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成 纤维 细胞增殖剂

阅读：245发布：2020-05-11

专利汇可以提供成纤维细胞增殖剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明的课题可以是安全且有效地提高皮肤成纤维细胞的增殖。作为本发明的解决问题的方法是，提供一种成纤维细胞增殖剂，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分。，下面是成纤维细胞增殖剂专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种成纤维细胞增殖剂，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分，所述酵母提取物是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射、过氧化氢处理或这两种处理的酵母调制而成的，所述红花提取物是红花的花的溶剂提取物，所述成纤维细胞是衰老成纤维细胞。
2.根据权利要求1所述的成纤维细胞增殖剂，所述红花的花的溶剂提取中使用的溶剂包含1，3-丁二醇。
3.一种皮肤外用剂，含有权利要求1～2的任一项所述的成纤维细胞增殖剂。
4.根据权利要求3所述的皮肤外用剂，是一种化妆品。
5.酵母提取物和红花提取物并用用于制造成纤维细胞增殖剂的用途，所述酵母提取物是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射、过氧化氢处理或这两种处理的酵母调制而成的，所述红花提取物是红花的花的溶剂提取物，所述成纤维细胞是衰老成纤维细胞。
6.根据权利要求5所述的用途，所述红花的花的溶剂提取中使用的溶剂包含1，3-丁二醇。
7.一种抗皮肤老化剂，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分，所述酵母提取物是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射、过氧化氢处理或这两种处理的酵母调制而成的，所述红花提取物是红花的花的溶剂提取物。
8.根据权利要求7所述的抗皮肤老化剂，所述红花的花的溶剂提取中使用的溶剂包含
1，3-丁二醇。

说明书全文

成纤维 细胞增殖剂

技术领域

[0001] 本发明涉及一种成纤维细胞增殖剂，更详细地说，涉及能够促进衰老成纤维细胞增殖的成纤维细胞增殖剂，并涉及含有该成纤维细胞增殖剂的皮肤外用剂。

背景技术

[0002] 近年来，保持健康且美丽的肌肤无论对于男女老幼都成为重大关心的事情。皮肤主要分为表皮、真皮、皮下组织3层，其中真皮在维持皮肤的结构方面是极为重要的。真皮是具有主要由成纤维细胞、胶原纤维(胶原蛋白纤维)、弹性纤维(弹性蛋白)等复合地三维状扩展而成的结构的结缔组织，但构成这些纤维的胶原等蛋白质是由成纤维细胞产生的，成纤维细胞通过保持这些蛋白质合成、分解的平衡来维持结缔组织的状态，从而保持皮肤的强度、伸展性和弹性等。

[0003] 由于老化等内在因素，紫外线、活性氧等外在因素，造成真皮的结缔组织减少而皮肤本来维持的收缩性、柔软性、保湿性等功能衰退，因而产生皱纹或松弛，并产生张力、弹性降低等各种肌肤问题。对这样的皮肤老化症状，皮肤真皮的成纤维细胞数量减少、功能降低、以及由成纤维细胞产生的基质纤维减少被认为是重要的原因。因此，为了得到具有防止、改善皮肤老化作用的抗老化皮肤外用剂，人们尝试了寻找和配合具有促进成纤维细胞增殖作用的成分。

[0004] 例如，引用文献1和2中报告了，兵豆(Lens esculenta)、荜拔(Piperlongum)、积雪草(Centella asiatica)、圣罗勒(Ocimum sanctum，Ocimumtenuiflorum，Ocimum album)等植物的提取物，木槿提取物等具有成纤维细胞增殖活性，并在抗老化化妆品等中配合这些物质。

[0005] 但是，在皮肤老化中，存在成纤维细胞的分裂速度降低等衰老造成的成纤维细胞的增殖能力衰退，现有的成纤维细胞增殖剂有如下问题，即即使对年轻成纤维细胞有效也不能对衰老成纤维细胞发挥充分的促进增殖效果，因而强烈要求开发能够提高衰老成纤维细胞增殖的新型物质。

[0006] 酵母提取物或酵母萃取物具有促进胶原产生的作用(专利文献3)、保湿效果(专利文献4)、细胞活化作用、促进透明质酸产生的作用(专利文献5)等已为人们所知，故而被配合到化妆品等皮肤外用剂中。

[0007] 红花提取物或红花萃取物在汉方或中医学中具有改善血液的作用已为人们所知，故而以美容为目的而在改善全身发冷(改善皮肤末梢血流)、改善痤疮、以及治疗特应性皮炎等(专利文献6)中使用。进而，有人报告了红花提取物具有抑制弹性蛋白酶的活性(专利文献7)，另外，作为细胞活化作用而被配合在抗老化用皮肤外用剂等中(专利文献8)。

[0008] 专利文献1：特开2008-184441号公报

[0009] 专利文献2：日本专利第3748941号公报

[0010] 专利文献3：国际公开第2004/075621号小册子

[0011] 专利文献4：特公平6-23088号公报

[0012] 专利文献5：特开平8-163983号公报

[0013] 专利文献6：日本专利第3839438号公报

[0014] 专利文献7：特开2000-319189号公报

[0015] 专利文献8：日本专利第3641699号公报

发明内容

[0016] 本发明是鉴于如上所述的情况而做出的，目的是提供安全且有效的成纤维细胞增殖剂，该成纤维细胞增殖剂不仅能提高年轻成纤维细胞增殖，还能提高衰老成纤维细胞增殖。

[0017] 本发明者发现，通过组合酵母提取物与红花提取物，即使对衰老成纤维细胞也能够显著促进细胞增殖，从而完成了本发明。例如上述专利文献8所述的那样，酵母提取物和红花提取物均作为细胞活化剂而为人们所知，但完全未报告对于由于衰老而增殖能力衰退的成纤维细胞的效果。令人惊讶的是，通过将这两种成分组合，可以协同地提高衰老成纤维细胞的增殖。

[0018] 本发明的成纤维细胞增殖剂的特征在于，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分。

[0019] 本发明的使成纤维细胞增殖的方法的特征在于，使用酵母提取物和红花提取物。

[0020] 另外本发明的抗皮肤老化剂的特征在于，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分。

[0021] 酵母提取物和红花提取物分别单独使用不能对衰老细胞带来充分的促进增殖的效果，但通过组合这两种成分，即使对衰老成纤维细胞也能够带来与年轻成纤维细胞同等高的促进细胞增殖的效果，因此可以有效地防止皮肤老化。

[0022] 本发明中所谓“衰老成纤维细胞”意味着由于年龄积累，或由于紫外线、活性氧等影响，而增殖能力、细胞外基质产生能力等功能有所降低的成纤维细胞。

[0023] 酵母提取物优选是由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射、过氧化氢处理或这两种处理的酵母调制而成的。已知可以通过将酵母在紫外线和/或过氧化氢所产生的压力存在下，在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养，从而产生保护细胞的成分，通过使用由这样的酵母培养物调制而成的酵母提取物，可以使成纤维细胞更有效地增殖。

[0024] 本申请发明的皮肤外用剂的特征在于，含有上述成纤维细胞增殖剂。例如可以通过在化妆品等皮肤外用剂中配合本发明的成纤维细胞增殖剂，来防止或改善由于年龄增长等造成的真皮的结缔组织中成纤维细胞减少或功能降低，从而有效地防止或改善皱纹或松弛的产生，张力或弹性降低等皮肤老化症状。

[0025] 本发明通过组合酵母提取物和红花提取物，不仅对年轻成纤维细胞，而且即使对衰老成纤维细胞也可带来高的促进细胞增殖的效果，而且对皮肤无害，可以安全且有效地在老化的皮肤的真皮中增加成纤维细胞从而提高皮肤的张力、弹性。因此，将本申请发明的成纤维细胞增殖剂或含有该成纤维细胞增殖剂的皮肤外用剂应用于皮肤，可以有效地防止或改善皱纹或松弛的产生，张力或弹性的降低等皮肤老化症状。附图说明

[0026] 图1是显示组合红花提取物和酵母提取物而产生的对年轻或衰老成纤维细胞增殖的效果的图。

具体实施方式

[0027] 本发明的成纤维细胞增殖剂等，含有酵母提取物和红花提取物作为有效成分。

[0028] 酵母提取物可以使用酵母的极性溶剂提取物，将通过自身消化、酸水解、酶水解等使酵母溶菌而得的酵母分解物过滤而得酵母提取物，或者使用将这样的酵母分解物干燥并进一步进行极性溶剂提取等而得的酵母提取物等。

[0029] 作为用于调制酵母提取物的菌体，可以优选使用单囊霉(Eremascus)属、内孢霉(Endomyces)属等属于内孢霉科(Endomycetaceae)的酵母，裂殖酵母(Schizosaccharomyces)属、拿逊酵母(Nadsonia)属、类酵母(Saccharomycodes)属、有孢汉生酵母(Hanseniaspora)属、威克酵母(Wickerhamia)属、酵母(Saccharomyces)属、克鲁维酵母(Kluyveromyces)属、路德酵母(Lodderomyces)属、温格酵母(Wingea)属、拟内孢霉(Endomycopsis)属、毕赤酵母(Pichia)属、汉森酵母(Hansenula)属、管囊酵母(Pachysolen)属、固囊酵母(Citeromyces)属、德巴利酵母(Debaryomyces)属、许旺酵母(Schwanniomyces)属、德克酵母(Dekkera)属、复膜孢酵母(Saccharomycopsis)属、油脂酵母(Lipomyces)属等属于酵母(Saccharomycetaceae)科的酵母，蚀精霉(Spermophthora)属、假囊酵母(Eremothecium)属、多囊酶(Crebrothecium)属、阿舒囊霉(Ashbya)属、针孢酵母(Nematospora)属、梅奇酵母(Metschnikowia)属、双孢子球酵母(Coccidiascus)属等属于蚀精霉(Spermophthoraceae)科的酵母等子囊菌酵母。其中，从容易获得等方面出发，优选由酵母属(Saccharomyces)的酵母，例如啤酒酵母、清酒酵母、面包酵母等菌体调制而成。另外，本发明中作为“酵母提取物”可以使用市售的酵母提取物。

[0030] 作为提取所使用的溶剂，可以使用水，生理盐水，磷酸缓冲液，磷酸缓冲生理盐水，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等低级醇，1，3-丁二醇、丙二醇、双丙甘醇、甘油等多元醇，乙醚、丙醚等醚类，乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯类，丙酮、甲乙酮等酮类等极性有机溶剂，可以从它们之中选择1种或2种以上来使用。在溶剂提取时，既可以将酵母或酵母分解物冻结干燥和/或粉碎，然后进行提取，还可以在提取溶剂中进行均化、超声波破碎。作为提取温度，通常为0℃～提取溶剂的沸点的温度，另外提取时间根据提取溶剂的种类、提取温度不同而不同，通常为1小时～5天左右。

[0031] 作为酵母提取物，本发明中优选使用由在含有糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射、过氧化氢处理或这两种处理的酵母调制而成的酵母提取物。已知可以通过将酵母在紫外线、过氧化氢等压力存在下培养，通过压力使细胞产生保护细胞的细胞保护成分，进而可以通过在此时向培养基中添加营养蛋白胨类、糖胺聚糖等来提高对压力的响应。这种制造方法等，例如美国专利第6461857号说明书中有记载。例如，可以将作为面包酵母的一种的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在添加了非动物来源的糖胺聚糖的营养培养基中培养，通过对培养物加入亚致死量的过氧化氢，例如加入培养物的总质量的约0.1～2质量％的过氧化氢，再任意地照射亚致死照射量的紫外线(例如，以强度2
31.5mJ/cm 来照射UVA/UVB)来施加压力，通过自身消化或酸水解等使得到的培养物可溶化，然后通过干燥、水提取、过滤等来调制酵母提取物。另外，由在含有非动物来源的糖胺聚糖的营养培养基中培养且经受过紫外线照射和过氧化氢处理的酵母调制而成的酵母提取物，由Arch Personal Care Products L.P.社以“バイオダイン EMPP(商标)”的商品名市售。

[0032] 红花提取物可以通过将红花(Carthamus tinctorius L.)进行溶剂提取来调制。可以使用红花的花、叶、茎、根茎、根等各部位或整体，但优选使用作为生药“红花”使用的红花的花。

[0033] 可以未经加工地直接进行提取操作，但如果考虑提取效率，则优选在进行切细、干燥、粉碎等处理之后进行提取。通过浸渍到提取溶剂中来进行提取。为了提高提取效率，可以进行搅拌、或在提取溶剂中进行均化。作为提取温度，通常为5℃左右～提取溶剂的沸点的温度，另外提取时间通常为4小时～14天左右。

[0034] 作为提取溶剂，可以使用水，生理盐水，磷酸缓冲液，磷酸缓冲生理盐水，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等低级醇，1，3-丁二醇、丙二醇、双丙甘醇、1，2-戊二醇、甘油等多元醇，乙醚、丙醚等醚类，乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯类，丙酮、甲乙酮等酮类等极性有机溶剂，或它们之中的2种以上形成的混合溶剂等。

[0035] 例如，本发明中优选使用将红花的花用50％1，3-丁二醇提取并过滤而得的提取物。另外，作为红花提取物，本发明中可以使用市售的产品。

[0036] 本发明的成纤维细胞增殖剂等可以直接使用酵母提取物和红花提取物，也可以添加适当的载体、赋形剂、稳定剂、缓冲剂、pH调整剂、溶剂等任意的助剂，以溶液、悬浊液、乳浊液、霜剂、软膏剂、凝胶剂、粉末剂等任意的形态使用。另外，还可以内包在脂质体、微囊等中。进而，在本发明的成纤维细胞增殖剂等中，只要在不损害本发明效果的范围内，除了上述必须成分之外，还可以添加抗氧化剂、防腐剂、紫外线吸收剂等稳定剂，吸收促进剂等。

[0037] 可以将本发明的成纤维细胞增殖剂等包含在外用剂基剂等中来调制皮肤外用剂。

[0038] 本发明的皮肤外用剂中酵母提取物和红花提取物的配合量，只要能够实现本发明的效果即可，不特别限制，但相对于外用剂的总质量，酵母提取物的配合量优选为0.00001质量％～10质量％，更优选为0.001质量％～5质量％，进而优选为0.005质量％～1质量％，另外红花提取物的配合量优选为0.00001质量％～10质量％，更优选为0.001质量％～5质量％，进而优选为0.01质量％～1质量％。

[0039] 本发明的皮肤外用剂包括化妆品、药品、准药品等，更适合在化妆品中广泛应用。其剂型也包括水溶液系、可溶化系、乳化系、油液系、凝胶系、糊剂系、软膏系、气雾剂系、水-油2层系、水-油-粉末3层等任意的剂型。另外，还包括担载在片状基剂上的剂型。

[0040] 另外，本发明的皮肤外用剂可以采用的制品形态和用途也包括可以实现本发明的效果的任意形态和用途。例如，可以应用于洗面奶、化妆水、妆底用乳液(lotion)或霜、乳液、霜、凝胶、精华液(美容液)、剥撕式面膜(pack)、面膜(mask)等基础化妆品，粉底等彩妆化妆品，防晒乳液或霜等防晒化妆品，润手乳液或霜、润腿乳液或霜、身体乳液或霜等身体化妆品，沭浴香皂、肥皂等日化产品等。

[0041] 本发明的皮肤外用剂中，除了上述的必须构成成分之外，还可以根据需要适当配合通常在化妆品、药品等皮肤外用剂中使用的其它任意成分，根据目标的剂型用常规方法来制造。例如，可以根据需要适当配合美白剂、保湿剂、抗氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增粘剂、醇类、粉末成分、色素、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。进而，还可以适当配合乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多磷酸钠、偏磷酸钠、葡糖酸等金属螯合剂，咖啡因、鞣质、维拉帕米、氨甲环酸及其衍生物、甘草提取物、光甘草定、火棘果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸及其衍生物或其盐等药剂，维生素C、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸等其它美白剂，葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖等糖类，等等。

[0042] 实施例

[0043] 以下，列举实施例来具体地说明本发明，但本发明不受下述实施例限制。此外，在下述实施例中，使用バイオダイン EMPP(商标)(Arch PersonalCare Products L.P.社)作为酵母提取物，另外使用フアルコレツクスベニバナB(一丸フアルコス(株))作为红花提取物。

[0044] 促进成纤维细胞增殖的效果的研究

[0045] 使用来自新生儿包皮的成纤维细胞作为“年轻细胞”，使用来自70岁以上且不足80岁女性的皮肤真皮的成纤维细胞作为“衰老细胞”。

[0046] 将各成纤维细胞在含有10％FBS的DMEM培养基中培养24小时，然后换成添加了0.1％红花提取物、或者添加了0.01％酵母提取物、或者添加了0.1％红花提取物和0.01％酵母提取物的含有0.5％FBS的DMEM培养基，再培养48小时。另外作为对照，在未添加试验物质的含有0.5％FBS的DMEM培养基中同样地进行培养。在培养结束时用阿尔玛蓝(AlamarBlue)试剂测定细胞的呼吸活性从而作为细胞增殖的指标。以对照例的呼吸活性为
100％，求出相对细胞增殖(％)。

[0047] 结果示于图1。在单独使用红花提取物的情况下，对年轻成纤维细胞和衰老成纤维细胞均仅能稍微提高细胞增殖，促进增殖的效果较低。另外在单独使用酵母提取物的情况下，能够显著提高年轻细胞增殖，但对衰老细胞促进增殖的效果较低。另一方面，通过组合添加红花提取物和酵母提取物，特别是对衰老细胞能协同地提高促进增殖的效果，从而能与年轻细胞同等地提高衰老细胞增殖。

[0048] 结果显示通过组合红花提取物和酵母提取物，可以显著地提高由于衰老而增殖能力降低的衰老成纤维细胞的增殖，从而即使在老化的皮肤中也能提高成纤维细胞增殖，因而可以有效地防止或改善皱纹或松弛的产生，张力或弹性的下降等皮肤老化症状。

[0049] 以下示出含有本发明的成纤维细胞增殖剂的皮肤外用剂的处方例。此外，配合量以相对于全部组合物总量的质量％来表示。

[0050] 处方例1(水/油(W/O)霜) (质量％)

[0051] (1)二甲基聚硅氧烷 3.0

[0052] (2)十甲基环五硅氧烷 13.0

[0053] (3)十二甲基环六硅氧烷 5.0

[0054] (4)聚氧乙烯-甲基聚硅氧烷共聚物 1.0

[0055] (5)3-三(三甲基甲硅烷氧基)甲硅烷基丙基氨基甲酸支链淀粉 1.0

[0056] (6)交联型聚甲基硅氧烷的十甲基环五硅氧烷配合物 5.0

[0057] (Dow C orning 9040 Silicone Elastomer BlendTM：DowCorning社制造)[0058] (7)乙酸视黄醇酯 0.1

[0059] (8)对羟基苯甲酸酯适量

[0060] (9)L-薄荷醇适量[0061] (10)三甲基甲硅烷氧基硅酸 2.0

[0062] (11)乙醇 2.0[0063] (12)甘油 3.0[0064] (13)双丙甘醇 5.0

[0065] (14)聚乙二醇6000 5.0

[0066] (15)六偏磷酸钠 0.05

[0067] (16)乙酸生育酚酯 0.1

[0068] (17)咖啡因 0.1[0069] (18)茴香提取物 0.1

[0070] (19)金缕梅提取物 0.1

[0071] (20)红花提取物 1.0

[0072] (21)酵母提取物 .0

[0073] (22)乙二胺四乙酸三钠 0.05

[0074] (23)二吗啉代哒嗪酮 0.01

[0075] (24)三甲氧基肉桂酸甲基二(三甲基甲硅烷氧基)甲硅烷基异戊酯 0.1

[0076] (25)无机复合粉体(カバ一リ一フ AR-80TM，触媒化成工业(株) 5.0制造)[0077] (26)氧化铁黄适量[0078] (27)钛酸钴适量[0079] (28)二硬脂二甲铵锂蒙脱石 1.5

[0080] (29)聚乙烯醇 0.1[0081] (30)羟乙基纤维素 0.1

[0082] (31)丙烯酸钠/2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸共聚物(SIMULGEL 0.1EGTM，SEPPIC社制造)

[0083] (32)(丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/VP)共聚物(Aristoflex AVCTM， 0.1Clariant社制造)

[0084] (33)香料适量[0085] (34)纯化水剩余

[0086] 处方例2(乳液) (质量％)

[0087] 凡士林 5[0088] 山萮醇 0.5[0089] 鲨肝醇 0.5[0090] 甘油 7[0091] 1，3-丁二醇 7

[0092] 1，2-戊二醇 1

[0093] 木糖醇 3[0094] 聚乙二醇20000 2

[0095] 固化油 2[0096] 霍霍巴油 2

[0097] 角鲨烷 5

[0098] 异硬脂酸 0.5

[0099] 四(2-乙基己酸)季戊四醇酯 2

[0100] 聚氧乙烯硬化蓖麻油 0.5

[0101] 十二烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱 0.4

[0102] 氢氧化钾适量

[0103] 焦亚硫酸钠 0.01

[0104] 六偏磷酸钠 0.05

[0105] 甘草酸二钾 0.05

[0106] 三甲基甘氨酸 3

[0107] 熊果苷 3

[0108] 酵母提取物 0.1

[0109] 乙酸生育酚酯 0.1

[0110] 硫代牛磺酸 0.1

[0111] 红花提取物 1

[0112] 苦参提取物 0.1

[0113] 氧化铁红适量

[0114] 榅桲种子提取物 0.1

[0115] 羧乙烯基聚合物 0.2

[0116] 苯氧基乙醇适量

[0117] 纯化水剩余

[0118] 处方例3(乳液) (质量％)

[0119] 二甲基聚硅氧烷 3

[0120] 十甲基环五硅氧烷 4

[0121] 乙醇 5

[0122] 甘油 6

[0123] 1，3-丁二醇 5

[0124] 聚氧乙烯甲基葡糖苷 3

[0125] 向日葵油 1

[0126] 角鲨烷 2

[0127] 氢氧化钾 0.1

[0128] 六偏磷酸钠 0.05

[0129] 羟丙基-β-环糊精 0.1

[0130] 甘草酸二钾 0.05

[0131] 枇杷叶提取物 0.1

[0132] L-谷氨酸钠 0.05

[0133] 茴香提取物 0.1

[0134] 酵母提取物 0.1

[0135] 薰衣草油 0.1

[0136] 红花提取物 0.1

[0137] 地黄提取物 0.1

[0138] 二吗啉代哒嗪酮 0.1

[0139] 黄原酸胶提取物 0.1

[0140] 羧乙烯基聚合物 0.1

[0141] 丙烯酸-甲基丙烯酸烷基酯共聚物(ペミユレン TR-1) 0.1

[0142] 氧化铁红适量

[0143] 氧化铁黄适量

[0144] 对羟基苯甲酸酯适量

[0145] 纯化水剩余[0146] 这些处方例的皮肤外用剂，均可以适用于老化的皮肤，获得优异的皱纹改善效果。

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