索其所知的各种资源，得出是否能在T细胞上发现特定CD分子（也就代表了本发明T细胞表面抗
原）的结论，例如http://www.ebioscience.com/resources/human-cd/chart.htm，BD生物科学的《人鼠CD标记手册》（可在http://www.bdbiosciences.com/documents/cd_marker_handbook.pdf获取），或www.hcdm.org。相应地，T细胞表面抗原的例子包括例如BD生物科学在《人鼠CD标记手册》（可在http://www.bdbiosciences.com/documents/cd_marker_
handbook.pdf获取）中或《CD标记列表》等其他资源中明确指出的T细胞（人）CD标记。
原）的结论，例如http://www.ebioscience.com/resources/human-cd/chart.htm，BD生物科学的《人鼠CD标记手册》（可在http://www.bdbiosciences.com/documents/cd_marker_handbook.pdf获取），或www.hcdm.org。相应地，T细胞表面抗原的例子包括例如BD生物科学在《人鼠CD标记手册》（可在http://www.bdbiosciences.com/documents/cd_marker_
handbook.pdf获取）中或《CD标记列表》等其他资源中明确指出的T细胞（人）CD标记。
[0043] 本发明的抗体或其抗原结合片段在泌尿道赘生物治疗中得以应用。
[0044] 本文所用的术语“赘生物”指的是任何组织的异常生长。此类异常生长（瘤形成）通常但并非总是形成块状。如果成块，通常被称作“肿瘤”。特别地，肿瘤是一种固体或者积液的囊性病变，其可能是，也可能不是，由赘生细胞的异常生长引起并尺寸不断增大。就本发明而言，赘生物可能会，也可能不会形成肿瘤。特别地，白血病以及大部分形态的原位癌（CIS）都不会形成肿瘤。肿瘤也并非与癌症同义。尽管按照定义，癌总是恶性的，肿瘤可以是良性的、癌前期的或是恶性的。
[0045] 一般而言，赘生物被分为四大类：良性赘生物、原位赘生物、恶性赘生物以及未明确或未知行为。恶性赘生物也被认为是“癌”。特别地，赘生物可以是良性的、潜在恶性的（初期癌）、或恶性的（癌）。良性肿瘤包括子宫平滑肌瘤以及黑素细胞痣（皮肤痣）。它们被限制在局部，不会转化成癌。潜在恶性赘生物包括原位癌。它们限于局部，不会浸润其他组织，产生破坏，然而随着时间推移可能会转化为癌。恶性赘生物通常被称作癌。它们浸润并破坏周遭组织，可能会形成转移性病灶，且如果不进行治疗或治疗无效，将会致命。继发性赘生物指的是任何一类癌性肿瘤，其可能是原发性肿瘤的远程转移，也可能是在化疗或放疗等特定癌症治疗后出现次数增加的明显不相关的肿瘤。极少情况下会出现原发癌部位不明的转
移性赘生物，这被称为原发部位不明癌。
移性赘生物，这被称为原发部位不明癌。
[0046] 就本发明而言，赘生物优选为潜在恶性的（初期癌）（例如原位癌），或者恶性的（癌）。
[0047] 本文所用的术语“泌尿道”（也被称为“泌尿系统”）应被视作包含肾脏、输尿管、膀胱以及尿道。泌尿道通常指的是产生并引导尿液至排泄口的结构。
[0048] 优选地，本发明应用抗体或其抗原结合片段时采取全身施用或泌尿道局部施用，且优选灌注法。
[0049] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可通过多种途径施用，例如，全身地或局部地。全身施用途径通常包括经皮施用、口服施用或胃肠道外施用。胃肠道外施用又包括皮下注射、静脉注射、肌内注射、动脉注射、皮内注射、腹腔注射及/或鼻腔施用。作用限于局部的施用途径通常包括局部施用途径，但也包括直接在疼痛部位施用，比如瘤内注射。就本发明而言，优选“局部施用”，尤其指泌尿道直接施用，比如膀胱内施用。
[0050] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过胃肠道外施用。更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过静脉注射、瘤内注射、皮内注射、肌肉注射、鼻腔施用或结内施用。例如，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过静脉注射施用。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段不通过皮下注射施用。
[0051] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过灌注法施用，例如通过膀胱内灌注在泌尿道局部施用。本领域内专业人员可利用自己熟知的任意施用途径实施灌注
法，例如利用插管术进入尿道或膀胱内部空间。
法，例如利用插管术进入尿道或膀胱内部空间。
[0052] 最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段采取膀胱内施用这一途径。
[0053] 膀胱内施用特别意味着将药物直接施用在膀胱内，优选使用导管，比如尿道导管。使用或不使用2%利多卡因凝胶注射器均可。向膀胱内施用时优选灌注法。优选地，在膀胱灌注治疗前，先排空膀胱内尿液，如此一来抗体或其抗原结合片段可被灌注入已排空尿液的
膀胱内。在接受膀胱灌注治疗后，优选地，患者能遵照指示，维持治疗至少一小时，若能维持至少两小时则更好。换言之，患者在接受治疗后至再次排尿前，优选地，能遵照指示，等待至少一小时，更优选地，等待至少两小时。
膀胱内。在接受膀胱灌注治疗后，优选地，患者能遵照指示，维持治疗至少一小时，若能维持至少两小时则更好。换言之，患者在接受治疗后至再次排尿前，优选地，能遵照指示，等待至少一小时，更优选地，等待至少两小时。
[0054] 膀胱内施用靶区可以是膀胱内部任何部位，包括导入膀胱的空隙空间或导入膀胱上皮。一般而言，本文所用的术语“膀胱内施用”指的是向膀胱内空隙空间投递药物。其中，如果膀胱内存在尿液，灌注的液体可能会分散在尿液中，否则，灌注的液体会直接覆盖膀胱内壁。本文所述抗体或其抗原结合片段在尿液环境中的效用发挥时间通常足以使其在其膀
胱内预期部位发挥药理作用。
胱内预期部位发挥药理作用。
[0055] 惊人的是，本文所述抗体或其抗原结合片段，即使在不利的尿液环境中也能发挥效用，也因此能够与优选的靶组织中的特定抗原结合，例如膀胱内施用时的膀胱上皮上。此外，与泌尿道癌及/或肿瘤相关的特定抗原，如EpCAM，通常被认为位于或靠近膀胱上皮基
膜。在生理条件下，这些抗原一般不会被过量表达，紧密的膀胱上皮细胞使得它们难以被接近。然而，在赘生物形成的情况下，尤其是移行细胞癌等恶性或原位赘生物，受感染细胞通常变得更易透过，这就使得基膜变得更容易被接近。由此，优选地，本文所述抗体或其抗原结合片段的功效得以增强。
膜。在生理条件下，这些抗原一般不会被过量表达，紧密的膀胱上皮细胞使得它们难以被接近。然而，在赘生物形成的情况下，尤其是移行细胞癌等恶性或原位赘生物，受感染细胞通常变得更易透过，这就使得基膜变得更容易被接近。由此，优选地，本文所述抗体或其抗原结合片段的功效得以增强。
[0056] 此外，优选地，本文所述抗体或其抗原结合片段的膀胱内施用只在局部发挥作用，因而避免全身效应。特别地，往往更易在全身施用时产生的不良副作用得以避免。尤其是，IL-6、IL-8、IFN-γ及TNF-α等促炎细胞因子的全身性释放数量大幅减少，避免了不希望出现的发热、恶心、头痛等副作用，以及不希望出现的发红、发痒甚至是过敏性休克等全身性免疫反应。此外，优选地，不希望出现的HAMA（人抗鼠抗体）或ADA（抗药抗体）反应也得以避免。此外，众所周知的是，本文所述抗体或其抗原结合片段，如卡妥索单抗（Catumaxomab），在腹腔注射时，是致免疫的（Heiss等《，三功能抗体卡妥索单抗在上皮癌引起的恶性腹水治疗中的应用：一项前瞻性随机二/三期试验结果》，国际癌症杂志，127:2209-2221 (2010)；Ott等《，对卡妥索单抗的体液反应与临床结果相关：恶性腹水患者中二/三期关键阶段研究结果》，国际癌症杂志，130:2195-2203(2012)）（Heiss et al. The trifuntional
antibody catumaxomab for the treatment of malignant ascites due to epithelial
cancer: results of a prospective randomized phase II/III trial. Int. J Cancer
127:2209-2221 (2010); Ott et al. Humoral response to catumaxomab correlates
with clinical outcome: results of the pivotal phase II/III study in patients
with malignant ascites. Int. J Cancer 130:2195-2203(2012)）。然而，本文所述抗原结合片段的膀胱内施用，如卡妥索单抗，通常不会致免疫——最大原因可能在于药物并未
影响全身。
antibody catumaxomab for the treatment of malignant ascites due to epithelial
cancer: results of a prospective randomized phase II/III trial. Int. J Cancer
127:2209-2221 (2010); Ott et al. Humoral response to catumaxomab correlates
with clinical outcome: results of the pivotal phase II/III study in patients
with malignant ascites. Int. J Cancer 130:2195-2203(2012)）。然而，本文所述抗原结合片段的膀胱内施用，如卡妥索单抗，通常不会致免疫——最大原因可能在于药物并未
影响全身。
[0057] 由于避免了全身性施用后更易出现的副作用，如有需要，可在膀胱内进行更大剂量的本文所述抗体或其抗原结合片段的施用。另一方面，由于活性剂直接存在于预期作用
部位上，膀胱内施用时可减少所需用药量。相应地，少量到极少量的本文所述抗体及其抗原结合片段就足以确保疗效——尽管膀胱中的尿液可能会高度稀释药物。
部位上，膀胱内施用时可减少所需用药量。相应地，少量到极少量的本文所述抗体及其抗原结合片段就足以确保疗效——尽管膀胱中的尿液可能会高度稀释药物。
[0058] 此外，优选地，本文所述抗体或其抗原结合片段在膀胱内施用时不需要适用的复合配方。换言之，优选地，本文所述抗体或其抗原结合片段在不利的尿液环境中保持稳定，尤其是局部施用时，例如膀胱内施用。
[0059] 优选地，应用本文所述抗原结合片段进行治疗的赘生物为原位赘生物或恶性赘生物，更优选地，赘生物为恶性赘生物。
[0060] 就本发明而言，术语“恶性赘生物”（也被称作“恶性肿瘤”）泛指癌。与良性赘生物相比，恶性赘生物通常在生长时无自身限制性，且通常能够浸润邻近组织，并扩散至远端组织。
[0061] 原位赘生物又被称作“原位癌”（CIS）。原位癌通常是潜在恶性的。与恶性赘生物相比，原位赘生物限于局部，不会浸润并损害其他组织，但可能最终转化为癌。原位癌通常是一群异常细胞，优选地，这些细胞在正常部位生长，因此是在“原位”。恶性肿瘤通常表现出间变、侵袭性及转移这几种特征中的一项或多项。
[0062] 就泌尿道而言，尤其优选膀胱上皮原位癌。膀胱上皮原位癌是一种高级别赘生物，且是病情复发及进展时需要特异治疗的指示。特别地，膀胱上皮原位癌是一种扁平且非浸润性的高级别膀胱上皮赘生物。高级别异生、重度异生以及部分重度异生都被包括在原位
癌一类。尽管严格来说非浸润性乳头状膀胱上皮赘生物也是原位的，但其并不被视作原位
癌。重要的是，原位癌通常能以膀胱灌注化疗或膀胱切除术治疗进行治疗。
癌一类。尽管严格来说非浸润性乳头状膀胱上皮赘生物也是原位的，但其并不被视作原位
癌。重要的是，原位癌通常能以膀胱灌注化疗或膀胱切除术治疗进行治疗。
[0063] 依据“恶性肿瘤分类法”（TNM），原位癌通常被记录为TisN0M0（0期）。TNM分类法是一种癌症分期标记系统，能规范患者癌症分期，前提是患者癌症源于实体瘤。字母“T”描述最初（原发性）肿瘤的大小及其是否已经侵及周遭组织。字母“N”描述附近（区域性）受侵的淋巴结。字母“M”描述远端转移情况（癌从身体的某一部位扩散至另一部位）。依据原发性肿瘤的大小及/或其扩散情况，再分为T1，T2，T3，T4四个阶段。
[0064] 例如，在膀胱癌中，TNM分类法包括原发性肿瘤（“T”阶段）的以下阶段：TX–原发性肿瘤无法评估，T0–无原发性肿瘤证据，Ta–非浸润性乳头状癌，Tis–原位癌（“扁平肿瘤”），T1–肿瘤侵及上皮下结缔组织，T2a–肿瘤侵及浅层肌（内1/2），T2b–肿瘤侵及深层肌（外1/2），T3–肿瘤侵及膀胱周围组织：T3a–显微镜下及T3b–肉眼（膀胱外肿块），T4a–肿瘤侵及前列腺、子宫、阴道以及T4b–肿瘤侵及盆壁或腹壁；区域淋巴结（“N”阶段）的以下阶段：NX–区域淋巴结转移无法评估，N0–无区域淋巴结转移，N1–单个淋巴结转移，最大径等于或小于2厘米，N2–单个淋巴结转移，最大径大于2厘米但小于或等于5厘米，或者多个淋巴结转移，但最大径均不超过5厘米，以及N3–单个淋巴结转移，最大径大于5厘米；远端转移的以下阶段（“M”阶段）：MX–远端转移无法评估，M0–无远端转移，M1–有远端转移（Longe，Jacqueline L，《盖尔癌症百科全书：癌症及其治疗指南》，盖尔出版公司，p. 137）（Longe, Jacqueline L.(2005). Gale Encyclopedia Of Cancer: A Guide to Cancer And Its Treatments.
Detroit: Thomson Gale. p. 137）。将这些阶段结合后可产生以下用数字表示的膀胱癌病变分期：0a期：Ta，N0，M0；0is期：Tis，N0，M0；I期：T1，N0，M0；II期：T2a或T2b，N0，M0；III期：
T3a，T3b或T4a，N0，M0；及IV期：以下任一阶段：T4b，N0，M0；任意T阶段，N1至 N3，M0或任意T阶段，任意N阶段，M1。
Detroit: Thomson Gale. p. 137）。将这些阶段结合后可产生以下用数字表示的膀胱癌病变分期：0a期：Ta，N0，M0；0is期：Tis，N0，M0；I期：T1，N0，M0；II期：T2a或T2b，N0，M0；III期：
T3a，T3b或T4a，N0，M0；及IV期：以下任一阶段：T4b，N0，M0；任意T阶段，N1至 N3，M0或任意T阶段，任意N阶段，M1。
[0065] 优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗膀胱上皮赘生物。
[0066] 膀胱上皮是一种“移行上皮”，分布在泌尿道的大部分组织中，包括肾盂、输尿管、膀胱以及部分尿道。泌尿道上皮组织为泌尿道特有，有极大弹性及跨上皮细胞电阻。膀胱上皮通常由约3至5层细胞层构成，同时在细胞腔（顶部）表面有一层厚厚的保护性糖蛋白噬菌斑。
[0067] 膀胱上皮一般被认为易受赘生物影响，尤其是癌。“癌”指的是一类从上皮细胞发展而来的肿瘤，例如膀胱上皮细胞。一般而言，癌源于分布在身体内表面和外表面组织且通常始于胚胎发育期间内胚层和外胚层的细胞。
[0068] 一种尤其优选的膀胱上皮赘生物是移行细胞癌（TCC；也被称作膀胱上皮细胞癌，UCC）。相应地，优选地，抗体或其抗原结合片段用于膀胱上皮细胞癌（移行细胞癌）的治疗中。“移行”指的是显微镜下可见的癌细胞组织学亚类。移行细胞癌通常出现在泌尿系统中：
肾脏、膀胱以及辅助器官中。移行细胞癌是最常见的膀胱癌、输尿管癌、尿道癌以及脐尿管癌类型。移行细胞癌是第二常见的肾癌。移行细胞癌源于分布在泌尿道内表面组织，即膀胱上皮，且可从肾收集系统扩散至膀胱（“匐行性肿瘤”）。移行细胞癌常常是多病灶的，30%至
40%的患者在诊断时都有不止一个肿瘤。移行细胞癌的生长模式可以是乳头状、固着的（扁平的）或是原位癌。在被2004年世界卫生组织分级方法（低度恶性的乳头状赘生物[PNLMP]、低级别以及高级乳头状癌）取代前，1973年世界卫生组织的移行细胞癌分级体系（乳头状
瘤、G1、G2或G3）被最广泛应用。
肾脏、膀胱以及辅助器官中。移行细胞癌是最常见的膀胱癌、输尿管癌、尿道癌以及脐尿管癌类型。移行细胞癌是第二常见的肾癌。移行细胞癌源于分布在泌尿道内表面组织，即膀胱上皮，且可从肾收集系统扩散至膀胱（“匐行性肿瘤”）。移行细胞癌常常是多病灶的，30%至
40%的患者在诊断时都有不止一个肿瘤。移行细胞癌的生长模式可以是乳头状、固着的（扁平的）或是原位癌。在被2004年世界卫生组织分级方法（低度恶性的乳头状赘生物[PNLMP]、低级别以及高级乳头状癌）取代前，1973年世界卫生组织的移行细胞癌分级体系（乳头状
瘤、G1、G2或G3）被最广泛应用。
[0069] 优选地，抗体或其抗原结合片段能用于治疗的泌尿道赘生物选自以下组成的组：（i）原位癌，优选为尿道原位癌、膀胱原位癌、输尿管原位癌及/或肾盂原位癌；（ii）非肌层浸润性膀胱上皮癌，优选为集中在肾盂、输尿管、尿道、膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管；及（iii）肌层浸润性膀胱上皮癌，优选为集中在肾盂、输尿管、尿道、膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管。
[0070] 优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗泌尿道局部的淋巴瘤及/或肉瘤。
[0071] 特别地，抗体或其抗原结合片段优选用于治疗移行细胞癌、鳞状上皮细胞癌、腺癌、肉瘤、小细胞癌以及泌尿道其他任何部位癌的继发性癌。尤其优选移行细胞癌。
[0072] 优选地，泌尿道赘生物是下尿路赘生物。下尿路特别包含了膀胱及尿道，且包括膀胱的所有结构及功能性子器官，但不包含组成上尿路的肾脏及输尿管。下尿路尤其易受膀胱内施用影响。
[0073] 由此，优选地，应用抗体或其抗原结合片段进行治疗的下尿路赘生物选自以下所组成的组：（i）尿道原位癌及/或膀胱原位癌；（ii）集中于尿道、膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管的非肌层浸润性膀胱上皮癌；（iii）集中于尿道、膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管的肌层浸润性膀胱上皮癌。
[0074] 最优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗膀胱赘生物，优选为膀胱原位癌或膀胱恶性赘生物。特别地，抗体或其抗原结合片段用于治疗膀胱癌。尽管名称中带“癌”字，膀胱癌包括了上述所有以数字标记的病理阶段，也正因此，优选的膀胱癌阶段选自以下所组
成的组：（i）0a期：Ta，N0，M0（癌是非浸润性乳头状癌（Ta），且已朝膀胱中心生长但未扩散至膀胱壁的结缔组织或肌层；未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（ii）0is期：Tis，N0，M0（此类癌是扁平的非浸润性癌（Tis），也被叫作扁平原位癌（CIS），且只生长于膀胱内衬层；还未向膀胱中心生长，也并未侵及膀胱壁的结缔组织或肌层；未扩散至附近的淋巴结
（N0）或远部（M0））；（iii）I期：T1，N0，M0（癌已扩散至膀胱衬层下的结缔组织层，但未侵及膀胱壁肌层（T1）；癌未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（iv）II期：T2a或T2b，N0，M0 （癌已扩散至膀胱壁厚肌层，但未完全穿过肌层侵及包围膀胱的脂肪组织层（T2）：癌未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（v）III期：T3a，T3b或T4a，N0，M0（癌扩散至包围膀胱的肌肉组织层（T3a或T3b）；可能已扩散至前列腺、子宫或阴道，但未扩散至骨盆壁或腹壁
（T4a）；癌未扩散至附近淋巴结（N0）或远部（M0））；及（vi）IV期：以下阶段的任意一种：T4b，N0，M0（癌已穿过膀胱壁，侵及骨盆壁或腹壁（T4b）；癌未扩散至附近淋巴结（N0）或远部（M0））；任意T阶段，N1至N3，M0（癌已扩散至附近淋巴结（N1至N3）但未至远部（M0））或任意T阶段，任意N阶段，M1（癌已扩散至远部淋巴结或骨、肝脏、肺等部位（M1））。更优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0a期，0is期，I期或II期中任一阶段的肿瘤，尤其是治疗0a期，0is期，I期或II期中任一阶段的膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0a期肿瘤，尤其是0a期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0is期肿瘤，尤其是
0is期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗I期肿瘤，尤其是I期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗II期肿瘤，尤其是II期膀胱癌。
成的组：（i）0a期：Ta，N0，M0（癌是非浸润性乳头状癌（Ta），且已朝膀胱中心生长但未扩散至膀胱壁的结缔组织或肌层；未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（ii）0is期：Tis，N0，M0（此类癌是扁平的非浸润性癌（Tis），也被叫作扁平原位癌（CIS），且只生长于膀胱内衬层；还未向膀胱中心生长，也并未侵及膀胱壁的结缔组织或肌层；未扩散至附近的淋巴结
（N0）或远部（M0））；（iii）I期：T1，N0，M0（癌已扩散至膀胱衬层下的结缔组织层，但未侵及膀胱壁肌层（T1）；癌未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（iv）II期：T2a或T2b，N0，M0 （癌已扩散至膀胱壁厚肌层，但未完全穿过肌层侵及包围膀胱的脂肪组织层（T2）：癌未扩散至附近的淋巴结（N0）或远部（M0））；（v）III期：T3a，T3b或T4a，N0，M0（癌扩散至包围膀胱的肌肉组织层（T3a或T3b）；可能已扩散至前列腺、子宫或阴道，但未扩散至骨盆壁或腹壁
（T4a）；癌未扩散至附近淋巴结（N0）或远部（M0））；及（vi）IV期：以下阶段的任意一种：T4b，N0，M0（癌已穿过膀胱壁，侵及骨盆壁或腹壁（T4b）；癌未扩散至附近淋巴结（N0）或远部（M0））；任意T阶段，N1至N3，M0（癌已扩散至附近淋巴结（N1至N3）但未至远部（M0））或任意T阶段，任意N阶段，M1（癌已扩散至远部淋巴结或骨、肝脏、肺等部位（M1））。更优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0a期，0is期，I期或II期中任一阶段的肿瘤，尤其是治疗0a期，0is期，I期或II期中任一阶段的膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0a期肿瘤，尤其是0a期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗0is期肿瘤，尤其是
0is期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗I期肿瘤，尤其是I期膀胱癌。尤其优选地，抗体或其抗原结合片段用于治疗II期肿瘤，尤其是II期膀胱癌。
[0075] 膀胱癌的优选例子包括膀胱原位癌、非浸润性、浸润性及转移性的移行细胞癌、非转移性膀胱细胞癌。因此，膀胱赘生物选自移行细胞癌、鳞状上皮细胞癌、腺瘤、肉瘤、小细胞癌以及身体内其他任何部位癌的继发性癌，优选地，膀胱赘生物是移行细胞癌。膀胱原位癌一般是一种更为恶性的病变过程，转移的可能性比一些已浸润膀胱壁的大尺寸低度恶性肿瘤更大。
[0076] 固有膜是确定移行细胞肿瘤攻击性的有用标记。固有膜是移行细胞层（尿路上皮）及肌纤维之间的一层膀胱壁结缔组织及细胞。随着异常细胞不断繁殖，其遗传机制中将会产生更多的变异。通常而言，此类变异可被修复，但此类细胞的修复能力有限。最终，遗传变化及进一步生长使细胞形成破坏及穿透下方固有膜的能力。浸润性移行细胞肿瘤由此形
成。相应地，“浅表的”（非浸润性）移行细胞癌及“（肌层）浸润性”移行细胞癌的差异是一项重要特征。实质上，任何未浸润肌层的肿瘤都被认为是浅表的（非浸润性的）。然而，一旦肌层被侵及，所作诊断即是肌层浸润性移行细胞癌。这一特征至关重要，原因在于其预测了这些肿瘤的自然史。浅表性移行细胞癌易复发，但此类复发大多为对局部切除术反应良好的
浅表性肿瘤。只有15%的浅表性肿瘤会转化为或复发为高级别的浸润性病变。在这一方面，复发的原位癌病变或高级别/浸润性肿瘤更难控制，且更易导致转移扩散。
成。相应地，“浅表的”（非浸润性）移行细胞癌及“（肌层）浸润性”移行细胞癌的差异是一项重要特征。实质上，任何未浸润肌层的肿瘤都被认为是浅表的（非浸润性的）。然而，一旦肌层被侵及，所作诊断即是肌层浸润性移行细胞癌。这一特征至关重要，原因在于其预测了这些肿瘤的自然史。浅表性移行细胞癌易复发，但此类复发大多为对局部切除术反应良好的
浅表性肿瘤。只有15%的浅表性肿瘤会转化为或复发为高级别的浸润性病变。在这一方面，复发的原位癌病变或高级别/浸润性肿瘤更难控制，且更易导致转移扩散。
[0077] 除移行细胞癌外，还有几种可在膀胱内发展的肿瘤，也由此，就本发明而言，是优选。这些肿瘤包括鳞状上皮细胞癌（SCC）。传染原或异物对膀胱的长期刺激可导致移行上皮转化为一种被称作鳞状上皮细胞或“扁平”细胞的不同细胞类型。此外，从理论上来说，膀胱内各种不同细胞类型中的任意一种都可能演变为癌：肌细胞（横纹肌肉瘤）、腺细胞（腺瘤）、神经细胞（神经细胞瘤），甚至是免疫型细胞（淋巴瘤）。邻近器官中形成的肿瘤也能侵及膀胱，表现为“膀胱肿瘤”（如宫颈癌或结肠癌）。相应地，以上膀胱癌中的任意一种都可以本文所述抗体或其抗原结合片段进行治疗。
[0078] 优选地，应用抗体或其抗原结合片段进行治疗的泌尿道赘生物选自以下所组成的组：（i）膀胱原位癌；（ii）集中于膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管的非肌层浸润性膀胱上皮癌；及（iii）集中于膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、膀胱颈、输尿管口及/或脐尿管的肌层浸润性膀胱上皮癌。
[0079] 由此，优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可用于治疗膀胱原位癌，尤其是膀胱上皮原位癌。此外，优选地，其可用于治疗任何恶性膀胱赘生物，尤其是集中于膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、输尿管口、脐尿管及/或膀胱颈（包括尿道内口）的非肌层浸润性膀胱上皮癌。此外，其还可治疗任何恶性膀胱赘生物，尤其是集中于膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、输尿管口、脐尿管及/或膀胱颈（包括尿道内口）的肌层浸润性膀胱上皮癌。
[0080] 就本发明而言，尤其优选的是膀胱原位癌及集中于膀胱三角、膀胱顶部、膀胱侧壁、膀胱前壁、膀胱后壁、输尿管口及脐尿管或膀胱颈（包括尿道内口）的非肌层浸润性膀胱上皮癌。
[0081] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
[0082] 此处，单克隆抗体（mAb或moAb）被视作由完全相同的免疫细胞形成的抗体，且这些完全相同的免疫细胞是同一母细胞的所有克隆细胞，相比之下，多克隆抗体由多个不同的免疫细胞形成。通常，制造出专门与特定物质结合的单克隆抗体是可能的。
[0083] 优选地，T细胞表面抗原选自CD2，CD3，CD4，CD5，CD6，CD8，CD28，CD40L及CD44所组成的组。这意味着，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个互补位，这一互补位优选地可识别（且能够结合）T细胞表面抗原的一个表位，这一T细胞表面抗原选自CD3，CD2，CD4，CD5，CD6，CD8，CD28，CD40L及/或CD44所组成的组。上文所述特异性优选地能促进T细胞的募集反应。其中，如上文所述，CD是“分化抗原簇”（标识簇或决定簇）的缩写。通常，这被用于识别并研究那些为细胞免疫表型提供靶点的细胞表面分子。从生理学角度看，CD分子可在多方面发挥作用，经常充当对细胞十分重要的受体或配体（使受体活化的分子）。信号级联反应通常由此开始，改变细胞行为（参考细胞信号传送）。部分CD蛋白在细胞信息传送过程中不发挥任何作用，但却有其他功能，例如细胞粘附。目前，人类CD分子的编号已编至
364。本发明所指的是与T细胞相关的CD分子。
364。本发明所指的是与T细胞相关的CD分子。
[0084] 更优选地，T细胞表面抗原是CD2或CD3，最优选地，T细胞表面抗原是CD3。这意味着，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个互补位，这一互补位更优选地可识别
CD2或CD3的一个表位。最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个能识别
CD3表位的互补位。
CD2或CD3的一个表位。最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个能识别
CD3表位的互补位。
[0085] 就本发明而言，癌相关及/或肿瘤相关抗原优选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，alpha(v)beta(3)整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。这意味着本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个互补位，这一互
补位优选地可识别（可结合）选自以下的癌相关及/或肿瘤相关抗原的一个表位：EpCAM，
HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，alpha(v)beta(3)整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。
补位优选地可识别（可结合）选自以下的癌相关及/或肿瘤相关抗原的一个表位：EpCAM，
HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，alpha(v)beta(3)整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。
[0086] 优选地，就本发明而言，癌相关及/或肿瘤相关抗原选自以下所组成的组：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，alpha(v)beta(3)-整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，CD133，c-erb-2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。这意味着本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个互补位，这一互补位优选地可识别（可结合）选自以下的癌相关及/或肿瘤相关抗原的一个表位：EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，蛋白聚糖，VEGF，EGFR，mTOR，PIK3CA，RAS，alpha(v)beta(3)-整合素，HLA，HLA-DR，ASC，碳酸酐酶，CD1，CD2，CD4，CD6，CD7，CD8，CD11，CD13，CD14，CD19，CD20，CD21，CD22，CD23，CD24，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD41，CD47，CD52，CD133，c-erb-
2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。
2，CALLA，MHCII，CD44v3，CD44v6，p97，GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD2，GD3，GT1b，GT3，GQ1，NY-ESO-1，NFX2，SSX2，SSX4，Trp2，gp100，酪氨酸酶，MUC-1，端粒酶，生存素，p53，PD-L1，CA125，Wue抗原，Lewis Y抗原，HSP-27，HSP-70，HSP-72，HSP-90，Pgp，MCSP，EphA2及细胞表面靶点GC182、GT468或GT512。
[0087] 尤其优选地，癌相关及/或肿瘤相关抗原选自EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19，CD20及CD33所组成的组，更优选地，癌相关及/或肿瘤相关抗原选自EpCAM，HER2/neu，CEA，GD2，CD19，CD20及CD33所组成的组，甚至更优选地，癌相关及/或肿瘤相关抗原选自EpCAM，HER2/neu，GD2及CD20所组成的组，最优选地，癌相关及/或肿瘤相关抗原是EpCAM。这意味着，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个互补位，此互补位优选地可识别EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19，CD20或CD33的一个表位；更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个可识别EpCAM，HER2/neu，CEA，GD2，CD19，CD20或CD33的一个表位的互补位；甚至更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个可识别EpCAM，HER2/
neu，GD2或 CD20的一个表位的互补位；最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个可识别EpCAM的一个表位的互补位。EpCAM主要表达为高级别及晚期膀胱上皮癌
（Brunner等，《EpCAM主要表现为高级别及晚期膀胱上皮癌》，临床病理学杂志，61(3):307 (2008)）（Brunner et al. EpCAM is predominately expressed in high grade and
advanced stage urothelial carcinoma of the bladder. J Clin Pathol 61(3):307
(2008)）。由此，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）优选为EpCAM。
neu，GD2或 CD20的一个表位的互补位；最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个可识别EpCAM的一个表位的互补位。EpCAM主要表达为高级别及晚期膀胱上皮癌
（Brunner等，《EpCAM主要表现为高级别及晚期膀胱上皮癌》，临床病理学杂志，61(3):307 (2008)）（Brunner et al. EpCAM is predominately expressed in high grade and
advanced stage urothelial carcinoma of the bladder. J Clin Pathol 61(3):307
(2008)）。由此，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）优选为EpCAM。
[0088] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为Her2/neu。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为GD2。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为GD3。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为CD20。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为CD19。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为CD30。或者，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段识别的癌相关及/或肿瘤相关抗原（或抗原上的表位，分别）为CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA或RAS。
[0089] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过以下结合：（i）其第一特异性，例如第一互补位，与选自CD2，CD3，CD4，CD5，CD6，CD8，CD28，CD40L及CD44的T细胞表面抗原表位结合，优选为CD2或CD3，更优选为CD3; （ii）其第二特异性，例如第二互补位，与选自肿瘤抗原EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19，CD20及CD33的癌相关及/或肿瘤相关抗原结合。
[0090] 更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过以下结合：（i）其第一特异性，例如第一互补位，与选自CD2，CD3，CD4，CD5，CD6，CD8，CD28，CD40L及CD44的T细胞表面抗原表位结合，优选为CD2或CD3，更优选为CD3；（ii）其第二特异性，例如第二互补位，与选自肿瘤抗原EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK2CA，RAS，GD2，CD19及CD20的癌相关及/或肿瘤相关抗原结合。
[0091] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段通过其第一特异性，例如第一互补位，优选地与T细胞表面抗原（优选为CD3）的一个表位结合，以及通过其第二特异性，例如第二互补位，与癌相关及/或肿瘤相关抗原结合，这些抗原优选自以下肿瘤抗原所组成的组：
EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19及CD20，或与神经节苷脂GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD3，GT1b，GT3或GQ1结合。
EpCAM，HER2/neu，CEA，MAGE，VEGF，EGFR，mTOR，PD-L1，PIK3CA，RAS，GD2，CD19及CD20，或与神经节苷脂GM1，GM2，GM3，GD1a，GD1b，GD3，GT1b，GT3或GQ1结合。
[0092] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含抗CD3的第一特异性以及抗癌相关及/或肿瘤相关抗原的第二特异性，此处所指癌相关及/或肿瘤相关抗原选自EpCAM，HER2/neu，CEA，GD2，CD19，CD20及CD33所组成的组。
[0093] 相应地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗EpCAM的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗EpCAM）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗Her2/neu的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗Her2/neu）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗GD2的特
异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗GD2）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗GD3的特异性（优选为一个互补
位）（抗CD3×抗GD3）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CD20的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD20）。
优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CD19的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD19）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CEA的特
异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CEA）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗MAGE的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗MAGE）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗VEGF的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗VEGF）。
优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗EGFR的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗EGFR）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗mTOR的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗mTOR）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗PD-L1的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗PD-L1）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗PIK3CA的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗
PIK3CA）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗RAS的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗RAS）。
异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗GD2）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗GD3的特异性（优选为一个互补
位）（抗CD3×抗GD3）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CD20的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD20）。
优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CD19的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD19）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CEA的特
异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CEA）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗MAGE的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗MAGE）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗VEGF的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗VEGF）。
优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗EGFR的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗EGFR）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗mTOR的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗mTOR）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗PD-L1的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗PD-L1）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗PIK3CA的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗
PIK3CA）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗RAS的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗RAS）。
[0094] 或者，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗CD30的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD30）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗
CD33的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD33）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗虫媒病毒E蛋白表位的
特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗虫媒病毒E蛋白）。
CD33的特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗CD33）。优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一种抗CD3的特异性（优选为一个互补位）及一种抗虫媒病毒E蛋白表位的
特异性（优选为一个互补位）（抗CD3×抗虫媒病毒E蛋白）。
[0095] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含选自抗EpCAM×抗CD3，抗CD20×抗CD3，抗HER2/neu×抗CD3，抗GD2×抗CD3，抗CD19×抗CD3的两种特异性。
[0096] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是一种双特异性抗体或其双特异性抗原结合片段。
[0097] 就本发明而言，双特异性抗体（BiAbs）包含（正好）两种特异性。它们是最优选的多特异性抗体及其抗原结合片段类型。就本发明而言，双特异性抗体可以是双特异性抗体的任何形态，正如Spiess C.，Zhai Q. 及Carter P.J.在《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页所述。例如，BiAbs可以是全IgG样分子等全抗体，或并不是全抗体但保留了抗体特性的片段。此处所指的形态可以是小的重组抗体形态，例如串联单链可变片段分子（taFvs）、二聚体（Dbs）、单链二聚体（scDbs）、双特异性T细胞衔接器（BiTes）或这几种形态的其它衍生形态（参照，例如，Byre H.等人，《生物技术趋势》（2013），31 (11):621-632，图2所示的各种双特异性抗体形态）（Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31 (11):621-632）。一些BiAb形态可将效应细胞再导向至在疾病过程中发挥关键作用的靶细胞。例如，一些BiAb形
态可以将效应细胞再导向至肿瘤细胞，且许多BiAb结构也被设计为可对免疫系统细胞进行
再导向，例如通过结合并启动效应细胞表面的Fc受体，或通过结合T细胞受体（TCR）的复合体。
态可以将效应细胞再导向至肿瘤细胞，且许多BiAb结构也被设计为可对免疫系统细胞进行
再导向，例如通过结合并启动效应细胞表面的Fc受体，或通过结合T细胞受体（TCR）的复合体。
[0098] 优选地，多特异性（尤其是双特异性）抗体或其抗原结合片段至少是二价的，即其至少有两个互补位。更优选地，多特异性（尤其是双特异性）抗体或其抗原结合片段是二价的，三价的，四价的或六价的。甚至更优选地，多特异性（尤其是双特异性）抗体或其抗原结合片段是二价的或四价的。最优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是一个双特异性的二价抗体，即有两个互补位的抗体：其中一个互补位识别T细胞表面抗原，另一个互补位识别癌相关及/或肿瘤相关抗原。
[0099] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段也优选为一个双功能或三功能抗体或其抗原结合片段，即能够同时与两个或三个（优选为不同的）结合部位相互作用。更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是一个三功能抗体或一个三功能的抗原结合片段，尤
其是一个双特异性三功能抗体或其双特异性三功能抗原结合片段。
其是一个双特异性三功能抗体或其双特异性三功能抗原结合片段。
[0100] 就本发明而言，“双功能”抗体或其抗原结合片段指的是通常也是双特异性的复合物。通常而言，此类复合物除这两种“特异性”（互补位）外，没有更多其他互补位，甚至没有非特异性的结合部位。与此相反，就本发明而言，“三功能”抗体（trAb）被视作一类特殊的双特异性抗体，这些抗体能够，例如通过其Fc受体结合位点，在靶向癌/肿瘤上同时募集并活化T细胞，尤其是巨噬细胞、树状细胞、自然杀伤细胞等辅助性免疫细胞，及其它Fc受体表达细胞。由此，三功能双特异性抗体有两个抗原结合部位（即两个互补位）。通常，此两个抗原结合部位（互补位）允许抗体与癌/肿瘤细胞（癌/肿瘤细胞表面抗原）及T细胞（T细胞表面抗原）结合。同时，例如通过其Fc部分，尤其是其Fcγ受体结合片段，阳性佐细胞得以募集，例如单核细胞/巨噬细胞、天然杀伤细胞、树状细胞或其它Fcγ受体表达细胞。不同类别效应细胞的同时活化导致吞噬作用、穿孔素介导的细胞毒性等各种机制有效杀害肿瘤细胞。通常，三功能抗体的净效应连接T细胞（尤其是Fcγ受体阳性佐细胞）与肿瘤细胞，导致对肿瘤细胞的破坏。
[0101] 三功能抗体引发肿瘤细胞移除，尤其是通过以下几种方式：（i）抗体依赖性细胞介导的细胞毒（性）反应，（ii）T细胞介导的细胞杀害，及（iii）抗肿瘤免疫的诱导。相比之下，只有第一种作用方式实际上是由常规（单克隆及单一特异性）抗体完成的。此外，与常规抗体相比，双特异性（且尤其是三功能）抗体有更大的细胞毒性可能性，且其甚至与表达相对较弱的抗原结合。因此，与常规抗体相比，同剂量的双特异性（且尤其是三功能）抗体在消除肿瘤细胞时更有效（超过1000倍）。
[0102] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可以是任何抗体形态。特别地，多特异性抗体优选地包含“全”抗体，例如全IgG或IgG样分子，尽管就本发明而言，抗原结合片段优选地指的是小的重组抗体形态，例如双特异性T细胞衔接器（BiTes），串联单链可变片段分子（taFvs），二聚体（Dbs），单链二聚体（scDbs）及这些形态的其它衍生形态（参考，例如Byre H等，《生物技术趋势》（2013），31 (11): 621-632，图2所示的各种双特异性抗体形态；Weidle U.H等《，肿瘤基因组学及蛋白组学》（2013），10: 1-18，尤其是图1所示的各种双特异性抗体形态；Chan，A.C.及Carter, P.J.，《自然综述免疫学》（2010），10:301-316，图3所示的各种双特异性抗体形态）（Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31 (11): 621-632;
Weidle U.H et al. (2013) Cancer Genomics and Proteomics 10: 1-18; and Chan,
A.C. and Carter, P.J. (2010) Nat Rev Immu 10:301-316）。双特异性抗体形态的例子
包括但不限于细胞杂交瘤，化学偶联的Fab片段（抗原结合片段），及BiTE®（双特异性T细胞衔接器）。在本发明的一个实施方案中，优选应用的抗体就是BiTE®（双特异性T细胞衔接
器）。
Weidle U.H et al. (2013) Cancer Genomics and Proteomics 10: 1-18; and Chan,
A.C. and Carter, P.J. (2010) Nat Rev Immu 10:301-316）。双特异性抗体形态的例子
包括但不限于细胞杂交瘤，化学偶联的Fab片段（抗原结合片段），及BiTE®（双特异性T细胞衔接器）。在本发明的一个实施方案中，优选应用的抗体就是BiTE®（双特异性T细胞衔接
器）。
[0103] 由此，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自以下所组成的组：Triomabs；杂交杂交瘤（细胞杂交瘤）；多特异性anticalin平台（Pieris公司）；二聚体；单链二聚体；串联单链Fv片段；TandAbs，三特异性抗体（Affimed公司）（105-110 kDa）；Darts（双亲和性再导向；Macrogenics公司）；双特异性Xmabs（Xencor公司）；双特异性T细胞衔接器（Bites；
Amgen公司；55kDa）；三聚体；Tribody，即单链抗体Fv片段融合蛋白（CreativeBiolabs公司）；多功能重组体抗体变异体（110kDa）；Duobody平台（Genmab公司）；Dock and lock平台；
Knob into hole （KIH）平台；人源化双特异性IgG抗体（REGN1979）（Regeneron公司）；Mab2双特异性抗体（F-Star公司）；DVD-Ig，即双可变域免疫球蛋白（Abbvie公司）；Kappa-lambda体；TBTI，即四价双特异性串联免疫球蛋白；及CrossMab。
Amgen公司；55kDa）；三聚体；Tribody，即单链抗体Fv片段融合蛋白（CreativeBiolabs公司）；多功能重组体抗体变异体（110kDa）；Duobody平台（Genmab公司）；Dock and lock平台；
Knob into hole （KIH）平台；人源化双特异性IgG抗体（REGN1979）（Regeneron公司）；Mab2双特异性抗体（F-Star公司）；DVD-Ig，即双可变域免疫球蛋白（Abbvie公司）；Kappa-lambda体；TBTI，即四价双特异性串联免疫球蛋白；及CrossMab。
[0104] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自包含以下的双特异性IgG样抗体（BsIgG）：CrossMab；DAF（二合一）；DAF（四合一）；DutaMab；DT-IgG；Knobs-in-holes常见LC；
Knobs-in-holes集合；电荷对；Fab臂交换；SEEDbody；Triomab；LUZ-Y；Fcab；kλ-body；及直角Fab。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
Knobs-in-holes集合；电荷对；Fab臂交换；SEEDbody；Triomab；LUZ-Y；Fcab；kλ-body；及直角Fab。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
[0105] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自包含以下的带有附加抗原结合部分的IgG附加抗体：DVD-IgG；IgG(H)-scFv；scFv-(H)IgG；IgG(L)-scFv；scFV-(L)IgG；IgG(L,H)-Fv；IgG(H)-V；V(H)-IgG；IgG(L)-V；V(L)-IgG；KIH IgG-scFab；2scFv-IgG；
IgG-2scFv；scFv4-Ig；scFv4-Ig；Zybody；及DVI-IgG（四合一）。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
IgG-2scFv；scFv4-Ig；scFv4-Ig；Zybody；及DVI-IgG（四合一）。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
[0106] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自包含以下的双特异性抗体片段：单域抗体（Nanobody）；Nanobody-HAS；BiTE；二聚体；DART；TandAb；单链二聚体；sc-Diabody-CH3；Diabody-CH3；Triple Body；微型抗体；微抗体；TriBi微抗体；scFv-CH3 KIH；
Fab-scfv；scFv-CH-CL-scFv；F(ab’)2；F(ab’)2-scFv2；scFv-KIH；Fab-scFv-Fc；串联HCAb；
scDiabody-Fc；Diabody-Fc；Diabody-Fc；串联scFv-Fc；及细胞内抗体。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
Fab-scfv；scFv-CH-CL-scFv；F(ab’)2；F(ab’)2-scFv2；scFv-KIH；Fab-scFv-Fc；串联HCAb；
scDiabody-Fc；Diabody-Fc；Diabody-Fc；串联scFv-Fc；及细胞内抗体。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
[0107] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段不包含Fc受体的结合部位，尤其是，抗体或其抗原结合片段不包含Fc区等Fc部分。
[0108] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自包含以下的双特异性融合蛋白：Dock and Lock；ImmTAC；HSAbody；scDiabody-HAS；及串联scFv-Toxin。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至
106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
[0109] 特别地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可选自包含以下的双特异性抗体缀合物：IgG-IgG；Cov-X-Body；及scFv1-PEG-scFv2。这些双特异性抗体形态在，例如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J.所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至106页，得以展示及描述，尤其是图1及相应描述，如第95至101页。
[0110] 另外，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段也可选自由双特异性T细胞衔接器（BiTETM）及双特异性三功能抗体组成的组。
[0111] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个Fc受体的结合部位。更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段包含一个Fc部分，尤其是一个Fc区。
[0112] 此处所用的术语“Fc部分”指的是源于免疫球蛋白重链某段的一个序列，且该段始于木瓜蛋白酶切割位点上游的绞链区，结束于免疫球蛋白重链的C端。优选地，“Fc部分”包含一个Fc受体的结合部位。然而，同样优选地，Fc部分可介导一种不同于结合Fc受体的功能性，例如与补体系统的一种蛋白质结合。相应地，一个“Fc部分”可以是一个完整的Fc区或其中某个部分（例如一个结构域）。优选地，“Fc部分”可介导一个完整的Fc区的全部功能性，例如包括Fc受体结合以及任选地结合补体系统的某种蛋白质。因此，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段优选地包含一个完整的Fc区，且此完整的Fc区包含至少一个绞链域，一个
CH2域，以及一个CH3域。Fc部分也可包含一个或多个与自然出现的Fc区有关的氨基酸插入、缺失、或替换。例如，绞链域、CH2域或CH3域（或其部分）中至少一个可被删除。例如，一个Fc部分可包含或由以下组成：（i）与CH2域（或其部分）融合的绞链域（或其部分），（ii）与CH3域（或其部分）融合的绞链域（或其部分），（iii）与CH3域（或其部分）融合的CH2域（或其部分），（iv）一个绞链域（或其部分），（v）CH2域（或其部分），或（vi）CH3域（或其部分）。
CH2域，以及一个CH3域。Fc部分也可包含一个或多个与自然出现的Fc区有关的氨基酸插入、缺失、或替换。例如，绞链域、CH2域或CH3域（或其部分）中至少一个可被删除。例如，一个Fc部分可包含或由以下组成：（i）与CH2域（或其部分）融合的绞链域（或其部分），（ii）与CH3域（或其部分）融合的绞链域（或其部分），（iii）与CH3域（或其部分）融合的CH2域（或其部分），（iv）一个绞链域（或其部分），（v）CH2域（或其部分），或（vi）CH3域（或其部分）。
[0113] 作为多特异性抗体或其抗原结合片段，三功能双特异性抗体尤其得到优选，原因在于依据本发明其可被应用，且其展示了三种功能，尤其包括其通过上述两种特异性结合
（改变方向）T细胞及结合（定位）肿瘤细胞的能力，以及——作为第三种功能——三功能抗体尤其能够通过其Fc受体结合单核细胞、巨噬细胞、树状细胞、“自然杀害”细胞（NK细胞）及/或活性嗜中性白细胞。优选地，其Fc部分与Fc受体阳性细胞结合，且优选地，这些Fc受体阳性细胞至少表达Fcγ受体的一种类型，优选为Fcγ受体类型I，IIa及/或III。然而，缺少上述第三种功能的双功能双特异性抗原结合剂，例如双特异性T细胞衔接器，仍得到优选，原因在于其即使在膀胱环境中仍有能改变T细胞方向的能力。
（改变方向）T细胞及结合（定位）肿瘤细胞的能力，以及——作为第三种功能——三功能抗体尤其能够通过其Fc受体结合单核细胞、巨噬细胞、树状细胞、“自然杀害”细胞（NK细胞）及/或活性嗜中性白细胞。优选地，其Fc部分与Fc受体阳性细胞结合，且优选地，这些Fc受体阳性细胞至少表达Fcγ受体的一种类型，优选为Fcγ受体类型I，IIa及/或III。然而，缺少上述第三种功能的双功能双特异性抗原结合剂，例如双特异性T细胞衔接器，仍得到优选，原因在于其即使在膀胱环境中仍有能改变T细胞方向的能力。
[0114] 例如，本发明中应用的双特异性三功能抗体的“第三种功能性”是Fc受体的一个结合部位，因此，特别地，本发明中应用的双特异性三功能抗体优选地包含Fc受体的一个结合部位。更优选地，本发明中应用的双特异性三功能抗体包含一个Fc部分，例如一个Fc域（可结晶段，也被称作“Fc片段”）。本发明中优选应用的三功能双特异性抗体，尤其通过其Fc受体的结合部位，募集在细胞表面Fc受体（尤其是Fcγ受体类型I,IIa及/或III）上表达的免疫细胞。由此，三功能双特异性抗体尤其能聚集三种不同的细胞类型，即两种类型的免疫细胞（T细胞及表达免疫细胞的Fc受体）与靶向癌/肿瘤细胞。免疫系统的各种作用方式由此得到调动以攻击募集的靶向癌/肿瘤细胞。
[0115] Fc受体的结合部位，例如Fc区，使得（三功能）抗体能额外募集表达Fc受体的细胞，例如巨噬细胞、树状细胞、自然杀害（NK）细胞等Fcγ受体阳性佐细胞及其他Fc受体表达细胞。由于三功能抗体是双特异性（或多特异性）抗体，它们优选地能募集并活化（i）T细胞及（ii）Fc受体表达细胞，例如单核细胞/巨噬细胞、自然杀害细胞、树状细胞等辅助性免疫细胞及其他Fc受体表达细胞，同时还有（iii）靶向癌/肿瘤细胞。不同类别效应细胞的同时活化导致吞噬作用、穿孔素介导的细胞毒性等机制对肿瘤细胞的有效杀害。通常而言，优选的包含Fc受体的三功能抗体的净效应将T细胞及Fc受体阳性细胞与靶细胞（如肿瘤细胞）结合，导致肿瘤细胞被破坏。三功能抗体通过以下方式移除肿瘤细胞：（i）抗体依赖性细胞介导的细胞毒（性）反应，（ii）T细胞介导的细胞杀害，及（iii）抗肿瘤免疫的诱导。
[0116] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段有一个IgG样形态（基于IgG，也被称作“IgG类型”），而带有IgG样形态的抗体通常包含两条重链及两条轻链。通常，免疫球蛋白G（IgG）被视作抗体的一种类型。此处其被视作由四条肽链组成的蛋白复合物——两条相同的重链及两条相同的轻链，排列成抗体单体中常见的Y形。每个IgG通常有两个抗原结合部位，二者可不同，也可相同。IgG代表了人体内75%的血清抗体，是循环中最常见的抗体类型。在生理学上，IgG分子由浆B细胞创造并释放。
[0117] 带有IgG样形态的抗体包括细胞杂交瘤及各种IgG-scFv形态（参考Byrne H等，《生物技术趋势》（2013），31(11):621-632；图2A-E）（Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31(11):621-632; Figure 2A-E），其中细胞杂交瘤为优选，且优选地由两种不同的杂交瘤融合而成。在IgG这一类别中，抗体优选地可基于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4这几亚类，其中基于IgG1的抗体（也被称作“IgG1类型”）为优选。本发明中应用的多特异性抗体或其抗原结合片段，例如双特异性抗体，也可基于免疫球蛋白类别（例如IgA、IgG、IgM等）及其亚类（例如IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等）中的任意一种。
[0118] 通常，本发明中应用的多特异性抗体，例如双特性抗体，或其抗原结合片段由三种主要方式制造：（i）化学接合，涉及化学交联；（ii）两种不同的杂交瘤细胞系的融合；或者（iii）遗传方法，涉及重组DNA技术。两种不同杂交瘤的融合产生一种杂交杂交瘤（或“细胞杂交瘤”），此种杂交杂交瘤会分泌一种异质性抗体群，包括双特异性分子。
[0119] 其他方法包括两种不同的mAbs及/或较小抗体片段的化学接合。连接两种不同抗体或抗体片段的氧化重缔合策略被认为是无效的，原因在于多重天然双硫键的再氧化过程
中出现的副作用。目前的化学接合方法集中于同质或异质双功能交联试剂的应用。重组DNA技术已经通过对基因的人为操控得到最多种bsAbs，且代表了bsAb生成的最多样方法（过去二十年内出现45种形态；参考Byrne H等，《生物技术趋势》（2013），31(11):621-632）（Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31(11):621-632）。
中出现的副作用。目前的化学接合方法集中于同质或异质双功能交联试剂的应用。重组DNA技术已经通过对基因的人为操控得到最多种bsAbs，且代表了bsAb生成的最多样方法（过去二十年内出现45种形态；参考Byrne H等，《生物技术趋势》（2013），31(11):621-632）（Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31(11):621-632）。
[0120] 特别地，借助此种重组DNA技术，最近也出现了更多的多特异性抗体。多特异性抗体，尤其是有三个或更多互补位的多特异性抗体，可以特别地通过重组DNA技术生成。就本发明而言，抗体也可特别含有两种以上特异性，即有两种以上互补位，因为依据本发明，若要有两种特异性，则必须要有两种互补位，例如，靶细胞的一种特异性及T细胞的另一种特异性。相应地，本发明中应用的抗体除了此处所指的两种互补位外可以有更多互补位，尤其是与更多种特异性有关的互补位。
[0121] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是一个IgG类型抗体，且这一抗体包含一个Fc受体的结合部位，尤其是一个Fc区。更优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段是一个三功能双特异性抗体，此抗体是异源且未受损的大鼠/小鼠抗体，包含Fc受体的一个结合部位，尤其是Fc区。由此，有小鼠IgG2a及大鼠IgG2b此两个亚类复合的抗体为优选。包含Fc受体结合位点（尤其是Fc区）的异源且未受损的大鼠/小鼠抗体，若有由小鼠
IgG2a及大鼠IgG2b亚类组成的重链，且每条重链上有各自轻链，则尤其为优选。
IgG2a及大鼠IgG2b亚类组成的重链，且每条重链上有各自轻链，则尤其为优选。
[0122] 通常，本发明中应用的三功能双特异性抗体优选地在其Fc区展示以下同种型组合的任意一种：大鼠-IgG2b/小鼠-IgG2a，大鼠-IgG2b/小鼠-IgG2b, 大鼠-IgG2b/人-IgG1,或小鼠[VH-CH1,VL-CL]-人IgG1/大鼠[VH-CH1,VL-CL]-人IgG1-[铰链]-人IgG3*-[CH2-CH3],
其中*即白种人同种异形G3m(b+g)，即未与蛋白A结合。
其中*即白种人同种异形G3m(b+g)，即未与蛋白A结合。
[0123] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段同样优选地包含至少两个不同的单链可变片段（scFvs）。此处所指的单链可变片段（scFv）被视作是免疫球蛋白重链（VH）及轻链（VL）可变区的融合蛋白，二者由一个短的连接肽连接。此处所指的肽通常包含至少5个，优选为至少10个，更优选为约25个氨基酸。此处所说的接头通常富含甘氨酸，因此具备灵活
性，富含丝氨酸或苏氨酸，因此具备可溶性，或连接重链的N端与轻链的C端，或连接重链的C端与轻链的N端。即使在移除恒定区和引入接头后，scFv仍可保留初始免疫球蛋白的特异
性。通常，一个scFv可以直接由杂交瘤中取得的亚克隆重链及轻链生成。scFvs通常用于，例如细胞计量术及免疫组织化学，并作为人造T细胞受体的抗原结合区域。就本发明而言，它们优选地作为人造T细胞受体的抗原结合区域得以应用。
性，富含丝氨酸或苏氨酸，因此具备可溶性，或连接重链的N端与轻链的C端，或连接重链的C端与轻链的N端。即使在移除恒定区和引入接头后，scFv仍可保留初始免疫球蛋白的特异
性。通常，一个scFv可以直接由杂交瘤中取得的亚克隆重链及轻链生成。scFvs通常用于，例如细胞计量术及免疫组织化学，并作为人造T细胞受体的抗原结合区域。就本发明而言，它们优选地作为人造T细胞受体的抗原结合区域得以应用。
[0124] 优选的双特异性IgG样抗体形态包含例如杂交杂交瘤（细胞杂交瘤）、带有常见轻链的knobs-into-holes、各种IgG-scFv形态、各种scFv-IgG形态、二合一IgG、双V区IgG、IgG-V及V-IgG，正如在Chan，A.C.及Carter,P.J.所著《自然综述免疫学》（2010）第10卷301至316页的图3c及本文所述。其他优选的双特异性IgG样抗体形态包括DAF、CrossMab、IgG-dsscFv、DVD、IgG-dsFV、IgG-scFab、scFab-dsscFv及Fv2-Fc，正如Weidle U.H.等人所著《癌症基因组学及蛋白组学》（2013）第10卷1至18页图表1A及本文所述。更多优选的双特异性IgG样抗体形态包括DAF(二合一)；DAF（四合一）；DutaMab；DT-IgG；Knobs-in-holes集合；电荷对；Fab臂交换；SEEDbody；Triomab；LUZ-Y;Fcab；kλ-body；直角Fab；DVD-IgG；IgG(H)-scFv；scFv-(H)IgG；gG(L)-scFv；scFv-(L)IgG；gG(L,H)-Fv；gG(H)-V；V(H)-IgG；IgG(L)-V；
V(L)-IgG；KIH IgG-scFab；2scFv-IgG；IgG-2scFv；scFv4-Ig;scFv4-Ig；Zybody；及DVI-IgG（四合一），正如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J. 所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至
106所述，尤其是图1及相应描述（如第95至101页）。
V(L)-IgG；KIH IgG-scFab；2scFv-IgG；IgG-2scFv；scFv4-Ig;scFv4-Ig；Zybody；及DVI-IgG（四合一），正如Spiess C.，Zhai Q.及Carter P.J. 所著《分子免疫学》（2015）第67卷95至
106所述，尤其是图1及相应描述（如第95至101页）。
[0125] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段选自以下所组成的组：卡妥索单抗（抗CD3×抗EpCAM），FBTA05/Lymphomun（抗CD3×抗CD20），厄妥索单抗（Ertumaxomab）（抗CD3×抗HER2/neu），Ektomun（抗CD3×抗GD2），博纳吐单抗（blinatumomab）及苏力图单抗（solitomab）。所用抗体优选为卡妥索单抗。
[0126] 三功能双特异性抗体的最优选例子为卡妥索单抗（Removab ®）（抗EpCAM×抗CD3）。三功能双特异性抗体的其他优选例子包括（i）FBTA05（也被称作“lymphomun”），一种三功能抗CD3×抗CD20抗体，（ii）厄妥索单抗，一种三功能抗CD3×抗HER2抗体，及（iii）TRBs02/TRBs07，两种专门针对人黑素瘤的三功能抗体（Ruf等，《国际癌症杂志》，108: 725-
732）（Ruf et al. (2004) Int J Cancer, 108: 725-732）。
732）（Ruf et al. (2004) Int J Cancer, 108: 725-732）。
[0127] 或者，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段从抗CD19×抗CD3双特异性T细胞衔接器及抗EpCAM×抗CD3双特异性T细胞衔接器中选取。
[0128] 治疗方案及剂量由于作用方式的差异，既定的多特异性抗体治疗方案，尤其是双特异性抗体，例如双特
异性三功能抗体，通常与常规（单克隆及单一特异性）抗体治疗方案存在很大不同。例如，卡妥索单抗的施用是在第0，3，7，10天，每天剂量分别为10，20，50及150μg，此为四次腹腔注射的用药法（参考，Heiss 等，《国际癌症杂志》（2010），127:2209-2221；及欧洲药品管理局“Removab评估报告”，文件编号：EMEA/CHMP/100434/2009）（Heiss et al. (2010) Int J Cancer, 127:2209-2221）。FBTA05/Lymphomun在施用（例如静脉注射）时，剂量逐次增加，第
1天开始时用量10μg，接下来每天加大剂量（比如加倍），直至最终剂量到达到2000μg
（Buhmann等，《骨髓移植》（2009），43: 383-397：表2）（Buhmann et al. (2009) Bone Marrow Transplant, 43: 383-397:Table 2）。厄妥索单抗在施用（例如静脉注射）时，剂量逐次增加，第1天开始时剂量为10μg，接下来在第7±1天和第13±1天分别为20，50，100，150或200μg（Kiewe等，《临床癌症研究》(2006)，12:3085-3091）（Kiewe et al. (2006) Clin Cancer Res, 12:3085-3091）。因此，临床试验中的多特异性抗体，尤其是双特异性抗体，例如双特异性三功能抗体，其治疗方案通常都遵循逐渐增加的方法。需要注意的是，多特异性抗体，尤其是双特异性抗体，比如双特异性三功能抗体，其初始剂量是一个关键参数，原因在于这些抗体能活化T细胞，启动促炎细胞因子释放，并正调节共刺激因子，如CD28。
异性三功能抗体，通常与常规（单克隆及单一特异性）抗体治疗方案存在很大不同。例如，卡妥索单抗的施用是在第0，3，7，10天，每天剂量分别为10，20，50及150μg，此为四次腹腔注射的用药法（参考，Heiss 等，《国际癌症杂志》（2010），127:2209-2221；及欧洲药品管理局“Removab评估报告”，文件编号：EMEA/CHMP/100434/2009）（Heiss et al. (2010) Int J Cancer, 127:2209-2221）。FBTA05/Lymphomun在施用（例如静脉注射）时，剂量逐次增加，第
1天开始时用量10μg，接下来每天加大剂量（比如加倍），直至最终剂量到达到2000μg
（Buhmann等，《骨髓移植》（2009），43: 383-397：表2）（Buhmann et al. (2009) Bone Marrow Transplant, 43: 383-397:Table 2）。厄妥索单抗在施用（例如静脉注射）时，剂量逐次增加，第1天开始时剂量为10μg，接下来在第7±1天和第13±1天分别为20，50，100，150或200μg（Kiewe等，《临床癌症研究》(2006)，12:3085-3091）（Kiewe et al. (2006) Clin Cancer Res, 12:3085-3091）。因此，临床试验中的多特异性抗体，尤其是双特异性抗体，例如双特异性三功能抗体，其治疗方案通常都遵循逐渐增加的方法。需要注意的是，多特异性抗体，尤其是双特异性抗体，比如双特异性三功能抗体，其初始剂量是一个关键参数，原因在于这些抗体能活化T细胞，启动促炎细胞因子释放，并正调节共刺激因子，如CD28。
[0129] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段的施用持续一个或多个治疗周期。就本发明而言，一个治疗周期就是一个或多个可定期重复的且中间有休整时间的疗程。
例如，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可在一个治疗周期内施用（比如，单次剂量或多次剂量），随后可观察癌或肿瘤是否复发。尤其当癌/肿瘤复发时，可进行更多治疗周期。
然而，更多治疗周期也可被当作预防措施。尤其是，同个治疗周期内两次治疗（比如两次剂量）之间的间隔优选地不超过一个月（31天），更优选地不超过3周，而上一治疗周期的末次和下一治疗周期的首次治疗之间的间隔优选为至少一个月，优选为至少两个月，更优选为
至少三个月，甚至更优选为至少四个月，最优选为至少6个月。
例如，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段可在一个治疗周期内施用（比如，单次剂量或多次剂量），随后可观察癌或肿瘤是否复发。尤其当癌/肿瘤复发时，可进行更多治疗周期。
然而，更多治疗周期也可被当作预防措施。尤其是，同个治疗周期内两次治疗（比如两次剂量）之间的间隔优选地不超过一个月（31天），更优选地不超过3周，而上一治疗周期的末次和下一治疗周期的首次治疗之间的间隔优选为至少一个月，优选为至少两个月，更优选为
至少三个月，甚至更优选为至少四个月，最优选为至少6个月。
[0130] 优选地，一个治疗周期包含（i）一次单次剂量或（ii）一次初始剂量及一次或多次后续剂量。本发明中应用的治疗方案通常由若干单次施用组成，这些单次施用形成一个治疗周期。患者可接受单个或多个治疗周期。每个治疗周期通常由2至28次单次剂量组成，优选为2至20次，更优选为3至10次，甚至更优选为5至8次，例如6次或7次。
[0131] 优选地，一个治疗周期包含一次初始剂量及一个或多次后续剂量以及（i）初始剂量及一个或多个后续剂量相同，或（ii）一次或多次的后续剂量高于初始剂量。换言之，优选地，在一个治疗周期内（始于初始剂量，终于最终剂量），单次施用剂量（除了初始剂量）不低于前一次施用剂量，即每次后续剂量等于或高于前一次剂量。此种逐次增加剂量的施用方
法在此处被认为是升级剂量，优选地也包括与前一次施用相同的剂量。例如，只有初始剂量较低，所有后续剂量全都相同（且都高于初始剂量）或初始剂量较低，第二次剂量略高于初始剂量，但低于所有后续剂量，所有后续剂量优选地保持相同（且高于初始剂量及第二次剂量）。由此，优选地，一次或多次后续剂量是升级剂量，即高于前一次剂量。一个治疗周期的最终剂量通常表现了该治疗周期内施用抗体的最大量，即最大剂量。尤其是，在任意治疗周期的末尾，表现最大剂量的1次，2次，3次，4次，5次或更多次施用可以被预见。通常而言，剂量升级的指导原则是在保证安全性和快速见效时避免使患者接受亚治疗剂量。
法在此处被认为是升级剂量，优选地也包括与前一次施用相同的剂量。例如，只有初始剂量较低，所有后续剂量全都相同（且都高于初始剂量）或初始剂量较低，第二次剂量略高于初始剂量，但低于所有后续剂量，所有后续剂量优选地保持相同（且高于初始剂量及第二次剂量）。由此，优选地，一次或多次后续剂量是升级剂量，即高于前一次剂量。一个治疗周期的最终剂量通常表现了该治疗周期内施用抗体的最大量，即最大剂量。尤其是，在任意治疗周期的末尾，表现最大剂量的1次，2次，3次，4次，5次或更多次施用可以被预见。通常而言，剂量升级的指导原则是在保证安全性和快速见效时避免使患者接受亚治疗剂量。
[0132] 优选地，在同一个治疗周期内，没有任何单次剂量低于前一次剂量。无论何时，若后续剂量是第二次剂量，则前一次剂量都是初始剂量（“首次剂量”或“起始剂量”）。若后续剂量是第三次剂量，则前一次剂量就是第二次剂量。由此，本申请书中术语“前一次剂量”指的是紧邻当前剂量的对患者的前一次施用，此处所述患者被诊断为至少患有一种类型的癌症。
[0133] 通常，单个治疗周期包括至少一次初始（首次）剂量及第二次剂量。在一个优选的实施方案中，单个治疗周期可包括一次初始（首次）剂量，第二次剂量，第三次剂量，第四次剂量，第五次剂量，优选地还有额外的第六次剂量。在单个治疗周期内，优选地，后续剂量的施用在前一次剂量的1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20或21天后，优选地，后续剂量的施用在前一次剂量的2至15天后，更优选地，后续剂量的施用在前一次剂量的5至10天后，甚至更优选地，后续计量的施用在前一次剂量的6至8天后，最优选地，后续剂量的施用在前一次剂量的7天后。换言之，尤其优选地，抗体或其抗原结合片段的施用每周一次，优选为每周一次单次剂量，例如通过膀胱灌注。所述抗体或其抗原结合片段后续剂量的施用显示其减少了促炎细胞因子的（多余）释放。治疗过程中，促炎细胞因子间歇性增加的数量可被减少至可检测水平以下。同时，泌尿道中抗赘生物细胞毒素的免疫反应被加强。
[0134] 优选地，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段施用的单次剂量控制在0.1至5000μg之间，优选为1至1000μg或5至500μg之间，更优选为10至300μg之间，最优选为20至
100μg之间。换言之，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段的每次剂量都在0.1至5000μg之间，优选为1至1000μg或5至500μg之间，更优选为10至300μg之间，最优选为20至100μg之间。就本发明而言，“单次剂量”（或“每次剂量”）是单独一次的剂量，即每个患者在每次接受施用时的药量。
100μg之间。换言之，本发明中应用的抗体或其抗原结合片段的每次剂量都在0.1至5000μg之间，优选为1至1000μg或5至500μg之间，更优选为10至300μg之间，最优选为20至100μg之间。就本发明而言，“单次剂量”（或“每次剂量”）是单独一次的剂量，即每个患者在每次接受施用时的药量。
[0135] 本发明中应用的抗体或其抗原结合片段在一个治疗周期内的总剂量（一个治疗周期内所有单次剂量的总和）优选为在100至1500μg之间，更优选为在200至1000μg之间，最优选为在300至800μg之间。
[0136] 优选地，抗体或其抗原结合片段的初始剂量在0.5至500μg之间，优选为1至200μg之间，更优选为在5至100μg之间，最优选为在10至70μg之间。初始剂量是一个治疗周期中第一次且优选为最小的剂量。此外，多特异性抗体或其抗原结合片段的施用单次剂量优选为在0.5μg到1000μg之间，更优选为在1至500μg之间，甚至更优选为在5至200μg之间，最优选为在10至150μg。
[0137] 优选地，第一次后续剂量超过初始剂量，且增加的倍数优选为1.1至10.0倍，更优选为1.2至5.0倍之间，甚至更优选为1.5至3.0倍之间，以及任选地，第二次后续剂量及其后的后续剂量超过初始剂量的倍数在1.1至10.0倍之间，优选为1.5至5.0倍之间。
[0138] 其中，第三次，第四次及第五次后续剂量可以与第二次后续剂量相同。优选地，第二次后续剂量高于第一次后续剂量。任选地，第三次后续剂量及其后的后续剂量重复第一次或第二次剂量，即剂量保持恒定。或者，第三次及其后的后续剂量都高于同一治疗周期内的第二次后续剂量。
[0139] 相应地，此处所述多特异性抗体或其抗原结合片段也被用于制备治疗癌症患者的药物组合物，其中此药物组合物优选通过膀胱注射施用，且此处所述药物组合物的用药量
优选为与多特异性抗体或其抗原结合部位（溶解于溶液中）的初始剂量相同，处于10至200μg之间，优选为15至100μg之间，例如20μg或50μg，及/或最大剂量为50至200μg，例如100μg。
优选为与多特异性抗体或其抗原结合部位（溶解于溶液中）的初始剂量相同，处于10至200μg之间，优选为15至100μg之间，例如20μg或50μg，及/或最大剂量为50至200μg，例如100μg。
[0140] （一个治疗周期内的）最大剂量优选为在25μg至1000μg之间，尤其是在50μg至500μg之间，更优选为75μg至150μg之间，例如100μg。
[0141] 优选地，在一个治疗周期内，每次后续剂量的施用都在前一次剂量的1天至31天后，优选为前一次剂量的1天至21天后，更优选为前一次剂量的5天到10天后，最优选为前一次剂量的7天后。此处所述剂量优选为“后续剂量”。每次单次剂量优选通过膀胱注射施用，例如每7天一次（一周一次）。特别是老年患者，膀胱部位赘生性疾病发病率最高，优选进行低频率施用，比如一周一次或更少。
[0142] 此处所述抗体或其抗原结合片段通常用于治疗泌尿道赘生物治疗，此处所述治疗优选包含单个或多个重复周期。每个治疗周期可以重复一次、两次、三次或更多次。通常，一个治疗周期，例如6至10次剂量，持续30至60天，施用频率为每1至30天一次（比如1至10天），优选为7天一次。若干个治疗周期之间通常会有1个至12个月时间的停药阶段，优选为至少2个月，更优选为至少3个月，甚至更优选为至少4个月，最优选为至少6个月。此后可开始进行另一治疗周期，这一周期可大体上与前一治疗周期相同（相同的剂量及施用方案）。第二个、第三个甚至更多治疗周期也可以是前一个治疗周期的修正版（取决于上一治疗周期疗效的
观察结果）。一般而言，第二个及第三个治疗周期的每次施用剂量或与初始剂量相同，或略微增加初始剂量（比如增加3倍）。在治疗方案的结尾，比如到第四，第五或第六个治疗周期时，单次施用剂量可再次减少，例如减少至第一个治疗周期的剂量或比其更少。
观察结果）。一般而言，第二个及第三个治疗周期的每次施用剂量或与初始剂量相同，或略微增加初始剂量（比如增加3倍）。在治疗方案的结尾，比如到第四，第五或第六个治疗周期时，单次施用剂量可再次减少，例如减少至第一个治疗周期的剂量或比其更少。
[0143] 一种优选的实施方案是，抗体或其抗原结合片段的单次剂量施用频率是每周一次，例如持续2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14周。或者，抗体或其抗原结合片段的单次剂量施用频率是例如一周内至少两次，例如每天一次。每日施用优选持续2，3，4，5，6，7，8，
9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29日，或连续30日。为减少对患者生活质量的影响以及增强顺应性，施用优选少于每天一次，例如每两天，三天，四天，五天或六天一次。更优选地，施用频率最多一周一次，更优选为两周或三周一次。在本发明的特定实施方案中，施用可以每月仅一次。然而，就本发明而言，每周一次的施用频率是优选，原因是此间隔能较好平衡顺应性与医生的连续医疗监护。
9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29日，或连续30日。为减少对患者生活质量的影响以及增强顺应性，施用优选少于每天一次，例如每两天，三天，四天，五天或六天一次。更优选地，施用频率最多一周一次，更优选为两周或三周一次。在本发明的特定实施方案中，施用可以每月仅一次。然而，就本发明而言，每周一次的施用频率是优选，原因是此间隔能较好平衡顺应性与医生的连续医疗监护。
[0144] 联合疗法本发明应用的抗体或其抗原结合片段可以作为独立疗法施用，也可与其它一种或多种
成分（以下称为“联合药剂”）联合施用。
成分（以下称为“联合药剂”）联合施用。
[0145] 本发明应用的抗体或其抗原结合片段优选地作为独立疗法施用，例如在肿瘤切除术后进行施用。因此，“独立疗法”该术语意在强调本发明应用的抗体或其抗原结合片段是治疗上述泌尿道赘生物的唯一施用药剂。为治疗上述泌尿道赘生物，优选地不施用其它药
剂或药物（与本发明应用的抗体或其抗原结合片段联合治疗）。
剂或药物（与本发明应用的抗体或其抗原结合片段联合治疗）。
[0146] 在癌症所有阶段，本发明应用的抗体或其抗原结合片段尤其优选采用独立疗法。在癌症早期尤其在膀胱癌0a期和0is期，本发明应用的抗体或其抗原结合片段优选采用独
立疗法。
立疗法。
[0147] 例如，本发明应用的抗体或其抗原结合片段不需要辅以活化外周血液淋巴细胞（PBLs）疗法联合施用。此外，再举一例，本发明应用的抗体或其抗原结合片段可以不与IL-2联合施用治疗。
[0148] 在联合疗法中，尤其优选该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或者与自体免疫效应细胞联合施用。该联合疗法可用于癌症所有阶段。但是，该联合疗法特别优选用于癌症后期，尤其用于膀胱癌I期或者II期。
[0149] 此处使用的“联合疗法”或者“联合施用”术语尤指该疗法确保联合疗法中的多种成分（药物）至少在某一时间点同时对（人的）身体产生药效。换句话说，若第一种成分先于第二种成分施用，而在第二种成分施用时第一种成分在（人的）身体内已无法检测到或者已失效（如因降解过程），则这种情况不是本发明中所指的“联合疗法”或“联合施用”。所属技术领域的专业人员在设想联合疗法时通常都会考虑到药物成分的半衰期。
[0150] 该抗体或其抗原结合片段优选地与过继性细胞转移联合施用。一般而言，待转移的细胞可以来自患者本人，对细胞进行改动后再转移回患者，或者待转移细胞直接来源于
其它个体。大多数细胞通常来自于免疫系统，在细胞移回至患者的时候以提供更好的免疫
功能和特性。过继性细胞或来自患者本人的细胞都能将罹患移植物抗宿主病（GVHD）的可能性降到最低。因此，该抗体或其抗原结合片段优选与自体免疫细胞，更优选地与外周血单个核细胞（PBMCs）联合施用。尤其是若该抗体或其抗原结合片段用于身体局部，如用于膀胱部位，那么其优选地与自体免疫效应细胞，更优选地是与外周血单核细胞联合施用。因此，局部可检测的免疫效应细胞数量会增加。通过菲科尔密度梯度离心法等标准方法可以从患者
的外周血液内获得自体外周血单个核细胞。可施用的外周血单个核细胞数量为104至108。
其它个体。大多数细胞通常来自于免疫系统，在细胞移回至患者的时候以提供更好的免疫
功能和特性。过继性细胞或来自患者本人的细胞都能将罹患移植物抗宿主病（GVHD）的可能性降到最低。因此，该抗体或其抗原结合片段优选与自体免疫细胞，更优选地与外周血单个核细胞（PBMCs）联合施用。尤其是若该抗体或其抗原结合片段用于身体局部，如用于膀胱部位，那么其优选地与自体免疫效应细胞，更优选地是与外周血单核细胞联合施用。因此，局部可检测的免疫效应细胞数量会增加。通过菲科尔密度梯度离心法等标准方法可以从患者
的外周血液内获得自体外周血单个核细胞。可施用的外周血单个核细胞数量为104至108。
[0151] 该抗体或其抗原结合片段还优选与抗癌药物联合施用。抗癌药物可以是任何小分子、大分子、小复合物或大复合物，这些药物在癌症治疗中尤其在泌尿道癌症治疗中发挥积极疗效。该类抗癌药物尤其是针对治疗泌尿道癌症的抗癌药物为所属技术领域的专业人员
所熟知。此外，该抗体或其抗原结合片段还可与多种抗癌药物联合施用。
所熟知。此外，该抗体或其抗原结合片段还可与多种抗癌药物联合施用。
[0152] 与该抗体或其抗原结合片段联合施用的抗癌药物优选地是一种细胞毒性剂，或一种抗癌抗体或卡介苗（BCG）。更优选的与该抗体或其抗原结合片段联合施用的抗癌药物是一种细胞毒性剂或一种抗癌抗体。更优选的是与该抗体或其抗原结合片段联合施用的抗癌
药物是一种细胞毒性剂。
药物是一种细胞毒性剂。
[0153] 细胞毒性剂阻止或抑制细胞功能，从而阻止体内癌细胞以及其他细胞的快速生长和分裂。优选的细胞毒性剂包括烷化剂（alkylating agents）、抗代谢药物
（antimetabolites）、抗微管药物（anti-microtubule agents）、拓扑异构酶抑制剂
（topoisomerase inhibitors）和细胞毒性抗生素（cytotoxic antibiotics）。细胞毒性剂优先地选自以下所组成的组：顺铂、丝裂霉素（特别是丝裂霉素C）、戊柔比星（valrubicin）、多西他赛（docetaxel）、塞替派（thiotepa）和盐酸耶西塔宾（gemcitabine）。
（antimetabolites）、抗微管药物（anti-microtubule agents）、拓扑异构酶抑制剂
（topoisomerase inhibitors）和细胞毒性抗生素（cytotoxic antibiotics）。细胞毒性剂优先地选自以下所组成的组：顺铂、丝裂霉素（特别是丝裂霉素C）、戊柔比星（valrubicin）、多西他赛（docetaxel）、塞替派（thiotepa）和盐酸耶西塔宾（gemcitabine）。
[0154] 抗癌抗体优选地为一种单克隆单特异性的抗癌抗体，优先地选自以下所组成的组：曲妥珠单抗（trastuzumab）、阿仑单抗（alemtuzumab）、阿特朱单抗（atezolizumab）、巴文西亚（avelumab,）、贝伐珠单抗（bevacizumab）、维汀-布仑妥昔单抗（brentuximab vedotin）、西妥昔单抗（cetuximab）、奥星-吉妥珠单抗（gemtuzumab ozogamicin）、替伊莫单抗（ibritumomab tiuxetan）、伊匹单抗、尼妥珠单抗（nimotuzumab）、奥法木单抗
（ofatumumab）、帕尼单抗（panitumumab）、派姆单抗（pembrolizumab）、利妥昔单抗
（rituximab）和托西莫单抗（lositumomab）。另外，一种单克隆单特异性抗癌抗体还优先地选自以下所组成的组：曲妥珠单抗、阿仑单抗、阿特朱单抗、巴文西亚、贝伐珠单抗、维汀-布仑妥昔单抗、西妥昔单抗、奥星-吉妥珠单抗、替伊莫单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗（nivolumab）、奥法木单抗、帕尼单抗、派姆单抗、利妥昔单抗和托西莫单抗。
（ofatumumab）、帕尼单抗（panitumumab）、派姆单抗（pembrolizumab）、利妥昔单抗
（rituximab）和托西莫单抗（lositumomab）。另外，一种单克隆单特异性抗癌抗体还优先地选自以下所组成的组：曲妥珠单抗、阿仑单抗、阿特朱单抗、巴文西亚、贝伐珠单抗、维汀-布仑妥昔单抗、西妥昔单抗、奥星-吉妥珠单抗、替伊莫单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗（nivolumab）、奥法木单抗、帕尼单抗、派姆单抗、利妥昔单抗和托西莫单抗。
[0155] 本发明应用的抗体或其抗原结合片段优选地与抗癌药物尤其是与此处所述的抗癌抗体联合施用，但不与（活性）外周血液淋巴细胞等（自体）免疫效应细胞联合施用。这意味着在此处所述的联合治疗中，本发明应用的抗体或其抗原结合片段以及抗癌药物优选地
为针对所述的泌尿道赘生物治疗的唯一药剂。
为针对所述的泌尿道赘生物治疗的唯一药剂。
[0156] 或者，本发明应用的抗体或其抗原结合片段优选与所述的过继性细胞转移联合施用，但不与所述的抗癌药物联合施用。这意味着在此处所述的联合治疗中，本发明应用的抗体或其抗原结合片段以及（自体）免疫效应细胞优选地为针对所述的泌尿道赘生物治疗的
唯一药剂。
唯一药剂。
[0157] 另外，本发明应用的抗体或其抗原结合片段还优选地与（i）此处所述的抗癌药物尤其是所述的抗癌抗体，以及（ii）此处所述的过继性细胞转移，尤其是所述的（自体）免疫效应细胞，进行联合施用。
[0158] 该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂应持续性施用。例如，优选地在抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂施用后，施用该抗体或其抗原结合片段。或优选在抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂施用前，施用该抗体或其抗原结合片段。
[0159] 在持续性施用过程中，第一种药物和第二种药物的施用间隔期优选地不要超过一周，更优选地不超过3天，更优选地不超过2天，两种药物的间隔期最优选地不超过24小时。
尤其优选两种药物在同一天施用，两种药物施用间隔期优选地不要超过6小时，更优选地不超过3小时，更优选地不超过2小时，两种药物的间隔期最优选地不超过1小时。
尤其优选两种药物在同一天施用，两种药物施用间隔期优选地不要超过6小时，更优选地不超过3小时，更优选地不超过2小时，两种药物的间隔期最优选地不超过1小时。
[0160] 或者，该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂并存施用，例如基本在同一时间施用。此处所述的“基本在同一时间”表明同一时间施用，或者在抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂施用后立即施用该抗体或其抗原结合片段，或者在该抗体或其抗原结合片段施用后立即施用抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂。所属技术领域的专业人员了解“之后立即”包括制备第二次施用所需的时间，特别是接触并消毒第二次施用部位以及适当准备“施用设备”（如注射器和输液泵等）所需时间。同一时间施用也包括该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物与抗癌药物或（自体）免疫效应细
胞等联合药剂的施用时间重叠，或者例如其中一种药物施用需要较长的时间，比如需要30
分钟、1个小时、2个小时或者更长时间，如采用灌输治疗方法，而另一种药物在该期间的某段时间施用。若采用不同方法和/或不同部位的施用治疗，那么优选同一时间施用该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂。
胞等联合药剂的施用时间重叠，或者例如其中一种药物施用需要较长的时间，比如需要30
分钟、1个小时、2个小时或者更长时间，如采用灌输治疗方法，而另一种药物在该期间的某段时间施用。若采用不同方法和/或不同部位的施用治疗，那么优选同一时间施用该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂。
[0161] 该抗体或其抗原结合片段与抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂优选地（i）包含于同一组合物中，或（ii）分别施用。
[0162] 若包含于同一组合物中，则可采用以下所述的药用组合物。
[0163] 若预设采用不同施用方法，那么更优选采用分别施用。例如，抗癌药物或（自体）免疫效应细胞等联合药剂可进行全身施用，如静脉注射或口服，而该抗体或其抗原结合片段在膀胱部位内部施用。
[0164] 泌尿道赘生物治疗应用中的药用组合物另一方面，本发明还提供了在所述的泌尿道赘生物治疗应用中的包含该抗体或其抗原
结合片段的药用组合物。
结合片段的药用组合物。
[0165] 更明确来说，本发明涉及用于治疗所述的泌尿道赘生物的药用组合物，例如通过膀胱部位的施用治疗。药用组合物包含上述多特异性抗体或其抗原结合片段。施用所述的
该抗体或其抗原结合片段优选地采用适宜的剂量给药（给药方案），例如施用该抗体或其抗原结合片段的给药方案、治疗安排和方法。
该抗体或其抗原结合片段优选地采用适宜的剂量给药（给药方案），例如施用该抗体或其抗原结合片段的给药方案、治疗安排和方法。
[0166] 因此，本发明进一步提供了用于泌尿道赘生物的药用组合物，该药用组合物包含该抗体或其抗原结合片段，尤其是一种双特异性抗体，如一种双特异性三功能抗体。药用组合物的优选实施方案为本文所述的依据本发明应用的抗体优选实施方案。药用组合物优选
使用为该抗体或其抗原结合片段的优选使用。
使用为该抗体或其抗原结合片段的优选使用。
[0167] 包含该抗体或其抗原结合片段的药用组合物优选地以一种“治疗有效量”施用，即足以体现对个体成效的剂量。实际使用剂量、频率和时相取决于泌尿道赘生物的性质和严重程度。
[0168] 药用组合物还可以包含至少两种不同的所述的该抗体或其抗原结合片段。因此，同一种赘生物可针对不同定向处理，从而优选地提高治疗功效。因此，一种药物的剂量可有利地减少。
[0169] 药用组合物优选地还可进一步包含一种药学上可接受载体和/或赋形剂，或辅料、缓冲剂、稳定剂或其他所属技术领域的专业人员所熟知的物质。
[0170] 从进一步的成分来看，药用组合物可特别包含一种（可配伍的）药学上可接受载体和/或赋形剂。就本发明而言，药学上可接受载体通常包括药用组合物的液体或非液体形态基底。此处所用的“可配伍的”属于表明药用组合物的各个组成成分能够与该抗体或其抗原结合片段相互混合，且在混合中不会发生相互作用从而影响一般使用条件下药用成分的药效。当然，药学上可接受的载体和赋形剂具有充分的高纯度和低毒性，以确保适宜对治疗的实验对象进行施用。
[0171] 药用组合物优选地采用一种冻干粉（lyophilized powder）或液体形态，液体形态优选地为一种水溶液。因此，本发明中的药用组合物可以为一种干粉或冻干粉，或者更优选为一种溶液（溶于赋形剂）。若生产商提供的为干粉形态，那么干粉通常可在施用前在合适的溶液中（水溶液；例如注射用水或盐溶液，或者任选地的磷酸盐缓冲液（PBS）等缓冲剂）短时间溶解。小瓶的液体药剂可只一次性使用或多次使用。
[0172] 在另一优选实施方案中，依据本发明应用的抗体和/或该药用组合物不为冻干形态。因此，本发明应用的抗体或其抗原结合片段优选不采用冻干形态，而采用溶液形态，优选地采用水溶液，更优选地采用水性缓冲溶液。
[0173] 因此，该药用组合物尤其优选以液体形式提供。所以该药学上可接受的载体通常包含一种或多种（可配伍的）药学上可接受的液体载体。（可配伍的）药学上可接受的液体载体例如包括无热原水、生理盐水或缓冲（水性）溶液，如柠檬酸盐缓冲液（citrate buffer）；
聚丙二醇（polypropylene glycol）、丙三醇（glycerol）、山梨糖醇（sorbitol）、甘露醇（mannitol）和聚乙二醇（polyethylene glycol）等多元醇；海藻酸（alginic acid）、进一步还可包括PLGA等有机或无机多聚体，优选地为该活性药剂提供一种持续性释放作用。液体
药用组合物中的载体优选地为无热原水、生理盐水或缓冲（水性）溶液，例如磷酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液等。若采用注射或灌注药用组合物，可采用水或者优选地采用缓冲剂，或者更优选地采用柠檬酸盐缓冲液等水性缓冲剂。
聚丙二醇（polypropylene glycol）、丙三醇（glycerol）、山梨糖醇（sorbitol）、甘露醇（mannitol）和聚乙二醇（polyethylene glycol）等多元醇；海藻酸（alginic acid）、进一步还可包括PLGA等有机或无机多聚体，优选地为该活性药剂提供一种持续性释放作用。液体
药用组合物中的载体优选地为无热原水、生理盐水或缓冲（水性）溶液，例如磷酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液等。若采用注射或灌注药用组合物，可采用水或者优选地采用缓冲剂，或者更优选地采用柠檬酸盐缓冲液等水性缓冲剂。
[0174] 因此，药用组合物优选包含缓冲剂，优选地为柠檬酸盐缓冲液、丁二酸盐缓冲液（succinate buffer）和酒石酸盐缓冲液（tartrate buffer）等有机酸缓冲溶液（即一种基于有机酸的缓冲液），更优选地所述药用组合物包含柠檬酸盐缓冲液。有机酸缓冲溶液优先地选自以下所组成的组：柠檬酸盐缓冲液、丁二酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液和磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液（phosphate-citrate buffer），更优先地选自以下所组成的组：柠檬酸盐缓冲液、丁二酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液。特别优选的缓冲液为柠檬酸盐缓冲液。总的来说，一种缓冲液（还）可以包含一种钠盐、优选的至少浓度为30mM的一种钠盐，一种钙盐、优选的至少浓度为0.05mM的一种钙盐和/或任选地一种钾盐、优选的至少浓度为1mM的一种钾盐，
钠盐、钙盐和钾盐或以氯化物、碘化物、溴化物等卤化物形式存在，或以氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐或硫酸盐等形式存在。钠盐的形态可包括NaCl，Nal，NaBr，Na2CO3，NaHCO3，Na2SO4，作为选择的钾盐形态包括KCI，KI，KBr，K2CO3，KHCO3，K2SO4，钙盐的形态包括CaCl2，Cal2，CaBr2，CaCO3，CaSO4，Ca(OH)2。此外，此前提到阳离子的有机阴离子也存在于缓冲液中。
钠盐、钙盐和钾盐或以氯化物、碘化物、溴化物等卤化物形式存在，或以氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐或硫酸盐等形式存在。钠盐的形态可包括NaCl，Nal，NaBr，Na2CO3，NaHCO3，Na2SO4，作为选择的钾盐形态包括KCI，KI，KBr，K2CO3，KHCO3，K2SO4，钙盐的形态包括CaCl2，Cal2，CaBr2，CaCO3，CaSO4，Ca(OH)2。此外，此前提到阳离子的有机阴离子也存在于缓冲液中。
[0175] 药用组合物还包含盐水（0.9%NaCl）、乳酸林格氏液（Ringer-Lactate solution）或PBS（磷酸盐缓冲液）。例如，药用组合物可以以该抗体或其抗原结合片段存于适宜缓冲液的原液形式提供，仅在施用前使用盐水（0.9%NaCl）、乳酸林格氏液或磷酸盐缓冲液稀释该原液，从而取得施用所需的抗体浓度。适宜的缓冲液例如上述的有机酸性溶液，优选地是柠檬酸盐缓冲液。
[0176] 此外，药用组合物可采用一种或多种可配伍的固体或液体填充物或稀释剂或胶囊复合物，从而适宜对治疗的实验对象进行施用。药用组合物可包括的复合物包含如乳糖、葡萄糖或蔗糖等糖类，玉米淀粉或土豆淀粉等淀粉，羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、醋酸纤维素等纤维素及其衍生物，西黄蓍胶粉，麦芽，明胶，动物油脂，硬脂酸、硬脂酸镁、硫酸钙等固态助流剂，花生油、棉花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油等植物油，聚丙二醇、丙三醇、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇等多元醇以及海藻酸。此外，复合物的成分可根据要求包括防腐剂、稳定剂、抗氧化剂和/或其他添加剂。所以，药用组合物还可包含稳定药剂，如吐温80（Tween® 80）或吐温20（Tween® 20）。任选地，为保持该抗体或其抗原结合片段缓释的辅料成分也可包含在药用组合物中。
[0177] 药用组合物可以进一步包含上述的抗癌药物。
[0178] 药用组合物的酸碱度值优选地为6.5到8.2，更优选地为7.0到7.8，更优选地为7.2到7.6，最优选地为7.4。该酸碱值既适宜于泌尿道环境，也能保证本活性药剂的稳定需求。
因此，具有该酸碱值的药用组合物既不会对泌尿道施用的局部产生刺激，也不会削弱该抗
体或其抗原结合片段的稳定性。
因此，具有该酸碱值的药用组合物既不会对泌尿道施用的局部产生刺激，也不会削弱该抗
体或其抗原结合片段的稳定性。
[0179] 在优选实施方案中，药用组合物的成分仅包含以下部分（i）此处所述的该抗体或其抗原结合片段；（ii）此处所述的缓冲剂；以及任选地（iii）注射用水，生理盐水和/或磷酸盐缓冲液。
[0180] 治疗的对象治疗的对象优选为人类或动物，优选的是哺乳动物或人类。对人类施用关于上文所述
的该抗体或其抗原结合片段，发明治疗方案至关重要。实验对象优选的是患有膀胱赘生物
疾病的患者。例如，年轻的患者（小于15岁）或者年老的患者（大于60岁）可依据本发明进行治疗。鉴于年老患者为泌尿道赘生物的高发人群，实验对象特别优选为年老患者。对于年老患者来说，通过医生对患者进行药物施用并确保遵循医嘱的方法对患者治疗具有极大益
处。同时药物优选地采用无痛方式进行施用。
的该抗体或其抗原结合片段，发明治疗方案至关重要。实验对象优选的是患有膀胱赘生物
疾病的患者。例如，年轻的患者（小于15岁）或者年老的患者（大于60岁）可依据本发明进行治疗。鉴于年老患者为泌尿道赘生物的高发人群，实验对象特别优选为年老患者。对于年老患者来说，通过医生对患者进行药物施用并确保遵循医嘱的方法对患者治疗具有极大益
处。同时药物优选地采用无痛方式进行施用。
[0181] 总的来说，在优选地未进行免疫抑制治疗的情况下，任何年龄患者的泌尿道赘生物疾病都能在本发明的抗体或其抗原结合片段的使用中获得改善。
[0182] 包含多特异性抗体的药盒另一方面，本发明提供了一种药盒，所述药盒包括此处所述的抗体或其抗原结合片段
或者此处所述的药用组合物，以及附有优选地通过泌尿道局部施用治疗泌尿道赘生物的指
导说明的包装说明书或标签。
或者此处所述的药用组合物，以及附有优选地通过泌尿道局部施用治疗泌尿道赘生物的指
导说明的包装说明书或标签。
[0183] 该药盒可包含在一个或多个容器内，优选地为一个容器。
[0184] 该药盒优选地用于防止和/或治疗此处所述的泌尿道赘生物疾病。
[0185] 此外，该药盒还包含一种（i）导尿管，（ii）一种导尿管注射器，（iii）一种上述的进一步抗癌药物，和/或（iv）用于所述药用组合物干冻粉复原的适宜溶液或用于所述药用组合物原液稀释的适宜溶液。
[0186] 治疗患有泌尿道赘生物的对象的方法另一方面，通过施用一种多特异性抗体或其抗原结合片段，本发明提供了对患有泌尿
道赘生物的对象进行的治疗的方法，多特异性抗体包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗肿瘤相关细胞表面抗原的特异性。
道赘生物的对象进行的治疗的方法，多特异性抗体包含
（i）一种抗T细胞表面抗原的特异性，以及
（ii）一种抗肿瘤相关细胞表面抗原的特异性。
[0187] 抗体或其抗原结合片段优选地为上述抗体或其抗原结合片段。更优选的是施用上述的药用组合物。因此，根据上述治疗方法，该多特异性抗体或其抗原结合片段通常以药用组合物的形式提供。药用组合物或抗体优选地对泌尿道的局部施用，如对膀胱部位施用。
[0188] 进一步来说，本治疗方法还优选地允许采用联合治疗，在对此处所述的抗体或其抗原结合片段施用时可结合此处所述另一抗癌药物联合施用。该抗癌药物可采用任一适宜
方式施用，如全身或膀胱部位，优选地采用与此处所述抗体施用方法相分别的方法。
方式施用，如全身或膀胱部位，优选地采用与此处所述抗体施用方法相分别的方法。
[0189] 此处所述的抗体或其抗原结合片段在治疗方案中优选地采用给药方案进行施用，并通过上述施用方法进行，如泌尿道的局部施用，如膀胱部位施用。因此，根据此处所述的治疗方案，此处所述的抗体和抗原结合片段优选地采用上述方法进行施用。
附图简介
附图简介
[0190] 以下将给出附随的附图简介。这些附图旨在更详细的阐明本发明的情况。但是，并不旨在以任何形式限制本发明的主题范围。
[0191] 附图1 展现了实施例1中（A）卡妥索单抗与表达CD3基因的Jurkat细胞在100%尿液中的结合情况。5×105个靶细胞在2°C至8°C的条件下并在指定的卡妥索单抗浓度中温育60
分钟。（B）卡妥索单抗与EpCAM阳性HCT-8细胞在100%尿液中的结合情况。5×105个靶细胞在
2至8°C的条件下并在指定的卡妥索单抗浓度中温育60分钟。
分钟。（B）卡妥索单抗与EpCAM阳性HCT-8细胞在100%尿液中的结合情况。5×105个靶细胞在
2至8°C的条件下并在指定的卡妥索单抗浓度中温育60分钟。
[0192] 附图2 展现了实施例2中通过采用异基因细胞毒性试验（allogeneic cytotoxicity assay）的方法检测10%尿液环境中卡妥索单抗的生物活性。在指定的抗体数量存在环境中，1×105外周血单个核细胞（PBMC）与1×104EpCAM+ HCT-8肿瘤细胞相互混合。
肿瘤细胞杀伤率经过计算并以[%]标绘。
肿瘤细胞杀伤率经过计算并以[%]标绘。
[0193] 附图据3 展现了实施例3中在膀胱部位施用卡妥索单抗两周前，患者1膀胱的内窥镜成像画面。图F中的箭头表示正在生长中的典型浅表性膀胱癌的乳头状结构。
[0195] 以下具体实施例说明本发明的各个实施方案及各方面的情况。但是，本发明不局限于以下所述的具体实施方案范围。提供以下准备程序和具体案例是为了能使所属技术领
域的专业人员更清楚明确地理解并实施本发明。但是，本发明并不局限于用以例证的实施
方案的范围，仅仅旨在详细阐明本发明的某一方面，并且也不局限于使用方法，功能上等效的方法落入本发明的范围。实际上，根据前部分描述并辅以下文的附图和实施例，本发明的各种改进及其他所述将对所属技术领域的专业人员清晰易懂。所有改进将包含在附随的权
利要求范围内。
域的专业人员更清楚明确地理解并实施本发明。但是，本发明并不局限于用以例证的实施
方案的范围，仅仅旨在详细阐明本发明的某一方面，并且也不局限于使用方法，功能上等效的方法落入本发明的范围。实际上，根据前部分描述并辅以下文的附图和实施例，本发明的各种改进及其他所述将对所属技术领域的专业人员清晰易懂。所有改进将包含在附随的权
利要求范围内。
[0196] 实施例1：尿液环境中卡妥索单抗的结合活性本研究是为了测评尿液环境中卡妥索单抗的结合活性。为了评测卡妥索单抗的结合活
性，将采用表达卡妥索单抗特异性对应靶抗原的细胞系。鉴于卡妥索单抗的双特异性结合
活性以结合CD3+T细胞和EpCAM+肿瘤细胞为典型（Chelius等，《三功能抗体卡妥索单抗的结构性和功能性特征》，mABs，2(3):1-12(2010)）（Chelius et al. Structural and
functional characterization of the trifunctional antibody catumaxomab. mAbs 2
(3):1-12(2010)）,将采用FACS分析技术（流式细胞仪）并使用表达相关靶抗原细胞系即CD3+ Jurkat细胞和EpCAM+ HCT-8细胞对卡妥索单抗的结合活性进行测评。为了在尿液环境中
测评卡妥索单抗的结合活性，磷酸缓冲生理盐水（缓冲液对照组）中的卡妥索单抗结合活性与两份人体尿液样品（100%尿液）中的结合活性进行比较。
性，将采用表达卡妥索单抗特异性对应靶抗原的细胞系。鉴于卡妥索单抗的双特异性结合
活性以结合CD3+T细胞和EpCAM+肿瘤细胞为典型（Chelius等，《三功能抗体卡妥索单抗的结构性和功能性特征》，mABs，2(3):1-12(2010)）（Chelius et al. Structural and
functional characterization of the trifunctional antibody catumaxomab. mAbs 2
(3):1-12(2010)）,将采用FACS分析技术（流式细胞仪）并使用表达相关靶抗原细胞系即CD3+ Jurkat细胞和EpCAM+ HCT-8细胞对卡妥索单抗的结合活性进行测评。为了在尿液环境中
测评卡妥索单抗的结合活性，磷酸缓冲生理盐水（缓冲液对照组）中的卡妥索单抗结合活性与两份人体尿液样品（100%尿液）中的结合活性进行比较。
[0197] 5×105靶细胞（CD3+Jurkat细胞或EpCAM+ HCT-8细胞）在以下卡妥索单抗浓度下，2°C到8°C温化60分钟：0.0μg/ml，0.01μg/ml，0.02μg/ml，0.04μg/ml，0.08μg/ml, 0.15μg/ml, 0.30μg/ml，0.60μg/ml，1.20μg/ml，2.40μg/ml，4.80μg/ml，9.60μg/ml 和19.20μg/ml。
靶细胞在磷酸盐缓冲液或尿液样品（100%尿液）中重悬。然后细胞经两次冲洗后，联胞卡妥索单抗使用荧光标记（FITC）的小鼠抗大鼠IgG（Jurkat）或大鼠抗小鼠IgG（HCT-8）二次检测抗体（Dianova）进行检测。采用FACS-Calibur流式细胞仪（Becton Dickinson）可对染色阳性细胞进行评测。
靶细胞在磷酸盐缓冲液或尿液样品（100%尿液）中重悬。然后细胞经两次冲洗后，联胞卡妥索单抗使用荧光标记（FITC）的小鼠抗大鼠IgG（Jurkat）或大鼠抗小鼠IgG（HCT-8）二次检测抗体（Dianova）进行检测。采用FACS-Calibur流式细胞仪（Becton Dickinson）可对染色阳性细胞进行评测。
[0198] 结果显示在附图1中。附图据1显示缓冲液对照组和100%尿液中卡妥索单抗与表达CD3Jurkat细胞的成功结合（附图1A）以及卡妥索单抗与EpCAM阳性HCT-8细胞的成功结合
（附图1B）。尤其，在尿样2中的结合与缓冲液对照组中的结合没有差异。在较高的抗体浓度下，尿样1中的卡妥索单抗结合也与缓冲液对照组中的结合没有差异。在较低的抗体浓度
下，相较于缓冲液对照组，尿样1存在少许结合缺陷，但在高浓度下没有出现该缺陷。因此，结果表明即使在100%的尿液环境中卡妥索单抗能够与其靶抗原EpCAM和CD3没有缺陷的结
合。
（附图1B）。尤其，在尿样2中的结合与缓冲液对照组中的结合没有差异。在较高的抗体浓度下，尿样1中的卡妥索单抗结合也与缓冲液对照组中的结合没有差异。在较低的抗体浓度
下，相较于缓冲液对照组，尿样1存在少许结合缺陷，但在高浓度下没有出现该缺陷。因此，结果表明即使在100%的尿液环境中卡妥索单抗能够与其靶抗原EpCAM和CD3没有缺陷的结
合。
[0199] 实施例2：尿液环境中卡妥索单抗的生物活性接下来对卡妥索单抗的生物活性进行调查。通过对T细胞和FcγR免疫细胞的重新定向
和活化，双特异性抗体卡妥索单抗引发对EpCAM+肿瘤细胞有效性破坏（Lindhofer H, Hess J, Ruf P，《癌症治疗中的三功能抗体Triomab》，《双特异性抗体》，编者Kontermann RE（等），施普林格出版社，第289页（2011））（Lindhofer H, Hess J, Ruf P:Trifunctional Triomab® antibodies for cancer therapy. In: Bispecific Antibodies.
Kontermann RE(ed). Springer Heidelberg Dordrecht London New York, 289
(2011)）。因此，通过采用异基因细胞毒性试验可在生物体外理想地评测卡妥索单抗的生物活性，其中，在异基因细胞毒性试验中进行了靶向肿瘤细胞杀伤分析（Chelius等，《三功能抗体卡妥索单抗的结构性和功能性特征》，mABs，2(3):1-12(2010)）。
和活化，双特异性抗体卡妥索单抗引发对EpCAM+肿瘤细胞有效性破坏（Lindhofer H, Hess J, Ruf P，《癌症治疗中的三功能抗体Triomab》，《双特异性抗体》，编者Kontermann RE（等），施普林格出版社，第289页（2011））（Lindhofer H, Hess J, Ruf P:Trifunctional Triomab® antibodies for cancer therapy. In: Bispecific Antibodies.
Kontermann RE(ed). Springer Heidelberg Dordrecht London New York, 289
(2011)）。因此，通过采用异基因细胞毒性试验可在生物体外理想地评测卡妥索单抗的生物活性，其中，在异基因细胞毒性试验中进行了靶向肿瘤细胞杀伤分析（Chelius等，《三功能抗体卡妥索单抗的结构性和功能性特征》，mABs，2(3):1-12(2010)）。
[0200] 因此，在异基因细胞毒性试验中可对以卡妥索单抗为介导的杀伤EpCAM+ HCT-8肿瘤细胞的情况进行评测。从而，卡妥索单抗在磷酸盐缓冲液对照组中的杀伤活性和其在10%尿液样品中的活性进行对比。已对三组不同的尿液样品进行测试。通过菲科尔密度梯度离
心法对来自一名健康捐献者的外周血单个核细胞（PBMC）（1×105细胞）进行分离，之后在96孔培养板中，指定数量的抗体与1×104EpCAM+ HCT-8肿瘤细胞相互混合。将10Vol%的尿液
添加进“尿样1”、“尿样2”和“尿样3”。经过4天37°C和5%CO2浓度条件的联合培养后，再经磷酸盐缓冲溶液两次冲洗可溶性外周血单个核细胞，除去Ca2+和Mg2+。附着的肿瘤细胞之后被四唑氢氧化物（tetrazolium hydroxide）（XTT，细胞增殖检测试剂盒II，罗氏）染色，根据公式(ODtumor cells + PBMC – ODtumor cells + PBMC + antibody)/(ODtumor cells + PBMC - ODmedium)×100%计算肿瘤细胞样品对照组的OD650nm-490nm肿瘤细胞杀伤率（%），当杀伤率达到2.5%到3.0%时对细胞增殖进行测量。每一样品的数据测量重复进行一次并计算得出平均值。
心法对来自一名健康捐献者的外周血单个核细胞（PBMC）（1×105细胞）进行分离，之后在96孔培养板中，指定数量的抗体与1×104EpCAM+ HCT-8肿瘤细胞相互混合。将10Vol%的尿液
添加进“尿样1”、“尿样2”和“尿样3”。经过4天37°C和5%CO2浓度条件的联合培养后，再经磷酸盐缓冲溶液两次冲洗可溶性外周血单个核细胞，除去Ca2+和Mg2+。附着的肿瘤细胞之后被四唑氢氧化物（tetrazolium hydroxide）（XTT，细胞增殖检测试剂盒II，罗氏）染色，根据公式(ODtumor cells + PBMC – ODtumor cells + PBMC + antibody)/(ODtumor cells + PBMC - ODmedium)×100%计算肿瘤细胞样品对照组的OD650nm-490nm肿瘤细胞杀伤率（%），当杀伤率达到2.5%到3.0%时对细胞增殖进行测量。每一样品的数据测量重复进行一次并计算得出平均值。
[0201] 结果显示在附图2中。附图2显示与缓冲液对照组相比，尿液样品中卡妥索单抗的生物活性没有削弱。在卡妥索单抗浓度低至4%的所有案例中都检测出肿瘤细胞的杀伤率为
100%。需要指出的是，将浓度达到10%仅出于技术分析原因：由于尿液本身对肿瘤生长和肿瘤细胞的杀伤的影响，10%以上的尿液浓度扰乱了该实验的分析。但是，关于卡妥索单抗的细胞毒性，更高的尿液浓度与其不会提供不同结果，这点在以下的实施例中通过生物体内
阳性结果得到进一步证明。
100%。需要指出的是，将浓度达到10%仅出于技术分析原因：由于尿液本身对肿瘤生长和肿瘤细胞的杀伤的影响，10%以上的尿液浓度扰乱了该实验的分析。但是，关于卡妥索单抗的细胞毒性，更高的尿液浓度与其不会提供不同结果，这点在以下的实施例中通过生物体内
阳性结果得到进一步证明。
[0202] 实施例3：70周岁女性膀胱癌患者同情使用治疗70周岁女性膀胱患者（患者1）于2004年初步诊断为膀胱上皮细胞癌，经过尿液细胞学
检查确定为EpCAM阳性肿瘤细胞。根据下表表格1总结的治疗方案，在该患者的膀胱部位施
用了6次卡妥索单抗抗体。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
检查确定为EpCAM阳性肿瘤细胞。根据下表表格1总结的治疗方案，在该患者的膀胱部位施
用了6次卡妥索单抗抗体。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
[0203] 表格1：患者1的治疗方案根据表格1，患者1接受了6周的灌注，卡妥索单抗剂量逐次增加，最后一次达100μg。抗
体总施用量为470μg。
体总施用量为470μg。
[0204] 血浆样品中细胞因子的水平通过Luminex200多功能流式点阵仪（Luminex, TX, USA）以及预先混合的包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α细胞因子的
8孔fluorokine细胞流式检测试剂盒（R&D Systems, MN, USA）进行分析。在表格2A和表格
2B显示的时间点，对样品进行收集并存储于-20°C进行批量测量。治疗日当天的样品在抗体灌注前进行采集。细胞因子的检出限（detection limit）为3.2pg/ml。全身系统性卡妥索单抗浓度按照所述的酶联免疫吸附测定（ELISA）进行测量（Ruf等，《癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》，《英国临床药理学杂志》，69(6): 617-
625 (2010)）（Ruf et al. Pharmacokinetics, immunogenicity and bioactivity of
the therapeutic antibody catumaxomab intraperitoneally administered to cancer
patients. Br J Clin Pharmacol. 69(6): 617-625 (2010)）。酶联免疫吸附测定方法的
定量限（quantification limit）为125pg/ml。根据生产商的操作指南，采用认证的酶联免疫吸附测定试验（medac, Hamburg, Germany）测量人抗鼠抗体（HAMA）的数量。阴性样品（neg.）的数值低于40ng/ml。
8孔fluorokine细胞流式检测试剂盒（R&D Systems, MN, USA）进行分析。在表格2A和表格
2B显示的时间点，对样品进行收集并存储于-20°C进行批量测量。治疗日当天的样品在抗体灌注前进行采集。细胞因子的检出限（detection limit）为3.2pg/ml。全身系统性卡妥索单抗浓度按照所述的酶联免疫吸附测定（ELISA）进行测量（Ruf等，《癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》，《英国临床药理学杂志》，69(6): 617-
625 (2010)）（Ruf et al. Pharmacokinetics, immunogenicity and bioactivity of
the therapeutic antibody catumaxomab intraperitoneally administered to cancer
patients. Br J Clin Pharmacol. 69(6): 617-625 (2010)）。酶联免疫吸附测定方法的
定量限（quantification limit）为125pg/ml。根据生产商的操作指南，采用认证的酶联免疫吸附测定试验（medac, Hamburg, Germany）测量人抗鼠抗体（HAMA）的数量。阴性样品（neg.）的数值低于40ng/ml。
[0205] 数据结果显示在以下表格2A和表格2B中。
[0206] 表格2A：患者1体内IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-2和IL-4细胞因子的全身系统性浓度表格2B：患者1体内IL-6、IL-8和TNF-α细胞因子、系统性卡妥索单抗和人抗鼠抗体的全身系统性浓度
根据患者本人的陈述和参与医生的理学检查，抗体治疗具有良好耐受性，并且不具有
明显副作用。尤其是没有任何发烧症状或流行性感冒症状的报告。因此未检测到显著的全
身系统性细胞激素分泌（表格2A和表格2B）。只有在第二次灌注50μg卡妥索单抗后，检测到IL-6弱中间血浆水平13pg/ml和10pg/ml。在进一步治疗中，IL-6数值又回落到检出限
（3.2pg/ml）。低量的IL-8和TNF-α在治疗前就已经可以检测到，但是没有观察到与治疗相关的以上细胞因子的诱导。与此相反，IL-8和TNF-α的细胞数值在治疗过程中低于检出限。该结果表明经常出现在肿瘤环境中的慢性炎症在治疗过程中有所缓解。
根据患者本人的陈述和参与医生的理学检查，抗体治疗具有良好耐受性，并且不具有
明显副作用。尤其是没有任何发烧症状或流行性感冒症状的报告。因此未检测到显著的全
身系统性细胞激素分泌（表格2A和表格2B）。只有在第二次灌注50μg卡妥索单抗后，检测到IL-6弱中间血浆水平13pg/ml和10pg/ml。在进一步治疗中，IL-6数值又回落到检出限
（3.2pg/ml）。低量的IL-8和TNF-α在治疗前就已经可以检测到，但是没有观察到与治疗相关的以上细胞因子的诱导。与此相反，IL-8和TNF-α的细胞数值在治疗过程中低于检出限。该结果表明经常出现在肿瘤环境中的慢性炎症在治疗过程中有所缓解。
[0207] 正如表格2B显示，卡妥索单抗的浓度低于125pg/ml的定量限，因此患者血液体内未检测到全身系统性卡妥索单抗。该现象说明膀胱局部抗体治疗（例如膀胱施用）未导致药物的系统性分泌。根据该发现，人抗鼠抗体的诱导没有出现。包含六周的药物应用的抗体治疗结束14天后，该患者对人抗鼠抗体呈阴性（表格2B）。
[0208] 在治疗前后对患者尿液样品中的EpCAM+肿瘤细胞进行分析。经已构建并论述的免疫细胞化学治疗方案（Jäger等，《三功能抗体卡妥索单抗（抗EpCAM×抗CD3）治疗恶性腹水二期/三期患者的免疫检测研究结果》，《癌症研究》，72(1):24-32 (2012)）（Jäger et al. Immunomonitoring Results of a Phase II/Ill Study of Malignant Ascites
Patients Treated with the Trifunctional Antibody Catumaxomab (Anti-EpCAM×
anti-CD3) Cancer Res.72(1):24-32 (2012) ）对EpCAM+肿瘤细胞进行检测，对该方案作
出了调整以适用尿液样品的分析。简言之，30ml尿液中的细胞在细胞离心涂片器的作用下
离心分离。针对EpCAM和细胞角蛋白对玻片进行双重染色。EpCAM染色通过直接标记有Alexa Fluor 594 Texas Red染料（Alexa Fluor 594 Texas Red）的EpCAM特异性抗体HO-3进行
（Ruf等《，新型EpCAM特异性抗体HO-3的特征：癌症三功能抗体免疫疗法的含义》，《英国癌症杂志》，97 (3):315-321 (2007)）（Ruf et al. Characterisation of the new EpCAM-
specific antibody HO-3: implications for trifunctional antibody immunotherapy
of cancer. Br J Cancer 97 (3):315-321 (2007)）进行。针对细胞角蛋白的染色，则采用了抗角蛋白8、18、19抗体A45B/B3（Micromet）以及对应的Alexa Fluor 488标记的二代抗小鼠IgG1检测抗体（Molecular Probes）。计算机图像分析系统（MDS, Applied Imaging）对所有的细胞离心涂片进行分析清点双染色细胞的数量。为计算CD45+白细胞的数量，用抗CD-
45抗体（Caltag Laboratories, Hamburg, Germany）和对应的二代抗小鼠IgG1抗体Alexa Fluor488染料（Molecular Probes）对附加的细胞离心涂片进行染色。
Patients Treated with the Trifunctional Antibody Catumaxomab (Anti-EpCAM×
anti-CD3) Cancer Res.72(1):24-32 (2012) ）对EpCAM+肿瘤细胞进行检测，对该方案作
出了调整以适用尿液样品的分析。简言之，30ml尿液中的细胞在细胞离心涂片器的作用下
离心分离。针对EpCAM和细胞角蛋白对玻片进行双重染色。EpCAM染色通过直接标记有Alexa Fluor 594 Texas Red染料（Alexa Fluor 594 Texas Red）的EpCAM特异性抗体HO-3进行
（Ruf等《，新型EpCAM特异性抗体HO-3的特征：癌症三功能抗体免疫疗法的含义》，《英国癌症杂志》，97 (3):315-321 (2007)）（Ruf et al. Characterisation of the new EpCAM-
specific antibody HO-3: implications for trifunctional antibody immunotherapy
of cancer. Br J Cancer 97 (3):315-321 (2007)）进行。针对细胞角蛋白的染色，则采用了抗角蛋白8、18、19抗体A45B/B3（Micromet）以及对应的Alexa Fluor 488标记的二代抗小鼠IgG1检测抗体（Molecular Probes）。计算机图像分析系统（MDS, Applied Imaging）对所有的细胞离心涂片进行分析清点双染色细胞的数量。为计算CD45+白细胞的数量，用抗CD-
45抗体（Caltag Laboratories, Hamburg, Germany）和对应的二代抗小鼠IgG1抗体Alexa Fluor488染料（Molecular Probes）对附加的细胞离心涂片进行染色。
[0209] 数据结果显示在以下表格3中。
[0210] 表格3：尿液中EpCAM+肿瘤细胞的检测治疗开始前（第0天）30ml的尿液中可检测到23个肿瘤细胞，而在治疗结束后的一天（第
36天）不再检测到肿瘤细胞（表3）。最重要的是跟踪样品检测中，在第148、211、339和701天对肿瘤细胞仍然呈阴性。第703天（2017年2月17日）对尿液样品通过进一步实验室的细胞学分析，确认没有肿瘤细胞存在的证据。
36天）不再检测到肿瘤细胞（表3）。最重要的是跟踪样品检测中，在第148、211、339和701天对肿瘤细胞仍然呈阴性。第703天（2017年2月17日）对尿液样品通过进一步实验室的细胞学分析，确认没有肿瘤细胞存在的证据。
[0211] 该结果显示了该治疗的疗效。尿液中可以经常发现肿瘤细胞，尤其是晚期膀胱癌患者，针对非肌层浸润性膀胱上皮癌的跟踪护理推荐尿液细胞学检查方法（Babjuk等，《欧洲泌尿外科学会非肌层浸润性膀胱上皮癌的指导方针》，2011年更新，《欧洲泌尿外科学》，
59: 997-1008 (2011)）（Babjuk etal EAU guidelines on non-muscle-invasive
urothelial carcinoma of the bladder, the 2011 Update. Eur Urol 59: 997-1008
(2011)）。除了EpCAM+肿瘤细胞，表格3显示治疗前后几天对白细胞进行分析。治疗前期（第0天）可以检测到496个CD45+白细胞，而治疗完成后1天（第36天）只可以检测到6个白细胞。该结果表明（i）治疗开始时膀胱部位存在免疫效应细胞，这些细胞可被三功能抗体重新定向攻击肿瘤部位；（ii）治疗完成后一天白细胞数量减少，表明白细胞仍固定在肿瘤部位。
59: 997-1008 (2011)）（Babjuk etal EAU guidelines on non-muscle-invasive
urothelial carcinoma of the bladder, the 2011 Update. Eur Urol 59: 997-1008
(2011)）。除了EpCAM+肿瘤细胞，表格3显示治疗前后几天对白细胞进行分析。治疗前期（第0天）可以检测到496个CD45+白细胞，而治疗完成后1天（第36天）只可以检测到6个白细胞。该结果表明（i）治疗开始时膀胱部位存在免疫效应细胞，这些细胞可被三功能抗体重新定向攻击肿瘤部位；（ii）治疗完成后一天白细胞数量减少，表明白细胞仍固定在肿瘤部位。
[0212] 首次膀胱部位施用卡妥索单抗两周后，通过肿瘤病变的内窥镜成像可以确定膀胱内部的环境。数据显示在附图3中。附图3F中的箭头表示正在生长中的典型浅表性膀胱癌的乳头状结构。
[0213] 膀胱部位最后一次施用卡妥索单抗两周后，通过内窥镜成像对患者1膀胱内环境进行重新测评。结果显示在附图4中。由附图4所示最后一次施用卡妥索单抗两周后患者1膀胱的内窥镜成像推断，此前分析的同一区域的粘膜已恢复正常（与附图3相比）。这表明多特性抗体方法治愈了肿瘤。
[0214] 实施例4：72周岁男性膀胱癌患者同情使用治疗患有膀胱癌的72周岁男性患者（“患者2”）接受切除手术后，根据以下表格4总结的治疗
方案，膀胱部位接受了6次卡妥索单抗。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液
（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
方案，膀胱部位接受了6次卡妥索单抗。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液
（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
[0215] 表格4：患者2的治疗方案——第一个治疗周期大约六个月后该患者的肿瘤复发（通过Urovysion测试，Abbott对尿液样品中的非典型
细胞检测），因此如表格5显示接受了包含卡妥索单抗7周剂量第二个治疗周期。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
细胞检测），因此如表格5显示接受了包含卡妥索单抗7周剂量第二个治疗周期。每次抗体药剂通过导尿管以40ml磷酸盐缓冲溶液（酸碱值为7.4）对排空后的膀胱施用，并保证至少两个小时内不允许排泄，以允许抗体结合。
[0216] 表格5：患者2的治疗方案——第二个治疗周期血浆样品中细胞因子的水平通过Luminex200多功能流式点阵仪（Luminex, TX, USA）
以及预先混合的包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α细胞因子的8孔fluorokine细胞流式检测试剂盒（R&D Systems, MN, USA）进行分析。在指定的时间点，对样品进行收集并存储于-20°C进行批量测量。治疗日当天的样品在抗体灌注前进行采集。细胞因子的检出限为3.2pg/ml。全身系统性卡妥索单抗浓度按照前述的酶联免疫吸附测定
（ELISA）进行测量（Ruf等《，癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》《，英国临床药理学杂志》，69(6): 617-625 (2010)）。酶联免疫吸附测定方法的定量限为125pg/ml。根据生产商的操作指南，采用认证的酶联免疫吸附测定试验
（medac, Hamburg, Germany）测量人抗鼠抗体的数量。阴性样品的数值低于40ng/ml。
以及预先混合的包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IFN-γ和TNF-α细胞因子的8孔fluorokine细胞流式检测试剂盒（R&D Systems, MN, USA）进行分析。在指定的时间点，对样品进行收集并存储于-20°C进行批量测量。治疗日当天的样品在抗体灌注前进行采集。细胞因子的检出限为3.2pg/ml。全身系统性卡妥索单抗浓度按照前述的酶联免疫吸附测定
（ELISA）进行测量（Ruf等《，癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》《，英国临床药理学杂志》，69(6): 617-625 (2010)）。酶联免疫吸附测定方法的定量限为125pg/ml。根据生产商的操作指南，采用认证的酶联免疫吸附测定试验
（medac, Hamburg, Germany）测量人抗鼠抗体的数量。阴性样品的数值低于40ng/ml。
[0217] 结果显示在表格6A和表格6B（第一个治疗周期）以及表格7A和表格7B（第二个治疗周期）中。
[0218] 表格6A：患者2体内IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-2和IL-4细胞因子的全身系统性浓度——第一个治疗周期
表格6B：患者2体内IL-6、IL-8和TNF-α、系统性卡妥索单抗和人抗鼠抗体的全身系统性
浓度——第一个治疗周期
表格7A：患者2体内IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-2和IL-4细胞因子的系统性浓度——第二
个治疗周期
表格7B：患者2体内IL-6、IL-8和TNF-α、系统性卡妥索单抗和人抗鼠抗体的系统浓
度——第二个治疗周期
根据患者本人的陈述和参与医生的理学检查，抗体治疗具有良好耐受性，并且不具有
明显的副作用症状。尤其是没有任何发烧症状或流行性感冒症状的报告。因此在两轮治疗
周期中未检测到显著的系统性细胞激素分泌（表格6A/B和表格7A/B）。只有在第一个治疗周期的第三次灌注100μg卡妥索单抗后，检测到IL-6弱中间血浆水平16pg/ml到13pg/ml（表格
6B）。在进一步治疗中，IL-6数值又回落到检出限（3.2pg/ml）。低量的IL-8和TNF-α在治疗前就已经可以检测到，但是没有观察到与治疗相关的以上细胞因子的诱导。与此相反，细胞因子的数值在治疗过程中低于检出限。该结果表明经常出现在肿瘤环境中的慢性炎症在治疗
过程中有所缓解。有趣的是，在整个第二轮治疗周期中，IL-8和TNF-α数值以及其它测量的细胞因子始终低于检出限（表格7A/7B）。
表格6B：患者2体内IL-6、IL-8和TNF-α、系统性卡妥索单抗和人抗鼠抗体的全身系统性
浓度——第一个治疗周期
表格7A：患者2体内IFN-γ、IL-10、IL-17、IL-2和IL-4细胞因子的系统性浓度——第二
个治疗周期
表格7B：患者2体内IL-6、IL-8和TNF-α、系统性卡妥索单抗和人抗鼠抗体的系统浓
度——第二个治疗周期
根据患者本人的陈述和参与医生的理学检查，抗体治疗具有良好耐受性，并且不具有
明显的副作用症状。尤其是没有任何发烧症状或流行性感冒症状的报告。因此在两轮治疗
周期中未检测到显著的系统性细胞激素分泌（表格6A/B和表格7A/B）。只有在第一个治疗周期的第三次灌注100μg卡妥索单抗后，检测到IL-6弱中间血浆水平16pg/ml到13pg/ml（表格
6B）。在进一步治疗中，IL-6数值又回落到检出限（3.2pg/ml）。低量的IL-8和TNF-α在治疗前就已经可以检测到，但是没有观察到与治疗相关的以上细胞因子的诱导。与此相反，细胞因子的数值在治疗过程中低于检出限。该结果表明经常出现在肿瘤环境中的慢性炎症在治疗
过程中有所缓解。有趣的是，在整个第二轮治疗周期中，IL-8和TNF-α数值以及其它测量的细胞因子始终低于检出限（表格7A/7B）。
[0219] 此外，仅在第一个治疗周期第二次和第五次用药后，患者体内血液可检测到浓度范围为pg/ml的极少量的全身系统性卡妥索单抗。其他检测的所有浓度都低于125pg/ml定
量限（表格6A/6B和表格7A/7B）。这意味着膀胱部位的抗体治疗并未导致显著的药物全身释放。根据这一发现，没有出现人抗鼠抗体明显的诱导。治疗开始前该患者已经出现40ng/ml人抗鼠抗体的临界值（数值低于40ng/ml视为阴性）。治疗过程中人抗鼠抗体首次轻微增加但之后又基本回落到初始数值（表格6B，第一个治疗周期）。重要的是，即使在第二轮治疗周期中，人抗鼠抗体的数值仅小幅度增长至281ng/ml。该进程对卡妥索单抗减少人抗鼠抗体
的反应不具有典型代表性。之前研究中使用卡妥索单抗进行腹腔注射，人抗鼠抗体浓度最
高达到104至105ng/ml（Ruf等《，癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》，《英国临床药理学杂志》，69(6): 617-625 (2010)）。因此在上述案例中，特别是在膀胱部位施用卡妥索单抗明显仅具有较弱的致免疫性。
量限（表格6A/6B和表格7A/7B）。这意味着膀胱部位的抗体治疗并未导致显著的药物全身释放。根据这一发现，没有出现人抗鼠抗体明显的诱导。治疗开始前该患者已经出现40ng/ml人抗鼠抗体的临界值（数值低于40ng/ml视为阴性）。治疗过程中人抗鼠抗体首次轻微增加但之后又基本回落到初始数值（表格6B，第一个治疗周期）。重要的是，即使在第二轮治疗周期中，人抗鼠抗体的数值仅小幅度增长至281ng/ml。该进程对卡妥索单抗减少人抗鼠抗体
的反应不具有典型代表性。之前研究中使用卡妥索单抗进行腹腔注射，人抗鼠抗体浓度最
高达到104至105ng/ml（Ruf等《，癌症患者腹腔施用治疗性抗体卡妥索单抗的药物动力、免疫原性和生物活性》，《英国临床药理学杂志》，69(6): 617-625 (2010)）。因此在上述案例中，特别是在膀胱部位施用卡妥索单抗明显仅具有较弱的致免疫性。
[0220] 在治疗前后对患者尿液样品中的EpCAM+肿瘤细胞进行分析。通过已构建并论述的免疫细胞治疗方案（Jäger等，《三功能抗体卡妥索单抗（抗EpCAM×抗CD3）治疗恶性腹水二期/三期患者的免疫检测研究结果》，《癌症研究》，72(1):24-32 (2012)）对EpCAM+肿瘤细胞进行检测，对方案作出了调整以适用尿液样品的分析。简言之，30ml尿液中的细胞在细胞离心涂片器的作用下离心分离。针对EpCAM和细胞角蛋白对玻片进行双重染色。EpCAM的染色
通过直接标记有Alexa Fluor 594 Texas Red染料（Alexa Fluor 594 Texas Red）的EpCAM特异性抗体HO-3进行（Ruf等，《新型EpCAM特异性抗体HO-3的特征：癌症三功能抗体免疫疗法的含义》，《英国癌症杂志》，97 (3):315-321 (2007)）。进行。针对细胞角蛋白的染色，则采用了抗角蛋白8、18、19抗体A45B/B3抗体（Micromet）以及对应的Alexa Fluor 488标记的二代抗小鼠IgG1检测抗体（Molecular Probes）。计算机图像分析系统（MDS, Applied
Imaging）对所有的细胞离心涂片进行分析清点双染色细胞的数量。
通过直接标记有Alexa Fluor 594 Texas Red染料（Alexa Fluor 594 Texas Red）的EpCAM特异性抗体HO-3进行（Ruf等，《新型EpCAM特异性抗体HO-3的特征：癌症三功能抗体免疫疗法的含义》，《英国癌症杂志》，97 (3):315-321 (2007)）。进行。针对细胞角蛋白的染色，则采用了抗角蛋白8、18、19抗体A45B/B3抗体（Micromet）以及对应的Alexa Fluor 488标记的二代抗小鼠IgG1检测抗体（Molecular Probes）。计算机图像分析系统（MDS, Applied
Imaging）对所有的细胞离心涂片进行分析清点双染色细胞的数量。
[0221] 以下表格8显示了第二个治疗周期获得的数据结果。以下表格9显示了第319天（2016年1月21日）和第463天（2016年6月15日）跟踪护理获得的数据。
[0222] 表格8：第二个治疗周期尿液中EpCAM+肿瘤细胞的减少量表格9：第二个治疗周期后跟踪护理的尿液样品中EpCAM+肿瘤细胞的减少量
这些结果表明了卡妥索单抗的临床疗效。治疗前患者的尿液细胞学检查呈阳性。各类
膀胱上皮细胞都显示出细胞核增大并深染，同时核质比随之增大。在背景中可观察到单一
淋巴细胞和中性粒细胞。
这些结果表明了卡妥索单抗的临床疗效。治疗前患者的尿液细胞学检查呈阳性。各类
膀胱上皮细胞都显示出细胞核增大并深染，同时核质比随之增大。在背景中可观察到单一
淋巴细胞和中性粒细胞。
[0223] 卡妥索单抗治疗10天后，尿液细胞学检查中观察到各类细胞未出现少量淋巴细胞和极少中性粒细胞的异常表型。没有观察到非典型细胞。
[0224] 但是，六个月后患者再次对Urovysion荧光原位杂交技术(FISH)检测呈阳性反应。因此，患者接受了卡妥索单抗第二轮治疗周期。EpCAM+肿瘤细胞的数量在第二轮治疗周期
过程中持续减少，表格8显示EpCAM+阳性肿瘤细胞数量从111下降到4。该治疗结果显示了生物体内卡妥索单抗介导抗肿瘤反应。值得注意的是从第261天到第268天的样品只出现了形
态紊乱的细胞和细胞碎片。
过程中持续减少，表格8显示EpCAM+阳性肿瘤细胞数量从111下降到4。该治疗结果显示了生物体内卡妥索单抗介导抗肿瘤反应。值得注意的是从第261天到第268天的样品只出现了形
态紊乱的细胞和细胞碎片。
[0225] 最重要的是，第319天和第463天获取的跟踪护理尿液样品中没有检测到EpCAM阳性肿瘤细胞。
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