本发明的目的是提供
一种单克隆抗体涂层生物支架的制备方法。
本发明所提供的单克隆抗体涂层生物支架的制备方法,以支架本 体为
阳极,通过静电
喷涂或阳极极化的方式使得抗体溶液带负电,在
电场力的作用下,向阳极移动,均匀地涂覆在生物支架的表面。所述 支架本体的表面还可制成有直径100-800nm的孔洞。
上述采用静电喷涂的方式涂覆生物支架,其包括如下步骤:
(1)支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,
超声波频率为 28-100KHz,清洗时间为5-15min;使用去离子
水进行清洗三次;
(2)抗体涂覆液的配制:以纯水或者浓度为0.01-1.0mol/l、pH 值为9.6的
碳酸盐缓冲溶液为
溶剂,加入浓度为0.01-1.0mg/ml的抗体 溶液;
(3)静电喷涂:以抗体溶液为
阴极,接上电源负高压,以支架 本体为阳极,接地,两极形成高压静电场,由于在阴极产生电晕放电, 使喷出的抗体溶液介质带电,并进一步雾化,沿电力线定向地流向带 正电的被涂物支架本体表面,中和沉积成一层均匀、附着牢固的抗体 涂层。
静电喷涂的原理:以抗体溶液作为阴极,接上电源负高压,而支 架接地,这样在两极就形成了高压静电场。由于在阴极产生电晕放电, 可使喷出的抗体溶液介质带电,并进一步雾化。按“照同性相斥,异 性相吸”的原理,已带电的溶液介质受电场力(F=qE)作用,沿电力线 定向地流向带正电的被涂物支架表面,就可中和沉积成一层均匀、附 着牢固的抗体涂层。
上述采用阳极极化的方式涂覆生物支架,其包括如下步骤:
(1)支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,
超声波频率为 28-100KHz,清洗时间为5-15min;使用去离子水进行清洗三次;
(2)抗体涂覆液的配制:以纯水或者浓度为0.01-1.0mol/l、pH 值为9.6的碳酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.01-1.0mg/ml的抗体 溶液;
(3)阳极极化:以支架本体作为阳极,溶液中采用单克隆抗体 溶液时,该抗体电离变为阴离子,通电后抗体向阳极支架本体处移动, 使单克隆抗体与支架本体表面牢固均匀地结合,附着牢固的抗体涂 层。
阳极极化的原理:电化学中的极化现象是指极化作用一经开始, 在阳极,
电子流走了,溶液中的阴离子向阳极移动;在阴极,电子流 入快,溶液中的阳离子向阴极移动。当把支架作为阳极,溶液中采用 单克隆抗体溶液时,该抗体电离变为阴离子,通电后抗体向阳极支架 处移动,在阴阳相吸作用下,克服支架表面的液面
张力,使单克隆抗 体与支架表面牢固均匀的结合,与电
镀的原理基本相同。
所述支架本体可先经过表面清洗和防腐处理后,进行静电喷涂或 阳极极化的涂覆处理;所述涂覆后的生物支架自然晾干,经预冷冻后, 放入
真空冷冻干燥机干燥。
支架本体的表面清洗过程为:
(1)用
砂带打磨支架本体表面,用于去除表面的
氧化物,调整 表面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用
乙醇溶液、99.5%的丙
酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为28-100KHz,清洗时间为5-15min;
(3)将支架本体放入15-60g/L、70-100℃的氢氧化钠溶液中浸 泡5-10min,用于去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,
温度设定在 30-40℃,干燥30-60min后取出。
支架本体的防腐处理采用化学氧化处理或
阳极氧化处理的方法 进行。
化学氧化处理的过程为:将支架本体浸入含重铬酸
钾15-20g/L、
硝酸15-25g/L、
氯化钠0.75-1.25g/L的混合溶液中,在70-80℃下,氧 化0.5-2.0min,在支架本体表面生成氧化膜。
阳极氧化处理的过程为:采用交流电氧化,在两
电极上分别安装 完全相同的支架本体,阳极氧化处理用槽液为高锰酸钾15-20g/L、磷 酸三钠15-55g/L、氟化钾25-55g/L、氢氧化钾65-165g/L、氢氧化
铝 15-65g/L的
混合液,在20-60℃下,
电流密度为0.1-10A/dm2,交流电 压为50-90V下,氧化10-50min,支架本体表面生成氧化膜。
除上方法外,还可采用
离子注入、激光
表面处理、热扩散、金属 镀层、气相沉积、
有机涂层等方式中的一种或多种对支架本体表面进 行防腐处理。
此外,在支架本体表面涂覆抗体前,可先涂覆治疗性药物,涂覆 的治疗性药物与抗体的比例为50∶1-100∶1。所述治疗性药物为肝素、 阿司匹林、水蛭素、秋水仙
碱、抗血小板GPIIb/IIIa受体结抗剂、白 甲
氨蝶呤、嘌呤类、嘧啶类、
植物碱类和埃坡破霉素(Epothilone) 类、雷公藤系列化合物、抗生素、
激素、抗体治癌药物、环孢霉素、 他克莫司及同系物(FK506),脱精胍菌素(15-deoxyspergualin),霉 酚酸脂(MMF),雷帕霉素(Rapamycin)及其衍生物,FR 900520, FR 900523,NK 86-1086,戊酰胺(depsidomycin),康乐霉素C (kanglemycin C),斯博格埃林(spergualin),灵菌红素 25c(prodigiosin25-c),曲尼斯特(tranilast),多球壳菌素(myriocin),FR 651814,SDZ214-104,环孢霉素C,布雷青霉素(bredinin),麦考酚 酸、布雷菲得菌素A,WS9482,糖皮质类固醇、替罗非班(tirofiban)、 埃替非巴肽(eptifibatide)、紫杉醇、放线菌素-D等中的一种或多种。
上述治疗性药物溶液的涂覆处理,其过程为:以甲醇作溶剂,加 入浓度为1-15μg/ml的上述治疗性药物的溶液对支架本体表面进行 定向超声喷涂,匀速旋转支,根据支架本体表面药物含量要求喷涂 1-15次;
上述治疗性药物的涂覆处理,其过程也可为:以四氢呋喃作有机 溶剂,加入浓度为1-15μg/ml的药物,将支架本体浸泡在上述溶液中 5-10分钟,重复
浸涂4次。
本发明的单克隆抗体涂层生物支架的制备方法中,所述支架本体 采用316医用不锈
钢材质或钴络
合金材质;所述单克隆抗体为单克隆 抗体CD34、单克隆抗体CD133、单克隆抗体CD105、单克隆抗体 CD117、单克隆抗体CD123、单克隆抗体CD9+、达利珠单抗 (daclizumab)、或阿昔单抗等中的一种或多种。
本发明所提的单克隆抗体涂层生物支架的制备方法,其具有如下 有益效果:
1.在支架本体原材料的表面,即直接与人体病变组织
接触的表 面上制备有孔洞或者没有孔洞分布。无需额外制备载药涂层,无明显 界面,能够在支架本体全部或者部分表面通过静电作用均匀包被一层 抗体;
2.支架本体全部或者部分表面包被抗体后,支架本体上抗体包 被量
稳定性较好,经过直接或者超声清洗生物支架,生物支架上抗体 量均没有损失,这预示着该抗体支架能够耐受更长时间的血液冲刷, 抗体主要是通过静电
吸附作用或者特殊的孔洞结构结合到支架本体 表面;
3.使用安全,满足临床需要。抗体包被所使用的药品器材都是比 较安全的医用级药品和器材,本身产品就比较安全,所使用的抗体为
治疗性抗体,能够直接作用于人体;
4.
工业实用性强。该种抗体包被方式能够进行大规模的工业化 生产,且操作简单,成本较低。
附图说明
图1为本发明支架本体的扫描电镜图。
图2为本发明表面带有纳米孔的支架本体表面的扫描电镜图。
图3为本发明表面带有纳米孔的支架本体上的抗体分布扫描电 镜图。
图4为静电喷涂设备示意图;
图中:1、储液器;2、
泵;3、
喷嘴;4、高压发生器;5、导电 杆;6、喷液室;7、雾滴;8、电极板。
图5为阳极极化涂覆过程示意图;
图中:A、操控电脑 B、阳极极化仪 C、储液容器 D、电极。
以下
实施例进一步说明本发明的内容,但不应理解为对本发明 的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步 骤或条件所作的
修改或替换,均属于本发明的范围。
图1所示的支架本体是医用316
不锈钢,也可以为钴络合金材质, 通过激光雕刻或
机械加工而成的,除可制成血管支架外,还可制成骨 缝合线、骨钉、骨连接件,脊椎骨盘,缝合用锚,
止血钳、止血螺丝、 止血板、止血夹,以及组织
粘合剂、
密封剂,人造骨等医疗设备。
图2所示的表面带有纳米孔的支架本体是医用316不锈钢合金, 也可以为钴络合金材质,经
抛光后,用激光雕刻成血管支架;支架表 面通过化学或物理方法,如
腐蚀、阳极氧化、微弧氧化、微弧氮化等 方法或这些方法的结合。并且在器械本体原材料的局部表面直接制备 形成孔洞,孔洞可以是载药槽或孔结构,孔洞的直径为100-800nm。
实施例1
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架,按照如下步骤制得单克隆抗体CD34涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为100KHz,清洗时间为10min;
(3)将支架本体放入30g/L、80℃的氢氧化钠溶液中浸泡10min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在40 ℃,干燥45min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:将支架本体浸入到重铬酸钾15 g/L、硝酸15g/L、氯化钠1.0g/L溶液中,在80℃下氧化1min,支 架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD34溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 100KHz,清洗时间为10min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD34溶液;
(3)、静电喷涂:如图4所示,将电极板8接上高压静电负极,
电压为0-10KV,连续可调。将配制好的抗体涂覆液注入静电喷
涂装 置的抗体溶液储存容器1中,抗体溶液容器1与泵2相连,泵将溶液增 压,
增压后的溶液经溶液输送管送至喷嘴3处,溶液从喷嘴急速喷出, 瞬间降压,剧烈膨胀雾
化成极细小的雾滴7,并由静电发生器4放电而 带上电荷,在电极板8与血管支架之间形成静电场,支架穿到接地的 可以转动的金属导杆5上,支架与喷嘴的距离是5cm,带电涂料在电 场引力和高压推力的共同作用下,吸附于血管支架内外表面上,并形 成一层均匀的抗体涂层,喷涂的时间为6秒,抗体涂层的量为1/4000 的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,
冰箱中预冷冻后放 入真空
冷冻干燥机中干燥4h。
实施例2
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架,按照如下步骤制得单克隆抗体CD133涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为28KHz,清洗时间为15min;
(3)将支架本体放入60g/L、70℃的氢氧化钠溶液中浸泡5min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在30 ℃,干燥60min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:采用交流电氧化,在两电极上安 装完全相同的图1所示的支架本体或者图2所示的支架本体,阳极氧 化处理用槽液成份为:高锰酸钾15g/L、
磷酸三钠15g/L、氟化钾25 g/L、氢氧化钾65g/L、氢氧化铝15g/L;在25℃,氧化10min,电流 密度为0.1A/dm2,交流电压为50V,支架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD133溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 28KHz,清洗时间为15min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD133溶液;
(3)、静电喷涂:如图4所示,将电极板8接上高压静电负极,电 压为0-10KV,连续可调。将配制好的抗体涂覆液注入静电喷涂装置 的抗体溶液储存容器1中,抗体溶液容器1与泵2相连,泵将溶液增压, 增压后的溶液经溶液输送管送至喷嘴3处,溶液从喷嘴急速喷出,瞬 间降压,剧烈膨胀雾化成极细小的雾滴7,并由静电发生器4放电而带 上电荷,在电极板8与血管支架之间形成静电场,支架穿到接地的可 以转动的金属导杆5上,支架与喷嘴的距离是5cm,带电涂料在电场 引力和高压推力的共同作用下,吸附于血管支架内外表面上,并形成 一层均匀厚度的抗体涂层,喷涂的时间为6秒,抗体的量为1/4000的 支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。
实施例3
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架;支架表面通过化学或物理方法,如腐蚀、阳极氧化、微弧 氧化、微弧氮化等方法或这些方法的结合在器械本体原材料的局部表 面直接制备形成孔洞,孔洞可以是载药槽或孔结构,孔洞的直径为 100-800nm。按照如下步骤制得单克隆抗体CD105涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为50KHz,清洗时间为13min;
(3)将支架本体放入15g/L、100℃的氢氧化钠溶液中浸泡8min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在35 ℃,干燥50min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:将支架本体浸入到重铬酸钾20
g/L、硝酸25g/L、氯化钠1.25g/L溶液中,在70℃下氧化0.5min, 支架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD105溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 50KHz,清洗时间为13min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD105溶液;
(3)、静电喷涂:如图4所示,将电极板8接上高压静电负极,电 压为0-10KV,连续可调。将配制好的抗体涂覆液注入静电喷涂装置 的抗体溶液储存容器1中,抗体溶液容器1与泵2相连,泵将溶液增压, 增压后的溶液经溶液输送管送至喷嘴3处,溶液从喷嘴急速喷出,瞬 间降压,剧烈膨胀雾化成极细小的雾滴7,并由静电发生器4放电而带 上电荷,在电极板8与血管支架之间形成静电场,支架穿到接地的可 以转动的金属导杆5上,支架与喷嘴的距离是5cm,带电涂料在电场 引力和高压推力的共同作用下,吸附于血管支架内外表面上,并形成 一层均匀的厚度的抗体涂层,喷涂的时间为6秒,抗体的量为1/4000 的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。
实施例4
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架;支架表面通过化学或物理方法,如腐蚀、阳极氧化、微弧 氧化、微弧氮化等方法或这些方法的结合在器械本体原材料的局部表 面直接制备形成孔洞,孔洞可以是载药槽或孔结构,孔洞的直径为 100-800nm。按照如下步骤制得单克隆抗体CD117涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为100KHz,清洗时间为5min;
(3)将支架本体放入30g/L、80℃氢氧化钠溶液中浸泡10min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在40 ℃,干燥45min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:采用交流电氧化,在两电极上安 装完全相同的图1所示的支架或者图2所示的支架,阳极氧化处理用 槽液成份为:高锰酸钾20g/L、磷酸三钠35g/L、氟化钾55g/L、氢氧 化钾100g/L、氢氧化铝30g/L;在40℃,氧化25min,电流密度为 5A/dm2,交流电压为70V,支架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD117溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 100KHz,清洗时间为5min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD117溶液;
(3)、静电喷涂:如图4所示,将电极板8接上高压静电负极,电 压为0-10KV,连续可调。将配制好的抗体涂覆液注入静电喷涂装置 的抗体溶液储存容器1中,抗体溶液容器1与泵2相连,泵将溶液增压, 增压后的溶液经溶液输送管送至喷嘴3处,溶液从喷嘴急速喷出,瞬 间降压,剧烈膨胀雾化成极细小的雾滴7,并由静电发生器4放电而带 上电荷,在电极板8与血管支架之间形成静电场,支架穿到接地的可 以转动的金属导杆5上,支架与喷嘴的距离是5cm,带电涂料在电场 引力和高压推力的共同作用下,吸附于血管支架内外表面上,并形成 一层均匀的厚度的抗体涂层,喷涂的时间为6秒,抗体的量为1/4000 的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。
实施例5
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架,按照如下步骤制得单克隆抗体CD123涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为100KHz,清洗时间为10min;
(3)将支架本体放入30g/L、80℃的氢氧化钠溶液中浸泡10 min,去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在40 ℃,干燥45min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:采用交流电氧化,在两电极上安 装完全相同的图1所示的支架或者图2所示的支架,阳极氧化处理用 槽液成份为:高锰酸钾18g/L、磷酸三钠55g/L、氟化钾40g/L、氢氧 化钾165g/L、氢氧化铝65g/L;在60℃,氧化50min,电流密度为 10A/dm2,交流电压为90V,支架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD123溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 100KHz,清洗时间为10min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD123溶液;
(3)、阳极极化涂覆:如图5所示,将支架本体
串联到阳极极化 仪的阳极4上,将配制好的抗体溶液注入阳极极化的抗体储存容器3 中,调节阳极电压为400mv,进行极化,极化时间为600s,通电后抗 体离子向阳极支架处移动,在阴阳相吸作用下,克服支架表面的液面 张力,使单克隆抗体与支架表面牢固均匀的结合。并在支架表面形成 一层均匀的抗体涂层,抗体的量为1/4000的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。
实施例6
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架;支架表面通过化学或物理方法,如腐蚀、阳极氧化、微弧 氧化、微弧氮化等方法或这些方法的结合在器械本体原材料的局部表 面直接制备形成孔洞,孔洞可以是载药槽或孔结构,孔洞的直径为 100-800nm。按照如下步骤制得单克隆抗体CD9+涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为100KHz,清洗时间为10min;
(3)将支架本体放入30g/L、80℃氢氧化钠溶液中浸泡10min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在40 ℃,干燥45min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:采用交流电氧化,在两电极上安 装完全相同的图1所示的支架或者图2所示的支架,阳极氧化处理用 槽液成份为:高锰酸钾15g/L、磷酸三钠15g/L、氟化钾25g/L、氢氧 化钾65g/L、氢氧化铝15g/L;在25℃,氧化10min,电流密度为 0.1A/dm2,交流电压为50V,支架本体表面即可生成氧化膜。
3、支架本体表面单克隆抗体CD9+溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 100KHz,清洗时间为10min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH值为9.6的碳 酸盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml单克隆抗体CD9+溶液;
(3)、阳极极化涂覆:如图5所示,将支架本体串联到阳极极化 仪的阳极4上,将配制好的抗体溶液注入阳极极化的抗体储存容器3 中,调节阳极电压为400mv,进行极化,极化时间为600s,通电后抗 体离子向阳极支架处移动,在阴阳相吸作用下,克服支架表面的液面 张力,使单克隆抗体CD9+与支架表面牢固均匀的结合。并在支架表 面形成一层均匀的抗体涂层,抗体的量为1/4000的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。
实施例7
选用316不锈钢合金或者钴络合金材质经抛光后,用激光雕刻成 血管支架;支架表面通过化学或物理方法,如腐蚀、阳极氧化、微弧 氧化、微弧氮化等方法或这些方法的结合在器械本体原材料的局部表 面直接制备形成孔洞,孔洞可以是载药槽或孔结构,孔洞的直径为 100-800nm。按照如下步骤制得达利珠单抗涂层生物支架:
1、支架本体表面的清洗:
(1)砂带打磨支架本体表面,机械去除表面的氧化物,调整表 面粗糙度;
(2)利用超声波,依次用75%的医用乙醇溶液、99.5%的丙酮溶 液、去离子水清洗,超声波频率为100KHz,清洗时间为10min;
(3)将支架本体放入30g/L、80℃氢氧化钠溶液中浸泡10min, 去除油脂和氧化皮;
(4)将清洗后的支架本体放置在真空干燥机中,温度设定在40 ℃,干燥45min后取出。
2、支架本体表面的防腐处理:采用交流电氧化,在两电极上安 装完全相同的图1所示的支架或者图2所示的支架,阳极氧化处理用 槽液成份为:高锰酸钾15g/L、磷酸三钠15g/L、氟化钾25g/L、氢氧 化钾65g/L、氢氧化铝15a/L;在25℃,氧化10min,电流密度为 0.1A/dm2,交流电压为50V,支架本体表面即可生成氧化膜。
3、治疗性药物溶液的涂覆处理:以四氢呋喃作溶剂,加入浓度 为15μg/ml的雷帕霉素对支架表面进行定向超声喷涂,匀速旋转支, 喷涂4次,使支架表面药物含量达到1/80支架重量。
4、支架本体表面达利珠单抗溶液的涂覆处理:
(1)、支架本体的预处理:用四氢呋喃超声清洗,超声波频率为 100KHz,清洗时间为10min;使用去离子水清洗三次;
(2)、抗体涂覆液的配制:以浓度为0.05mol/l、pH为9.6的碳酸 盐缓冲溶液为溶剂,加入浓度为0.1mg/ml达利珠单抗溶液;
(3)阳极极化涂覆:如图5所示,将支架本体串联到阳极极化仪 的阳极4上,将配制好的抗体溶液注入阳极极化的抗体储存容器3中, 调节阳极电压为400mv,极化时间为600s,通电后抗体离子向阳极支 架处移动,在阴阳相吸作用下,克服支架表面的液面张力,使单克隆 抗体与支架表面牢固均匀的结合。并在支架表面形成一层均匀的抗体 涂层,抗体的量为1/4000的支架重量;
(4)、生物支架干燥:将支架自然稍晾干后,冰箱中预冷冻后放 入真空冷冻干燥机中干燥4h。