一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法
专利汇可以提供一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种从荷叶中提取抑制晚期糖基化产物形成的活性组分的方法，属于 植物 资源高值化利用和功能性 食品添加剂 、功能食品基料制备研究领域。其提取方法包括如下步骤：（1）将荷叶 粉碎 ，得到荷叶颗粒；（2）以亲 水 性 有机 溶剂 为提取剂，采用溶剂提取法处理荷叶颗粒得到提取液；再将提取液浓缩干燥，得到荷叶粗提取物；（3）用水溶解荷叶粗提取物配制荷叶粗提物水溶液，采用柱层析法进一步纯化，得到抑制蛋白糖基化过程中晚期糖基化产物形成的活性组分。本发明工艺简单，操作方便，产物不含有害物质，对环境无污染，安全性高，对食品热加工和贮藏过程中天然的抑制晚期糖基化产物形成的产品的开发具有重要意义。，下面是一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将荷叶粉碎，得到荷叶颗粒；
（2）以亲水性有机溶剂为提取剂，采用溶剂提取法处理荷叶颗粒得到提取液；再将提取液浓缩干燥，得到荷叶粗提取物；
（3）用水溶解荷叶粗提取物配制为荷叶粗提取物水溶液，采用柱层析法进一步提纯，得到抑制AGEs形成的活性组分。
2.根据权利要求1所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的荷叶为干燥的荷叶。
3.根据权利要求1所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的亲水性有机溶剂为体积浓度为50%～100%的乙醇的水溶液，所述亲水性有机溶剂的加入量与荷叶颗粒比例为1g:10mL～40mL。
4.根据权利要求1所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中的所述荷叶颗粒中参入五味子果肉干粉，五味子果肉干粉和荷叶颗粒的质量比五味子果肉干粉/荷叶颗粒=5～8:100；亲水性有机溶剂中参有甘氨酸和琥珀酸，甘氨酸和琥珀酸比亲水性有机溶剂的浓度分别为甘氨酸3～5g/300mL亲水性有机溶剂，琥珀酸0.8～1g/300mL。
5. 根据权利要求1所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的溶剂提取法为超声波提取，超声提取时间为20 min～60 min，超声功率为300～500 W。
6. 根据权利要求1所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中柱层析法的条件为：以经过预处理的大孔吸附树脂为固定相，上样量为0.5BV，上样流速为1～3 BV/h，吸附方式为静态吸附，吸附时间为12小时；用20～
100%乙醇为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱体积为3 BV，洗脱流速为1～3BV/h。
7. 根据权利要求6所述的一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂进行预处理的方法为：将大孔吸附树脂用乙醇或甲醇浸泡，再用乙醇或甲醇冲洗，洗至流出的乙醇无浑浊，然后用去离子水洗至无醇味，后用溶质质量百分含量为2%～4% HCl溶液浸泡，再用去离子水洗至清洗后液呈中性，再用溶质质量百分含量为2%～4% NaOH溶液浸泡，再用去离子水洗至清洗后液呈中性，得到处理后的大孔吸附树脂，大孔吸附树脂进行预处理所用乙醇或甲醇、HCl溶液、NaOH溶液浸泡时间皆为2 8小~
时。
8.如权利要求1～7任一项所述制备方法所获得的活性组分的应用，其特征在于，所述活性组分用于抑制食品加工过程中AGEs的形成。
一种荷叶中抑制晚期糖基化产物形成活性组分的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
（2）以亲水性有机溶剂为提取剂，采用溶剂提取法处理荷叶颗粒得到提取液；再将提取液浓缩干燥，得到荷叶粗提取物；
（3）用水溶解荷叶粗提取物配制为荷叶粗提取物水溶液，采用柱层析法进一步提纯，得到抑制AGEs形成的活性组分。
具体实施方式
20% 100%乙醇为洗脱剂进行洗脱，洗脱体积均为3BV，洗脱流速为3 BV/h。收集各洗脱组分，~
浓缩成膏状，称量各组分的质量，计算样品提取物的得率。样品提取物得率见表1。其中，大孔吸附树脂进行预处理的方法为：将大孔吸附树脂用乙醇浸泡5h，再用乙醇冲洗，洗至流出的乙醇无浑浊，然后用去离子水洗至无醇味，后用溶质质量百分含量为3% HCl溶液浸泡5h，再用去离子水洗至清洗后液呈中性，再用溶质质量百分含量为3% NaOH溶液浸泡5h，再用去离子水洗至清洗后液呈中性，得到处理后的大孔吸附树脂。
20%乙醇 2.13 0.71
40%乙醇 3.89 1.30
60%乙醇 4.61 1.54
80%乙醇 1.65 0.55
100%乙醇 0.79 0.26
评价抑制活性：
由上述实施例中所得的AGEs形成抑制组分在体外对VOA的抑制实验叙述如下：
果糖和OVA为原料。具体实验方法如下：将各组洗脱浓缩后的样品提取物分别溶解在蒸馏水中配置成样品提取物浓度为0.2 mg/mL的样品溶液，将100 µL样品溶液与1 mL糖基化体系（0.5 mL 20 mg/mL的果糖溶液和0.5 mL 20 mg/mLOVA）混匀，55℃反应24 h后在激发波长370 nm，发射波长440 nm测荧光值，实验重复测三次。酶抑制作用计算公式为：
AC为样品溶液用100 μL 70%乙醇替代的反应体系的荧光值；Ab为10mg/mL果糖溶液和提取物均用缓冲溶液代替的反应体系的荧光值，As为添加了提取物的糖基化体系的荧光值。按规定方法进行实验，最终结果如下所示。
20%乙醇 0.05
40%乙醇 39.30
60%乙醇 52.29
80%乙醇 63.87
100%乙醇 -19.26
从上表可以看出，80%乙醇-水溶液洗脱组分抑制AGEs形成的效果最佳，为63.87%，该活性组分的重量占荷叶原料重量的1.65%。
实施例1 58.76%
实施例2 60.69%
实施例3 63.38%
实施例4 61.10%
对比例1 79.82%
对比例2 82.33%
对比实施例2和对比例1可知， 在荷叶干中混入五味子果肉干复合提取后，获得的提取物抗蛋白糖基化抑制活性有所提高，对比对比例1和对比例2可知，乙醇、甘氨酸、琥珀酸混合水溶液作为提取液比单纯的酒精提取效果要好，表现为产物抑制活性得到进一步改善。
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