技术领域
[0001] 本
发明涉及饲料领域,特别涉及一种复合饲料添加剂。
背景技术
[0002] 随着饲料产业的发展和完善,我国已颁布相关规定完全禁止在饲料添加剂中使用抗生素。因此替抗类添加剂的研究应用将引起高度重视,而中药多糖因其具有的多种
生物活性且无毒
副作用,是一类有很大开发潜
力的免疫调节剂。益生菌在动物肠道酸性环境中具有较高的
稳定性,能够抑制有害菌种生长,提高
机体免疫力,同时参与了机体的新陈代谢,已在
水产养殖业中广泛使用。中药多糖和益生菌是公认的两类绿色饲料添加剂,两者对动物机体积极影响的机理极其相似,在实际应用中也表现出优势互补的作用,是开发新型动物饲料合生元的重要方向。然而市面上的中药多糖饲料添加剂或益生菌添加剂对鱼类吸收代谢的效果并不理想。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于针对上述
现有技术的不足,提供一种多糖益生菌复合饲料添加剂及其制备方法。
[0004] 本发明所采取的技术方案是:一种多糖益生菌复合饲料添加剂的制备方法,其包括如下工艺步骤:
[0005] 1)取玉屏
风药渣与离子水混合浸泡,
真空抽滤,浓缩至原体积的0.3~0.5倍,得浓缩液;
[0006] 2)将浓缩液加入酒精中混合,静置,过滤得沉淀物,再经干燥,得玉屏风粗多糖粉末;
[0007] 3)在无菌环境条件下,对乳酸杆菌、嗜热链球菌和枯草芽孢杆菌分别进行分离纯化、液体培养,将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液混合,得混合菌液;
[0008] 4)将步骤2)所得的玉屏风粗多糖粉末配制成终浓度为0.05~0.3g/ml的溶液,灭菌冷却后与步骤3)所得的混合菌液混合,置于28℃、150rpm恒温条件下
发酵48~72h,经真空
冷冻干燥,得成品。
[0009] 具体地,本发明通过步骤4)中将玉屏风多糖溶液与混合菌液混合后进行联合发酵,不仅进一步提高了其中玉屏风的充分利用,且使得最终成品特别适用于鱼类对糖类的吸收和代谢,从而有效提高了鱼类抗应激能力和免疫力。
[0010] 作为上述方案的进一步改进,步骤1)中所述混合浸泡的料液比为1:10~15,浸泡时间为20~45min。具体地,料液比和浸泡时间的限定有利于提高玉屏风多糖的
浸出率。
[0011] 作为上述方案的进一步改进,步骤1)所述真空抽滤前还包括将混合浸泡的玉屏风药渣与离子水置于100℃水浴中回流提取1~2h,重复两次并合并两次滤液,其使得玉屏风药渣得以充分利用。
[0012] 作为上述方案的进一步改进,步骤2)中所述的酒精为95~98%浓度的酒精。
[0013] 作为上述方案的进一步改进,步骤2)中所述静置为在0~8℃下静置10~12h。
[0014] 作为上述方案的进一步改进,步骤3)中所述分离纯化过程为选用
质量百分比成分为1%蛋白胨、0.8%
牛肉膏、0.4%
酵母膏、2%
葡萄糖、0.2%
磷酸二氢
钾、0.2%
柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%
硫酸镁、0.004%硫酸锰、0.1%吐温80、1.4%琼脂的MRS固体培养基对乳酸杆菌进行培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%
碳酸
钙、1.5%琼脂、0.005%中性红的MC固体培养基对嗜热链球菌进行培养;选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5%
氯化钠、1%可溶性
淀粉、1.5%琼脂的含有可溶性淀粉的LB培养基对枯草芽孢杆菌进行培养。
[0015] 作为上述方案的进一步改进,步骤3)中所述液体培养过程为选用质量百分比成分为1%蛋白胨、2%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%
硫酸镁、0.005%硫酸锰、0.1%吐温80的液体培养基对乳酸杆菌进行培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、0.005%中性红的液体培养基对嗜热链球菌进行培养;选用质量百分比成分为5%豆饼粉、7%玉米粉、0.5%Na2HPO4、0.4%(NH4)2SO4、0.2%NH4Cl、0.2%CaCl2的液体培养基对枯草芽孢杆菌进行培养。
[0016] 作为上述方案的进一步改进,所述培养的培养
温度为30~37℃,培养时间20~24h。
[0017] 作为上述方案的进一步改进,步骤3)中所述的混合为将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液按质量比为1:1:1混合,其混合菌液的有效活菌量为1.0×109CFU/ml。具体地,本发明对三种菌液混合比例的限定可高效地对玉屏风多糖进行分解代谢,充分发挥混合菌液和玉屏风多糖的优势互补作用,从而可高效地鱼类肠道菌群,增强鱼类对营养物质的消化和吸收,提供鱼类的糖代谢水平。
[0018] 作为上述方案的进一步改进,步骤4)的混合中所述混合菌液的添加量按质量百分比计为溶液的3%。
[0019] 本发明的有益效果是:本发明利用益生菌混合菌液对玉屏风多糖的分解代谢,充分发挥两者对鱼类肠道菌群平衡和糖代谢水平提升的作用,同时使该饲料添加剂可有效提高鱼类抗应激能力和免疫力。
具体实施方式
[0020] 下面结合
实施例对本发明进行具体描述,以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是,实施例只是用于对本发明做进一步说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,所属领域技术熟练人员,根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整,应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的,均为市售产品;未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
[0021] 实施例1
[0022] 一种多糖益生菌复合饲料添加剂的制备方法,其包括如下工艺步骤:
[0023] 1)取玉屏风药渣与离子水按料液比为1:12浸泡,浸泡时间为30min,置于100℃水浴中回流提取2h,重复两次并合并两次滤液,真空抽滤,浓缩至原体积的0.4倍,得浓缩液;
[0024] 2)将浓缩液加入98%的酒精中混合,4℃下静置12h,过滤得沉淀物,再经干燥,得玉屏风粗多糖粉末;
[0025] 3)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.8%牛肉膏、0.4%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.004%硫酸锰、0.1%吐温80、1.4%琼脂的pH值为6.5的MRS固体培养基对乳酸杆菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、1.5%琼脂、0.005%中性红的pH值为6.0的MC固体培养基对嗜热链球菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5%氯化钠、
1%可溶性淀粉、1.5%琼脂的含有可溶性淀粉的pH值为7.2的LB培养基对枯草芽孢杆菌进行分离纯化培养,控制培养温度为35℃、培养时间22h;
[0026] 4)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、2%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.005%硫酸锰、
0.1%吐温80的pH值为6.5的液体培养基对乳酸杆菌进行液体培养;选用质量百分比成分为
0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、0.005%中性红的pH值为6.0的液体培养基对嗜热链球菌进行液体培养;选用质量百分比成分为5%豆饼粉、7%玉米粉、0.5%Na2HPO4、0.4%(NH4)2SO4、0.2%NH4Cl、0.2%CaCl2的pH值为7.2的液体培养基对枯草芽孢杆菌进行液体培养,控制培养温度为35℃、培养时间22h;
[0027] 5)将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液按质量比为1:1:1混合,其混合菌液的有效活菌量为1.0×109CFU/ml,得混合菌液;
[0028] 6)将步骤2)所得的玉屏风粗多糖粉末配制成终浓度为0.05~0.3g/ml的溶液,灭菌冷却后与混合菌液混合,混合菌液的添加量按质量百分比计为溶液的3%,后置于28℃、150rpm恒温条件下发酵60h,经真空冷冻干燥,得实施例1成品。
[0029] 对比例1
[0030] 一种复合饲料添加剂的制备方法,其包括如下工艺步骤:
[0031] 1)取玉屏风药渣与离子水按料液比为1:12浸泡,浸泡时间为30min,置于100℃水浴中回流提取2h,重复两次并合并两次滤液,真空抽滤,浓缩至原体积的0.4倍,得浓缩液;
[0032] 2)将浓缩液加入98%的酒精中混合,4℃下静置12h,过滤得沉淀物,再经干燥,得玉屏风粗多糖粉末;
[0033] 3)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.8%牛肉膏、0.4%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.004%硫酸锰、0.1%吐温80、1.4%琼脂的pH值为6.5的MRS固体培养基对乳酸杆菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、1.5%琼脂、0.005%中性红的pH值为6.0的MC固体培养基对嗜热链球菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5%氯化钠、
1%可溶性淀粉、1.5%琼脂的含有可溶性淀粉的pH值为7.2的LB培养基对枯草芽孢杆菌进行分离纯化培养,控制培养温度为35℃、培养时间22h;
[0034] 4)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、2%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.005%硫酸锰、
0.1%吐温80的pH值为6.5的液体培养基对乳酸杆菌进行液体培养;选用质量百分比成分为
0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、0.005%中性红的pH值为6.0的液体培养基对嗜热链球菌进行液体培养;选用质量百分比成分为5%豆饼粉、7%玉米粉、0.5%Na2HPO4、0.4%(NH4)2SO4、0.2%NH4Cl、0.2%CaCl2的pH值为7.2的液体培养基对枯草芽孢杆菌进行液体培养,控制培养温度为35℃、培养时间22h;
[0035] 5)将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液按质量比为1:1:1混合,其混合菌液的有效活菌量为1.0×109CFU/ml,得混合菌液;
[0036] 6)将步骤2)所得的玉屏风粗多糖粉末配制成终浓度为0.05~0.3g/ml的溶液,灭菌冷却后与混合菌液混合,混合菌液的添加量按质量百分比计为溶液的3%,经真空冷冻干燥,得对比例1成品。
[0037] 将该对比例1成品与实施例1成品做成饲料添加剂试样后分别与鱼饲料混合并投喂,添加量为鱼饲料重量的0.08%。经4周投喂试验后,用添加了实施例1成品的鱼饲料投喂的鱼类生长状况良好,无出现消化不良、糖代谢水平低、应激反应明显和患病的现象,而用添加了对比例1成品的鱼饲料投喂的鱼类已出现因生长发育状况欠佳导致的食欲不振及患病现象。
[0038] 实施例2
[0039] 一种多糖益生菌复合饲料添加剂的制备方法,其包括如下工艺步骤:
[0040] 1)取玉屏风药渣与离子水按料液比为1:15浸泡,浸泡时间为20min,置于100℃水浴中回流提取2h,重复两次并合并两次滤液,真空抽滤,浓缩至原体积的0.3倍,得浓缩液;
[0041] 2)将浓缩液加入98%的酒精中混合,0℃下静置12h,过滤得沉淀物,再经干燥,得玉屏风粗多糖粉末;
[0042] 3)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.8%牛肉膏、0.4%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.004%硫酸锰、0.1%吐温80、1.4%琼脂的pH值为6.3的MRS固体培养基对乳酸杆菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、1.5%琼脂、0.005%中性红的pH值为6.2的MC固体培养基对嗜热链球菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5%氯化钠、
1%可溶性淀粉、1.5%琼脂的含有可溶性淀粉的pH值为7.1的LB培养基对枯草芽孢杆菌进行分离纯化培养,控制培养温度为30℃、培养时间24h;
[0043] 4)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、2%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.005%硫酸锰、
0.1%吐温80的pH值为6.3的液体培养基对乳酸杆菌进行液体培养;选用质量百分比成分为
0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、0.005%中性红的pH值为6.2的液体培养基对嗜热链球菌进行液体培养;选用质量百分比成分为5%豆饼粉、7%玉米粉、0.5%Na2HPO4、0.4%(NH4)2SO4、0.2%NH4Cl、0.2%CaCl2的pH值为7.1的液体培养基对枯草芽孢杆菌进行液体培养,控制培养温度为37℃、培养时间20h;
[0044] 5)将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液按质量比为1:1:1混合,其混合菌液的有效活菌量为1.0×109CFU/ml,得混合菌液;
[0045] 6)将步骤2)所得的玉屏风粗多糖粉末配制成终浓度为0.3g/ml的溶液,灭菌冷却后与混合菌液混合,混合菌液的添加量按质量百分比计为溶液的3%,后置于28℃、150rpm恒温条件下发酵48h,经真空冷冻干燥,得实施例2成品。
[0046] 实施例3
[0047] 一种多糖益生菌复合饲料添加剂的制备方法,其包括如下工艺步骤:
[0048] 1)取玉屏风药渣与离子水按料液比为1:10浸泡,浸泡时间为45min,置于100℃水浴中回流提取1h,真空抽滤,浓缩至原体积的0.5倍,得浓缩液;
[0049] 2)将浓缩液加入95%的酒精中混合,8℃下静置12h,过滤得沉淀物,再经干燥,得玉屏风粗多糖粉末;
[0050] 3)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.8%牛肉膏、0.4%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.004%硫酸锰、0.1%吐温80、1.4%琼脂的pH值为6.7的MRS固体培养基对乳酸杆菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、1.5%琼脂、0.005%中性红的pH值为5.8的MC固体培养基对嗜热链球菌进行分离纯化培养;选用质量百分比成分为1%蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5%氯化钠、
1%可溶性淀粉、1.5%琼脂的含有可溶性淀粉的pH值为7.5的LB培养基对枯草芽孢杆菌进行分离纯化培养,控制培养温度为37℃、培养时间20h;
[0051] 4)在无菌环境条件下,选用质量百分比成分为1%蛋白胨、2%酵母膏、2%葡萄糖、0.2%磷酸二氢钾、0.2%柠檬酸氢二铵、0.5%乙酸钠、0.02%硫酸镁、0.005%硫酸锰、
0.1%吐温80的pH值为6.7的液体培养基对乳酸杆菌进行液体培养;选用质量百分比成分为
0.5%大豆蛋白胨、0.3%牛肉粉、0.3%酵母粉、2%葡萄糖、2%乳糖、1%碳酸钙、0.005%中性红的pH值为5.8的液体培养基对嗜热链球菌进行液体培养;选用质量百分比成分为5%豆饼粉、7%玉米粉、0.5%Na2HPO4、0.4%(NH4)2SO4、0.2%NH4Cl、0.2%CaCl2的pH值为7.5的液体培养基对枯草芽孢杆菌进行液体培养,控制培养温度为30℃、培养时间24h;
[0052] 5)将得到的乳酸杆菌菌液、嗜热链球菌菌液和枯草芽孢杆菌菌液按质量比为1:1:1混合,其混合菌液的有效活菌量为1.0×109CFU/ml,得混合菌液;
[0053] 6)将步骤2)所得的玉屏风粗多糖粉末配制成终浓度为0.05g/ml的溶液,灭菌冷却后与混合菌液混合,混合菌液的添加量按质量百分比计为溶液的3%,后置于28℃、150rpm恒温条件下发酵72h,经真空冷冻干燥,得实施例3成品。
[0054] 上述实施例为本发明的优选实施例,凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化,均应属于本发明的保护范畴。