一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法
阅读：210发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种减少解冻过程中 微 生物 变化的解冻方法，它主要包括如下步骤：首先通过模拟样品检测的方法，对样品人工接种不同浓度的食源性致病微生物；然后通过不同处理 温度 和不同时间的样品进行解冻和检测；最后经过数据分析得出对冷冻食品进行解冻，样品中微生物含量变化最小的解冻条件；本发明具有提高检测结果的高通量、准确性和及时性的优点。，下面是一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法专利的具体信息内容。
1.一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：它包括以下步骤：
步骤1）：制备过夜菌悬液备用；
步骤2）：采购样品，并把样品进行平均分成100-300份；
步骤3）：采用人工污染的方法，分别接种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌各1-3种对样品进行污染，每种设置不同的浓度等级，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
2.如权利要求1所述的一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：它包括以下步骤：
步骤1）：制备过夜菌悬液肉汤备用；
步骤2）：将购买的猪肉进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品，并且将样品剪碎，用无菌锡箔纸进行包裹；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
3.如权利要求1所述的一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：它包括以下步骤：
步骤1）：制备过夜冰淇淋备用；
步骤2）：将购买的冰淇淋进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
4.如权利要求2、3所述的一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：在步骤3）中所述的不同浓度梯度的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具体设置如下：
沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-8×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-7.9×
104CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL）三个不同的浓度梯度；
金黄色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（3.5×
4 4
10-10.5×10CFU/mL）、低浓度（30-320CFU/mL）三个不同的浓度梯度。
5.如权利要求2、3所述的一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：在步骤4）中所述的解冻温度和时间具体设置为：
在4℃的解冻温度下设置有2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h、48h的解冻时间；
在25℃、37℃、45℃的解冻温度下均设置有5min、10min、15min、30min、45min、60min、
90min、120min的解冻时间。
6.如权利要求2、3所述的一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，其特征在于：在步骤3）中所述的沙门氏菌可以替换为革兰氏阴性菌的其他种或革兰氏阴性菌的任意两种或三种，所述的金黄色葡萄球菌可以替换为革兰氏阳性菌的其他种或革兰氏阳性菌的任意两种或三种。
一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法
技术领域
[0001] 本发明属于食品微生物检验技术领域，尤其涉及一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法。
背景技术
[0002] 冷冻食品在微生物检测的过程中，新国标GB 4789.1-2016 总则中规定“采取必要措施防止样品中微生物数量的变化”，而采用何种措施来防止冷冻食品样品在检测过程中
食源性致病微生物数量不发生变化仍然没有结果；因此，以冷冻食品中食源性致病菌的检
测技术研究为出发点，建立冷冻食品中致病菌快速无损解冻技术是研究的重点，且革兰氏
阳性菌和革兰氏阴性菌是主要的食源性致病微生物，而目前传统检测方法仍然存在检测周
期长，检测过程繁琐的问题；因此，采用高温速解冻、低温缓解冻以等不同方式建立冷冻食
品中致病菌快速无损解冻技术，建立起一种提高检测结果的高通量、准确性和及时性的减
少解冻过程中微生物变化的解冻方法是非常有必要的。
食源性致病微生物数量不发生变化仍然没有结果；因此，以冷冻食品中食源性致病菌的检
测技术研究为出发点，建立冷冻食品中致病菌快速无损解冻技术是研究的重点，且革兰氏
阳性菌和革兰氏阴性菌是主要的食源性致病微生物，而目前传统检测方法仍然存在检测周
期长，检测过程繁琐的问题；因此，采用高温速解冻、低温缓解冻以等不同方式建立冷冻食
品中致病菌快速无损解冻技术，建立起一种提高检测结果的高通量、准确性和及时性的减
少解冻过程中微生物变化的解冻方法是非常有必要的。
发明内容
[0004] 本发明技术方案是：一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，它包括如下步骤：
步骤1）：制备过夜菌悬液备用；
步骤2）：采购样品，并把样品进行平均分成100-300份；
步骤3）：采用人工污染的方法，分别接种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌各1-3种对样品
进行污染，每种设置不同的浓度等级，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
步骤1）：制备过夜菌悬液备用；
步骤2）：采购样品，并把样品进行平均分成100-300份；
步骤3）：采用人工污染的方法，分别接种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌各1-3种对样品
进行污染，每种设置不同的浓度等级，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
[0005] 一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，它包括以下步骤：步骤1）：制备过夜菌悬液肉汤备用；
步骤2）：将购买的猪肉进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品，并且
将样品剪碎，用无菌锡箔纸进行包裹；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
步骤2）：将购买的猪肉进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品，并且
将样品剪碎，用无菌锡箔纸进行包裹；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
[0006] 在步骤3）中所述的不同浓度梯度的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具体设置如下：沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-8×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-7.9×
104CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL）三个不同的浓度梯度；
金黄色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（3.5×
104-10.5×104CFU/mL）、低浓度（30-320CFU/mL）三个不同的浓度梯度。
104CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL）三个不同的浓度梯度；
金黄色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（3.5×
104-10.5×104CFU/mL）、低浓度（30-320CFU/mL）三个不同的浓度梯度。
[0007] 在步骤4）中所述的解冻温度和时间具体设置为：在4℃的解冻温度下设置有2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h、48h的解冻时间；
在25℃、37℃、45℃的解冻温度下均设置有5min、10min、15min、30min、45min、60min、
90min、120min的解冻时间。
在25℃、37℃、45℃的解冻温度下均设置有5min、10min、15min、30min、45min、60min、
90min、120min的解冻时间。
[0008] 一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，它包括以下步骤：步骤1）：制备过夜冰淇淋备用；
步骤2）：将购买的冰淇淋进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
步骤2）：将购买的冰淇淋进行样品称取，每份样品20-30g，共计称取100-300份样品；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1-3mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
[0009] 在步骤3）中所述的不同浓度梯度的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具体设置如下：沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-8×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-7.9×
104CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL）三个不同的浓度梯度；
金黄色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（3.5×
104-10.5×104CFU/mL）、低浓度（30-320CFU/mL）三个不同的浓度梯度。
104CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL）三个不同的浓度梯度；
金黄色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（3.5×
104-10.5×104CFU/mL）、低浓度（30-320CFU/mL）三个不同的浓度梯度。
[0010] 在步骤4）中所述的解冻温度和时间具体设置为：在4℃的解冻温度下设置有2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h、48h的解冻时间；
在25℃、37℃、45℃的解冻温度下均设置有5min、10min、15min、30min、45min、60min、
90min、120min的解冻时间。
在25℃、37℃、45℃的解冻温度下均设置有5min、10min、15min、30min、45min、60min、
90min、120min的解冻时间。
[0011] 本发明具有以下优点：本发明在使用时，采用人工污染的方法对样品进行污染，接种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，由于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌为冷冻食品中主要的
食源性致病菌，并且接种不同种类微生物时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结
果的高通量和准确性；本发明在采用人工污染的方法的同时，与自然产生的过夜微生物含
量进行比对，能够很好的模拟实际情况，便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本
发明采用高温速解冻、低温缓解冻等不同方式建立冷冻食品中致病菌快速无损解冻技术，
设置不同的解冻温度和相应的解冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到
冷冻食品中微生物检测过程中解冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明
具有提高检测结果的高通量、准确性和及时性的优点。
附图说明
食源性致病菌，并且接种不同种类微生物时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结
果的高通量和准确性；本发明在采用人工污染的方法的同时，与自然产生的过夜微生物含
量进行比对，能够很好的模拟实际情况，便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本
发明采用高温速解冻、低温缓解冻等不同方式建立冷冻食品中致病菌快速无损解冻技术，
设置不同的解冻温度和相应的解冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到
冷冻食品中微生物检测过程中解冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明
具有提高检测结果的高通量、准确性和及时性的优点。
附图说明
[0012] 图1是本发明接种高浓度沙门氏菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0013] 图2是本发明接种中浓度沙门氏菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0014] 图3是本发明接种低浓度沙门氏菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0015] 图4是本发明接种高浓度沙门氏菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0016] 图5是本发明接种中浓度沙门氏菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0017] 图6是本发明接种低浓度沙门氏菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0018] 图7是本发明接种高浓度金黄色葡萄球菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0019] 图8是本发明接种中浓度金黄色葡萄球菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0020] 图9是本发明接种低浓度金黄色葡萄球菌且在4℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0021] 图10是本发明接种高浓度金黄色葡萄球菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0022] 图11是本发明接种中浓度金黄色葡萄球菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0023] 图12是本发明接种低浓度金黄色葡萄球菌且在25℃、37℃、45℃解冻条件下的检测结果统计图。
[0024] 图中：系列1为25℃，系列2为37℃，系列3为45℃。
具体实施方式
[0025] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0026] 实施例1一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，它包括以下步骤：
步骤1）：制备过夜菌悬液肉汤备用；
步骤2）：将购买的猪肉进行样品称取，每份样品25g，共计称取100份样品，并且将样品
剪碎，用无菌锡箔纸进行包裹；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
步骤1）：制备过夜菌悬液肉汤备用；
步骤2）：将购买的猪肉进行样品称取，每份样品25g，共计称取100份样品，并且将样品
剪碎，用无菌锡箔纸进行包裹；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各1mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
[0027] 为了更好的效果，在步骤3）和步骤4）中具体设置如下：在4℃的解冻温度下解冻并在2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h、48h的解冻时间点上检测微
生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-4×107CFU/mL）、中浓
4 4
度（1.8×10-4.3×10CFU/mL）、低浓度（15-90 CFU/mL），金黄色葡萄球菌的接种量设置有
高浓度（4×107-7.5×107CFU/mL）、中浓度（3.5×104-7.2×104CFU/mL）、低浓度（30-90CFU/
mL）；
在25℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×
107-3.5×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-3.8×104 CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL），金黄
色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4.2×107-8.6×107CFU/mL）、中浓度（4×104-9.5×
104CFU/mL）、低浓度（30-90 CFU/mL）；
在37℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.5×104CFU/mL）、低浓度（40-90CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（4.8×107-9.9×107CFU/mL）、中浓度（4.6×104-9.5×104CFU/
mL）、低浓度（40-120CFU/mL）；
在45℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.9×104CFU/mL）、低浓度（60-80CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（5×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（4.8×104-10.5×104CFU/
mL）、低浓度（80-320CFU/mL）。
生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-4×107CFU/mL）、中浓
4 4
度（1.8×10-4.3×10CFU/mL）、低浓度（15-90 CFU/mL），金黄色葡萄球菌的接种量设置有
高浓度（4×107-7.5×107CFU/mL）、中浓度（3.5×104-7.2×104CFU/mL）、低浓度（30-90CFU/
mL）；
在25℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×
107-3.5×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-3.8×104 CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL），金黄
色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4.2×107-8.6×107CFU/mL）、中浓度（4×104-9.5×
104CFU/mL）、低浓度（30-90 CFU/mL）；
在37℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.5×104CFU/mL）、低浓度（40-90CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（4.8×107-9.9×107CFU/mL）、中浓度（4.6×104-9.5×104CFU/
mL）、低浓度（40-120CFU/mL）；
在45℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.9×104CFU/mL）、低浓度（60-80CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（5×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（4.8×104-10.5×104CFU/
mL）、低浓度（80-320CFU/mL）。
[0028] 为了更好的效果，在步骤3）中所述的沙门氏菌可以替换为革兰氏阴性菌的其他种或革兰氏阴性菌的任意两种或三种，所述的金黄色葡萄球菌可以替换为革兰氏阳性菌的其
他种或革兰氏阳性菌的任意两种或三种。
他种或革兰氏阳性菌的任意两种或三种。
[0029] 本实施例采用人工污染的方法对样品进行污染，接种沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌的一种，沙门氏菌是革兰氏阴性菌的一种，且沙门氏菌
和金黄色葡萄球菌为冻肉食品中主要的食源性致病菌，同时接种沙门氏菌和金黄色葡萄球
菌时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结果的高通量和准确性；本发明在采用人
工污染的方法的同时，与夜菌悬液肉汤的微生物含量进行比对，能够很好的模拟实际情况，
便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本发明设置有不同的解冻温度和相应的解
冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到冷肉食品中微生物检测过程中解
冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明具有提高检测结果的高通量、准确
性和及时性的优点。
和金黄色葡萄球菌为冻肉食品中主要的食源性致病菌，同时接种沙门氏菌和金黄色葡萄球
菌时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结果的高通量和准确性；本发明在采用人
工污染的方法的同时，与夜菌悬液肉汤的微生物含量进行比对，能够很好的模拟实际情况，
便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本发明设置有不同的解冻温度和相应的解
冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到冷肉食品中微生物检测过程中解
冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明具有提高检测结果的高通量、准确
性和及时性的优点。
[0030] 实施例2一种减少解冻过程中微生物变化的解冻方法，它包括以下步骤：
步骤1）：制备过夜冰淇淋备用；
步骤2）：将购买的冰淇淋进行样品称取，每份样品25g，共计称取200份样品；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各2mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
步骤1）：制备过夜冰淇淋备用；
步骤2）：将购买的冰淇淋进行样品称取，每份样品25g，共计称取200份样品；
步骤3）：在生物安全柜中进行样品的接种，分别接种不同浓度梯度的沙门氏菌、金黄色
葡萄球菌各2mL，然后将接种后的样品进行冷冻保存过夜；
步骤4）：上述步骤完成后，接种不同浓度梯度的样品在不同解冻温度和时间条件下检
测微生物的生长状态，记录样品中微生物含量的变化；
步骤5）：找出不同解冻条件下样品的微生物含量变化最小的解冻条件。
[0031] 为了更好的效果，在步骤3）和步骤4）中具体设置如下：在4℃的解冻温度下解冻并在2h、4h、8h、16h、24h、30h、36h、48h的解冻时间点上检测微
生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-4×107CFU/mL）、中浓
度（1.8×104-4.3×104CFU/mL）、低浓度（15-90 CFU/mL），金黄色葡萄球菌的接种量设置有
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高浓度（4×10-7.5×10CFU/mL）、中浓度（3.5×10-7.2×10CFU/mL）、低浓度（30-90CFU/
mL）；
在25℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×
107-3.5×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-3.8×104 CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL），金黄
色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4.2×107-8.6×107CFU/mL）、中浓度（4×104-9.5×
104CFU/mL）、低浓度（30-90 CFU/mL）；
在37℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.5×104CFU/mL）、低浓度（40-90CFU/mL），金黄色葡萄
7 7 4 4
球菌的接种量设置有高浓度（4.8×10-9.9×10CFU/mL）、中浓度（4.6×10-9.5×10CFU/
mL）、低浓度（40-120CFU/mL）；
在45℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
7 7 4 4
10-8×10CFU/mL）、中浓度（5×10-7.9×10CFU/mL）、低浓度（60-80CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（5×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（4.8×104-10.5×104CFU/
mL）、低浓度（80-320CFU/mL）。
生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×107-4×107CFU/mL）、中浓
度（1.8×104-4.3×104CFU/mL）、低浓度（15-90 CFU/mL），金黄色葡萄球菌的接种量设置有
7 7 4 4
高浓度（4×10-7.5×10CFU/mL）、中浓度（3.5×10-7.2×10CFU/mL）、低浓度（30-90CFU/
mL）；
在25℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（1.9×
107-3.5×107CFU/mL）、中浓度（1.8×104-3.8×104 CFU/mL）、低浓度（15-90CFU/mL），金黄
色葡萄球菌的接种量设置有高浓度（4.2×107-8.6×107CFU/mL）、中浓度（4×104-9.5×
104CFU/mL）、低浓度（30-90 CFU/mL）；
在37℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
107-8×107CFU/mL）、中浓度（5×104-7.5×104CFU/mL）、低浓度（40-90CFU/mL），金黄色葡萄
7 7 4 4
球菌的接种量设置有高浓度（4.8×10-9.9×10CFU/mL）、中浓度（4.6×10-9.5×10CFU/
mL）、低浓度（40-120CFU/mL）；
在45℃的解冻温度下解冻并在5min、10min、15min、30min、45min、60min、90min、120min
的解冻时间点上检测微生物生长状态的样品，其沙门氏菌的接种量设置有高浓度（5.4×
7 7 4 4
10-8×10CFU/mL）、中浓度（5×10-7.9×10CFU/mL）、低浓度（60-80CFU/mL），金黄色葡萄
球菌的接种量设置有高浓度（5×107-10.2×107CFU/mL）、中浓度（4.8×104-10.5×104CFU/
mL）、低浓度（80-320CFU/mL）。
[0032] 为了更好的效果，在步骤3）中所述的沙门氏菌可以替换为革兰氏阴性菌的其他种或革兰氏阴性菌的任意两种或三种，所述的金黄色葡萄球菌可以替换为革兰氏阳性菌的其
他种或革兰氏阳性菌的任意两种或三种。
他种或革兰氏阳性菌的任意两种或三种。
[0033] 本实施例采用人工污染的方法对样品进行污染，接种沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌的一种，沙门氏菌是革兰氏阴性菌的一种，且沙门氏菌
和金黄色葡萄球菌为冰淇淋食品中主要的食源性致病菌，同时接种沙门氏菌和金黄色葡萄
球菌时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结果的高通量和准确性；本发明在采用
人工污染的方法的同时，与过夜冰淇淋的微生物含量进行比对，能够很好的模拟实际情况，
便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本发明设置有不同的解冻温度和相应的解
冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到冰淇淋食品中微生物检测过程中
解冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明具有提高检测结果的高通量、准
确性和及时性的优点。
和金黄色葡萄球菌为冰淇淋食品中主要的食源性致病菌，同时接种沙门氏菌和金黄色葡萄
球菌时，设置有相应的浓度梯度，因此，提高了检测结果的高通量和准确性；本发明在采用
人工污染的方法的同时，与过夜冰淇淋的微生物含量进行比对，能够很好的模拟实际情况，
便于实际检验的控制，提高了检测结果的效度；本发明设置有不同的解冻温度和相应的解
冻时间，并检测和记录微生物含量的变化情况，方便找到冰淇淋食品中微生物检测过程中
解冻的控制点，提高了检测结果的准确性和及时性；本发明具有提高检测结果的高通量、准
确性和及时性的优点。
[0034] 为了进一步地说明本发明的性能，将实施例的具体检测实验数据提供如下。
[0035] 表1 本发明实施例中接种沙门氏菌的检测结果4℃ 解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 1 mL) 2 mL) 3
2h 1.9 7.28 1.8 4.26 15 1.18
4h 2 7.3 1.9 4.28 18 1.26
8h 2 7.3 2 4.3 20 1.3
16h 2.2 7.34 2.3 4.36 24 1.38
24h 2.6 7.41 2.7 4.43 28 1.45
30h 3 7.48 3.1 4.49 50 1.7
36h 3.3 7.52 3.5 4.54 65 1.81
48h 4 7.6 4.3 4.63 90 1.95
表2 本发明实施例中接种沙门氏菌的检测结果
温度 解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 4 mL) 5 mL) 6
25℃ -5min 1.9 7.28 1.8 4.26 15 1.18
-10min 2.1 7.32 2.2 4.34 20 1.3
-15min 2.2 7.34 2.3 4.36 23 1.36
-30min 2.5 7.4 2.6 4.41 27 1.43
-45min 2.8 7.45 3.2 4.51 38 1.58
-60min 3 7.48 3.5 4.54 52 1.72
-90min 3.2 7.51 3.6 4.56 68 1.83
-120min 3.5 7.54 3.8 4.58 86 1.93
37℃ -5min 5.4 7.73 5 4.7 40 1.6
-10min 5.5 7.74 5.5 4.74 60 1.78
-15min 6.3 7.8 6.3 4.8 100 2
-30min 6.8 7.83 6.5 4.81 130 2.11
-45min 7.1 7.85 6.8 4.83 90 1.95
-60min 7.4 7.87 7.2 4.86 80 1.9
-90min 7.5 7.88 7.5 4.88 90 1.95
-120min 8 7.9 7.5 4.88 90 1.95
45℃ -5min 5.4 7.73 5 4.7 60 1.78
-10min 5.5 7.74 5.5 4.74 120 2.08
-15min 6.3 7.8 6.3 4.8 150 2.18
-30min 6.8 7.83 6.5 4.81 130 2.11
-45min 7.1 7.85 6.8 4.83 80 1.9
-60min 7.4 7.87 7.2 4.86 90 1.95
-90min 7.5 7.88 7.5 4.88 90 1.95
-120min 8 7.9 7.5 4.9 80 1.9
根据沙门氏菌菌悬液的浓度和样品中人工接种量的统计结果分析可知：冷冻肉制品中
沙门氏菌检测的最佳解冻条件应该在25℃条件下解冻15-30min，或者4℃条件下16-4h，该
条件下检测到的微生物含量最接近于人工接种的微生物含量。
2h 1.9 7.28 1.8 4.26 15 1.18
4h 2 7.3 1.9 4.28 18 1.26
8h 2 7.3 2 4.3 20 1.3
16h 2.2 7.34 2.3 4.36 24 1.38
24h 2.6 7.41 2.7 4.43 28 1.45
30h 3 7.48 3.1 4.49 50 1.7
36h 3.3 7.52 3.5 4.54 65 1.81
48h 4 7.6 4.3 4.63 90 1.95
表2 本发明实施例中接种沙门氏菌的检测结果
温度 解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 4 mL) 5 mL) 6
25℃ -5min 1.9 7.28 1.8 4.26 15 1.18
-10min 2.1 7.32 2.2 4.34 20 1.3
-15min 2.2 7.34 2.3 4.36 23 1.36
-30min 2.5 7.4 2.6 4.41 27 1.43
-45min 2.8 7.45 3.2 4.51 38 1.58
-60min 3 7.48 3.5 4.54 52 1.72
-90min 3.2 7.51 3.6 4.56 68 1.83
-120min 3.5 7.54 3.8 4.58 86 1.93
37℃ -5min 5.4 7.73 5 4.7 40 1.6
-10min 5.5 7.74 5.5 4.74 60 1.78
-15min 6.3 7.8 6.3 4.8 100 2
-30min 6.8 7.83 6.5 4.81 130 2.11
-45min 7.1 7.85 6.8 4.83 90 1.95
-60min 7.4 7.87 7.2 4.86 80 1.9
-90min 7.5 7.88 7.5 4.88 90 1.95
-120min 8 7.9 7.5 4.88 90 1.95
45℃ -5min 5.4 7.73 5 4.7 60 1.78
-10min 5.5 7.74 5.5 4.74 120 2.08
-15min 6.3 7.8 6.3 4.8 150 2.18
-30min 6.8 7.83 6.5 4.81 130 2.11
-45min 7.1 7.85 6.8 4.83 80 1.9
-60min 7.4 7.87 7.2 4.86 90 1.95
-90min 7.5 7.88 7.5 4.88 90 1.95
-120min 8 7.9 7.5 4.9 80 1.9
根据沙门氏菌菌悬液的浓度和样品中人工接种量的统计结果分析可知：冷冻肉制品中
沙门氏菌检测的最佳解冻条件应该在25℃条件下解冻15-30min，或者4℃条件下16-4h，该
条件下检测到的微生物含量最接近于人工接种的微生物含量。
[0036] 表3 本发明实施例中接种金黄色葡萄球菌的检测结果4℃ 解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 7 mL) 8 mL) 9
2h 4 7.60206 3.5 4.544068 30 1.477121
4h 4.3 7.633468 3.7 4.568202 37 1.568202
8h 4.5 7.653213 4.2 4.623249 42 1.623249
16h 4.8 7.681241 4.9 4.690196 50 1.69897
24h 5.2 7.716003 5.3 4.724276 55 1.740363
30h 5.9 7.770852 5.8 4.763428 63 1.799341
36h 6.2 7.792392 6.5 4.812913 75 1.875061
48h 7.5 7.875061 7.2 4.857332 90 1.954243
表4 本发明实施例中接种金黄色葡萄球菌的检测结果
温度 -解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 10 mL) 11 mL) 12
25℃ -5min 4.2 7.623249 4 4.60206 35 1.544068
-10min 4.4 7.643453 4.3 4.633468 42 1.623249
-15min 4.8 7.681241 4.9 4.690196 49 1.690196
-30min 5.3 7.724276 5.3 4.724276 54 1.732394
-45min 6 7.778151 6.5 4.812913 63 1.799341
-60min 6.4 7.80618 7.1 4.851258 88 1.944483
-90min 7.2 7.857332 8.3 4.919078 97 1.986772
-120min 8.6 7.934498 9.5 4.977724 99 1.995635
37℃ -5min 4.8 7.681241 4.6 4.662758 40 1.60206
-10min 5.5 7.740363 5.5 4.740363 50 1.69897
-15min 6.2 7.792393 6.3 4.799341 100 2
-30min 7.3 7.863323 6.8 4.832509 120 2.079181
-45min 8 7.90309 7.5 4.875061 150 2.176091
-60min 8.6 7.934498 8 4.90309 100 2
-90min 9.4 7.973128 8.5 4.929419 109 2.037426
-120min 9.9 7.995635 9.5 4.977724 120 2.079181
45℃ -5min 5 7.69897 4.8 4.681241 80 1.90309
-10min 6.3 7.799341 6.2 4.792392 150 2.176091
-15min 6.5 7.812913 6.9 4.838849 240 2.380211
-30min 7.4 7.869232 7.5 4.875061 280 2.447158
-45min 8.2 7.913814 7.9 4.897627 240 2.380211
-60min 9.5 7.977724 9 4.954243 260 2.414973
-90min 9.9 7.995635 9.6 4.982271 280 2.447158
-120min 10.2 8.0086 10.5 5.021189 320 2.50515
根据金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度和样品中人工接种量的统计结果分析可知：冷冻肉
制品中金黄色葡萄球菌检测的最佳解冻条件应该在25℃条件下解冻15-30min，或者4℃条
件下16-24h，该条件下检测到的微生物含量最接近于人工接种的微生物含量。
2h 4 7.60206 3.5 4.544068 30 1.477121
4h 4.3 7.633468 3.7 4.568202 37 1.568202
8h 4.5 7.653213 4.2 4.623249 42 1.623249
16h 4.8 7.681241 4.9 4.690196 50 1.69897
24h 5.2 7.716003 5.3 4.724276 55 1.740363
30h 5.9 7.770852 5.8 4.763428 63 1.799341
36h 6.2 7.792392 6.5 4.812913 75 1.875061
48h 7.5 7.875061 7.2 4.857332 90 1.954243
表4 本发明实施例中接种金黄色葡萄球菌的检测结果
温度 -解冻时 高浓度(×107CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 中浓度(×104CFU/ 检验结果(CFU/mL)图 低浓度(CFU/ 检验结果(CFU/mL)图间 mL) 10 mL) 11 mL) 12
25℃ -5min 4.2 7.623249 4 4.60206 35 1.544068
-10min 4.4 7.643453 4.3 4.633468 42 1.623249
-15min 4.8 7.681241 4.9 4.690196 49 1.690196
-30min 5.3 7.724276 5.3 4.724276 54 1.732394
-45min 6 7.778151 6.5 4.812913 63 1.799341
-60min 6.4 7.80618 7.1 4.851258 88 1.944483
-90min 7.2 7.857332 8.3 4.919078 97 1.986772
-120min 8.6 7.934498 9.5 4.977724 99 1.995635
37℃ -5min 4.8 7.681241 4.6 4.662758 40 1.60206
-10min 5.5 7.740363 5.5 4.740363 50 1.69897
-15min 6.2 7.792393 6.3 4.799341 100 2
-30min 7.3 7.863323 6.8 4.832509 120 2.079181
-45min 8 7.90309 7.5 4.875061 150 2.176091
-60min 8.6 7.934498 8 4.90309 100 2
-90min 9.4 7.973128 8.5 4.929419 109 2.037426
-120min 9.9 7.995635 9.5 4.977724 120 2.079181
45℃ -5min 5 7.69897 4.8 4.681241 80 1.90309
-10min 6.3 7.799341 6.2 4.792392 150 2.176091
-15min 6.5 7.812913 6.9 4.838849 240 2.380211
-30min 7.4 7.869232 7.5 4.875061 280 2.447158
-45min 8.2 7.913814 7.9 4.897627 240 2.380211
-60min 9.5 7.977724 9 4.954243 260 2.414973
-90min 9.9 7.995635 9.6 4.982271 280 2.447158
-120min 10.2 8.0086 10.5 5.021189 320 2.50515
根据金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度和样品中人工接种量的统计结果分析可知：冷冻肉
制品中金黄色葡萄球菌检测的最佳解冻条件应该在25℃条件下解冻15-30min，或者4℃条
件下16-24h，该条件下检测到的微生物含量最接近于人工接种的微生物含量。
[0037] 综上所述，我们得出对于革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌），还是革兰氏阴性菌（如沙门氏菌）在冷冻制品中的最佳解冻环境为在25℃条件下解冻15-30min，或者4℃条件
下16-24h，在该条件下对冷冻食品进行解冻，样品中微生物的含量变化最小。
下16-24h，在该条件下对冷冻食品进行解冻，样品中微生物的含量变化最小。
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