防止成纤维细胞皱缩
阅读：1035发布：2020-05-11
专利汇可以提供防止成纤维细胞皱缩专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 技术是针对木犀(Osmanthus)属 植物 的提取物、包含所述木犀属植物的提取物的护肤组合物及调配护肤组合物的方法，以及减少或防止 成 纤维 细胞 皱缩、减少或防止 糖化 、维持或增加 皮肤 弹性及紧实度并减少衰老外观的方法，其包含将本发明技术的护肤组合物涂覆到患者的皮肤上。，下面是防止成纤维细胞皱缩专利的具体信息内容。
1.一种护肤组合物，其包含木犀属植物的提取物。
2.根据权利要求2所述的护肤组合物，其中所述植物从美国桂花(Osmanthus
americanus)、红柄木犀(Osmanthus armatus)、银桂(Osmanthus asiaticus)(甜橄榄)、丹桂(Osmanthus aurantiacus)、美丽木犀(Osmanthus decorus)、管花木犀(Osmanthus delavayi)、桂 花 (Osmanthus fragrans)、柊 树 (Osmanthus heterophyllus)、短 丝木犀(Osmanthus serrulatus)、香花木犀(Osmanthus suavis)、野桂花(Osmanthus yunnanensis)、布克木犀(Osmanthus×burkwoodii)(管花木犀与美丽木犀的杂交种)及齿叶木犀(Osmanthus×fortunei)(桂花与柊树的杂交种)中选出。
3.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述提取物是呈粉末或粉碎物质、颗粒、片、乳膏、渣、乳液、悬浮液或糊的形式。
4.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述护肤组合物是呈乳、乳膏、糊、悬浮液、凝胶、液体、气溶胶、粉末、泡沫、精华液、软膏或前述任意混合物的形式。
5.根据权利要求1所述的护肤组合物，其进一步包含从以下中选出的至少一种额外护肤成分：润肤剂、表面活性剂、溶剂、维生素、脂质、防晒剂、聚合物、保湿剂、着色剂、掩蔽剂、芳香剂、防腐剂或去角质剂。
6.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述提取物以按所述护肤组合物的重量计约0.001％至约15％的量存在。
7.一种护肤组合物，其包含：
(a)约0.001％至约50％木犀属植物的提取物；
(b)约0.1％至约20％乳化剂；
(c)约0.1％至约60％润肤剂；
(d)约0.01％至约10％增稠剂；及
(e)约0.1％至约99％水。
8.根据权利要求7所述的护肤组合物，其进一步包含至少一种额外护肤成分。
9.根据权利要求8所述的护肤组合物，其中所述护肤成分从以下中选出：润肤剂、表面活性剂、溶剂、维生素、脂质、防晒剂、聚合物、保湿剂、着色剂、掩蔽剂、芳香剂、防腐剂或去角质剂。
10.一种调配护肤组合物的方法，所述方法包含以下步骤：
(a)通过制备约2重量份至约10重量份的木犀属植物的任何部分和约90重量份至约
98重量份的溶剂的组合来制备所述植物的提取物；及
(b)将所述提取物和护肤成分组合以产生所述护肤组合物。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在步骤(a)与步骤(b)之间，使所述提取物变成粉末或粉碎物质、颗粒、片、乳膏、渣、乳液、悬浮液或糊。
12.一种将根据权利要求1所述的护肤组合物涂覆到患者的皮肤上的方法。
13.一种减少或防止患者皮肤中的成纤维细胞皱缩的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和患者的皮肤接触的步骤。
14.根据权利要求13所述的方法，其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤上的成纤维细胞皱缩量相比时，所述成纤维细胞皱缩减少或防止了至少约5％的量。
15.一种减少患者皮肤上的衰老外观的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和患者的皮肤接触的步骤；
其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤上的衰老外观相比时，所述患者皮肤上的衰老外观减少了至少约5％。
16.一种防止患者皮肤中的蛋白质糖化的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和患者的皮肤接触的步骤；
其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤中的蛋白质的糖化相比时，所述蛋白质的糖化被防止了至少约5％。
17.一种维持或增加患者皮肤的弹性的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和所述患者接触的步骤；
其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤的弹性相比时，所述患者皮肤的弹性维持或增加了至少约5％。
18.一种维持或增加患者皮肤的紧实度的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和所述患者接触的步骤；
其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤的紧实度相比时，所述患者皮肤的紧实度维持或增加了至少约5％。
1.一种护肤组合物，其包含木犀属植物的提取物。
2.根据权利要求 1所述的护肤组合物，其中所述植物从美国桂花
(Osmanthusamericanus)、红柄木犀(Osmanthusarmatus)、银桂(Osmanthusasiaticus)(甜橄榄)、丹桂(Osmanthusaurantiacus)、美丽木犀(Osmanthusdecorus)、管花木犀(Osmanthusdelavayi)、桂 花(Osmanthusfragrans)、柊树 (Osmanthusheterophyllus)、短 丝 木 犀 (Osmanthusserrulatus)、香 花 木 犀 (Osmanthussuavis)、野 桂 花(Osmanthusyunnanensis)、布克木犀(Osmanthus×burkwoodii)(管花木犀与美丽木犀的杂交种)及齿叶木犀(Osmanthus×fortunei)(桂花与柊树的杂交种)中选出。
3.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述提取物是呈粉末或粉碎物质、颗粒、片、乳膏、渣、乳液、悬浮液或糊的形式。
4.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述护肤组合物是呈乳、乳膏、糊、悬浮液、凝胶、液体、气溶胶、粉末、泡沫、精华液、软膏或前述任意混合物的形式。
5.根据权利要求1所述的护肤组合物，其进一步包含从以下中选出的至少一种额外护肤成分：润肤剂、表面活性剂、溶剂、维生素、脂质、防晒剂、聚合物、保湿剂、着色剂、掩蔽剂、芳香剂、防腐剂或去角质剂。
6.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中所述提取物以按所述护肤组合物的重量计约0.001％至约15％的量存在。
7.一种护肤组合物，其包含：
(a)约0.001％至约50％木犀属植物的提取物；
(b)约0.1％至约20％乳化剂；
(c)约0.1％至约60％润肤剂；
(d)约0.01％至约10％增稠剂；及
(e)约0.1％至约99％水。
8.根据权利要求7所述的护肤组合物，其进一步包含至少一种额外护肤成分。
9.根据权利要求8所述的护肤组合物，其中所述护肤成分从以下中选出：润肤剂、表面活性剂、溶剂、维生素、脂质、防晒剂、聚合物、保湿剂、着色剂、掩蔽剂、芳香剂、防腐剂或去角质剂。
10.一种调配护肤组合物的方法，所述方法包含以下步骤：
(a)通过制备约2重量份至约10重量份的木犀属植物的任何部分和约90重量份至约
98重量份的溶剂的组合来制备所述植物的提取物；及
(b)将所述提取物和护肤成分组合以产生所述护肤组合物。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在步骤(a)与步骤(b)之间，使所述提取物变成粉末或粉碎物质、颗粒、片、乳膏、渣、乳液、悬浮液或糊。
12.一种将根据权利要求1所述的护肤组合物涂覆到患者的皮肤上的方法。
13.一种减少或防止患者皮肤中的成纤维细胞皱缩的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的护肤组合物和患者的皮肤接触的步骤。
14.根据权利要求13所述的方法，其中当和未和所述护肤组合物接触的患者皮肤上的成纤维细胞皱缩量相比时，所述成纤维细胞皱缩减少或防止了至少约5％的量。
15.一种减少患者皮肤上的衰老外观的方法，所述方法包含使根据权利要求1所述的
防止成纤维细胞皱缩
技术领域
[0001] 这一技术总体上涉及个人护理组合物，确切地说，适用于防止成纤维细胞皱缩和由此引起的衰老及衰老外观的护肤组合物，以及包含木犀(Osmanthus)属植物的提取物的护肤组合物和使用所述提取物的方法。
[0002] 相关申请案的交叉引用
背景技术
[0004] 胶原蛋白和弹性蛋白是健康皮肤中的重要蛋白质成分，且分别衍生自原胶原和弹性蛋白原，其由成纤维细胞产生并加工。在皮肤中足够量的适当组织的胶原蛋白和弹性蛋白对于维持年轻的身体性质(例如抗张强度和弹性)及支持无可见起皱和松弛的皮肤的年轻外观是必需的。成纤维细胞皱缩是已知和皮肤衰老一起出现的过程。术语成纤维细胞皱缩已经用于指代个别成纤维细胞由于丧失对其正常底物胞外基质的适当附着而发生的实际的物理皱缩或收缩。这是由于糖化和随之形成晚期糖化终点产物(在本文中被称为“AGE”)所引发的胞外基质的异常结构变化而发生。成纤维细胞皱缩也可以指代皮肤中的成纤维细胞群的皱缩，也就是说由于晚期糖化终点产物(AGE)的毒性影响作用而使得皮肤中的成纤维细胞的数目减少。
[0005] 糖化是指皮肤中的蛋白质和糖分子或衍生自代谢反应或脂质氧化的某些反应性羰基化合物结合。糖化是在导致成纤维细胞皱缩且因此导致皮肤和身体中的其它组织衰老中起作用的过程。糖化会因为身体内的较高量的糖(一般由于糖尿病或高糖饮食)而加速。糖化会导致分子功能的损害，且最终导致弹性和抗张强度降低、紧实度降低并导致皮肤衰老增加。一旦糖化，身体组织产生晚期糖化终点产物(AGE)，其导致氧化损害、蛋白质的异常交联、细胞毒性、组织衰竭及发炎。
[0006] 木犀属是原产于亚洲和北美洲且已经发现其花适用于制造茶和香料的开花植物属。但是，本文中首次发现某些包含木犀属植物，确切地说，桂花(Osmanthus fragrans)的提取物的护肤组合物尤其适用于防止成纤维细胞皱缩且当涂覆到皮肤上时使身体免受糖化的毒性影响。
[0007] 确切地说，木犀属提取物尤其包含类黄酮，包括木犀草素；类胡萝卜素，例如β-胡萝卜素；及许多小芳香剂分子，例如萜烯醇芳樟醇，其中的许多被认为具有抗氧化和消炎性质。
[0008] 到目前为止，先前未考虑在护肤组合物中使用所述提取物。也未考虑在皮肤上局部使用这些组合物来防止糖化对细胞衰竭和衰老的影响。
[0009] 本发明技术提供以下优势：提供这些组合物以及使用这些组合物来防止和减少成纤维细胞皱缩，且因此防止过早衰老、过早衰老外观及组织损害的方法。
发明内容
[0010] 在某些实施例中，本发明技术是针对一种包含木犀属植物的提取物的护肤组合物。
[0011] 在其它实施例中，本发明技术是针对一种包含以下的护肤组合物：(a)约0.001％至约50％木犀属植物的提取物；(b)约0.1％至约20％乳化剂；(c)约0.1％至约60％润肤剂；(d)约0.01％至约10％增稠剂；及(e)约0.1％至约99％水。
[0012] 在其它实施例中，本发明技术是针对一种调配护肤组合物的方法，所述方法包含以下步骤：(a)通过制备约2重量份至约10重量份的木犀属植物的任何部分和约90重量份至约98重量份的溶剂的组合来制备所述植物的提取物；及(b)将所述提取物和护肤成分组合以产生所述护肤组合物。
[0013] 在其它实施例中，本发明技术是针对减少或防止成纤维细胞皱缩、减少或防止糖化、维持或增加皮肤弹性和抗张强度的方法，增加紧实度的方法及减少衰老外观的方法，其包含将本发明技术的护肤组合物涂覆到患者的皮肤上。附图说明
[0014] 图1显示不同组合物之中AGE修饰的蛋白质的量的比较，所述不同组合物包括两种包含木犀属植物的提取物的组合物。
[0015] 图2显示不同组合物之中AGE修饰的蛋白质的量的比较，所述不同组合物包括三种额外的包含木犀属植物的提取物的组合物。
[0016] 图3显示不同组合物之中细胞活力百分比的比较。
[0017] 图4显示暴露于未和还原糖接触的蛋白质样品的健康成纤维细胞的相对强度和数目。
[0018] 图5显示暴露于已经和还原糖接触的蛋白质样品的健康成纤维细胞的相对强度和数目。
[0019] 图6显示暴露于在吡哆胺存在的情况下已经和还原糖接触的蛋白质样品的健康成纤维细胞的相对强度和数目。
[0020] 图7显示暴露于在1％组合物A存在的情况下已经和还原糖接触的蛋白质样品的健康成纤维细胞的相对强度和数目，所述组合物A包括根据本发明技术的木犀属的提取物。
具体实施方式
[0021] 如本文中所述，在某些实施例中，本发明技术是针对包含木犀属的提取物的护肤组合物。在某些实施例中，这些组合物包括(但不限于)例如以下的已知物种：美国桂花(Osmanthus americanus)、红柄木犀(Osmanthus armatus)、银桂(Osmanthus asiaticus)(甜橄榄)、丹桂(Osmanthus aurantiacus)、美丽木犀(Osmanthus decorus)、管花木犀(Osmanthus delavayi)、桂花、柊树(Osmanthus heterophyllus)、短丝木犀(Osmanthus serrulatus)、香花木犀(Osmanthus suavis)、野桂花(Osmanthus yunnanensis)以及花园杂交种，例如布克木犀(Osmanthus×burkwoodii)(管花木犀与美丽木犀的杂交种)和齿叶木犀(Osmanthus×fortunei)(桂花与柊树的杂交种)。
[0022] 本文中已经发现当在各种实施例中局部涂覆至皮肤或皮肤成纤维细胞时，包含木犀属的提取物的护肤组合物是有益的。确切地说，在某些实施例中桂花的提取物是最佳的。如本文所使用，“提取物”是指由使用任何溶剂(包括水)的化学或物理分离过程产生的植物的任何部分(包括(但不限于)花、茎、根、种子、果实或叶)的提取物。贯穿本发明，将提及“组合物A”，其为根据本文中论述的方法制备且可能包括不同浓度的实际木犀属提取物以及其它物质(例如水或其它溶剂)的组合物的实例。如本文所使用，“植物”是指植物的任何这些或其它部分。
[0023] 木犀属的提取物的目前研究显示已经发现所述提取物尤其包括以下组分中的一或多种：
[0024] 辛烷
[0025] 5-辛烯-1-醇
[0026] 反-芳樟醇氧化物(呋喃和吡喃)
[0027] 顺-芳樟醇氧化物(呋喃和吡喃)
[0028] 芳樟醇
[0029] 壬醛
[0030] 2-甲基己酸
[0031] 丁香醇
[0032] 癸醛
[0033] β-紫罗兰醇
[0034] 橙花醇
[0035] 10-十五烯-1-醇
[0036] α-紫罗兰酮
[0037] 二氢-β-紫罗兰酮
[0038] γ-癸内酯
[0039] β-紫罗兰酮
[0040] 5,6,7,7-四氢-4,4,7-三甲基-2(4H)-苯并呋喃酮
[0041] 十六烷
[0042] 4-羟基-β-紫罗兰酮
[0043] 3-氧代-β-紫罗兰酮
[0044] 3-(3-羟基丁基)-2,2,4-三甲基-2-环己烯-1-酮
[0045] 9-十八酸
[0046] 2,6,10-三甲基十四烷
[0047] 6,10,14-三甲基-2-十五烷酮
[0048] 邻苯二甲酸二丁酯
[0049] 十六酸
[0050] 十六酸乙酯
[0051] 十八醛
[0053] 9,12,15-十八碳三烯酸甲酯
[0054] 二十二烷
[0055] 1-二十二醇
[0056] 全反式-β-胡萝卜素
[0057] 全反式-α-胡萝卜素
[0058] 新-β-胡萝卜素B
[0059] 顺-茉莉酮
[0060] γ-癸内酯
[0061] 各种δ内酯
[0062] 亚油酸
[0063] 亚麻酸
[0064] 棕榈酸
[0065] 油酸
[0066] 亚麻酸乙酯
[0067] (+)-癸-4-内酯
[0068] 棕榈酸乙酯
[0069] 亚油酸乙酯
[0070] 二氢-β-紫罗兰醇
[0071] 硬脂酸
[0072] 反香叶酸
[0073] 二十醇
[0074] 油酸乙酯
[0075] 香叶醇
[0076] 对甲氧基苯乙醇
[0077] 十四酸
[0078] 4-氧代-二氢-β-紫罗兰醇
[0079] 倒紫罗烯(4种异构体)
[0080] 硬脂酸乙酯
[0081] (+)-茶香螺烷B(反式)
[0082] 对乙基苯酚
[0083] (+)-茶香螺烷A(顺式)
[0084] 4-羟基-β-紫罗兰醇
[0085] 4-氧代-β-紫罗兰醇
[0086] 4-氧代-二氢-β-紫罗兰酮
[0087] 6-戊基-α-吡喃酮
[0088] 十四酸乙酯
[0089] (-)-7-氧代二氢茶香螺烷B1
[0090] (+)-7-氧代二氢茶香螺烷A1
[0091] (-)-7-氧代二氢茶香螺烷A2
[0092] (+)-7-氧代二氢茶香螺烷B2
[0093] (+)-橙花叔醇
[0094] 2-苯乙醇
[0095] 4-氧代-β-紫罗兰酮
[0096] 1-壬醇
[0097] 7(Z)-癸烯-4-内酯
[0098] 7(Z)-癸烯-5-内酯
[0099] 香茅醇
[0100] 十二-4-内酯
[0101] 丁香酚
[0102] 2(3)-脱氢茶香螺烷
[0103] 1-(2,6,6-三甲基-1,3-环己二烯-1-基)-3-丁酮
[0104] 苄醇
[0106] 壬酸乙酯
[0107] 辛酸乙酯
[0108] 对薄荷-1-烯-9-醛
[0109] β紫罗兰酮的光异构体
[0110] 1-(2,6,6-三甲基-1,3-环己二烯-1-基)-3-丁醇
[0111] β-紫罗兰酮环氧化物
[0112] 癸-5-内酯
[0113] 苯乙酰腈
[0114] (E)-倒紫罗兰醇
[0115] (E)-倒紫罗兰酮
[0116] 1-(2,3,6-三甲基苯基)丁-1-烯-3-酮
[0117] 2(Z),7(Z)-癸二烯-5-内酯
[0118] 5(Z),8(Z),11(Z)-十四碳三烯-4-内酯
[0119] 2,5-环氧-巨豆甾-6(E),8(E)-二烯
[0120] α-紫罗兰醇
[0121] α-松油醇
[0122] β-紫罗兰基乙基醚
[0123] 香豆素
[0124] 十六烷-4-内酯
[0125] 脱氢芳樟醇
[0126] 巨豆甾-5,7(E),9-三烯-4-酮
[0127] 橙花醇氧化物
[0128] 壬-4-内酯
[0129] 辛-4-内酯
[0130] (Z)-倒紫罗兰醇
[0131] (Z)-倒紫罗兰酮
[0132] 2-癸烯-5-内酯
[0133] 2-甲基-2-乙烯基-5-(2'-6-甲基庚-2,6-二烯基)呋喃
[0134] 3-氧代-α-紫罗兰酮
[0135] 4-氧代-异佛尔酮
[0136] 5(Z),8(Z)-十四碳二烯-4-内酯
[0137] 5(Z)-十四-4-内酯
[0138] 6,7-环氧-茶香螺烷
[0139] 6-庚基-α-吡喃酮
[0140] 6-羟基-二氢茶香螺烷
[0141] 6-丙基-α-吡喃酮
[0142] 顺-7,10-环氧-2,6,10-三甲基-2,5(E),11-十二碳三烯
[0143] 反-7,10-环氧-2,6,10-三甲基-2,5(E),11-十二碳三烯
[0144] 乙酸香叶酯
[0145] 巨豆甾-4,6,8-三烯-3-酮(4种异构体)
[0146] 巨豆甾-4,7(E),9-三烯-3-酮
[0147] 巨豆甾-5,8(E)二烯-4-酮
[0148] 2,5-环氧-巨豆甾-6(Z),8(E)-二烯
[0149] 2,3-环氧-4-氧代-异佛尔酮
[0150] 2,6,6-三甲基环己-1-烯-甲酸
[0151] 2-羟基-2,6,6-三甲基环己酮
[0152] 3-氧代-倒紫罗兰醇
[0153] 9-氧代-二氢优达兰(9-Oxo-dihydroeudalan)
[0154] 9-氧代-优达兰(9-Oxo-eudalan)
[0155] β-环柠檬醛
[0156] β-大马酮
[0157] 二氢猕猴桃内酯
[0158] 异佛尔酮(3,5,5-三甲基环己-2-烯-1-酮)
[0159] 藏花醛
[0160] 茶香螺酮
[0161] 1-(2,3,6-三甲基苯基)丁-1-烯-3-乙氧基醚
[0162] 2,3,6-三甲基苯基丁-3-醇
[0163] 2,5-环氧-6-巨豆甾烯-9-醇
[0164] 2,7-环氧-巨豆甾-4,8(E)-二烯
[0165] 2-甲基-2-乙烯基-5-异丙烯基呋喃(2-异构体)
[0166] 4,7-环氧-巨豆甾-5(11),8(E)-二烯
[0167] 9-羟基茶香螺烷
[0168] 脱氢-ar-紫罗兰酮
[0169] 己-4-内酯
[0170] 如本文所使用，“护肤组合物”是指局部涂覆到皮肤上的组合物。如本文所使用，“皮肤”是指覆盖人类或哺乳动物的外表面的软组织且包括头发、头皮及指甲。在本发明技术的某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以指代除仅仅是香料或芳香剂的组合物之外的任何这类组合物。如本文所使用，护肤组合物包括(但不限于)乳、乳膏、糊、悬浮液、凝胶、液体、气溶胶、粉末、泡沫、软膏、精华液、喷雾、香粉或前述任意混合物。
[0171] 如本文所使用，除非另外指出，否则以百分比表示的组合物的所有组分都是指重量百分比。
[0172] 在某些实施例中，本发明技术涵盖木犀属植物的提取物以及包含所述提取物的护肤组合物。可以通过使植物和水或另一种溶剂接触获得所述提取物。适用于获得提取物并添加到本文中论述的护肤组合物的溶剂的实例包括有机溶剂，例如甘油、丙二醇(propanediol)、丙二醇(propylene glycol)、乙二醇、戊烷、环戊烷、己烷、己二醇、环己烷、苯、甲苯、二噁烷、乙醚、氯仿、二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃(THF)、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、二甲亚砜(DMSO)、碳酸丙二酯、甲酸、丁醇、丙醇、异丙醇、乙醇、甲醇、乙酸、硝基甲烷等等。
[0173] 在一例示性方法中，可以如下制备木犀属的提取物：在各种实施例中，可以获得木犀属植物的任何部分且将其和水组合。举例来说，按重量计约1份至约75份、约1份至约50份、约1份至约25份、约1份至约10份、约3份、4份、5份或约10份的木犀属植物可以和对应量的水或任何其它溶剂组合，以使得总份数等于100。在某些实施例中，随后将这一组合加热(但加热并非必需的)，且任选地过滤以去除微粒，得到物质(为了易于提及，在本文中称为“组合物A”)。取决于木犀属和所组合的溶剂的相对量，在各种实施例中，组合物A可以含有约0.01％至约95％、约0.01％至约90％、约0.01％至约75％、约0.01％至约
50％、约0.01％至约25％或约0.01％至约15％的所需木犀属提取物。
50％、约0.01％至约25％或约0.01％至约15％的所需木犀属提取物。
[0174] 在某些实施例中，本文中论述的木犀属提取物可以呈如本文中所述的液体或实质上液体形式，或其可以呈固体或实质上固体形式，例如粉末或粉碎物质、颗粒、片、乳膏、渣、乳液、悬浮液等等。举例来说，可以将提取物干燥随后研磨成粉末，或所述提取物可以用于产生糊，所述糊也可以任选地干燥。可以使用例如HPLC、UV或其它光谱测定方法测量提取物中的活性成分的含量。
[0175] 本文中论述的木犀属提取物(不论何种形式)可以随后在某些实施例中和从以下中的一或多种中选出的额外成分(在本文中称为“护肤成分”)组合：润肤剂、保湿剂、表面活性剂、聚合物、维生素、植物性药材提取物、溶剂(包括水和有机溶剂)、脂质(包括脂肪和油)、防晒剂、去角质剂、着色剂、掩蔽剂、或香料或芳香剂、愈合剂、皮肤抗衰老剂、皮肤保湿剂、抗皱剂、抗萎缩剂、皮肤光滑剂、抗细菌剂、抗真菌剂、杀虫剂抗寄生虫剂、抗微生物剂、消炎剂、止痒剂、外部麻醉剂、抗病毒剂、角质层分离剂、自由基清除剂、抗皮脂溢剂、去屑剂、调节皮肤分化、增生或色素沉着的药剂和加速渗透的药剂、脱皮剂、脱色或色素原形成剂、抗糖化剂、紧致剂、刺激真皮或表皮大分子合成和/或防止其退化的药剂、刺激成纤维细胞和/或角化细胞增殖或刺激角化细胞分化的药剂、肌肉松弛剂、抗污染和/或抗自由基剂、减肥剂、消脂剂、对微循环起作用的药剂、对细胞的能量代谢起作用的药剂、清洁剂、护发剂、头发定型剂、头发生长促进剂、防晒和/或紫外线防护化合物、化妆剂、清洁剂、药学药物、乳化剂、消毒剂、除臭活性剂、皮肤病学上可接受的载剂、研磨剂、吸收剂、着色剂、精油、皮肤感知物、化妆品收敛剂、抗痤疮剂、抗结块剂、消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、酶、酶抑制剂、酶诱导剂、辅酶、植物提取物、植物衍生物、植物组织提取物、植物种子提取物、植物油、植物性药材、植物性药材提取物、神经酰胺、肽、缓冲剂、填充剂、螯合剂、化学添加剂、着色剂、化妆品杀生物剂、变性剂、药物收敛剂、外部镇痛剂、成膜剂或成膜物质、乳浊剂、pH调节剂、推进剂、还原剂、多价螯合剂、皮肤漂白及亮白剂、皮肤晒黑剂、皮肤调理剂(例如湿润剂)、皮肤舒缓和/或愈合剂及衍生物、增稠剂、剥离剂、保湿剂、固化剂、木酚素、防腐剂、UV吸收剂、细胞毒素、抗肿瘤剂、脂溶性活性剂、悬浮剂、粘度调节剂、稀释剂、珠光助剂、泡沫促进剂或前述任意混合物。
[0176] 在某些实施例中，可以使本文中论述的护肤组合物和提取物和患者，也就是说，人类或其它哺乳动物的皮肤接触。可以简单地通过用手或用任何个人护理工具(例如刷子、棉球、垫片、刮板或拭子)涂覆护肤组合物或提取物来进行接触。在某些实施例中，组合物和提取物可以以面膜、外皮或包裹物形式涂覆到皮肤上，且可以和皮肤接触短时间段或较长时间段以使效果最大化。
[0177] 在某些实施例中，护肤组合物包含有效量或足以防止或减少成纤维细胞皱缩的有效量的所述提取物。如本文所使用，“减少”意指减少了任何可测量的量。如本文所使用，“防止”在某些实施例中意指当和无木犀属的提取物或具有目前用于已知皮肤组合物的其它提取物的对照组合物相比时，减少了至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的成纤维细胞皱缩。
[0178] 在某些实施例中，本文中论述的组合物在减少或防止成纤维细胞皱缩方面、在维持或增加皮肤弹性方面、在减少皱纹或衰老外观方面或在延长成纤维细胞的寿命方面是有效的。如本文所使用，“延长寿命”在某些实施例中意指在成纤维细胞皱缩之前使其寿命延长了未和木犀属提取物接触的成纤维细胞寿命的至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的时间段。
[0179] 如本文所使用，“减少衰老外观”意指减少患者皮肤上的衰老的可见外观，其包括(但不限于)某些衰老指示物的外观，例如皱纹、细纹、笑纹及深皱纹、斑点(包括老人斑和雀斑及痣)、可见日光损害等等，所有都是衰老外观的指示物。
[0180] 本文中，可以在定量基础上进行衰老外观的减少量的测量-例如：
[0182] --测量并比较已经和本文中的护肤组合物接触的第一皮肤样品上的衰老指示物的数目和未进行所述接触的第二皮肤样品；或
[0183] --使用例如激光扫描显微术、超声波或仅凭肉眼再次测量且比较衰老指示物的强度(例如，测量在相同皮肤区域和本文中的护肤组合物接触之前及之后皱纹的深度或老人斑、痣或雀斑的色强度/对比度；或比较保留在用本文中的护肤组合物的相同皮肤区域中的水的相对量)。
[0184] 在各种实施例中，当相比于未和本文中的皮肤组合物接触的皮肤时，本文中的护肤组合物使衰老外观减少了至少约5％、至少约10％、至少约15％或至少约20％。
[0185] 在某些实施例中，当和无木犀属的提取物或具有目前用于已知皮肤组合物的其它提取物的对照组合物相比时，本文中的护肤组合物有效防止至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的量的糖化。这可以例如通过测量存在于已经和如本文中所论述的护肤组合物接触的第一皮肤样品中的糖化的量，且将其和存在于未和本文中的皮肤组合物接触的第二皮肤样品中的糖化的量比较来测量。
[0186] 在某些实施例中，当和无木犀属的提取物或具有目前用于已知皮肤组合物的其它提取物的对照组合物相比时，本文中的护肤组合物使皮肤弹性维持或增加了至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％。
[0187] 在某些实施例中，当和无木犀属的提取物或具有目前用于已知皮肤组合物的其它提取物的对照组合物相比时，本文中的护肤组合物使患者的皮肤紧实度维持或增加了至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％。
[0188] 弹性和紧实度都可以如下测试：通过例如肤盾测定法(cutometry)，一种向皮肤施加真空且测量压力的机械方法；或通过使用机器，例如冲击计量器，其具有摇锤从固定高度落到皮肤表面上，记录紧实度和/或弹性；或通过向皮肤施加扭转或扭曲运动的任何装置，测量并记录皮肤返回到其正常状态的时间；或通过测量声学冲击波的共振运行时间且测定胶原蛋白和弹性蛋白纤维以及紧实度和皮肤弹性。
[0189] 在各种实施例中，本文中论述的组合物包含木犀属植物的提取物作为主要活性成分，也就是说，在这些实施例中的所有其余成分是惰性的或对皮肤无明显影响。在某些实施例中，对皮肤的大部分(也就是说，超过一半)的任何益处可以归因于木犀属提取物整体或部分存在。
[0190] 在各种实施例中，本文中论述的护肤组合物包含约0.001重量％至约50重量％木犀属提取物。在各种实施例中，护肤组合物包含约0.001重量％至约50重量％、约0.001重量％至约25重量％、约0.001重量％至约20重量％、约0.001重量％至约15重量％、约0.005重量％至约5重量％、或约0.01重量％至约5重量％、或约1重量％、约2重量％、约
3重量％或约4重量％、约5重量％或约10重量％木犀属提取物。
3重量％或约4重量％、约5重量％或约10重量％木犀属提取物。
[0191] 在本文中论述的一些实例中，在本发明技术的护肤组合物和含有吡哆胺作为阳性对照的那些组合物之间进行比较。已经显示暴露于糖化蛋白质的一群人类真皮成纤维细胞(HDF)一般预期会皱缩。确切地说，当以在2mg/mL至6mg/mL范围内的浓度添加到正常培养的皮肤成纤维细胞中时，糖化蛋白质(例如牛血清白蛋白，BSA)造成细胞在大约18小时至36小时内死亡。添加吡哆胺作为阳性对照以防止糖化减轻了一定程度的皱缩，但是当本发明技术的护肤组合物包含约0.001重量％至约15重量％木犀属时，添加所述组合物以具有几乎100％保护的线性剂量反应保护成纤维细胞免受糖化的毒性影响。
[0192] 在某些实施例中，显示当和无木犀属的提取物或具有目前用于已知皮肤组合物的其它提取物的对照组合物相比时，本发明组合物和方法有效防止至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约35％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％。至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％的糖化。在某些实施例中，显示所述组合物和方法有效防止约10％至约95％或约20％至约90％或约35％至约85％或约
50％至约75％的糖化。事实上，在某些实施例中，显示本发明技术组合物在和约0.001％至约15％的量的蛋白质糖化混合物(也含有核糖，一种糖化糖)接触时防止约80％至约95％的蛋白质糖化；且当随后纯化且添加到皮肤成纤维细胞培养物中时，蛋白质的毒性(致命性)被防止了至少约95％。已知含有晚期糖化终点产物的蛋白质对成纤维细胞是有毒的。
50％至约75％的糖化。事实上，在某些实施例中，显示本发明技术组合物在和约0.001％至约15％的量的蛋白质糖化混合物(也含有核糖，一种糖化糖)接触时防止约80％至约95％的蛋白质糖化；且当随后纯化且添加到皮肤成纤维细胞培养物中时，蛋白质的毒性(致命性)被防止了至少约95％。已知含有晚期糖化终点产物的蛋白质对成纤维细胞是有毒的。
[0193] 在其它实施例中，本发明技术是针对包含处于递送系统中的木犀属的提取物的组合物，所述递送系统例如(但不限于)脂质体和前体脂质体、胶束和前体胶束、微胶囊、纳米胶囊、毫球体、微球体、海绵、纳米球、脂质球、微乳液及纳米乳液等等。在某些实施例中，护肤组合物也可以表征为化妆品或皮肤药学组合物。
[0194] 在某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以含有化妆品学或皮肤药学有效量的至少一种具有MMP和/或弹性蛋白酶抑制活性的化合物或提取物或油，例如丁香(Eugenia Caryophyllus/Clove)花提取物 大果越橘(VacciniumMacrocarpon)(蔓越橘)果实提取物 茶树(Camellia Sinensis)叶提
TM
取物(Scavenox GTE)、蔬食埃塔棕(Euterpe Oleracea)果实提取物(和)石榴(Punica Granatum)提取物(及)甘油 AFA藻类提取物( KBGA)。
TM
取物(Scavenox GTE)、蔬食埃塔棕(Euterpe Oleracea)果实提取物(和)石榴(Punica Granatum)提取物(及)甘油 AFA藻类提取物( KBGA)。
[0195] 在某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以含有化妆品学或皮肤药学有效量的至少一种具有恢复和/或维持皮肤的屏障功能的活性的化合物或提取物或油，例如酵母提取物( HydroSeal)、皱波角叉菜(Chondrus crispus)提取物(和)透明质酸钠
[0196] 在某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以含有化妆品学或皮肤药学有效量的至少一种具有增加成纤维细胞的胶原蛋白产生的活性的化合物或提取物或油，例如酵母提取物( HydroSeal)、酵母提取物( SRC)。
[0197] 在某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以含有化妆品学或皮肤药学有效量的至少一种具有角质层分离和/或去角质和/或脱皮活性的化合物或提取物或油，例如酵母提取物( SRC)。
[0198] 在某些实施例中，本文中论述的护肤组合物可以进一步含有以下额外成分中的一或多种：糖胺、葡糖胺、D-葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基-D-葡糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、维生素B3及其衍生物、烟酸胺、脱氢乙酸钠、脱氢乙酸及其盐、植物甾醇、水杨酸化合物、己脒定、二烷酰基羟基脯氨酸化合物、大豆提取物及衍生物、雌马酚、异黄酮、类黄酮、植烷三醇、法呢醇、香叶醇、肽及其衍生物、二肽、三肽、四肽、五肽及六肽及其衍生物、赖氨酸-苏氨酸-苏氨酸-赖氨酸-丝氨酸、棕榈酰基-赖氨酸-苏氨酸-苏氨酸-赖氨酸-丝氨酸、肌肽、N-酰基氨基酸化合物、类视黄素、丙酸视黄酯、视黄醇、棕榈酸视黄酯、乙酸视黄酯、视黄醛、视黄酸、水溶性维生素、抗坏血酸酯、维生素C、抗坏血酸、抗坏血酸基葡糖苷、棕榈酸抗坏血酸酯、磷酸抗坏血酸酯镁、磷酸抗坏血酸酯钠、维生素及其盐及衍生物、维生素原及其盐及衍生物、乙基泛醇、维生素B、维生素B衍生物、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素K、维生素K衍生物、泛酸及其衍生物、泛酰乙基醚、泛醇及其衍生物、右泛醇、生物素、氨基酸及其盐及衍生物、水溶性氨基酸、天冬酰胺、丙氨酸、吲哚、谷氨酸、水不溶性维生素、维生素A、维生素E、维生素F、维生素D、单萜类、二萜类及三萜类、β-紫罗兰醇、雪松醇及其衍生物、水不溶性氨基酸、酪氨酸、色胺、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、尿囊素、生育酚烟酸酯、生育酚、生育酚酯、棕榈酰基-甘氨酸-组氨酸-赖氨酸、植物甾醇、羟酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、酮酸、丙酮酸、植酸、溶血磷脂酸、芪、肉桂酸酯、白藜芦醇、激动素、玉米素、二甲基氨基乙醇、天然肽、大豆肽、糖酸的盐、葡糖酸锰、葡糖酸锌、微粒材料、颜料材料、天然色料、吡啶酮乙醇胺盐、3,4,4'-三氯对称二苯脲、三氯卡班、吡啶硫酮锌、氢醌、曲酸、抗坏血酸、磷酸抗坏血酸酯镁、抗坏血酸基葡糖苷、吡哆醇、真芦荟、萜烯醇、尿囊素、没药醇、甘草酸二钾、甘油酸、山梨糖醇酸、季戊四醇酸、吡咯烷酮酸及其盐、二羟基丙酮、赤藓酮糖、甘油醛、酒石醛、丁香油、薄荷醇、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅馏出物、二十烯和乙烯基吡咯烷酮共聚物、丁基氨基甲酸碘丙酯、多糖、必需脂肪酸、水杨酸盐、甘草次酸、类胡萝卜素、神经酰胺及假神经酰胺、脂质络合物、一般来自天然来源的油(例如牛油果树脂、杏仁油、月见草油、李属油、棕榈油、摩诺依(monoi)油、HEPES)；丙半胱氨酸；O-辛酰基-6-D-麦芽糖；甲基甘氨酸乙酰乙酸的二钠盐、类固醇(例如薯蓣皂元及DHEA的衍生物)；DHEA或脱氢表雄酮和/或前驱物或化学或生物衍生物、N-乙氧基羰基-4-对氨基苯酚、越桔提取物；植物激素；酵母酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的提取物；藻类的提取物；大豆、羽扇豆、玉米和/或豌豆的提取物；阿尔维林(alverine)及其盐，包括阿尔维林柠檬酸盐、假叶树及马栗树的提取物。
[0199] 在其它实施例中，本发明技术是针对通过将本文中论述的组合物涂覆到患者的皮肤(在某些实施例中，包括患者的头发)上来减少或防止成纤维细胞皱缩的方法。如本文所使用，“患者”可以指具有皮肤的任何人类或动物。在各种实施例中，患者可以是人类或哺乳动物。
[0200] 在其它实施例中，本发明技术是针对改良组合物在减少或防止成纤维细胞皱缩方面的功效的方法，所述组合物包含木犀属植物的提取物，其中所述方法包含使其中的木犀属提取物的浓度和量最优化。
[0201] 本发明技术的某些实施例显示在附图中。举例来说，图2是显示通过防止目标蛋白(BSA＝牛血清白蛋白)糖化本发明技术的护肤组合物防止目标蛋白变得对皮肤成纤维细胞有毒的条形图。已知用晚期糖化终点产物(AGE)修饰的蛋白质(糖化的最终结果)对成纤维细胞有毒。
[0202] 实例1
[0203] 如下制备提取物：
[0204] 1.将约1克至约5克(在各种实施例中，约1克、约2克、约3克、约4克或约5克)的量的干燥木犀属植物的部分和约95克至约99克去离子水(量取决于干燥木犀属植物的量，以使得总量＝100克)组合。
[0205] 2.在约40℃至约80℃下将这一组合加热约2小时至约6小时。随后将材料冷却且过滤以去除悬浮微粒。
[0206] 3.在糖化糖存在的情况下将剩余溶液(在本文中称为“组合物A”)应用于目标蛋白且将其和如图1中所示的以下对照比较：无处理(也就是目标蛋白加糖，无任何其它试剂存在)、10mM吡哆胺(也就是目标蛋白加糖加10mM吡哆胺)。如图1中可以看出，当不同处理的蛋白质混合物的AGE含量通过酶联免疫分析来测定时，包含木犀属提取物的组合物显示AGE修饰的蛋白质含量的显著剂量依赖性减少。
[0208] 实例2
[0209] 如下制备提取物：
[0210] 1.将约1克至约5克的量的干燥木犀属植物的部分和约95克至约99克去离子水(总量＝100克)组合。
[0211] 2.在约40℃至约80℃下将这一组合加热约2小时至约6小时。随后将材料冷却且过滤以去除悬浮微粒。
[0212] 3.在10毫摩尔乙二醛(一种反应性羰基化合物)存在的情况下将剩余溶液(在本文中称为“组合物A”)应用于目标蛋白且将其和如图2中所示的以下对照比较：无处理(也就是目标蛋白加乙二醛，无任何其它试剂存在)，10mM吡哆胺(也就是目标蛋白加乙二醛加10mM吡哆胺)。如图1和图2中可以看出，当不同处理的蛋白质混合物的AGE含量通过酶联免疫分析来测定时，包含木犀属提取物的组合物显示AGE修饰的蛋白质含量的统计显著的剂量依赖性减少。
[0213] 实例3
[0214] 进行一系列测试来评估本发明技术的护肤组合物，看其是否可以防止BSA的目标蛋白对皮肤成纤维细胞有毒。这通过首先使BSA和糖(核糖)在缓冲生理盐水溶液中反应来进行。反应混合物中的一些也含有吡哆胺(已知会防止糖化的此处用作阳性对照的药物)或本发明技术的护肤组合物。
[0215] 对于这一测试，无菌反应混合物的培育在约45℃的温度下历时6.5天。在那之后，反应混合物针对去离子水充分地渗析，从混合物中去除所有小分子(核糖、盐等)，仅留下BSA。随后将所得BSA溶液冻干(冷冻干燥)以去除水，且使BSA的残余物再溶解于缓冲生理盐水溶液中。在测量这些溶液各自的蛋白质浓度之后，以5.5毫克/毫升的最终BSA浓度将其各自添加到含有成纤维细胞的多孔细胞培养板的数个重复实验孔(所有孔中的细胞数目相同)中。
[0216] 在37℃下将细胞暴露于这些溶液24小时之后，通过将染料(刃天青)添加到孔中且在37℃下再培育一小时来测定细胞的活力。活细胞代谢染料且使其改变颜色，死亡细胞不改变颜色。随后在读取板的分光光度计上测量孔中的颜色变化作为光学密度。通过参照设定成100％的“无蛋白质(对照)”情况的光学密度，标准化每种情况下的光学密度(细胞活力)。图标签的具体意义如下：
[0217] 无蛋白质(对照)：这些是添加了缓冲生理盐水但其中无任何BSA的细胞。这些细胞显示全(100％)活力。
[0218] 仅蛋白质(无糖)：这些是添加了含于缓冲生理盐水中的未糖化BSA的细胞。这是从未用核糖培育的BSA。
[0219] 蛋白质+糖：这些是用含有已经和100毫摩尔核糖反应的BSA的缓冲盐水培育的细胞。这是高度糖化的BSA。活力百分比较低，意指大多数细胞被这一BSA样品杀死。
[0220] 100mM核糖+1％组合物A：这些是用含有已经在1％组合物A存在的情况下和100毫摩尔核糖反应的BSA的缓冲盐水培育的细胞。木犀属提取物防止糖化以使得这一BSA样品具有极小毒性。事实上，此处活力是约95％且在统计上和无BSA对照没有不同。因此，免于成纤维细胞皱缩的保护是优良的。
[0221] 实例4
[0222] 根据本发明技术的某些实施例制得乳膏调配物。“组合物A”是指含有木犀属的提取物的根据本发明技术的组合物。包括以下范围的成分：
[0223] 乳化剂：约0.1％至约99％、约0.1％至约20％、约1％至约20％、约1.5％至约10％或约2％至约6％。
[0224] 润肤剂：约0.1％至约99％、约0.1％至约60％、约1％至约60％、约5％至约50％或约10％至约35％。
[0225] 增稠剂：约0.01％至约10％、约0.01％至约8％、0.01％至约5％、约0.05％至约5％、约0.1％至约5％、约0.1％至约2％或约0.1％至约1％。
[0226] 水：约0.1％至约99％、约10％至约95％、约15％至约90％、约20％至约80％、约30％至约90％、约35％至约90％、约40％至约90％或约45％至约80％。
[0227] 防腐剂：约0.01％至约5％、约0.01％至约2％、约0.1％至约1.5％、约0.2％至约1％或约0.25％至约0.75％。
[0228] 组合物A(含有木犀属提取物)：约0.01％至约10％、约0.1％至约8％、约0.1％至约5％或约1％至约3％。
[0229] 实例5
[0230] 根据以下配方和方法制备乳膏组合物：
[0231]
[0232] 制造程序：
[0234] 2.当混合的批料经彻底乳化时，将混合物冷却到约40℃至约50℃的范围。
[0235] 3.随后添加相F、G及H成分且彻底混合所得混合物。
[0236] 实例6
[0237] 根据以下配方和方法制备精华液组合物：
[0238]
[0239] 制造程序：
[0240] 1.将相A、B、C用螺旋桨混合直至均匀。
[0241] 2.随后添加相D。用转子-定子乳化器加工混合物且使其均质化。
[0242] 实例7
[0243] 进行另一系列测试来评估本发明技术的护肤组合物，看其是否可以防止BSA的目标蛋白对皮肤成纤维细胞有毒。这通过首先使BSA与糖化糖(核糖)在缓冲生理盐水溶液中反应来进行。反应混合物中的一些也含有吡哆胺(已知会防止糖化的此处用作阳性对照的药物)或本发明技术的护肤组合物。
[0244] 对于这一测试，无菌反应混合物的培育在约45℃的温度下历时两天。在那之后，反应混合物针对去离子水充分地渗析，从混合物中去除所有小分子(核糖、盐等)，仅留下BSA。随后将所得BSA溶液冻干(冷冻干燥)以去除水，且使BSA的残余物再溶解于缓冲生理盐水溶液中。在测量这些溶液各自的蛋白质浓度之后，将其各自添加到含有汇合成纤维细胞的细胞培养皿中以获得2毫克/毫升的最终BSA浓度。
[0245] 在37℃下将细胞暴露于这些溶液16小时之后，通过将染料(中性红)添加到板中且在37℃下再培育一小时来测定细胞的活力。活细胞吸收染料且将染料集中在其溶酶体内部从而呈现红色，而死亡细胞不螯合染料。随后使用亮场光学器件在显微镜下给细胞拍照。照片标签的具体意义和结果的解释如下：
[0246] 图4仅蛋白质(无糖)：使这些细胞暴露于未与核糖反应的BSA。细胞经染色，因为其积聚了中性红染料，且其显得充分附着于培养皿表面且在所述培养皿表面上展布开，所有都是健康细胞的指示。
[0247] 图5蛋白质+糖：使这些细胞暴露于已经与100毫摩尔核糖反应的BSA。这些细胞未经染色，因为其是代谢失活的(死亡的)且不积聚染料。其也丧失了其对培养皿表面的大部分牢固附着。
[0248] 图6蛋白质+糖+吡哆胺：使这些细胞暴露于在10毫摩尔吡哆胺(一种糖化抑制剂)存在的情况下与100毫摩尔核糖反应的BSA。这些细胞保持健康且积聚染料且保持附着于培养皿表面。
[0249] 图7蛋白质+糖+1％组合物A：使这些细胞暴露于在1％组合物A存在的情况下与100毫摩尔核糖反应的BSA。组合物A防止糖化以使得这一BSA样品具有极小毒性。照此，细胞积聚染料且保持附着于培养皿表面，这些是健康培养物的标志。因此，通过组合物A防止成纤维细胞皱缩是高度有效的。
[0250] 尽管已经关于本发明技术的具体实施例描述本发明技术，但是这些实施例及实例仅仅是例示性的且并不想要加以限制。许多其它变化及修改及其它用途对于本领域的普通技术人员将变得显而易见。因此，本发明技术不应受本文中的特定揭示内容限制，且可以在不脱离其精神的情况下以本文中未明确描述的其它形式体现。
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