检测α-葡聚糖的金标试纸及检测方法
专利汇可以提供检测α-葡聚糖的金标试纸及检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种检测α-葡聚糖的金标 试纸 及检测方法，包括 底板 ，底板上依次相连的样品垫、金标垫、 硝酸 纤维 素膜以及吸样垫。在硝酸 纤维素 膜上设有检测线 抗原 和质控线 抗体 ，在金标垫上设有金标抗体。根据胶体金 免疫层析 试验 (GICA)原理制成，选取抗α-葡聚糖特异性单克隆抗体，采用竞争抑制免疫层析测α-葡聚糖。应用本发明试纸检测α-葡聚糖，特异性强，灵敏度高，操作简单、方便、快捷，不需要特殊仪器设备和专业培训，结果明晰易辨，经济实用。，下面是检测α-葡聚糖的金标试纸及检测方法专利的具体信息内容。
1.一种检测α-葡聚糖的金标试纸，其包括底板，底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜以及吸样垫；
在金标垫上包被有胶体金标记的抗α-葡聚糖的单克隆抗体或抗α-葡聚糖的多克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征在于，所述反应膜位于金标垫一端设有检测区，远离金标垫一端设有质控区，所述检测区上设置了1条或多条互相平行的检测线，检测线上包被有α-葡聚糖-蛋白交联物。
3.根据权利要求2所述的金标试纸，其特征在于，所述质控区设置有质控线，质控线上包被有羊抗鼠抗体IgG。
4.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征在于，所述α-葡聚糖-蛋白交联物的制备方法为：
1）将α-葡聚糖与蛋白混合，用水溶解，冷冻干燥，研磨成粉；
2）将粉末置于50～60℃的恒温，反应至少3天，得到α-葡聚糖-蛋白交联物。
5.根据权利要求4所述的金标试纸，其特征在于，所述蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白中的一种。
6.根据权利要求4所述的金标试纸，其特征在于，所述α-葡聚糖的分子量在10～
2000kDa。
7.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征在于，所述抗α-葡聚糖的单克隆抗体的制备方法如下：
1）将α-葡聚糖-蛋白交联物与佐剂混合，乳化，注射到动物体内，所述α-葡聚糖-蛋白交联物如权利要求4-6任一项的方法制备得到；
2）选取血清效价高的动物体，取其脾细胞制成悬液，并与对数生长期的瘤细胞混合，介导融合、筛选得到可以分泌α-葡聚糖特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
3）使用杂交瘤细胞生产得到α-葡聚糖特异性单克隆抗体或使用腹水法生产得到α-葡聚糖特异性单克隆抗体。
8.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征在于，所述抗α-葡聚糖的单克隆抗体由杂交瘤细胞株D9分泌得到，所述杂交瘤细胞株D9已于2010年12月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2010107。
9.一种半定量检测α-葡聚糖的试剂盒，包括外盒体和盒内支架，其特征在于：所述盒内支架上设置有试纸条凹槽可放置权利要求1～8任一项所述的金标试纸。
10.根据权利要求9所述的半定量检测α-葡聚糖的试剂盒，其特征在于：所述盒内支架上还设置有若干试剂管孔，孔内放置有试剂管，试剂管中分别盛装的试剂包括α-葡聚糖标准品溶液、样品稀释液。
检测α-葡聚糖的金标试纸及检测方法
技术领域
背景技术
发明内容
在金标垫上包被有胶体金标记的抗α-葡聚糖的单克隆抗体或抗α-葡聚糖的多克隆抗体。
2）选取血清效价高的动物体，取其脾细胞制成悬液，并与对数生长期的瘤细胞混合，介导融合、筛选得到可以分泌α-葡聚糖特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
3）使用杂交瘤细胞生产得到α-葡聚糖特异性单克隆抗体或使用腹水法生产得到α-葡聚糖特异性单克隆抗体。
图3为检测结果示意图（α-葡聚糖浓度为5-20ng/ml）；
图4为检测结果示意图（α-葡聚糖浓度为20-50ng/ml）；
图5为检测结果示意图（α-葡聚糖浓度大于50ng/ml）。
具体实施方式
采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金。取50ml 0.1mg/ml的氯金酸溶液，100 r/min搅拌，加热至沸腾，加入2ml 10mg/ml柠檬酸钠溶液，保持原有的反应温度和搅拌速度，继续沸腾反应5min，至溶液颜色刚刚变为清亮橘红色后停止反应。冷却，并置于棕色瓶中4℃避光保存。经电镜检测，胶体金粒径为10-15nm。
40-BSA交联物。用同样的方法制备Dextran T-40-OVA交联物。
1%，搅拌后静置1h， 2000 r/min 、4℃ 低速离心30 min，取上清。将上一步得到的上清液于
12000 r/min、4℃ 高度离心15 min，弃上请，收集沉淀。用0.01M、pH7.2 的PBS 缓冲液(含
1％ BSA)溶解沉淀，置于4℃备用。
1mm，作为质控线（C线），用1％ BSA 进行封闭，真空干燥，4℃保存。
表1 各类样品的检测结果
其中Dextran T2000和Dextran T40标准品溶液的测试结果符合预期。葡萄糖，淀粉，β-葡聚糖等样品不会对检测造成干扰，显示出试纸条具有较好的特异性。
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