[0001] 政府权利

[0002] 本发明是在美国农业部国家粮食和农业研究所授予的合同号为No.12229724的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

[0003] 相关申请

[0004] 本申请要求于2017年1月27日提交的美国临时申请No.62/451,146的优先权。上述申请的全部内容通过引用明确地并入本文。

[0005] 食源性人类病原体是重大的公共健康问题。特别是，弯曲杆菌(Campylobacter)和沙门氏菌(Salmonella)是全世界食源性细菌疾病的主要原因。弯曲杆菌胃肠炎与生鸡肉的
加工不当或食用未煮熟的鸡有关(1)(2)。家禽供应(包含鸡、火鸡、鸭和鹅)经常感染空肠弯曲杆菌(C.jejuni)和结肠弯曲杆菌(C.coli)(3)。人类沙门氏菌感染部分地与摄入被动物
粪便污染的或被其它来源(包含家禽)交叉污染的食物有关(4)(5)。家禽和家禽产品消费量
的增加使得与家禽有关的食源性疾病成为一个重要的公共卫生问题。

[0006] 用于控制家禽中的弯曲杆菌和沙门氏菌的策略包括施用抗生素。然而，抗生素的过度使用和产生抗生素抗性细菌菌株的风险降低了将抗生素用于这些目的的意义。因此，
家禽疫苗接种已成为减轻家禽供应中至少这两种食源性病原体的流行的重要策略。

[0007] 已经开发了重组的减毒沙门氏菌疫苗(RASV)作为疫苗和抗原递送系统以刺激针对众多抗原的保护性免疫反应。最近开发了改进的RASV，其被设计为包含诱导型启动子调
控的致病性属性。该技术的改进包括开发受控延迟减毒RASV(RDA RASV)，其在诱导物(例如糖)存在下体外生长以诱导与发病机理相关的基因的表达。施用于受试者后，RDA RASV以完全毒力复制并定植于淋巴组织以诱导有效的免疫反应。然而，随着受试者内诱导物水平的
降低和在多轮复制后，RDA RASV变为减毒的，从而阻止细菌在体内进一步增殖。

[0008] 使用RASV预防和处理家禽中的食源性病原体是特别有希望的。然而，需要新的方法来增强体内疫苗的免疫原性和安全性。特别希望的是能够对家禽中的多种食源性病原体
诱导有效免疫反应的RASV和药物组合物。

[0009] 本公开提供了具有增强的免疫原性特性和期望的安全特征的重组细菌菌株，包括沙门氏菌。该重组细菌可以安全地用于向受试者(例如家禽)有效地递送抗原性化合物，以
便产生针对病原体如弯曲杆菌和沙门氏菌的有效免疫原性反应。这些菌株递送多种保守的
保护性沙门氏菌表面/分泌的抗原和/或弯曲杆菌N-聚糖修饰的表面/分泌的抗原以诱导保
护性免疫。

[0010] 在一些实施方案中，本文公开了病原菌的重组衍生物，其包含受控延迟的减毒、目标抗原的受控延迟的合成、受控延迟的体内裂解表型以及合成和递送一种或多种空肠弯曲杆菌的蛋白质抗原。

[0011] 在一些实施方案中，本文所述的重组细菌能够合成弯曲杆菌N-聚糖并将其连接至目标抗原，从而增强抗原在体内的免疫原性。重组细菌可依赖于两种或三种糖以通过控制
多种毒力基因和任选的目标抗原的表达，以及受控延迟的裂解表型来调控细菌的毒力表
型，从而允许生物遏制和免疫原性特性的增强。鉴于生物体在自然环境中不可能遇到所有
的糖，对多种糖的依赖性增强了重组细菌的安全性。参见2018年1月23日提交的PCT/US18/
14860，其全部内容通过引用明确并入本文。

[0012] 具体地，本文公开的细菌基于衍生自高禽毒性鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)UK-1株的重组减毒沙门氏菌疫苗(RASV)，并且可用于合成和递送多种空肠弯曲杆菌保守的
保护性蛋白质抗原。已发现接种这些RASV可诱导针对多种感染家禽的沙门氏菌血清型和空
肠弯曲杆菌的免疫。本公开还提供了一种创新的新RASV设计策略以产生这些食品安全疫
苗，其对几种家禽病原体诱导高水平的保护性免疫。这些RASV载体进行编程以在免疫的动
物内的各种细胞区室中发生受控延迟的裂解，以诱导优异的粘膜和全身抗体及细胞免疫。
此外，这些活RASV显示完全的生物遏制，其中在体内没有持久性且如果排泄，也没有存活。
预计这些RASV的广泛使用将大大减少沙门氏菌和空肠弯曲杆菌感染并最终消除鸡的空肠
弯曲杆菌定植，从而减少这些病原体通过食物链传播给人类。此外，使用这些大大改进的载体系统还将减少家禽饲养期间抗生素的使用，并因此降低也可通过食物链传播给人类的耐
药细菌物种的选择压力。

[0013] 本公开进一步提供了经验证且高度免疫原性的鼠伤寒沙门氏菌UK-1RASV，其表现出受控延迟的减毒、重组抗原的受控延迟合成和受控延迟的裂解表型。构建了使得能够合
成和递送多种空肠弯曲杆菌蛋白抗原的衍生物。因此，由于RASV无法在体内合成血清型特
异性的LPS O-抗原以暴露完全相同的LPS核心，沙门氏菌血清型诱导对大多数沙门氏菌血
清型的交叉保护性免疫，同时还递送多种空肠弯曲杆菌蛋白抗原以诱导对空肠弯曲杆菌的
优异的保护性免疫。

[0014] 构建的RASV被设计成在向家禽喷雾或口服递送时显示与野生型毒性UK-1亲本菌株相同的属性以与宿主防御策略抗衡，并且成功地通过粘膜表面侵入以在显示减毒表型之
前有效地定植至内部效应淋巴组织，且因此不能诱导任何疾病症状或者损害或减少生长。
发现到达这些内部组织的RASV逐渐开始用作合成待通过分泌并最终通过RASV裂解来递送
的保护性空肠弯曲杆菌抗原的工厂。由于裂解使得能够在不同的细胞外和细胞内区室中发
生，因此诱导了所需的粘膜、系统性抗体和细胞免疫反应。这些创新策略提供了先前使用的经典减毒方式，其由于减毒菌株的定植能力受损而降低了免疫原性。此外，具有受控延迟的裂解表型的这些RASV表现出完全的生物遏制，而在体内没有持久的疫苗细胞，且如果排泄，没有存活者。

[0015] 在一个方面，本文公开了病原菌的重组衍生物，其包含受控延迟的减毒表型；受控延迟的目标抗原的表达；受控延迟的体内裂解表型；并且它能够合成和递送空肠弯曲杆菌的一种或多种蛋白质抗原。在一个实施方案中，该细菌还包含导致体内呈现通用LPS核心多糖(universal LPS core polysaccharide)的突变。

[0016] 在一个方面，本文公开了病原菌的重组衍生物，其包含受控延迟的减毒表型；受控延迟的目标抗原的表达；受控延迟的裂解体内表型；并且它能够合成和递送一种或多种呈现空肠弯曲杆菌N-聚糖的蛋白质抗原。

[0017] 在一个方面，本文公开了病细菌的重组衍生物，其包含受控延迟的减毒表型；受控延迟的目标抗原的表达；受控延迟的体内裂解表型；并且它能够合成和递送空肠弯曲杆菌的一种或多种蛋白质抗原，并且还呈现空肠弯曲杆菌N-聚糖。

[0018] 在一个实施方案中，所述细菌包含一个或多个弯曲杆菌pgl操纵子基因。在一个实施方案中，所述一个或多个弯曲杆菌pgl操纵子基因经密码子优化以在细菌中表达。

[0019] 在一个实施方案中，所述细菌是革兰氏阴性细菌。在一个实施方案中，所述细菌属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)。

[0020] 在一个实施方案中，目标抗原是弯曲杆菌抗原。在一个实施方案中，该弯曲杆菌抗原是选自表4的抗原，或与其具有同源性或同一性的抗原，如本文所述。在一个实施方案中，目标抗原选自于Peb1、CjaA、Dps、TlyA、Omp18、Cj0998c、Cj0034c、Cj0168c、Cj0248、Peb3、CmeC、Cj0404、Cj0420、Cj0427、Cj0428、PorA、FlaA、CadF和Cj1656c。

[0021] 在一个实施方案中，空肠弯曲杆菌N-聚糖与目标抗原连接。

[0022] 在一个实施方案中，细菌包含全部或部分cj1433c基因插入到ompA基因的缺失中的插入以产生Cj1433c蛋白的融合体。

[0023] 在一个实施方案中，所述受控延迟的减毒由基因fur或mntR赋予。

[0024] 在一个实施方案中，所述受控延迟的体内裂解表型由ΔPmurA::TT araC PBAD murA、ΔasdA::TT araC PBAD c2或者Δ(wza-wcaM)缺失或缺失/插入突变赋予。

[0025] 在一个实施方案中，细菌还包含sifA基因的突变。

[0026] 在一个实施方案中，细菌还包含relA基因的突变。

[0027] 在一个方面，本文公开了包含重组细菌和药学上可接受的载体的药物组合物。在一个实施方案中，该药物组合物还包含病原菌的第二重组衍生物，其中所述细菌包含编码
第二目标抗原的核酸。在一个实施方案中，第二目标抗原是沙门氏菌(Salmonella)抗原。

[0028] 在一个方面，本文公开了一种用于在禽类中诱导保护性免疫的方法，该方法包括向禽类施用有效量的本文公开的药物组合物。

[0029] 下面更全面地描述本发明的其它方面和部分(iterations)。附图说明

[0030] 图1A和1B描绘了抗原特异性淋巴细胞的增殖分析测定。在图1A中，从用非裂解载体对照RASVχ11840(pYA3342)(G2)、非裂解RASVχ11442(pYA5301)(G3)、非裂解ΔsifA RASVχ11840(pYA5301)(G4)、裂解载体对照RASVχ11791(pYA3681)(G5)、裂解RASVχ11730
(pYA5293)(G6)和裂解ΔsifA RASVχ11791(pYA5293)(G7)免疫的鸡分离的脾淋巴细胞的代
表性样品用CSFE标记并用Eimeria SO7抗原刺激。通过CFSE稀释定义增殖性淋巴细胞群体。
图1B显示了图1A中描述的每个组中细胞增殖的图形分析。误差条、平均传球和SD是3个独立实验的总和，每个实验使用每组3只鸡。星号代表所示组之间的显著差异(p<0.05)。还与增加的INF-γ和IL-2产生以及增加的CD4和CD8反应相关。

[0031] 图1C和1D描绘了在免疫后第35天(图1C)或免疫后第42天(图1D)在免疫的鸡中诱导针对E.tenella SO7的肠免疫球蛋白A(IgA)。

[0032] 图2A描绘了由于ΔsifA突变而在没有和有SCV逃逸的情况下非裂解与裂解RASV中的SO7特异性CD4和CD8增殖分析。

[0033] 图2B描绘了在来自用RASV疫苗株接种的小鸡的脾淋巴细胞的体外同源回忆(homologous recall)后的淋巴细胞活化和细胞因子分泌。

[0034] 图3A和3B描绘了裂解载体图谱。图3A-裂解载体pYA4763，pBR ori。图3B-具有改良的bla SS的裂解载体pG8R17，pBR ori。

[0035] 图4A和4B描绘了RASV菌株χ12341中的抗原产生。

[0036] 图5描绘了在含有0.1％的阿拉伯糖、鼠李糖和甘露糖中每一种而有或没有被1mM IPTG诱导的L肉汤中生长的χ12452鼠伤寒沙门氏菌中空肠弯曲杆菌抗原的蛋白质印迹分
析。在小鼠中产生的单克隆抗多聚组氨酸抗体用于检测合成的抗原。

[0037] 图6描绘了空肠弯曲杆菌pgl操纵子的遗传图谱。

[0038] 图7描绘了具有/不具有pglB基因缺失的pgl操纵子的表达，其中合成的空肠弯曲杆菌N-聚糖添加至具有wbaP基因缺失的鼠伤寒沙门氏菌的LPS核心。

[0039] 图8A和8B描绘了具有Cj1433c基因编码的序列插入的修饰鼠伤寒沙门氏菌OmpA蛋白的结构方面，指明了由于空肠弯曲杆菌pgl操纵子和沙门氏菌WaaL酶的活性，空肠弯曲杆菌保守N-聚糖连接于其上的9个重复序列。

[0040] 为了更容易理解本公开，首先定义某些术语。应根据本公开的其余部分并且如本领域普通技术人员所理解的那样阅读这些定义。除非另外定义，否则本文使用的所有技术
和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。另外的定义在整个详
细描述中阐述。

[0041] 如本文所用，术语“重组细菌”是指已经从其天然状态进行遗传修饰的细菌细胞。例如，重组细菌可包含一个或多个核苷酸插入、核苷酸缺失、核苷酸重排和核苷酸修饰。这些遗传修饰可以引入细菌的染色体中，或者可选地存在于染色体外核酸(例如质粒)上。本
公开的重组细菌可包含位于质粒上的核酸。或者，重组细菌可包含位于细菌染色体中(例
如，稳定地并入其中)的核酸。在一些实施方案中，重组细菌是无毒性的。在一些实施方案中，重组细菌表现出降低的毒力。在一些实施方案中，重组细菌是非毒性的。在一些实施方案中，重组细菌是减毒的。在另一个实施方案中，重组细菌是病原菌的重组衍生物。

[0042] 如本文所用，术语“基因”是指编码蛋白质或其片段或者功能性或结构性RNA分子的核酸片段，并且可任选地包含核酸的编码序列之前(5'非编码序列)和之后(3'非编码序
列)的调控序列。在一些实施方案中，“基因”不包含编码序列之前和之后的调控序列。

[0043] 在一个实施方案中，基因是异源基因。在另一个实施方案中，核酸是异源核酸。如本文所用，术语“异源基因”或“异源核酸”是指存在于重组细胞(例如细菌)中的基因或核酸序列，其原本通常不存在于自然界的野生型细胞(例如细菌)中。在一些实施方案中，异源基因或异源核酸外源引入给定细胞中。在一些实施方案中，异源基因可包括引入到非原始宿主细胞中的基因或其片段。在一些实施方案中，除相应的原始基因外，术语“异源基因”包括引入宿主细胞中的原始基因或其片段的第二拷贝。在一些实施方案中，异源核酸还可以包
括在给定细胞中天然存在，但已经进行修饰(例如通过不同启动子序列调控)的基因序列，
以表达其所编码的非天然量的核酸和/或多肽；和/或两种或更多种在自然界中彼此不是以
该相同关系存在的核酸序列。

[0044] 如本文所用，术语“内源基因”是指存在于生物基因组(例如细菌染色体)中的其天然位置的原始基因。

[0045] 如本文所用的“启动子”是指能够控制编码序列或基因的表达的核酸序列。启动子可以包含一种或多种特定的转录调控序列以进一步增强核酸的表达和/或改变空间表达和/或时间表达。例如，启动子可包含一个或多个被转录激活蛋白(例如增强子元件)、转录阻遏蛋白、聚合酶等特异性识别的核酸。如本文所用的术语“可操作地连接”是指核酸序列的表达处于与其空间连接的启动子的控制下。启动子可以位于在其控制下的核酸序列的5'
侧(上游)。启动子和待表达的核酸序列之间的距离可以与该启动子与其控制的原始核酸序
列之间的距离大致相同。如本领域所知，可以适应该距离的变化而不丧失启动子功能。本文描述的启动子的核酸序列是本领域已知的，并且将这些启动子与基因(例如，编码阻遏物的基因)可操作地连接的方法是本领域已知的。

[0046] 在一些实施方案中，可以通过糖直接或间接调控如本文所述使用的启动子。例如，在一些实施方案中，启动子对阿拉伯糖的水平有反应，在本文中另外称为“阿拉伯糖调节的启动子”。一般而言，阿拉伯糖可以在细菌体外生长期间存在，而通常不存在于宿主组织中。在一个实施方案中，启动子源自来自大肠杆菌(Escherichia coli)的araC-ParaBAD系统。
araC-ParaBAD系统是一种严格调控的表达系统，其已被证明作为通过添加低水平阿拉伯糖诱导的强启动子发挥作用。该araC-araBAD启动子是双向启动子，其在一个方向上控制araBAD核酸序列的表达和在另一个方向上控制araC核酸序列的表达。

[0047] 为方便起见，介导araBAD核酸序列表达且由araC核酸序列产物控制的araC-araBAD启动子的部分在本文中称为ParaBAD。对于如本文所述的用途，可以使用具有araC核酸序列和araC-araBAD启动子的盒。该盒在本文中称为araC ParaBAD。AraC蛋白同时是ParaBAD的正调控子和负调控子。在阿拉伯糖存在下，AraC蛋白是允许从ParaBAD表达的正调控元件。在不存在阿拉伯糖的情况下，AraC蛋白抑制从PBAD的表达。其它肠细菌含有与来自大肠杆菌的araC-araBAD系统同源的阿拉伯糖调控系统，包括例如鼠伤寒沙门氏菌。例如，大肠杆菌
AraC蛋白仅激活大肠杆菌ParaBAD(在阿拉伯糖存在下)而不激活鼠伤寒沙门氏菌ParaBAD。因此，如果启动子和操纵子来源于两种不同的细菌种，则阿拉伯糖调控的启动子可用于具有
相似阿拉伯糖操纵子的重组细菌中，而两者之间没有实质性干扰。一般而言，诱导表达所必需的培养基中的阿拉伯糖浓度通常小于约2％(w/w)。在一些实施方案中，培养基中的浓度
小于约1.5％、1％、0.5％、0.2％、0.1％或0.05％(w/w)。在其它实施方案中，浓度为0.05％或更低，例如，约0.04％、0.03％、0.02％或0.01％(w/w)。在一个示例性实施方案中，培养基中的浓度为约0.05％(w/w)。

[0048] 在其它实施方案中，启动子可以对环境中的麦芽糖水平有反应，在本文中另外称为“麦芽糖调控的启动子”。在一些实施方案中，本文所述的重组细菌在包含麦芽糖的培养基中培养。malT基因编码MalT，其是四种麦芽糖反应性启动子(PPQ、PEFG、PKBM和PS)的正调节子。malT和mal启动子的组合产生了严格调控的表达系统，该系统已经显示作为在麦芽糖存在下诱导的强启动子发挥作用。与araC-ParaBAD系统不同，malT表达受到功能上与其它mal启动子无关的启动子(即PT)的调控。PT不受MalT调控。malEFG-malKBM启动子是双向启动子，其在一个方向上控制malKBM核酸序列的表达，和在另一个方向上控制malEFG核酸序列的表
达。为方便起见，介导malKBM核酸序列的表达且受MalT控制的malEFG-malKBM启动子的部分在本文中称为PmalKBM，和介导malEFG核酸序列的表达且受MalT控制的malEFG-malKBM启动子的部分在本文中称为PEFG。PKBM的完全诱导需要存在PmalEFG的MalT结合位点。为了用于本文所述的载体和系统中，可以使用包含编码MalT的核酸序列和mal启动子的基因盒。该基因盒在本文中称为malT-Pmal。在麦芽糖存在下，MalT是允许由Pmal介导表达的正调控元件。一般而言，诱导表达所必需的培养基中的麦芽糖浓度通常小于约1％(w/w)。在一些实施方案中，培养基中的浓度小于约1.0％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％或0.05％(w/w)。在其它实施方案中，浓度为0.05％或更低，例如，约0.04％、0.03％、0.02％或0.01％(w/w)。在一个示例性实施方案中，培养基中的浓度为约0.2％至约0.4％(w/w)。

[0049] 在再其它的实施方案中，本文使用的启动子对环境中的鼠李糖水平有反应，在本文中另外称为“鼠李糖调控的启动子”。类似于上述araC-ParaBAD系统，rhaRS-PrhaB激活剂-启动子系统受鼠李糖的严格调控。来自鼠李糖启动子(Prha)的表达在鼠李糖存在下被诱导至
高水平。在一些实施方案中，在鼠李糖存在下培养细菌。鼠李糖通常存在于细菌中，但在人类受试者中很少见。rhaBAD操纵子由PrhaBAD启动子控制。该启动子受两种激活剂RhaS和RhaR的调控，并且相应的核酸序列属于以rhaBAD核酸序列的相反方向定位的一个转录单元。在
L-鼠李糖存在下，RhaR与PrhaRS启动子结合并激活RhaR和RhaS的产生。RhaS与L-鼠李糖一起随之与PrhaBAD和PrhaT启动子结合并激活结构核酸序列的转录。本文所述的阿拉伯糖、麦芽糖和鼠李糖调控的启动子的完全诱导需要Crp-cAMP复合物的结合，这是分解代谢物抑制的关
键调节子。

[0050] 尽管L-阿拉伯糖和L-鼠李糖都直接作为介导其分解代谢的调控子表达的诱导剂，但在调控机制方面存在重要差异。L-阿拉伯糖在阿拉伯糖调控子的正向控制中与激活剂
AraC一起作为诱导物。然而，L-鼠李糖调控子经历调控级联，且因此与araC-ParaBAD系统相比受到更紧密的控制。L-鼠李糖与激活剂RhaR一起作为诱导物用于RhaS的合成，RhaS转而作
为鼠李糖调控子的正向控制中的激活剂。在本公开中，鼠李糖可以用于与RhaR蛋白相互作
用，和然后RhaS蛋白可以激活与PrhaBAD启动子可操作地连接的核酸序列的转录。

[0051] 而在其它实施方案中，启动子可以对环境中的木糖水平有反应，在本文中称为“木糖调控的启动子”。通常，环境中0.0002％至0.63％(w/w)之间的木糖浓度激活本文所述的木糖诱导型启动子的表达(6)。xylR-PxylA系统是另一种良好确立的诱导型激活剂-启动子系统。木糖诱导木糖特异性操纵子(例如，xylE、xylFGHR和xylAB)，其由XylR和环状AMP-Crp系统调控。XylR蛋白通过与xyl核酸序列启动子的两个不同区域结合而用作正调节子。如同上述araC-ParaBAD系统一样，可以使用xylR-PxylAB和/或xylR-PxylFGH调控系统。在这些实施方案中，与XylR蛋白相互作用的xylR-PxylAB木糖激活与两个Pxyl启动子中任一个可操作地连接的核酸序列的转录。

[0052] 如本文所用，术语“外源的”是指除其天然来源之外的存在于细胞中的物质(例如，核酸或多肽)。术语外源的可以指已经通过涉及人工的过程引入生物系统(例如，细胞或生物体)中的核酸或蛋白质，其在所述生物系统中通常不存在或者以不可检测的量存在。如果物质被引入细胞或遗传该物质的细胞祖先中，该物质可被认为是外源的。相反，术语“内源的”是指生物系统或细胞的原始的物质。

[0053] 如本文所用，术语“侵入性”当用于提及细菌时是指能够被真核细胞吸收的细菌或活跃地穿透真核细胞的细菌。在一些实施方案中，侵入性细菌穿透真核细胞并通过液泡膜的裂解到达真核细胞的细胞质。

[0054] 如本文所用，术语“病原性”在用于提及细菌时是指能够在宿主中感染和引起疾病，以及在感染的宿主中产生感染相关的症状的细菌。可以使作为病原体和具有致病性的
细菌物种减毒或无毒性，使得它不再在感染的宿主中产生感染相关的症状。这种细菌被称
为“病原菌的减毒衍生物”。

[0055] 如本文所用的“药物组合物”是指包含活性成分(例如，本文所述的重组细菌)与其它组分(例如生理上合适的载体和/或赋形剂)的组合物。

[0056] 如本文所用，术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如，润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或锌、或硬脂酸)或溶剂包封材料，其涉及将主体化合物从一个器官或身体部分运送或运输到另一个器官或身体部分。在与制剂的其它成分相容并且对患者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)润滑剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石粉；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；
(10)二醇类，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水(例如，磷酸盐缓冲盐水(PBS))；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；(22)填充剂，如多肽和氨基酸；(23)血清成分，如血清白蛋白、HDL和LDL；(22)C2-C12醇，如乙醇；和(23)药物制剂中使用的其它无毒相容物质。润湿剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、崩解剂、粘合剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、蛋白酶抑制剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、增粘剂、成膜剂、增溶剂、表面活性剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于制剂中。诸如“赋形剂”、“载体”、“药学上可接受的赋形剂”等术语在本文中可互换使用。

[0057] “质粒”或“载体”包括设计用于递送至宿主细胞或在不同宿主细胞之间转移的核酸构建体。当表达控制序列控制和调节多核苷酸序列的转录和翻译时，并入质粒中的核酸可与表达控制序列可操作地连接。

[0058] 如本文所用，术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用以表示通过相邻残基的α-氨基和羧基之间的肽键彼此连接的一系列氨基酸残基。术语“蛋白质”和“多肽”是指氨基酸的聚合物，包含修饰的氨基酸(例如，磷酸化的、糖化的、糖基化的等)和氨基酸类似物，无论其大小或功能如何。如本文所用的术语“蛋白质”和“多肽”是指大的多肽和小肽。当提及基因产物及其片段时，术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用。因此，示例性多肽或蛋白质包含基因产物、天然存在的蛋白质、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段和前述的其它等同物、变体、片段和类似物。

[0059] “核酸”或“核酸序列”可以是合并核糖核酸、脱氧核糖核酸或其类似物的单元的任何分子，优选聚合物分子。核酸可以是单链或双链的。单链核酸可以是变性双链DNA的一条核酸链。或者，它可以是非源自任何双链DNA的单链核酸。在一个方面，核酸可以是DNA。在另一方面，核酸可以是RNA。合适的核酸分子是DNA，包括基因组DNA或cDNA。其它合适的核酸分子是RNA，包括mRNA、rRNA和tRNA。

[0060] 原始氨基酸序列的改变可以通过本领域技术人员已知的许多技术中的任何一种来完成。例如，可以通过合成含突变序列的寡核苷酸(其侧邻使得能够连接于天然序列片段的限制性位点)在特定基因座处引入突变。连接后，得到的重构序列编码具有所需氨基酸插入、置换或缺失的类似物。或者，可以采用寡核苷酸指导的位点特异性诱变方法来提供改变的核苷酸序列，其具有根据所需的置换、缺失或插入而改变的特定密码子。用于进行这种改变的技术已经很好地建立，并且包括例如Walder等(7)；Bauer等(8)；Craik(9)；Smith等
(10)；和美国专利美国专利号4,518,584(11)和4,737,462(12)，其全部内容通过引用并入
本文。任何不参与维持多肽正确构象的半胱氨酸残基也可以被置换，通常被丝氨酸置换，以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可以将半胱氨酸键添加到多肽中以改善其
稳定性或促进寡聚化。

[0061] 术语“统计学显著的”或“显著地”是指统计学显著性，并且通常表示两个标准偏差(2SD)或更大的差异。

[0062] 如本文所用，术语“宿主细胞”是指向其施用重组细菌以便例如诱导免疫反应的生物体的细胞。在一个实施方案中，宿主是鸟、马或人，并且宿主细胞分别指鸟细胞、马细胞或人细胞。

[0063] 除了在操作实施例中或另有说明的情况之外，本文所用的表示成分的量或反应条件的所有数字在所有情况下应理解为由术语“约”修饰。当与百分比结合使用时，术语“约”可以表示±1％。

[0064] 除非明确地相反指出，否则本文所用的冠词“一”和“一个”应理解为表示“至少一个”。

[0065] 当在列表中的元素之间使用时，短语“和/或”旨在表示(1)仅存在单个列出的元素，或者(2)存在列表中的多于一个元素。例如，“A、B和/或C”表示选择可以仅A；仅B；仅C；A和B；A和C；B和C；或A、B和C。短语“和/或”可以与列表中的元素的“至少一个”或“一个或多个”互换使用。

[0066] 本文提供的范围被理解为该范围内的所有值的简略表达方式。例如，1至50的范围应理解为包含由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或
50组成的组中的任何数字、数字组合或子范围。

[0067] I.重组细菌

[0068] 在一些实施方案中，本公开提供了能够调控至少一种编码目标抗原(例如，弯曲杆菌抗原)的核酸序列的表达的重组细菌。本文所述的重组细菌在引发针对目标抗原的免疫
反应(例如，保护性免疫)方面特别有效，因为该细菌包含多种重组调控系统，其允许细菌在施用后复制并定植至受试者的淋巴组织而引起有效的免疫反应。然而，在体内多个复制周
期后，细菌最终表现出减毒的表型，这使得对于受试者施用是安全的，例如作为疫苗组合
物。本文所述细菌的重组调控系统部分地取决于对细菌在体内不可得的一种或多种糖(例
如阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、麦芽糖、木糖和半乳糖)有反应的多种遗传调控元件。因此，利用本文所述重组细菌的表型可以在施用于受试者时改变。在一些实施方案中，本文所述的
重组细菌的表型是目标抗原的调控的延迟表达，并且赋予该表型的基因编码目标抗原。在
一些实施方案中，在施用本文所述的重组细菌之前、之后或同时向受试者施用一种或多种
糖以激活和/或抑制细菌的糖响应性调控系统。在一些实施方案中，本文所述的重组细菌包含至少三种调控系统(每种调控系统依赖于不同的糖)，这促进受试者中宿主细胞的初始侵
入、延迟的减毒和改善的免疫原性。

[0069] 在一些实施方案中，本文所述的重组细菌可以调控以在体内延迟减毒。在一些实施方案中，本文所述的重组细菌能够调控编码目标抗原的核酸的延迟表达。在一些实施方
案中，本文所述的重组细菌表现出在体内膜抗原通用模块(Generalized Module for 
Membrane Antigen)(GMMA)的调控产生，这可以导致细菌中存在的保守外膜蛋白的产生增
强，并最终导致改善的免疫原性。在一些实施方案中，本文所述的重组细菌能够调控编码至少一种目标抗原的至少一种核酸的表达和调控减毒。在一些实施方案中，本文所述的重组
细菌能够调控编码至少一种目标抗原的至少一种核酸的表达和调控体内GMMA的产生。在一
些实施方案中，本文所述的重组细菌能够调控体内GMMA的产生和调控减毒。在一些实施方
案中，本文所述的重组细菌能够调控编码至少一种目标抗原的至少一种核酸的表达、调控
减毒和调控体内GMMA产生。在一些实施方案中，这些性质中的每一种由至少一种糖(例如阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、木糖、麦芽糖和半乳糖)的丰度直接或间接调控。

[0070] 在一些实施方案中，本文描述的细菌是革兰氏阴性细菌。在一些实施方案中，细菌是病原细菌。在一些实施方案中，细菌是无毒性细菌。在一些实施方案中，细菌属于肠杆菌科(Enterobaceteriaceae)。在一些实施方案中，细菌属于选自于以下的属：交替球菌属(Alterococcus)、Aquamonas、Aranicola、杀雄菌属(Arsenophonus)、布伦尼亚属
(Brenneria)、布戴维氏采菌属(Budvicia)、布丘氏菌属(Buttiauxella)、Candidatus 
Phlomobacter、Cedeceae、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、爱德华氏菌属(Edwardsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、埃希氏菌属(Escherichia)、爱文氏菌属
(Ewingella)、哈夫尼菌属(Hafnia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、克吕沃尔菌属
(Kluyvera)、勒克菌属(Leclercia)、勒米诺菌属(Leminorella)、米勒氏菌属
(Moellerella)、摩根氏菌属(Morganella)、肥杆菌属(Obesumbacterium)、泛菌属
(Pantoea)、果胶杆菌属(Pectobacterium)、发光杆菌属(Photorhabdus)、邻单胞菌属
(Plesiomonas)、布拉格菌属(Pragia)、变形杆菌属(Proteus)、普罗威登斯菌属
(Providencia)、拉恩氏菌属(Rahnella)、拉乌尔菌属(Raoultella)、沙门氏菌属
(Salmonella)、Samsonia、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、Sodalis、塔特姆菌属(Tatumella)、特布尔西氏菌属(Trabulsiella)、Wigglesworthia、Xenorhbdus、耶尔森氏菌属(Yersinia)、预研菌属(Yokenella)。在一些实施方案中，细菌是肠杆菌科的致病物种。在一些实施方案中，细菌选自于大肠杆菌、志贺氏菌、爱德华氏菌、沙门氏菌、柠檬酸杆菌、克雷伯氏菌、肠杆菌、沙雷氏菌、变形杆菌、摩根氏菌、普罗威登斯菌和耶尔森氏菌。在一些实施方案中，细菌是沙门氏菌属的。在一些实施方案中，细菌是耶尔森氏菌属的。在一些实施方案中，细菌是爱德华氏菌属的。在一些实施方案中，细菌是通常用作活疫苗或减毒疫苗的属、种或菌株。

[0071] 本公开的一些实施方案包含沙门氏菌属的种或亚种(例如，肠道沙门氏菌(S.enterica)或S.bongori)。例如，重组细菌可以是肠沙道门氏菌血清型，包括例如副伤寒A(Paratyphi A)、肠炎(Enteritidis)、伤寒(Typhi)和鼠伤寒(Typhimurium)。在一些实施方案中，重组细菌是血清型鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌(S.Typhi)、副伤寒沙门氏菌
(S.Paratyphi)、鸡沙门氏菌(S.Gallinarum)、肠炎沙门氏菌(S.Enteritidis)、
S.Choleraesius、亚利桑那沙门氏菌(S.Arizonae)、纽波特沙门氏菌(S.Newport)、海德堡沙门氏菌(S.Heidelberg)、婴儿沙门氏菌(S.Infantis)、猪霍乱沙门菌(S.Cholerasiuis)
或都柏林沙门氏菌(S.Dublin)。

[0072] 源自沙门氏菌的重组细菌可特别适合用作疫苗。例如，用沙门氏菌菌株口服感染宿主通常导致肠相关淋巴样组织(GALT)的定植，这导致诱导对重组细菌的广泛粘膜免疫反
应。细菌进一步渗透到肠系膜淋巴结、肝脏和脾脏中可以增强针对细菌的全身和细胞免疫
反应的诱导。因此，使用重组沙门氏菌进行口服免疫刺激免疫系统的所有三个分支，这对于针对通过粘膜表面定植和/或侵入的传染病因子进行免疫是特别重要的。在一些实施方案
中，本文所述的重组细菌用于在家禽中诱导免疫反应(例如，作为疫苗)。当在家禽中使用
时，重组细菌可以通过粗喷雾(course spray)施用，从而通过眼睛暴露接种结膜相关淋巴
样组织(CALT)，通过呼吸道暴露接种鼻相关淋巴样组织(NALT)和支气管相关淋巴样组织
(BALT)，和通过口服暴露接种GALT。在一些实施方案中，本文所述的重组细菌施用于新孵出的小鸡。

[0073] A.抗原

[0074] 如本文所用，“抗原”是指能够在宿主中引发免疫反应的生物分子。在一些实施方案中，抗原可以是蛋白质或蛋白质的片段。在一些实施方案中，重组细菌包含编码目标抗原的核酸(例如质粒)，其中核酸由宿主细胞表达(例如DNA疫苗)。在一些实施方案中，重组细菌包含编码目标抗原的核酸。在一些实施方案中，重组细菌包含编码目标抗原的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种或更多种核酸(例如，编码特定抗原的核酸的一个或多个拷贝，编码不同目标抗原的一种或多种核酸，或其组合)。在示例性实施方案中，抗原在受试者中引发保护性免疫反应。

[0075] 如本文所用，“保护性”是指免疫反应有助于减轻与病原体感染宿主相关的任何症状，其中所述抗原来源于该病原体或设计为引发针对其的应答。例如，来自病原体，例如沙门氏菌，的保护性抗原可以诱导免疫应答，其有助于改善与沙门氏菌感染相关的症状或降低与病原体感染相关的发病率和死亡率，或者可以降低沙门氏菌感染和定植宿主的能力。
在本公开中使用术语“保护性”不一定要求完全保护宿主以免受病原体的影响。

[0076] 空肠弯曲杆菌是家禽的共生体并且不引起疾病症状。因此，当在家禽中诱导对空肠弯曲杆菌的“保护性”免疫时，这是指疫苗降低肠和盲肠中空肠弯曲杆菌(Cj)定植水平的能力。沙门氏菌也是如此。因此，虽然沙门氏菌的几个菌株可导致新孵出的雏鸡的疾病和死亡，但是小鸡在一周龄时就会变得完全耐受沙门氏菌，之后大多数沙门氏菌菌株作为共生
菌在胃肠道中持续存在。

[0077] 在一些实施方案中，目标抗原是源自感染因子的抗原。在一些实施方案中，目标抗原源自选自于以下的感染因子：病毒、细菌、原生动物、朊病毒、真菌和蠕虫。在一些实施方案中，目标抗原源自细菌。

[0078] 或者，抗原可以源自新鉴定的或与疾病或致病病症新近相关的有机体，或者动物或人的新的或新出现的病原体(包括现在已知或将来鉴定的那些)可以通过本文详述的细
菌表达。此外，抗原不限于来自病原生物体的那些抗原。

[0079] 可以通过构建其中也表达细胞因子、佐剂和其它免疫调节剂的序列的菌株来增强和/或调节细菌的免疫原性。

[0080] 下面列出了可用作抗原来源的微生物的一些实例。这些可以包括用于控制由鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia  pestis)和其它耶尔森氏菌种(如假结核耶尔森氏菌
(Y.pseudotuberculosis)和小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica))引起的瘟疫，用
于控制由淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoea)引起的淋病，用于控制由苍白密螺旋体
(Treponema pallidum)引起的梅毒，以及用于控制由沙眼衣原体(Chlamydia 
trachomatis)引起的性病及眼部感染的微生物。来自A组和B组链球菌的种，例如引起喉咙
痛或心脏病的那些种，马链球菌(Streptococcus equi)(其引起马的腺疫)、变形链球菌
(Streptococcus mutans)(其引起蛀牙)及肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、猪红
斑丹毒丝菌(Erysipelothrix  rhusiopathiae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria 
meningitidis)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)和其它支原体种、流感嗜血杆菌
(Hemophilus influenza)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、结核分枝杆菌
(mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)，其它博德特氏
菌(Bordetella)种、大肠杆菌、马链球菌、肺炎链球菌、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、溶血巴斯德氏菌(Pasteurella hemolytica)和多杀巴斯德氏菌(P.multocida)、霍乱弧菌
(Vibrio cholera)、志贺氏菌种、Borrellia种、巴尔通氏体(Bartonella)种、幽门螺杆菌(Heliobacter pylori)、弯曲杆菌种、假单胞菌(Pseudomonas)种、莫拉氏菌(Moraxella)
种、布鲁氏菌(Brucella)种、弗朗西斯菌(Francisella)种、气单胞菌(Aeromonas)种、放线杆菌(Actinobacillus)种、梭菌(Clostridium)种、立克次体(Rickettsia)种、芽孢杆菌
(Bacillus)种、柯克斯体(Coxiella)种、埃利希氏体(Ehrlichia)种、李斯特菌(Listeria)种和嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是本公开范围内可以从其获得抗原核酸序列
的的细菌的另外的例子。

[0081] 在一些实施方案中，抗原是弯曲杆菌抗原(例如，空肠弯曲杆菌抗原或结肠弯曲杆菌抗原)。在一些实施方案中，弯曲杆菌抗原选自Peb1(由cj0921c基因编码)、CjaA(由
cj0982c基因编码)、Dps(由cj1534c基因编码)、TlyA(由cj0588基因编码)、Omp18(由cj0113基因编码)、Cj0998c(由cj0998c基因编码)、Cj0034c(由cj0034c基因编码)、Cj0168c(由
cj0168c基因编码)、Cj0248(由cj0248基因编码)、Peb3(由cj0289基因编码)、CmeC(由
cj0365基因编码)、Cj0404(由cj0404基因编码)、Cj0420(由cj0420基因编码)、Cj0427(由
cj0427基因编码)、Cj0428(由cj0428基因编码)、PorA(由cj1259基因编码)、Fla(由cj1339c基因编码)、CadF(由cj1478c基因编码)和Cj1656c(由cj1656c基因编码)。

[0082] 在一些实施方案中，弯曲杆菌抗原包含规范弯曲杆菌N-糖基化氨基酸序列。在一些实施方案中，规范弯曲杆菌N-糖基化氨基酸序列包含氨基酸序列Asp/Glu-Xaa-Asn-Tyr-
Ser/Thr(SEQ ID NO:1)。规范弯曲杆菌N-糖基化氨基酸序列的存在允许当由包含pgl操纵
子(例如，弯曲杆菌pgl操纵子)或者一个或多个pgl操纵子基因(例如，wlaA、gne、pglK、
pglH、pglI、pglJ、pglB、pglA、pglC、pglD、wlaJ、pglE、pglF和pglG)的重组细菌产生时抗原的糖基化。在一个实施方案中，PglB酶可以将N-聚糖添加至略微不同的aa序列，DGGK(SEQ ID NO:2)，其不同于真核生物中使用的N-糖基化序列(Barre等，2017.Glycobiology 27:
978-989)。

[0083] 在一些实施方案中，目标抗原包含天然规范弯曲杆菌N-糖基化氨基酸序列。在一些实施方案中，目标抗原经工程改造以包含至少一个非天然规范弯曲杆菌N-糖基化氨基酸
序列Asp/Glu-Xaa-Asn-Tyr-Ser/Thr(SEQ ID NO:1)，使得当其由包含pgl操纵子(例如，弯
曲杆菌pgl操纵子)或者一个或多个pgl操纵子基因的重组细菌产生时，该抗原是N-糖基化
的。

[0084] 在某些实施方案中，抗原可包含B细胞表位或T细胞表位。或者，需要对于其的免疫反应的抗原可以表达为与载体蛋白的融合体，所述载体蛋白含有强混杂的T细胞表位和/或用作佐剂和/或促进抗原的呈递以在所有情况下增强对抗原或其组成部分的免疫反应。这
可以通过本领域已知的方法完成。与破伤风毒素片段C、CT-B、LT-B和肝炎病毒B核心的融合对于这些目的特别有用，尽管其它表位呈递系统是本领域熟知的。

[0085] 在进一步的实施方案中，编码抗原的核酸序列可包含分泌信号。

[0086] 如上所述，可以通过修饰编码阻遏物和/或启动子的核酸序列来优化目标抗原的合成水平。如本文所用，“修饰”是指阻遏物和/或启动子的核酸序列的改变，其导致编码阻遏物的核酸序列的转录水平的变化，或者导致阻遏物的合成水平的变化。例如，在一个实施方案中，修饰可以指改变编码阻遏物的核酸序列的起始密码子。一般而言，与ATG起始密码子相反，GTG或TTG起始密码子可使翻译效率降低十倍。在另一个实施方案中，修饰可以指改变编码阻遏物的核酸序列的Shine-Dalgarno(SD)序列。SD序列是核糖体结合位点，其通常
位于起始密码子上游6-7个核苷酸处。SD共有序列是AGGAGG(SEQ ID NO:80)，并且共有序列的变异可以改变翻译效率。在又一个实施方案中，修饰可以指改变SD序列和起始密码子之
间的距离。而在另一个实施方案中，修饰可以指改变用于RNA聚合酶识别的-35序列。在类似的实施方案中，修饰可以指改变用于RNA聚合酶结合的-10序列。在另外的实施方案中，修饰可以指改变-35和-10序列之间的核苷酸数。在替代实施方案中，修饰可以指优化编码阻遏
物的核酸序列的密码子以改变编码阻遏物的mRNA的翻译水平。例如，最初在编码阻遏物的
核酸序列的起始密码子之后的非富含A密码子可能不会最大化编码阻遏物的mRNA的翻译。
类似地，编码本文所述任何蛋白质的核酸序列的密码子可以是密码子优化的，即，改变以模拟来自特定生物体的高度合成蛋白质的密码子。在进一步的实施方案中，修饰可以指改变
编码阻遏物的核酸序列的GC含量以改变编码阻遏物的mRNA的翻译水平。修饰核酸序列的方
法是本领域已知的。

[0087] 在一些实施方案中，可以进行一种以上修饰或修饰类型以优化本文所述核酸(例如，编码阻遏物或目标抗原的核酸)的表达水平。例如，可以进行至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或九种修饰或修饰类型以优化本文所述核酸的表达水平。作为非限制性实例，当阻遏物是LacI时，则可以改变LacI的核酸序列和启动子以提高LacI合成的
水平。在一个实施方案中，LacI阻遏物的起始密码子可以从GTG改变为ATG。在另一个实施方案中，SD序列可以从AGGG改变为AGGA。而在另一个实施方案中，lacI的密码子可以根据用于高度合成的沙门氏菌蛋白质的密码子使用进行优化。在进一步的实施方案中，可以改变
lacI的起始密码子，可以改变SD序列，并且可以优化lacI的密码子。

[0088] 在一些实施方案中，重组细菌包含位于质粒或载体中的核酸。如本文所用，“载体”是指自主复制的核酸单元。可以用任何已知类型的载体(包括病毒、粘粒、噬菌粒和质粒载体)实施本发明。最优选的载体类型是质粒载体。在一些实施方案中，质粒或载体是高拷贝质粒。在一些实施方案中，质粒或载体是低拷贝质粒或载体。

[0089] 如本领域众所周知的，质粒和其它载体可具有广泛的启动子、多个克隆序列、转录终止子等，并且载体可选择以通过控制载体的相对拷贝数来控制编码抗原的核酸序列的表达水平。在其中载体可能编码表面定位的粘附素作为抗原，或能够刺激T细胞免疫的抗原的某些情况下，可以优选使用具有低拷贝数的载体，例如每个细菌细胞至少有两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个拷贝。低拷贝数载体的非限制性实例可以是包含pSC101 ori的载体。

[0090] 在一些实施方案中，质粒包含编码天冬氨酸-半醛脱氢酶基因(例如，asdA)的核酸序列。这些质粒可有利地用于补偿包含天冬氨酸-半醛脱氢酶基因(例如asdA)的细菌。在一些实施方案中，质粒选自于pYA3342、pYA3337和pYA3332。

[0091] 在其它情况下，中间拷贝数载体可能对于诱导所需免疫反应是最佳的。例如，中间拷贝数载体可以具有每细菌细胞至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个拷贝。中间拷贝数载体的非限制性实例可以是包含p15A ori的载体。

[0092] 而在其它情况下，高拷贝数载体对于诱导最大抗体反应可能是最佳的。高拷贝数载体可以具有每细菌细胞至少31、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个拷贝。在一些实施方案中，高拷贝数载体可以具有每细菌细胞至少100、125、150、175、200、
225、250、275、300、325、350、375或400个拷贝。高拷贝数载体的非限制性实例可包括含有pBR ori或pUC ori的载体。

[0093] 另外，可以通过选择增加质粒拷贝数的突变来增加载体拷贝数。这些突变可能发生在细菌染色体中，但更可能发生在质粒载体中。

[0094] 优选地，本文使用的载体不包含抗生素抗性标记以对于载体维持进行选择。

[0095] 在一些实施方案中，本文描述的核酸序列与启动子可操作地连接。用于本文所述实施方案的启动子是本领域已知的。本领域技术人员将认识到，阻遏物的选择部分地决定
了用于调控本文所述核酸表达的启动子的选择。例如，如果阻遏物是LacI，那么启动子可以选自于LacI反应性启动子，例如Ptrc、Plac、PT7lac和Ptac。如果阻遏物是C2，那么启动子可以选自于C2反应性启动子，例如P22启动子PL和PR。如果阻遏物是C1，那么启动子可以选自于C1反应启动子，例如，λ启动子PL和PR。

[0096] 在本文的每个实施方案中，启动子调控核酸序列的表达。在一些实施方案中，启动子包含由阻遏物控制的调控序列，使得当阻遏物被合成时(例如，在细菌的体外生长期间)，核酸序列的表达被阻抑，但是当阻遏物未合成时(例如，在体内)，编码抗原的核酸序列的表达很高。一般而言，在编码阻遏物的基因表达停止后，阻遏物的浓度将随着每次细胞分裂而降低。在一些实施方案中，阻遏物的浓度降低，使得在约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次细菌分裂之后实现被调控的核酸序列的高水平表达。在一个示例性实施方案中，细菌在体内约5次分裂后，阻遏物的浓度降低到足以允许编码抗原的核酸序列的高水平表达。

[0097] 在某些实施方案中，启动子可包含其它调控元件。例如，如果阻遏物是LacI，则启动子可以包含lacO。这是由LacI调控的脂蛋白启动子PlpplacO的情况，因为它具有LacI结合结构域lacO。在一个实施方案中，阻遏物是LacI阻遏物，和启动子是Ptrc。

[0098] 在一些实施方案中，由阻遏物调控的核酸序列的表达在体内被阻抑。当表达为非阻抑条件下表达的约50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％或甚至低于1％时，表达可以是被“阻抑”或“部分阻抑”的。因此，尽管在“完全阻抑”条件下的表达水平可能非常低，但是很可能使用非常敏感的方法是可以检测的，因为阻抑从不可能是绝
对的。

[0099] 相反，当阻遏物的表达被阻抑时，编码抗原的核酸序列的表达应该是高的。例如，如果在宿主中阻遏物在重组细菌生长期间不表达，则在阻遏物控制下的核酸表达将是高的。如本文所用，“高水平”表达是指足够强以引发对抗原的免疫反应的表达。因此，与高水平表达相关的拷贝数可以并且将根据抗原和所需的免疫反应类型而变化。确定抗原是否引
发免疫反应的方法，例如通过测量抗体水平或抗原依赖性T细胞群体或抗原依赖性细胞因
子水平，是本领域已知的，且通过测量转录的mRNA的水平或通过定量蛋白质的表达水平来
测量抗原编码序列的表达水平的方法也是本领域已知的。

[0100] 在上述每个实施方案中，能够调控表达的重组细菌还可以减毒。“减毒”是指其中细菌通过某种形式的重组或物理操作从其野生型适生性(fitness)被弱化的细菌状态。这包括改变细菌的基因型以降低其引起疾病的能力。然而，细菌定植肠道(在沙门氏菌的情况下)和诱导免疫反应的能力优选地基本上不受损害。

[0101] 在示例性实施方案中，重组细菌可以如上所述减毒。在这种情况下，受调控的减毒和受调控的抗原编码序列的表达可依赖于糖调控的系统。因此，调控的抗原编码序列的最佳表达所需的糖(例如阿拉伯糖)的浓度可能与用于最佳减毒表达的浓度不同。在示例性实
施方案中，用于优化调控的减毒和调控的编码抗原序列的表达的阿拉伯糖浓度基本相同。

[0102] 因此，可以修饰启动子和/或编码减毒蛋白的核酸序列以优化系统。以上详述了修饰方法。简而言之，例如，SD核糖体结合序列可以被改变，和/或起始密码子可以从ATG改变为GTG用于核酸序列fur和phoPQ，使得当使用给定浓度的阿拉伯糖生长菌株时，Fur和PhoPQ的产生水平对于调控的减毒表型和调控的表达两者都是最佳的。本领域技术人员将理解，
除fur和phoPQ之外，其它核酸序列也可以如本文所述与其它熟知的方案组合进行改变。另
外，可以使用本领域技术人员已知的成熟方案通过其它系统调控这些减毒核酸序列。例如，可以使用依赖于添加麦芽糖、鼠李糖或木糖而不是阿拉伯糖的启动子来调控它们。

[0103] cj0034c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0034c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0034c基因)的核酸。

[0104] 在一些实施方案中，包含cj0034c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0034c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0105] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0034c基因的核酸序列：

[0106] ATGAAAACAAATAATATCTTTATGGCTTTAGCCATAGTTTTGGCAAGTTTGATTCTAGCTTTTGGATTTAACAAGGCTTTAAGTGATTTTAAAACACTTGAAAGAAGTGTAAGTGTAAAGGGTTTAAGTCAAAAAGAAGTCGAA
GCGGATACTTTGATACTTCCTATAAAATTCACAAGATCAAACAACAATCTTACAAATTTATACGAAGAACTAGAAC
AAGATAAAGAAAATATCATCAAATTTTTAGAAAAACAAGGCATAAAAGAAGATGAGATCAGCTACAACTCGCCAAA
TATCATAGATCGTTTAAGCGATCCTTATAGCAACGACACTCAAGCTGCATACCGATACATAGGCACTGCGAATTTA
CTCATCTATACTCAAAATGTAAAGCTTGGAAAAAGCATACTAGAAAACATTTCAAGTCTTGCAAAATTTGGTATAG
TAACAAAAATCGATGATTATGATATAGAATACCTTTACACCAAGCTAAATGATATAAAACCACAAATGATAGAAGA
AGCAACGCTCAATGCTAGAAATGCAGCGATAAAATTCGCACAAGACTCAAACAGCCATCTAGGCAAGATAAAAAAG
GCTTCTCAAGGACAATTTAGCATTAGCAACAGAGATAAAAACACCCCTTATATCAAAACCATAAGAGTGGTTTCTA
CTATAGAATACTACTTAAAAGACTGA(SEQ ID NO:3)

[0107] 由SEQ ID NO:3的核酸编码的Cj0034c蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0108] MKTNNIFMALAIVLASLILAFGFNKALSDFKTLERSVSVKGLSQKEVEADTLILPIKFTRSNNNLTNLYEELEQDKENIIKFLEKQGIKEDEISYNSPNIIDRLSDPYSNDTQAAYRYIGTANLLIYTQNVKLGKSILENISSL
AKFGIVTKIDDYDIEYLYTKLNDIKPQMIEEATLNARNAAIKFAQDSNSHLGKIKKASQGQFSISNRDKNTPYIKT
IRVVSTIEYYLKD(SEQ ID NO:4)

[0109] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0034c基因(作为SEQ ID NO:3提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0034c基因，其中cj0034c基因包含与SEQ ID NO:3的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0034c基因，其中该cj0034c基因包含与SEQ ID NO:3的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0110] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0034c蛋白的核酸序列，其中所述Cj0034c蛋白包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0034c蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0034c蛋白包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0111] cj0113-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0113基因(例如空肠弯曲杆菌cj0113基因)的核酸。

[0112] 在一些实施方案中，包含cj0113基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0113基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0113] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0113基因的核酸序列：

[0114] ATGAAAAAAGTTTTATTGAGTTCATTGGTTGCGGTGTCTTTGTTAAGCACAGGTTTGTTTGCTAAAGAATATACTTTAGATAAAGCACATACAGATGTAGGTTTTAAAATCAAACATTTACAAATTAGCAATGTAAAAGGAAAT
TTCAAAGATTATTCTGCGGTGATTGATTTTGATCCTGCGAGTGCTGAATTTAAAAAGCTTGATGTAACTATAAAAA
TCGCATCTGTAAATACAGAAAATCAAACAAGAGATAATCACTTACAACAAGATGATTTTTTCAAAGCAAAAAAATA
TCCTGATATGACTTTTACAATGAAAAAATATGAAAAAATCGATAATGAAAAAGGCAAAATGACAGGAACTTTAACT
ATAGCTGGAGTTTCTAAAGATATCGTTTTAGATGCTGAAATCGGCGGTGTAGCTAAAGGCAAAGATGGAAAAGAAA
AAATAGGATTTTCTTTAAATGGAAAAATCAAACGCTCTGATTTTAAATTTGCAACAAGTACTTCAACTATTACTTT
AAGTGATGATATTAATTTAAATATCGAAGTTGAAGCGAACGAAAAATAA(SEQ ID NO:5)

[0115] 由SEQ ID NO:5的核酸编码的Omp18蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0116] MKKVLLSSLVAVSLLSTGLFAKEYTLDKAHTDVGFKIKHLQISNVKGNFKDYSAVIDFDPASAEFKKLDVTIKIASVNTENQTRDNHLQQDDFFKAKKYPDMTFTMKKYEKIDNEKGKMTGTLTIAGVSKDIVLDAEIGGVAKG
KDGKEKIGFSLNGKIKRSDFKFATSTSTITLSDDINLNIEVEANEK(SEQ ID NO:6)

[0117] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0113基因(作为SEQ ID NO:5提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0113基因，其中该cj0113基因包含与SEQ ID NO:5的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0113基因，其中该cj0113基因包含与SEQ ID NO:5的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0118] 在一些实施方案中，核酸包含编码Omp18蛋白的核酸序列，其中所述Omp18蛋白包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Omp18蛋白的核酸序列，其中所述Omp18蛋白包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0119] cj0168c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0168c基因(例如，空肠弯曲杆菌cj0168c基因)的核酸。

[0120] 在一些实施方案中，包含cj0168c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0168c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0121] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0168c基因的核酸序列：

[0122] ATGAAAAAAGTTGTACTAATCTCAGCATTACTAGGTGCTTTCGCAGCTAATGTTTTTGCAGCTAATACTCCAAGCGATGTAAATCAAACACATACAAAAGCTAAAGCTGATAAAAAACATGAAGCTAAAACTCACAAAAAAACA
AAAGAGCAAACACCAGCTCAATAA(SEQ ID NO:7)

[0123] 由SEQ ID NO:7的核酸编码的Cj0168c蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0124] MKKVVLISALLGAFAANVFAANTPSDVNQTHTKAKADKKHEAKTHKKTKEQTPAQ(SEQ ID NO:8)

[0125] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0168c基因(作为SEQ ID NO:7提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0168c基因，其中cj0168c基因包含与SEQ ID NO:7的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0168c基因，其中cj0168c基因包含与SEQ ID NO:7的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0126] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0168c蛋白的核酸序列，其中所述Cj0168c蛋白包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0168c蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0168c蛋白包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0127] cj0248-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0248基因(例如空肠弯曲杆菌cj0248基因)的核酸。

[0128] 在一些实施方案中，包含cj0248基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0248基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0129] 以下提供了示例性空肠弯曲杆菌cj0248基因的核酸序列：ATGATTGGAGATATGAATGAGCTTTTATTAAAAAGCGTTGAAGTATTGCCACCTTTACCTGATACTGTAAGTAAGTTAAGAAAATATGTGAGCGA
GGCTAATTCAAATATAGAAACTATGAAAGTTGCTGAAATCATTTCAAGCGATCCGTTGATGACGGCTAAGCTTTTG
CAATTAGCAAATTCTCCTTATTATGGTTTTACAAGAGAAATTACAACCATAAATCAAGTGATTACTTTATTAGGCG
TTGGTAATATCATCAATATAGTTATGGCTGACTCCATTAGAGATAATTTTAAAATAGACGTTTCACCTTATGGTTT
AAATACTCAAAATTTTTTAAAAACGTGCAATGAAGAGGCAACTTTTATCGCAAATTGGCTTAATGATGAAGATAAA
AAACTTTCTCATCTTTTAGTTCCTTGTGCAATGCTTTTAAGGCTTGGTATTGTTATTTTTTCAAATTTTCTTATAC
AAAATCATAAGGATAAGGATTTTTTAGCTTTTTTAAATAAAAATGAAAATCTTGCTTTAGCGGAGAATGAATTTTT
AGGCGTAGATCATATTTCTTTCTTGGGATTTTTGTTACATCGTTGGAATTTTGATGATGTTTTGATTGAAAGTATA
TGTTTTGTTCGCACTCCTCATGCTGCTCGCGAAAAAGTGAAAAAATCCGCTTATGCTTTAGCAATAACAGATCATC
TTTTTGCTCCGCATGATGGTTCTTCTCCATTTAACGCAAAAGCTGCAGTTGCTTTACTTAAAGAGGCAAAAACTCA
AGGAATTAATTTTGATTTAAACAATCTTTTATCTAAGCTTCCTAACAAAGCTAAGGAAAATTTAAACAAAGAAGAT
TAA(SEQ ID NO:9)

[0130] 由SEQ ID NO:9的核酸编码的Cj0248蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0131] MIGDMNELLLKSVEVLPPLPDTVSKLRKYVSEANSNIETMKVAEIISSDPLMTAKLLQLANSPYYGFTREITTINQVITLLGVGNIINIVMADSIRDNFKIDVSPYGLNTQNFLKTCNEEATFIANWLNDEDKKLSHLLVPCAM
LLRLGIVIFSNFLIQNHKDKDFLAFLNKNENLALAENEFLGVDHISFLGFLLHRWNFDDVLIESICFVRTPHAARE
KVKKSAYALAITDHLFAPHDGSSPFNAKAAVALLKEAKTQGINFDLNNLLSKLPNKAKENLNKED(SEQ ID NO:
10)

[0132] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0248基因(作为SEQ ID NO:9提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0248基因，其中该cj0248基因包含与SEQ ID NO:9的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0248基因，其中该cj0248基因包含与SEQ ID NO:9的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0133] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0248蛋白的核酸序列，其中所述Cj0248蛋白包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0248蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0248蛋白包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0134] cj0289c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0289c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0289c基因)的核酸。

[0135] 在一些实施方案中，包含cj0289c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0289c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0136] 以下提供了示例性空肠弯曲杆菌cj0289c基因的核酸序列：ATGAAAAAAATTATTACTTTATTTGGTGCATGTGCCTTAGCTTTTAGTATGGCAAATGCAGACGTGAACCTGTACGGCCCGGGCGGCCCGCACA
CGGCCCTGAAAGACATCGCAAACAAATATAGCGAAAAAACCGGCGTGAAAGTGAACGTGAACTTTGGCCCGCAGGC
GACCTGGTTTGAAAAAGCGAAAAAAGACGCGGACATCCTGTTTGGCGCGTCAGACCAGTCCGCTCTGGCTATCGCG
AGCGACTTTGGCAAAGACTTTAACGTGAGCAAAATCAAACCGCTGTATTTTCGTGAAGCCATCATCCTGACCCAGA
AAGGCAACCCGCTGAAAATCAAAGGCCTGAAAGACCTGGCGAACAAAAAAGTGCGTATCGTGGTGCCGGAAGGCGC
GGGCAAAAGCAACACCTCTGGCACCGGCGTGTGGGAAGACATGATCGGCCGTACCCAGGACATCAAAACCATCCAG
AACTTTCGTAACAACATCGTGGCCTTTGTGCCGAACAGCGGTAGCGCGCGTAAACTGTTCGCGCAGGACCAGGCCG
ACGCTTGGATCACTTGGATCGACTGGTCAAAAAGCAACCCGGACATCGGCACTGCCGTGGCTATCGAAAAAGACCT
GGTGGTGTATCGTACTTTTAACGTGATCGCGAAAGAAGGCGCGAGCAAAGAAACACAGGACTTTATCGCTTATCTG
AGTTCTAAAGAAGCGAAAGAAATCTTTAAAAAATACGGCTGGCGTGAATAA(SEQ ID NO:11)

[0137] 由SEQ ID NO:11的核酸编码的Peb3蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0138] MKKIITLFGACALAFSMANADVNLYGPGGPHTALKDIANKYSEKTGVKVNVNFGPQATWFEKAKKDADILFGASDQSALAIASDFGKDFNVSKIKPLYFREAIILTQKGNPLKIKGLKDLANKKVRIVVPEGAGKSNTSGTGVW
EDMIGRTQDIKTIQNFRNNIVAFVPNSGSARKLFAQDQADAWITWIDWSKSNPDIGTAVAIEKDLVVYRTFNVIAK
EGASKETQDFIAYLSSKEAKEIFKKYGWRE(SEQ ID NO:12)

[0139] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0289c基因(作为SEQ ID NO:11提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0289c基因，其中cj0289c基因包含与SEQ ID NO:11的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0289c基因，其中cj0289c基因包含与SEQ ID NO:11的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0140] 在一些实施方案中，核酸包含编码Peb3蛋白的核酸序列，其中所述Peb3蛋白包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Peb3蛋白的核酸序列，其中所述Peb3蛋白包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0141] cj0365c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0365c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0365c基因)的核酸。

[0142] 在一些实施方案中，包含cj0365c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0365c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0143] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0365c基因的核酸序列：

[0144] ATGAATAAAATAATTTCAATTAGTGCTATAGCAAGTTTTACTCTTTTGATTTCAGCTTGCTCTTTAAGTCCAAATTTAAATATTCCCGAAGCAAACTATAGCATTGATAATAAGCTTGGAGCCTTATCTTGGGAAAAAGAAAAC
AATAGCTCTATCACAAAAAATTGGTGGAAAGACTTTGATGATGAAAATTTAAATAAAGTGGTTGATTTAGCACTTA
AAAATAATAATGATTTAAAACTTGCTTTCATACACATGGAACAAGCTGCTGCTCAATTAGGTATAGATTTTAGCAG
TTTGTTGCCAAAATTTGATGGTAGCGCAAGCGGAAGTCGTGCAAAAACAGCTATAAATGCTCCAAGCAATCGAACT
GGGGAAGTAAGTTACGGTAATGATTTTAAAATGGGACTTAATTTAAGCTATGAAATCGATCTTTGGGGAAAATATC
GCGATACATATCGCGCCTCAAAATCAGGCTTTAAAGCAAGTGAGTATGATTATGAAGCTGCAAGACTTTCTGTTAT
TTCAAATACAGTTCAAACTTATTTTAATCTTGTAAATGCTTATGAAAATGAAAATGCTCTTAAAGAAGCCTATAAA
TCTGCAAAAGAAATTTATAGGATTAATGATGAAAAATTTCAAGTTGGTGCTGTAGGTGAATATGAACTTGCTCAAG
CAAGAGCCAACTTAGAAAGTATGGCTTTGCAATATAATGAAGCAAAGTTAAATAAAGAAAATTACCTTAAAGCTTT
AAAAATTTTAACTTCAAATGATTTAAATGACATACTTTACAAAAATCAAAGCTATCAAGTTTTTAATCTTAAAGAA
TTTGACATTCCAACTGGAATTTCAAGTACCATCTTGCTTCAACGTCCAGATATTGGCTCTTCTTTAGAAAAATTAA
CTCAGCAAAATTATCTTGTTGGAGTAGCTCGCACGGCTTTCTTACCTAGCCTTTCTTTAACAGGATTATTGGGATT
TGAAAGCGGGGATTTAGATACCTTGGTTAAAGGAGGTTCTAAGACTTGGAATATAGGTGGAAACTTTACTCTGCCT
ATTTTTCATTGGGGTGAAATTTACCAAAATGTAAATTTAGCCAAGCTTAATAAAGATGAAGCTTTTGTAAATTATC
AAAATACTTTGATTACTGCTTTTGGAGAAATTCGCTATGCTTTAGTAGCTAGAAAAACTATACGCTTACAATACGA
TAATGCACAAGCAAGCGAACAATCTTACAAAAGAATCTATGAAATTGCTAAAGAACGCTATGATATAGGAGAAATG
TCTTTGCAAGATTATTTAGAGGCACGTCAAAATTGGCTTAATGCTGCGGTTGCTTTTAATAATATTAAATATTCTT
ATGCCAATTCCATAGTAGATGTAATCAAAGCATTTGGTGGAGGATTTGAGCAAAGTGAAGATACGAGTAAAAATAT
AAAAGAAGAATCAAAAAATTTAGATATGTCTTTTAGAGAATAG(SEQ ID NO:13)

[0145] 由SEQ ID NO:13的核酸编码的CmeC蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0146] MNKIISISAIASFTLLISACSLSPNLNIPEANYSIDNKLGALSWEKENNSSITKNWWKDFDDENLNKVVDLALKNNNDLKLAFIHMEQAAAQLGIDFSSLLPKFDGSASGSRAKTAINAPSNRTGEVSYGNDFKMGLNLSYEID
LWGKYRDTYRASKSGFKASEYDYEAARLSVISNTVQTYFNLVNAYENENALKEAYKSAKEIYRINDEKFQVGAVGE
YELAQARANLESMALQYNEAKLNKENYLKALKILTSNDLNDILYKNQSYQVFNLKEFDIPTGISSTILLQRPDIGS
SLEKLTQQNYLVGVARTAFLPSLSLTGLLGFESGDLDTLVKGGSKTWNIGGNFTLPIFHWGEIYQNVNLAKLNKDE
AFVNYQNTLITAFGEIRYALVARKTIRLQYDNAQASEQSYKRIYEIAKERYDIGEMSLQDYLEARQNWLNAAVAFN
NIKYSYANSIVDVIKAFGGGFEQSEDTSKNIKEESKNLDMSFRE(SEQ ID NO:14)

[0147] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0365c基因(作为SEQ ID NO:13提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0365c基因，其中cj0365c基因包含与SEQ ID NO:13的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0365c基因，其中cj0365c基因包含与SEQ ID NO:13的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0148] 在一些实施方案中，核酸包含编码CmeC蛋白的核酸序列，其中所述CmeC蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码CmeC蛋白的核酸序列，其中所述CmeC蛋白包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0149] cj0404-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0404基因(例如空肠弯曲杆菌cj0404基因)的核酸。

[0150] 在一些实施方案中，包含cj0404基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0404基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0151] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0404基因的核酸序列：

[0152] ATGGAAAATCAAAAAAATGAATTTGATGATATTATTTTAGAAAAAAGTAATAAAAGTGAAAAAGTAAAAAAAATTCTTTTACGAGTTATTGCTTTAGTTATTTTGTTTTTAGCTATCATGATAGTTATGAAGCTTATTAATGGT
AGTGGTGATGAAAATACGCAAAATCAAAGTGTATTGCCAAGTGAACCTATAGCAACTCAAGACAATAACAATGATA
CTTCTTTTGAAAGTATGCCAATTACAGATAATACTTCAGCAGAAGATCAATTTGAGGCATTAAGAAAACAATTTCA
AGATGAACAAAATACAACTCAAAATACAACAACCTCTAGTTCAAATAACAATGATACTACAAATTTTGCTATGCCT
GATCAAGAAGTTCCAGCAGAACCAACAGCAACTACTTCAGCAAATACCACTCCACAAGCAAGTACTCCTAAACAAG
AAGTAACACAAACTGCAAAATCTAAAGAAGAAGCAAAAAAACAAACAGCTGTAAAAAAAGAAAAAGAAAGTGCAAA
ACAAACCCCTAAAAAAGAACAAAATGCAAATGATTTATTTAAAAATGTTGATGCTAAACCTGTACATCCAAGTGGT
TTAGCATCGGGTATTTATGTGCAAATTTTCTCAGTAAGTAATTTGGATCAAAAATCAAAAGAACTTGCTTCTGTAA
AGCAAAAAGGTTATGATTATAAACTTTATAAAACTACAGTTGGAAGTAAAGAAATTACCAAGGTTTTAATAGGACC
ATTTGAAAAGGCAGATATTGCAGCAGAACTTGCTAAAATCCGTAAGGATATTGCAAAAGATGCTTTTTCTTTTACT
TTAAAATGA(SEQ ID NO:15)

[0153] 由SEQ ID NO:15的核酸编码的Cj0404蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0154] MENQKNEFDDIILEKSNKSEKVKKILLRVIALVILFLAIMIVMKLINGSGDENTQNQSVLPSEPIATQDNNNDTSFESMPITDNTSAEDQFEALRKQFQDEQNTTQNTTTSSSNNNDTTNFAMPDQEVPAEPTATTSANTTPQA
STPKQEVTQTAKSKEEAKKQTAVKKEKESAKQTPKKEQNANDLFKNVDAKPVHPSGLASGIYVQIFSVSNLDQKSK
ELASVKQKGYDYKLYKTTVGSKEITKVLIGPFEKADIAAELAKIRKDIAKDAFSFTLK(SEQ ID NO:16)

[0155] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0404基因(以SEQ ID NO:15提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0404基因，其中cj0404基因包含与SEQ ID NO:15的核酸序
列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0404基因，其中cj0404基因包含与SEQ ID NO:15的核酸序列至少75％、至少
80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0156] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0404蛋白的核酸序列，其中所述Cj0404蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0404蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0404蛋白包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0157] cj0420-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0420基因(例如空肠弯曲杆菌cj0420基因)的核酸。

[0158] 在一些实施方案中，包含cj0420基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0420基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0159] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0420基因的核酸序列：

[0160] ATGAAAAAAGTTTTATTGAGTTCATTGGTTGCGGTGTCTTTGTTAAGCACAGGTTTGTTTGCTAAAGAATATACTTTAGATAAAGCACATACAGATGTAGGTTTTAAAATCAAACATTTACAAATTAGCAATGTAAAAGGAAAT
TTCAAAGATTATTCTGCGGTGATTGATTTTGATCCTGCGAGTGCTGAATTTAAAAAGCTTGATGTAACTATAAAAA
TCGCATCTGTAAATACAGAAAATCAAACAAGAGATAATCACTTACAACAAGATGATTTTTTCAAAGCAAAAAAATA
TCCTGATATGACTTTTACAATGAAAAAATATGAAAAAATCGATAATGAAAAAGGCAAAATGACAGGAACTTTAACT
ATAGCTGGAGTTTCTAAAGATATCGTTTTAGATGCTGAAATCGGCGGTGTAGCTAAAGGCAAAGATGGAAAAGAAA
AAATAGGATTTTCTTTAAATGGAAAAATCAAACGCTCTGATTTTAAATTTGCAACAAGTACTTCAACTATTACTTT
AAGTGATGATATTAATTTAAATATCGAAGTTGAAGCGAACGAAAAATAA(SEQ ID NO:17)

[0161] 由SEQ ID NO:17的核酸编码的Cj0420蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0162] MKKVLLSSLVAVSLLSTGLFAKEYTLDKAHTDVGFKIKHLQISNVKGNFKDYSAVIDFDPASAEFKKLDVTIKIASVNTENQTRDNHLQQDDFFKAKKYPDMTFTMKKYEKIDNEKGKMTGTLTIAGVSKDIVLDAEIGGVAKG
KDGKEKIGFSLNGKIKRSDFKFATSTSTITLSDDINLNIEVEANEK(SEQ ID NO:18)

[0163] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0420基因(以SEQ ID NO:17提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0420基因，其中cj0420基因包含与SEQ ID NO:17的核酸序
列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0420基因，其中cj0420基因包含与SEQ ID NO:17的核酸序列至少75％、至少
80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0164] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0420蛋白的核酸序列，其中所述Cj0420蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0420蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0420蛋白包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0165] cj0427-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0427基因(例如空肠弯曲杆菌cj0427基因)的核酸。

[0166] 在一些实施方案中，包含cj0427基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0427基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0167] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0427基因的核酸序列：

[0168] ATGATGGCTAAATTTAGAATTCAATACAGCGCAGGTTTTGGGCACTATACGCAAAATCACAAGGGTTTTGGACCTACGATTTATATAGAAGAGGTCGTAGAGTTTGATAATGGCAAGGATTATTTTGACTATATAGATTTTTAT
AAAACTTATTCAAAGAGCGATGATACTTATTTTCATATCAGTTTTTTAGAAGATAGACCTCTAAGCGATAAAGAAA
TCACCATTCGCAATGAATACCGCAAAATGCGTGATGAAAACTGTAAAAAAGCCAAGGAGGAATTTATAGCCAACAA
TGAGCTTGATGTGGAGCATTTGCCTACTCACCATGATTAA(SEQ ID NO:19)

[0169] 由SEQ ID NO:19的核酸编码的Cj0427蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0170] MMAKFRIQYSAGFGHYTQNHKGFGPTIYIEEVVEFDNGKDYFDYIDFYKTYSKSDDTYFHISFLEDRPLSDKEITIRNEYRKMRDENCKKAKEEFIANNELDVEHLPTHHD(SEQ ID NO:20)

[0171] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0427基因(作为SEQ ID NO:19提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0427基因，其中cj0427基因包含与SEQ ID NO:19的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0427基因，其中cj0427基因包含与SEQ ID NO:19的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0172] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0427蛋白的核酸序列，其中所述Cj0427蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0427蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0427蛋白包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0173] cj0428-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0428基因(例如空肠弯曲杆菌cj0428基因)的核酸。

[0174] 在一些实施方案中，包含cj0428基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0428基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0175] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0428基因的核酸序列：

[0176] ATGCAGGTAAATTATAGAACGATTAGCTCGTATGAATACGATGCTATTAGTGGTCAGTATAAACAGGTGGATAAACAGATTGAAGATTATTCTTCATCTGGAGATTCTGATTTTATGGATATGTTAAATAAGGCGGATGAGAAG
TCAAGCGGAGATGCTTTAAATTCTAGCAGTAGTTTTCAAAGCAATGCGCAAAACTCAAATTCAAATTTAAGTAATT
ATGCTCAAATGTCAAATGTTTACGCTTATCGTTTTAGACAAAATGAAGGCGAGCTGTCTATGAGAGCTCAAAGTGC
TAGCGTTCATAATGATCTTACACAACAAGGTGCAAATGAACAAAGTAAGAATAATACTTTGTTAAATGATTTATTG
AACGCAATTTAA(SEQ ID NO:21)

[0177] 由SEQ ID NO:21的核酸编码的Cj0428蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0178] MQVNYRTISSYEYDAISGQYKQVDKQIEDYSSSGDSDFMDMLNKADEKSSGDALNSSSSFQSNAQNSNSNLSNYAQMSNVYAYRFRQNEGELSMRAQSASVHNDLTQQGANEQSKNNTLLNDLLNAI(SEQ ID NO:22)

[0179] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0428基因(以SEQ ID NO:21提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0428基因，其中cj0428基因包含与SEQ ID NO:21的核酸序
列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0428基因，其中cj0428基因包含与SEQ ID NO:21的核酸序列至少75％、至少
80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0180] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0428蛋白的核酸序列，其中所述Cj0428蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0428蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0428蛋白包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0181] cj0588-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0588基因(例如空肠弯曲杆菌cj0588基因)的核酸。

[0182] 在一些实施方案中，包含cj0588基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0588基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0183] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0588基因的核酸序列：

[0184] ATGCGTTTCGACTTCTTCGTGTCCAAACGTCTGAACATCAGCCGTAACAAAGCGCTGGAGCTGATCGAAAACGAAGAGATCCTGCTGAACGGCAAAAGCTTCAAAGCGTCCTTCGACGTGAAAAACTTCCTGGAAAACCTGAAA
AAAACCCAGGACCTGAACCCGGAAGACATCCTGCTGGCGAACGAGCTGAAACTGGACCTGCTGAGCGAAATCTACG
TGTCCCGTGCGGCGCTGAAACTGAAAAAATTCCTGGAAGAAAACGACATCGAAATCAAACACAAAAACTGTCTGGA
CATCGGCTCCAGCACCGGCGGCTTCGTGCAGATCCTGCTGGAAAACCAGGCGCTGAAAATCACCGCGCTGGACGTG
GGCAGCAACCAGCTGCACCCGAGCCTGCGTGTGAACGAAAAAATCATCCTGCACGAAAACACCGACCTGCGTGCGT
TCAAAAGCGAAGAAAAATTCGAACTGGTGACCTGCGACGTGAGCTTCATCTCCCTGATCAACCTGCTGTACTACAT
CGACAACCTGGCGCTGAAAGAAATCATCCTGCTGTTCAAACCGCAGTTCGAAGTGGGCAAAAACATCAAACGTGAC
AAAAAAGGCGTGCTGAAAGACGACAAAGCGATCCTGAAAGCGCGTATGGACTTCGAAAAAGCGTGCGCGAAACT
(SEQ ID NO:23)

[0185] 由SEQ ID NO:23的核酸编码的TlyA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0186] MRFDFFVSKRLNISRNKALELIENEEILLNGKSFKASFDVKNFLENLKKTQDLNPEDILLANELKLDLLSEIYVSRAALKLKKFLEENDIEIKHKNCLDIGSSTGGFVQILLENQALKITALDVGSNQLHPSLRVNEKIILHEN
TDLRAFKSEEKFELVTCDVSFISLINLLYYIDNLALKEIILLFKPQFEVGKNIKRDKKGVLKDDKAILKARMDFEK
ACAKLGWLLKNTQKSSIKGKEGNVEYFYYYIKN(SEQ ID NO:24)

[0187] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0588基因(作为SEQ ID NO:23提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0588基因，其中cj0588基因包含与SEQ ID NO:23的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0588基因，其中cj0588基因包含与SEQ ID NO:23的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0188] 在一些实施方案中，核酸包含编码TlyA蛋白的核酸序列，其中所述TlyA蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码TlyA蛋白的核酸序列，其中所述TlyA蛋白包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0189] cj0921c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0921c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0921c基因)的核酸。

[0190] 在一些实施方案中，包含cj0921c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0921c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0191] 示例性空肠弯曲杆菌cj0921c基因的核酸序列提供如下：

[0192] ATGGTTTTTAGAAAATCTTTGTTAAAGTTGGCAGTTTTTGCTCTAGGTGCTTGTGTTGCATTTAGCAATGCTAATGCAGCAGAAGGCAAACTGGAGTCCATCAAATCCAAAGGCCAGCTGATCGTGGGCGTGAAAAACGACGTG
CCGCACTACGCTCTGCTGGACCAGGCAACCGGCGAAATCAAAGGCTTCGAAGTGGACGTGGCCAAACTGCTGGCTA
AAAGCATCCTGGGGGACGACAAAAAAATCAAACTGGTGGCAGTGAACGCCAAAACCCGTGGCCCGCTGCTGGACAA
CGGCAGCGTGGACGCGGTGATCGCAACCTTCACCATCACCCCGGAGCGCAAACGTATCTATAACTTCTCCGAGCCG
TATTATCAGGACGCTATCGGCCTGCTGGTTCTGAAAGAAAAAAAATATAAATCTCTGGCTGACATGAAAGGTGCAA
ACATCGGCGTGGCTCAAGCTGCAACTACAAAAAAAGCTATCGGCGAAGCTGCTAAAAAAATCGGCATCGACGTGAA
ATTCAGCGAATTCCCGGACTATCCGAGCATCAAAGCTGCTCTGGACGCTAAACGTGTGGACGCGTTCTCTGTGGAC
AAATCCATCCTGCTGGGCTATGTGGACGACAAAAGCGAAATCCTGCCGGACAGCTTCGAACCGCAGAGCTATGGCA
TCGTGACCAAAAAAGACGACCCGGCTTTCGCAAAATATGTGGACGACTTCGTGAAAGAACACAAAAACGAAATCGA
CGCTCTGGCGAAAAAATGGGGCCTGTAA(SEQ ID NO:25)

[0193] 由SEQ ID NO:25的核酸编码的Peb1蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0194] MVFRKSLLKLAVFALGACVAFSNANAAEGKLESIKSKGQLIVGVKNDVPHYALLDQATGEIKGFEVDVAKLLAKSILGDDKKIKLVAVNAKTRGPLLDNGSVDAVIATFTITPERKRIYNFSEPYYQDAIGLLVLKEKKYKSLA
DMKGANIGVAQAATTKKAIGEAAKKIGIDVKFSEFPDYPSIKAALDAKRVDAFSVDKSILLGYVDDKSEILPDSFE
PQSYGIVTKKDDPAFAKYVDDFVKEHKNEIDALAKKWGL(SEQ ID NO:26)

[0195] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0921c基因(作为SEQ ID NO:25提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0921c基因，其中cj0921c基因包含与SEQ ID NO:25的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0921c基因，其中cj0921c基因包含与SEQ ID NO:25的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0196] 在一些实施方案中，核酸包含编码Peb1蛋白的核酸序列，其中所述Peb1蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Peb1蛋白的核酸序列，其中所述Peb1蛋白包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0197] cj0982c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0982c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0982c基因)的核酸。

[0198] 在一些实施方案中，包含cj0982c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0982c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0199] 示例性空肠弯曲杆菌cj0982c基因的核酸序列提供如下：

[0200] ATGAAAAAAATACTTCTAAGTGTTTTAACGGCCTTTGTTGCAGTAGTATTGGCTGCGGCGGCAACTCCGACTCCAAAACCCTGAACTCCCTGGACAAAATCAAACAGAACGGCGTGGTGCGTATCGGCGTGTTTGGCGACAAAC
CGCCGTTTGGCTATGTGGACGAAAAAGGCAACAACCAGGGCTATGACATCGCTCTGGCTAAACGTATCGCGAAAGA
ACTGTTTGGCGACGAAAACAAAGTGCAGTTTGTGCTGGTGGAAGCTGCGAACCGTGTGGAGTTTCTGAAATCCAAC
AAAGTGGACATCATCCTGGCTAACTTTACCCAGACCCCGCAGCGTGCGGAGCAGGTGGACTTTTGCTCCCCGTATA
TGAAAGTGGCTCTGGGCGTGGCTGTGCCGAAAGACAGCAACATCACCAGCGTGGAAGACCTGAAAGACAAAACCCT
GCTGCTGAACAAAGGCACCACCGCGGACGCTTATTTTACCCAGAACTATCCGAACATCAAAACCCTGAAATATGAC
CAGAACACCGAAACCTTTGCGGCTCTGATGGACAAACGTGGCGACGCTCTGAGCCACGACAACACCCTGCTGTTTG
CTTGGGTGAAAGACCACCCGGACTTTAAAATGGGCATCAAAGAGCTGGGCAACAAAGACGTGATCGCGCCGGCGGT
GAAAAAAGGCGACAAAGAACTGAAAGAATTTATCGACAACCTGATCATCAAACTGGGCCAGGAGCAGTTTTTTCAC
AAAGCTTATGACGAAACCCTGAAAGCTCACTTTGGCGACGACGTGAAAGCGGACGACGTGGTGATCGAAGGCGGCA
AAATCTAA(SEQ ID NO:27)

[0201] 由SEQ ID NO:27的核酸编码的CjaA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0202] MKKILLSVLTAFVAVVLAACGGNSDSKTLNSLDKIKQNGVVRIGVFGDKPPFGYVDEKGNNQGYDIALAKRIAKELFGDENKVQFVLVEAANRVEFLKSNKVDIILANFTQTPQRAEQVDFCSPYMKVALGVAVPKDSNITSVE
DLKDKTLLLNKGTTADAYFTQNYPNIKTLKYDQNTETFAALMDKRGDALSHDNTLLFAWVKDHPDFKMGIKELGNK
DVIAPAVKKGDKELKEFIDNLIIKLGQEQFFHKAYDETLKAHFGDDVKADDVVIEGGKI(SEQ ID NO:28)

[0203] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0982c基因(以SEQ ID NO:27提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0982c基因，其中cj0982c基因包含与SEQ ID NO:27的核酸
序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0982c基因，其中cj0982c基因包含与SEQ ID NO:27的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0204] 在一些实施方案中，核酸包含编码CjaA蛋白的核酸序列，其中所述CjaA蛋白包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码CjaA蛋白的核酸序列，其中所述CjaA蛋白所包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0205] cj0998c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj0998c基因(例如空肠弯曲杆菌cj0998c基因)的核酸。

[0206] 在一些实施方案中，包含cj0998c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj0998c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0207] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌cj0998c基因的核酸序列：

[0208] ATGAAAAAAATTCTTGTAAGTGTTTTAAGTTCTTGCTTGTTAGCTTCGGCTTTAAGTGCGGTGTCCTTCAAAGAAGACAGCCTGAAAATCTCCTTCGAAGGCTACAAAACCAAAGACATGATCGGCACCAAAGGCGAATTCAAA
AACGTGGAATACAAATTCTCCAAAAACATCAAAGACCTGGCGAGCTACCTGAAAGGCGCGAAAGCGACCATCAAAC
CGAGCAACGCGTTCATGGGCGAAGGCAACGACATCATCACCAACAACATCACCAAAGTGTTCTTCCCGGCGCTGCT
GGGCGACACGGACATCAAAGTGGTGTTTCAGGACGTGATCGCGGGCGAAAACAAAGGCGTGATCTCCGCGAAAATC
ACCATGGACAAAAAAAGCACCATCGTGCCGCTGACCTATACCATCAAAGACAACAAATTTGAAGCGAAAGGCCAGC
TGGACCTGCACACCTTTAAAAACGGCTCCAAAGCGCTGAAAGCGCTGAGCGACGTGGCTGCAGGCCACGGCGGCAT
CTCCTGGCCGCTGGTGGACATCAGCTTTAACGCGGACCTGGCGGAATAA(SEQ ID NO:29)

[0209] 由SEQ ID NO:29的核酸编码的Cj0998c蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0210] MKKILVSVLSSCLLASALSAVSFKEDSLKISFEGYKTKDMIGTKGEFKNVEYKFSKNIKDLASYLKGAKATIKPSNAFMGEGNDIITNNITKVFFPALLGDTDIKVVFQDVIAGENKGVISAKITMDKKSTIVPLTYTIKDNKF
EAKGQLDLHTFKNGSKALKALSDVAAGHGGISWPLVDISFNADLAE(SEQ ID NO:30)

[0211] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj0998c基因(作为SEQ ID NO:29提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj0998c基因，其中该cj0998c基因包含与SEQ ID NO:29的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj0998c基因，其中cj0998c基因包含与SEQ ID NO:29的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0212] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0998c蛋白的核酸序列，其中所述Cj0998c蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj0998c蛋白的核酸序列，其中所述
Cj0998c蛋白包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0213] cj1259-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj1259基因(例如空肠弯曲杆菌cj1259基因)的核酸。

[0214] 在一些实施方案中，包含cj1259基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj1259基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0215] 示例性空肠弯曲杆菌cj1259基因的核酸序列提供如下：

[0216] ATGAAACTAGTTAAACTTAGTTTAGTTGCAGCTCTTGCTGCAGGTGCTTTTTCAGCAGCTAACGCTACCCCGCTGGAAGAAGCGATCAAAGACGTGGACGTGTCCGGCGTGCTGCGTTACCGTTACGACACCGGCAACTTTGAC
AAAAACTTCGTGAACAACTCCAACCTGAACAACAGCAAACAGGACCACAAATATCGTGCACAGGTGAACTTCAGTG
CTGCTATCGCTGACAACTTCAAAGCTTTTGTGCAGTTTGACTATAACGCTGCTGACGGTGGCTATGGCGCTAACGG
CATCAAAAACGACCAGAAAGGCCTGTTTGTGCGTCAGCTGTACCTGACTTATACCAACGAAGACGTGGCTACCAGT
GTGATCGCTGGTAAACAGCAGCTGAACCTGATCTGGACGGACAACGCTATCGACGGTCTGGTGGGCACCGGTGTGA
AAGTGGTGAACAACAGCATCGACGGTCTGACTCTGGCTGCTTTTGCTGTGGACAGCTTCATGGCTGCGGAGCAGGG
TGCGGACCTGCTGGAACACAGTAACATCTCCACCACCTCCAACCAGGCTCCGTTTAAAGTGGACTCCGTGGGCAAC
CTGTACGGTGCTGCTGCTGTGGGTTCTTATGACCTGGCTGGTGGCCAGTTCAACCCGCAGCTGTGGCTGGCTTATT
GGGACCAGGTGGCATTCTTCTATGCTGTGGACGCAGCTTATAGCACAACTATCTTTGACGGCATCAACTGGACACT
GGAAGGCGCTTACCTGGGAAACAGCCTGGACAGCGAACTGGACGACAAAACACACGCTAACGGCAACCTGTTTGCT
CTGAAAGGCAGCATCGAAGTGAACGGCTGGGACGCTAGCCTGGGTGGTCTGTACTACGGCGACAAAGAAAAAGCTT
CTACAGTGGTGATCGAAGACCAGGGTAACCTGGGTTCTCTGCTGGCAGGTGAGGAAATCTTCTATACTACTGGCTC
ACGCCTGAACGGTGACACTGGTCGTAACATCTTCGGTTATGTGACTGGTGGATATACTTTCAACGAAACAGTGCGC
GTGGGTGCTGACTTCGTGTATGGTGGAACAAAAACAGAAGCTGCTAACCACCTGGGTGGTGGTAAAAAACTGGAAG
CTGTGGCACGCGTGGACTACAAATACTCTCCGAAACTGAACTTCTCAGCATTCTATTCTTATGTGAACCTGGACCA
GGGTGTGAACACTAACGAAAGTGCTGACCACAGCACTGTGCGTCTGCAGGCTCTGTACAAATTCTAA(SEQ ID 
NO:31)

[0217] 由SEQ ID NO:31的核酸编码的PorA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0218] MKLVKLSLVAALAAGAFSAANATPLEEAIKDVDVSGVLRYRYDTGNFDKNFVNNSNLNNSKQDHKYRAQVNFSAAIADNFKAFVQFDYNAADGGYGANGIKNDQKGLFVRQLYLTYTNEDVATSVIAGKQQLNLIWTDNAIDGL
VGTGVKVVNNSIDGLTLAAFAVDSFMAAEQGADLLEHSNISTTSNQAPFKVDSVGNLYGAAAVGSYDLAGGQFNPQ
LWLAYWDQVAFFYAVDAAYSTTIFDGINWTLEGAYLGNSLDSELDDKTHANGNLFALKGSIEVNGWDASLGGLYYG
DKEKASTVVIEDQGNLGSLLAGEEIFYTTGSRLNGDTGRNIFGYVTGGYTFNETVRVGADFVYGGTKTEAANHLGG
GKKLEAVARVDYKYSPKLNFSAFYSYVNLDQGVNTNESADHSTVRLQALYKF(SEQ ID NO:32)

[0219] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj1259基因(以SEQ ID NO:31提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj1259基因，其中cj1259基因包含与SEQ ID NO:31的核酸序
列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj1259基因，其中cj1259基因包含与SEQ ID NO:31的核酸序列至少75％、至少
80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0220] 在一些实施方案中，核酸包含编码PorA蛋白的核酸序列，其中所述PorA蛋白包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PorA蛋白的核酸序列，其中所述PorA蛋白包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0221] cj1339c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj1339c基因(例如空肠弯曲杆菌cj1339c基因)的核酸。

[0222] 在一些实施方案中，包含cj1339c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj1339c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0223] 示例性空肠弯曲杆菌cj1339c基因的核酸序列提供如下：

[0224] ATGGGTTTTCGTATCAACACCAACGTGGCGGCTCTGAACGCAAAAGCAAACGCGGATCTGAACAGCAAAAGCCTGGATGCTTCTCTGAGCCGTCTGAGCTCCGGCCTGCGTATCAACTCCGCAGCAGATGATGCTTCCGGGATG
GCGATCGCAGATAGCCTGCGTTCTCAGGCTAACACTCTGGGCCAGGCTATCTCTAACGGCAACGATGCTCTGGGCA
TCCTGCAGACTGCTGATAAAGCTATGGACGAGCAGCTGAAAATCCTGGATACCATCAAAACTAAAGCAACCCAGGC
GGCTCAGGATGGCCAGAGCCTGAAAACCCGTACCATGCTGCAGGCAGATATCAACCGTCTGATGGAAGAACTGGAC
AACATCGCAAACACTACTTCCTTTAACGGTAAACAGCTGCTGAGCGGCAACTTTATCAACCAGGAATTTCAGATCG
GCGCAAGCTCCAACCAGACTGTGAAAGCTACTATCGGCGCAACTCAGTCTTCTAAAATCGGTCTGACCCGCTTTGA
AACCGGCGGCCGTATCTCCACTAGCGGCGAAGTGCAGTTTACTCTGAAAAACTACAACGGTATCGATGATTTTCAG
TTTCAGAAAGTGGTGATCTCCACTTCCGTGGGCACCGGCCTGGGCGCTCTGGCAGATGAGATCAACAAAAACGCTG
ATAAAACCGGTGTGCGTGCTACTTTTACAGTGGAAACTCGTGGTATCGCTGCAGTGCGTGCAGGCGCTACTTCAGA
TACTTTTGCTATCAACGGGGTGAAAATCGGCAAAGTGGATTACAAAGATGGCGATGCTAACGGCGCCCTGGTGGCT
GCAATCAACTCGGTGAAAGATACCACCGGCGTGGAAGCTTCGATCGATGCTAACGGCCAGCTGCTGCTGACTTCCC
GTGAAGGCCGTGGCATCAAAATCGATGGTAACATCGGTGGCGGTGCCTTTATCAACGCTGATATGAAAGAAAACTA
TGGCCGCCTGTCTCTGGTGAAAAACGATGGTAAAGATATCCTGATCAGCGGTAGCAACCTGTCTTCTGCAGGTTTT
GGTGCAACCCAGTTTATCTCTCAGGCTTCTGTGTCTCTGCGTGAGTCCAAAGGCCAGATCGATGCTAACATCGCTG
ATGCTATGGGCTTTGGCTCTGCAAACAAAGGCGTGGTGCTGGGTGGTTATTCTTCTGTGAGCGCCTATATGAGCAG
CGCAGGCAGCGGCTTTTCTTCCGGTTCCGGTTATTCTGTGGGTAGCGGCAAAAACTATTCCACCGGTTTTGCAAAC
GCTATCGCTATCTCCGCTGCTTCGCAGCTGTCTACGGTGTATAACGTGTCTGCAGGCTCAGGTTTTTCAAGCGGTT
CCACCCTGTCTCAGTTTGCCACTATGAAAACCACTGCTTTTGGCGTGAAAGATGAAACCGCAGGTGTGACCACCCT
GAAAGGCGCTATGGCTGTGATGGATATCGCTGAAACCGCTATCACCAACCTGGATCAGATCCGTGCCGACATCGGC
TCGGTGCAGAACCAGGTGACATCCACTATCAACAACATCACCGTGACTCAGGTGAACGTGAAAGCAGCAGAATCGC
AGATCCGTGATGTGGACTTTGCAGCCGAGAGCGCAAACTACTCTAAAGCAAACATCCTGGCTCAGAGCGGCTCTTA
TGCCATGGCACAGGCTAACTCTGTGCAGCAGAACGTGCTGCGTCTGCTGCAGTA(SEQ ID NO:33)

[0225] 由SEQ ID NO:33的核酸编码的FlaA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0226] MGFRINTNVAALNAKANADLNSKSLDASLSRLSSGLRINSAADDASGMAIADSLRSQANTLGQAISNGNDALGILQTADKAMDEQLKILDTIKTKATQAAQDGQSLKTRTMLQADINRLMEELDNIANTTSFNGKQLLSGNFIN
QEFQIGASSNQTVKATIGATQSSKIGLTRFETGGRISTSGEVQFTLKNYNGIDDFQFQKVVISTSVGTGLGALADE
INKNADKTGVRATFTVETRGIAAVRAGATSDTFAINGVKIGKVDYKDGDANGALVAAINSVKDTTGVEASIDANGQ
LLLTSREGRGIKIDGNIGGGAFINADMKENYGRLSLVKNDGKDILISGSNLSSAGFGATQFISQASVSLRESKGQI
DANIADAMGFGSANKGVVLGGYSSVSAYMSSAGSGFSSGSGYSVGSGKNYSTGFANAIAISAASQLSTVYNVSAGS
GFSSGSTLSQFATMKTTAFGVKDETAGVTTLKGAMAVMDIAETAITNLDQIRADIGSVQNQVTSTINNITVTQVNV
KAAESQIRDVDFAAESANYSKANILAQSGSYAMAQASVQQNVLRLLQ(SEQ ID NO:34)

[0227] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj1339c基因(以SEQ ID NO:33提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj1339c基因，其中cj1339c基因包含与SEQ ID NO:33的核酸
序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj1339c基因，其中cj1339c基因包含与SEQ ID NO:33的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0228] 在一些实施方案中，核酸包含编码FlaA蛋白的核酸序列，其中所述FlaA蛋白包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码FlaA蛋白的核酸序列，其中所述FlaA蛋白包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0229] cj1478c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj1478c基因(例如空肠弯曲杆菌cj1478c基因)的核酸。

[0230] 在一些实施方案中，包含cj1478c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj1478c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0231] 示例性空肠弯曲杆菌cj1478c基因的核酸序列提供如下：

[0232] ATGAAAAAAATCTTCCTGTGTCTGGGCCTGGCGAGCGTGCTGTTTGGCGCTGACAACAACGTGAAATTTGAAATCACCCCGACCCTGAACTATAACTACTTTGAAGGCAACCTGGACATGGACAACCGTTATGCGCCGGGGATC
CGTCTGGGCTATCACTTTGACGACTTTTGGCTGGACCAGCTGGAATTTGGGCTGGAGCACTATTCTGACGTGAAAT
ATACCAACACCAACAAAACCACCGACATCACCCGTACCTATCTGAGCGCTATCAAAGGCATCGACGTGGGTGAGAA
ATTTTATTTCTATGGCCTGGCAGGCGGCGGCTATGAGGACTTTTCCAACGCTGCGTATGACAACAAAAGCGGCGGC
TTTGGCCACTATGGCGCGGGCGTGAAATTCCGTCTGAGCGACTCTCTGGCTCTGCGTCTGGAAACCCGTGACCAGA
TCAACTTCAACCACGCAAACCACAACTGGGTGTCCACTCTGGGCATCAGCTTTGGCTTTGGCGGCAAAAAAGAAAA
AGCTGTGGAAGAAGTGGCTGACACCCGTGCAACTCCGCAGGCCAAATGTCCGGTGGAACCGCGTGAAGGCGCTCTG
CTGGACGAAAACGGCTGCGAAAAAACCATCTCTCTGGAAGGCCACTTTGGCTTTGACAAAACCACCATCAACCCGA
CTTTTCAGGAAAAAATCAAAGAAATCGCAAAAGTGCTGGACGAAAACGAACGTTATGACACTATCCTGGAAGGCCA
CACCGACAACATCGGCTCCCGTGCTTATAACCAGAAACTGTCCGAACGTCGTGCTAAAAGCGTGGCTAACGAACTG
GAAAAATATGGCGTGGAAAAAAGCCGCATCAAAACAGTGGGCTATGGCCAGGACAACCCGCGCTCCAGCAACGACA
CCAAAGAAGGCCGCGCGGACAACCGTCGCGTGGACGCTAAATTTATCCTGCGCTAA(SEQ ID NO:35)

[0233] 由SEQ ID NO:35的核酸编码的CadF蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0234] MKKIFLCLGLASVLFGADNNVKFEITPTLNYNYFEGNLDMDNRYAPGIRLGYHFDDFWLDQLEFGLEHYSDVKYTNTNKTTDITRTYLSAIKGIDVGEKFYFYGLAGGGYEDFSNAAYDNKSGGFGHYGAGVKFRLSDSLALRL
ETRDQINFNHANHNWVSTLGISFGFGGKKEKAVEEVADTRATPQAKCPVEPREGALLDENGCEKTISLEGHFGFDK
TTINPTFQEKIKEIAKVLDENERYDTILEGHTDNIGSRAYNQKLSERRAKSVANELEKYGVEKSRIKTVGYGQDNP
RSSNDTKEGRADNRRVDAKFILR(SEQ ID NO:36)

[0235] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj1478c基因(以SEQ ID NO:35提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj1478c基因，其中cj1478c基因包含与SEQ ID NO:35的核酸
序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj1478c基因，其中cj1478c基因包含与SEQ ID NO:35的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0236] 在一些实施方案中，核酸包含编码CadF蛋白的核酸序列，其中所述CadF蛋白包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码CadF蛋白的核酸序列，其中所述CadF蛋白包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0237] cj1534c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj1534c基因(例如空肠弯曲杆菌cj1534c基因)的核酸。

[0238] 在一些实施方案中，包含cj1534c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj1534c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0239] 示例性空肠弯曲杆菌cj1534c基因的核酸序列提供如下：

[0240] ATGTCCGTGACCAAACAGCTGCTGCAGATGCAGGCGGACGCGCACCACCTGTGGGTGAAATTCCACAACTACCACTGGAACGTGAAAGGCCTGCAGTTCTTCTCCATCCACGAGTACACCGAAAAAGCGTACGAAGAAATGGCA
GAACTGTTCGACAGCTGTGCGGAACGTGTGCTGCAGCTGGGCGAAAAAGCGATCACCTGCCAGAAAGTGCTGATGG
AAAACGCGAAAAGCCCGAAAGTGGCGAAAGACTGCTTCACCCCGCTGGAAGTGATCGAACTGATCAAACAGGACTA
CGAATACCTGCTGGCGGAATTCAAAAAACTGAACGAAGCGGCAGAAAAAGAAAGCGACACCACCACCGCTGCTTTC
GCGCAGGAAAACATCGCGAAATATGAAAAAAGTCTGTGGATGATCGGCGCTACCCTGCAGGGCGCTTGCAAAATGT
AA(SEQ ID NO:37)

[0241] 由SEQ ID NO:37的核酸编码的Dps蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0242] MSVTKQLLQMQADAHHLWVKFHNYHWNVKGLQFFSIHEYTEKAYEEMAELFDSCAERVLQLGEKAITCQKVLMENAKSPKVAKDCFTPLEVIELIKQDYEYLLAEFKKLNEAAEKESDTTTAAFAQENIAKYEKSLWMIGATLQ
GACKM(SEQ ID NO:38)

[0243] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj1534c基因(以SEQ ID NO:37提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj1534c基因，其中cj1534c基因包含与SEQ ID NO:37的核酸
序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj1534c基因，其中cj1534c基因包含与SEQ ID NO:37的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0244] 在一些实施方案中，核酸包含编码Dps蛋白的核酸序列，其中所述Dps蛋白包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Dps蛋白的核酸序列，其中所述Dps蛋白包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0245] cj1656c-在一些实施方案中，重组细菌包含含有cj1656c基因(例如空肠弯曲杆菌cj1656c基因)的核酸。

[0246] 在一些实施方案中，包含cj1534c基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含cj1534c基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0247] 示例性空肠弯曲杆菌cj1656c基因的核酸序列提供如下：

[0248] ATGGTTTCAGATGTTTCTATGGGTAATGTTAATTTAATGACTGCTGTTAATACTTCAGTTTTGAAAAAATCTATGGACACAAACGAGGCATTGATGAATGAACTCATCGAAGGTATGGAAGGTGTCTCTCAAGCCTCCGCTCCA
CAAGCTTCTAGCTCTAGTGGTTTGGATATTTACGCTTAA(SEQ ID NO:39)

[0249] 由SEQ ID NO:39的核酸编码的Cj1656c蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0250] MVSDVSMGNVNLMTAVNTSVLKKSMDTNEALMNELIEGMEGVSQASAPQ ASSSSGLDIYA(SEQ ID NO:40)

[0251] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌cj1656c基因(作为SEQ ID NO:39提供)。在一些实施方案中，核酸包含cj1656c基因，其中cj1656c基因包含与SEQ ID NO:39的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含cj1656c基因，其中cj1656c基因包含与SEQ ID NO:39的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0252] 在一些实施方案中，核酸包含编码Cj1656c蛋白的核酸序列，其中所述Cj1656cs蛋白包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Cj1656c蛋白的核酸序列，其中所述
Cj1656c蛋白包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少
91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0253] B.弯曲杆菌糖基化蛋白质

[0254] 在一些实施方案中，重组细菌经过遗传工程改造以在其表面中产生空肠弯曲杆菌N-聚糖。空肠弯曲杆菌N-聚糖是七糖((GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-[Glc-β-1,3]GalNAc-α
1,4-GalNAc-α1,4-Ga lNAc-α1,3-diNAcBac；diNAcBac是2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧-D-吡喃葡萄糖，GalNAc是N-乙酰半乳糖胺，和Glc是葡萄糖)，并且常见于所有空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)分离株中。在弯曲杆菌中，N-聚糖被添加到多种周
质和膜蛋白上，并且在兔和人中具有免疫原性(参见，例如，Nothaft等人(2012)
Mol.Cell.Proteomics 11:1203-19(13)；和Szymanski等(2003)J Biol Chem.278:24509-
20(14))。

[0255] 空肠弯曲杆菌N-聚糖缀合到Glu/Asp Xaa1 Asn-Xaa2-Ser/Thr(SEQ ID NO:41)糖基化共有基序内的天冬酰胺上。在空肠弯曲杆菌中，编码介导N-连接糖基化的蛋白质的基
因存在于被称为pgl操纵子的17-kb基因座中，其含有14个开放阅读框(ORFs)(参见Wacker
等人(2002)Science 298:1790-3(15))。14个ORF编码几种糖基转移酶和糖生物合成酶，它
们协同地产生脂质连接的七糖前体。七糖通过细菌周质中的PglB转移到目标天冬酰胺上。
空肠弯曲杆菌pgl操纵子包含以下基因：wlaA、gne、pglK、pglH、pglI、pglJ、pglB、pglA、pglC、pglD、wlaJ、pglE、pglF和pglG(图6)。

[0256] 表A：pgl操纵子基因大小和GC含量

[0257]

[0258] 在一些实施方案中，重组细菌包含含有pgl操纵子(例如，空肠弯曲杆菌pgl操纵子或结肠弯曲杆菌pgl操纵子)的核酸。在一些实施方案中，重组细菌包含至少一个选自于
walA、gne、pglK、pglH、pglI、pglJ、pglB、pglA、pglC、pglD、wlaJ、pglE、pglF和pglG的pgl操纵子基因。包含pgl操纵子的核酸或一个或多个pgl操纵子基因的表达可赋予细菌(例如，非弯曲杆菌属细菌)合成N-聚糖以及将N-聚糖与包含Glu/Asp Xaa1 Asn-Xaa2-Ser/Thr(SEQ 
ID NO:41)糖基化共有基序的蛋白质缀合的能力。

[0259] 在一些实施方案中，包含pgl操纵子的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pgl操纵子的核酸位于细菌的染色体上。在一些实施方案中，包含pgl操纵子的核酸位于染色体基因座处，所述染色体基因座对应于在细菌染色体中删除或改变的内源cysG基
因的基因座。在一些实施方案中，包含pgl操纵子的核酸与可调控的启动子(例如，LacI调控启动子，例如Ptrc)可操作地连接。

[0260] 示例性空肠弯曲杆菌pgl操纵子的核酸序列提供如下：

[0261] GGATTACAAATGGCAAAAAATGAAGGTTATATTTGTGTTTTTGATTGTGAGAGTGTGCCAGATGTTGAGCTTATCCGCAAAACTTTGGGTTTTGAAGGAAGTGATTTAGAGGTAAGTTTAAAAGCACTTCAGTGGCAAAAAGAA
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TTATTTTTCCAAAAAGGAATTTGTTTGCCAAGTGGCACGGCGATGAGTAAAGATGATGTTTATGAAATTTCAAAAC
TGATCTTAAAGAGCATAAAGGCTTAAAATGATTTTTTATAAAAGCAAAAGATTAGCATTTTTTTTAACTTCAGATA
TTGTTTTAATTTTACTTAGCGTTTATCTGGCTTTTTCTTTGAGATTTAGTGGAGATATTCCGAGTATTTTTTATCA
TGGTATGATGGTTTCTGCTATTATTTTGCTTGTTTTAAAACTTTCATTTTTGTTTGTTTTTAGAATTTATAAAGTA
GCTTGGAGATTTTTTTCTCTCAATGAAGCAAGAAAGATTTTTATCGCTTTGCTTTTAGCTGAGTTTTGTTTTTTTC
TTATTTTTTATTTTTTTAGTGATTTTTTTAATCCTTTTCCAAGAAGTGCTATTGTGATAGATTTTGTTCTTTCTTA
TATGTTTATAGGTACTTTAAGAATTAGCAAAAGAATGCTTGTGGATTTTAAACCTTCTAGAATGAAAGAAGAAGAA
ACTCCTTGTATTGTAGTAGGGGCAACTTCTAAGGCTTTGCATTTGTTAAAAGGTGCAAAAGAAGGTTCTTTAGGGC
TTTTTCCTGTAGGCGTAGTTGATGCGAGAAAAGAGCTTATAGGGACTTATTGTGATAAATTTATTGTAGAAGAAAA
AGAAAAAATAAAATCTTATGTAGAACAAGGGGTAAAAACTGCCATTATTGCTTTAAGACTTGAACAAGAAGAGCTT
AAAAAACTTTTTGAAGAACTTGTAGCTTATGGTATTTGCGATGTAAAAATATTTTCTTTTACAAGAAACGAAGCAA
GAGATATCAGTATAGAAGACTTGCTTGCTAGAAAACCAAAAGATTTAGATGATAGTGCTGTGGCGGCTTTTTTAAA
AGATAAGGTAGTTTTGGTAAGTGGAGCAGGTGGAACTATAGGCAGTGAACTTTGTAAGCAATGTATTAAATTTGGT
GCTAAGCATCTTATCATGGTTGATCATAGTGAGTATAATCTTTATAAGATCAATGATGATTTAAATTTATATAAAG
AAAAAATTACTCCTATTTTACTGAGTATTTTAGATAAGCAAAGTTTAGATGAGGTATTAAAAACTTATAAACCCGA
GCTTATTTTACATGCAGCCGCTTATAAACATGTGCCTCTTTGCGAACAAAATCCACATTCAGCAGTAATCAATAAT
ATTTTAGGAACTAAAATTTTATGCGACAGTGCTAAAGAAAACAAAGTAGCTAAATTTGTGATGATAAGTACAGATA
AAGCAGTACGACCAACAAATATTATGGGTTGCACTAAGAGAGTTTGCGAGCTTTATACTTTAAGTATGAGTGATGA
AAATTTTGAAGTTGCTTGTGTGCGTTTTGGTAATGTTTTAGGTTCTAGTGGTAGTGTGATACCGAAATTTAAAGCA
CAAATTGCCAATAATGAGCCTTTAACTTTAACGCACCCTGATATAGTGCGTTATTTTATGCTTGTGGCTGAGGCAG
TGCAACTTGTTTTACAAGCTGGAGCTATCGCAAAAGGGGGAGAACTTTTTGTTTTGGATATGGGTAAGCCTGTGAA
AATCATAGATTTAGCTAAAAAAATGCTTTTACTTTCTAATCGCAATGATTTAGAAATTAAAATCACAGGCTTAAGA
AAAGGTGAGAAGCTTTATGAAGAGCTTTTGATTGATGAAAATGATGCTAAAACACAATATGAGAGTATTTTTGTAG
CAAAGAATGAGAAGGTTGACCTTGATTGGCTTAATAAAGAGATAGAAAATTTACAAATATGTGAAGATATTTCAGA
GGCTTTATTAAAGATTGTACCTGAATTTAAACACAATAAAGAAGGTGTATAATGTATATAAAAGATATACAAAGAT
TTGAAGATAATCGCTATCGTGCTAGAGCTTATATGAGTTATATTTTAACAAGAAATCTGCCCAATAAACTTCCTGA
CATTCACCTTGAAACGATTAAAACAGCTTTGGATAAAATAGCTCATGAAGTTGTTGTTTTTGATGCTTTGTATATT
TTAGATATTTCAGGCATGCAAATAGAAAATGCGATTTCCTTAAATAAAGCTCATGAAATAGGGCAGGGTGAGGATA
GAAGTACTCGTTCTTATTTTTATAGAGCTGTAAAATTAAGACGATGTGTTTTGAGCGATCCTTATCCTTCGGTTTT
AAATAATGAGCTTTGCGTGACAGCTTCTATGCCAATTTACGATGATAAAAATAACTTGCTTTTTGTTGTTTGTATT
GATATCAAGCTTGAAGATATTTTAAAGATTATTCAAGCAGGAAAATTTGAATTTGTTTTTACTCAGTTTAGTCGTT
TGGTATATTTTTGCTTCGCACTGGTTTTATTTGTGATTACTTGTTTTTTATTTCAAAAAGGTTTTTTTAGTCTTTT
TGATAATCAAGCTATAGGTATAGAACATATGTTTGAAAGTACCATCGCTATAACTTTGGCTTTAGCTATTTTTGAT
TTGGCAAAAACTTTGATCGAACAAGAAGTATTAGGAAGGACGAAAAAAGAAGAAGGTGGAATTCAAAAAACTATGG
TGAGATTTTTGGGTTCTATTATCATTGCTTTAGCTATAGAAGCTTTGATGTTGGTATTTAAACTTGCTATTGGTGA
TCTTTCTCAGATGATTTATGCGATTTATCTTATCGGTGGAGTGAGCTTGCTTCTTTTAGGTTTAAGTGTATATTTA
TTTACGGTTAAGTATAAAAATAATAATATTTGAACTTAGT(SEQ ID NO:42)。

[0262] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pgl操纵子(以SEQ ID NO:42提供)。在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pgl操纵子，其中该空肠弯曲杆菌pgl操纵子包含
与SEQ ID NO:42的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pgl操纵子，其中空肠弯曲杆菌pgl操纵子包含与SEQ ID NO:42的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0263] wlaA-在一些实施方案中，重组细菌包含含有wlaA基因(例如，空肠弯曲杆菌wlaA基因)的核酸。

[0264] 在一些实施方案中，包含wlaA基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含wlaA基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0265] 示例性空肠弯曲杆菌wlaA基因的核酸序列提供如下：

[0266] ATGGCAAAAAATGAAGGTTATATTTGTGTTTTTGATTGTGAGAGTGTGCCAGATGTTGAGCTTATCCGCAAAACTTTGGGTTTTGAAGGAAGTGATTTAGAGGTAAGTTTAAAAGCACTTCAGTGGCAAAAAGAACAAAGTGGG
AGTGAGTTTTTGCCTTTGCCTTATCATAAAATTATCAGTATTTGTGCGGTTTTAAGTGATAATTTTGGAAAATTTA
TCAAAGTGAATAAAATTGATGGACAAAATGAAAAAGAAATGATTGAGAATTTTTTCAATTTTATAGAAAATTATGA
GCCAAAATTAGTCAGTTTTAATGGTAAAAATTTCGATATGCCTGTTCTTGTTTTAAGGGCTTTAAAATACAATTTA
AAAGCAGCAACTTATTTGGATACTCAAAGTGATAAATGGAATAATTATAAAACAAGATTTTCAGAATTAAAACATT
GTGATTTATTAGAATCCTTAGGATCTAACGGGCGTGGAATAAAGCTTGATACACTTTGTTCTATGGTGGGTTTGCC
AGGAAAATATGATGTGCATGGCGATGAGGTAATGAAACTTTTTTATGAAAATAAACTTGAAAAAATCCACGAATAT
TGTGAAAGTGATGTTTTAAACACCTATATGCTTTTTTTAAAATATGAACTTATTAAAGCTAATGTTGATGAAGAAG
ATTATGTTGGTTTTCTTTCTTATATGAGAGATTTCTTGTGTGCAAAAAAATCAGATCGTTCTTATACAGAAGTTTT
TGCAAAAGCTTGTGAGAGTGAAATTTCAAAAGTTCGATCTTAA(SEQ ID NO:43)

[0267] 由SEQ ID NO:43的核酸编码的WlaA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0268] MAKNEGYICVFDCESVPDVELIRKTLGFEGSDLEVSLKALQWQKEQSGSEFLPLPYHKIISICAVLSDNFGKFIKVNKIDGQNEKEMIENFFNFIENYEPKLVSFNGKNFDMPVLVLRALKYNLKAATYLDTQSDKWNNYKTRFSE
LKHCDLLESLGSNGRGIKLDTLCSMVGLPGKYDVHGDEVMKLFYENKLEKIHEYCESDVLNTYMLFLKYELIKANVD
EEDYVGFLSYMRDFLCAKKSDRSYTEVFAKACESEISKVRS

[0269] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌wlaA基因(作为SEQ ID NO:43提供)。在一些实施方案中，核酸包含wlaA基因，其中wlaA基因包含与SEQ ID NO:43的核酸序列至
少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少
87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含wlaA基因，其中wlaA基因包含与SEQ ID NO:43的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0270] 在一些实施方案中，核酸包含编码WlaA蛋白的核酸序列，其中所述WlaA蛋白包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码WlaA蛋白的核酸序列，其中所述WlaA蛋白包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0271] wlaJ-在一些实施方案中，重组细菌包含含有wlaJ基因(例如，空肠弯曲杆菌wlaJ基因)的核酸。

[0272] 在一些实施方案中，包含wlaJ基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含wlaJ基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0273] 以下提供示例性空肠弯曲杆菌wlaJ基因的核酸序列：

[0274] ATGAAAAAGGTGTTTTTGTGGGAGTACCTGCAAAAAGGATGTAAATTGCATTTTAATAACAATCTTGTTGTTCACTATATAGTAAATCCTTCGCCTTTGGGGTGGATTGTCATTAATTTACTAACCATATGTCTAATATGCTAC
ATATTTCCTTTGAAAAATTCTTTAAAACACAAAAAACTTTTTAGTCTTAAAGCAAATGTAAATTCTAAAAATAGTA
GGATTATAAAATATACAGGTATTGCTGCTTTTTTGGGTGGATTAATAGGAATTTGGTATAATTTTGAAGGTTTTTA
TCAACTTCTTTTTTTCTTTGAATTAGAAAATGAAAATTTAAAAACACTTTGGAGTTTGCAAGTATCAGTTTCTTCT
GTGATAACAGGTATGTTATTATTGTTGATATATGTTATAAATTTAGCAATGGTTTGTGAAAATGGAATTTATATAG
TTAGTAAATTTAATCTTTTTTATATGTATTTTATAAAACGAGAAGATTTGGAAATTGTTAAAATAGAAAAAATGAA
ATTTTTAAATCAAGTTGAAGTTTGTTTTGTTATCAAAACAAAAAATAAAATACTCCTTAAATGCTTTGAAAGTATT
TATAAAAAAGAAGACTTAGAAAAGCTTAAAAATTGGTATGAAAACAAGCTTTGA(SEQ ID NO:45)。

[0275] 由SEQ ID NO:45的核酸编码的WlaJ蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0276] MKKVFLWEYLQKGCKLHFNNNLVVHYIVNPSPLGWIVINLLTICLICYIFPLKNSLKHKKLFSLKANVNSKNSRIIKYTGIAAFLGGLIGIWYNFEGFYQLLFFFELENENLKTLWSLQVSVSSVITGMLLLLIYVINLAMVCE
NGIYIVSKFNLFYMYFIKREDLEIVKIEKMKFLNQVEVCFVIKTKNKILLKCFESIYKKEDLEKLKNWYENKL.

[0277] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌wlaJ基因(以SEQ ID NO:45提供)。在一些实施方案中，核酸包含wlaJ基因，其中wlaJ基因包含与SEQ ID NO:45的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含wlaJ基因，其中wlaJ基因包含与SEQ ID NO:45的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0278] 在一些实施方案中，核酸包含编码WlaJ蛋白的核酸序列，其中所述WlaJ蛋白包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码WlaJ蛋白的核酸序列，其中所述WlaJ蛋白包含与SEQ IDNO:46的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0279] gne-在一些实施方案中，重组细菌包含含有gne基因(例如空肠弯曲杆菌gne基因)的核酸。

[0280] 在一些实施方案中，包含gne基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含gne基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0281] 示例性空肠弯曲杆菌gne基因的核酸序列提供如下：

[0282] ATGATGATGAAAATTCTTATTAGCGGTGGTGCAGGTTATATAGGTTCTCATACTTTAAGACAATTTTTAAAAACAGATCATGAAATTTGTGTTTTAGATAATCTTTCTAAGGGTTCTAAAATCGCAATAGAAGATTTGCAAAAA
ACAAGAGCTTTTAAATTTTTCGAACAAGATTTAAGTGATTTTCAAGGCGTAAAAGCATTGTTTGAGAGAGAAAAAT
TTGACGCTATTGTGCATTTTGCAGCAAGCATTGAAGTTTTTGAAAGTATGCAAAATCCTTTAAAATATTATATGAA
CAACACTGTTAATACGACAAATCTCATCGAAACTTGTTTGCAAACTGGAGTGAATAAATTTATATTTTCTTCAACG
GCGGCCACTTATGGCGAACCACAAACTCCCGTTGTGAGCGAAACAAGTCCTTTAGCACCTATTAATCCTTATGGGC
GTAGTAAGCTTATGAGTGAAGAAGTTTTGCGTGATGCAAGTATGGCAAATCCTGAATTTAAGCATTGTATTTTAAG
ATATTTTAATGTTGCAGGTGCTTGTATGGATTATACTTTAGGACAACGCTATCCAAAAGCGACTTTGCTTATAAAA
GTTGCAGCTGAATGTGCCGCAGGAAAACGTGATAAACTTTTCATATTTGGCGATGATTATGATACAAAAGATGGTA
CTTGCATAAGAGATTTTATCCATGTAGATGATATTTCAAGTGCACATTTAGCGGCTTTGGATTATTTAAAAGAGAA
TGAAAGCAATGTTTTTAATGTAGGTTATGGACATGGTTTTAGCGTAAAAGAAGTGATTGAAGCGATGAAAAAAGTT
AGCGGAGTGGATTTTAAAGTAGAACTTGCCCCACGCCGTGCGGGTGATCCTAGTGTATTGATTTCTGATGCAAGTA
AAATCAGAAATCTTACTTCTTGGCAGCCTAAATATGATGATTTAGAGCTTATTTGTAAATCTGCTTTTGATTGGGA
AAAACAGTGTTAA(SEQ ID NO:47)

[0283] 由SEQ ID NO:47的核酸编码的Gne蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0284] MMMKILISGGAGYIGSHTLRQFLKTDHEICVLDNLSKGSKIAIEDLQKTRAFKFFEQDLSDFQGVKALFEREKFDAIVHFAASIEVFESMQNPLKYYMNNTVNTTNLIETCLQTGVNKFIFSSTAATYGEPQTPVVSETSPLAP
INPYGRSKLMSEEVLRDASMANPEFKHCILRYFNVAGACMDYTLGQRYPKATLLIKVAAECAAGKRDKLFIFGDDY
DTKDGTCIRDFIHVDDISSAHLAALDYLKENESNVFNVGYGHGFSVKEVIEAMKKVSGVDFKVELAPRRAGDPSVL
ISDASKIRNLTSWQPKYDDLELICKSAFDWEKQC(SEQ ID NO:48)。

[0285] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌gne基因(以SEQ ID NO:47提供)。在一些实施方案中，核酸包含gne基因，其中所述gne基因包含与SEQ ID NO:47的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含gne基因，其中所述gne基因包含与SEQ ID NO:47的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0286] 在一些实施方案中，核酸包含编码Gne蛋白的核酸序列，其中所述Gne蛋白包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码Gne蛋白的核酸序列，其中所述Gne蛋白包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0287] pglK-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglK基因(例如，空肠弯曲杆菌pglK基因)的核酸。

[0288] 在一些实施方案中，包含pglK基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglK基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0289] 示例性空肠弯曲杆菌pglK基因的核酸序列提供如下：

[0290] ATGCCTTTTATCACTTTGGCTAGTGATTTTTCTTATTTTGATCGTAATAAATATTTAATCMAGCCTAAAAGAATATCTTAATATCCCTGTTTTTGAAATCATTGTTTATTTTGGAGTGGGGCTTATTGTTTTTTATGTGTTTAG
AGCTTTGTTAAATGCGTATTATTTTCATCTTTTGGCALAGATTTTCTAAAGGGCGTTATCATGCGATCGCTTATAA
GGTTTTTTCTAAATTTTTAAATATTAATTATGAAAAATTTACTCAAAAAAATCAATCTGAAATTTTAAAGTCCATT
ACAGGGIGAAGTTTATAATCTAAGCACTATGATTTCATCATTTTTACTTTTGATGAGTGAAATTTTTGTAGTACTT
TTGCTTTATGCTTTAATGCTTTTGATTAATTATAAAATCACTTTGTTTTTAVAGTATTTTTATGGTGTTAAATGCC
TTTATTTTAGTGAAAATTTTAAGCCCTATCATTAAAAAAGCAGGAGTAAGACGCGAAGAAGCGATGAAAAATTTCT
TTGAAATTTTAAATACAAATKTTAAATAATTTCAAATTTATTAAGCTTAAAACCAAAGAAGATGGAGTATTAAGTC
TTTTTAAAGCGCAAAGTGAAGCTTTTTCTAAAGCAAATATTACCAACGAAAGCGTAGCTGCGGTGKCCTAGAATTT
ATCTTGAAGGAATAGGCTTTTGCGTACTTGTTTTTATCGTGGTATTTTTGGTTTTGAAAAATGAAAGTGATATTTC
AGGTATTTTATCCACGATTTCTATTTTTGTTTTAVGCGCTTTATCGCTTAATGCCAAGTGCAAATCGTATTATTAC
AAGTTATCATGATTTGCTTTATTATCATTCTTCTTTGGATATTATTTATCAAAATTTAAGACAAGAAGAAGAAAAT
TTGYGGCGAGGAAAAATTAAGCTTTAATCAAGAGCTTAAAATTTGCAATCTTAGCTTTGGTTATGAGGGAAAAAAA
TATTTATTTAAAAATCTTAACTTAAATATTAAAAAAGGCGAAAAAATCEGCTTTTATAGGGGAGAGTGGTTGTGGA
AAAAGTACCTTAGTAGATCTTATCATAGGACTTTTAAAACCAAAAGAAGGGCAAATTTTAATTGATGAGCAAGAAT
TAAATGCAAATAATACALAAAAATTATCGCCAAAAAATAGGCTATATCCCGCAAAATATCTATCTTTTTAATGACA
GTATAGCTAAAAATATCACTTTTGGAGATGCGGTTGATGAAGAAAAACTTAATAGGGTTATCIAAACAAGCAAATT
TAGAGCATTTTATAAAAAATTTACCTCAAGGAGTGCAAACAAAAGTGGGCGATGGGGGGAGTAATTTAAGCGGGGG
ACAAAAACAACGCATAGCTATAGCAAGAGCTGTTATATTTAGAGCCTGAAATGTTAGTGCTTGATGAAGCAACTTC
TGCGCTTGATACTCAAAGTGAAGCAAAAATTATGGATGAAATTTATAAAATTTCTAAAGATAAAACCATGATTATT
SATCGCACATCGCCTTTCTACGATAACACAATGTGATAAGGTTTATCGTTTAGAACACGGTAAGCTTAAAGAGGAG
AAATGA(SEQ ID NO:49)

[0291] 由SEQ ID NO:49的核酸编码的PglK蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0292] MPFITLASDFSYFDRNKYLISLKEYLNIPVFEIIVYFGVGLIVFYVFRALLNAYYFHLLARFSKGRYHAIAYKVFSKFLNINYEKFTQKNQSEILKSITGEVYNLSTMISSFLLLMSEIFVVLLLYALMLLINYKITLFLSIFM
VLNAFILVKILSPIIKKAGVRREEAMKNFFEILNTNLNNFKFIKLKTKEDGVLSLFKAQSEAFSKANITNESVAAV
PRIYLEGIGFCVLVFIVVFLVLKNESDISGILSTISIFVLALYRLMPSANRIITSYHDLLYYHSSLDIIYQNLRQE
EENLGEEKLSFNQELKICNLSFGYEGKKYLFKNLNLNIKKGEKIAFIGESGCGKSTLVDLIIGLLKPKEGQILIDE
QELNANNTKNYRQKIGYIPQNIYLFNDSIAKNITFGDAVDEEKLNRVIKQANLEHFIKNLPQGVQTKVGDGGSNLS
GGQKQRIAIARALYLEPEMLVLDEATSALDTQSEAKIMDEIYKISKDKTMIIIAHRLSTITQCDKVYRLEHGKLKE
EK(SEQ ID NO:50)。

[0293] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglK基因(以SEQ ID NO:49提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglK基因，其中pglK基因包含与SEQ ID NO:49的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglK基因，其中pglK基因包含与SEQ ID NO:49的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0294] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglK蛋白的核酸序列，其中所述PglK蛋白包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglK蛋白的核酸序列，其中所述PglK蛋白包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0295] pglH-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglH基因(例如空肠弯曲杆菌pglH基因)的核酸。

[0296] 在一些实施方案中，包含pglH基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglH基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0297] 示例性空肠弯曲杆菌pglH基因的核酸序列提供如下：

[0298] AAAATAAGCTTTATTATCGCAACTTTAAATTCAGGAGGTGCTGAGCGTGCTTTAGTAACCTTAGCTAATGCACTTTGCAAAGAGCATGAAGTAAGTATTATTAAATTTCATGCAGGAGAATCTTTTTATAAGCTTGAAAATGAA
GTTAAAGTTACAAGTTTGGAACAATTTAGATTTGACACGCTTTATCATAAAATCGCAAGTCGTTTTAAGAAATTTT
TTGCTTTAAGAAAGGCTTTGAAAGAAAGTAAGTCTGATGTTTTTATTTCTTTTTTGGATACGACTAATATTGCTTG
TATTGCTGCGAAAATAGGGCTTAAAACTCCACTCATTATAAGTGAGCATAGCAATGAAGCGTATTTAAAACCTAAA
ATTTGGCGTTTTTTAAGAAGGGTAAGCTATCCTTTTTGTGATGCTTTAAGTGTGCTTGGAAGCAGTGATAAGGTGT
ATTATGAAAGATTTGTAAAAAGGGTTAAGCTTTTATTAAACCCTTGTCATTTTAGCGATGAAATTTCTTTTGATTC
TAGTTTTGAAAAGGAAAATTTGGTTCTTTTTATAGGGCGTTTAGATCACAACAAAAACCCTGTAATGTTTTTAAAA
GCTATAGCGCATTTGGATAAAAATTTACAAGAAAATTATAAATTTGTTATAGCAGGAGATGGACAGTTAAGACAAG
AACTTGAATATAAGGTAAAATCTTTAGGAATAAAAGTTGATTTTTTAGGACGCGTTGAAAATGTCAAGGCTCTTTA
TGAAAAAGCAAAAGTGCTTTGCCTTTGTTCTTTTGTAGAGGGTTTGCCAACGGTTTTAATTGAAAGTTTGTATTTT
GAGGTTTGTAGAATTTCAAGTTCTTATTATAATGGTGCTAAGGATTTAATCAAAGATAATCATGATGGGCTTTTGG
TAGGTTGTGATGATGAAATAGCACTTGCTAAAAAACTTGAACTTGTTTTAAATGATGAAAATTTTAGAAAAGAACT
TGTAAATAATGCCAAACAAAGGTGTAAAGACTTTGAAATTTCTCATATCAAAGAAGAATGGCTTAAGCTTATAGCC
GAGGTT(SEQ ID NO:51)

[0299] 由SEQ ID NO:51的核酸编码的PglH蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0300] KISFIIATLNSGGAERALVTLANALCKEHEVSIIKFHAGESFYKLENEVKVTSLEQFRFDTLYHKIASRFKKFFALRKALKESKSDVFISFLDTTNIACIAAKIGLKTPLIISEHSNEAYLKPKIWRFLRRVSYPFCDALSVLG
SSDKVYYERFVKRVKLLLNPCHFSDEISFDSSFEKENLVLFIGRLDHNKNPVMFLKAIAHLDKNLQENYKFVIAGD
GQLRQELEYKVKSLGIKVDFLGRVENVKALYEKAKVLCLCSFVEGLPTVLIESLYFEVCRISSSYYNGAKDLIKDN
HDGLLVGCDDEIALAKKLELVLNDENFRKELVNNAKQRCKDFEISHIKEEWLKLIAEV(SEQ ID NO:52)

[0301] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglH基因(作为SEQ ID NO:51提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglH基因，其中pglH基因包含与SEQ ID NO:51的核酸序列至
少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少
87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglH基因，其中pglH基因包含与SEQ ID NO:51的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0302] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglH蛋白的核酸序列，其中所述PglH蛋白包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglH蛋白的核酸序列，其中所述PglH蛋白包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0303] pglI-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglI基因(例如空肠弯曲杆菌pglI基因)的核酸。

[0304] 在一些实施方案中，包含pglI基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglI基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0305] 示例性空肠弯曲杆菌pglI基因的核酸序列提供如下：

[0306] ATGCCTAAACTTTCTGTTATAGTACCAACTTTTAATCGTCAAGTTTTGTTAGAAAAGGCTATTAAAAGCATACAAAATCAAGATTTTAAAGATTTAGAAATTATTGTAAGCGATGATAATTCTAGCGATGATACTAAAAGTGTG
GTGCAAAATTTACAAAAAGATGATGATCGCATTAAGTATTTTTTAAATCAAAATTACAAACAAGGTCCAAATGGCA
ATAAAAACAATGGCTTAGATCAAGCAAGTGGCGAGTTTGTAACTTTTTTAGATGATGATGATGAGCTTTTATCCGG
GGCTTTAAGTACCTTGATGCAAAAAGCAAATGAGGGTTATGCTCATGTTTTTGGAAATTGTTTGATAGAAAAAGAA
GGAAATTTAAGCAAGGAATTTAGCGGCAAGGGCTTGGAAAAAGATAGTGAAATTTCTAAAAAAGATTTTTTAATGG
CTAAATTTAGCGGAGAGTTTTTTTCTGTTTTTAAAAAATCCCTACTTGAAAATAAGCGTTTTAATGAAGAATTTTA
TGGCAATGAAGCCACGCTTTGGGTAAATTTATACAAAGAAAAAAGTTTTTATATCCATAAGGCTTTTAGGATTTAT
AGAATTTTTAGGCAAGATAGCGTGACTTTAGGGGCGAGTAAAAATGCTTATAGGGTGTATTTGGATATTTAGAGCT
TGCTAAAATTTTAGAAAATGAACTTAGAATGAGTAAGGATAAAGATTATAAAAAAACTTGTGCGAGTTATTATAAA
ATGGCAGCTTATTATGCAAAACTTGCAAAAAATTATAAAGCCCTTTATAAATGTTTGTTTAAAAGCCTAAGTATAA
AAATCAACGCTCCTGCTTTGATATTACTCATTTTAAGTATAATTCCAAATAATATGATTGAAAAATTATCAAAAAT
TCGGGTG(SEQ ID NO:53)

[0307] 由SEQ ID NO:53的核酸编码的PglI蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0308] MPKLSVIVPTFNRQVLLEKAIKSIQNQDFKDLEIIVSDDNSSDDTKSVVQNLQKDDDRIKYFLNQNYKQGPNGNKNNGLDQASGEFVTFLDDDDELLSGALSTLMQKANEGYAHVFGNCLIEKEGNLSKEFSGKGLEKDSEISK
KDFLMAKFSGEFFSVFKKSLLENKRFNEEFYGNEATLWVNLYKEKSFYIHKAFRIYRIFRQDSVTLGASKNAYRVY
LGYLELAKILENELRMSKDKDYKKTCASYYKMAAYYAKLAKNYKALYKCLFKSLSIKINAPALILLILSIIPNNMI
EKLSKIRV(SEQ ID NO:54)

[0309] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglI基因(以SEQ ID NO:53提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglI基因，其中pglI基因包含与SEQ ID NO:53的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglI基因，其中pglI基因包含与SEQ ID NO:53的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0310] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglI蛋白的核酸序列，其中所述PglI蛋白包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglI蛋白的核酸序列，其中所述PglI蛋白包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0311] pglJ-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglJ基因(例如空肠弯曲杆菌pglJ基因)的核酸。

[0312] 在一些实施方案中，包含pglJ基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglJ基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0313] 示例性空肠弯曲杆菌pglJ基因的核酸序列提供如下：

[0314] TTAGGCATTTTTATTTATTCTTTAGGAAGTGGTGGTGCTGAAAGAGTTGTGGCGACTTTATTGCCTATTTTAAGTTTGAAATTTGAAGTGCATTTGATCTTGATGAATGATAAAATTTCTTATGAAATTCCAGAGTGTCAAATT
CATTTTTTAGAATGTTCAAAACCTAGTGAAAATCCTATTTTGAAATTTTTAAAACTACCTTTTTTGGCTTTAAAAT
ACAAAAAACTTTGCAGAAATTTAGGTATTGATACAGAATTTGTTTTTTTAAATCGACCTAATTATATAGCTTTAAT
GGCAAGAATGTTTGGAAACAAAACTCGCCTTGTGATCAATGAATGCACTACGCCAAGTGTGATGTATATGAAAAAT
AATTTTAATTCTTTGGTAAATAAATTTTTAATTTCTTTGCTTTACCCAAAAGCTGATTTAATCTTGCCTAATTCTA
AGGGAAATTTAGAAGATTTAGTGCAAAATTTTAGTATAAGTCCAAAAAAATGTGAAATTTTATACAATGCCATCGA
TTTAGAAAACATAGGGCAAAAAGCCCTTGAAGACATAGCTTTAAAAGATAAATTTATTTTAAGTGTAGGCAGGCTT
GATAAAGGTAAAAATCATGCTTTATTAATTCGTGCTTATGCGAGATTGAAAACAGATTTAAAGCTTGTGATTTTAG
GTGAAGGTGTGCTTAAGGATGAGCTTTTAGCTTTGATTAAAGAATTAAATTTGGAAGAAAAGGTTTTGCTTTTAGG
ATTTGATAATAATCCTTATAAATACATGGCTAAATGCGAATTTTTTGCTTTTGCTTCTGTGTTTGAAGGTTTTTCA
AATGTTTTAATCGAAAGTTTGGCTTGTTCTTGTGCGGTGGTTTGCACTGATCATAAAAGTGGTGCAAGAGAGCTTT
TTGGCGATGATGAATTTGGACTTTTAGTAGAAGTAGATAATGAAAACTCTATGTTTCAGGGTTTAAAAACTATGCT
TGAAGACGATAAATTAAGAAAAGCGTATAAAAACAAAGCTAAAACTAGGGCTAAAGCCTTTGATAAAGTAAAAATT
GCACGCGATGCTTTGAAATATTTATTAGGATAA(SEQ ID NO:55)

[0315] 如下提供由SEQ ID NO:55的核酸编码的PglJ蛋白的氨基酸序列：

[0316] LGIFIYSLGSGGAERVVATLLPILSLKFEVHLILMNDKISYEIPECQIHFLECSKPSENPILKFLKLPFLALKYKKLCRNLGIDTEFVFLNRPNYIALMARMFGNKTRLVINECTTPSVMYMKNNFNSLVNKFLISLLYPKADL
ILPNSKGNLEDLVQNFSISPKKCEILYNAIDLENIGQKALEDIALKDKFILSVGRLDKGKNHALLIRAYARLKTDL
KLVILGEGVLKDELLALIKELNLEEKVLLLGFDNNPYKYMAKCEFFAFASVFEGFSNVLIESLACSCAVVCTDHKS
GARELFGDDEFGLLVEVDNENSMFQGLKTMLEDDKLRKAYKNKAKTRAKAFDKVKIARDALKYLLG(SEQ ID NO:
56)

[0317] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglJ基因(以SEQ ID NO:55提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglJ基因，其中pglJ基因包含与SEQ ID NO:55的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglJ基因，其中pglJ基因包含与SEQ ID NO:55的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0318] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglJ蛋白的核酸序列，其中所述PglJ蛋白包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglJ蛋白的核酸序列，其中所述PglJ蛋白包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0319] pglB-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglB基因(例如空肠弯曲杆菌pglB基因)的核酸。

[0320] 在一些实施方案中，包含pglB基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglB基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0321] 示例性空肠弯曲杆菌pglB基因的核酸序列提供如下：

[0322] ATGTTGAAAAAAGAGTATTTAAAAAACCCTTATTTAGTTTTGTTTGCGATGATTGTATTAGCTTATGTTTTTAGTGTATTTTGCAGGTTTTATTGGGTTTGGTGGGCAAGTGAGTTTAACGAGTATTTTTTCAATAATCAATTA
ATGATCATTTCAAACGATGGCTATGCTTTTGCTGAGGGCGCAAGAGATATGATAGCAGGTTTTCATCAGCCTAATG
ATTTGAGTTATTATGGATCTTCTTTATCTACGCTTACTTATTGGCTTTATAAAATCACACCTTTTTCTTTTGAAAG
TATCATTTTATATATGAGTACTTTTTTATCTTCTTTGGTGGTGATTCCTATTATTTTACTAGCTAATGAATACAAA
CGCCCTTTAATGGGCTTTGTAGCTGCTCTTTTAGCAAGTGTAGCAAACAGTTATTATAATCGCACTATGAGTGGGT
ATTATGATACGGATATGCTGGTAATTGTTTTACCTATGTTTATTTTATTTTTTATGGTAAGAATGATTTTAAAAAA
AGACTTTTTTTCATTGATTGCCTTGCCATTATTTATAGGAATTTATCTTTGGTGGTATCCTTCAAGTTATACTTTA
AATGTAGCTTTAATTGGACTTTTTTTAATTTATACACTTATTTTTCATAGAAAAGAAAAGATTTTTTATATAGCTG
TGATTTTGTCTTCTCTTACTCTTTCAAATATAGCATGGTTTTATCAAAGTGCCATTATAGTAATACTTTTTGCTTT
ATTTGCTTTAGAGCAAAAACGCTTAAATTTTATGATTATAGGAATTTTAGGTAGTGCAACTTTGATATTTTTGATT
TTAAGTGGTGGGGTTGATCCCATACTTTATCAGCTTAAATTTTATATTTTTAGAAGCGATGAAAGTGCGAATTTAA
CACAGGGCTTTATGTATTTTAATGTTAATCAAACCATACAAGAAGTTGAAAATGTAGATTTTAGCGAATTTATGCG
AAGAATTAGTGGTAGTGAAATTGTTTTCTTGTTTTCTTTGTTTGGTTTTGTATGGCTTTTGAGAAAACATAAAAGT
ATGATTATGGCTTTACCTATATTGGTGCTTGGGTTTTTAGCCTTAAAAGGAGGACTTAGATTTACCATTTATTCTG
TACCTGTAATGGCTTTAGGATTTGGTTTTTTATTGAGCGAGTTTAAGGCTATATTGGTTAAAAAATATAGCCAATT
AACTTCAAATGTTTGTATTGTTTTTGCAACTATTTTGACTTTGGCTCCAGTATTTATCCATATTTACAACTATAAA
GCGCCAACAGTTTTTTCTCAAAATGAAGCATCATTATTAAATCAATTAAAAAATATAGCCAATAGAGAAGATTATG
TGGTAACTTGGTGGGATTATGGTTATCCTGTGCGTTATTATAGCGATGTGAAAACTTTAGTAGATGGTGGAAAGCA
TTTAGGTAAGGATAATTTTTTCCCTTCTTTTTCTTTAAGTAAAGATGAACAAGCTGCAGCTAATATGGCAAGACTT
AGTGTAGAATATACAGAAAAAAGCTTTTATGCTCCGCAAAATGATATTTTAAAATCAGACATTTTACAAGCCATGA
TGAAAGATTATAATCAAAGCAATGTGGATTTATTTCTAGCTTCATTATCAAAACCTGATTTTAAAATCGATACACC
AAAAACTCGTGATATTTATCTTTATATGCCCGCTAGAATGTCTTTGATTTTTTCTACGGTGGCTAGTTTTTCTTTT
ATTAATTTAGATACAGGAGTTTTGGATAAACCTTTTACCTTTAGCACAGCTTATCCACTTGATGTTAAAAATGGAG
AAATTTATCTTAGCAACGGAGTGGTTTTAAGCGATGATTTTAGAAGTTTTAAAATAGGTGATAATGTGGTTTCTGT
AAATAGTATCGTAGAGATTAATTCTATTAAACAAGGTGAATACAAAATCACTCCAATCGATGATAAGGCTCAGTTT
TATATTTTTTATTTAAAGGATAGTGCTATTCCTTACGCACAATTTATTTTAATGGATAAAACCATGTTTAATAGTG
CTTATGTGCAAATGTTTTTTTTGGGAAATTATGATAAGAATTTATTTGACTTGGTGATTAATTCTAGAGATGCTAA
AGTTTTTAAACTTAAAATTTAA(SEQ ID NO:57)

[0323] 由SEQ ID NO:57的核酸编码的PgIB蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0324] MLKKEYLKNPYLVLFAMIVLAYVFSVFCRFYWVWWASEFNEYFFNNQLMIISNDGYAFAEGARDMIAGFHQPNDLSYYGSSLSTLTYWLYKITPFSFESIILYMSTFLSSLVVIPIILLANEYKRPLMGFVAALLASVANSYYN
RTMSGYYDTDMLVIVLPMFILFFMVRMILKKDFFSLIALPLFIGIYLWWYPSSYTLNVALIGLFLIYTLIFHRKEK
IFYIAVILSSLTLSNIAWFYQSAIIVILFALFALEQKRLNFMIIGILGSATLIFLILSGGVDPILYQLKFYIFRSD
ESANLTQGFMYFNVNQTIQEVENVDFSEFMRRISGSEIVFLFSLFGFVWLLRKHKSMIMALPILVLGFLALKGGLR
FTIYSVPVMALGFGFLLSEFKAILVKKYSQLTSNVCIVFATILTLAPVFIHIYNYKAPTVFSQNEASLLNQLKNIA
NREDYVVTWWDYGYPVRYYSDVKTLVDGGKHLGKDNFFPSFSLSKDEQAANMARLSVEYTEKSFYAPQNDILKSDI
LQAMMKDYNQSNVDLFLASLSKPDFKIDTPKTRDIYLYMPARMSLIFSTVASFSFINLDTGVLDKPFTFSTAYPLD
VKNGEIYLSNGVVLSDDFRSFKIGDNVVSVNSIVEINSIKQGEYKITPIDDKAQFYIFYLKDSAIPYAQFILMDKT
MFNSAYVQMFFLGNYDKNLFDLVINSRDAKVFKLKI(SEQ ID NO:58)

[0325] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglB基因(作为SEQ ID NO:57提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglB基因，其中pglB基因包含与SEQ ID NO:57的核酸序列至
少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少
87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglB基因，其中pglB基因包含与SEQ ID NO:57的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0326] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglB蛋白的核酸序列，其中所述PglB蛋白包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglB蛋白的核酸序列，其中所述PglB蛋白包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0327] pglA-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglA基因(例如空肠弯曲杆菌pglA基因)的核酸。

[0328] 在一些实施方案中，包含pglA基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglA基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0329] 示例性空肠弯曲杆菌pglA基因的核酸序列提供如下：

[0330] ATGAGAATAGGATTTTTATCACATGCAGGAGCGAGTATTTATCATTTTAGAATGCCTATTATAAAAGCGTTAAAAGATAGAAAAGACGAAGTTTTTGTTATAGTGCCGCAAGATGAATACACGCAAAAACTTAGAGATCTTGGC
TTAAAAGTAATTGTTTATGAGTTTTCAAGAGCTAGTTTAAATCCTTTTGTGGTTTTAAAGAATTTTTTTTATCTTG
CTAAGGTTTTGAAAAATTTAAATCTTGATTTTATTCAAAGTGCGGCACACAAAAGCAATACTTTTGGAATTTTAGC
AGCAAAATGGGCAAAAATTCCTTATCGTTTTGCCTTAGTAGAAGGCTTGGGATCTTTTTATATAGATCAAGGTTTT
AAGGCAAATTTAGTGCGTTTTGTTATTAATAGTCTTTATAAATTAAGTTTTAAATTTGCACACCAATTTATTTTTG
TCAATGAAAGTAATGCTGAGTTTATGCGGAATTTAGGACTTAAAGAAAATAAAATTTGCGTGATAAAATCTGTAGG
GATCAATTTAAAAAAATTTTTTCCTATTTATGTAGAATCGGAAAAAAAAGAGCTTTTTTGGAAAAATTTAAACATA
GATAAAAAACCCATTGTGCTTATGATAGCAAGAGCTTTATGGCATAAGGGTGTAAAAGAATTTTATGAAAGTGCTA
CTATGCTAAAAGACAAAGCAAATTTTGTTTTAGTTGGTGGAAGAGATGAAAATCCTTCTTGTGCAAGTTTGGAGTT
TTTAAACTCTGGCGCGGTGCATTATTTGGGTGCTAGAAGTGATATAGTCGAGCTTTTGCAAAATTGTGATATTTTT
GTTTTGCCAAGCTATAAAGAAGGCTTTCCTGTAAGTGTTTTGGAGGCAAAAGCTTGCGGTAAGGCTATAGTGGTGA
GTGATTGTGAAGGTTGTGTGGAGGCTATTTCTAATGCTTATGATGGACTTTGGGCAAAAACAAAAAATGCTAAAGA
TTTAAGCGAAAAAATTTCACTTTTATTAGAAGATGAAAAATTAAGATTAAATTTAGCTAAAAATGCCGCCCAAGAT
GCTTTACAATACGATGAAAATATAATCGCACAGCGTTATTTAAAACTTTATGATAGGGTAATTAAGAATGTA(SEQ 
ID NO:59)

[0331] 由SEQ ID NO:59的核酸编码的PglA蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0332] MRIGFLSHAGASIYHFRMPIIKALKDRKDEVFVIVPQDEYTQKLRDLGLKVIVYEFSRASLNPFVVLKNFFYLAKVLKNLNLDFIQSAAHKSNTFGILAAKWAKIPYRFALVEGLGSFYIDQGFKANLVRFVINSLYKLSFKFA
HQFIFVNESNAEFMRNLGLKENKICVIKSVGINLKKFFPIYVESEKKELFWKNLNIDKKPIVLMIARALWHKGVKE
FYESATMLKDKANFVLVGGRDENPSCASLEFLNSGAVHYLGARSDIVELLQNCDIFVLPSYKEGFPVSVLEAKACG
KAIVVSDCEGCVEAISNAYDGLWAKTKNAKDLSEKISLLLEDEKLRLNLAKNAAQDALQYDENIIAQRYLKLYDRV
IKNV(SEQ ID NO:60)

[0333] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglA基因(以SEQ ID NO:59提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglA基因，其中pglA基因包含与SEQ ID NO:59的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglA基因，其中pglA基因包含与SEQ ID NO:59的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0334] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglA蛋白的核酸序列，其中所述PglA蛋白包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglA蛋白的核酸序列，其中所述PglA蛋白包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0335] pglC-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglC基因(例如空肠弯曲杆菌pglC基因)的核酸。

[0336] 在一些实施方案中，包含pglC基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglC基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0337] 示例性空肠弯曲杆菌pglC基因的核酸序列提供如下：

[0338] GAAAAAGTTTTTAAAAGAATTTTTGATTTTATTTTATCTTTAGTGCTTTTAGTGCTTTTTTCTCCGGTGATTTTAATCACTGCTTTACTTTTAAAAATCACTCAAGGAAGTGTGATTTTTACCCAAAATCGTCCCGGGTTAGAT
GAAAAAATTTTTAAAATTTATAAATTTAAAACCATGAGCGATGAAAGAGATGAAAAGGGTGAGTTATTAAGCGATG
AATTGCGTTTGAAAGCTTTTGGAAAAATCGTTAGAAGCTTAAGTTTGGATGAGCTTTTGCAACTTTTTAATGTTTT
AAAAGGGGATATGAGTTTTGTTGGACCTAGACCTCTTTTGGTTGAGTATTTGCCTCTTTACAATAAAGAGCAAAAA
TTGCGTCATAAAGTGCGTCCAGGTATAACAGGATGGGCGCAGGTAAATGGTAGAAATGCTATTTCTTGGCAGAAAA
AATTCGAACTTGATGTGTATTATGTGAAAAATATTTCTTTTTTGCTTGATTTAAAAATCATGTTTTTAACAGCTTT
AAAGGTTTTAAAACGAAGTGGGGTAAGCAAAGAAGGCCATGTTACAACAGAGAAATTTAATGGCAAGAACTGA(SEQ 
ID NO:61)

[0339] 由SEQ ID NO:61的核酸编码的PglC蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0340] EKVFKRIFDFILSLVLLVLFSPVILITALLLKITQGSVIFTQNRPGLDEKIFKIYKFKTMSDERDEKGELLSDELRLKAFGKIVRSLSLDELLQLFNVLKGDMSFVGPRPLLVEYLPLYNKEQKLRHKVRPGITGWAQVNGRNA
ISWQKKFELDVYYVKNISFLLDLKIMFLTALKVLKRSGVSKEGHVTTEKFNGKN(SEQ ID NO:62)

[0341] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglC基因(作为SEQ ID NO:61提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglC基因，其中pglC基因包含与SEQ ID NO:61的核酸序列至
少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少
87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglC基因，其中pglC基因包含与SEQ ID NO:61的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0342] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglC蛋白的核酸序列，其中所述PglC蛋白包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglC蛋白的核酸序列，其中所述PglC蛋白包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0343] pgID-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglD基因(例如空肠弯曲杆菌pglD基因)的核酸。

[0344] 在一些实施方案中，包含pglD基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglD基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0345] 示例性空肠弯曲杆菌pglD基因的核酸序列提供如下：

[0346] ATGGCAAGAACTGAAAAAATTTATATTTATGGTGCTAGTGGTCATGGGCTTGTTTGTGAAGATGTGGCTAAAAATATGGGTTATAAAGAATGTATTTTTTTAGATGATTTTAAAGGAATGAAATTTGAAAGTACCTTACCTAAA
TATGATTTTTTTATAGCCATAGGAAACAATGAAATTCGAAAAAAGATTTATCAAAAAATTTCAGAAAATGGCTTTA
AAATTGTCAATCTTATCCATAAAAGCGCGCTTATAAGTCCTAGCGCAATCGTGGAAGAAAATGCAGGAATTTTAAT
CATGCCTTATGTAGTGATTAACGCTAAAGCTAAAATAGAAAAAGGTGTGATTTTAAATACTTCAAGCGTAATTGAG
CATGAATGTGTGATAGGGGAATTTTCTCATGTGAGTGTGGGAGCTAAATGTGCGGGTAATGTAAAAATTGGTAAAA
ATTGTTTTTTAGGGATTAATTCTTGTGTTTTGCCTAATTTAAGTTTGGCAGATGATAGTATTTTAGGTGGTGGAGC
AACTTTAGTTAAAAATCAAGATGAAAAAGGTGTTTTTGTGGGAGTACCTGCAAAAAGGATGTAA(SEQ ID NO:
63)

[0347] 由SEQ ID NO:63的核酸编码的PglD蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0348] MARTEKIYIYGASGHGLVCEDVAKNMGYKECIFLDDFKGMKFESTLPKYDFFIAIGNNEIRKKIYQKISENGFKIVNLIHKSALISPSAIVEENAGILIMPYVVINAKAKIEKGVILNTSSVIEHECVIGEFSHVSVGAKCAGN
VKIGKNCFLGINSCVLPNLSLADDSILGGGATLVKNQDEKGVFVGVPAKRM(SEQ ID NO:64)

[0349] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglD基因(以SEQ ID NO:63提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglD基因，其中pglD基因包含与SEQ ID NO:63的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglD基因，其中pglD基因包含与SEQ ID NO:63的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0350] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglD蛋白的核酸序列，其中所述PglD蛋白包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglD蛋白的核酸序列，其中所述PglD蛋白包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0351] pglE-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglE基因(例如空肠弯曲杆菌pglE基因)的核酸。

[0352] 在一些实施方案中，包含pglE基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglE基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0353] 示例性空肠弯曲杆菌pglE基因的核酸序列提供如下：

[0354] ATGAGATTTTTTCTTTCTCCTCCGCATATGGGTGGTAATGAATTAAAATACATAGAAGAAGTTTTCAAAAGCAATTATATAGCACCTTTGGGTGAATTTGTAAATCGCTTTGAACAAAGTGTCAAGGCTTACAGTAAAAGTGAA
AATGCCTTAGCTTTAAATTCAGCCACAGCGGCTTTGCATTTAGCTTTAAGGGTGGCAGGGGTAAAACAAGATGATA
TTGTTTTGGCTTCTTCTTTTACTTTTATCGCTTCAGTAGCACCTATTTGTTATCTTAAAGCAAAACCTGTATTTAT
AGATTGTGATGAAACTTATAATATCGATGTAGATTTATTAAAGCTTGCTATTAAAGAATGTGAAAAAAAACCAAAA
GCATTGATTTTAACTCATCTTTATGGCAATGCGGCTAAAATGGATGAAATTGTTGAAATTTGCAAAGAAAATGAAA
TTGTTTTAATCGAAGATGCTGCTGAAGCTTTAGGAAGTTTTTATAAGAATAAAGCTTTAGGAACTTTTGGAGAATT
TGGAGCTTATTCTTATAATGGCAATAAAATTATCACCACTTCAGGTGGAGGTATGCTTATAGGAAAAAATAAAGAA
AAGATTGAAAAAGCAAGATTTTATAGCACTCAAGCTAGGGAAAATTGTTTGCATTATGAACATTTAGATTATGGTT
ATAATTACCGCTTAAGCAATGTTTTAGGAGCTATTGGCGTAGCGCAAATGGAGGTTTTAGAACAAAGAGTGCTTAA
AAAAAGAGAAATTTATGAGTGGTATAAAGAATTTTTAGGAGAGTGTTTTAGCTTTTTAGATGAATTAGAAAATTCA
AGAAGCAATCGCTGGTTAAGTACAGCTTTGATTGATTTTGATAAAAATGAACTTAATTCTTGTCAAAAAGATATAA
ATATCAGTCAAAAAAATATTACTTTGCATCCAAAAATTTCAAAACTCATAGAAGATTTGAAAAATGAACAAATAGA
AACAAGACCATTATGGAAAGCTATGCACGCTCAAGAAGTATTTAAAGGAGCTAAGGCTTATCTTAATGGCAATAGT
GAGTTATTTTTCCAAAAAGGAATTTGTTTGCCAAGTGGCACGGCGATGAGTAAAGATGATGTTTATGAAATTTCAA
AACTGATCTTAAAGAGCATAAAGGCTTAA(SEQ ID NO:65)

[0355] 由SEQ ID NO:65的核酸编码的PglE蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0356] MRFFLSPPHMGGNELKYIEEVFKSNYIAPLGEFVNRFEQSVKAYSKSENALALNSATAALHLALRVAGVKQDDIVLASSFTFIASVAPICYLKAKPVFIDCDETYNIDVDLLKLAIKECEKKPKALILTHLYGNAAKMDEIVEI
CKENEIVLIEDAAEALGSFYKNKALGTFGEFGAYSYNGNKIITTSGGGMLIGKNKEKIEKARFYSTQARENCLHYE
HLDYGYNYRLSNVLGAIGVAQMEVLEQRVLKKREIYEWYKEFLGECFSFLDELENSRSNRWLSTALIDFDKNELNS
CQKDINISQKNITLHPKISKLIEDLKNEQIETRPLWKAMHAQEVFKGAKAYLNGNSELFFQKGICLPSGTAMSKDD
VYEISKLILKSIKA(SEQ IDNO:66)

[0357] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglE基因(以SEQ ID NO:65提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglE基因，其中pglE基因包含与SEQ ID NO:65的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglE基因，其中pglE基因包含与SEQ ID NO:65的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0358] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglE蛋白的核酸序列，其中所述PglE蛋白包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglE蛋白的核酸序列，其中所述PglE蛋白包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0359] pgIF-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglF基因(例如空肠弯曲杆菌pglF基因)的核酸。

[0360] 在一些实施方案中，包含pglF基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglF基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0361] 示例性空肠弯曲杆菌pglF基因的核酸序列提供如下：

[0362] ATGATTTTTTATAAAAGCAAAAGATTAGCATTTTTTTTAACTTCAGATATTGTTTTAATTTTACTTAGCGTTTATCTGGCTTTTTCTTTGAGATTTAGTGGAGATATTCCGAGTATTTTTTATCATGGTATGATGGTTTCTGCT
ATTATTTTGCTTGTTTTAAAACTTTCATTTTTGTTTGTTTTTAGAATTTATAAAGTAGCTTGGAGATTTTTTTCTC
TCAATGAAGCAAGAAAGATTTTTATCGCTTTGCTTTTAGCTGAGTTTTGTTTTTTTCTTATTTTTTATTTTTTTAG
TGATTTTTTTAATCCTTTTCCAAGAAGTGCTATTGTGATAGATTTTGTTCTTTCTTATATGTTTATAGGTACTTTA
AGAATTAGCAAAAGAATGCTTGTGGATTTTAAACCTTCTAGAATGAAAGAAGAAGAAACTCCTTGTATTGTAGTAG
GGGCAACTTCTAAGGCTTTGCATTTGTTAAAAGGTGCAAAAGAAGGTTCTTTAGGGCTTTTTCCTGTAGGCGTAGT
TGATGCGAGAAAAGAGCTTATAGGGACTTATTGTGATAAATTTATTGTAGAAGAAAAAGAAAAAATAAAATCTTAT
GTAGAACAAGGGGTAAAAACTGCCATTATTGCTTTAAGACTTGAACAAGAAGAGCTTAAAAAACTTTTTGAAGAAC
TTGTAGCTTATGGTATTTGCGATGTAAAAATATTTTCTTTTACAAGAAACGAAGCAAGAGATATCAGTATAGAAGA
CTTGCTTGCTAGAAAACCAAAAGATTTAGATGATAGTGCTGTGGCGGCTTTTTTAAAAGATAAGGTAGTTTTGGTA
AGTGGAGCAGGTGGAACTATAGGCAGTGAACTTTGTAAGCAATGTATTAAATTTGGTGCTAAGCATCTTATCATGG
TTGATCATAGTGAGTATAATCTTTATAAGATCAATGATGATTTAAATTTATATAAAGAAAAAATTACTCCTATTTT
ACTGAGTATTTTAGATAAGCAAAGTTTAGATGAGGTATTAAAAACTTATAAACCCGAGCTTATTTTACATGCAGCC
GCTTATAAACATGTGCCTCTTTGCGAACAAAATCCACATTCAGCAGTAATCAATAATATTTTAGGAACTAAAATTT
TATGCGACAGTGCTAAAGAAAACAAAGTAGCTAAATTTGTGATGATAAGTACAGATAAAGCAGTACGACCAACAAA
TATTATGGGTTGCACTAAGAGAGTTTGCGAGCTTTATACTTTAAGTATGAGTGATGAAAATTTTGAAGTTGCTTGT
GTGCGTTTTGGTAATGTTTTAGGTTCTAGTGGTAGTGTGATACCGAAATTTAAAGCACAAATTGCCAATAATGAGC
CTTTAACTTTAACGCACCCTGATATAGTGCGTTATTTTATGCTTGTGGCTGAGGCAGTGCAACTTGTTTTACAAGC
TGGAGCTATCGCAAAAGGGGGAGAACTTTTTGTTTTGGATATGGGTAAGCCTGTGAAAATCATAGATTTAGCTAAA
AAAATGCTTTTACTTTCTAATCGCAATGATTTAGAAATTAAAATCACAGGCTTAAGAAAAGGTGAGAAGCTTTATG
AAGAGCTTTTGATTGATGAAAATGATGCTAAAACACAATATGAGAGTATTTTTGTAGCAAAGAATGAGAAGGTTGA
TCTTGATTGGCTTAATAAAGAGATAGAAAATTTACAAATATGTGAAGATATTTCAGAGGCTTTATTAAAGATTGTA
CCTGAATTTAAACACAATAAAGAAGGTGTA(SEQ ID NO:67)

[0363] 由SEQ ID NO:67的核酸编码的PglF蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0364] MIFYKSKRLAFFLTSDIVLILLSVYLAFSLRFSGDIPSIFYHGMMVSAIILLVLKLSFLFVFRIYKVAWRFFSLNEARKIFIALLLAEFCFFLIFYFFSDFFNPFPRSAIVIDFVLSYMFIGTLRISKRMLVDFKPSRMKEEET
PCIVVGATSKALHLLKGAKEGSLGLFPVGVVDARKELIGTYCDKFIVEEKEKIKSYVEQGVKTAIIALRLEQEELK
KLFEELVAYGICDVKIFSFTRNEARDISIEDLLARKPKDLDDSAVAAFLKDKVVLVSGAGGTIGSELCKQCIKFGA
KHLIMVDHSEYNLYKINDDLNLYKEKITPILLSILDKQSLDEVLKTYKPELILHAAAYKHVPLCEQNPHSAVINNI
LGTKILCDSAKENKVAKFVMISTDKAVRPTNIMGCTKRVCELYTLSMSDENFEVACVRFGNVLGSSGSVIPKFKAQ
IANNEPLTLTHPDIVRYFMLVAEAVQLVLQAGAIAKGGELFVLDMGKPVKIIDLAKKMLLLSNRNDLEIKITGLRK
GEKLYEELLIDENDAKTQYESIFVAKNEKVDLDWLNKEIENLQICEDISEALLKIVPEFKHNKEGV(SEQ ID NO:
68)。

[0365] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglF基因(以SEQ ID NO:67提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglF基因，其中pglF基因包含与SEQ ID NO:67的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglF基因，其中pglF基因包含与SEQ ID NO:67的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0366] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglF蛋白的核酸序列，其中所述PglF蛋白包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglF蛋白的核酸序列，其中所述PglF蛋白包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0367] pglG-在一些实施方案中，重组细菌包含含有pglG基因(例如空肠弯曲杆菌pglG基因)的核酸。

[0368] 在一些实施方案中，包含pglG基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含pglG基因的核酸位于细菌的染色体上。

[0369] 示例性空肠弯曲杆菌pglG基因的核酸序列提供如下：

[0370] ATGTATATAAAAGATATACAAAGATTTGAAGATAATCGCTATCGTGCTAGAGCTTATATGAGTTATATTTTAACAAGAAATCTGCCCAATAAACTTCCTGATATTCACCTTGAAACGATTAAAACAGCTTTGGATAAAATAGCT
CATGAAGTTGTTGTTTTTGATGCTTTGTATATTTTAGATATTTCAGGCATGCAAATAGAAAATGCGATTTCCTTAA
ATAAAGCTCATGAAATAGGGCAGGGTGAGGATAGAAGTACTCGTTCTTATTTTTATAGAGCTGTAAAATTAAGACG
ATGTGTTTTGAGCGATCCTTATCCTTCGGTTTTAAATAATGAGCTTTGCGTGACAGCTTCTATGCCAATTTACGAT
GATAAAAATAACTTGCTTTTTGTTGTTTGTATTGATATCAAGCTTGAAGATATTTTAAAGATTATTCAAGCAGGAA
AATTTGAATTTGTTTTTACTCAGTTTAGTCGTTTGGTATATTTTTGCTTCGCACTGGTTTTATTTGTGATTACTTG
TTTTTTATTTCAAAAAGGTTTTTTTAGTCTTTTTGATAATCAAGCTATAGGTATAGAACATATGTTTGAAAGTACC
ATCGCTATAACTTTGGCTTTAGCTATTTTTGATTTGGCAAAAACTTTGATCGAACAAGAAGTATTAGGAAGGACGA
AAAAAGAAGAAGGTGGAATTCAAAAAACTATGGTGAGATTTTTGGGTTCTATTATCATTGCTTTAGCTATAGAAGC
TTTGATGTTGGTATTTAAACTTGCTATTGGTGATCTTTCTCAGATGATTTATGCGATTTATCTTATCGGTGGAGTG
AGCTTGCTTCTTTTAGGTTTAAGTGTATATTTATTTACGGTTAAGTATAAAAATAATAATATTTGA(SEQ ID NO:
69)

[0371] 由SEQ ID NO:69的核酸编码的PglG蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0372] MYIKDIQRFEDNRYRARAYMSYILTRNLPNKLPDIHLETIKTALDKIAHEVVVFDALYILDISGMQIENAISLNKAHEIGQGEDRSTRSYFYRAVKLRRCVLSDPYPSVLNNELCVTASMPIYDDKNNLLFVVCIDIKLEDILK
IIQAGKFEFVFTQFSRLVYFCFALVLFVITCFLFQKGFFSLFDNQAIGIEHMFESTIAITLALAIFDLAKTLIEQE
VLGRTKKEEGGIQKTMVRFLGSIIIALAIEALMLVFKLAIGDLSQMIYAIYLIGGVSLLLLGLSVYLFTVKYKNNNI
(SEQ ID NO:70)

[0373] 在一些实施方案中，核酸包含空肠弯曲杆菌pglG基因(以SEQ ID NO:69提供)。在一些实施方案中，核酸包含pglG基因，其中pglG基因包含与SEQ ID NO:69的核酸序列至少
75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，核酸包含pglG基因，其中pglG基因包含与SEQ ID NO:69的核酸序列至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0374] 在一些实施方案中，核酸包含编码PglG蛋白的核酸序列，其中所述PglG蛋白包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码PglG蛋白的核酸序列，其中所述PglG蛋白包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0375] C.减毒

[0376] 在一些实施方案中，本文所述的重组细菌经修饰以使得一种或多种基因的表达可以以糖响应方式调控。在一些实施方案中，一种或多种内源基因，例如毒力基因，从细菌染色体删除。在一些实施方案中，缺失是内源基因的部分缺失。在一些实施方案中，缺失是内源基因的全长缺失。在一些实施方案中，对基因进行遗传改变以防止编码蛋白质的基因的
转录和/或翻译。在一些实施方案中，内源基因遗传改变以在基因的开放阅读框中插入转录终止子。在一些实施方案中，对基因(例如毒力基因)的调控区进行遗传修饰以改变(例如，降低)基因的表达。在一些实施方案中，基因(例如毒力基因)的启动子被改变为包含一个或多个调控元件(例如，糖响应性启动子)。

[0377] 在一些实施方案中，本文所述的重组细菌经修饰以包含含有基因的核酸。在一些实施方案中，重组细菌经修饰以包含含有基因的核酸，由此细菌染色体中基因的内源拷贝
被改变和/或删除。在一些实施方案中，核酸包含与细菌染色体中已经删除和/或改变的内
源基因至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的基因。在一些实施方案中，核酸包含与细菌染色体中已经删除和/或改变的内源基因至少75％、至少80％、至少
81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少
98％、至少99％或100％同源的基因。在一些实施方案中，核酸包含来自不同于所述重组细菌的细菌种的细菌种、亚种、血清型或菌株的基因。

[0378] 在一些实施方案中，核酸包含来自与所述重组细菌的细菌种相同的细菌种、亚种、血清型或菌株的基因。在一些实施方案中，核酸包含与可调控的启动子(例如，糖调控启动子)可操作地连接的基因。在一些实施方案中，核酸包含与鼠李糖调控启动子、木糖调控启动子、半乳糖调控启动子、阿拉伯糖调控启动子、鼠李糖调控启动子、甘露糖调控启动子或麦芽糖调控的启动子可操作地连接的基因。在一些实施方案中，包含基因的核酸位于细菌中的质粒中。在一些实施方案中，包含基因的核酸位于细菌染色体中。在一些实施方案中，包含基因的核酸位于与细菌染色体中删除或改变的内源基因的基因座对应的染色体基因
座处。在一些实施方案中，核酸经密码子优化(例如，以改善重组细菌中核酸的表达)。

[0379] GTP焦磷酸激酶基因

[0380] 在一些实施方案中，重组细菌包含编码GTP焦磷酸激酶RelA的内源性relA基因的缺失。在重组细菌中包含relA缺失使生长依赖性裂解的发生与对持续蛋白质合成的需要解
耦。在一些实施方案中，内源性relA基因的缺失是部分缺失。在一些实施方案中，内源性
relA基因的缺失是全长缺失。

[0381] 其它减毒方法

[0382] 其它减毒方法在本领域中是已知的。例如，可以通过改变(例如，删除)在野生型细菌中发现的天然核酸序列来实现减毒。例如，如果细菌是沙门氏菌，可用于减毒的核酸序列的非限制性实例包括：pab核酸序列、pur核酸序列、aro核酸序列、asd、dap核酸序列、nadA、pncB、galE、pmi、fur、rpsL、ompR、htrA、hemA、cdt、cya、crp、dam、phoP、phoQ、rfc、poxA、galU、mviA、sodC、recA、ssrA、sirA、inv、hilA、rpoE、flgM、tonB、slyA及其任何组合。示例性减毒突变可以是aroA、aroC、aroD、cdt、cya、crp、phoP、phoQ、ompR、galE和htrA。

[0383] 在某些实施方案中，可以将上述核酸序列置于糖调控启动子的控制下，其中糖在重组细菌的体外生长期间存在，但在动物或人宿主内基本上不存在。上面列出的核酸序列
的转录停止随后导致减毒和重组细菌诱导疾病症状的失能。

[0384] D.另外的突变

[0385] 在一些实施方案中，重组细菌在编码DNA复制和修复蛋白RecF的内源recF基因中包含缺失。在一些实施方案中，内源recF基因的缺失是部分缺失。在一些实施方案中，内源recF基因的缺失是全长缺失。在一些实施方案中，内源recF基因经遗传改变以在基因的开
放阅读框中插入转录终止子。

[0386] 在一些实施方案中，重组细菌在编码外切核酸酶RecJ的内源recJ基因中包含缺失。在一些实施方案中，内源recJ基因的缺失是部分缺失。在一些实施方案中，内源recJ基因的缺失是全长缺失。在一些实施方案中，内源recJ基因经遗传改变以在基因的开放阅读
框中插入转录终止子。

[0387] 还可以修饰细菌以产生平衡致死宿主-载体系统，尽管也可以使用其它类型的系统(例如，产生互补杂合子)。对于平衡-致死宿主-载体系统，细菌可以通过操纵其合成其细胞壁的刚性肽聚糖层合成所需的各种必需成分的能力来修饰。在一个实例中，该成分是二
氨基庚二酸(DAP)(参见，例如，第5,672,345；5,840,482；和6,872,547号美国专利，其全部内容通过引用明确并入本文)。各种酶参与DAP的最终合成。

[0388] 在一些实施方案中，重组细菌包含内源性asd基因的缺失。在一些实施方案中，内源性asd基因的缺失是部分缺失。在一些实施方案中，内源性asd基因的缺失是全长缺失。在一些实施方案中，内源性asd基因经遗传改变以在基因的开放阅读框中插入转录终止子。在一些实施方案中，内源性asd基因的启动子被改变以包含一个或多个调控元件(例如，糖响
应性启动子)。在一个实例中，细菌通过使用ΔasdA突变来修饰以消除细菌产生β-天冬氨酸半醛脱氢酶的能力，所述β-天冬氨酸半醛脱氢酶是DAP合成所必需的酶。导致消除DAP合成的其它突变包括但不限于dapA、dapB、dapC、dapD、dapE、dapF和asd(参见，例如，美国专利号
6,872,547，通过引用并入本文)。可以采用的其它修饰包括对细菌合成D-丙氨酸或合成D-
谷氨酸的能力的修饰(例如，ΔmurI突变)，这两者都是细菌细胞壁的肽聚糖层的独特成分。

[0389] 类似地，各种实施方案可包含插入编码天冬氨酸半醛脱氢酶的asd核酸序列中的araC ParaBAD c2基因盒。由于araC核酸序列在可能导致相邻核酸序列表达受干扰并不利地影响疫苗菌株性能的方向上转录，因此转录终止(TT)序列通常插入到araC核酸序列的3'
侧。染色体asd核酸序列通常失活以使得能够在平衡致死宿主-载体系统中使用编码野生型
asd核酸序列的质粒载体。这允许在不存在活菌疫苗中不允许的任何抗药物抗性属性的情
况下质粒在体内稳定维持。在这些实施方案的一些中，野生型asd核酸序列可以由本文描述的载体编码。该载体使得能够通过阻抑型启动子调控抗原编码序列的表达。

[0390] 调控的体内延迟裂解

[0391] 在一些实施方案中，重组细菌可以包含缺失和/或缺失-插入突变以利于调控的体内延迟裂解，这防止细菌的体内持久性和(如果排泄)存活(表3)。这些染色体突变可包括：
Δ(wza-wcaM)、ΔPmurA::TT araC PBAD murA和ΔasdA::TT araC PBAD c2。Δ(wza-wcaM)消除了合成几种促进生物膜形成的表多糖及合成用于荚膜异多糖酸(colonic acid)合成所
需的GDP-岩藻糖所需的20种酶(194)，这可以保护细胞免于发生来自裂解的无细胞壁死亡
(195)。ΔPmurA::TT araC PBAD murA依赖于生长培养基中阿拉伯糖的存在进行MurA(它是胞壁酸合成中的第一种酶)的合成，并且由于缺乏阿拉伯糖而在体内停止合成(142)(118)。由于体内细胞分裂，MurA降低而最终导致细胞裂解和死亡(166)(191)。murA缺陷由MurA+质粒载体补偿(142)(118)。关于ΔasdA::TT araC PBAD c2突变，Asd酶对于肽聚糖合成所需的二氨基庚二酸的合成是必需的(167)(192)。C2阻遏物的阿拉伯糖依赖性合成使得能够调控在
C2阻抑的启动子的控制下的DNA序列的延迟表达(142)(118)。ΔasdA突变由Asd+质粒载体
补偿(157)(193)。

[0392] 后两种突变通常由具有asdA和murA基因的阿拉伯糖依赖性表达的调控的延迟裂解质粒载体补偿。包含此类突变的重组细菌通常在阿拉伯糖存在下生长。然而在体内，细菌停止表达编码Asd和MurA酶的任何核酸，使得肽聚糖细胞壁层的合成停止，最终导致细菌的裂解。这种裂解可以导致肠道病原体特异性的抗原团(bolus)的释放，从而用作增强诱导针对该肠道病原体的免疫而同时加予生物防范的手段。

[0393] 延迟裂解的其它方法描述于例如美国专利号9,481,888中，其全部内容通过引用明确并入本文。

[0394] sopB突变

[0395] 为了安全地用作疫苗，必须通过毒力基因的缺失或调控表达来减弱细菌肠道病原体的毒力。例如，在沙门氏菌的情况下，可以改变由3型分泌系统分泌的效应分子，例如
sopB，以实现减毒。基因可以删除或可以将可调控的启动子插入到基因之前以实现调控的
延迟减毒。如本文所用，“调控的延迟减毒”是指微生物定植宿主并然后显示减毒表型以避免实际引起症状性感染的能力。

[0396] E.阻遏物调控系统

[0397] 在一些实施方案中，重组细菌包含与阻遏物调控的启动子可操作地连接的核酸(例如，基因)以利用基因的可调控表达。因此，在一些实施方案中，重组细菌包含含有编码阻遏物的基因的核酸。在一些实施方案中，编码阻遏物的基因与可调控的启动子可操作地
连接。将与可调控启动子可操作地连接的编码阻遏物的核酸序列染色体整合的方法是本领
域已知的并且在实施例中详述。在一些实施方案中，编码阻遏物的核酸序列未整合到染色
体基因座中以使得破坏细菌定植宿主细胞的能力。在一些实施方案中，重组细菌包含被整
合到细菌染色体的relA基因座中的编码阻遏物的核酸。在一些实施方案中，重组细菌包含
整合到细菌染色体的endA基因座中的编码阻遏物的核酸。在一些实施方案中，重组细菌包
含至少一种编码阻遏物的核酸序列。在一些实施方案中，重组细菌包含至少两种、至少三
种、至少四种、至少五种、至少六种或更多种编码阻遏物的核酸。在一些实施方案中，编码阻遏物的核酸存在于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，编码阻遏物的核酸位于细菌染色
体中。如果存在多于一种编码阻遏物的核酸序列，则编码阻遏物的每种核酸序列可以与可
调控的启动子可操作地连接，使得每种启动子受相同的化合物或条件调控。或者，编码阻遏物的每个核酸序列可以与可调控的启动子可操作地连接，其各自受不同的化合物或条件调
控。

[0398] 如本文所用，“阻遏物”是指阻抑启动子的转录活性的生物分子。在一些实施方案中，阻遏物在体外培养期间由重组细菌以足够高量的合成，使得与阻遏物调控的启动子可操作地连接的核酸的转录被阻抑。例如，如果由所述核酸编码的产物的表达阻碍细菌的体
外生长和/或细菌感染和/或定植受试者的能力，则这可能是特别有利的。在一些实施方案
中，与阻遏物调控的启动子可操作地连接的核酸表达目标抗原。在一些实施方案中，在编码阻遏物的基因的转录减少或停止(例如，在体内)后，细胞内阻遏物的浓度随着每个细胞分
裂周期逐渐降低。如本文所述，特定阻遏物的使用可部分取决于所用重组细菌的种、亚种、菌株或血清型。在一些实施方案中，阻遏物源自与阻遏物调控启动子所来源的相同物种(例如，相同的细菌种或相同的噬菌体)。在一些实施方案中，阻遏物不是源自与阻遏物在其中表达的细菌物种相同的细菌物种。例如，在一些实施方案中，如果重组细菌属于沙门氏菌
属，则阻遏物源自大肠杆菌。其它合适的阻遏物包括源自噬菌体的阻遏物。

[0399] 上文详述的编码阻遏物的核酸序列和可调控启动子可以进行修饰以优化编码阻遏物的核酸序列的表达水平。编码阻遏物的核酸序列的最佳表达水平可以估算，或者可以
通过实验测定。这种测定应考虑阻遏物是否作为单体、二聚体、三聚体、四聚体或更高倍体发挥作用，并且还应考虑编码目标抗原的载体的拷贝数。在一个示例性实施方案中，优化表达水平以使得阻遏物在允许的环境(即，体外生长)中以基本上抑制编码目标抗原的核酸表
达的水平合成，并且在非允许的环境中基本上不合成，从而允许表达编码目标抗原的核酸。

[0400] 在一些实施方案中，本文所述的重组细菌经修饰以包含含有编码LacI阻遏蛋白的lacI基因的核酸。lacI编码的阻遏物在本文所述的重组细菌中的表达可用于调控由该细菌
表达的目标抗原的表达。例如，在一些实施方案中，lacI基因的表达受糖调控启动子(例如阿拉伯糖调控启动子)的调控。当在阿拉伯糖存在下培养时，重组细菌将表达LacI阻遏蛋
白，其随之阻抑与LacI响应性启动子(例如，Ptrc、Plac、PT7lac和Ptac)可操作地连接的编码目标抗原的基因的表达。在施用于受试者时并且不存在阿拉伯糖源的情况下，LacI阻遏物的合
成停止，导致LacI反应性启动子的去阻遏和随后目标抗原的表达。在体内每次细胞分裂时，细胞中LacI的浓度降低约一半，导致阻抑水平逐渐降低并且目标抗原的合成逐渐增加。

[0401] 在一些实施方案中，包含lacI基因的核酸位于细菌中的质粒上。在一些实施方案中，包含lacI基因的核酸位于细菌的染色体上。在一些实施方案中，包含lacI基因的核酸位于与已在细菌染色体中缺失或改变的内源性relA基因的基因座对应的染色体基因座处。在
一些实施方案中，重组细菌经修饰以包含含有lacI基因的核酸，由此细菌染色体中lacI基
因的内源拷贝改变和/或缺失。

[0402] 在一些实施方案中，核酸包含大肠杆菌lacI基因。大肠杆菌lacI基因的核酸序列提供如下：

[0403] gtgaaaccagtaacgttatacgatgtcgcagagtatgccggtgtctcttatcagaccgtttcccgcgtggtgaaccaggccagccacgtttctgcgaaaacgcgggaaaaagtggaagcggcgatggcggagctgaattacatt
cccaaccgcgtggcacaacaactggcgggcaaacagtcgttgctgattggcgttgccacctccagtctggccctgc
acgcgccgtcgcaaattgtcgcggcgattaaatctcgcgccgatcaactgggtgccagcgtggtggtgtcgatggt
agaacgaagcggcgtcgaagcctgtaaagcggcggtgcacaatcttctcgcgcaacgcgtcagtgggctgatcatt
aactatccgctggatgaccaggatgccattgctgtggaagctgcctgcactaatgttccggcgttatttcttgatg
tctctgaccagacacccatcaacagtattattttctcccatgaagacggtacgcgactgggcgtggagcatctggt
cgcattgggtcaccagcaaatcgcgctgttagcgggcccattaagttctgtctcggcgcgtctgcgtctggctggc
tggcataaatatctcactcgcaatcaaattcagccgatagcggaacgggaaggcgactggagtgccatgtccggtt
ttcaacaaaccatgcaaatgctgaatgagggcatcgttcccactgcgatgctggttgccaacgatcagatggcgct
gggcgcaatgcgcgccattaccgagtccgggctgcgcgttggtgcggatatctcggtagtgggatacgacgatacc
gaagacagctcatgttatatcccgccgttaaccaccatcaaacaggattttcgcctgctggggcaaaccagcgtgg
accgcttgctgcaactctctcagggccaggcggtgaagggcaatcagctgttgcccgtctcactggtgaaaagaaa
aaccaccctggcgcccaatacgcaaaccgcctctccccgcgcgttggccgattcattaatgcagctggcacgacag
gtttcccgactggaaagcgggcagtga(SEQ ID NO:78)

[0404] 由SEQ ID NO:78的核酸编码的大肠杆菌LacI蛋白的氨基酸序列提供如下：

[0405] MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAELNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVP
ALFLDVSDQTPINSIIFSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDW
SAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSCYIPPLTTIKQDFRLL
GQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ(SEQ ID NO:
79)

[0406] 在一些实施方案中，核酸包含lacI基因，其中lacI基因包含与SEQ ID NO:78的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少
86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。在一些实施方案中，所述核酸包含lacI基因，其中lacI基因包含与SEQ ID NO:78的核酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少
88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的核酸序列。

[0407] 在一些实施方案中，核酸包含编码LacI蛋白的核酸序列，其中所述LacI蛋白包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸包含编码LacI蛋白的核酸序列，其中所述LacI蛋白包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少
84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同源的氨基酸序列。

[0408] 在一些实施方案中，核酸包含与可调控的启动子(例如，糖调控的启动子)可操作地连接的lacI基因。在一些实施方案中，核酸包含与糖调控的启动子可操作地连接的lacI
基因。在一些实施方案中，糖调控的启动子在特定糖的存在下表现出增加的活性(例如，转录增加)，并且在不存在糖的情况下表现出降低的活性。在一些实施方案中，核酸包含与鼠李糖调控的启动子(例如，糖调控的启动子)可操作地连接的lacI基因。在一些实施方案中，核酸包含与阿拉伯糖调控的启动子可操作地连接的lacI基因。在一些实施方案中，阿拉伯
糖调控的启动子是ParaBAD。在一些实施方案中，重组细菌包含突变ΔrelA::araC ParaBAD lacI TT。

[0409] II.药物组合物

[0410] 可以将重组细菌作为药物组合物施用于宿主。在一些实施方案中，药物组合物可以用作疫苗以引发对重组细菌的免疫反应，其包括可以由细菌合成和递送的任何抗原。在
一个示例性实施方案中，免疫反应是保护性的。对抗原的免疫反应被充分研究和广泛报道。

[0411] 在一些实施方案中，药物组合物包含本文所述的重组细菌。在一些实施方案中，药物组合物包含合成沙门氏菌目标抗原的重组细菌。在一些实施方案中，药物组合物包含合成弯曲杆菌目标抗原的重组细菌。在一些实施方案中，药物组合物包含合成沙门氏菌目标
抗原的重组细菌和合成弯曲杆菌目标抗原的重组细菌。在一些实施方案中，药物组合物包
含合成含有弯曲杆菌N-聚糖的目标抗原的重组细菌。在一些实施方案中，药物组合物包含
至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种或更多种重组细菌菌株，如本文所描述的。

[0412] 可以将药物组合物施用于能够产生免疫反应的任何宿主。这些宿主可包括所有脊椎动物，例如哺乳动物，包括家畜、农畜、实验室动物和人类，以及各种鸟类物种，包括家禽和具有农业重要性的鸟类。优选地，宿主是温血动物。在一个实施方案中，宿主是奶牛。在一些实施方案中，宿主是马类。在另一个实施方案中，宿主是禽类。在另一个实施方案中，宿主是人。

[0413] 药物组合物可以作为预防剂或用于治疗目的而施用于受试者。在一些实施方案中，可以施用药物组合物用于预防或治疗沙门氏菌病。在一些实施方案中，可以施用药物组合物用于预防或治疗弯曲杆菌感染。在一些实施方案中，可以施用药物组合物用于预防或
治疗沙门氏菌病和/或弯曲杆菌感染。

[0414] 在一些实施方案中，当在本文所述的药物组合物中施用于宿主时，重组细菌是活的。合适的疫苗组合物制剂和施用方法如下详述。

[0415] 包含重组细菌的药物组合物可任选地包含一种或多种可能的添加剂，例如载体、防腐剂、稳定剂、佐剂和其它物质。

[0416] 在一个实施方案中，药物组合物包含佐剂。任选加入佐剂以增加疫苗触发、增强或延长免疫应答的能力。在示例性实施方案中，活的减毒重组细菌的使用可以充当天然佐剂。在一些实施方案中，重组细菌合成并分泌免疫调节剂。另外的材料，如细胞因子、趋化因子和细菌中天然存在的细菌核酸序列(如CpG)，也是潜在的疫苗佐剂。

[0417] 在一些实施方案中，药物组合物包含缓冲盐水(例如，磷酸盐缓冲盐水(PBS))。

[0418] 在一些实施方案中，药物组合物包含食品。

[0419] 在另一个实施方案中，药物组合物可包含药用载体(或赋形剂)。这种载体可以是用于包封的任何溶剂或固体材料，其对接种的宿主无毒并且与重组细菌相容。载体可以赋
予形态或稠度，或充当稀释剂。合适的药用载体可包括液体载体，例如生理盐水和生理浓度的或接近生理浓度的其它无毒盐，和不用于人的固体载体，例如滑石或蔗糖，或动物饲料。
载体还可包括稳定剂、润湿剂和乳化剂、用于改变渗透压的盐、包封剂、缓冲剂和皮肤渗透增强剂。载体和赋形剂以及用于肠胃外和非肠胃外药物递送的制剂在Remington’s 
Pharmaceutical Sciences 19th Ed.Mack Publishing(1995)中提出。当用于通过支气管
施用时，药物组合物优选以气溶胶的形式存在。

[0420] 在一些实施方案中，药物组合物递送至农畜(例如家禽)。在一些实施方案中，药物组合物作为粗喷雾(course spray)递送(例如，用于孵化场以递送至家禽)。在一些实施方案中，药物组合物在饮水中递送。

[0421] 当使用添加剂时应当小心不使活的重组细菌被杀死，或者使有效地定植淋巴组织如GALT、NALT和BALT的能力受到添加剂使用的损害。可以加入稳定剂如乳糖或谷氨酸单钠
(MSG)以使药物组合物针对各种条件(例如温度变化或冷冻干燥过程)是稳定的。如本文所
述，重组细菌还可以与谷氨酸盐和/或精氨酸盐(arginite)共同施用。

[0422] 如本领域技术人员所理解的，药物组合物的剂量可以并且将根据重组细菌、受调控的抗原和预期的宿主而变化。一般而言，剂量仅需足以在大多数宿主中引发保护性免疫
反应。常规实验可以容易地确定所需的剂量。用于口服施用的疫苗的典型初始剂量可以是
约1×107至1×1010CFU，这取决于待免疫宿主的年龄。还可根据需要施用多个剂量以提供所
需水平的保护性免疫。

[0423] 为了刺激GALT、NALT或BALT细胞的优先反应，优选将药物组合物直接施用于肠道、鼻咽或支气管，例如通过口服、鼻内施用、胃插管或气溶胶形式，虽然施用重组细菌的其它方法，例如静脉内、肌肉内、皮下注射或乳房内、阴茎内、直肠内、阴道给药或其它肠胃外途径，也是可能的，例如用于抗癌应用。

[0424] 在一些实施方案中，配制这些组合物用于通过注射(例如，腹膜内、静脉内、皮下、肌肉内等)施用。

[0425] 在另一个实施方案中，本公开提供了用于在宿主中引发针对抗原的免疫应答的方法。该方法包括向宿主施用有效量的包含本文所述重组细菌的药物组合物。

[0426] 而在另一个实施方案中，重组细菌可以在用于引发需要的个体中针对病原体的免疫应答的方法中使用。该方法包括向宿主施用有效量的包含本文所述重组细菌的药物组合
物。在另一个实施方案中，本文所述的重组细菌可在用于改善需要的宿主中传染病的一种
或多种症状的方法中使用。该方法包括施用有效量的包含如本文所述的重组细菌的药物组
合物。

[0427] 实施例

[0428] 通过以下实施例进一步说明本发明，这些实施例不应被解释为以任何方式进行限制。所有引用的参考文献的内容，包含参考文献书目、授权专利和公开的专利申请，如本申请全文所引用的，在此通过引用明确地并入本文。还应该理解，所附的所有附图和表格的内容也通过引用明确地并入本文。

[0429] 实施例1：背景和概述

[0430] 弯曲杆菌是全世界细菌性食源性胃肠炎的主要原因，并且是重大的公共健康问题(21-23)。疾病预防控制中心(CDC)最近的预测表明，空肠弯曲杆菌不仅是导致人类食源性
疾病的最常见原因(每年超过800,000例)，而且也是住院治疗的主要原因(每年超过8,000)
(24)。感染空肠弯曲杆菌的患者经常出现水样/血性腹泻、腹部痉挛、恶心和发烧。严重的神经系统后遗症、菌血症和其它肠外并发症可能不经常发生(25)。空肠弯曲杆菌广泛存在于
食用动物中，特别是在家禽中。大多数人类空肠弯曲杆菌感染主要与生鸡肉处理不当或食
用未煮熟的鸡肉有关(1、2、26-32)。家禽在人类弯曲杆菌病中的主要作用得到了活禽和屠体中空肠弯曲杆菌的高流行率、流行病学研究结果以及家禽和人类感染中相同基因型的检
测的支持(28-30、33、34)。

[0431] 包含鸡、火鸡、鸭和鹅的家禽经常被空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌感染(3、35-37)。尽管在肠道中广泛定植，弯曲杆菌感染在家禽中很少或不产生临床疾病(3、35、38、
39)。在欧洲和美国进行的流行度研究报道，空肠弯曲杆菌阳性鸡群的范围为2％至100％
(38、40-42)。通常，空肠弯曲杆菌的流行度随着鸟类生长而增加，并且对于肉鸡在屠宰年龄达到最高点。一旦肉鸡群感染空肠弯曲杆菌，鸡群中的大多数禽类就会被定植(40、43-46)。
肠道中空肠弯曲杆菌的巨大数量导致屠宰期间家禽屠体受到污染，使得在生产线末端处
(冷冻后)家禽屠体上的空肠弯曲杆菌通常超过50％，范围从0到100％(33、47-53)。在美国，几项研究报导，大部分加工过的肉鸡屠体被大量空肠弯曲杆菌污染(47、53-55)。空肠弯曲杆菌对屠体的污染可归因于原产地农场，因为农场的高流行率通常与加工工厂中的高屠体
污染水平有关(56-60)。

[0432] 沙门氏菌病发展出不同的综合征，包括肠胃炎、肠热病(伤寒热)和菌血症，以及动物和人类中的无症状携带(61)。它是美国食源性疾病的主要原因，具有35％的住院率和28％的死亡率(24)。美国每年约有103万例非伤寒沙门氏菌病例，由于过早死亡、残疾、医疗和生产力成本造成约33.1亿美元的经济损失，每年损失16,782个质量调整生命年(62)。沙
门氏菌具有广泛的宿主范围，且适应于在广泛的各种不同环境中生存，甚至在25℃下储存
的干饲料中存活长达16个月(63、64)。虽然大量的人类感染与食用动物来源有关，但感染也来自宠物、爬行动物、水果、蔬菜和其它人类(65-67)。沙门氏菌向人类的传播通常发生在摄取被动物粪便污染或被其它来源交叉污染的食物时(4)。根据CDC的报告，在这些来源中，家禽和家禽相关产品被广泛认为是人类沙门氏菌感染的最重要的媒介之一(5、67-74)。随着
家禽和家禽产品消费量的增加，与家禽相关的沙门氏菌病数量在美国仍然是一个重要的公
共卫生问题。

[0433] 有超过2000种沙门氏菌血清型。肠炎沙门氏菌、海德堡沙门氏菌、S.Kentucky和鼠伤寒沙门氏菌通常与鸡有关，并且与其它食用动物物种和人类感染有不同程度的关联。根据CDC和美国农业部(USDA)的报告，肠炎沙门氏菌是美国人类疾病中涉及的最常见的血清
型变种(74)，且最通常与鸡和鸡蛋相关和与其它食用动物物种的关联程度要小得多(74-
80)。海德堡沙门氏菌也存在于大多数主要食用动物物种、蛋和零售肉类样品中，并且是与人类疾病相关的前五种最常见的血清型之一(79、81、82)。虽然在美国S.Kentucky很少引起人类感染，但它在欧洲和北非是一种新出现的血清型变种(83)，并且在家禽中普遍存在
(75、84、85)。

[0434] 传统上，抗生素已用于治疗细菌感染和用于食用动物的生长促进。然而，抗生素的这些使用造成抗生素抗性率增加(86)，导致鸡群和食品被抗生素抗性的弯曲杆菌、沙门氏菌、肠球菌和大肠杆菌污染，从而增加人类感染的风险(87)。公众对于人畜共患细菌病原体中抗生素耐药性的扩散(其对在临床医学和兽医实践中现有抗生素治疗的有效性构成威
胁)(88-97)的担忧导致欧盟在1999年禁止使用大多数促进生长的抗生素以保持重要的人
类药物的有效性(98)。2004年，美国FDA禁止食用动物中使用恩诺沙星(enrofloxacin)，理由是它的使用导致人类病原体的氟喹诺酮耐药性。最近，FDA和业界已同意停止使用促生长抗生素。然而，有人担心减少动物生产中抗生素的使用可能会导致肉类和其它动物性食物
中食源性病原体的增加。除管理实践外，还有必要开发其它有效方法来减少抗生素耐药细
菌的出现并控制食源性病原体。最好的预防策略之一是开发和使用疫苗。

[0435] 弯曲杆菌控制：弯曲杆菌可以以各种不同的方式从各种环境来源污染禽舍，使得预防弯曲杆菌定植鸟群成为非常具有挑战性的任务。一般而言，检验用于家禽中弯曲杆菌
的农场控制策略可大致分为两种途径：1)通过使用基于生物安全性的干预措施预防鸟群定
植，以及2)通过基于非生物安全性的措施预防和/或减少弯曲杆菌定植，如疫苗接种，添加细菌素、噬菌体和饲料添加剂，以及竞争性排除(42、99-101)。改善农场的生物安全性显然对降低整体鸟群疾病流行度有显著影响。然而，即使是最严格的生物安全性措施也不总是
对控制弯曲杆菌具有一致和可预测的影响，并且在商业环境下很难评估它们对鸟群流行度
的有效性(42、102-105)。此外，严格的生物安全性措施成本过高，难以维护，且其有效性似乎随生产系统而异(36、42)。已经评估了用于控制活禽中的弯曲杆菌的多种非生物安全性
措施。目前，在生产条件下没有商业上可获得的竞争性排除产品、疫苗、细菌素、噬菌体或饲料/水添加剂用于从鸡中排除弯曲杆菌，尽管最近报道了在实验室条件下获得了一些有希
望的结果(99、106-108)。

[0436] 针对空肠弯曲杆菌的疫苗接种是有希望的策略，但需要使用保护性抗原优化疫苗接种方案(例如，诱导粘膜和可能的细胞免疫和实用递送系统)。空肠弯曲杆菌通常被认为
是鸡的共生体，尽管已经观察到全身和粘膜体液反应(109-111)和在后代中可检测到作为
母体来源的抗体的抗弯曲杆菌抗体(112)。然而，与人类不同，鸡中先天/适应性免疫反应的强烈激活的缺乏需要开发增强对空肠弯曲杆菌抗原的免疫反应的疫苗策略。由于空肠弯曲
杆菌疫苗抗原是免疫原性的，将抗原递送至区域淋巴组织和脾脏以刺激有效的粘膜免疫和
全身性抗体和细胞免疫反应是至关重要的。因此，构建了递送空肠弯曲杆菌保护性抗原的
鼠伤寒沙门氏菌衍生的RASV以控制/降低家禽中的空肠弯曲杆菌流行度。

[0437] 沙门氏菌控制：由于受污染的家禽产品是人类沙门氏菌感染的主要来源，因此鸡的疫苗接种是降低家禽群中沙门氏菌水平的重要策略，这最终将导致人类沙门氏菌感染率
降低。考虑到肉鸡的整个寿命期仅为5-6周，开发一种可以对不同的血清型变种进行交叉保护的安全有效的沙门氏菌疫苗是一项挑战。目前，有3种类型的疫苗，减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗；只有前两种被许可用于鸡。减毒活疫苗可以口服给药，从而向宿主递送一剂(bolus)抗原并诱导抗体和细胞介导的免疫反应。这些活疫苗对鼠伤寒沙门氏菌(113-115)
和肠炎沙门氏菌(115-121)的菌株使用了多样的减毒策略。然而，多变的效力和持久性、毒力的恢复、交叉保护的缺乏和/或对沙门氏菌测试程序的可能干扰是关注的问题(122-
125)。灭活疫苗是安全的，但它们必须通过昂贵的注射来递送并且需要佐剂来增加效力
(123-125)。因此，仍然需要安全和改进的活性减毒的但高度免疫原性的沙门氏菌疫苗
(125)。沙门氏菌血清型由免疫异质的LPS O-抗原侧链和鞭毛抗原定义。因此，诱导对这些异质抗原的免疫反应不能很好地用于诱导对多样性血清型的交叉保护性免疫的目的。另一
方面，沙门氏菌和其它肠道细菌病原体具有许多免疫相关的交叉反应性抗原。这些包含LPS核心多糖，其中除了肠道沙门氏菌血清型Arizonae外，其在大多数(如果不是全部)肠道沙
门氏菌血清型中是相同的(126)。此外，尽管许多外膜蛋白(OMPs)具有微观异质性，但仍然共享抗原决定簇(127)，正如铁摄取所需的铁调节外膜蛋白(IROMP)一样(128)，铁摄取是对于病原体在受感染的动物中的成功必需的重要功能。已经开发出用于沙门氏菌疫苗的策略
以在体外和在口服免疫宿主中通过粘膜表面感染的初始阶段中显示野生型表面抗原决定
簇，和然后停止合成LPS O-抗原侧链并在内脏器官中组成性地合成铁调节外膜蛋白
(IROMPs)(19、129)。LPS O-抗原侧链在体内的逐渐消除也更好地将免疫相关的交叉反应性OMP和IROMP暴露用于免疫系统的监测和免疫系统的刺激。已知对IROMP的免疫应答有效地
预防肠道病原体的败血性感染，尤其是引起鸡和火鸡的大肠杆菌败血的大肠杆菌(130)。此外，对于来自一种细菌血清型的IROMP诱导的抗体可以识别由其它血清型合成的IROMP
(131)。fur基因编码阻遏物，其在游离铁的存在下抑制所有编码IROMP的基因(128)。当铁浓度变低时，如在肠壁屏障之外的动物宿主组织中的情况一样，Fur停止以高水平合成，并且观察到IROMP和将铁从感染的动物宿主隔离开所需要的其它Fur-调控基因的组成型表达
(128)。当口服进食时，fur突变体减弱，其在施用于小鼠(132)或孵化日小鸡(133)时，给出高2至3个数量级的LD50。为了获得用于铁摄取的所有成分(包括IROMP)的高组成性合成水
平，fur基因的启动子(Pfur)被缺失并被紧密调控的araC PBAD激活剂-启动子取代，以使得fur基因的表达仅取决于阿拉伯糖(129)的存在而与铁的浓度无关。具有ΔPfur::TT araC 
ParaBAD fur缺失-插入突变的鼠伤寒沙门氏菌疫苗生长在具有低水平阿拉伯糖的培养基中
的生长导致淋巴组织的非常好的定植、在109CFU的剂量下的总体减毒和诱导的保护性免疫
的非常高的水平(129)。

[0438] 已经创建遗传工程的沙门氏菌血清型变体鼠伤寒(Typhimurium)(134)、甲型副伤寒(Paratyphi A)和伤寒(Typhi)(135、136)作为用于体内受控延迟减毒(129、134)，通过密码子优化的DNA序列指定的保护性抗原的受控延迟体内合成(137-140)以及受控延迟的体
内裂解(140-142)的疫苗，使得疫苗可以在这样的条件下生长：其能够使得它们在粗喷雾或口服免疫后表现出野生型菌株在宿主防御压力中存活和在显示出减毒以防止疾病症状和
合成诱导保护性免疫应答的蛋白质抗原之前有效地定植效应淋巴组织的能力。菌株已经工
程化以消除或减少血清型特异性LPS O-抗原(18、143)和鞭毛抗原的合成，暴露保守的LPS
核心(18、19、143)和过表达获得必需的铁和锰离子所需要的免疫交叉反应性表面外膜蛋白抗原(19、144)，减少胃肠炎症状的诱导(145)而同时保留募集先天免疫的能力，且通过细胞裂解表现出生物遏制以排除体内持久性或(如果排泄)存活(140-142)。对于新生的(136、
146、147)、怀孕的、蛋白质营养不良的和免疫功能低下的小鼠，菌株在高剂量下是完全安全的。由用相同的RASV菌株免疫的母亲所生的新生幼崽(7日龄)与由未免疫母亲所生的幼崽
相比也会产生更好的免疫反应，并且表现出对于攻击的更高水平的保护性免疫。几年前观
察到一些类似的结果，其中由免疫母鸡产下的蛋孵出的小鸡对用于免疫母鸡的相同减毒鼠
伤寒沙门氏菌疫苗的保护性免疫水平高于由未免疫母鸡产下的蛋孵出的小鸡(148)。这些
技术已被用于开发疫苗以预防肺炎链球菌(147)、结核分枝杆菌(140、149)、导致人类腹泻病的多样的肠道细菌病原体和流感病毒(141)感染新生儿。在伤寒沙门氏菌来源的RASV的
最近的人体试验中，用口服施用高达1010CFU的疫苗剂量，观察到完全安全性和12天收集的粪便中没有活疫苗细胞的泄出(150)。还使用鼠伤寒沙门氏菌RASV开发针对农业重要动物
的病原体的疫苗，特别是对鸡的病原体如引起球虫病的艾美球虫(Eimeria)物种(151、152)和引起的坏死性肠炎的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)(153、154)。在这些方
面，六项研究(140-142、154-156)已经证明，与没有这种裂解表型的RASV相比，具有调控的体内延迟裂解表型的RASV提供了优异的的免疫反应水平和保护性免疫。

[0439] 为了消除使用具有非允许的药物抗性基因的质粒载体并在体内稳定RASV中的质粒载体(157)，通过删除asd基因来开发平衡-致死载体-宿主系统以施加对于二氨基庚二酸
(DAP)的强制要求，二氨基庚二酸是细胞壁刚性层的重要组成部分，以及具有野生型asd基
因的质粒载体。还证明了对合成的保护性抗原的更好的免疫反应可以通过使用T2SSs(例如
与N-和C-末端β-内酰胺酶序列的融合)使它们分泌来实现(158、159)，其现在已经进一步优化(154)。增强的免疫原性部分是由于含有保护性抗原的免疫原性外膜囊泡的形成增强
(19、160)。

[0440] 还构建(118)并使用了质粒，其是与χ11730、χ11791和χ12341的衍生物结合显示出调控的延迟体内裂解表型所需的。这些菌株具有murA基因的araC ParaBAD调控的表达和在其染色体中阻断DAP合成的Δasd突变，murA基因编码胞壁酸合成中的第一种酶。这些裂解质粒引起保护性抗原的合成以用于通过细胞裂解递送，并且具有araC ParaBAD调控的murA和
asd基因及GTG起始密码子以降低翻译效率。位于与质粒araC ParaBAD GTG-murA GTG-asd基因转录相反方向的P22 PR受到菌株在含有阿拉伯糖的培养基中生长期间产生的C2阻遏物
的阻抑(由于ΔasdA::TT araC ParaBAD c2突变)。然而，C2浓度由于体内细胞分裂而降低以导致PR指导的反义mRNA的合成阻断残留的asdA和murA mRNA的翻译。转录终止子(TT)位于
用于受控裂解、复制和基因表达的所有质粒域的侧翼，使得在一个域中的表达不影响另一
个域的活性。

[0441] A.对鸡的艾美球虫感染的保护性免疫。

[0442] 证实了鸡中对抗引起球虫病的堆形艾美球虫(E.acervulina)的保护性反应。图1A和1B显示以用于递送艾美球虫SO7抗原的没有和具有ΔsifA突变的非裂解和裂解菌株免疫
鸡的比较数据。ΔsifA突变使RASV能够从含沙门氏菌的囊泡(SCV)逃逸，使得裂解在胞质溶胶中发生以增强CD8-、CD17-和NKT-依赖性细胞免疫的诱导。显然，最广泛的艾美球虫SO7特异性淋巴细胞增殖是由具有裂解表型和ΔsifA突变的RASV菌株诱导的(组7)。该相同的组
给出最高水平的抗原特异性IgA抗体反应(图1C和1D)、CD8细胞(图2A)、细胞因子反应(图
2B)和艾美球虫卵囊攻击后的体重增加(表1)。基于这些结果，ΔsifA突变包含在RASV载体
菌株中以指定空肠弯曲杆菌保护性抗原的合成和递送。这些总体结果证明了使用这些改进
的RASV开发赋予对鸡中的沙门氏菌和空肠弯曲杆菌菌株的保护性免疫的疫苗的功效。使用
也表现出完全的生物控制(没有在体内的持久性或在粪便中泄出时的存活)的RASV提供了
另一种重要的益处。

[0443] 表1.用RASV菌株免疫肉鸡并用柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊攻击

[0444]

[0445] a在1周龄时并在1周后再次对鸡进行口服疫苗接种。

[0446] b三周后，组G2至G7用105个柔嫩艾美耳球虫卵囊接种。

[0447] 组3＝空载体对照。组3和组4＝递送艾美球虫S07抗原的非裂解RASV。组6和组7＝递送S07抗原的裂解RASV。组7RASV也从用于在胞质溶胶中裂解的含沙门氏菌的囊泡逃逸以
诱导最大的全身和细胞免疫。

[0448] c重量增加，以克计，在柔嫩艾美耳球虫攻击和终止之间的感染期(6天)内计算。

[0449] dFCR，计算为平均饲料消耗量(g)/在柔嫩艾美耳球虫攻击和终止之间的感染期(6天)内平均体重增加的饲料转化率。

[0450] B.鼠伤寒沙门氏菌疫苗载体菌株

[0451] 表2中列出了用于构建重组质粒载体和用于自杀载体的接合转移的大肠杆菌宿主菌株，用于构建具有改进的性质及添加的突变改变的鼠伤寒沙门氏菌。用于构建和评估合
成和递送艾美球虫SO7抗原和空肠弯曲杆菌抗原的RASV菌株的菌株也列于表2中。表3中描
述了与这些菌株中的突变相关的表型属性。

[0452] 表2：细菌菌株

[0453]

[0454] 表3.鼠伤寒沙门氏菌疫苗菌株a中使用的突变和相关表型

[0455]

[0456]

[0457] C.空肠弯曲杆菌推定的和证明的保护性抗原。

[0458] 基于文献综述和生物信息学分析，选择19种空肠弯曲杆菌抗原作为已知或可能的保护性抗原。它们在表4中列明为可能诱导保护性免疫应答。

[0459] 表4.示例性空肠弯曲杆菌抗原

[0460]

[0461]

[0462] cj序列来自空肠弯曲杆菌NCTC 11168(ATCC700819)，

[0463] *使用Blast对空肠弯曲杆菌NCTC 11168(ATCC700819)、327、LMG23211、84-25、H693-13、CG8486、LMG9872、S3、LMG23269、414、ATCC33560、2008-831、1997-4、260.94.CF93-
6、M1、RM221&20另外测序的空肠弯曲杆菌基因组进行分析

[0464] euk：真核生物；gmN：革兰氏阴性

[0465] 这些序列存在于所分析的所有39个空肠弯曲杆菌基因组中，并且在所有这些菌株中具有82％或更高的氨基酸序列同一性。这些包括cj0034c、cj0113(Omp18)、cj0168c、
cj0248、cj0289(Peb3)、cj0365(CmeC)、cj0404、cj0420、cj0427、cj0428、cj0588(TlyA)、cj0921c(Peb1)、cj0982c(CjaA)、cj0998c、cj1259(PorA)、cj1339c(Fla)、cj1478c(CadF)、cj1534c(Dps)和cj1656c。使用多样的生物信息学分析来分析19种抗原中的每一种以确定
在所有测序的空肠弯曲杆菌菌株中存在哪些抗原，其在氨基酸序列中高度保守，具有用于
输出的信号序列并且是细胞表面定位的。选择其中的10个，包括：Cj0113＝Omp18(Refs需要的)、Cj0289c＝Peb3(120-123)、Cj0982c＝CjaA(124-128)、Cj1259＝PorA(120、121、123、
126、129-134)、Cj1339c＝FlaA(120、121、123、135-144)、Cj1478＝CadF(120、121、129、132、
144-147)、Cj0588 TlyA(148-150)、Cj0921c＝Peb1 (121-123、145、151-157)、Cj0998c (US 
9,328,148) (150)和Cj1534c＝Dps(158、159)，以根据抗原是否具有用于它们从空肠弯曲
杆菌菌株分泌的信号序列使用调控的裂解质粒pYA4763和/或pG8R17产生重组质粒。

[0466] 对编码序列进行密码子优化以调节GC含量并优化沙门氏菌中的表达，并且还消除mRNA中经受核糖核酸酶E(RNase E)切割的潜在位点，从而延长mRNA的半衰期以另外增强抗
原合成水平。密码子优化的序列经修饰以删除天然信号肽编码序列(如果存在)，在C-末端
添加编码组氨酸-标签(His-tag)的序列以促进蛋白质纯化及N-和C-末端的其它序列以指
定被限制性内切酶识别的核苷酸序列，以便能够克隆到pYA4763中(如果抗原不是由RASV分
泌)(图3A)或pG8R17中(图3B)，其具有大大改善的β-内酰胺酶信号序列(154)(131)(如果抗原要分泌)。如果需要，还设计序列以便能够在之后切除His-标签序列。这些序列在商业上合成并返回到无启动子的pUC ori载体中。从这些质粒中切下待克隆的序列，并插入任一裂解质粒中，将然后电穿孔到大肠杆菌菌株χ6212(pYA232)中(表2)。pYA232编码lacIq基因，其过量产生LacI以阻抑其中抗原编码序列处于受LacI阻抑的Ptrc控制下的重组菌株的抗原
合成。在通过Asd+选择和纯化以选择重组克隆后，通过大肠杆菌重组体在IPTG存在下生长
以引起空肠弯曲杆菌重组抗原的去阻遏和合成的能力来验证存活力。尽管在某些情况下由
于高水平的空肠弯曲杆菌抗原合成导致生长稍微延迟，期望的是生长不被抗原合成改变。
然后重组裂解质粒从χ6212宿主菌株分离，并电穿孔到鼠伤寒沙门氏菌疫苗株χ12341(Δ
PmurA25::TT araC PBA D murAΔasdA27::TT araC PBA D c2Δpmi-2426ΔwaaL46ΔpagL64::TT rhaRS PrhaBAD waaLΔ(wza-wcaM)-8ΔrelA197::araC PBAD lacI TTΔrecF126ΔsifA26)
(表2)再次选择Asd+。纯化后，RASVs测试在具有和不具有IPTG的情况下的生长速率和空肠
弯曲杆菌抗原的合成，在甘露糖和鼠李糖存在下依赖于生长的LPS O-抗原的合成，以及在
补充有DAP的培养基中自由生长的50代生长后的质粒维持和抗原合成的稳定性。

[0467] 图4A-4B显示了χ12341中重组抗原合成的蛋白质印迹分析。所选择的重组pG8R质粒以及质粒是否来自pYA4763或来自pG8R17显示在图的顶部。使用辣根过氧化物酶标记的
抗His标签单克隆抗体检测蛋白质。在某些情况下，例如对于编码CadF抗原的pG8R130，CadF蛋白的水平是低的，表明抗原的合成不良或降解。有时会遇到这些问题，可以对其进行评
估。因此，抗原合成通过将RASV菌株暴露于IPTG 2小时来诱导，然后加入50μg氯霉素/ml以阻断进一步的蛋白质合成。然后每小时取样持续4小时以通过蛋白质印迹分析测量抗原水
平。恒定抗原水平的维持排除了不稳定性。如果观察到不稳定性，则用计算机程序仔细检查氨基酸序列以指示蛋白酶的潜在切割位点，和然后用核苷酸改变制备新的构建体以消除这
种潜在的蛋白酶切割位点。如果看起来抗原合成很低，则检查序列并制备新的构建体以完
全确定问题的基础并最终产生具有高水平的重组抗原稳定合成的重组克隆。在一些情况
下，这需要SD序列的修饰以增强核糖体结合或者在N-末端编码序列中的其它改变以提高翻
译效率。由于检查了多种重组空肠弯曲杆菌抗原向家禽的递送以选择攻击菌株的盲肠滴度
降低100倍或更多的那些，因此在最终疫苗中不太可能需要超过三种或四种抗原。因此，获得所有潜在抗原的高水平稳定合成的问题可能不是必要的。

[0468] 在评估RASV构建体以诱导针对家禽中普遍的沙门氏菌血清型(表5)的保护性免疫时，将一些编码空肠弯曲杆菌抗原的重组质粒引入χ12452中，其是具有ΔsopB和ΔompA突变的χ1234的衍生物。因此，已经引入了编码CjaA的pG8R86、编码Omp18的pG8R88、编码Peb1的pG8R89、编码Cj0998c的pG8R90、编码Peb3的pG8R102、编码Dps的pG8R128和编码TlyA的
pG8R129。所有这些构建体产生良好的抗原合成水平，如图4所示。将χ12341构建体的相对能力与保护免受所选择沙门氏菌血清型菌株(表5)的感染的χ12452构建体进行比较。这些构
建体也被评估用于保护以用表5中列出的空肠弯曲杆菌菌株进行的攻击。为了确定非免疫
鸡的攻击性侵染后与免疫鸡相比导致空肠弯曲杆菌的最大减少的空肠弯曲杆菌抗原的最
佳组合，评估各自递送单独的空肠弯曲杆菌抗原的菌株的不同组合在降低攻击菌株的盲肠
滴度方面的累加益处。在使用其它RASV的几项研究中，当用递送两种不同保护性抗原的两
种RASV的混合物进行免疫时，发现非常相似(如果不是相同的话)的保护性免疫水平，如在
单个RASV递送两种抗原时观察到的。

[0469] 表5.用于攻击研究的菌株

[0470]

[0471] 该研究通过用递送多种保护性空肠弯曲杆菌抗原的多种鼠伤寒沙门氏菌衍生的RASV免疫家禽以减少沙门氏菌血清型和空肠弯曲杆菌菌株在鸡中的定植和持久性，从而减
少它们通过食物链对人类的传播来增强食物安全性。预计所选择的疫苗还提高家禽养殖生
产力并减少抗生素的使用，从而提高家禽生产的经济效益。用这些RASV对种鸡和肉鸡进行
免疫应减少(如果不是最终消除的话)沙门氏菌和空肠弯曲杆菌通过食物链传播给人类。

[0472] D.材料和方法

[0473] a.细菌菌株、培养基和细菌生长。

[0474] 减毒鼠伤寒沙门氏菌UK-1菌株诱导针对所有鼠伤寒沙门氏菌菌株的攻击的保护性免疫，而用相同的突变减毒的其它鼠伤寒沙门氏菌菌株通常不能诱导针对其它鼠伤寒沙
门氏菌菌株的保护性免疫，并且绝对不能诱导针对高毒力的UK-1株的保护性免疫(187)。因此，显示出引起疾病的最大能力的菌株被用作所有减毒衍生物疫苗菌株的亲本菌株。LB肉
汤和琼脂被用作沙门氏菌繁殖和平板接种的复合培养基(见163(188、189))。还使用不含阿拉伯糖、甘露糖和鼠李糖的Purple肉汤(Difco)以及最低盐培养基和琼脂(190)(164)。使用铬天青S(CAS)板评估Fe摄取嗜铁素的合成。必要时，使用含有0.5％乳糖(Lac)和0.1％阿拉伯糖(Ara)的MacConkey琼脂来计数来自鸡的细菌。含有或不含补充剂的连四硫酸盐或亚硒
酸盐肉汤用于从盲肠和肠内容物、法氏囊、肝脏和脾脏富集沙门氏菌。细菌生长通过分光光度法和通过平板接种用于菌落计数来监测。将测序的和充分表征的空肠弯曲杆菌菌株
NCTC11168,81-176,81116和RM221以及来自鸡的空肠弯曲杆菌分离株(表5)用于攻击研究。
将这些菌株在Mueller-Hinton(MH)培养基上于42℃下微需氧(85％N2，10％CO2，5％O2)培养
24小时。对于来自鸡粪和器官的空肠弯曲杆菌分离物，MH琼脂平板补充弯曲杆菌选择性补
充剂(SR117E；Oxoid，Lenexa，KS)。用于攻击研究的细菌菌株列于表5中。

[0475] b.分子和遗传过程。

[0476] 用于DNA分离、限制酶消化、DNA克隆及使用PCR构建和验证载体的方法是标准的(参见172(191))。在佛罗里达大学跨学科生物技术研究中心(University of Florida 
Interdisciplinary Center for Biotechnology Research)(ICBR)进行DNA序列分析。使
用密码子优化进行所有寡核苷酸和/或基因区段合成以增强在沙门氏菌中的翻译效率并通
过消除RNase E切割位点以延长mRNA半衰期来稳定mRNA(192-194)(173-175)。由于活疫苗
不能显示抗生素抗性，因此使用自杀载体技术在有和没有插入的情况下产生确定的无标记
缺失突变(参见176-181Edwards等人(1998)Gene 207:149-57(195)；Kaniga等人(1998)
Infect.Immun.66:5599-606(196)；Maloy和Nunn(1981)J.Bacteriol.145:1110-2(197)；
Miller和Mekalanos(1988)J.Bacteriol.170:2575-83(198)Ried和Collmer(1987)Gene 
57:239-46(199)；以及Roland等(1999)Avian Dis.43:429-41)(200))。已经使用了具有衍
生自鼠伤寒沙门氏菌亲本χ3761的侧翼序列的自杀载体用于产生表3中列出的所有确定的
突变。这些突变可以使用整合到亲本鼠伤寒沙门氏菌菌株的缺失突变中的自杀载体的噬菌
体P22HTint转导(201、202)(182、183)引入，然后针对蔗糖抗性的选择或者使用标准方法
(201、202)(195、203)(176、185)的自杀载体与自杀载体供体菌株χ7213(181)的接合转移来引入。构建的所有菌株均给出Chi数并储存在-80℃。通过DNA测序及使用凝胶电泳和蛋白质印迹分析指定空肠弯曲杆菌蛋白质合成的能力来评估质粒构建体。

[0477] c.RASV菌株表征。

[0478] 疫苗菌株在其构建的每个步骤和引入编码空肠弯曲杆菌抗原的质粒后完全表征。最初，评估空肠弯曲杆菌抗原Peb1和Omp18以便能够比较分析不同的RASV载体菌株χ12341
和χ12452。然后，我们评估两种菌株的不同组合以建立给出空肠弯曲杆菌攻击菌株的盲肠滴度最大降低的等级次序。在开始免疫研究之前，将RASV与载体对照菌株进行质粒维持稳
定性、完整性和在阿拉伯糖和DAP存在下生长50代时的抗原合成能力的比较。对于空肠弯曲杆菌抗原的组成型合成，菌株在IPTG存在下生长以确定其是否导致生长不良和/或遗传不
稳定性。通过PCR和/或DNA印迹分析证实了分子遗传属性。在使用银染凝胶的电泳后进行了LPS核心和O-抗原的测量(204)(186)。在任何菌株构建的每个步骤之后执行该分析以消除
粗变体(rough variant)(如果它们出现)。使用运动性试验和鞭毛抗原的特异性抗血清来
确定鞭毛的存在。评估了最终RASV的胆汁敏感性、耐酸性以及在有和没有补体失活的情况
下在血清中存活的能力(104、111)。还评估RASV对抗生素的完全敏感性。使用API-20E测试评估疫苗菌株的代谢属性。

[0479] d.动物实验。

[0480] RASV菌株的测试：对RASV的研究在SPAFAS白来杭(white leghorn)鸡及在从商业孵化场获得的Cobb和/或Ross肉鸡中进行。新孵出的白来杭鸡口服免疫，之后随意提供食物和水。在从孵化场收到以使它们能够适应一天后但在喂食之前肉鸡同样口服免疫。免疫后
提供食物。待评估的疫苗菌株(以及沙门氏菌攻击菌株)在LB肉汤中生长至OD600为～0.9，在
10
室温下通过离心沉淀并以5×10 CFU/ml的密度悬浮于PBS中以使口服剂量能够达到最多1
×109CFU从而以20μl施用于雏鸡。最终的RASV评估免疫反应的诱导，所述免疫反应减少沙
门氏菌血清型攻击菌株的组织(法氏囊、肝脏和脾脏)和盲肠滴度以及空肠弯曲杆菌攻击菌
株的盲肠滴度。在口服接种后，RASV在各种组织中随时间定量计数。

[0481] NIH RAC和UF IBC将具有调控的裂解表型和完全生物防护的RASV菌株再分类为用于在商业环境和门诊患者中以1级防护水平使用，对圈养在笼中的小鸡或幼崽进行初始免
疫。然而，对于沙门氏菌血清型的攻击，鸟类被安置在Federal Design Molded Isolators中。所有实验工作均按照动物福利法案(Animal Welfare Act)以及关于实验动物人道护理
和使用的公共卫生服务政策(Animal Welfare Act and the Public Health Service 
Policy on Humane Care and Use of Laboratory Animals)的规定和政策进行，并由UF 
IACUC批准。

[0482] e.统计分析。

[0483] 所有结果使用来自SAS程序的最合适的统计学检验来分析，以评估所获得结果的相对显著性或显著性的缺乏。在特定情况下，求教于UF的临床转化科学研究所(Clinical 
Translational Science Institute)的工作人员来为动物和人类研究和试验提供实验设
计和统计分析服务方面的帮助。使用10只鸡/处理组产生>0.80的统计功效。在先前的研究
中，发现n＝10是获得治疗组之间的统计学显著差异的足够禽类数量。但是，最好的RASV在两个机构进行多次评估以证实结论。

[0484] 实施例2.RASV菌株的构建

[0485] 用于衍生菌株开发的起始菌株是鼠伤寒沙门氏菌χ12341(ΔPmurA25::TT araC PBAD murAΔasdA27::TT araC PBAD c2Δpmi-2426ΔwaaL46ΔpagL64::TT rhaRS PrhaBAD waaLΔ(wza-wcaM)-8ΔrelA197::araC PBAD lacI TTΔrecF126ΔsifA2)。该菌株以多个步骤衍生自鼠伤寒沙门氏菌UK-1亲本菌株χ3761。由于活疫苗不能呈现抗生素抗性，因此使用自杀载体技术产生了限定的未标记缺失突变(参见Edwards等人(1998)Gene 207:149-57(195)；Kaniga等人(1998)Infect.Immun.66:5599-606(196)；Maloy和Nunn(1981)
J.Bacteriol.145:1110-2(197)；Miller和Mekalanos(1988)J.Bacteriol.170:2575-83
(198)；Ried和Collmer(1987)Gene 57:239-46(199)；和Roland等人(1999)Avian Dis.43:
429-41(200))。使用分子遗传学、自杀载体和噬菌体P22介导的转导的组合可以产生精确的缺失和缺失-插入突变而没有对相邻基因功能的干扰，也不会留下可能导致遗传不稳定的
重复性疤痕(repetitive scar)(Kang等(2002)J.Bacteriol.184：307-12)(205)。这些方法用于将表3中列出的缺失和缺失-插入突变(以构建表2中列出的菌株以及本文所述的衍生
物)引入鼠伤寒沙门氏菌χ12341中。衍生自pRE112或pMEG-375的自杀载体已经和按照需要
构建。为了防止插入序列对任何相邻基因的表达产生不利影响，可以将从噬菌体基因组分
离的强转录终止子(TT)插入适当的位置以阻断这种不良作用。可以将这些序列对于个体构
建适当地插入到自杀载体中。在构建自杀载体和产生缺失和缺失-插入突变时，分配等位基因数和Chi数以使得能够区分。菌株保存在-80℃下。

[0486] 显示保守的空肠弯曲杆菌N-聚糖的RASV的构建。

[0487] 在这种情况下，将编码也具有佐剂特性的高度保守的，交叉保护性N-聚糖(15、206)(其连接到LPS核心并通过连接于LPS核心的通用UndPP载体运输)的合成的14基因空肠
弯曲杆菌pgl操纵子插入到cysG基因的缺失中，其是对于外源基因插入非必要的和非常有
用的位点。pgl操纵子的表达通过与LacI调控的Ptrc融合来驱动，所述Ptrc通过包含在编码参与多糖合成的许多基因的操纵子的启动子中发现的35bp序列而被修饰(207、208)，这使得
能够合成长mRNA转录物。这种ΔcysG中的插入被引入χ12341衍生物χ12445(表2)中，其中ΔwaaL46ΔpagL64::TT rhaRS PrhaBAD waaL突变已被消除，因为需要WaaL的活性来引起空肠弯曲杆菌N-聚糖的连接和转运(209、210)。由于希望的是在LPS O-抗原的体内受控停止以
更好地呈现保护性表面抗原，因此编码将O-抗原重复单元的第一个糖半乳糖偶联到LPS核
心上的酶的wbaP基因的缺失和araC ParaBADwbP到pagL基因中存在于χ12445中。因此，waaL基因连续表达，且WaaL酶能够将空肠弯曲杆菌N-聚糖连接到LPS核心，合成的Cj1433c蛋白和
任何空肠弯曲杆菌或RASV表面蛋白如OmpC和OmpD与用作N-糖基化的受体序列的D/E-X1-N-
X2-T/S序列。

[0488] 通过将全部或部分cj1433c基因(209)插入到ompA基因的缺失中以产生Cj1433c蛋白的融合体来进一步修饰该χ12445菌株，所述Cj1433c蛋白具有9个用于N-聚糖结合的
DLNNT序列的重复，及ompA编码的信号序列。应该注意的是，OmpA蛋白是最丰富的沙门氏菌表面抗原之一，对于定植和毒力是完全不必要的，并且是最具免疫原性的沙门氏菌蛋白之
一，但不能提供任何保护性免疫。

[0489] 实施例3：呈现空肠弯曲杆菌N-聚糖的RASV

[0490] 目前正在构建的一种RASV呈现保守的空肠弯曲杆菌特异性N-聚糖抗原，并合成具有多个N-糖基化靶标的空肠弯曲杆菌外膜蛋白。这将通过表达平衡致死质粒上的来自空肠
弯曲杆菌的14-基因pgl操纵子或在插入到染色体中和将编码经典细菌N-糖基化序列D/E-
X-N-Y-T/S的序列插入编码RASV表面抗原的基因中之后实现，该操纵子编码酶以合成与许
多空肠弯曲杆菌表面蛋白连接的免疫保护性N-连接聚糖。该RASV可以进一步修饰以引起用
于铁和锰的摄取的保守的交叉反应抗原的体内展示，从而产生将诱导针对大多数沙门氏菌
血清型的交叉保护性免疫而同时还递送多种空肠弯曲杆菌蛋白抗原以诱导对空肠弯曲杆
菌的优异的保护性免疫的RASV。

[0491] 编码空肠弯曲杆菌pgl操纵子的RASV的构建。

[0492] 空肠弯曲杆菌具有14-基因pgl操纵子，其编码用于合成和配置高度保守的交叉保护性N-聚糖的酶(15、206)。图7描绘了pgl操纵子。当连接到用于附接LPS核心的通用UndPP载体并由其运输时，N-聚糖具有佐剂性质。由于pgl操纵子核苷酸序列的长度，尚未尝试优化密码子用于在沙门氏菌中的表达，因为这需要密码子优化和合成随后需要重组装成全长
操纵子的片段。尽管这是可能的，但天然空肠弯曲杆菌序列最初克隆并插入到低拷贝数Asd+质粒pYA3337(pSC101 ori)的修饰衍生物(pG8R160)中，该pYA3337具有通过插入增强长操
纵子的完整转录的35bp插入物而修饰的LacI阻遏Ptrc启动子(206、207)。由于pglB基因编码寡多糖转移酶，它具有对沙门氏菌WaaL酶的重复的竞争活性，并且pglB基因的缺失使得能
够更好地向LPS核心添加N-聚糖(参见图5)以使其能够转移至蛋白质中的D/E-X-N-Y-T/S序
列。因此删除pG8R160衍生构建体pG8R161中的pglB基因。随后的插入pgl操纵子序列具有～
30％的GC含量，并且仍含有在高度表达的沙门氏菌基因中不常使用的密码子。然而，这可能有利于χ12445(ΔPmurA25::TT araC ParaBAD murAΔasdA27::TT araC ParaBAD c2Δpmi-2426Δ(wza-wcaM)-8ΔrelA197::araC ParaBAD lacI TTΔrecF126ΔsifA26ΔwbaP45Δ
pagL14::TT araC ParaBAD wbaP)的RASV衍生物的健康，因为即使在低拷贝数质粒上基因的过表达也可以导致减少的生长。因此，较低的基因表达水平可能是有益的。

[0493] 呈现保守的空肠弯曲杆菌N-聚糖的RASV的构建。

[0494] pgl操纵子插入低拷贝数pYA3337(pSC101 ori)Asd+质粒pG8R161(见上文)中，并将插入cysG基因的缺失中，其是非必需的，并且是非常有用的外源基因插入的位点。pgl操纵子的表达通过与LacI调控的Ptrc启动子的融合来驱动，所述启动子通过包含在编码参与
多糖合成的许多基因的操纵子的启动子中发现的35bp序列而被修饰(207、208)。这使得能
够合成长mRNA转录物。ΔcysG中的插入被引入χ12445(表2)中，其中ΔwaaL46ΔpagL64::TT rhaRS PrhaBAD waaL突变被消除，因为需要WaaL的活性来引起空肠弯曲杆菌N-聚糖的连接和转运(209、210)。由于希望的是LPS O-抗原合成的体内受控停止以更好地展示保护性表面
抗原，因此插入了编码将O-抗原重复单元的第一糖半乳糖偶联到LPS核心上的酶的wbaP基
因的缺失，并将araC ParaBAD wbaP插入pagL基因中。以多个步骤从χ12341衍生的所得菌株是χ12445(ΔPmurA25::TT araC ParaBAD murAΔasdA27::TT araC ParaBAD c2Δpmi-2426Δ(wza-wcaM)-8ΔrelA197::araC ParaBAD lacI TTΔrecF126ΔsifA26ΔwbaP45ΔpagL14::TT 
araC ParaBAD wbaP)。在具有pgl操纵子的质粒或cysG插入的该菌株中，waaL基因被连续表达，并且WaaL酶将空肠弯曲杆菌N-聚糖连接到LPS核心上，合成的Cj1433c蛋白质融合体(见下文)和任何空肠弯曲杆菌或RASV表面蛋白(如OmpC和OmpD)与作为N-糖基化的受体序列的
D/E-X1-N-X2-T/S序列。通过将Cj1433c基因(209)插入到ompA基因的部分缺失中以产生具有用于N-聚糖结合的9个DLNNT序列重复的Cj1433c蛋白与ompA编码的信号序列的融合体而对
χ12445进一步修饰。应该注意的是，OmpA蛋白是最丰富的沙门氏菌表面抗原之一，对于定植和毒力是完全不必要的，并且还是最具免疫原性的沙门氏菌蛋白之一，但不能提供任何保
护性免疫。如果需要，可以将ΔPfur::TT araC PBAD fur和ΔPmntR::TT araC PBAD mntR缺失-插入突变添加到χ12445中以导致铁和锰摄取所需的所有基因的体内上调。由于对IROMP的
免疫反应在肠杆菌科中是交叉反应性的，因此随着LPS O-抗原合成体内停止(由于pmi突变
和缺乏甘露糖及wbaP基因的araC ParaBAD调控的关闭)以更好地暴露表面蛋白抗原，该菌株诱导增强的对沙门氏菌血清型和其它肠道细菌的交叉保护性免疫。

[0495] Cj1433c-OmpA融合体的构建并插入到χ12445中的ΔompA11突变中。

[0496] 空肠弯曲杆菌的基因组富含AT，这导致鼠伤寒沙门氏菌中转录保真度的问题。Cj1433c基因特别“坏”，因为它的GC含量仅为26.4％。进行两次连续密码子优化以改善该基因或其部分在RASV菌株中的准确表达。下面给出Cj14433c基因的原始和改进的核苷酸序
列，其中指示了指定蛋白质中的N-糖基化位点的序列。

[0497] Cj1433c 1107bp(368aa)无信号肽，26.4％的GC

[0498] 各种空肠弯曲杆菌之间的同一性；低(31％-100％)许多序列仅与部分序列比对

[0499] 第一行；原始的(26.4％)

[0500] 第二行；最佳优化的(45.9％)

[0501] 第三行；对于高GC(49.1％)修饰的丝氨酸、缬氨酸、甘氨酸(S，V和G)修饰的

[0502] N-聚糖添加位点加下划线

[0503]

[0504]

[0505]

[0506] 指明所有16个跨膜序列的OmpA蛋白的拓扑结构由Reusch等人，Int.J.Mol.Sci.2013,14(6):10727-10748(213)(214、215)图解表示，其全部内容通过引用明确并入本文。基于生物信息学分析，插入编码N-糖基化位点的重复(氨基酸21至86)的一
部分空肠弯曲杆菌Cj1433c基因作为跨越并包含OmpA的3和4个跨膜序列(氨基酸70至107)
的环的替代物插入。

[0507] 具有部分Cj1433c序列的插入的修饰的OmpA的编码序列

[0508] 删除OmpA的β环3和4(aa 70-107)并插入Cj1433c的66aa(aa21至86)，其指定用于N-糖基化的9个重复。

[0509]

[0510]

[0511]

[0512] OmpAΔ70-107::Cj1433 aa21-86

[0513] ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTAGCGCAGGCCGCTCCGAAAGATAACACCTGGTACGCTGGTGCTAAACTGGGCTGGTCTCAGTACCATGACACCGGCTTCATTCACAATGAT
GGCCCGACTCATGAAAACCAACTGGGCGCAGGTGCTTTTGGTGGTTACCAGGTTAACCCGTATGTCGACATCAAAA
TCGACCTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAA
CACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCGAC
CTGAACAACACCAAAATCGACCTGAACAACACCAAAATCCTGCAGATCACTGACGATCTGGACGTTTATACCCGTC
TGGGTGGTATGGTATGGCGTGCAGACACCAAGTCTAACGTCCCTGGCGGCCCGTCTACTAAAGACCACGACACCGG
CGTTTCCCCGGTATTCGCGGGCGGTATCGAGTATGCTATCACCCCTGAAATCGCAACCCGTCTGGAATACCAGTGG
ACTAACAACATCGGTGATGCCAACACCATCGGCACCCGTCCGGACAACGGCCTGCTGAGCGTAGGTGTTTCCTACC
GTTTCGGCCAGCAAGAAGCTGCTCCGGTAGTAGCTCCGGCACCAGCTCCGGCTCCGGAAGTACAGACCAAGCACTT
CACTCTGAAGTCTGACGTACTGTTCAACTTCAACAAATCTACCCTGAAGCCGGAAGGCCAGCAGGCTCTGGATCAG
CTGTACAGCCAGCTGAGCAACCTGGATCCGAAAGACGGTTCCGTTGTCGTTCTGGGCTTCACTGACCGTATCGGTT
CTGACGCTTACAACCAGGGTCTGTCCGAGAAACGTGCTCAGTCTGTTGTTGATTACCTGATCTCCAAAGGTATTCC
GTCTGACAAAATCTCCGCACGTGGTATGGGCGAATCTAACCCGGTTACCGGCAACACCTGTGACAACGTGAAACCT
CGCGCTGCCCTGATCGATTGCCTGGCTCCGGATCGTCGCGTAGAGATCGAAGTTAAAGGCGTTAAAGACGTGGTAA
CTCAGCCGCAGGCTTAA(SEQ ID NO:77)

[0514] 图8A-8B描绘了修饰的鼠伤寒沙门氏菌OmpA蛋白的结构方面，其具有Cj1433c基因编码的序列的插入，指定了由于空肠弯曲杆菌pgl操纵子和沙门氏菌WaaL酶的活性而与其
附接的空肠弯曲杆菌保守N-聚糖的9个重复。所得构建体目前引入自杀载体中，该载体用于将编码该Cj14433c-OmpA融合体的序列引入到χ12445染色体中以代替野生型ompA基因。然
后将该菌株进一步修饰以递送编码早先研究中发现最有效地降低空肠弯曲杆菌攻击菌株
的盲肠滴度的空肠弯曲杆菌抗原的裂解质粒。重复通过免疫白来杭鸡和肉鸡的上述实验。

[0515] 增强针对沙门氏菌血清型和其它肠道细菌的保护性免疫的IROMPS和MnOMPs的产生。

[0516] ΔPfur::TT araC PBAD fur突变插入χ12341中以产生χ12396(表2)，并且也插入ΔPmntR::TT araC PBAD mntR缺失-插入突变(表3)以导致铁和锰摄取所需的所有基因的体内上调。由于对IROMP的免疫反应在肠杆菌科中是交叉反应性的，因此随着LPS O-抗原合成体内停止(由于pmi突变和甘露糖缺乏及waaL基因的araC ParaBAD调控的关闭)以更好地暴露表面蛋白抗原，该菌株诱导增强的对沙门氏菌血清型和其它肠道细菌的交叉保护性免疫。

[0517] 实施例4：白来杭鸡中RASV-Cj菌株的评价

[0518] 诱导针对沙门氏菌血清型的交叉保护性免疫，防止器官定植和降低盲肠滴度的能力的评估。

[0519] 比较χ12341与实施例2中描述的χ12396的衍生物，评估RASV-Cj的由pG8R17 T2SS载体pG8R86(图8)指定的CjaA的递送。将遵循Hassan和Curtiss(113)描述的实验方案。选择用于这些比较研究的CjaA抗原，因为在一种新的RASV菌株的未发表的研究中，空肠弯曲杆
菌攻击菌株的盲肠滴度降低3至4个数量级。此外，已在约23项先前研究中评估过的CjaA含
有应允许在RASV-Cj菌株中用空肠弯曲杆菌N-聚糖进行糖基化的序列。对孵化日的白来杭
雏鸡进行口服免疫，并在第10天进行第二次免疫。在6周龄时，各自用1×106CFU的表5中列
出的8种沙门氏菌血清型(鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、海德堡沙门氏菌、蒙得维的亚沙门氏菌、Hadar沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、纽波特沙门氏菌和Kentucky沙门氏菌)中的每一种对10只免疫的小鸡和10只未免疫的小鸡进行攻击。攻击后4天和11天，将通过CO2窒息对每
组中的5只鸡实施安乐死，并通过直接接种在SS琼脂上和通过亚硒酸盐-半胱氨酸肉汤富集
(113)定量肝脏、脾脏、卵巢(如果存在)、法氏囊和盲肠中的攻击和疫苗菌株的滴度。增菌肉汤检测低至5/克组织或内容物的细菌滴度。RASV的生物防护特征阻碍它们的检测。

[0520] 第二阶段研究。

[0521] 用两种RASV的混合物重复这些研究，每种RASV递送两种或三种验证的保护性空肠弯曲杆菌抗原。使用上述相同的免疫方案。这用作第一个实验的独立重复，并确定初始结果的重复性水平。还在通过用两种RASV的组合免疫进行攻击10、20和30天后评估鼠伤寒沙门
氏菌和肠炎沙门氏菌攻击菌株的滴度，所述两种RASV各自递送多种空肠弯曲杆菌蛋白抗
原。另一项小型研究旨在确定单次免疫是否足够并确定在初次免疫后多久可以在攻击研究
中检测到对沙门氏菌血清型的保护性免疫。

[0522] 实施例5：肉鸡中RASV-Cj菌株的评估

[0523] 评估包含编码表4中列出的各种空肠弯曲杆菌抗原的裂解质粒的RASV-Cj菌株以确定针对空肠弯曲杆菌定植和持久性的保护水平。初始测试评估χ12341(图4A和4B)或χ
12452(图5)的CjaA抗原递送是否给出最佳结果。然后将最佳递送菌株用于后续评估。通过
测量盲肠内容物中的CFU以及将结果与血清和粪便中的抗体反应相关联来评估保护作用。
编码导致最高水平保护的空肠弯曲杆菌抗原的质粒用于评估针对使用充分表征的空肠弯
曲杆菌菌株以及在美国通常从家禽中分离的鸡分离物混的合物(在表5中列出)的异源攻击
的保护。

[0524] 将从孵化场获得新孵化的日龄肉鸡雏鸡，并且在使用之前，通过在MH琼脂平板上培养泄殖腔拭子和通过PCR确认雏鸡对弯曲杆菌是阴性的。

[0525] 用递送空肠弯曲杆菌抗原(表4)的不同RASV-Cj菌株以1×109CFU/小鸡口服免疫6组3日龄肉鸡(n＝10/组)。10只鸡的对照组接种具有空质粒的RASV-Cj或未疫苗接种。在第
一次接种后10天用RASV重新接种雏鸡。在加强免疫后两周，用空肠弯曲杆菌菌株81-176口
服攻击小鸡(在200μl的PBS中1×105CFU/小鸡)。我们之前使用81-176和鸡空肠弯曲杆菌混
合物的工作表明该剂量导致100％定植(186、211)。攻击后一周，将鸡杀死，收集盲肠内容物，在PBS中均质化，并接种在MH琼脂+CSS平板上。将平板在42℃下微氧孵育3天，并测定盲肠内容物的CFU/g以评价针对空肠弯曲杆菌攻击的保护作用，比较来自接种组的滴度与未
疫苗接种的对照组。预计几种RASV-Cj构建体将导致盲肠空肠弯曲杆菌定植滴度降低超过
100倍。

[0526] 收集血液、胆汁和粪便样品，血清中的IgY反应和粪便中的IgA反应如前所述通过间接ELISA测量(212)。简言之，将微量滴定板用纯化的重组空肠弯曲杆菌蛋白涂覆，洗涤，用Sea Block封闭缓冲液(Pierce，Rockford，IL)封闭。加入测试样品(血清、胆汁或粪便)，洗涤平板并用生物素化的山羊抗鸡IgG或IgA抗体(Bethyl Laboratories，Montgomery，TX)检测抗-空肠弯曲杆菌抗体。洗涤平板并加入链霉抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶溶液
(Southern Biotech，Birmingham，AL)。使用柠檬酸盐缓冲液(pH 4.35)中含有0.03％H2O2的ABTS(Sigma，St.Louis，MO)检测显色。显色后，用1％SDS溶液终止反应，并用酶标仪
(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)测定OD405。

[0527] 测试了被发现在免疫后赋予降低的攻击滴度的多种空肠弯曲杆菌抗原的递送。构建编码多种抗原的质粒并将其引入RASV-Cj菌株中。研究包括比较一种RASV与两种递送相
同或甚至不同空肠弯曲杆菌抗原的RASV的混合物。比较一个剂量与两个剂量的免疫。如果
单一剂量的结果给出令人满意的结果，则研究较低的口服剂量。如上所述评估这些RASV赋
予针对空肠弯曲杆菌盲肠定植的保护的能力。如上所述，保护性反应也与血清和粪便中的
抗体反应相关。使用用携带空质粒的RASV接种的鸡及攻击的鸡和非接种的未攻击的鸡的对
照组。

[0528] 测试选自上述研究的RASV是否赋予针对异源空肠弯曲杆菌菌株攻击的保护作用。用常用的充分表征的空肠弯曲杆菌菌株(NC11168、81116、RM221和81-176)攻击RASV免疫的鸡。此外，鸡用家禽来源的空肠弯曲杆菌分离物的混合物(5种经常从家禽中分离的分离物)攻击。鸡(n＝10/组)通过上述研究确定的最佳方式用选定的RASV(1×109CFU/鸡口服)疫苗
接种，并用200μl的PBS中1×105CFU/鸡的空肠弯曲杆菌菌株攻击。对于混合物，将相同浓度的每种菌株(1×105)在PBS中混合用于攻击。攻击后，如上所述评估针对盲肠定植的保护以
及血清和粪便中的抗体反应。用携带空质粒的RASV接种并用空肠弯曲杆菌攻击的鸡的群组
以及非疫苗接种的未攻击的鸡的群组用作对照。

[0529] 关于安全性和实用性，所有鼠伤寒沙门氏菌菌株中包含排除生物膜形成和在胆汁存在下不能定植胆结石的多个突变。这些相同的突变降低了在小鼠和鸡的肠道中的持久性
10
的能力。在口服施用高达10 CFU后，具有在所提出的鼠伤寒沙门氏菌RASV中的一些相同突
变的伤寒沙门氏菌菌株不能在人类中引起菌血症，并且未在粪便中以存活的可培养形式泄
出(150)。相同基因型的鼠伤寒沙门氏菌菌株在新生(146、147)、怀孕、营养不良和免疫功能低下的小鼠中是安全的。此外，大多数菌株经历受控的延迟裂解，其排除体内持久性和在粪便中(如果泄出)的存活力(142)。而且，这些RASV的传染性和完全毒力需要存在糖类阿拉伯糖、甘露糖和鼠李糖，且因此(如果泄出)不能感染或免疫动物或人类。评估和证明RASV的安全性和有效性的新方法被不断设计，通常是利用APHIS和FDA的高效投入。已经进行了RASV
在水(有和没有氯化)中、由于失水、在污水中、在粪便中、在全血中、在有和没有补体失活的血清中以及在单核细胞衍生的巨噬细胞中的存活的研究。最终进行鼠伤寒沙门氏菌RASV和
在鸡粪、体液和细胞中的这样的测试。

[0530] 虽然沙门氏菌是关于使用BSL2实验室设施和程序以及在ABSL2设施中的动物研究进行的研究的2类病原体，但NIH RAC已经审查了我们的RASV的安全性，并且允许在商业农
业环境中和门诊人类志愿者中，在1级保护下进行所有进行免疫接种的研究。该批准取决于机构生物安全委员会(Institutional Biosafety Committee)的同意，并且UF IBC已经批
准。然而，免疫动物的攻击仍必须在该特定病原体所需的保护水平下进行。

[0531] 参考文献

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