一种小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法
专利汇可以提供一种小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及小鼠培育技术领域，且公开了一种小鼠 体外受精 试剂 及其制备方法和体外受精方法，包括NACL5.8～6.0g、KCL0.4～0.5g、KH2PO4 0.038～0.045g、MgSO4.7H2O 0.088～0.095g、丙 酮 酸 钠0.03～0.04g、 葡萄糖 0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～0.35g、BSA4～5g、 牛 磺酸0.30～0.312g和双抗（100x）5.4～5.6ML，还包括GlutaMAX和EDTA（5%）。该小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法，结合现有的受精试剂的基料配方，进行改进，能使小鼠的受精效率大大提高，具有很好的应用前景，解决了现有的受精试剂在应用于小鼠测验时，国内的试剂受精效率较低，会耗费大量相关试剂，而国外试剂价格较为昂贵，并不适用于对小鼠的大量培育测验的问题。，下面是一种小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法专利的具体信息内容。
1.一种小鼠体外受精试剂，其特征在于，包括NACL5.8～6.0g、KCL0.4～0.5g、KH2PO4
0.038～0.045g、MgSO4.7H2O 0.088～0.095g、丙酮酸钠0.03～0.04g、葡萄糖0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～0.35g、BSA4～5g、牛磺酸0.30～0.312g和双抗（100x）5.4～5.6ML。
2.根据权利要求1所述的一种小鼠体外受精试剂，其特征在于，还包括GlutaMAX和EDTA（5%）。
3.一种小鼠体外受精试剂的制备方法，其特征在于，使用如权利要求1或2所述的受精试剂，包括以下步骤：
1）取出1L容量的玻璃皿，称量800ML双氧水放入1L玻璃皿中，再依次称量NACL5.8～
6.0g、KCL0.4～0.5g、KH2PO4 0.038～0.045g、MgSO4.7H2O 0.088～0.095g、丙酮酸钠0.03～0.04g、葡萄糖0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～
0.35g、BSA4～5g和牛磺酸0.30～0.312g放入玻璃皿中进行溶解；
2）再称量双抗（100x）5.4～5.6ML、GlutaMAX和EDTA（5%）依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
4.一种小鼠体外受精方法，其特征在于，使用如权利要求3所述受精试剂，包括以下步骤：
1）取用多个培养皿，在精子培养皿和受精培养皿中分别滴入1个0.2ml的HTF试剂液和2个0.1ml的HTF试剂液，后用矿物油或者石蜡油封面，并将培养皿置于培养箱中培养，处于温度37℃、含有5%CO2和95%湿度下；
2）取小鼠的精子放入平衡后的精子培养皿中培养获能；
3）取小鼠的卵子放入平衡后的受精培养皿中，然后用微量移液器取步骤（2）中获能后的精子放入受精培养皿中；
4）将受精培养皿置于37℃和含5％CO2的培养箱中培养。
5.如权利要求4所述的小鼠体外受精方法，其特征在于，精子获能培养皿放入37℃和含
5％CO2培养箱中培养，精子获能时间为60分钟。
6.如权利要求4所述的小鼠体外受精方法，其特征在于，取卵子的方法包括以下步骤：
1）小鼠按每只5IU剂量注射PMSG和HCG先后进行超排，间隔时间为二十四小时；
2）在注射HCG后约15－17小时处死经过超数排卵处理的供体母鼠，用精细镊子固定住输卵管并用解剖针刺破输卵管的膨大部，带出卵母细胞团至受精培养皿中。
一种小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法
技术领域
背景技术
发明内容
0.095g、丙酮酸钠0.03～0.04g、葡萄糖0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～
4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～0.35g、BSA4～5g、牛磺酸0.30～0.312g和双抗（100x）5.4～
5.6ML。
6.0g、KCL0.4～0.5g、KH2PO4 0.038～0.045g、MgSO4.7H2O 0.088～0.095g、丙酮酸钠0.03～0.04g、葡萄糖0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～
0.35g、BSA4～5g和牛磺酸0.30～0.312g放入玻璃皿中进行溶解；
2）再称量双抗（100x）5.4～5.6ML、GlutaMAX和EDTA（5%）依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
2）取小鼠的精子放入平衡后的精子培养皿中培养获能；
3）取小鼠的卵子放入平衡后的受精培养皿中，然后用微量移液器取步骤（2）中获能后的精子放入受精培养皿中；
4）将受精培养皿置于37℃和含5％CO2的培养箱中培养。
2）在注射HCG后约15－17小时处死经过超数排卵处理的供体母鼠，用精细镊子固定住输卵管并用解剖针刺破输卵管的膨大部，带出卵母细胞团至受精培养皿中。
该小鼠体外受精试剂及其制备方法和体外受精方法，在制备小鼠受精试剂时，除基本配备小鼠受精试剂原料外，本发明通过加入EDTA和GlutaMAX，可在受精试剂在制备时，增强其试剂的稳定性，有益于增强其受精试剂的受精效率，结合对小鼠体外受精方法操作，使得受精试剂用于小鼠的培育成功率更高，并且该受精试剂的基料成本并不高，可使试剂能适应并用于小鼠的大量测验上。
具体实施方式
6.0g、KCL0.4～0.5g、KH2PO4 0.038～0.045g、MgSO4.7H2O 0.088～0.095g、丙酮酸钠0.03～0.04g、葡萄糖0.55～0.6g、NaCO3 2.1～2.15g、乳酸钠4.19～4.641g、CaCL2.2H2O 0.3～
0.35g、BSA4～5g和牛磺酸0.30～0.312g放入玻璃皿中进行溶解；
2）再称量双抗（100x）5.4～5.6ML、GlutaMAX 3.0～3.2ML和EDTA（5%）0.15-0.25ML依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
2）取用多个培养皿，在精子培养皿和受精培养皿中分别滴入1个0.2ml的HTF试剂液和2个0.1ml的HTF试剂液，后用矿物油或者石蜡油封面，并将培养皿置于培养箱培养，处于温度
37℃、含有5%CO2和95%湿度下；
3）取成熟雄鼠（3－6月龄）2～3只，处死后采取其附睾尾部，尽可能地去除其周围的脂肪、血液和组织液等；将附睾尾部放在无菌过滤纸上，除净其血液和组织液，将附睾尾部移入精子培养皿中，用精细镊子夹住附睾尾部，再取解剖针，交替向前挤压，挤出附睾尾部的精子团，用一解剖针将挤出的精子团导入到过夜的HTF培养液中，并将培养皿放入37℃、含
5％CO2培养箱中培养60分钟获能；
4）在注射HCG后约15－17小时处死经过超数排卵处理的供体母鼠，打开腹腔，取出输卵管，尽可能的减少血液、组织液和脂肪等，将输卵管置于灭菌过滤纸上，擦去血迹和组织液等，将输卵管置于受精培养皿中，用一把精细镊子固定住输卵管，用一把解剖针刺破输卵管的膨大部，带出卵母细胞团至HTF培养液中，然后用微量移液器取步骤（2）中获能后的精子放入受精培养皿中；
5）将受精培养皿置于37℃,含5％CO2的培养箱中培养，受精5－6小时后，用新鲜的M2培养液清洗3次，并观察胚胎；
6）在37℃,含5％CO2的培养箱中培养18－22小时后，对分裂的卵进行计数，可以移植或者进行胚胎冷冻。
4.19、CaCL2.2H2O 0.3、BSA4和牛磺酸0.30放入玻璃皿中进行溶解；
2）再称量双抗（100x）5.4、GlutaMAX 3.0ML和EDTA（5%）0.15ML依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
2.125g、乳酸钠4.4155g、CaCL2.2H2O 0.325g、BSA4.5g和牛磺酸0.306g放入玻璃皿中进行溶解；
2）再称量双抗（100x）5.5ML、GlutaMAX3.1ML和EDTA（5%）0.2ML依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
2）再称量双抗（100x）5.6ML、GlutaMAX 3.2ML和EDTA（5%）0.25ML依次放入玻璃皿中进行溶解，进行溶解3h后，取用0.22um滤器进行过滤，将滤后的容液放入新的玻璃皿中，即可制得HTF受精试剂，并将试剂放置于零下20℃保存。
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