本发明涉及化合物，它是整合素α4β1，还称为极晚抗原(Very Late Anti gen—4)(VLA—4）或CD49d／CD29，和它的蛋白质配位体，例如血管 细胞粘连分子—1(VCAM—1)和纤维结合素间相互作用的抑制剂。本发明还 涉及制备该化合物的方法、含有它们的药物组合物和它们在治疗应用方 法中的用途。

α4β1是杂二聚体细胞表面受体的整合素家族的成员，所述受体由非 共价联合的糖蛋白亚单元(α和β)组成，包含细胞粘连于其它细胞或细胞 外基质。存在至少14种不同人体整合素α亚单元和至少8种不同β亚单 元，每种β亚单元可与一种或多种α亚单元形成杂二聚体。整合素可根据 它们的β亚单元组成细分，α4β1是若干β1整合素中的一种，还称为极晚 抗原(VLA)。

整合素与它们的蛋白质配位体间的相互作用是保持细胞功能的基 础，例如通过束缚细胞在特定的位置、有助于细胞转移或由它们的环境 向细胞提供生存信号。被整合素识别的配位体包括细胞外基质蛋白质， 例如胶原和纤维结合素；血浆蛋白，例如纤维蛋白原；和细胞表面分子， 例如免疫球蛋白总科和细胞结合补体的跨膜蛋白质。整合素和配位体间 相互作用的特异性由α和β亚单元组成支配。

整合素α4β1在许多造血细胞和建立的细胞系中表达，包括造血前 体、末梢和细胞毒素T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、胸腺细胞和 嗜曙红细胞[Hemler，M．E．等人(1987)，J．Biol．Chem．，262， 11478—11485；Bochner，B．S．等人(1991)，J．Exp．Med．，173， 1553—1556]。不像其它仅结合细胞外基质蛋白质的β1整合素，α4β1结合 VCAM—1、在细胞表面，例如血管内皮细胞上表达的免疫球蛋白总科成员， 和结合含有不同拼接类型Ⅲ连接片段的纤维结合素(CS—1纤维结合 素)[Elices，M．J．等人(1990)，Cell，60，577—584；Wayner，E．A． 等，(1989)J．Cell Biol．，109，1321—1330]。

血液白细胞的活化和外渗在炎性疾病的形成和发展中起主要作用。 细胞粘连于血管内皮需要细胞先从血液迁移到发炎的组织，由血管内皮 细胞表面上的细胞粘连分子和循环的白细胞之间特殊相互作用传递 [Sharar，S．R．等(1995)．Springer Semin．Immunopathol．，16， 359—378]。α4β1被认为在炎症过程中在淋巴细胞、单核细胞和嗜曙红细 胞的募集中起重要作用。在T—细胞增生、生发中心的B—细胞集中、在 骨骼中促红细胞生成祖先细胞的集中、胎盘发育、肌肉发育和肿瘤细胞 转移中也与α4β1／配位体结合有关。

α4β1与其配位体的亲和力通常是低的，但由炎性血管内皮表达的化 学促活经白细胞表面上的受体作用以提高α4β1功能[Weber，C．等 (1996)，J．Cell Biol．，134，1063—1073]。通过体外胞质变动[Osborn， L．等(1989)Cell，59，1203—1211]和人体炎性疾病，例如类风湿性关 节炎[Morales—Ducret，J．等(1992)J．Immunol．，149，1424—1431]、 多发性硬化[Cannella，B．等(1995)Ann．Neurol．，37，424—435]、变 应性哮喘[Fukuda，T．等(1996)，Am．J．Respir．Cell Mol．Biol．， 14，84—94]和动脉粥样硬化[O’Brien，K．D．等(1993)．J．Clin． Invest．，92，945—951]提高了在内皮细胞上的VCAM—1表达。

直接针对α4整合素亚单元的单克隆抗体已显示出对许多人体炎性疾 病的动物模型是有效的，包括多发性硬化、类风湿性关节炎、变应性哮 喘、接触性皮炎、移植排斥、胰岛素依赖糖尿病、炎性肠炎和肾小球性 肾炎。

整合素识别其配位体中的短肽基元。在CS—1中最小α4β1结合表位 是三肽亮氨酸—天冬氨酸—缬氨酸(Leu—Asp—Yal)[Komoriya，A．，等 (1991)J．Biol．Chem．，266，15075—15079]，而VCAM—1含有类似序 列异亮氨酸—天冬氨酸—丝氨酸[Clements，J．M．，等(1994)J．Cell． Sci．，107，2127—2135]。25氨基酸纤维结合素，CS—1肽，它含有Ler Asp—Val基元，是α4β1结合于VCAM—1的竞争抑制剂[Makarem，R．，等 (1994)，J．Biol．Chem．，269，4005—4011]。基于在CS—1中的Leu— Asp—Val序列的小分子α4β1抑制剂已有描述，例如线性分子苯基乙酸— Leu—Asp—Phe—D—Pro—酰胺[Molossi，S．等(1995）．J．Clin．Invest．， 95，2601—2610]和二硫键环肽Cys—Trp—Leu—Asp—Val— Cys[Vanderslice，P．，等(1997)．J．Immuno1．，158，1710—1718]。

近来，在1996年1月11日公开的WO96／00581和1996年7月4日 公开的W96／20216中，含有Leu—Asp—Val序列的环肽被报导抑制α4β1整 合素结合于VCAM—1或纤维结合素。

在1994年2月3日公开的WO94／02445中，报导了少数非肽Leu— Asp—Val替代化合物，用于抑制α4β1导致的粘连。

近来，可口服给药和抑制VCAM／VLA4结合的式Ⅰ非肽化合物在PCT 申请WO96／22966中报导。

优选的化合物是其中在式Ⅰ中，R1’是脲衍生物、R2’是氢、R3’是烷基 或取代的烷基，R4’是二甲氧基苯基或苯并二氧杂环戊烯—5—基和Y是CO的化合物。

人们仍需要抑制VCAM—1和纤维结合素与整合素VLA—4相互作用的 选择性化合物，尤其是可通过口服给药的化合物。

我们现在发现一组合有取代的苯氧基的抑制该相互作用的化合物。

根据本发明的一个方面，它们提供式(Ⅱ)化合物：

其中：

R1在对位或间位位置，是

其中R2和R3分别选自氢、硝基、C1—6烷基、C3—6环烷基、C2—6烯基、 C2—6炔基、C1—4烷氧基、C1—6烷基氨基、C1—6二烷基氨基、C1—6烷基C1—4烷 氧基、C1—6烷基氨基C1—6烷基、氨基、氰基、卤素、三氟甲基、—CO2R12和—CONR12R13，其中R12和R13分别选自氢或C1—6烷基，或R2和R3和与它们 相连的苯基一起形成9或10元二环体系；

R4是C1—4烷基；

R5选自氢和C1—4烷基；

R6选自C1—6烷基、C1—4烷基(C4—6)环烷基、C1—6烷基(C1—6)烷氧基、C1—6 烷基S(C1—6)烷基、C1—4烷基磺酰基(C1—4)烷基，

其中q是1—6的整数，R14是卤素；

R7选自C1—6烷基、C1—8烷氧基羰基、C2—6烯基、1，3—苯并二氧戊环— 5—基和选择性地被一个或多个选自C1—4烷氧基、C1—6烷基、氰基、卤素 和三氟甲基的取代基取代的芳基；

R8是芳基、杂芳基、经环碳原子连接氮的二环杂芳基环体系或经环 碳原子连接氮的9或10元二环体系，每个环选择性地被至多两个取代 基取代，取代基可以是相同或不同的，选自C1—6烷基、C1—4烷氧基、C1—4 烷硫基、C1—6烷基C1—4烷氧基、C1—6烷基氨基C1—6烷基、羟基、—CO2H、 (CH2)pOH，其中p是1或2、氰基、卤素和三氟甲基；

R9和R10分别选自氢和C1—4烷基或R8和R9和与它们相连的氮一起形 成二氢吲哚基或二氢喹啉基；

R11选自羧基、四唑基、烷基磺酰基氨基甲酰基、磺基和亚磺基；

Y是氧、硫或磺酰基；

m是0或1，n是0或1—4的整数，其条件是m和n不同时是0，和 当m是1时，n是0；

或可药用的盐或体内可水解的酯。

‘C1—6烷基C1—4烷氧基’通常指—(C1—6)烷基O(C1—4)烷基，优选实例 是—CH2OCH3。‘C1—6烷基氨基C1—6烷基’通常指—(C1—6)烷基NH(C1—6)烷基， 其优选实例是—CH2NHC2H5。

‘芳基’通常指苯基或萘基，优选苯基。‘杂芳基’指带有至多4 个选自氮、氧和硫的杂原子的芳香5或6元环，‘杂芳基’的实例包括 吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻二唑基、噻唑基、异噁唑基、吡 啶基(pyridinyl)、吡啶基和嘧啶基。

二环杂芳基环体系指芳香5，6—、6，5或6，6—稠合环系，其中一 个或两个环含有环杂原子。环系可含有至多三个杂原子，它分别选自氧、 氮和硫。当环系含有超过一个杂原子时，至少一个杂原子是氮。优选二 环杂芳基环体系的实例是异喹啉基、苯并噻唑基或苯并咪唑基。

9或10元二环体系指芳香6元环稠合于5或6元环，优选5或6 元饱和环，并选择性地被至少一个杂原子，优选氧取代，并且经芳香6 元环上的环碳原子连接于氮。R8的优选实例是四氢萘基。当R2，R3和与 它们相连的苯基一起形成该9或10元二环体系时，优选的基团是二氢 苯并呋喃基和二氢苯并吡喃基。

R2和R3优选分别选自氢、C1—6烷基、C1—4烷氧基、三氟甲基和卤素， 和更优选分别选自甲基、甲氧基、异丙氧基、三氟甲基、氟、溴和氯。

R4的优选基团是C1—2烷基，R5优选选自氢、甲基和异丙基。R6优选 选自C1—4烷基和C1—4烷基S(C1—4)烷基，更优选选自—CH2CH(CH3)(CH3)和— CH2CH2SCH3。R7优选选自C2—6烯基、1，3—苯并二氧戊环—5—基和1—异丙 基—2—甲基丙基乙酰基，更优选选自烯丙基和1，3—苯并二氧戊环—5—基。

R8优选是苯基、噻吩基、吡啶基、噻二唑基、异噁唑基、噻唑基、 5，6，7，8—四氢萘基、异喹啉基、1，3—苯并咪唑基和1，3—苯并噻唑 基，分别选择性地被至多两个取代基取代，取代基优选和分别选自C1—4 烷基，更优选甲基、卤素，更优选氟、氯和溴；—COOH、—CH2OH、羟基 和甲硫基。

R9和R10分别优选选自氢和甲基或R8和R9和与它们相连的氮一起形 成2，3—二氢—1H—吲哚—1—基，或3，4—二氢—1(2H)—喹啉基。R11优选是 COOH。在优选实施方案中，n是1和m是0。Y优选是氧。

本发明的优选化合物是式(Ⅲ)化合物：

其中R2—R8、Y、m和n是如上定义的。

更优选是这些化合物，其中R2是C1—4烷氧基，尤其是甲氧基，R3、 R5和R10分别是氢；R4是C1—4烷基；R6选自C1—4烷基和C1—4烷基S(C1—6)烷 基，尤其是—CH2CH(CH3)(CH3)或—CH2CH2SCH3；R7是1，3—苯并二氧戊环—5— 基；R8是芳基或杂芳基，每个分别选择性地被选自C1—6烷基，尤其是甲 基、CH2OH、卤素，尤其是氯或氟，和羟基的取代基取代，和R9是氢或C1—4 烷基或R8和R9和与它们相连的氮一起形成二氢吲哚基或二氢喹啉基； 和m和n是0或1，其条件是n和m不能同时是0或1，最优选m是0， 和n是1。

尤其优选的化合物包括4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙 酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺；4—(N’—苯基 脲)—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙 酸)酰胺；4—(N’—(2—氯苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨 基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺；7—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2，3— 二氢苯并呋喃基—4—氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯 基丙酸)酰胺；4—(N’—(2—羟基甲基苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮 氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺；4—[(2，3—二氢—1H— 吲哚—1—基羰基)氨基]—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4— 亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺；4—(N’—(2—氟苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙 酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺；4—(N’—(2—羟 基—6—甲基苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基(3，4—亚甲 二氧基)苯基丙酸)酰胺；和4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—异丙氧基苯氧基 乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺。

式(Ⅱ)和(Ⅲ)化合物在—CHR6和—CHR7上具有手性中心，因此当R6 是—CH2CH(CH3)(CH3)或—CH2CH2SCH3时，本发明的式(Ⅱ)和(Ⅲ)化合物含 有亮氨酸或蛋氨酸亚单元，后者是其蛋白原(或天然)构型。本发明覆盖 了抑制VCAM—1和纤维结合素与整合素VLA—4之间相互作用的所有非对 映体。

根据本发明的另一方面，其提供了式(Ⅳ)化合物：

其中：

R1a在对位或间位位置，是

其中

R2a和R3a分别选自氢、硝基、C1—6烷基、C3—6环烷基、C2—6烯基、C2—6 炔基、C1—4烷氧基、C1—6烷基氨基、C1—4烷氧基C1—6烷基、C1—6烷基氨基C1—6 烷基、氰基、卤素、三氟甲基、—CO2R7a和—CONR7aR8a，其中R7a和R8a分 别选自氢或C1—6烷基；

R4a是选自C1—6烷基，C1—6烷氧基取代的(C1—6)烷基和C1—6烷基S(C1—6) 烷基；

R5a选自C1—6烷基、C2—6烯基、1，3—苯并二氧戊环—5—基和选择性地 被至少一个选自C1—4烷氧基、C1—6烷基、氰基、卤素和三氟甲基的取代 基取代的芳基；

R6a是芳基或杂芳基，该环选择性地被至多两个取代基取代，取代基 可以是相同或不同的，选自C1—6烷基、C1—4烷氧基、C1—4烷氧基C1—6烷基、 C1—6烷基氨基C1—6烷基、氰基、卤素和三氟甲基；

Ya是氧或硫；和

na是1—4的整数；

或可药用的盐或体内可水解的酯。

在式(Ⅳ)化合物中，‘芳基’通常指苯基或萘基，优选苯基。‘杂芳 基’指带有至多4个选自氮、氧和硫的杂原子的芳香5或6元环，‘杂 芳基’的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吡啶基 和嘧啶基。

R2a和R3a优选分别选自氢、C1—6烷基、三氟甲基和卤素，和更优选 分别选自甲基、三氟甲基和氯。R4a的优选选自C1—4烷基和C1—4烷基 S(C1— 4)烷基，更优选选自—CH2CH(CH3)(CH3)和—CH2CH2SCH3。R5a优选选自C2—6 烯基、更优选选自烯丙基和1，3—苯并二氧戊环—5—基。R6a优选带有至 多两个取代基的苯基，取代基优选和分别选自C1—4烷基，最优选甲基、 卤素，最优选氯和溴，n优选是1。

本发明的式(Ⅳ)化合物在—CHR4a和—CHR5a上具有手性中心，因此R4a 是—CH2CH(CH3)(CH3)或—CH2CH2SCH3时本发明的式(Ⅳ)化合物含有亮氨酸 或蛋氨酸亚单元，后者是其蛋白原(或天然)构型。本发明覆盖了抑制 VCAM—1和纤维结合素与整合素VLA—4之间相互作用的所有非对映体。

式(Ⅱ)、(Ⅲ)和(Ⅳ)化合物的可药用的盐包括酸加成盐，例如由 无机酸，例如氢卤酸，例如盐酸和氢溴酸、磺酸和膦酸形成的盐；和与 有机酸，尤其是柠檬酸、马来酸、乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸、对甲 苯磺酸、甲磺酸等形成的盐。在另一方面，合适的盐是碱性盐，例如碱 金属盐，例如钠和钾；碱土金属盐，例如镁和钙；铝和铵盐；和与有机 碱，例如乙醇胺、甲胺、二乙胺、异丙基胺、三甲基胺等形成的盐。该 盐可通过现有技术中已知的任何合适方法制备。

体内可水解的酯是那些可药用的酯，它在人体内水解以产生母体化 合物。该酯可通过给药，例如向试验动物静脉内给药试验的化合物，随 后检查试验动物的体液鉴定。羟基的合适的体内可水解的酯包括乙酰 基，用于羧基的包括C1—6烷氧基甲酯，例如甲氧基甲酯、C1—6烷酰氧基 甲酯，例如戊酰氧基甲基、对苯二甲酯，C3—8环烷氧基羰基C1—6烷基酯， 例如1—环己基羰基氧基乙基、1，3—二氧戊环—2—基甲酯，例如5—甲基— 1，3—二氧戊环—2—基甲基；和C1—6烷氧基羰基氧基乙酯，例如1—甲氧基 羰基氧基乙基。

本发明的化合物抑制VCAM—1和纤维结合素与整合素VLA—4之间相 互作用的活性使用许多体外和体内筛选确定，与现有技术的化合物相 比，它们显示改善的药效。

例如本发明的化合物在下文描述的MOLT—4细胞／纤维结合素试验中 优选具有＜10μnM，更优选＜1μM的IC50。

优选的化合物在许多小鼠体内筛选中显示活性，例如在步行中由卵 白蛋白引起的延迟型过敏(DTH)反应和胶原引起的关节炎。

为了使用，式(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)化合物或其可药用的盐或体内可 水解的酯通常根据标准治疗实践配制成药物组合物。

因此，根据本发明的另一方面，它提供了药物组合物，其含有式 (Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)化合物或其可药用的盐或体内可水解的酯和可药用 的载体。

本发明的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、胶囊、 含水或含油溶液、悬浮液或乳化液；用于鼻内使用，例如鼻吸药、鼻喷 雾剂或鼻滴剂；用于阴道或直肠使用，例如栓剂；用于通过吸入给药， 例如细粉或液体气溶胶；用于舌下或颊下使用，例如片剂或胶囊；或用 于肠胃外使用(例如静脉内、皮下、肌内、血管内或浸剂)，例如无菌含 水或油状溶液或悬浮液，或含有加入可生物降解的的聚合物中的药物的 贮存配方。组合物可以是适用于局部给药的形式，例如乳油、软膏和凝 胶，还包括皮肤斑。为此，本发明的组合物可通过现有技术中已知的方 法配制，例如在Comprehensive Medicinal Chemistry，第5卷，Hansch 等编辑，Pegamon Press 1990中一般描述的方法。

此外，除了本发明的化合物之外，本发明的药物组合物可含有适用 于治疗一种或多种与上述症状有关的疾病的一种或多种附加药理试剂。 在另一方面，附加的一种或多种药理试剂可与本发明的药物组合物同时 或先后地共同给药。

本发明的化合物通常以日剂量0．01—75mg／kg体重，优选0．1— 15mg／kg体重向人体给药。本发明的优选组合物是适用于以单元剂量形 式，例如片剂或胶囊口服给药的组合物，根据本发明每个单剂量在每一 单元剂量中含有1—1000mg，优选l0—500mg本发明的化合物。

因此，根据本发明的另一方面，它提供了式(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)化 合物或其可药用的盐或体内可水解的酯在人体或动物体的治疗方法中的 用途。

在本发明的另一方面，其提供了治疗由VCAM—1和／或纤维结合素和 整合素受体VLA—4之间相互作用传递的需要治疗的疾病的方法，包括向 温血动物给药有效量的式(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)或其可药用的盐或体内可 水解的酯。

本发明还提供了式(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)或其可药用的盐或体内可水 解的酯在制备用于治疗纤维结合素和／或VCAM—1(尤其是VCAM—1)和整合 素受体VLA—4之间相互作用传递的疾病或医学症状的药物中的用途。

在本发明的实施方案中，需要治疗的哺乳动物患多发性硬化、类风 湿性关节炎、哮喘、冠状动脉疾病或牛皮癣。

在本发明的另一方面，它提供了制备其中R11是COOH的式(Ⅱ)化 合物或其可药用的盐或体内可水解的酯的方法，其包括偶合

ⅰ)式(Ⅴ)化合物

和式(Ⅵ)化合物

NHR5—CHR6—CONH—CHR7—CH2—COOH    (Ⅵ) 或ⅱ)式(Ⅶ)化合物

和式(Ⅷ)化合物

NH2—CHR7—CH2—COOH    (Ⅷ)

其中L和L1是离去基团和任何官能团被选择性地保护；

和随后如果需要：

a)除去任何保护基团；和

b)形成可药用的盐或体内可水解的酯。

(Ⅴ)和(Ⅵ)或(Ⅶ)和(Ⅷ)的反应在用于形成肽键的标准偶合条件 下进行。它们可以固体载体(固相肽合成)或在有机化合物的合成中使用 的通常技术的溶液中进行。除了固体载体的例外之外，所有其它的保护 基团，偶合试剂、解封试剂和纯化技术类似于固相和溶液相肽合成技术。

在反应过程中，如果需要，氨基酸官能团可被保护基团，例如Boc 保护。该基团在需要时用标准技术，例如酸或碱处理断裂。

用于羧基保护的合适保护基团是酯。

用于形成肽键的偶合试剂包括通常使用的叠氮化物、对称酐、混合 的酐和各种活性酯和碳化二亚胺。在碳化二亚胺的情况下，还可加入添 加剂，例如1—羟基苯并三唑和N—羟基琥珀酰亚胺。其它偶合剂包括1H— 苯并三唑—1—基—氧基—三吡咯二膦鎓六氟硼酸盐(PyBOP)、(2—(1H—苯并 三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓(uronium)六氟硼酸盐(TBTU)、(2— (1H—苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓六氟磷酸盐(TBTU)和0—(7— 氮杂苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓六氟磷酸盐(HATU)。

偶合反应可在—20℃—40℃的温度下进行，反应时间可在例如10分 钟至24小时之间变化。用于中间体和最终产物的合适的纯化方法包括 与许多在有机化学中使用的其它标准技术(例如溶剂提取和结晶)一起采 用的色谱法技术，例如高压液相色谱法(HPLC)。

采用如下缩写： Boc      叔丁氧基羰基 DIPEA    二异丙基乙胺 DMF      二甲基甲酰胺 DMSO     二甲基亚砜 Et3N     三乙胺 HATU     0—(7—氮杂苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓六氟磷酸盐 HOBT     1—羟基苯并三唑 Su       琥珀酰亚胺 TFA      三氟乙酸 THF      四氢呋喃 WSCDI    1—(3—二甲基氨基丙基)—3—乙基碳化二亚胺甲基碘化物或甲基氯化物

用于式(Ⅴ)和(Ⅵ)或(Ⅶ)和(Ⅷ)化合物反应的优选偶合条件尤其 是，

a)HATU／DIPEA／DMF

b)HOBT／WSCDI／DIPEA／DMF

c)HOBT／WSCDI／DIPEA／N—甲基吗啉

式(Ⅵ)化合物可通过使式(Ⅸ)化合物

NHR5CHR6COL’    (Ⅸ)

与式(Ⅷ)化合物反应制备。式(Ⅸ)化合物优选是Boc—氨基酸或 Boc—氨基酸—OSu形式，偶合试剂选自

d)HATU／DMF／DIPEA；

e)HOBT／WSCDI／DIPEA／DMF／二氯甲烷；和

f)三乙胺／二氯甲烷；

保护基团可以通过使用现有技术中已知的任何合适试剂除去，其尤 其优选的实例是三氟乙酸。

式(Ⅶ)化合物可通过使式(Ⅴ)化合物与式(Ⅸ)化合物在标准方法中 反应制备。

制备式(Ⅷ)化合物的举例方法如下：当R7是芳基或1，3—苯并 二氧戊环—5—基时，可使用如下方法。

其中R15是选自C1—4烷氧基、C1—6烷基、氰基、卤素和三氟甲基；或 形成1，3—苯并二氧戊环—5—基，p是1—4的整数。

当R7是C2—6烯基时，可使用如下方法：

由现有技术显然BF3·Et2O可用其它已知路易斯酸代替， 被例如烯丙基溴代替，HCl／甲醇可被例如HBr／乙酸代替。

制备其中Y是氧，m是0，n是1和R8是6元芳香环的式(Ⅴ)化合物 的举例方法如下，其中R16和R17分别选自氢、C1—6烷基、C1—4烷氧基、 C1— 4烷硫基、C1—6烷基C1—4烷氧基、C1—6烷基氨基C1—6烷基、羟基、—CO2H、 —(CH2)pOH，其中p是1或2、氰基、卤素和三氟甲基：

在第一反应步骤中，除甲醇钠外，可使用碱，除叔丁基酯外，可使 用酯，但这些通常需要最终的碱性而不是酸性水解以形成最终产物。对 于其中m是0和n是2的式(Ⅴ)化合物，在丙烯酸酯中将加入酚盐离子 (ⅩⅦ)。制备式(ⅩⅪ)化合物的其它途径包括使式(ⅩⅨ)化合物与三光气 反应，随后与式(ⅩⅫ)化合物反应。此外，三光气可与胺(ⅩⅫ)反应， 随后与式(ⅩⅨ)化合物反应。

式(ⅩⅪ)化合物还可根据如下反应制备：

当Y是硫时，制备本发明的化合物的举例方法如下。式(Ⅴ)化合物 可通过例如在苯环上选择性地取代的苯基异氰酸酯与2—(4—氨基苯硫基) 乙酸反应形成。并加入偶合剂和式(Ⅵ)和(Ⅶ)的化合物。

当Y是磺酰基时，制备本发明的化合物的举例方法如下。其中Y=S的式(Ⅱ)化合物通过用Oxone、间—氢过苯甲酸或其它合适的氧化剂处理 氧化。在该方法中，可首先分离中间体亚砜(Y=SO)，采用其它更强的 条件得到磺酰基衍生物。

在式(Ⅱ)化合物中当R11是酰基磺酰胺(—CHNHSO2Rx)时，制备这些化 合物的举例方法如下。其中R11是—CO2H的式(Ⅱ)化合物用式RxSO2NH2的磺酰基胺在4—二甲基氨基吡啶和碳化二亚胺存在下处理。

本发明的化合物可含有超过两个单元，它们可通过形成酰胺键连 接。当该单元存在时，本领域技术人员知道将这些单元连接起来的优选 顺序。

本发明通过如下生物试验方法、数据和非限制性实施例进一步说 明。

表1涉及实施例13—76，它给出了最终物质的结构和它们的分析数 据，它还用代码给出制备该化合物的方法。

实施例

实施例1 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨 基—3，4—(亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚 甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺(1．3g，2mmol)在甲醇(250ml)和 THF(100ml)混合物中的悬浮液用1NLiOH(12．3ml，12mmol)处理。反应 混合物在室温下搅拌2小时，加入水(75ml)和DMF(10ml)，再搅拌2小 时。将反应混合物浓缩至1／4体积，用1M柠檬酸酸化溶液至pH2得到 白色固体。过滤出固体，用水和醚洗涤，得到酸(615mg，48％)，白色 固体。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．80(s，1H)，8．46(d，1H)，8．00(d，1H)，7．80(d，2H)， 7．36(d，2H)，7．08—7．18(m，2H)，6．72—6．96(m，6H)，5．98(s，2H)，5．10(q，1H)，4．48(s，2H)， 4．40(q，1H)，2．56—2．74(m，2H)，2．18—2．28(m，5H)，1．70—1．90(m，2H)；ESPMS(M+H)623；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，20分钟， Rt17．35分钟。

a)N—(叔丁氧基羰基)蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙 酸甲酯的制备

根据如下(实施例3a)中描述的用于制备N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸— 3—氨基—5—己烯酸甲酯的方法制备该化合物，只是用3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(根据WO96／22966(Biogen)52—55页中描述的 方法制备，列为本文参考文献)代替3—氨基—5—己烯酸甲酯盐酸盐，用 N—(叔丁氧基羰基)蛋氨酸代替N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸。

N—(叔丁氧基羰基)蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸 甲酯 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：1．3(9H，m)，1．6—1．8(2H，m)，2．0(3H，s)，2．3—2．4(2H，t)， 2．7—2．8(2H，m)，3．5(3H，s)，3．9—4．0(1H，m)，5．1(1H，m)，5．9(2H，s)，6．7—6．9(4H，m)，8．2(1H，d)： m／Z 455(M+H)。

b)蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯的制备

根据如下(实施例3b)中描述的用于制备亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸 甲酯的方法制备该化合物只是用N—(叔丁氧基羰基)蛋氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯代替N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨 基—5—己烯酸甲酯。

蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯                                                                                  1H NMR(DMSO—d6， 300 MHz，ppm)：1．8—1．9(2H，m)，2．0(3H，s)，2．2—2．4(2H，m)，2．7—2．9(2H，m)，3．5(3H，s)， 3．7(1H，t)，5．1(1H，b)，6．0(2H，s)，6．7—6．9(3H，m)，7．1—7．4(2H，b)，8．8(1H，d)：m／Z 355(M+H)。

c)叔丁基4—硝基苯氧基乙酸酯的制备

在室温下用在甲醇(50ml)中的甲醇钠(9．3g)溶液处理4—硝基苯酚 (23g)在甲醇(200ml)中的搅拌溶液，减压蒸发溶液至干，残余物悬浮在 甲苯(100ml)中。减压蒸发甲苯悬浮液至干，残余物通过用异己烷滗析 洗涤。将得到的固体溶解在二甲基甲酰胺(250ml)中，得到的搅拌悬浮 液在室温下用未稀释的叔丁基溴乙酸酯(35g)处理10分钟。混合物在60 ℃加热2小时，用冰和水(400ml)稀释。混合物用乙酸乙酯(3×150ml)提 取，合并的提取物在0℃用2N氢氧化钾(2×100ml)、水(100ml)和饱和 盐水洗涤。干燥提取物(硫酸镁)和蒸发。残余物用异己烷研制，过滤出 结晶，用异己烷洗涤。

叔丁基4—硝基苯氧基乙酸酯36．3g(86％)。熔点83—84℃。                                                  1H NMR(DMSO—d6，300 MHz， ppm)：1．45(9H，s)，4．88(2H，s)，7．10 (2H，d)，8．17(2H，d)：m／Z 254(M+H)。

d)叔丁基4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸酯的制备

在室温下将迅速搅拌的含有5％披钯碳(1g)的叔丁基4—硝基苯氧基 乙酸酯(10g)在乙酸乙酯(200ml)中的溶液暴露于氢气气氛中。在氢气摄 入停止后，过滤溶液，滤饼用乙酸乙酯洗涤。合成的滤液冷却至5℃， 在搅拌下用未稀释的2—甲基苯基异氰酸酯(7．9g)处理。将溶液在60℃ 加热2小时，随后将溶液急冷至0℃，过滤的沉淀物用冷乙酸乙酯洗涤 得到叔丁基4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸酯8．1g(57％)，熔点 177—78℃。

1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：1．43(9H，s)，2．21(3H，s)，4．58(2H，s)，6．83 (2H，d)，6．91(2H，t)，7．15(2H，q)，7．37(2H，d)，7．8(1H，s)，8．8(1H，s)：m／Z 357(M+H)。

e)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸的制备

在0℃用95％(v／v)三氟乙酸(50ml)处理叔丁基4—(N’—(2—甲基苯 基)脲)苯氧基乙酸酯(5g)在二氯甲烷(50ml)中的搅拌溶液。搅拌持续2 小时，在此期间溶液达到室温。通过减压蒸馏除去挥发性溶剂，残余物 用水(200ml)稀释。通过过滤收集沉淀，用水洗涤。粗物质由异丙醇中 重结晶得到4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸3．1g(73％)。熔点216— 218℃。

                                      1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：2．21(3H，s)，4．54(2H，s)，6．83(2H，d)，6．90(2H，t)， 7．15(2H，q)，7．8(1H，s)，8．80(1H，s)：m／Z 301(M+H)。

f)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(710mg，2mmol)在DMF(6ml)中 的溶液用蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(600mg， 2mmol)、(0—(7—氮杂苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓六氟磷酸 盐)(760mg，2mmol)和二异丙基乙胺(0．7ml，4mmol)处理。混合物在室 温下搅拌过夜，混合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离出乙酸乙酯层， 用1M柠檬酸、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，真空浓缩得到白色固体。固体 用水和乙醚洗涤得到偶合产物(1．3g，100％)白色固体。

NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．88(s，1H)，8．48(d，1H)，8．02(d，1H)，7．84(s，1H)，7．80 (d，2H)，7．38(d，2H)，7．06—7．18(m，2H)，6．84—6．94(m，4H)，6．80(d，1H)，6．74(d，1H)，5．98 (s，2H)，5．10(q，1H)，4．48(s，2H)，4．38(q，1H)，3．52(s，3H)，2．70—2．78(m，2H)，2．20—2．30(m， 5H)，1．92(s，3H)，1．70—1．88(m，2H)；ESPMS(M+H)637；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt19．04分钟。

实施例2 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— (3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧 基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代 替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—(亚 甲二氧基)苯基)丙酸甲酯)酰胺。

1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．2(3H，m)，2．1(3H，s)，2．5(2H，m)，4．3 (1H，m)，4．4(2H，S)，5．0(1H，m)，5．9(2H，s)，6．6(6H，m)，7．0—7．1(2H，dd)，7．3—7．4(2H，d)， 7．9(1H，d)，8．0(1H，d)，8．2(1h，s)，8．9(1H，d)，9．1(1H，s)：m／Z 603(M—H)。

HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt17．5分钟。

a)N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙 酸甲酯的制备

根据如下(实施例3a)中描述的用于制备N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸— 3—氨基—5—己烯酸甲酯的方法制备，只是用3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧 基苯基)丙酸甲酯(参见实施例1)代替3—氨基—5—己烯酸甲酯盐酸盐。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．3—1．5(3H，m)，2．7(2H，m)，3．5(3H，s)， 4．8—4．9(1H，m)，5．1—5．2(1H，m)，5．9(2H，s)，6．7—6．9(4H，m)，8．2(1h，d)，：m／Z 437(M+H)。

b)亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯的制备

根据如下(实施例3b)中描述的用于制备亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸 甲酯的方法制备，只是用N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯代替N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—5—己 烯酸甲酯。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．8(6H，m)，1．3—1．5(2H，m)，1．5—1．6(1H，m)， 2．7(2H，m)，3．3—3．4(1H，m)，3．5(3H，s)，4．9—5．3(2H，b)，5．1—5．2(1H，m)，6．0(2H，s)，6．7— 6．9(3H，m)，8．4—8．5(1H，d)，：m／Z 337(M+H)。

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲 二氧基苯基)丙酸甲酯代替蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙 酸甲酯。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．3—1．4(3H，m)，2．2(3H，s)，2．7(2H，m)， 3．5(3H，s)，4．3(1H，m)，4．4(2H，S)，5．0(1H，m)，5．9(2H，s)，6．7—6．9(6H，m)，7．0—7．1(2H，q)，7．3— 7．4(2H，d)，7．7—7．8(2H，m)，8．0(1H，d)，8．4—8．5(1h，d)，8．9(1H，s)：m／Z 619(M+H)。

HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt19．0分钟。

实施例3 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— 5—己烯酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧 基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯)酰胺代替4—(N’—(2—甲基苯基) 脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—(亚甲二氧基)苯基)丙酸甲 酯)酰胺。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．3—1．5(3H，m)，2．0—2．2(2h，m)，2．2(3H，s)， 2．3(2H，d)，4．0(1H，m)，4．3(1H，m)，4．4(2H，S)，4．9—5．0(2H，dd)，5．6—5．7(1H，m)，6．8—6．9(3H，m)， 7．1—7．2(2H，m)，7．3—7．4(2H，d)，7．8(2H，d)，7．9—8．0(2H，m)，8．8(1H，s)，12．2(1H，b)：m／Z 523(M— H)。

HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt16．8分钟。

a)N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯的制备

将HOBT(255mg)加入N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸(297mg)在DMF(5ml) 中的溶液中，随后加入1—(3—二甲基氨基丙基)—3—乙基碳化二亚胺盐酸 盐(273mg)，溶液搅拌15分钟。将3—氨基—5—己烯酸甲酯(185mg)溶解 在DMF(5ml)和三乙胺(140μl)中，将得到的溶液加入N—(叔丁氧基羰基) 亮氨酸活化酯中，随后加入二异丙基乙胺(100μl)。混合物在室温下搅 拌过夜，将混合物加入乙酸乙酯(30ml)中，用水(2×25ml)、5％柠檬酸 (5ml)、水(5ml)、饱和碳酸氢钠溶液(5ml)、水(5ml)、饱和盐水(5ml) 洗涤，干燥(硫酸镁)和蒸发，得到N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—5— 己烯酸甲酯(335mg)；                                                                                                        NMR (CDCl3)：0．9(6H，d)，1．4(10H，m)，1．6．1．8(2H，m)，2．2—2．3(2H，m)，2．5(2H，d)，3．6(3H，s)， 4．0—4．1(1H，m)，4．2—4．3(1H，m)，4．8—4．9(1H，b)，5．0—5．1(2H，d)，5．6—5．8(1H，m)，6．5—6．6(1H，m)： m／Z 357(M+H)

b)亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯的制备

N—(叔丁氧基羰基)亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯(10g)用在水 (100ml)中的90％TFA处理。混合物搅拌30分钟，蒸发除去TFA和水。 残余物用制备性HPLC在C18硅胶柱上纯化，用乙腈／水／0．1％TFA洗脱， 在蒸发合适馏分后得到胶状固体。将其溶解在乙酸乙酯(50ml)中，用饱 和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤两次，用饱和盐水(10ml)洗涤一次，干燥(硫 酸镁)和蒸发得到1．6g亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯的单个非对映体异 构体，为浅兰色油状物。HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％TFA10 ％—70％，超过20分钟，Rt10．7分钟；                                                                     1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)： 0．9(6H，m)，1．4—1．5(2H，m)，1．5—1．7(1H，m)，2．1—2．3(2H，m)，2．3—2．5(2H，m)，3．5(3H，s)， 3．6—3．7(1H，m)，4．1—4．2(1H，m)，4．4—4．6(2H，b)，5．0—5．1(2H，dd)，5．6—5．8(1H，m)，8．4 (1H，d)：m／Z 257(M+H)。

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(亮氨酸—3—氨基—5—己烯 酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸甲酯 代替蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(亮氨酸—3—氨基—5—己烯酸 甲酯)酰胺。m／Z 539(M+H)。HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％ TFA10％—70％，20分钟，Rt17．7分钟(92％纯度)，使用时无需严格干 燥或进一步表征。

实施例4 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三氟甲基—苯氧基乙酰基(亮 氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三 氟甲基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲 酯)酰胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．35(d，1H)，8．50(d，2H)，8．30(d，1H)，7．75(d，1H)， 7．60(d，1H)，7．05—7．30(m，4H)，6．90—7．00(m，1H)，6．85(s，1H)，6．70—6．80(m，2H)，5．95(s， 2H)，4．88—5．00(m，1H)，4．65(s，2H)，4．24—4．40(m，1H)，2．35—2．45(m，2H)，2．25(s，3H)， 1．40—1．60(m，3H)，0．70—0．90(m，6H)；ESPMS(M+H)673；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，超过20 分钟，Rt15．94分钟。

a)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三氟甲基苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三氟甲基苯氧基乙酸叔 丁基酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．28(d，2H)，7．75(d，1H)，7．60(d，1H)，7．04—7．22(m， 4H)，6．92(t，1H)，4．72(s，2H)，2．20(s，3H)，1．40(s，9H)；ESPMS(M+H)425。

b)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三氟甲基苯氧基乙酸的制备

以类似4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方法 制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．30(d，2H)，7．75(d，1H)，7．60(d，1H)，7．04—7．22(m， 4H)，6．90(t，1H)，4．75(s，2H)，2．22(s，3H))；ESPMS(M—H)367。

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三氟甲基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨 基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—三 氟甲基苯氧基乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸 —3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋 氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．52(s，1H)，8．45(s，1H)，8．20(d，1H)，7．75(d，1H)， 7．58(d，1H)，7．05—7．22(m，5H)，6．86—6．96(m，2H)，6．80(d，lH)，6．75(d，2H），5．98(s，2H)， 5．10(q，1H)，4．62(s，2H)，4．30—4．40(m，1H)，3．52(s，3H)，2．68—2．78(m，2H)，2．20(s，3H)， 1．30—1．50(m，3H)，0．72—0．84(m，6H)；ESPMS(M+H)687；

HPLC—Dynamax 60A柱C18；乙腈／水／0．1％TFA1O％—70％，超过20 分钟，Rt20．05分钟。

实施例5 4—(N’—(2—氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— 3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—氯苯基)脲)—苯氧基 乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代替 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲 二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．30(s，1H)，8．60(d，1H)，8．25(s，1H)，8．15(d，1H)， 7．95(d，1H)，7．42(d，1H)，7．35(d，2H)，7．25(t，1H)，7．00(t，1H)，6．75—6．92(m，4H)，6．70(d， 1H)，5．95(s，2H)，5．05(q，1H)，4．50(s，2H)，4．30—4．40(m，1H)，2．50—2．65(m，2H)，1．30—1．50 (m，3H)，0．70—0．85(m，6H)；ESPMS(M+H)625；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，超过20 分钟，Rt15．07分钟。

b)4—(N’—(2—氯苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1d)的方法用4—硝基—2—氯苯氧基乙酸叔丁基酯制备，4—硝基—2—氯苯氧 基乙酸叔丁基酯以类似4—硝基苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例1c)的 方法制备。

4—硝基—2—氯苯氧基乙酸叔丁基酯                     1H NMR(CDCl3，300 MHz，ppm)8．32(d，1H)，8．15 (d，1H)，6．85(d，1H)，4．72(s，2H)，1．45(s，9H)；ESPMS(M+H)288。

4—(N’—(2—氯苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯                                                                       1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm) 9．24(s，1H)，8．30—8．40(m，2H)，7．60(d，1H)，7．55(d，2H)，7．45(t，1H)，7．20(t，1H)，7．05(d， 2H)，4．75(s，2H)，1．60(s，9H)；ESPMS(M+H)377。

c)4—(N’—(2—氯苯基)脲)—苯氧基乙酸的制备

以类似4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方法 制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．20(s，1H)，8．20(s，1H)，8．15(d，1H)，7．40(d，1H)， 7．35(d，2H)，7．25(t，1H)，7．00(t，1H)，6．82(d，2H)，4．60(s，2H)；ESPMS(M—H)319

d)4—(N’—(2—氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—氯苯基)脲)—苯氧基 乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸—3—氨基 —3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．20(s，1H)，8．45(d，1H)，8．20(s，1H)，8．15(d，1H)， 7．95(d，1H)，7．42(d，1H)，7．35(d，2H)，7．25(t，1H)，7．00(t，1H)，6．85—6．95(m，3H)，6．80(d， 1H)，6．75(d，1H)，5．98(s，2H)，5．10(q，1H)，4．45(s，2H)，4．30—4．40(m，1H)，3．50(s，3H)， 2．70—2．76(m，2H)，1．30—1．50(m，3H)，0．70—0．85(m，6H)；ESPMS(M+H)639；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA20％—80％，超过20 分钟，Rt16．71分钟。

实施例6 4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— 3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基 乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代替 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲 二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．38(s，1H)，8．62(d，1H)，8．10(s，1H)，8．05(d，1H)， 7．95(d，1H)，7．60(d，1H)，7．25—7．40(m，3H)，6．70—7．00(m，6H)，5．95(s，2H)，5．05(q，1H)， 4．45(s，2H)，4．30—4．40(m，1H)，2．50—2．65(m，2H)，1．30—1．50(m，3H)，0．70—0．85(m，6H)； ESPMS(M+H)671；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，超过20 分钟，Rt14．85分钟。

a)4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．15(s，1H)，7．88—7．95(m，2H)，7．45(d，1H)，7．15— 7．25(m，3H)，6．78—6．88(m，1H)，6．68．6．75(m，2H)，4．45(s，2H)，1．30(s，9H)；ESPMS (M+H)423

b)4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基乙酸的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方 法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．25(s，1H)，8．00—8．10(m，2H)，7．58(d，1H)，7．25— 7．38(m，3H)，6．90—6．98(m，1H)，6．80—6．88(m，2H)，4．60(s，2H)；ESPMS(M+H)365

c)4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—溴苯基)脲)—苯氧基 乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸—3—氨基 —3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．28(s，1H)，8．45(d，1H)，8．00—8．10(m，2H)，7．95(d， 1H)，7．58(d，1H)，7．25—7．40(m，3H)，6．85—6．95(m，4H)，6．8(d，1H)，6．72(d，1H)，5．98(s， 2H)，5．10(q，1H)，4．44(s，2H)，4．35(q，1H)，3．50(s，3H)，2．70—2．78(m，2H)，1．30—1．50(m， 3H)，0．75—0．85(m，6H)；ESPMS(M+H)683；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA20％—80％，超过20 分钟，Rt16．87分钟。

实施例7 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酰基(亮氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯 苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰 胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．80(s，1H)，8．98(d，1H)，8．60(s，1H)，7．98(d，1H)， 7．75(s，1H)，7．65(d，1H)，7．20(d，1H)，7．04—7．15(m，2H)，6．85—7．00(m，2H)，6．82(s，1H)， 6．70—6．80(m，2H)，5．90(s，2H)，5．00(q，1H)，4．58(s，2H)，4．35(q，1H)，2．20(s，3H)，1．38— 1．55(m，3H)，0．70—0．90(m，6H)；ESPMS(M+H)639；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，超过20 分钟，Rt14．97分钟。

a)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．95(s，1H)，7．85(s，1H)，7．76(d，1H)，7．65(d，1H)， 7．05—7．20(m，3H)，6．88—6．95(m，2H)，4．65(s，2H)，2．20(s，3H)，1．40(s，9H)；ESPMS (M+H)391。

b)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酸的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方 法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．95(s，1H)，7．85(s，1H)，7．78(d，1H)，7．68(d，1H)， 7．08—7．20(m，3H)，6．88—7．00(m，2H)，4．70(s，2H)，2．20(s，3H)；ESPMS(M+H)335。

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯 苯氧基乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3—氨 基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．05(s，1H)，8．55(d，1H)，7．98(s，1H)，7．85(d，1H)， 7．75(d，1H)，7．70(d，1H)，7．05—7．20(m，3H)，6．90—7．00(m，2H)，6．85(s，1H)，6．80(d，1H)， 6．75(d，1H)，5．95(s，2H)，5．10(q，1H)，4．60(s，2H)，4．35(q，1H)，3．50(s，3H)，2．68—2．76(m， 2H)，2．20(s，3H)，1．35—1．45(m，3H)，0．75—0．85(m，6H)；ESPMS(M+H)653；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt20．45分钟。

实施例8 4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)— 苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰 胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)10．15(s，1H)，9．50—9．60(m，1H)，9．10(s，1H)，8．25(d， 1H)，7．90(d，2H)，7．60(d，1H)，7．30—7．40(m，2H)，6．95—7．05(m，3H)，6．90(s，2H)，6．10(d， 2H)，5．09—5．19(m，1H)，4．65(s，2H)，4．42—4．52(m，1H)，2．55(d，2H)，2．40(s，3H)，1．60—1．70 (m，3H)，0．90—1．10(m，6H)；ESPMS(M+H)639；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA1O％—90％，超过20 分钟，Rt15．14分钟。

a)4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)—苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．82(s，1H)，7．82—7．90(m，2H)，7．32(d，2H)，7．22(s， 1H)，7．15(d，1H)，6．80(d，2H)，4．56(s，2H)2．20(s，3H)；ESPMS(M+H)391。

b)4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)—苯氧基乙酸的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方 法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．84(s，1H)，7．82—7．90(m，2H)，7．32(d，2H)，7．22(s， 1H)，7．15(d，1H)，6．82(d，2H)，4．60(s，2H)2．20(s，3H)；ESPMS(M—H)335

c)4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基—4—氯苯基)脲)— 苯氧基乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3—氨 基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯，得到4—(N’—(2—甲基—4—氯苯 基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸 甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．15(s，1H)，8．50(d，1H)，8．15(s，1H)，7．95(d，1H)， 7．82(d，1H)，7．38(d，2H)，7．20(s，1H)，7．15(d，1H)，6．70—6．90(m，5H)，5．98(s，2H)，5．10(q， 1H)，4．45(s，2H)，4．35(q，1H)，3．50(s，3H)，2．68—2．78(m，2H)，2．20(s，3H)，1．30—1．50(m， 3H)，0．70—0．90(m，6H)；ESPMS(M+H)653；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／O．1％TFA1O％—70％，超过20 分钟，Rt20．53分钟。

实施例9 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲基苯氧基乙酰基(亮氨酸— 3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲 基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯) 酰胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．90—9．00(m，1H)，8．20(s，1H)，8．08(s，1H)，7．85(d， 1H)，7．60(d，1H)，7．30(d，1H)，6．90—7．04(m，2H)，6．50—6．80(m，6H)，5．78(s，2H)，4．72—4．88 (m，1H)，4．35(s，2H)，4．20—4．42(m，1H)，2．00—2．15(m，6H)，1．25—1．42(m，3H)，0．60—0．80(m， 6H)；ESPMS(M+H)619；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，20分钟， Rt14．70分钟。

a)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲基苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．10(s，2H)，8．00(s，1H)，7．78(d，1H)，7．50(d，1H)， 7．04—7．18(m，2H)，6．90(t，1H)，6．75(s，1H)，6．65(d，1H)，4．58(s，2H)，2．20(d，6H)，1．40(s， 9H)；ESPMS(M+H)371。

b)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲基苯氧基乙酸的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(参见实施例1e)的方 法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．10(s，2H)，8．00(s，1H)，7．75—7．82(m，1H)，7，44—7．52 (m，1H)，7．04—7．20(m，2H)，6．84—6．95(m，1H)，6．75(s，1H)，6．62—6．70(m，1H)，4．60(s，2H)， 2．20(d，6H)；ESPMS(M—H)313

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— 3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2—甲 基苯氧基乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸 —3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．50(d，1H)，8．18(s，1H)，8．05(s，1H)，7．95(d，1H)， 7．78(d，1H)，7．50(d，1H)，7．05—7．18(m，2H)，6．82—6．95(m，2H)，6．70—6．92(m，4H)，5．98(s， 2H)，5．10(q，1H)，4．50(s，2H)，4．30—4．40(m，1H)，3．50(s，3H)，2．70—2．78(m，2H)，2．20(d， 6H)，1．30—1．50(m，3H)，0．72—0．88(m，6H)；ESPMS(M+H)633；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／O．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt18．99分钟。

实施例10 4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)— 苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰 胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．70(s，1H)，9．15(d，1H)，8．68(s，1H)，7．95—8．10(m， 2H)，7．50(d，1H)，7．25—7．35(m，3H)，6．75—6．85(m，3H)，6．65—6．72(m，2H)，5．88(s，2H)， 4．85—4．95(m，1H)，4．45(s，2H)，4．20—4．35(m，1H)，2．33—2．40(m，2H)，1．35—1．50(m，3H)， 0．70—0．85(m，6H)；ESPMS(M+H)661；

HPLC—Vydac 201HS54柱；乙腈／水／0．1％TFA10％—90％，超过20 分钟，Rt15．96分钟。

a)4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)—苯氧基乙酸叔丁基酯的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸叔丁基酯(参见实施例 1c和1d)的方法制备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．20(s，1H)，8．25(s，1H)，8．15(d，1H)，7．50—7．60(m， 1H)，7．22—7．38(m，3H)，6．80(d，2H)，4．56(s，2H)，1．38(s，9H)；ESPMS(M+H)411。

b)4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)—苯氧基乙酸的制备

以类似于4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸(实施例1e)的方法制 备。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．22(s，1H)，8．30(s，1H)，8．18(d，1H)，7．58(s，1H)， 7．24—7．40(m，3H)，6．80—6．90(m，2H)，4．58(s，2H)；ESPMS(M—H)353

c)4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2，4—二氯苯基)脲)—苯 氧基乙酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸，用亮氨酸—3—氨基— 3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(实施例2a和2b)代替蛋氨酸—3—氨 基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯，得到4—(N’—(2，4—二氯苯基) 脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯) 酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)9．30(s，1H)，8．50(d，1H)，8．30(s，1H)，8．18(d，1H)， 7．94(d，1H)，7．58(s，1H)，7．30(d，3H)，6．68—6．95(m，5H)，5．94(s，2H)，5．10(q，1H)，4．50(s， 2H)，4．30—4．40(m，1H)，3．52(s，3H)，2．62—2．82(m，2H)，1．30—1．50(m，3H)，0．70—0．90(m， 6H)；ESPMS(M+H)675；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt21．90分钟。

实施例11 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯 苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰 胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4— 亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．95(s，1H)，8．50(d，1H)，7．98(d，1H)，7．85(s，1H)， 7．75(d，1H)，7．68(s，1H)，7．05—7．20(m，3H)，6．98(d，1H)，6．90(t，1H)，6．82(s，1H)，6．80(d， 1H)，6．75(d，1H)，5．95(s，2H)，5．05(q，1H)，4．60(s，2H)，4．40(q，1H)，2．60—2．75(m，2H)， 2．15—2．30(m，5H)，1．95(s，3H)，1．70—1．90(m，2H)；ESPMS(M+H)657；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt17．43分钟。

a)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1f的方法制备，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氯 苯氧基乙酸(参见实施例7a和7b)代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基 乙酸。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)8．98(s，1H)，8．52(d，1H)，8．00(d，1H)，7．85(s，1H)， 7．75(d，1H)，7．68(d，1H)，7．05—7．20(m，3H)，6．98(d，1H)，6．92(t，1H)，6．85(s，1H)，6．80(d， 1H)，6．75(d，1H)，5．96(s，2H)，5．10(q，1H)，4．60(s，2H)，4．40(q，1H)，3．52(s，3H)，2．70— 2．78(m，2H)，2．25(t，2H)，2．20(s，3H)，1．94(s，3H)，1．70—1．90(m，2H)；ESPMS(M+H)671；

HPLC—Dynamax 60A柱C18乙腈／水／0．1％TFA10％—70％，超过20 分钟，Rt19．47分钟。

实施例12 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯硫基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— (3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯硫基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲 二氧基)苯基丙酸酯)酰胺(150mg)、MeOH(5ml)和2N氢氧化钠(2ml)的混 合物在50℃搅拌2小时，随后用乙酸酸化。将混合物真空浓缩至约3ml， 随后用水稀释，收集不溶解的固体，用水和乙酸乙酯洗涤得到4—(N’—(2— 甲基苯基)脲)苯硫基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙 酸)酰胺(110mg，74％)，熔点207—210℃                                                   1H NMR(d6—DMSO，300MHz，ppm)：9．05(s，1H)； 8．4(d，1H)；8．05(d，1H)；7．9(s，1H)；7．8(d，1H)；7．4(d，2H)；7．3(d，2H)；7．1(m，2H)；6．95 (m，1H)；6．7—6．9(m，3H)；5．95(s，2H)；5．05(m，1H)；4．25(m，1H)；3．6(dd，2H)；2．6(m，2H)； 2．2(s，3H)；1．2—1．4(m，3H)；0．75(m，6H)．MS：(ES—)m／e 619．5(MH)—

a)4—N’—(2—甲基苯基)脲)苯硫基乙酸的制备

2—(4—氨基苯硫基)乙酸(3．07g)在乙腈(120ml)中的悬浮液回流搅 拌，同时加入2—甲基苯基异氰酸酯(2．1ml)，将混合物搅拌回流1小时。 冷却生成的溶液，收集结晶的浅灰色固体得到4—N’—(2—甲基苯基)脲)苯 硫基乙酸(4．93g，93％)，熔点182—183℃。

b)(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯硫基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4— 亚甲二氧基)苯基丙酸酯)酰胺的制备

在室温下搅拌4—N’—(2—甲基苯基)脲)苯硫基乙酸(364mg)、 DMF(7ml)、2—(1，3—苯并二氧戊环—5—基)—2—(亮氨酸基氨基)丙酸甲酯 (336mg)、1—羟基苯并三唑(156mg)、1—(3—二甲基氨基丙基)—3—乙基碳 化二亚胺盐酸盐(220mg)和N—甲基吗啉(116mg)的混合物4天．混合物 用乙酸乙酯和水稀释，收集沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤得到(4—(N’—(2— 甲基苯基)脲)苯硫基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙 酸酯)酰胺(500mg，79％)，为灰白色固体。

实施例13—76如下文和表1中描述制备。

实施例14 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯基磺酰基乙酰基(亮氨酸—3— 氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1中的方法制备，只是用甲基—2—(1，3—苯并二氧戊环— 5—基)—2—(2—{[4—(2—甲基苯基脲基)苯基磺酰基]乙酰基亮氨酰基氨基} 丙酸酯代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。

a)甲基—2—(1，3—苯并二氧戊环—5—基)—2—(2—{[4—(2—甲基苯基脲基) 苯基磺酰基]乙酰基亮氨酰基氨基}丙酸酯的制备

在室温下搅拌甲基—2—(1，3—苯并二氧戊环—5—基)—2—(2—{[4—(2—甲 基苯基脲基)苯硫基]乙酰基亮氨酰基氨基}丙酸酯(实施例12b，0．35g)、 DMF(2ml)、甲醇(8ml)、Oxone_(1g)和水(4ml)的混合物24小时。混合 物用水稀释，用乙酸乙酯提取，干燥有机相和蒸发至干。残余物用乙醚 磨碎，收集不溶解的固体得到甲基—2—(1，3—苯并二氧戊环—5—基)—2— (2—{[4—(2—甲基苯基脲基)苯基磺酰基]乙酰基亮氨酰基氨基}丙酸酯 (O．329)。[m／e667(M+H)+]

实施例16 2—(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基)丁酰基(亮氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例2的方法，只是在2c和1f中用2—(4—(N’—(2—甲基苯基) 脲)苯氧基)丁酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酸。

a)2—(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基)丁酸乙酯的制备

将碳酸钾(5．5g，0．04mol)加入4—硝基苯酚(5．56g，0．04mol)在 DMF(20ml)中的搅拌溶液中，随后加入2—溴丁酸乙酯(7．8g，0．04mol)， 混合物在室温下搅拌48小时。将混合物倾入水(60ml)中用乙醚(2次， 70ml)提取。分离有机相，用盐水洗涤，干燥和蒸发至干得到油状物(9g)。 在乙醇(20ml)中的该油状物(2g，0．008mol)中加入10％Pd／C(0．2g)， 混合物在氢气中搅拌2小时，过滤并蒸发至干。在二氯甲烷(20ml)中的 残余物用2—甲基苯基异氰酸酯(1．05g，0．008mol)处理，使混合物静置 18小时。过滤溶液，蒸发至干，残余物由乙醇中重结晶得到产物(1．3g)。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)；1．0(t)，3H；1．2(t)，3H；2．2(s)，3H；4．1(q)，2H；4．65 (t)，1H；6．8(d)，2H；6．9(t)，1H；7．1(m)，2H；7．35(d)，2H；7．8(m)，2H，8．8(s)，1H ESPMS (M+H)357

b)2—(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基)丁酸的制备

将2M氢氧化钠水溶液(3ml)加入在二甲基亚砜(7ml)中的2—(4—(N’— (2—甲基苯基)脲)—苯氧基)丁酸乙酯(1．2g，0．0034mol)中，混合物在室 温下搅拌1小时。加入水(10ml)，用2N盐酸调节pH至约2，过滤产物， 用水洗涤和干燥得到产物(1．0g)。 1H NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)；1．0(t)，3H；2．2(s)，3H；4．5(t)，1H；6．8(d)，2H；6．9(t)， 1H；7．1(m)，2H；7．35(d)，2H；7．8(m)，2H，8．8(s)，1H 1H ESPMS(M—H)327。

实施例23 4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—(2—[甲基磺酰 基乙基]甘氨酰基氨基)天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)酯的制备

在室温和常压下将4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—S—(2—[甲 基磺酰基乙基]甘氨酰基氨基)天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基 二酯(65mg)、DMF(5ml)和10％Pd／C催化剂(20mg)的混合物在氢气下搅 拌4小时。过滤混合物，蒸发滤液至干，残余物用乙酸乙酯研制得到2— (2—苯基—苯并噁唑—6—基)—乙酰基氨基—(2—[甲基磺酰基乙基]甘氨酰 基)—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)酯(52mg，91％)，为灰白色固体。

a)BOC—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的制备

搅拌BOC—天冬氨酸—β—苄酯(3．23g)、二氯甲烷(20ml)、2，4—二甲 基戊醇(1．51g)和二环己基碳化二亚胺(2．06g)的混合物，用4—二甲基 氨基吡啶(20mg)。将混合物搅拌1小时，过滤，蒸发滤液至干。残余物 用硅胶快速色谱法纯化，使用增加极性的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合 物，合并合适的馏分，蒸发至干得到产物，为胶状物(3．55g)。 [m／e422(MH)+]

b)天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的制备

BOC—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯(3．4g)在二氯甲 烷(10ml)中的溶液用三氟乙酸(10ml)处理，混合物在室温下搅拌2小 时，随后蒸发至干。残余物用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)的混合物搅拌， 用碳酸氢钾碱化。分离出有机相，用盐水洗涤，干燥和蒸发至干得到天 冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯(2．7g)。[m／e322(MH)+]

c)BOC—蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的 制备

搅拌天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯(0．64g)、BOC— 蛋氨酸(0．75g)、羟基苯并三唑(0．41g)、N—甲基吗啉(1ml)和1—(3—二 甲基氨基丙基)—3—乙基碳化二亚胺盐酸盐(0．57g)的混合物18小时。用 二氯甲烷稀释混合物至30ml，依次用含水碳酸氢钠溶液(2次)和盐水洗 涤，随后干燥和蒸发至干得到BOC—蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5—二甲 基戊基)—β—苄基二酯，为胶状物(1．15g)，无需进—步纯化而使用。

d)蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的制备

在室温下搅拌BOC—蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β— 苄基二酯(1g)、二氯甲烷(5ml)、三乙基甲硅烷(0．5ml)和三氟乙酸(5ml) 的混合物1小时，蒸发至干。残余物在含水碳酸钾溶液和乙酸乙酯之间 分配，分离出有机相，干燥并蒸发至干。残余物用快速色谱法纯化，用 在乙酸乙酯中的1％三乙胺溶液洗脱得到蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5— 二甲基戊基)—β—苄基二酯，为胶状物(0．32g)[m／e 453(MH)+]

e)4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—蛋氨酰基—天冬氨酸—α— (2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的制备

将蛋氨酰基—天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯(0．3g)、 4—(2—甲基苯基脲基)苯基乙酸(0．28g)、羟基苯并三唑(0．13g)、N—甲基 吗啉(0．1ml)、二氯甲烷(5ml)和1—(3—二甲基氨基丙基)—3—乙基碳化二 亚胺盐酸盐(0．19g)的混合物搅拌18小时。混合物用乙酸乙酯稀释，依 次用1盐酸、1N氢氧化钠和盐水洗涤，随后干燥和蒸发至干。残余物用 乙酸乙酯研制得到4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—蛋氨酰基—天 冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯白色固体(0．4g)。[m／e 719(MH)+]

f)4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—(2—[甲基磺酰基乙基]甘 氨酰基)天冬氨酸—α—(2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯的制备

将4—(2—甲基苯基脲基)—苯基乙酰基氨基—蛋氨酰基—天冬氨酸—α— (2，5—二甲基戊基)—β—苄基二酯(0．12g)、DMF(1ml)、 Oxane_[Aldrich](O．25g)和水(0．5ml)的混合物在室温下搅拌72小 时。混合物用水稀释，收集不溶解的固体得到4—(2—甲基苯基脲基)—苯 基乙酰基氨基—(2—[甲基磺酰基乙基]甘氨酰基)天冬氨酸—α—(2，5—二甲 基戊基)—β—苄基二酯(0．11g)，为白色固体。[m／e719(MH)+]

实施例28 6—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯并二氢吡喃—2—羧基(亮氨酸— 3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例2的方法，只是在2c和1f中用6—(N’—(2—甲基苯基)脲) 苯并二氢吡喃—2—羧酸代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸。

a)2—(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯并二氢吡喃—2—羧酸乙酯的制备

在室温下将2—甲基苯基异氰酸酯(O．32g，0．0024mol)加入6—氨基 苯并二氢吡喃—4—酮—2—羧酸乙酯(0．32g，0．0022mol，如Barker，G．； Ellis，G．P．；J Chem Soc C，1970，2230中所述制备，列为本文参 考文献)在THF(5ml)中的溶液中．将混合物搅拌18小时，通过过滤回收 产物，用乙醚洗涤得到0．64g产物，将其在60℃在Pd／C催化剂(0．4g) 存在下在N—甲基吡咯烷酮(20ml)和乙酸(20ml)的混合物中氢化10小 时，过滤和蒸发至干，残余物用水研制。干燥固体残余物得到产物2— (4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯并二氢吡喃—2—羧酸乙酯(0．45g)。 NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)；1．2(t)，3H；2．1(m)，2H；2．2(s)，3H；2．7(m)，2H；4．1(q)， 2H；4．8(m)，1H；6．7(d)，1H：6．9(t)，1H；7．1(m)，4H；7．8(m)，2H；8．7(s)，1H．ESPMS(M+H) 355

b)6—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯并二氢吡喃—2—羧酸的制备

在二甲基亚砜(5ml)中的2—(4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯并二氢吡喃— 2—羧酸乙酯(0．43g，0．0012mol)用含水氢氧化钠(1．2ml)处理，混合物 静置2小时，加入水(10ml)，用2N盐酸调节pH至2。过滤出产物，用 水洗涤，空气干燥得到上述产物(0．35g)。 NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)；2．1(m)，2H；2．2(s)，3H；2．7(m)，2H；4．7(m)，1H；6．7(d)， 1H；6．9(t)，1H；7．1(m)，4H，7．8(m)，2H；8．7(s)，1H，ESPMS(M+H)327。

实施例29 4—(N’—(2—噻吩基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基— (3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是用4—(N’—(2—噻吩基)脲)苯氧基乙酰基 (亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸甲酯)酰胺代替4—(N’—(2— 甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙 酸甲酯)酰胺。

a)4—(N’—(2—噻吩基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲 二氧基)苯基丙酸甲酯)酰胺的制备 在室温和氩气中将Proton-Sponge_(Aldrich)(102mg)加入在 THF(3ml)中的噻吩—2—羧酸(61mg)的搅拌溶液中。20分钟后，加入二苯 基磷酰基叠氮化物(131mg)，将混合物回流加热5小时。将溶液冷却至 室温，在搅拌和室温下加入在THF(5ml)中的如实施例30b中制备的4— 氨基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸甲酯) 酰胺(243mg)溶液，混合物回流12小时。将冷却的混合物在乙酸乙酯 (50ml)和水(50ml)之间分配，乙酸乙酯相用1M柠檬酸、饱和含水碳酸 氢钠和盐水洗涤。蒸发得到棕色固体，它用乙醚磨碎通过过滤分离出产 物，收率43mg。m／Z(+ve)611．3(M+H)m／Z(—ve)611．3

实施例30 4—(N’(2—苯基脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是用4—(N’—苯基脲)—苯氧基乙酰基(亮氨 酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代替4—(N’—(2—甲 基苯基)脲)苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙 酸甲酯)酰胺。

a)4—硝基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基) 丙酸甲酯)酰胺的制备

将HOBT(1．5g)加入在DMF(10ml)中的4—硝基苯氧基乙酸(1．97g)的 溶液中，随后加入1—(3—二甲基氨基丙基)—3—乙基碳化二亚胺盐酸盐 (2．14g)，溶液搅拌15分钟．将亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯 基)丙酸甲酯(实施例2b)(2．69g)溶解在DMF(10ml)中，将得到的溶液加 入活化酯的溶液中。混合物在室温下搅拌过夜，将混合物加入乙酸乙酯 (100ml)中，用水(2次，10ml)、5％柠檬酸(10ml)、水(10ml)、饱和碳 酸氢钠溶液(10ml)、水(10ml)和饱和盐水(10ml)洗涤，干燥(硫酸镁)， 蒸发得到4—硝基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯 基)丙酸甲酯)酰胺3．02g。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．3—1．4(3H，m)，2．7(2H，m)，3．5(3H，s)， 4．3—4．4(1H，s)，4．7(2H，m)，5．1(1H，m)，5．9(2H，s)，6．7—6．9(3H，m)，7．1(2H，d)，8．2(3H，m)， 8．4—8．5(1H，d)：m／Z 516(M+H)。

b)4—氨基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基) 丙酸甲酯)酰胺的制备

在室温下将在含有5％Pd／C(0．3g)的乙酸乙酯(60ml)中的4—硝基苯 氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺 (3．02g)迅速搅拌的溶液暴露于氢气气氛中。当氢气的摄入停止后，过 滤溶液，滤饼用乙酸乙酯洗涤。蒸发合并的滤液至干得到2．7g4—氨基苯 氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。 1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：0．9(6H，m)，1．3—1．4(3H，m)，2．7(2H，m)，3．5(3H，s)， 4．3—4．4(3H，m)，4．7(2H，m)，5．1(1H，m)，5．9(2H，s)，6．5(2H，d)，6．7—6．9(5H，m)，7．8(1H，d)， 8．4—8．5(1H，d)：m/Z 486(M+H)。

HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1％TFA20％—80％，超过20 分钟，Rt9．7分钟，用于下一步骤，无需进一步纯化。

c)4—(N’—(2—苯基脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲 二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

将4—氨基苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基) 丙酸甲酯)酰胺(727mg)和二异丙基乙胺(0．282ml)溶解在二氯甲烷(2ml) 中，在氩气下在30分钟内加入光气(165mg)在二氯甲烷(2ml)中的溶液 中。得到的溶液搅拌5分钟，加入注射器中，将总体积的三分之一在氩 气下加入苯胺(0．042ml)和二异丙基乙胺(0．093ml)在二氯甲烷(2ml)中 的常识。混合物在室温下搅拌过夜，蒸发混合物至干，随后溶解在乙酸 乙酯(30ml)中，用水(10ml)、5％柠檬酸(10ml)、水(10ml)、饱和碳酸 氢钠溶液(10ml)、水(10ml)和饱和盐水(10ml)洗涤，干燥(硫酸镁)。蒸 发溶剂，用乙醚研制，得到212mg4—(N’—苯基脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸 —3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺白色固体，将其水解， 无需进一步纯化。m／Z605(M+H)。HPLC—Dynamax 60AC18柱；乙腈／水／0．1 ％TFA20％—80％，超过20分钟，Rt15．8分钟(95％纯度)。

实施例54 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(N—(2—甲基丙 基)甘氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰 基—(甲基N—(2—甲基丙基)甘氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙 酸甲酯)酰胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基 —3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺。

a)N—(2—甲基丙基)甘氨酸甲酯的制备

在氩气气氛下将溴乙酸叔丁基酯(8．4ml，10．1g)在—40℃和搅拌在 5分钟内加入异丁基胺(50ml，36．8g)在乙醚(100ml)中的溶液中，溶液 在该温度下搅拌1小时，随后在室温下搅拌18小时。过滤混合物，在 室温下蒸馏滤液以除去乙醚和过量的异丁基胺(沸点64—66℃)，随后减 压蒸馏得到产物，收率82％，沸点68℃／3mm。 NMR(CDCl3 300 MHz，ppm)3．28(2H，s)，2．4(2H，d)，1．72(1H，m)，1．48 (9H，s)，0．92(6H，d)。

m／Z188．3(M+H)

b)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—{N—(2—甲基丙基)甘氨酸 叔丁基酯}酰胺的制备

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—苯氧基乙酸(1．5g，5mmol)在DMF(6ml)中 的溶液用N—(2—甲基丙基)甘氨酸叔丁基酯(936mg，5mmol)、(0—(7—氮 杂苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基尿鎓六氟磷酸盐)(2．28g，6mmol) 和二异丙基乙胺(1．9ml，11mmol)处理。混合物在室温下搅拌过夜，混 合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离出乙酸乙酯层，用1M柠檬酸、饱 和碳酸氢钠溶液洗涤，真空浓缩得到白色固体。固体在KP—SilO(Biotage UK Ltd．)上用色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱得到偶合产物(1．8g，76％)， 白色固体。 NMR(100degC，DMSO d6，300 MHz，ppm)8．52(1H，s)，7．73(1H，d)，7．66(1H，s)，7．33(2H，d) 7．1(2H，q) 6．92(1H，t)6．84(2H，d)，4．7(2H，宽s)，4．0(2H，宽s)，3．18(2H，d)，2．24(3H，s)， 1．88(1H，m)，1．48(9H，s)，0．85—0．96(6H，s宽)。 ESPMS(M+NH4)487．5

c)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—N—(2—甲基丙基)甘氨酸的 制备

根据实施例1e制备，但使用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基 —{N—(2—甲基丙基)甘氨酸叔丁基酯}酰胺代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯 氧基乙酸叔丁基酯。

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—N—(2—甲基丙基)甘氨酸

m／Z414．3(M+H)

d)4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(N—(2—甲基丙基)甘氨酸— 3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—N—(2—甲基丙基)甘氨酸 (1．5g，3．6mmol)在二氯甲烷和DMF9∶1v／v(70ml)的混合物中的溶液用3— 氨基—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯(根据WO96／22966中52—55页所 述的方法制备，列为本文参考文献)(1．6g，7．2mmol)、1—(3—二甲基氨 基丙基)—3—乙基碳化二亚胺盐酸盐(2．22g，7．2mmol)／HOBT(972mg， 7．2mmol)和二异丙基乙胺(1．3ml，7．2mmol)处理。混合物在室温下搅拌 过夜，混合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离出乙酸乙酯层，用1M柠 檬酸、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，真空浓缩得到半透明胶状物。胶状物在 KP—SilO(Biotage UK Ltd．)上用色谱法纯化，用甲苯／乙酸乙酯洗脱得 到偶合产物(1．3g，58％)，白色固体。

4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(N—(2—甲基丙基)甘氨酸—3— 氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺 NMR(DMSO d6，300 MHz，ppm)0．73—0．93(6H，m)，1．75—1．83(1H，m)，2．21(3H，s)， 2．75(2H，t)，3．0—3．2(2H，m)，3．52(3H，s)，3．82(2H，d)，4．70(2H，d)，5．18(1H，m)，5．95(2H，s)，6．7— 6．9(6H，m)，7．0—7．1(2H，q)，7．3(2H，d)，7．8(2H，d)，8．24—8．67(1h，dd)，8．79(1H，d)．m／Z 619．4 (M+H)。

实施例66 4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基—(2—(2—甲氧基 乙基)甘氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

根据实施例54的方法，用实施例546中的2—(2—甲氧基乙基)甘氨 酸甲酯代替N—(2—甲基丙基)甘氨酸叔丁基酯。2—(2—甲氧基乙基)甘氨 酸甲酯通过EP618221中所述的方法制备，如实施例1中所述用LiOH水 解实施例54c中的取代的甘氨酸酯。

实施例67—4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—甲氧基苯氧基乙酰基(亮氨 酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是用4—(N’—(2—甲基苯基)脲)—3—氨基苯氧 基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代 替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲 二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺，在1c中用4—硝基—3—甲氧基苯酚代替4— 硝基苯酚。

a)4—硝基—3—甲氧基苯酚

将氢氧化钠溶液在室温下加入4—氟—2—甲氧基硝基苯(11．1g)在 DMSO(60ml)中的搅拌溶液中，混合物在85℃下搅拌2．5小时。冷却的 溶液用水(100ml)稀释，用乙醚(3×100ml)提取，合并的乙醚溶液用2N 氢氧化钠(3×75ml)提取，合并的水相通过加入2N盐酸调节至pH2。收 集沉淀的固体，用水洗涤。用五氧化二磷干燥产物，得到7．4g。 m／Z170．1(M+H)它无需进一步纯化用于下一步骤(参见实施例1c)。

实施例69 4—(N’—(吡啶—3—基)脲)—苯氧基乙酰基(亮氨酸—3—氨基 —3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是用4—(N’—(吡啶—3—基)脲)—苯氧基乙酰 基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺代替4— (N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧基乙酰基(蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧 基苯基)丙酸甲酯)酰胺。

a)4—(N’—(吡啶—3—基)脲)—苯氧基乙酰基(甲基亮氨酸—3—氨基—3— (3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸)酰胺的制备

将3—吡啶基异氰酸酯(75mg，0．62mmol)在室温下加入4—氨基苯氧 基乙酰基(亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯)酰胺(参 见实施例30b)(280mg，0．58mmol)在雨水乙酸乙酯中的搅拌溶液中。将 混合物回流加热2小时，通过过滤收集产物，得到200mg。(56％) 1H NMR(DMSOd6，300 MHz，ppm)：0．78(6H，t)；1．39(3H，m)；2．73(2H，q)；3．52( 3H，s)；4．37(1H，m)；4．47(2H，s)；5．11(1H，q)；5．96(2H，s)；6．72(1H，d)；6．81(1H， d)；6．87(3H，d)；7．26—7．38(3H，m)；7．92(2H，m)；8．15(1H，d)；8．45(1H，d)；8．60 (2H，d)；8．76(1H，s)；ESPMS 606．4(M+H)+

实施例71 7—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2，3—二氢苯并呋喃—4—氧基 乙酰基(亮氨酸—3—氨基—(3，4—亚甲二氧基)苯基丙酸)酰胺的制备

根据实施例1的方法，只是在1e中用7—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2， 3—二氢苯并呋喃—4—氧基乙酸叔丁基酯代替4—(N’—(2—甲基苯基)脲)苯氧 基乙酸叔丁基酯，在1f中用亮氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基) 丙酸甲酯代替蛋氨酸—3—氨基—3—(3，4—亚甲二氧基苯基)丙酸甲酯。

a)4—羟基—二氢苯并呋喃的制备

在室温下将在含有30％Pd／C(0．2g)的冰醋酸(30ml)中的4—羟基苯 并呋喃(2．0g)(根据G．Keen & P．Maddocks Syn．Comm．，16(13)， 1635—1640(1986))的迅速搅拌的溶液暴露于氢气气氛中。当氢气摄入停 止时，过滤溶液，滤饼用冰醋酸洗涤。合并的滤液蒸发至干得到4—羟基 —二氢苯并呋喃(2．05g)。                                1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：3．0(2H，t)， 4．5(2H，t)，6．2(1H．d)，6．3(1H，d)，6．8(1H，t)，9．5(1H，b)m／Z135(M—H)。

b)4—羟基，7—(肼1，2—二羧酸二(2，2，2—三氯乙酯))—2，3—二氢 苯并呋喃的制备

将三氟磺酸(0．114ml)在—70℃和氩气中加入4—羟基—二氢苯并呋喃 (1．77g)在二氯甲烷(80ml)中的溶液中，随后加入二(2，2，2—三氯乙基) 偶氮二羧酸酯(BTEAD)(6g)。混合物在—60℃下搅拌30分钟，随后用25 ％乙酸铵溶液(30ml)骤冷，使其温热至室温，用乙酸乙酯(2次，100ml) 提取，合并的有机提取物用饱和盐水(20ml)洗涤，干燥(硫酸镁)、蒸发 和用Biotage 40M体系纯化，用5％乙酸乙酯／甲苯纯化得到4—羟基， 7—(肼1，2—二羧酸二(2，2，2—三氯乙酯))—2，3—二氢苯并呋喃(4．73g)。

                    1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm)：3．0(2H，t)，4．5(2H，t)， 4．8(4H，s)，6．2(1H，d)，7．0(1H，d)，9．6(1H，s)，10．75(1H，s)m／Z 515(M—H)。

c)叔丁基—7—(肼1，2—二羧酸二(2，2，2—三氯乙酯))—2，3—二氢 苯并呋喃基—4—氧基乙酸酯的制备

将溴乙酸叔丁基酯(1．62ml)加入4—羟基，7—(肼1，2—二羧酸二(2， 2，2—三氯乙酯))—2，3—二氢苯并呋喃(1．63g)在含有粉末碳酸钾(1．63g) 的丁—2—酮(50ml)溶液中，混合物在80℃下搅拌过滤。蒸发混合物至干， 随后溶解在乙酸乙酯(50ml)中，用水(20ml)洗涤，水相再次用乙酸乙酯 (20ml)提取，合并的有机提取物用饱和碳酸氢钠溶液(20ml)和饱和盐水 (20ml)洗涤，干燥(硫酸镁)。蒸发得到叔丁基—7—(肼1，2—二羧酸二(2， 2，2—三氯乙酯))—2，3—二氢苯并呋喃基—4—氧基乙酸酯 (5．4g)m／Z266(M+H)，无需进一步纯化，用于下一步骤。

d)叔丁基—7—氨基—2，3—二氢苯并呋喃基—4—氧基乙酸酯的制备

在氩气气氛下将锌粉(2g)加入叔丁基—7—(肼1，2—二羧酸二(2，2， 2—三氯乙酯)—2，3—二氢苯并呋喃基—4—氧基乙酸酯(2g)在冰醋酸(20ml) 中的搅拌溶液中。1小时后，加入氢氧化钠(70ml)，混合物用乙酸乙酯(3 次，100ml)提取，干燥(硫酸镁)。蒸发和在40S Biotage体系中色谱纯 化，用10％乙酸乙酯／甲苯洗脱得到叔丁基—7—氨基—2，3—二氢苯并呋喃 基—4—氧基乙酸酯，浅黄色固体(341mg)。 1H NMR(CDCl3，300 MHz，ppm)：1．5(9H，s)，3．2(2H，t)，4．4(2H，s)，4．6(2H，t)，6．1(1H，d)， 6．5(1H，d)：m／Z 266(M+H)。

e)7—(N’—(2—甲基苯基)脲)—2，3—二氢苯并呋喃—4—氧基乙酸叔丁基 酯的制备

在氩气气氛和室温下将未稀释的2—甲基苯基异氰酸酯(171mg， 160μl)在2分钟内加入叔丁基—7—氨基—2，3—二氢苯并呋喃基—4—氧基乙 酸酯(341mg)在二氯甲烷(5ml)中的搅拌溶液中。混合物搅拌18小时， 随后蒸发。残余物用乙醚磨碎，过滤固体。使用产物无需进一步提纯。

                                                                         1H NMR(DMSO—d6，300 MHz，ppm) 1．4(9H，s)，2．2(3H，s)，3．2(2H，t)，4．6(2H，s)，4．7(2H，t)，6．3(1H，d)，6．9(1H，t)7．1(1H，t)7．7(1H，d) 7．8(1H，d)8．2(1H，s)8．4(1H，s)。

实施例77

药物组合物

本发明的化合物可与例如乳糖Ph．Eur、Croscarmellose钠、玉米 淀粉浆(5％w／v浆)和硬脂酸镁一起配制片剂用于人的治疗或预防用途。

体外和体内试验

采用如下缩写，如下列出物质的合适来源。

MOLT—4细胞—人体T—成淋巴细胞的白细胞(European Collection of Animal Cell Cultures，Proton Down)

纤维结合素—根据在E．Nengvall，E．Ruoslahti，Int．J．Cancer， 1977，20，1—5页和J．Forsyth等的Mehtods in Enzymology，1992， 215，311—316页中描述的方法由人体血浆通过明胶—琼脂糖亲和力色谱 法纯化。

RPMI 1640—细胞培养介质(Life technologies，Paisley UK)。

PBS—Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水(Life technologies)

BSA—牛血清白蛋白，馏分V(ICN，Thame，UK)

CFA—Complete Freund’s Adjuvant(Life technologies)

在如下试验和模型中，所涉及的化合物是本发明的式(Ⅱ)、(Ⅲ) 和(Ⅳ)化合物。

1．1体外试验

1．1．1MOLT—4细胞／纤维结合素粘连试验

MOLT—4细胞／纤维结合素粘连试验用于研究在MOLT—4细胞膜上表 达的整合素α4β1与纤维结合素的相互作用。聚苯乙烯96孔板在4℃用纤 维结合素，在PBS中的100μl，20μg／ml涂覆过夜。通过加入100μlBSA， 20mg／ml阻断非特异粘连，在室温下培养1小时后，抽吸溶液。在每个 孔中加入悬浮在无血清RPMI—1640介质中的MOLT—4细胞，2E6细胞 ／ml(50μl)和在相同介质(50μl)中稀释的化合物的溶液。在37℃和5％ (v／v)CO2潮湿气氛中培养2小时后，通过缓慢摇晃随后真空抽吸除去非 粘连细胞。粘连细胞通过比色酸磷酸酶试验定量。在每个孔中加入在含 有1％Triton X—100的pH5．0的50mM乙酸钠缓冲液中的100μl对—硝基 苯基磷酸酯(6mg／ml)。在37℃下培养1小时后，在每个孔中加入50μl 氢氧化钠，用微滴板分光光度计测量在405nm的吸光度。抑制粘连的化 合物得到较低的吸光度读数。标准、对照和试验条件试验三次，抑制百 分数根据在每个孔中总(无抑制剂)和非特异抑制(无纤维结合素)标准计 算。

1．2体内炎性模型

化合物的活性可在如下模型中测试。

1．2．1在小鼠中的卵白蛋清延迟型过敏症

Balb／c雌性小鼠(20—25g)用卵白蛋清(2mg／ml)与CFA的1∶1(v／v) 乳液胁腹免疫，7天后，小鼠通过在右后足垫subplantar注射在盐水中 的1％热凝聚的卵白蛋清(30μl)攻击。在随后的24小时内发生足肿胀， 测量足垫厚度与对侧未注射足的厚度相比较，计算足垫厚度百分数的增 加。通过管饲法给5只一组的小鼠剂量口服化合物，剂量为 0．001mg／kg—l00mg／kg。比较载体处理的动物和化合物处理的动物计算 炎性响应的抑制。

1．2．2小鼠中胶原诱导的关节炎

DBA／l雄性小鼠用由等体积的在0．05M乙酸中的牛胶原Ⅱ型 (2mg／ml)和CFA制备的乳液0．1ml免疫，该混合物在尾根部注射。20 天后，通过管饲法剂量口服化合物，剂量为0．001mg／kg／天—100mg／kg／ 天。在第一次剂量的一天后，每个动物接受0．1ml在0．05M乙酸中的胶 原Ⅱ型腹膜内激发注射。到第28天，判断小鼠所有四肢关节炎的发病 率和严重程度。关节炎的抑制通过比较载体处理的和化合物处理的小鼠 计算。

表1

方法A1是经对氨基苯氧基乙酸的酯和异氰酸酯(实施例1d)

方法A2是经对氨基苯氧基乙酸的酯和异氰酸酯，异氰酸酯在溶液 中由羧酸和二苯基磷酰基叠氮化物产生(实施例1d)

方法B是经对对氨基苯氧基乙酸的酯和三光气，随后仲胺(类似于 实施例30c中描述的方法)

方法C1是通过与三光气，随后仲胺反应经完全N—端胺(实施例30c)

方法C2是通过与异氰酸酯反应经完全N—端胺(实施例69a)

方法K是经C—端甲酯的水解(实施例1)

方法L是经C—端苄酯的水解(实施例23)

方法P是经BTEAD在富电子苯酚中引入氨基(实施例71b)

方法Q是用亲核物质替代活性芳基卤化物(实施例67a)