氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用
阅读：272发布：2024-01-05
专利汇可以提供氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提出了 氧 化苦参 碱 在促进瘢痕修复中的应用，以及氧化苦参碱在瘢痕 治疗 药物中的应用，所述药物中的有效成分为氧化苦参碱，以及氧化苦参碱在增生性瘢痕治疗药物中的应用，所述药物中的成分包括氧化苦参碱和辅料，有效成分为氧化苦参碱，以及氧化苦参碱在抑制瘢痕 成 纤维 细胞 自噬中的应用，以及氧化苦参碱抑制瘢痕成纤维细胞自噬的 信号 通路为AMPK/mTOR/p62/LC3-II。，下面是氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用专利的具体信息内容。
氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及医药技术领域，尤其涉及氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用。
背景技术
[0002] 瘢痕是烧伤及创伤后常见的并发症，给患者造成巨大的精神创伤、肉体痛苦及沉重的经济负担。据统计每年全世界约有1000万烧伤病人, 而烧伤后瘢痕的发生率是 91.4%。瘢痕带给病人昂贵的医疗负担, 每年瘢痕的治疗费用预计至少为40亿美元。此外，许多并发症, 诸如，瘙痒、疼痛、失眠、焦虑、功能丧失、组织运动受限，最可怕的是瘢痕组织可发生恶性转变为瘢痕癌。现行瘢痕疗法不尽如人意，或副作用大，或使用周期长且费用昂贵，理想疗法还需不断探索。
[0003] 中医药是中华民族传承下来的瑰宝，历经几千年的实践积累，应用于瘢痕修复，具有独特疗效。然而中草药成分复杂、药效物质不明，并且缺乏系统的现代科学理论体系支持，难以在国际上推广应用。Oxymatrine（氧化苦参碱）是从苦参中提取的有效成分，被证实具有多种生物活性。临床和药理研究发现，氧化苦参碱具有抗炎、抗纤维化、免疫调节和抗肿瘤等作用。
发明内容
[0004] 有必要提出氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用。
[0005] 还有必要提出氧化苦参碱在促进增生性瘢痕修复中的应用。
[0006] 还有必要提出氧化苦参碱在瘢痕治疗药物中的应用，所述药物中的有效成分为氧化苦参碱。
[0007] 还有必要提出氧化苦参碱在增生性瘢痕治疗药物中的应用，所述药物中的成分包括氧化苦参碱和辅料，有效成分为氧化苦参碱。
[0008] 还有必要提出氧化苦参碱在抑制瘢痕成纤维细胞自噬中的应用。
[0010] 图1为猪全层烧伤瘢痕模型。
[0011] 图2、3为三组试验的瘢痕变化图及评分图。
[0012] 图4为三组试验组的模型瘢痕的表皮厚度、真皮厚度、胶原蛋白变化图。
[0013] 图5-1为三组试验组的模型瘢痕角质细胞分化变化图。
[0014] 图5-2为三组试验组的模型瘢痕角质细胞增殖变化图。
[0015] 图5-3为三组试验组的模型瘢痕中促纤维化相关转化生长因子TGF-β1变化图。
[0016] 图5-4为三组试验组的模型瘢痕中α-平滑肌肌动蛋白α-SMA 变化图。
[0017] 图5-5为三组试验组的模型瘢痕的I型胶原蛋白Collagen I变化图。
[0018] 图6为成功分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞加入Oxymatrine后染色图。
[0019] 图7为Oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性的柱状图。
[0020] 图8为Oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的柱状图。
[0021] 图9、10为Oxymatrine减少人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白合成量的染色图和柱状图。
[0022] 图11、12为Oxymatrine诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的染色图和柱状图。
[0023] 图13为Oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬的荧光图。
[0024] 图14-17通过Western Blot显示Oxymatrine下调自噬相关蛋白LC3-II、p-AMPK表达，上调p-mTOR、p62的表达。
具体实施方式
[0025] 为了更清楚地说明本发明的技术效果，以下将从测试Oxymatrine（氧化苦参碱）是否具有修复瘢痕的作用和揭示Oxymatrine修复增生性瘢痕的机理两个方面对本发明进行说明。
[0026] 1.测试Oxymatrine（氧化苦参碱）是否具有修复瘢痕的作用。
[0027] （1）构建猪烧伤增生性瘢痕模型；图1为猪全层烧伤瘢痕模型。
[0028] A、巴马小型实验猪，B、烧伤模具，C、加热水箱，D、制造烧伤创面，E、弹力防护外衣，F、烧伤3周创面，G、创面清创，H、清创后2周创面，I、清创后3周创面，J、清创后4周创面，K、清创后5周增生性瘢痕形成。
[0029] （2）临床瘢痕评估检测Oxymatrine促进增生性瘢痕修复。
[0030] （3）苏木精—伊红（H/E）染色检测Oxymatrine促进增生性瘢痕修复；（4）免疫组化检测Oxymatrine促进增生性瘢痕修复。
[0031] 通过前期猪烧伤瘢痕模型实验显示Oxymatrine促进增生性瘢痕修复的情况，具体表现为瘢痕面积变化，表皮厚度变化，胶原蛋白含量变化。
[0032] 参见图2、3，硅酮凝胶为阳性对照试验组，盐水为阴性对照试验组，Oxymatrine（OMT）为本发明试验组，图2中对三组试验的瘢痕评分，由图可知，使用OMT后能够降低瘢痕评分；由图3可见，使用OMT后能够减少瘢痕面积。
[0033] 参见图4，第一列H/E显示三组试验组的模型瘢痕的表皮厚度明显减少、真皮厚度明显减少，A、B、C、D分别为0、1、4、8周的变化图片，由第二列至六列可见，CK10、p63、TGF-β1、α-SMA、Collagen I的数量明显减少，可见OMT能够抑制CK10、p63、TGF-β1、α-SMA、Collagen I的表达。
[0034] 参见图5-1、图5-2、图5-3、图5-4、图5-5，由图可知，使用OMT能够抑制CK10、p63、TGF-β1、α-SMA、Collagen I的表达。
[0035] 2.揭示Oxymatrine修复瘢痕的机理。
[0036] （1）成功分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞。参见图6。该图中，OMT分别采用4.5mg/ml，1.5mg/ml，0.5mg/ml三个浓度来做对比试验。
[0037] （2）检测Oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性；（Alamar Blue法）；参见图7。该图中，可见Oxymatrine能够明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性。
[0038] （3）检测Oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖；（Brdu法）；参见图8。该图中，可见Oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖。
[0039] （4）检测Oxymatrine减少人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白合成量；（Sirius Red法）；参见图9、10，图9为胶原蛋白的染色图，图10显示4.5mg/ml的OMT明显减少胶原蛋白合成。
[0040] （5）检测Oxymatrine诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡；（Tunel法）；参见图11、12。图11为凋亡的染色图，图12显示4.5mg/ml的OMT能够明显诱导细胞的凋亡。
[0041] （6）检测Oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬(免疫荧光，Western Blot)；参见图13、14。图13通过免疫荧光细胞学实验显示Oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬。图14A显示Oxymatrine下调自噬相关蛋白LC3-II的表达的条带图，14B为条带图对应的柱状图；图15A显示Oxymatrine下调自噬相关蛋白p-AMPK的表达的条带图，15B为条带图对应的柱状图；图16A显示Oxymatrine上调自噬相关蛋白p-mTOR的表达的条带图，16B为条带图对应的柱状图，图17A显示Oxymatrine上调自噬相关蛋白p62的表达的条带图，17B为条带图对应的柱状图。
[0042] 由以上试验可以得到，氧化苦参碱（Oxymatrine）在促进瘢痕修复中具有显著的作用，能够应用于制备治疗瘢痕的药物中，且氧化苦参碱（Oxymatrine）促进瘢痕修复是通过抑制瘢痕成纤维细胞自噬而发挥作用的，抑制自噬通路为AMPK/mTOR/p62/LC3-II。
[0044] 以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
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