一种棉花等农作物根部病害防治的生物农药复合菌剂及制
备方法
技术领域
背景技术
[0002] 农作物和其他生物一样，体内、体表和根茎叶等各部分都存在病原菌和对
植物有益的微生物体系，不同的微生物之间存在着拮抗、寄生和竞争等各种各样的关系。
[0003] 植物病害的防治是通过直接的或间接的一种乃至多种生物因素，以消弱或减少病原生物的接种数量与活动，或者促进植物生长发展，从而达到减轻病害并提高产品数量和
质量的目的。参与植物病害
生物防治的微生物有
真菌、细菌和放线菌。
[0004] 抗生素是微生物产生的，在低浓度下对其它微生物有抑制杀灭作用的一类非酶类化学物质。放线菌是抗生素等一系列
生物质的重要生产者，目前世界药物市场上67％抗生素，产品来源于微生物，其中2/3又是放线菌产生的，我国农用抗生素是随着医用抗生素之后发展起来的，其中一些品种已达到世界先进
水平，取得巨大效益。
[0005] 国内微生物制剂防治土传病害近年发展很快，在防治水稻稻瘟病、草莓病毒病、小麦纹枯病、菜油菌核病效果明显，并增产10％-50％。如，研制的生物制剂“清枯散”对番茄青枯病，
烟草青枯病有效率达到80％，并有10％增产效果。
[0006] 利用特殊功能微生物和微生物菌团，进行抑制和杀灭有害病菌和病毒，将是人类治理生态环境的最有效和最有利的技术方法。
[0007] 我国人口众多，食品需求巨大，我国用占世界百分之七的耕地，养活了世界百分之二十二的人口，除坚持18亿亩耕地的红线外，主要是增大复种指数，提高单位面积产量，来实现自足的目标。
[0008] 但是，长期复种，
土壤肥
力减少，土壤土传病害治理和发生严重，有些已经失去再利用的程度。所以，研究土壤病害治理和解决农作物根部病害，成为目前农业生产的重要课题之一。
[0009] 国外发达国家在农业中也同样存在这一问题，由于他们人口少，耕地面积大，采用休耕，伦耕方法即可解决土传病害发生问题，社会及生产负担较轻。
[0010] 土壤危害中部分土传病害具有危害大、危害时间长、治理难的特点。棉花枯黄萎病，果树根腐病，蔬菜的根腐病，草莓病毒病都是长期影响农业生产的主要病害，长期以来人们投入了极大的力量，采用了很多方法，但是仍作用不大。
发明内容
[0011] 本发明所要解决的技术问题是提供一种
微生物农药，尤其提供一种棉花等农作物根部病害防治的生物农药及制备方法，这是一种强力微生物菌剂的抗生素
发酵产物，能有效地作用于防治棉花等农作物根部病害的生物农药。
[0012] 本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
[0013] 一种棉花等农作物根部病害防治的生物农药菌剂，是由以下8种产抗生素的微生物制备而成，所述微生物菌种，选自以下其中任意3-7个微生物菌种的组合：
[0014] (1)Streptomyces albido flavus(Rossi Doria1891)Waksman and Henrici1948白钩链霉菌(白丘链霉菌)ACCL40142←广东省微生物研究所←中科院微生物研究所；＝GIM4.3＝CGMCC4.252；产庆大霉素；培养基：0012；培养
温度：28℃；
[0015] (2)Streptomyces ambo faciens Pinnert-Sindico1954 产 二 素 链 霉 菌ACCL40133B←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.782；产螺旋霉素、刚果霉素，
淀粉水解强，
纤维素上生长好；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0016] (3)Streptomyces cel lulosae(Krainsky1914)Waksman and Henrici1948
纤维素链霉菌ACCC40131←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.437；产链霉菌素和放线菌素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0002；培养温度：30℃；
[0017] (4)Streptomyces hygroscopicus subsp.jinggangensis Yan et al.吸水链霉菌井岗变种ACCC40051←中国农业科学院
原子能利用研究所←浙江宜兴生物农药厂；产井冈霉素防治水稻纹枯病；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0018] (5)Streptomyces microaureus小金色链霉菌ACCC40060←中科院微生物研究所←上海农药厂；＝AS4.1057；产生春雷霉素防治水稻稻瘟病；培养基：0002；培养温度：28～30℃；
[0019] (6)Streptomyces sp.链霉菌ACCC40134←德国微生物及细胞系保藏中心(DSMZ)；＝DSM40511；产生蛎灰菌素(属美加霉素类群)，抗G+细胞；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0020] (7)“Streptomyces jingyangensis”Tao et al.泾阳链霉菌ACCC40059←中国农业科学院原子能利用研究所；原始编号：103A2；产生长刺
激素；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0021] (8)Streptomyces rimosus Sobin et al.1953龟裂链霉菌ACCC40031←中国农业科学院土壤
肥料研究所；原始编号：1013；产生四烯类抗菌素，能防治棉花苗期病害，可作抗生菌肥料的形式施用于土壤；培养基：0012；培养温度：28～30℃。
[0022] 本发明还所述复合菌剂还包括进一步选取如下第9种菌种的菌液：(9)ACCC40059←中国农业科学院原子能利用研究所；原始编号：103A2；产生长刺激素；培养基：0012；培养温度：28～30℃菌种可产生较强生物激素；可与上述复合菌剂配合组成组合菌剂，在杀菌的同时促进作物增产。
[0023] 本发明还提供了所述农作物根部病害防治的生物农药菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0024] (1)取所述沙土管菌种，试管斜面
种子菌筛选；平面培养皿观察；斜面复壮菌种，扩大培养；
[0025] (2)液体摇床培养；小型种子罐单菌液培养；液体摇床培养；大型生物
发酵罐混合菌液培养；镜检；
装瓶即得成品。
[0026] 所述扩大培养是将原菌种进行生物实验室无菌培养，筛选优良菌株进试管，摇床培养；小型种子罐，如20升；大型生物发酵罐，如1000升扩大培养；所述在1000升发酵罐中的发酵温度为28-30℃，经过5-6天发酵，菌液达到每20亿/毫升微生物单位时，即达到高浓度成品菌剂标准。
[0027] 首先将9个单菌种采用摇床扩大培养，再将9个菌液进行1∶1物料的混合发酵。
[0028] 所述扩大培养是高浓度发酵培养，选用改进培养基配方：KNO21克，NaCl0.5克，MgSO4·7H2O0.5克，K2HPO40.4克，FeSO4·7H2O0.01克，内膏3克，蛋白胨5克，可溶性淀粉20克，无菌水1000ml，琼脂20克，PH7.3；
[0029] 本发明还提供了所述生物农药菌剂在棉花
播种浸种杀菌方面的应用，可在棉籽或其它农作物播种前用于浸种、拌种或配制到生物种肥中；防治作物根部病害有效率达65-90％。
[0030] 本发明具有以下有益技术效果：
[0031] 1.本发明选取9种微
生物工程菌，这些微生物工程菌能产生多种主要功能的抗生素，如大庆霉素、
链霉素、螺旋霉素、春雷霉素、井岗霉素和加美霉素等，选用的可产生抗生素的菌种，是医用中功能较强、应用比较广泛的菌种，具有杀灭棉花等作物根部病害的能力，是产抗生素的菌种组合。将所述工程菌混合发酵，生成强力抗生素集团，能对引起土壤传播
疾病难症的病原菌进行防治和杀灭，对棉花的黄萎病及其它农作物根部病害有良好
治疗作用，尤其对目前复种指数高、
轮作套种
密度大的田
块和各种
温室、大棚、保护地栽培的耕地中多种土传病害及根部病害有较强的防治作用，防治效率达到65-90％。同时，促进了农作物健康生长及丰收。
[0032] 2.本发明是筛选的9种产生强力抗生素具有杀菌作用的微生物菌种制成的复合生物农药，采用改进的培养基配方经过生物扩大培养的方法制备而成，还进一步配制成多种应用的生物农药菌剂，对棉花等农作物根部病害具有良好的防治效果，同时具有促进作物生长的作用。即，具有两大功能：一是可产六个抗生素、起到抑制农作物病害，杀灭有害病菌的作用；二是促进作物生长和增产的作用。既防治了农作物病害，又促进了增产，这是一个组合功能的创新。
具体实施方式
[0034] 一种农作物根部病害防治的生物农药菌剂，是由以下8种产抗生素的微生物菌种制备而成的菌剂：
[0035] (1)Streptomyces albido flavus(Rossi Doria1891)Waksman and Henrici1948白钩链霉菌(白丘链霉菌)ACCL40142←广东省微生物研究所←中科院微生物研究所；＝GIM4.3＝CGMCC4.252；产庆大霉素；培养基：0012；培养温度：28℃；
[0036] (2)Streptomyces ambo faciens Pinnert-Sindico1954 产 二 素 链 霉 菌ACCL40133B←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.782；产螺旋霉素、刚果霉素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0037] (3)Streptomyces cel lulosae(Krainsky1914)Waksman and Henrici1948纤维素链霉菌ACCC40131←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.437；产链霉菌素和放线菌素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0002；培养温度：30℃；
[0038] (4)Streptomyces hygroscopiCus subsp.jinggangensis Yan et al.吸水链霉菌井岗变种ACCC40051←中国农业科学院原子能利用研究所←浙江宜兴生物农药厂；产井冈霉素防治水稻纹枯病；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0039] (5)Streptomyces microaureus小金色链霉菌ACCC40060←中科院微生物研究所←上海农药厂；＝AS4.1057；产生春雷霉素防治水稻稻瘟病；培养基：0002；培养温度：28～30℃；
[0040] (6)Streptomyces sp.链霉菌ACCC40134←德国微生物及细胞系保藏中心(DSMZ)；＝DSM40511；产生蛎灰菌素(属美加霉素类群)，抗G+细胞；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0041] (7)“Streptomyces jingyangensis”Tao et al.泾阳链霉菌ACCC40059←中国农业科学院原子能利用研究所；原始编号：103A2；产生长刺激素；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0042] (8)Streptomyces rimosus Sobin et al.1953龟裂链霉菌ACCC40031←中国农业科学院土壤肥料研究所；原始编号：1013；产生四烯类抗菌素，能防治棉花苗期病害，可作抗生菌肥料的形式施用于土壤；培养基：0012；培养温度：28～30℃。
[0043] 所述复合菌剂制备方法：
[0044] (1)从国家农业菌种保藏中心购回8种沙土管菌种，在生物实验室内的无菌条件下，接入试管斜面培养基上种子菌筛选，进行平面培养皿观察活力和纯度；再将良好菌株转入平板培养皿经过镜检，斜面复壮菌种；将提纯复壮后的菌种进行扩大培养；
[0045] (2)液体摇床培养；20升小型种子罐单种菌液培养；液体摇床培养；1000升大型生物发酵罐，将上述单种菌液按1∶1比例制成混合菌液培养，发酵温度30℃，经过5天发酵，所述扩大培养的改进培养基配方：KNO21克，NaCi0.5克，MgSO4·7H2O0.5克，K2HPO40.4克，FeSO4·7H2O0.01克，内膏3克，蛋白胨5克，可溶性淀粉20克，无菌水1000ml，琼脂20克，PH7.3；当菌液达到每20亿/毫升微生物单位时，即达到高浓度成品菌剂标准。镜检；装瓶即得。
[0046] 制得的微生物菌剂可产生抗生素井冈霉素，井冈霉素是一种由糖和
氨基结合的假糖类化合物。水稻纹枯病菌
接触到井冈霉素后，误认为糖类化合物，吸收到菌丝体内，从菌丝的一端转到另一端，作为分枝，干扰菌丝的正常生长，使纹枯病菌失去致病能力，并对棉花、蔬菜、人参等立枯病有良好的防治效果，对玉米大小叶斑病治疗结果良好。
[0047] 实施例2
[0048] 一种农作物根部病害防治的生物农药菌剂，是由以下3种产抗生素的微生物菌种制备而成的菌剂：
[0049] (1)Streptomyces albido flavus(Rossi Doria1891)Waksman and Henrici1948白钩链霉菌(白丘链霉菌)ACCL40142←广东省微生物研究所←中科院微生物研究所；＝GIM4.3＝CGMCC4.252；产庆大霉素；培养基：0012；培养温度：28℃；
[0050] (3)Streptomyces cellulosae(Krainsky1914)Waksman and Henrici1948纤维素链霉菌ACCC40131←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.437；产链霉菌素和放线菌素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0002；培养温度：30℃；
[0051] (5)Streptomyces microaureus小金色链霉菌ACCC40060←中科院微生物研究所←上海农药厂；＝AS4.1057；产生春雷霉素防治水稻稻瘟病；培养基：0002；培养温度：28～30℃；
[0052] 制备方法同实施例1，不同在于：只选用了3种菌种来制备。发酵罐发酵温度25℃，经过7天发酵；当菌液达到每20亿/毫升微生物单位时，即达到高浓度成品菌剂标准。
[0053] 该实施例微生物菌剂可产生抗生素春雷霉素，春雷霉素通过干扰菌
体细胞的氨酰核糖体亚单位结合，阻止氨基酸形成肽链，当菌丝接触到春雷霉素时，病菌菌丝变肥大，伸长停止，因而达到防病的目的。春雷霉素对水稻叶瘟病，穗颈瘟病疗效良好。所述菌剂对高梁
炭疽病，果树、蔬菜叶霉病，
苹果黑星病，甜菜的褐斑病有显著疗效。
[0054] 实施例3
[0055] 一种农作物根部病害防治的生物农药菌剂，是由以下9种产抗生素的微生物菌种制备而成的菌剂：
[0056] (1)Streptomyces albido flavus(ROssi Doria1891)Waksman and Henrici1948白钩链霉菌(白丘链霉菌)ACCL40142←广东省微生物研究所←中科院微生物研究所；＝GIM4.3＝CGMCC4.252；产庆大霉素；培养基：0012；培养温度：28℃；
[0057] (2)Streptomyces ambo faciens Pinnert-Sindico1954 产 二 素 链 霉 菌ACCL40133B←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.782；产螺旋霉素、刚果霉素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0058] (3)Streptomyces cellulosae(Krainsky1914)Waksman and Henrici1948纤维素链霉菌ACCC40131←中国农业科学院土肥所←中科院微生物研究所；＝AS4.437；产链霉菌素和放线菌素，淀粉水解强，纤维素上生长好；培养基：0002；培养温度：30℃；
[0059] (4)Streptomyces hygroscopicus subsp.j inggangens i s Yan et al.吸水链霉菌井岗变种ACCC40051←中国农业科学院原子能利用研究所←浙江宜兴生物农药厂；产井冈霉素防治水稻纹枯病；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0060] (5)Streptomyces microaureus小金色链霉菌ACCC40060←中科院微生物研究所←上海农药厂；＝AS4.1057；产生春雷霉素防治水稻稻瘟病；培养基：0002；培养温度：28～30℃；
[0061] (6)Streptomyces sp.链霉菌ACCC40134←德国微生物及细胞系保藏中心(DSMZ)；＝DSM40511；产生蛎灰菌素(属美加霉素类群)，抗G+细胞；培养基：0012；培养温度：30℃；
[0062] (7)“Streptomyces jingyangensis”Tao et a1.泾阳链霉菌ACCC40059←中国农业科学院原子能利用研究所；原始编号：103A2；产生长刺激素；培养基：0012；培养温度：28～30℃；
[0063] (8)Streptomyces rimosus Sobin et al.1953龟裂链霉菌ACCC40031←中国农业科学院土壤肥料研究所；原始编号：1013；产生四烯类抗菌素，能防治棉花苗期病害，可作抗生菌肥料的形式施用于土壤；培养基：0012；培养温度：28～30℃。
[0064] (9)ACCC40059←中国农业科学院原子能利用研究所；原始编号：103A2；产生长刺激素；培养基：0012；培养温度：28～30℃菌种可产生较强生物激素；。
[0065] 所述复合菌剂制备方法：
[0066] (1)从国家农业菌种保藏中心购回9种沙土管菌种，方法同实施例1所述发酵温度28℃，经过6天发酵；当菌液达到每20亿/毫升微生物单位时，即达到高浓度成品菌剂
