本发明涉及药物化学和有机化学领域，提供一类新型苯并噻吩化 合物。这些化合物可用于治疗多种与绝经后综合症相关的医学适应症， 以及子宫纤维病变、子宫内膜异位症和动脉平滑肌细胞增生。

“绝经后综合症”一词用于描述妇女正在进行或已完成生理性变 态即众所周知的绝经时，经常困扰她们的多种病理情况。虽然这一词 用于考虑多种病理情况，但绝经后综合症的三种主要效应是长期医学 关注的出发点，这三种效应即骨质疏松症、心血管效应(如高血脂)、 雌激素依赖性癌症(尤其是乳腺癌和子宫癌)。

骨质疏松症描述了一组由不同病因引起的疾病，但其特征均为单 位体积骨量的净减少。这种骨量的减少及所引起的骨折导致骨骼不能 对身体提供足够的结构支持。

骨质疏松症最常见一种类型与绝经相关。大多数妇女在月经停止 后三到六年内其骨松质腔减少了大约20％至60％的骨量，这种骨量的 快速减少一般同骨吸收与形成循环的增进有关，但吸收循环占优势， 其结果就是骨量的净减少。骨质疏松症是妇女绝经后一种常见而严重 的疾病。

仅在美国估计就有两千五百万妇女受这种疾病的折磨。骨质疏松 症的后果不仅是对个体有害，而且由于其病程长，以及其后遗症使得 病人需要长期而广泛的供养(入院治疗和家庭护理)，因而造成大量 的经济损失，尤其在年龄更大的病人中更是如此。而且，虽然一般认 为骨质疏松症不会危及生命，但在老年妇女中有20％至30％的死亡率 与髋部骨折有关。这一死亡率中很大一部分直接与绝经后骨质疏松症 有关。

绝经后骨质疏松症中骨内最易受损的组织是骨小梁，这一组织通 常被称作骨松质，主要集中在骨的两端(靠近骨连接)和脊柱的椎骨 中。骨松质的特征是内部为小的相互联接的骨前质结构，而更坚固浓 密的皮层组织组成骨的外层及中轴。小梁组织内部联接的网状结构给 予外部皮层结构以侧向支持，这对于整个结构的生物机械强度是至关 重要的。绝经后骨质疏松症主要是骨小梁的净吸收和净减少从而导致 骨的衰退和骨折。由于绝经后妇女骨小梁的减少，最常见的骨折与那 些高度依赖于骨小梁支持的骨相关就不奇怪了，例如椎骨、重量支承 型骨如股骨和前臂骨的颈部。事实上，髋骨骨折、科勒斯骨折、椎骨 粉碎性骨折是绝经后骨质疏松症的标志。

当今，唯一被广泛接受用于治疗绝经后骨质疏松症的方法是雌激素 替代疗法，虽然这种疗法一般是成功的，但患者的顺应性很低，这主 要是因为雌激素疗法经常产生一些不必要的副作用。

在绝经前，与同年龄的男子相比，多数妇女较少发生心血管疾病。 然而绝经后，妇女心血管疾病的发病率逐渐增加，赶上男子的发病率。 这种保护作用的丧失与雌激素的减少有关，特别是与失去雌激素调节 血脂的能力有关。雌激素调节血脂功能的本质还不十分清楚，但现有 证据表明雌激素能上调肝脏中低密度脂类(LDL)的受体来清除多余 的胆甾醇。另外雌激素对胆甾醇的生物合成似乎也有一些影响，并还 有其它一些对心血管健康有益的作用。

文献中已有报导，绝经后妇女在采用雌激素替代疗法时，血脂水 平回归到绝经前水平。在这种情况下雌激素似乎是一个合适的治疗手 段。但对许多妇女来说，雌激素替代疗法的副作用是不能接受的，这 就限制了这种疗法的应用。在这种情况下，一种理想的药物应当既能 像雌激素一样调节血脂水平，但又能避免雌激素替代疗法的副作用及 其带来的危险。

第三种与绝经后综合症相关的主要病理状况是雌激素依赖型乳腺 癌和稍少见一些的其它器官雌激素依赖型癌症，尤其是子宫的雌激素 依赖型癌症。虽然这些癌症的发生并不一定局限于绝经后的妇女，但 在老年绝经后妇女群体中要普遍得多。现在，对这些癌症的化学治疗 主要依靠抗雌激素类化合物，如tamoxifen。虽然在治疗这些癌症时， 这种激动剂-拮抗剂混合物具有有益的作用，同时在生命受到严重威胁 时，雌激素的副作用也是可以忍受的，但它们并不是理想的药物。例 如，由于具有雌激素(激动剂)性质，它们对子宫内的某些特定癌细 胞群体可能产生刺激作用，因而在某些病例中它们会起反作用。能更 好地治疗这些癌症的药物应当是一种抗雌激素的化合物，没有或可以 忽略不计其雌激素激动剂对繁殖组织的特性。

为回应这样一种明确的需求：即一种新的药剂，它特别能够减轻 绝经后综合症的症状。本发明提供一类新的苯并噻吩化合物及其药用 组合物，并提供这些化合物的使用方法，用于治疗绝经后综合症及其 它下面将要提到的雌激素相关疾病。

子宫纤维病变(子宫纤维瘤)是一个古老而至今仍存的临床难题。 它有多种名称，包括子宫纤维瘤、子宫肥大、子宫肌瘤、子宫肌层肥 大、子宫纤维病变和纤维子宫瘤。基本说来，子宫纤维病变是一种纤 维组织不合适地沉积在子宫壁上的病理情况。

这种情况是导致妇女痛经和不育的原因之一，其产生的确切原因 现在还了解很少，但有证据表明它是纤维组织对激素的一种不合适应 答。这种情况已通过对家兔进行三个月的每日雌激素给药诱导产生， 豚鼠可通过四个月的每日给药诱导产生，而且在大鼠中，雌激素给药 也造成了相似的肥大。

治疗子宫纤维病变最常规的方法是外科手术，既昂贵有时又是并 发症如腹部粘连形成和感染的原因。在有些病人中，最初的外科手术 仅能暂时治疗而纤维又重新生长。在这些病例中，进行子宫切除能有 效地终止纤维的生长，但同时病人也失去了生育能力。这种疾病还可 通过给予促性腺激素释放激素的拮抗物来治疗，但它们的使用又因能 引起骨质疏松症而受限，这样就需要一种治疗子宫纤维病变的新方法， 本发明所提供的方法可满足这一要求

子宫内膜异位症是一种严重的痛经病，伴随着剧烈的疼痛和血流 入子宫内膜基质或腹膜腔，经常导致不育  这种症状产生的原因可能 是子宫内膜对正常激素控制不适当应答和定位于不适当组织而导致的 异位生长。子宫内膜生长于不合适位置，似乎激发了生长位置组织的 类似炎症应答，导致巨噬细胞浸润和一系列引起疼痛应答的级联事件， 这一疾病的精确原因还并不十分清楚。这种疾病的激素疗法各不相同， 很不精确，且带有大量不必要的并可能是有害的副作用。

治疗这种疾病的方法之一是使用低剂量的雌激素，通过雌激素对 中枢促性腺激素的释放及随后卵巢雌激素合成的负反馈作用，来抑制 子宫内膜的生长。但是，这种疗法有时需要持续给予雌激素来控制症 状，这样使用雌激素常常产生不必要的副作用，甚至有导致子宫内膜 癌症的危险。

另一种治疗方法包括孕激素的持续给药。该疗法会导致经闭，并 因孕激素抑制卵巢雌激素生成而导致子宫内膜生长的退化。长期使用 孕激素，常常会带来令人不愉快的CNS副作用，还常常由于其对卵巢 功能的抑制而导致不育。

第三种治疗方法包括弱雄激素的给药，这种药物对控制子宫内膜 异位症是有效的，但会导致严重的雄性化后果，还有几个这种疗法的 病例在连续治疗时导致了轻度的骨质减少。因此需要一种治疗子宫内 膜异位症的新方法。

动脉平滑肌细胞增生在一些疾病如动脉粥样硬化和再狭窄中起重 要的作用。经皮冠状动脉腔内形成术(PTCA)后的血管再狭窄已知 是一种组织应答，其特征是分为早期和晚期，早期发生在PTCA后几 小时至数天，为血栓形成并伴随着一些血管痉挛；而晚期看来是动脉 平滑肌细胞的过量增生和迁移占优势。在这种疾病中，平滑肌细胞及 巨噬细胞的运动和移居增加明显造成该病的病理情况。血管动脉平滑 肌细胞的过量增生和迁移可能是PTCA、动脉粥样硬化斑切除术、激 光血管形成术及动脉搭桥手术后冠状动脉再堵塞的主要机制。见Austin 等，《美国心脏学会杂志》(Journal of the American College of Cardiology) 第8卷369-375页(1985年8月)。

血管再狭窄是用经皮冠状动脉腔内形成术(PTCA)、动脉粥样硬 化斑切除术、激光血管形成术及动脉搭桥手术疏导堵塞血管后一个主 要的长期并发症。在进行PTCA的病人中，大约35％在术后3-6个月内 发生再堵塞。现在治疗血管再堵塞的策略包括使用移植片固定模 (stent)等装置进行机械疏导，或使用如肝素、低分子量肝素、香豆 素、阿司匹林、鱼油、抗钙剂、类固醇及前列环素等化学药物。这些 方法不能抑制再堵塞的发生率，因而对治疗和防止血管再狭窄是无效 的。见《经皮冠状动脉血管形成术后再狭窄的防止：寻找“神奇子弹”》 (Prevention of Restenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty：The Search for a‘Magic bullet’)Hermans等，《美国心脏杂 志》(American Heart Journal)122卷171-187页(1991年7月)。

在再狭窄的病理原因中，细胞的过度增生和迁移是生长因子影响 的结果。这些生长因子是由血液和受损动脉血管中的细胞组分产生的， 并介导了血管再狭窄中平滑肌细胞的增生。

能抑制动脉平滑肌细胞增生和/或迁移的抑制剂对于治疗和防止再 狭窄是有用的。本发明提供这些化合物，用作动脉平滑肌细胞增生的 抑制剂及再狭窄的抑制剂。

本发明涉及通式I的化合物及其可药用的盐类。

其中R1是H、OH、卤素、OCO(C1-C6烷基)、OCO(芳 基)、OSO2(C4-C6烷基)、OCOO(C1-C6烷基)、OCOO(芳 基)、OCONH(C1-C6烷基)或OCON(C1-C6烷基)2；

R2是芳基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或4-环己醇；

R3是O(CH2)2或O(CH2)3；

R4和R5任选地为CO(CH2)2CH3、CO(CH2)3CH3、C1- C6烷基，或R4和R5及与其相连的氮原子结合成哌啶、吗啉、吡咯烷、 3-甲基吡咯烷、3，3-二甲基吡咯烷、3，4-二甲基吡咯烷、吖庚因 或2-甲基哌啶；

R6为＝C＝CH2，＝CH(C1-C5烷基)、＝CH(C2-C5链烯基)、 ＝C＝CH(C1-C5烷基)、＝CH(芳基)、＝C(OH)(C1-C5烷基)、 ＝C(OH)(C2-C5链烯基)、＝C(OH)芳基。

本发明进一步涉及含有通式(I)的化合物的药用组合物，该组合 物可任选地含有雌激素或孕激素。本发明还涉及这些化合物单独使用 或者与雌激素或孕激素联合使用的方法，用于减轻绝经后综合症的症 状，特别是骨质疏松症、心血管相关的病理状态，和缓解雌激素依赖 型癌症的症状，在这里“雌激素”一词包括具有雌激素活性的甾类化 合物，如17β-雌二醇、雌酮、共轭的雌激素(共轭雌激素)、雌马 雌激素、17β-乙炔基雌二醇等；而“孕激素”一词则包括具有促孕活 性的化合物，如孕甾酮、异炔诺酮(norethylnodrel)、nongestrel、乙酸 孕甾酮、炔诺酮等。

本发明的化合物同样适用于抑制妇女的子宫纤维病变和子宫内膜 异位症，以及人的动脉平滑肌增生，特别是再狭窄。

本发明的一方面包括通式I的化合物及其可药用的盐类。

其中R1是H、OH、卤素、OCO(C1-C6烷基)、OCO(芳 基)、OSO2(C4-C6烷基)、OCOO(C1-C6烷基)、OCOO(芳 基)、OCONH(C1-C6烷基)或OCON(C1-C6烷基)2；

R2是芳基、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或4-环己醇； R3可以是O(CH2)2或O(CH2)3；

R3是O(CH2)2或O(CH2)3；

R4和R5任选地为CO(CH2)2CH3、CO(CH2)3CH3、C1- C6烷基，或R4和R5及与其相连的氮原子结合成哌啶、吗啉、吡咯烷、 3-甲基吡咯烷、3，3-二甲基吡咯烷、3，4-二甲基吡咯烷、吖庚因 或2-甲基哌啶；

R6为＝C＝CH2、＝CH(C1-C5烷基)、＝CH(C2-C5链烯基)、 ＝C＝CH(C1-C5烷基)、＝CH(芳基)、＝C(OH)(C1-C5烷基)、 ＝C(OH)(C2-C5链烯基)、＝C(OH)芳基。

这里用于描述化合物的概括性的词代表其通常的含义，如“烷基” 指直链或支链的2-6个碳原子的脂肪族链，包括乙基、丙基、异丙基、 丁基、正丁基、戊基、异戊基、己基、异己基等。同样，“C2-C6链 烯基”一词代表2-6个碳原子的直链或支链烯基，包括丙烯基、乙烯 基、异丙烯基、丁烯基、正丁烯基、己烯基、戊烯基等。

“芳基”一词包括任选地被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、氨基、 硝基或羟基取代1-3次的苯基。

                      苯并噻吩的制备

本发明的化合物是苯并[b]噻吩的衍生物，苯并[b]噻吩根据美国化 学学会Ring Index命名和编号如下。

在制备本发明的化合物的过程中，起始物是通式II的化合物或其 盐类。

其中R7是一个羟基保护基团；R3、R4和R5的含义同上；或是所述 成分的盐。

虽然通式II化合物的游离碱形式可作为起始物质，但其酸盐形式， 特别是盐酸盐，通常更方便一些。

通式II的化合物是本领域已知的，基本上按U S.Pat.Nos. 4,133,184；4,380,635和4,418,068描述的方法制备，上述专利在此引入 作为参考文献。一般来说，一个通式III的苯并噻吩前体经过已知的过 程进行制备。 一般的方法是：两个羟基用已知能在标准Fiedel-Crafts条件下抵抗酰化 作用的羟基保护基团(形成通式II的R5保护基团)保护，然后用强还 原剂还原。优选的羟基保护基团为C1-C4烷基，最优选甲基。见上列的 美国专利和J.W.Barton，《(有机化学中的保护基团》(Protective Groups in Organic Chemistry)，J.G.W.McOmie编，Plenum Press，New York， NY，1973，第2章以及T.W.Green，《有机合成中的保护基团》(Protective Groups in Organic Synthesis)，John Wiley和Sons，New York，NY，1981， 第7章。

在制备了所需的保护型通式III的前体后，将前体与一种通式IV 的化合物在标准Friedel-Crafts条件下酰化。 在通式IV中，n、R3、R4、R5同前述，而R为氯基、溴基、碘基或 一种活性酯基团。通式IV化合物的制备以及优选的酰化方法，在上列 的美国专利中已公开。当R4和R5均为C1-C5烷基时，优选甲基和乙基； 当R4和R5结合在一起时，优选1-哌啶基和1-吡咯烷基，最优选哌啶 基。

酰化反应后，即制备通式II的化合物后，R7为OH的本发明的化 合物可通过将通式II的化合物或其盐类加入合适的溶剂，与一种还原 剂如氢化锂铝(LAH)在惰性气体(如氮气)中反应来制备。

合适的溶剂包括任何能在还原条件下保持惰性的溶剂或溶剂混合 物，合适的溶剂包括二乙醚、二噁烷、四氢呋喃(THF)。这些溶剂 的无水形式是优选的，最优选无水THF。

这一步反应在能有效完成还原反应的温度下进行，17-25℃左右 的室温一般是合适的。

所用的时间为反应所必需的，一般的反应时间为大约1-20小时， 最佳反应时间可用常规色谱技术监测反应过程来确定。

然后α-碳原子(羧基)可被修饰为R6所表示的基团，其中R6为 ＝C(OH)(C1-C5烷基)、＝C(OH)(C2-C5链烯基)、或＝C(OH) (芳基)。将一个化学基团在0到-85℃的温度条件下按前法加入到溶 有通式II化合物的合适溶剂中，化学基团可为RLi、RMgX或其它碳 原子的亲核基团，其中R为C1-C5烷基、C2-C5链烯基或芳基。给予足 够的反应时间(15分钟到20小时)，使反应充分进行。加入饱和碳酸 氢钠水溶液，抽提混合物，汇合的提取液经清洗、干燥、过滤、浓缩 和纯化，生成一种通式Ia的化合物。

当R6基团为＝CH(C1-C5烷基)、＝CH(C2-C5链烯基)、或＝CH (芳基)时，α-羟基用还原剂还原上述Ia化合物得到，还原剂可为三 乙基硅，然后加入一种酸(如三氟乙酸)，经足够的反应时间(15分 钟至24小时)后，中止反应，中止反应可使用乙酸乙酯/饱和碳酸氢钠 水溶液混合物。抽提反应混合物，将有机物质清洗、干燥、过滤、浓 缩和纯化，生成一种通式Ib的化合物。完成这一工作可替代的方法还 包括(a)三烷基硅和Et2AlCl2或BF3·Et2O(乙醚合三氟化硼)等 路易斯酸反应；(b)用钯碳等催化剂氢解(H2)；另外二氯二甲基 硅加上碘化钠也有效。

当R6为通式＝C＝CH(C1-C5烷基)基团时，通式Ia的适当化合 物在适宜的溶剂中冷却到10℃至-25℃，然后消除羟基。这一消除可 用加入二甲基氨基吡啶(DMAP)等碱，然后加入甲酰磺氯，再加入 DMAP来完成。另外，所需的链烯基还可用羰基化合物与R2+P- CH(C1-C5烷基)等鏻内鎓盐反应来制备。也可以使用其它的有机磷化 合物，如Ar2P(O)CHR或(RO)2P(O)CHR(Boutagy等，《化学评论》(Chem Reviews)74卷87页(1974))

其它化合物可采用已知方法用下述部分取代R1和R2的羟基来制 备，所说的部分具有以下通式：-O-CO-(C1-C6烷基)、-O-CO-Ar或-O-SO2(C4-6烷基)，其中Ar为任意取代的苯基。例如，可参见 前述U.S.Pat.No.4,358,593。

例如，当想得到一个-O-CO-(C1-C6烷基)或-O-CO-Ar基团时， 通式I的二羟基化合物与酰基氯、溴、氰化物或叠氮化合物等试剂或合 适的酸酐进行反应，或与酸酐混合。反应可在吡啶、二甲基吡啶、蝰 啉或异蝰啉等碱性溶剂，或在三乙胺、三丁胺、甲基哌啶等叔胺溶剂 中方便地进行。这一反应同样可在一种惰性溶剂中进行，可使用的惰 性溶剂包括乙酸乙脂、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二噁烷、二甲氧 基乙烷、乙腈、丙酮、丁酮等。反应中至少需加入一当量的酸清除剂， 如一种三级胺。如果需要，还可使用酰化反应催化剂，如4-二甲基氨 基吡啶或吡咯烷吡啶。见Haslam，等，《四面体》(Tetrahedron)36卷 2409-2433页(1980)。

提供前面所提到的R1和R2基团的酰化反应可在-25℃至100℃的 合适温度下进行。通常在氮气等惰性气体条件下进行。而且室温通常 足够反应进行。

这种羟基的酰化也可通过合适的羧酸在惰性有机溶剂或加热的情 况下进行酸催化反应来完成，可使用硫酸、多磷酸、甲磺酸等酸催化 剂。

前面所述的R1和R2基团也可用形成适当酸的活性酯来提供，例如 由已知的试剂形成的酯，包括二环己基碳二亚胺、酰基咪锉、硝基苯 酚类、五氯苯酚、N-羟基琥珀酰亚胺和1-羟基苯并三唑形成的酯。见 《日本化学学会通报》(Bull.Chem Soc.Japan)38卷1979页(1965)和 Chem.Ber.，788页和2024页(1970)。

上述用于提供-O-CO-(C1-C6烷基)或-O-CO-Ar基团的技术均 在前面讨论过的溶剂中进行，这些技术在反应中并未产生一种酸性产 物，因此，不需要在反应中使用酸清除剂

当想得到一种R1和R2为-O-SO2(C4-C6烷基)的通式I化合物 时，通式I中的二羟基化合物与磺酸的一种合适衍生物如磺酰氯、磺酰 溴或磺酰胺盐进行反应，方法见King和Monoir，《美国化学学会会志》 (J.Am.Chem.Soc.)97卷2566-2577页(1975)所述的方法反应。这些二羟 基化合物还可与合适的磺酸酐反应。这些反应可在前面讨论的与酰基 卤等反应中已解释的条件下进行。

可以制备通式I的化合物使R1和R2带上不同的生物保护基团，或 优选使R1和R2都带上相同的生物保护基团。优选的保护基团包括 -OCH3、-O-CO-C(CH3)3、-O-CO-C6H5和-O-SO2-(CH2)3-CH3。

虽然通式I的化合物的游离碱形式可以在本发明的方法中使用，但 优选的方法是制备和使用一种可药用的盐。这样，本发明的方法中使 用的化合物主要是与多种有机酸或无机酸形成的可以药用的酸加成 盐，包括常用于制药工业的生理接受性盐类。这些盐也是本发明的一 部分。用于生成这种盐的典型无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝 酸、硫酸、磷酸、连二磷酸等。也可使用由有机酸衍生的盐类，可使 用的有机酸包括脂肪一元羧酸和二元羧酸、苯的链烷酸取代物、羟基 链烷酸和羟基链烷二酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸，这些可药 用的盐类包括乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸、 苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基 苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴 化物、异丁酸盐、苯基丁酸盐、β-羟丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐，己 炔-1，4-二酸盐、癸酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、 甲酸盐、反丁烯二羧酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、 苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸 盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲 酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙 炔酸盐、丙酸盐、苯丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二 酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸 盐、苯磺酸盐、对溴代苯磺酸盐、氯代苯磺酸盐、乙基磺酸盐、2-羟 基乙基磺酸盐、甲基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯基 磺酸盐、二甲基苯磺酸盐、酒石酸盐等。优选的盐为盐酸盐。

可药用的酸加成盐类一般是用通式I的化合物与等摩尔或过量的 酸反应得到。一般将反应物混入一个互溶性的溶剂如二乙醚或乙酸乙 酯中，盐通常在大约1小时到十天内从溶液中沉淀出来，并能用过滤方 法析离或用常规方法去除溶剂。

可药用的盐类一般比衍生它们的化合物溶解性更好，这样它们更 便于配制成液体或乳剂。

下面的实施例用来进一步说明本发明化合物的制备，但并不表明 本发明可因下面任何实施例而受到局限。

1H NMR和13C NMR如指出那样分别在300和75兆周处测量，1H NMR的化学位移用δ值来报告，δ值是相对于所用NMR溶剂化学位移 的ppm。1H NMR的偶合常数用Hz来报告，并指出明显的峰的多重 性。多重峰表示如下：s(单峰)，δ(双峰)，t(三峰)，q(四 峰)；m(多峰)，comp(复杂峰)，br(宽峰)，app(表观峰)。 柱色谱按Still的方法(Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra，A.《有机化学杂志》 (J.Org.Chem.)1978年43卷2923页)进行，除非另外说明用EM Science 硅胶(230-400目ASTM)进行。径向色谱在色谱柱上用1、2或4mm 色谱板进行。所有对空气和/或湿度敏感的反应均在彻底干燥的玻璃器 皿里在氩气或氮气环境中进行。所有浓缩都在一个旋转蒸发器中减压 进行。

                      制备1

室温下，往raloxifene(1.00g，196mmol)搅拌溶于THF(20 ml)的溶液中加入N，N-二甲基氨基吡啶(1.00g，8.2mmol)，然后 加入叔丁基二甲基甲硅氯(0.90g，6mmol)。12小时后，用水稀释反 应液，用氯仿抽提，将汇合的有机抽提物干燥(硫酸纳)并浓缩。在 乙酸乙酯中将油质萃出，过滤得到沉淀物，滤液浓缩后，用快速色谱 纯化(硅胶，乙酸乙酯)，最后生成1.1g(80％)稠重的黄色油状的 所需产物：1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ7.76(d，J＝8.9Hz，2H)，7.68 (d，9.0Hz，1H)，7.22-7.29(m，3H)，6.88(dd，J＝8.9，3.1Hz，1H)，6.72(d，J ＝9.1Hz，2H)，6.63(d，J＝9.1Hz，2H)，4.10(br，2H)，2.79(br，2H)，2.54(br， 4H)，1.62(br，4H)，1.25(br，2H)，1.01(s，9H)，0.93(s，9H)，0.22(s，6H)， 0.06(s，6H)，MS(FD)701(M+)；IR(CHCl3)2934，1642，1599，1259cm-1； 元素分析理论值/实验值C(68.43/68.53)，H(7.90/7.92)，N(2.00/2.23).

                    实施例1

在-78℃，往制备1的产物(2.04g，2.91mmol)搅拌溶于THF (10ml)的溶液中滴入MeLi(4.16ml，1.4M的二乙醚溶液，5.82 mmol)。15分钟后，用过量的饱和碳酸氢钠水溶液中止反应，乙酸 乙酯抽提。汇合的有机抽提物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤， 然后浓缩。所得到的物质用径向色谱(硅胶，4mm，2.5∶2.5∶0.1∶0.1的己 烷：乙酸乙酯∶三乙胺∶MeOH)进行纯化，最后得到1.70g(81％) 灰白色泡沫状的所需产物。1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ7.31-7.36(m， 5H)，7.17(d，J＝2.9Hz，1H)，6.81(d，J＝8.9Hz，4H)，6.84(dd，J＝9.0，2.9 Hz，1H)，4.12(br，2H)，2.81(br，2H)，2,59(br，4H)，1.65(s，3H)，1.63(br， 4H)，1.45(br，2H)，0.99(s，9H)，0.97(s，9H)，0.21(s，6H)，0.19(s，6H)， MS(FD)718(M+)；IR(CHCl3)2934，1606，1467，1525，cm-1；元素分析(理 论值/实验值) C(68.57/68.93)，H(8.28/8.26)，N(1.95/2.10)。

                    实施例2

在0℃，往例1产物(0.50g，0.69mmol)搅拌溶于THF(5ml) 的溶液中加入四丁基氟化胺(1.74ml 0.1M的THF溶液，1.74 mmol)。15分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，混合物用乙酸乙酯 抽提，汇合的有机抽提物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤，然后 浓缩。所得到的物质用径向色谱(硅胶，2mm，2.5∶2.5∶0.1∶0.1的己烷∶ 乙酸乙酯∶MeOH∶三乙胺)进行纯化，最后得到定量的白色固体状 所需产物。1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ9.81(s，1H)，9.40(s，1H)，7.53 (d，J＝9.2Hz，1H)，7.24(app t，J＝9.0Hz，4H)，7.03(d，J＝2.8Hz，1H)，6.80 重叠d，J＝9.1Hz，6.61(dd，J＝8.9，2.9Hz，1H)，5.72(s，1H)，3，98(tm J＝ 4.0Hz，2H)，2.61(br，2H)，2.41(br，4H)，1.24-1.55(一系列的m，9H)；MS (FD)490(M+)。

                         实施例3

在0℃，往例1产物(1.77g，2.46mmol)搅拌溶于二氯甲烷(50 ml)溶液中在加入三乙基硅(2.36ml，14.8mmol)，然后加入三氟乙 酸(4.72ml)。15分钟后，将反应物小心倒入乙酸乙酯/饱和碳酸氢 钠水溶液混合物中中止反应，两相混合物用乙酸乙酯抽提，用盐水洗 涤汇合的有机抽提物，干燥(MgSO4)、过滤，然后浓缩。所得到的 物质用径向色谱(硅胶，2mM，2.5∶2.5∶0.1∶0.1的正己烷∶乙酸乙酯∶三 乙胺∶MeOH)进行纯化，最后得到1.5g(87％)白色泡沫状的所需产 物。1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ7.7.36(d，J＝9.0Hz，2H)，7.17-7.21(复 杂峰4H)，6.86(d，J＝8.9，2H)，6.80(s，J＝9.0Hz，2H)，6.68(dd，J＝9.0， 2.8Hz，1H)，4.57(q，J＝4.0Hz，1H)，4.17(br，2H)，2.84(br，2H)，2.62(br， 4H)，1.62-1.74(complex，7H)，1.49(br，2H)，0.99(s，9H)，0.97(s，9H)，0.22 (s，6H)，0.20(s，6H)，MS(FD)703(M+)；IR(CHCl3)2935，1605，1468， 1265cm-1；元素分析(理论值/实验值)C(70.13/69.78)，H(8.47/8.62)，N(2.00/2.11).

                       实施例4

在0℃，往例3产物(0.50g，0.71mmol)搅拌溶于THF(5ml) 的溶液中加入四丁基氟化胺(1.78ml，1.0M THF溶液，1.78mmol)。 15分钟后，加入过量的饱和碳酸氢钠水溶液中止反应，用乙酸乙酯抽 提混合物，汇合的有机抽提物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤， 然后浓缩。所得到的物质用径向色谱(硅胶，2mm，2.5∶2.5∶0.75∶0.25的 己烷∶乙酸乙酯∶MeOH∶三乙胺)进行纯化，最后得到314mg(93％) 白色固体的所需产物。 1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ9.71(s，1H)，9.50(s，1H)，7.30(d，J＝9.1Hz， 2H)，7.08-7.17(complex，4H)，6.81-6.88(complex，4H)，6.63(dd，J＝9.1， 2.8Hz，1H)，4.41(q，J＝4.2Hz，1H)，3.98(t，J＝3.8Hz，2H)，2.60(br，2H)， 2.41(br，4H)，1.84(d，J＝4.0Hz，3H)，1.35-1.51(一系列的br m，6H)；MS (FD)474(M+)。

                       实施例5 

在0℃，往例1产物(1.70g，2.36mmol)搅拌溶于二氯甲烷(20 ml)的溶液中加入N，N-二甲基氨基吡啶(461mg，3.78mmol)，然 后加入甲磺酰氯(0.27ml，3.55mmol)，0.5小时后，再加入第二份 N，N-二甲基氨基吡啶(461mg，3.78mmol)，将溶液温热至室温。 20小时后，将反应物倒入盐水，用乙酸乙酯抽提，汇合的有机抽提物 用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤，然后浓缩。所得的物质用径向 色谱(硅胶，2mm，2.5∶2.5∶0.1∶0.1的己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺∶MeOH) 进行纯化，最后得到1.56g(94％)白色泡沫状的所需产物。1H-NMR(300 MHZ，CDCl3)δ7.44(d，J＝2.8Hz，1H)，7.40(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22 (app t，J＝9.0Hz，3H)，6.78-6.86(complex，5H)，5.96(sm，1H)，5.17(s，1H)， 4.00(t，J＝4.1Hz，2H)，2.60(tm，J＝4.0Hzz，2H)，2.2.38-2.41(complex， 4H)，1.41-1.50(complex，4H)，1.38-1.40(m，2H)，0.98(s，9H)，0.92(s，9H)， 0.22(s，6H)，0.18(s，6H)；MS(FD)700(M+)；IR(CHCl3)2934，1605，1466， 1265cm-1；元素分析(理论值/实验值)C(70.34/70.49)，H(8.21/8.14)，N(2.00/2.10).

                      实施例6

在0℃，往例5产物(0.42g，0.61mmol)搅拌溶于THF(5ml) 的溶液中加入四丁基氟化胺(1.5ml，1.0M的THF溶液，1.51 mmol)，15分钟后，往反应物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸 乙酯抽提，汇合的有机抽提物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤， 然后浓缩。所得到的物质用径向色谱(硅胶，2mm，2.5∶2.5∶0.70∶0.30的 己烷∶乙酸乙酯∶MeOH∶三乙胺)进行纯化，最后得到250mg(87％) 白色固体的所需产物。1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ9.80(s，2H)，7.36(d， J＝9.2Hz，2H)，7.23-7.30(complex，3H)，7.04(d，J＝9.0Hz，1H)，6.84(d， J＝9.1Hz，2H)，6.74(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，6.70(d，J＝9.1Hz，2H)，5.96 (s，1H)，5.11(s，1H)，4.01(t，J＝3.8Hz，2H)，2.60(t，J＝3.9Hz，2H)，2.40 (m，4H)，1.37-1.51(一系列的m，6H)；MS(FD)472(M+)；IR(CHCl3) 3530，2934，1605，1465，1264cm-1。

                      实施例7

在-78℃，往搅拌着的制备1产物溶液(1.00g，1.42mmol)中 加入PhLi(1.6ml 1.8M的溶液，2.84mmol)。15分钟后，加入饱和 碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯抽提，汇合的有机抽提物用盐水洗涤， 干燥(MgSO4)、过滤，然后浓缩。用径向色谱(4mm，硅胶， 2.5∶2.5∶1∶.005的乙酸乙酯∶己烷∶三乙胺∶MeOH)纯化所得到的粗 物质，最后得到0.81g(73％)白色泡沫状的所需产物：1H-NMR(300 MHZ，CDCl3)δ7.11-7.22(complex，10H)，6.93(d，J＝9.1Hz，2H)，6.57- 6.78(一系列的m，4H)，4.18(br，2H)，2.90(br，2H)，2.61(br，4H)，1.40- 1.80(br，6H)，0.98(s，9H)，0.97(s，9H)，0.19(s，6H)，0.16(s，6H)；MS(FD) 781(M+)；元素分析(理论值/实验值)C(70.81/71.05)，H(7.88/7.94)，N(1.80/1.97)。

                       实施例8

在0C，往例7产物(0.50g，0.64mmol)搅拌溶于THF(5ml) 的溶液中加入四丁基氟化铵(1.60ml 1.0M的THF溶液，1.60 mmol)。15分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，所得混合物用乙酸 乙酯抽提。汇合的有机抽提物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)、过滤， 然后浓缩。所得到的物质用径向色谱(硅胶，2mm，2.5∶2.5∶0.1∶0.1的己 烷∶乙酸乙酯∶MeOH∶三乙胺)进行纯化，最后得到323mg(91％) 白色固体的所需产物。1H-NMR(300MHZ，CDCl3)δ9.35(br，2H)，7.38 (d，J＝9.0Hz，1H)，7.00-7.20(complex，7H)，6.86(d，J＝8.9Hz，2H)，6.58 (complex，3H)，6.40(s，1H)，6.31(d，J＝8.9Hz，2H)，3.91(t，J＝3.9Hz， 2H)，2.60(br，2H)，2.41(br，4H)，1.38-1.51(一系列的m，6H)；MS(FD) 552(M+)；元素分析(理论值/实验值)C(74.02/73.79)，H(6.03/6.26)，N(2.54/2.60)。

                        试验程序

                      一般准备程序

在用于说明方法的例子中，一个绝经后模型被用来确定不同的处 理对循环脂的影响。

75日龄的雌性Sprague Dawley大鼠(重量为220-225g)来自Charles River实验室(Portage，MI)。这些动物在Charles River实验室中进行 双侧卵巢切除(OVX)或Sham氏外科手术，一周后装船。到达后， 它们按每笼3或4只分组饲养在悬挂的金属笼中，一周内随意地供应食 物(含钙物质约0.5％)和水。室温维持在22.2°±1.7℃，最小相对湿度 为40％，房间的光周期为12小时光照12小时黑暗。 药物饲养组织的收集。经过一周的适应期(即两周post-ovx)，开始每 日给予动物待实验的化合物。除非另外说明，17-α-乙炔雌二醇或试验 化合物均以1％羧甲基纤维素悬液或溶于20％的环糊精的形式口服。对 动物每日给药共四天。药物饲养后，给动物称重，将动物用Ketamine： Xylazine(2∶1，V∶V)混合物麻醉，心脏穿刺法采集血样，然后将动物用 CO2窒息法处死，中线切开取出子宫，称量其湿重。 胆甾醇分析。血样在室温下放置2小时成凝块，3000rpm离心10分钟 收集血清。血清胆甾醇用Boehringer Mannheim Diagnostics高级胆甾醇 分析试验来测定。简单地说是将胆甾醇氧化成胆甾醇-4-烯-3-酮和过 氧化氢，过氧化氢与酚和4-氨基非那宗在过氧化氢酶的作用下，产生 一种对位-醌亚胺染料，可在500nm处用分光光度计读出，对照标准曲 线可计算胆甾醇的浓度，整个试验可用一个Biomek自动工作站自动进 行。 子宫嗜曙红细胞过氧化氢酶(EPO)试验。酶分析前将子宫保存在4℃， 然后在50倍体积含0.005％Triton X-100的50mM Tris缓冲液(pH 8.0) 中匀浆。加入0.01％的过氧化氢和10mM的邻苯二胺(终浓度)，在 450nm处测一分钟内光吸收的增加值，子宫中存在嗜曙红细胞表明化 合物具有雌激素活性。15秒间隔的最大反应速率用反应曲线开始的线 性部分来确定。 药品来源：17-α-乙炔雌二醇购自Sigma Chemical Co.，St.Louis， MO。

通式I化合物对血胆甾醇的影响和激动剂/非激动剂活性的测定

下面表I的数据表示卵巢切除大鼠、用17-α-乙炔雌二醇处理 (EE2，雌激素的口服形式)的大鼠及用本发明的化合物处理的大鼠相 比较的结果。虽然当口服浓度为0.1mg/Kg/日时，EE2可引起血胆甾醇 的降低，但它对子宫也产生了刺激作用，因而EE2处理大鼠的子宫重 量比卵巢切除大鼠的子宫重量要大得多，这种子宫对雌激素的应答在 本领域是公认的。

对照卵巢切除大鼠，本发明的化合物不仅一般都能降低血胆甾醇， 而且就大多数试验过的通式化合物来说，子宫的重量仅有少量增加甚 至略微减小。与本领域已知的其它雌激素化合物相比，既具有降低血 清胆甾醇的优点又不对子宫重量产生有害的影响，这样的化合物是非 常少见和理想的。

正如下面的数据所表示的，雌激素性质还可通过嗜曙红细胞在子 宫内浸润的有害应答来评估。本发明的化合物没有引起卵巢切除大鼠 子宫基质层中观察到的嗜曙红细胞数目的任何增加。而雌二醇却同预 期的一样，引起了嗜曙红细胞浸润的大量增加。

下表I的数据反映每种处理的应答大鼠。 化合物   剂量  mg/kg     子宫重量     对OVX的     增加百分率   子宫   EPO (V.最大)   血清胆甾醇   对OVX的降低     百分率 EE2   0.1     151.4     189.6     84.8 实施例2   0.01     13.8     4.2    -10.2   0.1     10.6     5.1     19.4   1.0     8.7     7.8     50.7   5.0     20.6     5.7     53.9 实施例4   0.01     0     4.5    -26.5   0.1     12.7     3.6     10.4   1.0     32.6     5.4     43.9   5.0    -14.8     3.9     35.2 实施例8   0.01    -22.7     4.2    -9.0   0.1    -8.4     3.6    -3.1   1.0    -7.2     4.5     14.0   5.0     33.1     35.1     56.9 化合物A   0.01    -12.9     3.6    -0.5   0.1    -10.4     5.4    -25.2   1.0     17.2     4.5     2.8   5.0     31.1     26.4     8.4 Raloxifene   0.01    -20.5     3.9     12.0   0.1     32.3     5.4     30.4   1.0     7.9     4.5     60.6

★化合物A是通式I的一个化合物，其中R1和R2为羟基，n＝2， R3为-O(CH2)2，R4和R5组成哌啶，R6为＝CH-苯基

除了已经证明的本发明的化合物的益处之外(特别在与雌二醇比 较时)，上述数据还清楚地证明了通式I的化合物不是雌激素模拟物， 同时各种处理中都没有观察到有害的毒性作用(存活)。 骨质疏松症试验程序

在完成一般准备程序后，对大鼠每日进行处理共35天(每个处理 组有6只大鼠)，在第36天用CO2窒息法将大鼠处死。35天的时间 已足够使骨密度的减少达到最大值，测量按这里所述的方法进行。在 处死大鼠时取出子宫，剔除外面的组织，将里面的液体排出，测量其 湿重，用以证明与卵巢切除相关的雌激素缺乏。作为对卵巢切除的应 答，子宫的重量通常减少大约75％。然后将子宫置于10％的中性缓冲 的福尔马林中用于随后的组织学分析。

取出大鼠的右股骨，用一个影像分析程序(NIH影像)对远端进 行X-射线数字成像和分析。这些动物胫骨的近侧面也用定量计算的X- 射线断层术进行扫描。

与上面的程序一样，本发明化合物和乙炔基雌二醇溶于20％的羟 丙基β-环糊精经口给药于试验动物。

概述起来，与完整的用载剂进行处理的动物相比，试验动物的卵 巢切除造成股骨密度明显减少。口服乙炔基雌二醇(EE2)可防止这种 减少，但一直存在对卵巢刺激的危险。

本发明的化合物以一种普遍性的剂量依赖方式阻止骨量的减少， 因此本发明的化合物对于治疗绝经后综合症特别是骨质疏松症是有效 的。 MCF-7增殖试验

MCF-7乳腺癌细胞(ATCC HTB22)维持在补加有10％牛胎血 清(FBS)(v/v)、L-谷氨酸(2mM)、丙酮酸钠(1mM)、 HEPES{(N-[2-羟乙基]哌嗪-N′-[2-乙磺酸]10mM}、非必需氨基酸和牛 胰岛素(1μg/ml)的MEM(最基本培养基，无酚红， Sigma，St.Louis，MO)(维持培养基)中。在开始试验前10天，将MCF-7 细胞转移到试验培养基中。试验培养基与维持培养基的差别是用10％ 葡聚糖包被活性碳解析的牛胎血清(DCC-FBS)替代FBS来消除内含 的甾醇类物质。用细胞解离培养基(补加有10mM的HEPES和2mM EDTA、不含Ca++/Mg++的HBSS(不含酚红))将MCF-7从维持培 养瓶中移出，用试验培养基洗涤两次，并调整至80000细胞/毫升，在 平底的微培养孔(Costar 3596)中加入大约100μl(8000个细胞)， 在37℃5％CO2的湿润培养箱中培养48小时，使细胞在转移后粘附和 平衡。用试验培养基制备药物的稀释梯度并以DMSO作稀释对照，取 50μl转入一式三份的培养物中，再加入50μl试验培养基，使总体 积达到200μl，继续在37C 5％CO2的湿润培养箱内培养48小时， 用氚化的胸腺嘧啶脉冲计1μCi/孔标记4小时。将培养物在-70℃冷 冻24小时中止培养，然后融化，用Skatron半自动细胞收集仪收集微 培养物，样品用Wallac BetaPlace计数器记录其液闪。 DMBA-诱导的乳腺癌抑制

在购自Harlan Industries，Indianapolis，Indiana的雌性Sprague- Dawley大鼠中诱导产生雌激素依赖型乳腺肿瘤。约55龄日的大鼠被一 次性喂入20mg 7，12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA)，在DMBA给药 约6周后，每周对乳腺进行触检，观察肿瘤是否出现。一旦一个或多个 肿瘤出现，用卡尺测量每个肿瘤的最大和最小直径，记录测量数据， 然后将这个动物选用于试验。尽量将不同大小的肿瘤均匀地分配在处 理组和对照组中使平均大小的肿瘤在各试验组中等量分布。每次试验 对照组和试验组含有5至9只动物。

通式I的化合物既可在2％的阿拉伯胶中腹膜注射给药，又可经口 给药。经口给药的化合物既可溶解也可悬浮在0.2ml的玉米油中。每 次试验，包括阿拉伯胶和玉米油对照试验，都每天每只动物给药一次。 在最初的肿瘤测量和动物选用后，用前面所提到的方法每星期对肿瘤 进行测量。对动物的处理和测量持续3至5周，然后测出肿瘤的最后区 域。对每一个化合物处理的大鼠的和对照处理的大鼠，确定平均肿瘤 区域的变化。 子宫纤维病变试验程序 试验1

在3-20名患有子宫纤维病变的妇女中，用本发明的一个化合物进 行给药，化合物剂量为0.1-1000mg/天，给药期为3个月。

在给药期及中止给药后三个月内，观察药物对这些妇女的子宫纤 维病变的影响。 试验2

除给药期为6个月外，步骤与试验1相同。 试验3

除给药期为1年外，步骤与试验1相同。 试验4 A.在豚鼠中诱导纤维瘤

通过长期雌激素刺激在性成熟的雌性豚鼠中诱导子宫纤维瘤。给 动物每星期3-5次注射雌二醇共2-4个月或直到肿瘤形成。处理包括采 用本发明的化合物或载剂进行每日给药共3-16周，然后处死动物，取 出子宫分析肿瘤的消退。 B.在裸鼠中移植人的子宫纤维病变组织

将人的子宫纤维瘤组织移植到性成熟的阉割的雌性裸鼠腹膜腔或 子宫肌层中，给予外源雌激素来诱导移植组织的生长。在某些情况下， 收集的肿瘤细胞在移植前进行体外培养。处理包括用本发明的化合物 或载剂进行灌胃，每日一次共3-16周，取出移植物，测量其生长或消 退。在处死动物时，收集子宫评价器官的状态。 试验5 A.收集人子宫纤维瘤的组织，在体外按原代未转化的培养物进行维 持。手术样品需通过一个无菌的网孔或筛孔，或从周围组织中挑出制 成单细胞悬液。细胞维持在含10％血清和抗生素的培养基中。确定细 胞在有或无雌激素时的生长率。分析细胞产生补体C3成分的能力和对 生长因子与生长激素的应答。在用孕激素、GnRH、本发明的一种化 合物和载剂处理后评价体外培养物的增殖应答。每星期通过评价甾醇 类激素受体的水平来确定重要的细胞特征在体外是否保持。共使用5- 25个病人的组织。

在上述试验中至少一个试验里表现出活性就表明本发明的化合物 在治疗子宫纤维病变方面是有前途的。 子宫内膜异位试验步骤

在试验1和试验2中，本发明的化合物在给药14天和21天后对移 植子宫内膜组织生长的影响能够被检验。 试验1

12-30只成年CD株雌性大鼠用作试验动物，它们被分为数量相等 的三个组，所有动物的动情周期受到监测。在动情前期对每只雌鼠进 行手术，将每组雌鼠的左侧子宫角取出，切成小块，将这些小块松驰 地缝于靠近肠系膜血流的多个位点上，同时将第二组雌鼠的卵巢切除。

从手术后第二天开始，给第一组和第二组的动物腹膜腔注射水共 14天，而给第三组的动物按1.0mg/公斤体重腹膜腔注射本发明的化合 物同样长的时间。经过14天的处理，处死每只雌鼠，取出子宫内膜移 植物、肾上腺、残留的子宫和可取得的卵巢，准备用于组织学检查。 对卵巢和肾上腺进行称重 试验2

12-30只成年CD株雌性大鼠用作试验动物，它们被分为相同的二 个组，所有动物的动情周期受到监测。在动情前期对每只雌鼠进行手 术，将每组雌鼠的左侧子宫角取出，切成小块，将这些小块松驰地缝 于靠近肠系膜血流的多个位点上。

手术大约50天后，给第一组动物腹膜腔注射水共21天，而给第二 组的动物按1.0mg/公斤体重腹膜腔注射本发明的化合物同样长的时 间。经过21天的处理，处死每只雌鼠，取出子宫内膜移植物和肾上腺 并称重，测量移植物作为生长的标志。监测动物的动情周期。 试验3 A.子宫内膜异位症的手术诱导

用自体子宫内膜组织在大鼠和/或兔中诱导子宫内膜异位症。对繁 殖力成熟的雌性动物作双侧卵巢切除，并外源给予雌激素来提供一个 特定而恒定的激素水平。将50-150只动物的自体子宫内膜组织移植到 腹膜内，给予雌激素诱导移植组织的生长。处理包括每日用灌胃的方 法给予本发明的化合物共3-16周。取出移植物，测量其生长或消退。 在处死动物时，收集完整的子宫角来评价子宫内膜的状态。 B.在裸鼠中移植人的子宫内膜组织

将人子宫病灶的组织移植到性成熟的阉割的雌性裸鼠腹膜中。给 予外源雌激素诱导移植组织的生长。在某些情况下，收集的子宫内膜 细胞在移植前进行体外培养。处理包括用本发明的化合物进行灌胃， 每日一次，共3-16周。取出移植物，测量其生长或消退。在处死动物 时，收集子宫来评价完整子宫内膜的状态。 试验4 A.收集取自人子宫内膜病灶的组织，在体外按原代未转化培养物进行 维持。手术样品需通过一个无菌的网孔或筛孔，或从周围组织中挑出 制成单细胞悬液。细胞维持在含10％血清和抗生素的培养基中。确定 细胞在有或无雌激素时的生长率，分析细胞产生补体C3成分的能力和 对生长因子与生长激素的应答。在用孕激素、GnRH、本发明的一种 化合物和载剂处理后评价体外培养物的增殖应答。每星期通过评价甾 醇类激素受体的水平来确定重要的细胞特征在体外是否保持。共使用 5-25个病人的组织。

在上述任何试验中具有活性就表明本发明的化合物对治疗子宫内 膜异位症是有用的。 抑制动脉平滑细胞增生/再狭窄试验程序

本发明的化合物能抑制动脉平滑细胞的增生，这可以用培养的取 自兔动脉的平滑细胞来证明。增生用测量DNA合成来确定。细胞用 Ross描述的移出方法获得，方法见Ross，《细胞生物学杂志》(J.of Cell Bio.)50卷172页(1971)。将细胞铺于96孔微培养板5天，培养物开始 汇合，生长停滞，然后将细胞转移到含有0.5-2％低血小板血浆、2mM L-谷氨酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素、1mC/ml3H-胸腺 嘧啶、20ng/ml血小板衍生的生长因子及各种浓度的本发明的化合物 的Dulbecco’s改良Eagle’s培养基(DMEM)中。化合物的贮存液用 二甲基亚砜制备，然后用上述试验培养基稀释到合适的浓度(0.01-30 mM)。细胞在37℃、5％CO2/95％空气的条件下培养24小时。24 小时后，将细胞在甲醇中固定。然后按Bonin等人描述的方法用闪烁计 数确定DNA中3H-胸腺嘧啶的掺入。Bonin等， Exp.Cell Res.181：475- 482(1989)。

本发明的化合物对动脉平滑肌细胞增生的抑制，还可以进一步用 其对对数生长期细胞的影响来证明。将取自兔动脉的平滑肌细胞接种 在12孔组织培养板上。培养基为补加有10％牛胎血清、2mM L-谷氨 酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素的DMEM培养基。24小时 后，细胞贴附，用含10％牛胎血清、2mM L-谷氨酸、100U/ml青霉 素、100mg/ml链霉素和所需浓度化合物的DMEM取代原来的培养 基，让细胞生长4天。用胰蛋白酶处理。每一培养物中细胞的数量用一 个ZM-Coulter计数器确定。

在上述试验中具有活性表明本发明的化会物在治疗再狭窄中有潜 力。

本发明还提供一种治疗妇女绝经后综合症的方法。该方法包括前 面所说的使用通式I化合物的方法，并进一步包括给予妇女有效剂量的 雌激素或孕激素。这些疗法对治疗骨质疏松症和降低血胆甾醇特别有 效，因为病人可以获得每种药剂带来的益处，而本发明的化合物又能 抑制雌激素和孕激素的不必要副作用。在下面任何绝经后综合症的试 验中联合治疗有作用，就表明这些治疗对缓解妇女绝经后综合症是有 用的。

雌激素和孕激素的多种形式都可由商业途径获得。雌激素类药剂 包括乙炔雌激素(0.01-0.03mg/天)、美雌醇(0.05-0.15mg/天)和共 轭雌激素类激素，如共轭雌激素(Wyeth-Ayerst；0.3-2.5mg/天)。孕 激素类药剂包括甲基孕甾酮，如Provera(Upjohn，2.5-10mg/天)、 异炔诺酮(1.0-10.0mg/天)和炔诺酮(0.5-2.0mg/天)；优选的雌激 素类化合物药物是共轭雌激素，而异炔诺酮和炔诺酮是优选的孕激素 类药物。

每种雌激素类药物和孕激素类药物的给药方法与本领域中已知的 方法一致。对本发明的大多数方法来说，通式I的化合物连续给药，每 天1-3次。但在治疗子宫内膜异位症时特别有效的是周期给药，或在疾 病引起疼痛时及时给药。在再狭窄的病例中，药物治疗应限于治疗程 序如血管形成术后的短时间内(1-6个月)。

在这里，“有效剂量”一词是指能够缓解这里描述的多种病理情 况的本发明化合物的量。当然，根据本发明的化合物给药的特定剂量 应由病例的特殊情况来确定，这些情况包括所给的化合物、给药途径、 病人情况、需治疗的病情。一般每日剂量可为无毒剂量水平，包括大 约5mg-600mg/天的本发明的化合物。优选的剂量范围是大约15mg-80 mg/天。

本发明的化合物可经多种途径给药，包括口、直肠、皮内、皮下、 静脉、肌肉和鼻腔。优选这些药物在给药前配制。选用何种药物应由 主治医师决定。这样本发明的另一个方面是一个药用组合物，包括有 效剂量的一个通式I的化合物或其可药用的盐类，任选地含有有效剂量 的雌激素或孕激素，以及可药用的载剂、稀释剂或赋形剂。

在这样的配方中，总的活性成分占配方重量的0.1％-99.9％。“可 药用”一词表示载剂、稀释剂、赋形剂及盐类必须与配方中其它成分 匹配，而且对接受者无害。

本发明的配方能按本领域已知的步骤用众所周知的易获得的成分 进行配制。例如通式I的化合物，与或不与雌激素或孕激素化合物一 起，能同常用的赋形剂、稀释剂或载剂一起配制，制成片剂、胶囊、 悬液、粉剂等。适于这种配方的赋形剂、稀释剂和载剂的实例包括如 下：填料和扩增剂，如淀粉、蔗糖、甘露醇、硅的衍生物；粘合剂， 如羧甲基纤维素及其它纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷 酮；保湿剂，如甘油；分散剂，如碳酸钙、碳酸氢钠；阻溶剂，如石 蜡；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇、甘油单 硬脂酸酯；吸收载剂，如陶土和皂土；以及润滑剂，如滑石、硬脂酸 钙和镁及固体聚乙二醇。

这些化合物还可以配制成甘香剂或便于口服的溶液，或配制成便 于非肠道给药(如肌肉内、皮下或静脉给药的溶液。而且这些化合物 非常适合配制成持续释放的药剂形式。还可以这样组合配制：使其活 性成分只在或优选在特定的生理位置释放，并可能是一段时间之后释 放。药物的外衣、被膜或保护性基质能用聚合物或蜡等制成。

通式I的化合物，单独或者与本发明的药剂组合一般都以方便的配 方进行给药，下面所举的配方仅为进行说明，并不是为了限制本发明 的范围。

                         配方 在下面的配方中，“活性成分”表示通式I的一种化合物或其盐或溶 剂化物 配方1：明胶胶囊 硬明胶胶囊用如下方法制备 成分                         量(mg/胶囊) 活性成分                      0.1-1000 淀粉，NF                        0-650 淀粉可流动粉末                  0-650 硅氧烷流体350厘沲               0-15

上面的配方可根据所提供的合理变化而改变。

一种片剂配方用下面成分制备： 配方2：片剂 成分                         量(mg/片) 活性成分                     2.5-1000 纤维素微晶                   200-650 二氧化硅雾化                  10-650 硬脂酸                         5-15 将各成分混合压制成片剂

或，每片含2.5-1000mg活性成分的片剂制备如下： 配方3：片剂 成分                         量(mg/片) 活性成分                      25-1000 淀粉                            45 纤维素微晶                      35 聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液)    4 羧甲基纤维素钠                  4.5 硬脂酸镁                        0.5 滑石                            1

活性成分、淀粉、纤维素过美国筛号45目的筛并充分混合，将聚 乙烯吡咯烷酮溶液与得到的粉末混合并过美国筛号14目的筛。产生的 颗粒在50℃-60℃干燥并过美国筛号18目的筛。羧甲基淀粉钠、硬脂 酸镁和滑石先过美国筛号60目的筛，然后加入到颗粒中，混匀后在压 片机上制成片剂。

含0.1-1000mg药剂的5ml悬液制备如下： 配方4：悬液 成分                量(mg/5ml) 活性成分            0.1-1000mg 羧甲基纤维素钠        50mg 糖浆                  1.25mg 苯甲酸溶液            0.10mL 香剂                  q.v. 色剂                  q.v. 加纯水至              5ml

药剂先过美国筛号45目的筛，然后与羧甲基纤维素钠和糖浆混 合，形成调匀的糊状物。用少许水稀释苯甲酸溶液、香剂和色剂，并 加入糊状物，搅拌，然后加足量的水调至所需体积。 含有下述成分的气溶胶溶液制备如下： 配方5：气溶胶 成分               量(重量百分数) 活性成分                0.25 乙醇                   25.75 推进剂22(氯二氟甲烷)   70.00

将活性成分与乙醇混合，然后加入部分推进剂22，冷却到30℃， 转入一个填充装置中，将所需数量注入一个不锈钢容器，用剩下的推 进剂稀释，然后在容器上安装阀门。 栓剂制备如下： 配方6：栓剂 成分                     量mg/栓剂 活性成分                    250 饱和脂肪酸甘油酯           2000

活性成分过美国筛号60目的筛，并悬于预先用最低必需温度熔化 的饱和脂肪酸甘油酯中，混合物注入一个2克容量的栓剂模中，冷却。 一种静脉注射液配方制备如下： 配方7：静脉注射液 成分                        量 活性成分                   50mg 等渗盐水                 2000ml

含上述成分的溶液，可以大约每分钟1ml的速度对病人进行静脉 给药。 配方8：组合胶囊I 成分                    量(mg/胶囊) 活性成分                   50 共轭雌激素                 1 微晶纤维素pH101            50 淀粉1500                   117.50 硅油                       2 吐温80                     0.50 亚微观硅石                 0.25 配方9：组合胶囊II 成分                    量(mg/胶囊) 活性成分                   50 异炔诺酮                   5 微晶纤维素pH101            82.50 淀粉1500                   90 硅油                      2 吐温80                    0.50 配方10：组合片剂 成分                   量(mg/胶囊) 活性成分                  50 共轭雌激素                1 玉米淀粉NF                50 聚维酮K29-32              6 微晶纤维素pH101           41.50 微晶纤维素pH102           136.50 交联聚维酮XL10            2.50 硬脂酸镁                  0.50 亚微观硅石                0.50