一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法
阅读：127发布：2020-05-08
专利汇可以提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种维生素C 葡萄糖 苷的连续合成方法，包括以下步骤：向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；将第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖 淀粉 酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；将第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。本发明的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法通过在两段相连的管式反应器中分别装填固定化糖基转移酶和固定化葡萄糖淀粉酶，可以实现维生素C葡萄糖苷的在线连续合成，合成工艺路线简单，条件易于控制，适合工业化规模生产；且通过本发明的连续合成方法维生素C葡萄糖苷的产物浓度可以达到300g/L左右，维生素C的转化率50%以上。，下面是一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法专利的具体信息内容。
1.一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；
将所述第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖淀粉酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；
将所述第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。
2.如权利要求1所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述第一管式反应器、所述第二管式反应器的管径为1cm 10cm，且所述第一管式反应器、所述第二管~
式反应器的进料端和出料端均装有过滤网格，所述过滤网格的空隙直径小于所述固定化糖基转移酶和所述固定化葡萄糖淀粉酶的直径。
3.如权利要求2所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述维生素C溶液与所述葡萄糖基供体溶液的流量均为5 50mL/min，流量比为1：1，维生素C与葡萄糖~
基供体的摩尔比为1：（1 2）。
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4.如权利要求3所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述第一阶段反应、所述第二阶段反应的反应温度为25-40℃。
5.如权利要求1-4任一项所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述固定化糖基转移酶按以下方法制备：
制备含海藻酸钠与糖基转移酶的第一混合溶液，所述第一混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，糖基转移酶的含量为600 1000U/mL；
~ ~
在搅拌下将所述第一混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化糖基转移酶。
6.如权利要求5所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述固定化葡萄糖淀粉酶按以下方法制备：
制备含海藻酸钠与葡萄糖淀粉酶的第二混合溶液，所述第二混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，葡萄糖淀粉酶的含量为200 600U/mL；
~ ~
在搅拌下将所述第二混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化葡萄糖淀粉酶。
7.如权利要求6所述的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，其特征在于，所述葡萄糖基供体为麦芽糖或可溶性淀粉中的至少一种。
一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法
技术领域
背景技术
[0002] 维生素C（L-抗坏血酸）能够用来使肌肤更明亮，更健康，更年轻的功效已广为人们熟知。科学研究表明维生素C提高美白肌肤的功效来自于其抑制黑色素形成及减少黑色素的能力。但将维生素C应用于健康和美容上仍面临诸多挑战，因为受热、氧化或与金属离子以及化妆品中其他常用成分的反应，都能轻易使维生素C失去生物活性。这会导致其成分在化妆品配方中变色，并且使得其带来的使肌肤更健康更年轻的功效大打折扣。
[0003] AA-2G，又称维生素C葡萄糖苷（L-Ascorbic Acid 2-Glucoside），1990 年由日本林原生物化学研究所与冈山大学药学系首次发现了 AA-2G，并利用生物方法大量合成了该类 VC 衍生物。由于AA-2G在2 位上有葡萄糖掩蔽，不会发生VC 的氧化反应。它在水溶液中特别稳定， 本身并无直接还原性， 它可由细胞膜上α-葡萄糖苷酶水解，VC 则被转运到体内。AA-2G 与L-抗坏血酸有相同的溶胶原活性， 能增强抗体产生和人体皮肤纤维原细胞的胶原合成， 加强α-维生素E 的抗氧化性，预防由紫外线照射造成的急性炎症等。它对热、Cu2+ 、抗坏血酸氧化酶等引起的强氧化降解有显著抗性。作为化妆品， 其抑制黑色素形成的能力比其它的VC 衍生物都要强。具备卓越的配方稳定性，能够从本质上抑制变色和降解，同时保留了全部生物活性，以达到提亮、美白，抵御紫外线照射以及抗衰老的功效。
[0004] AA-2G 良好的稳定性、水溶性和溶胶原活性使其易于被皮肤吸收，具有美白、活肤、去斑、抗衰老的功效，广泛应用于化妆品行业中。AA-2G 还可以用作紫外吸收剂，预防和治疗强紫外线照射引起的急性炎症等。添加 AA-2G 成分的化妆品由于美白护肤效果显著，一经上市就受到了消费群体的普遍欢迎。著名化妆品如纪梵希，香奈儿，雅诗兰黛，倩碧，资生堂等精华液中添加AA-2G 后价格也是一路飙升。
[0005] 近年来，通过 AA-2G 合成方法和生产工艺的不断改进，日本林原公司已成为国际上最大的 AA-2G 生产商并将 AA-2G 广泛应用于化妆品行业，同时申报了多项专利进行商业保护。 近年来，国内也有部分学者就 AA-2G 的合成检测和生物活性进行了初步探索。研究主要集中在如何在生物转化反应中获得高产物浓度和较高的维生素C转化率，此外，大量研究也集中在如何提高分离纯化收率上。但是国内对AA-2G的技术水平与日本林原国际还有相当大的差距。
[0006] 目前，受限于生产技术水平不成熟或者生产成本过高，在国内还没有一家企业可以大规模生产该产品。国内只有少量企业有小批量生产，技术水平不高，转化产物浓度只有100g/L左右，Vc的转化率30-40%，生产成本较高。
发明内容
[0007] 为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法。
[0008] 为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；
将所述第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖淀粉酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；
将所述第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。
向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；
将所述第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖淀粉酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；
将所述第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。
[0009] 优选地，所述第一管式反应器、所述第二管式反应器的管径为1cm 10cm，且所述第~一管式反应器、所述第二管式反应器的进料端和出料端均装有过滤网格，所述过滤网格的空隙直径小于所述固定化糖基转移酶和所述固定化葡萄糖淀粉酶的直径。
[0010] 优选地，所述维生素C溶液与所述葡萄糖基供体溶液的流量均为5 50mL/min，流量~比为1：1，维生素C与葡萄糖基供体的摩尔比为1：（1 2）。
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[0011] 优选地，所述第一阶段反应、所述第二阶段反应的反应温度为25-40℃。
[0012] 优选地，所述固定化糖基转移酶按以下方法制备：制备含海藻酸钠与糖基转移酶的第一混合溶液，所述第一混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，糖基转移酶的含量为600 1000U/mL；
~ ~
在搅拌下将所述第一混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化糖基转移酶。
~ ~
在搅拌下将所述第一混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化糖基转移酶。
[0013] 优选地，所述固定化葡萄糖淀粉酶按以下方法制备：制备含海藻酸钠与葡萄糖淀粉酶的第二混合溶液，所述第二混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，葡萄糖淀粉酶的含量为200 600U/mL；
~ ~
在搅拌下将所述第二混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化葡萄糖淀粉酶。
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在搅拌下将所述第二混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
分离、洗涤即获得固定化葡萄糖淀粉酶。
[0014] 优选地，所述葡萄糖基供体为麦芽糖或可溶性淀粉中的至少一种。
[0015] 与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：本发明的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法通过在两段相连的管式反应器中分别装填固定化糖基转移酶和固定化葡萄糖淀粉酶，可以实现维生素C葡萄糖苷的在线连续合成，合成工艺路线简单，条件易于控制，适合工业化规模生产；且通过本发明的连续合成方法维生素C葡萄糖苷的产物浓度可以达到300g/L左右，维生素C的转化率50%以上。
具体实施方式
[0016] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明实施例提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
（1）向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；
（2）将第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖淀粉酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；
（3）将第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。
（1）向装填有固定化糖基转移酶的第一管式反应器中通入维生素C溶液和葡萄糖基供体溶液进行第一阶段反应；
（2）将第一阶段反应的产物通入装填有固定化葡萄糖淀粉酶的第二管式反应器中进行第二阶段反应；
（3）将第二阶段反应的产物进行分离提纯获得维生素C葡萄糖苷。
[0017] 步骤（1）、步骤（2）中的第一管式反应器、第二管式反应器的管径为1cm 10cm，且第~一管式反应器、第二管式反应器的进料端和出料端均装有过滤网格，过滤网格的空隙直径小于固定化糖基转移酶和固定化葡萄糖淀粉酶的直径。这样可以将固定化糖基转移酶和固定化葡萄糖淀粉酶封装在第一管式反应器、第二管式反应器中，反应原料沿着管式反应器的管长方向流过，在管内在催化反应酶的作用下逐步发生反应，生成目标产物维生素C葡萄糖苷。因管式反应器的管径较小，在1cm 10cm之内，反应原料在反应器内可以快速混匀并发~
生反应，传热、传质快，利于反应原料的快速、高效转化。第一管式反应器、第二管式反应器可以根据生产状况设计合适的管长，当管长较长时，为节约空间，可以设计成盘管状。本实施例的第一管式反应器、第二管式反应器的管长在1m 5m之间。
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生反应，传热、传质快，利于反应原料的快速、高效转化。第一管式反应器、第二管式反应器可以根据生产状况设计合适的管长，当管长较长时，为节约空间，可以设计成盘管状。本实施例的第一管式反应器、第二管式反应器的管长在1m 5m之间。
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[0018] 步骤（1）中固定化糖基转移酶按以下方法制备：（11）制备含海藻酸钠与糖基转移酶的第一混合溶液，第一混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，糖基转移酶的含量为600 1000U/mL；
~ ~
（12）在搅拌下将第一混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
（13）分离、洗涤即获得固定化糖基转移酶。
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（12）在搅拌下将第一混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
（13）分离、洗涤即获得固定化糖基转移酶。
[0019] 固定化糖基转移酶选自日本天野公司提供的环糊精糖基转移酶（GGT-SL），用于催化维生素C和葡萄糖基供体反应生成葡萄糖基维生素C衍生物。
[0020] 步骤（11）中维生素C溶液与葡萄糖基供体溶液的流量均为5 50mL/min，流量比为~1：1，维生素C与葡萄糖基供体的摩尔比为1：（1 2）。控制第一阶段反应的反应温度为25-40~
℃。在为25-40℃反应温度范围内，可以获得较高的维生素C葡萄糖苷产率。此外，从节约成本、葡萄糖基供体的溶解度及维生素C葡萄糖苷的产率上综合考虑，研究发现葡萄糖基供体选择麦芽糖或可溶性淀粉为优选。
℃。在为25-40℃反应温度范围内，可以获得较高的维生素C葡萄糖苷产率。此外，从节约成本、葡萄糖基供体的溶解度及维生素C葡萄糖苷的产率上综合考虑，研究发现葡萄糖基供体选择麦芽糖或可溶性淀粉为优选。
[0021] 步骤（2）中固定化葡萄糖淀粉酶按以下方法制备：（21）制备含海藻酸钠与葡萄糖淀粉酶的第二混合溶液，第二混合溶液中海藻酸钠的质量分数为1.5 3.5%，葡萄糖淀粉酶的含量为200 600U/mL；
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（22）在搅拌下将第二混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
（23）分离、洗涤即获得固定化葡萄糖淀粉酶。
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（22）在搅拌下将第二混合溶液滴加到质量分数为3% 6%的氯化钙溶液中，静置硬化30~ ~
50min；
（23）分离、洗涤即获得固定化葡萄糖淀粉酶。
[0022] 控制第二阶段反应的反应温度为25-40℃。经过第一阶段反应，反应原料维生素C溶液与葡萄糖基供体发生反应，产物不仅有维生素C葡萄糖苷，还有维生素C葡萄糖苷的结构异构体AA-5G，AA-6G等副产物，因此需要通过第二阶段的反应，在固定化葡萄糖淀粉酶的作用下减少糖的聚合度，使这些副产物转变成维生素C葡萄糖苷，提高维生素C葡萄糖苷的收率。另一方面，可以减轻后续产物纯化处理压力，降低生产成本。
[0023] 本实施例步骤（1）中的糖基转移酶与步骤（2）中的葡萄糖淀粉酶都是通过海藻酸钠在钙离子的作用下发生凝胶化反应，将催化反应酶包埋生成粒径在850 1100um之间的凝~胶微珠进行固定化，固定化方法简单、温和且高程度保留酶的活性。经过固定化后酶的反应稳定性提高，且酶可反复使用、便于分离回收，降低生产成本。另一方面，经过固定化后酶反应过程更易于控制。步骤（12）、（22）中可以通过7号针头将第一混合溶液和第二混合溶液滴加到氯化钙溶液中进行凝胶固定化反应。
[0024] 步骤（3）中将第二阶段的反应产物先经过阳离子交换树脂除去阳离子，之后再经过阴离子交换树脂除去残余糖类获得维生素C葡萄糖苷溶液，维生素C葡萄糖苷溶液经过浓缩冷却结晶后可获得白色至浅黄色的维生素C葡萄糖苷固体产品。
[0025] 产物维生素C葡萄糖苷通过高效液相色谱法检测，检测条件如下：色谱柱Amethyst C18-H，检测器Variable Wavelength Detector（UV），检测波长
240nm，柱温25℃，进样量10uL，流动相用体积分数为0.5%的甲醇/磷酸二氢钾溶液，并用磷酸调流动相的pH至2.0。
240nm，柱温25℃，进样量10uL，流动相用体积分数为0.5%的甲醇/磷酸二氢钾溶液，并用磷酸调流动相的pH至2.0。
[0026] 本发明实施例的一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法通过在两段相连的第一管式反应器、第二管式反应器中分别装填固定化糖基转移酶和固定化葡萄糖淀粉酶，可以实现维生素C葡萄糖苷的在线连续合成，合成工艺路线简单，条件易于控制，适合工业化规模生产；且通过本发明的连续合成方法维生素C葡萄糖苷的产物浓度可以达到300g/L左右，维生素C的转化率50%以上。
[0027] 以下结合具体实施例做进一步说明。
[0028] 实施例1本发明实施例1提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为600U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为600U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
[0029] （2）取一个盘管式管式反应器（第一管式反应器），管径为1cm，管长为2m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化糖基转移酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0030] （3）分别称取1moL维生素C和1moL麦芽糖分别溶解于1000mL蒸馏水中，两种溶液各自通过流量泵泵入管式反应器，控制流量为5mL/min，确保两者流量一样。控制管式反应器反应温度35℃。
[0031] （4）固定化葡萄糖淀粉酶制备：称取1.00g海藻酸钠于盛有30mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的葡萄糖淀粉酶溶液20mL，葡萄糖淀粉酶的含量为200U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有200mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的葡萄糖淀粉酶。
[0032] （5）取另一个盘管式管式反应器（第二管式反应器），管径为1cm，管长为1m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化葡萄糖淀粉酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0033] （6）将第一管式反应器的出口与第二管式反应器的入口相连，第二管式反应器的出口与容器相连，用于盛接所得料液。
[0034] （7）所得料液先进阳离子交换树脂柱除去阳离子，洗脱液进入阴离子交换树脂柱除去残余糖类，收集维生素C葡萄糖苷溶液 。将收集到的维生素C葡萄糖苷溶液进行浓缩冷却结晶，获得维生素C葡萄糖苷产品。经过高效液相色谱法检测维生素C葡萄糖苷溶液中维生素C葡萄糖苷的浓度为280g/L，维生素C的转化率为52.3%。
[0035] 实施例2本发明实施例2提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为800U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为800U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
[0036] （2）取一个盘管式管式反应器（第一管式反应器），管径为5cm，管长为4m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化糖基转移酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0037] （3）分别称取1moL维生素C和1.5moL麦芽糖分别溶解于1000mL蒸馏水中，两种溶液各自通过流量泵泵入管式反应器，控制流量为10mL/min，确保两者流量一样。控制管式反应器反应温度40℃。
[0038] （4）固定化葡萄糖淀粉酶制备：称取1.00g海藻酸钠于盛有30mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的葡萄糖淀粉酶溶液20mL，葡萄糖淀粉酶的含量为400U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有200mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的葡萄糖淀粉酶。
[0039] （5）取另一个盘管式管式反应器（第二管式反应器），管径为5cm，管长为2m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化葡萄糖淀粉酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0040] （6）将第一管式反应器的出口与第二管式反应器的入口相连，第二管式反应器的出口与容器相连，用于盛接所得料液。
[0041] （7）所得料液先进阳离子交换树脂柱除去阳离子，洗脱液进入阴离子交换树脂柱除去残余糖类，收集维生素C葡萄糖苷溶液 。将收集到的维生素C葡萄糖苷溶液进行浓缩冷却结晶，获得维生素C葡萄糖苷产品。经过高效液相色谱法检测维生素C葡萄糖苷溶液中维生素C葡萄糖苷的浓度为295g/L，维生素C的转化率为53.1%。
[0042] 实施例3本发明实施例3提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为1000U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为1000U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
[0043] （2）取一个盘管式管式反应器（第一管式反应器），管径为10cm，管长为5m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化糖基转移酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0044] （3）分别称取1moL维生素C和2moL麦芽糖分别溶解于1000mL蒸馏水中，两种溶液各自通过流量泵泵入管式反应器，控制流量为20mL/min，确保两者流量一样。控制管式反应器反应温度25℃。
[0045] （4）固定化葡萄糖淀粉酶制备：称取1.00g海藻酸钠于盛有30mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的葡萄糖淀粉酶溶液20mL，葡萄糖淀粉酶的含量为600U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有200mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的葡萄糖淀粉酶。
[0046] （5）取另一个盘管式管式反应器（第二管式反应器），管径为10cm，管长为2m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化葡萄糖淀粉酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0047] （6）将第一管式反应器的出口与第二管式反应器的入口相连，第二管式反应器的出口与容器相连，用于盛接所得料液。
[0048] （7）所得料液先进阳离子交换树脂柱除去阳离子，洗脱液进入阴离子交换树脂柱除去残余糖类，收集维生素C葡萄糖苷溶液 。将收集到的维生素C葡萄糖苷溶液进行浓缩冷却结晶，获得维生素C葡萄糖苷产品。经过高效液相色谱法检测维生素C葡萄糖苷溶液中维生素C葡萄糖苷的浓度为306g/L，维生素C的转化率为53.7%。
[0049] 实施例4本发明实施例4提供一种维生素C葡萄糖苷的连续合成方法，包括以下步骤：
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为1000U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
（1）固定化糖基转移酶制备：称取10.00g 海藻酸钠于盛有300mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的糖基转移酶（日本天野公司GGT-SL）溶液200mL，糖基转移酶的含量为1000U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有1000mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的糖基转移酶。
[0050] （2）取一个盘管式管式反应器（第一管式反应器），管径为10cm，管长为5m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化糖基转移酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0051] （3）分别称取1moL维生素C和1.5moL可溶性淀粉分别溶解于1000mL蒸馏水中，两种溶液各自通过流量泵泵入管式反应器，控制流量为20mL/min，确保两者流量一样。控制管式反应器反应温度25℃。
[0052] （4）固定化葡萄糖淀粉酶制备：称取1.00g海藻酸钠于盛有30mL蒸馏水的烧杯中，加热至沸腾，完全溶解后，放置室温冷却至38℃左右，加入预先制备好的葡萄糖淀粉酶溶液20mL，葡萄糖淀粉酶的含量为600U/mL。用7号注射器抽取海藻酸钠-酶混合物，将混合物缓慢滴入盛有200mL 3.0%氯化钙溶液的烧杯中，同时烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，滴完后静置硬化30min，倾去氯化钙溶液，用适量蒸馏水洗涤2-3次，除去漂浮的空化珠状颗粒后，即制备得到固定化的葡萄糖淀粉酶。
[0053] （5）取另一个盘管式管式反应器（第二管式反应器），管径为10cm，管长为2m，将反应器出口端用细网格封住，网格空隙小于固定化酶尺寸。将制备好的固定化葡萄糖淀粉酶从反应器未封住的入口端装入管子，装好后入口也用同样的细网格封住。
[0054] （6）将第一管式反应器的出口与第二管式反应器的入口相连，第二管式反应器的出口与容器相连，用于盛接所得料液。
[0055] （7）所得料液先进阳离子交换树脂柱除去阳离子，洗脱液进入阴离子交换树脂柱除去残余糖类，收集维生素C葡萄糖苷溶液 。将收集到的维生素C葡萄糖苷溶液进行浓缩冷却结晶，获得维生素C葡萄糖苷产品。经过高效液相色谱法检测维生素C葡萄糖苷溶液中维生素C葡萄糖苷的浓度为304g/L，维生素C的转化率为53.6%。
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