用于诊断博尔纳病毒感染的方法
阅读：2发布：2020-08-04
专利汇可以提供用于诊断博尔纳病毒感染的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及：用于诊断边缘系脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、 视网膜 炎或视神经萎缩的方法，其包括检测样品中的博尔纳病毒的步骤，所述博尔纳病毒优选地选自包括下列各项的组： 哺乳动物 2型博尔纳病毒，更加优选地VSBV‑1，和哺乳动物1型博尔纳病毒，更加优选地BoDV‑1；载体，其包含用于捕获针对至少一种多肽的 抗体 的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV‑1‑N、BoDV‑1‑P、VSBV‑N和VSBV‑P； 试剂 盒 ，其包含根据本发明的载体以及用于检测所捕获的抗体的工具和用于检测样品的存在的对照；以及，载体或者试剂盒或者适合于检测博尔纳病毒的引物或正好如此的探针用于诊断脑炎，用于预断移植后并发症，用于监测脑炎或移植后并发症的 治疗 ，或者用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的用途。，下面是用于诊断博尔纳病毒感染的方法专利的具体信息内容。
1.用于诊断边缘系脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩的方法，其包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤，所述博尔纳病毒优选地选自包括下列各项的组：哺乳动物2型博尔纳病毒，更加优选地VSBV-1，和哺乳动物1型博尔纳病毒，更加优选地BoDV-1。
2.用于预断神经病学移植后并发症或者用于筛选器官供者或供者器官的方法，其包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤。
3.用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的方法，其包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤。
4.根据权利要求1至3之一的方法，其中所述检测通过检测所述样品中的针对博尔纳病毒特异性多肽的抗体来进行，所述博尔纳病毒特异性多肽优选地选自包括下列各项的组：
博尔纳病毒的N蛋白、P蛋白和X蛋白。
5.根据权利要求4的方法，其中使所述样品与载体相接触，所述载体包含用于捕获针对至少一种多肽的抗体的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-
1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X。
6.根据权利要求5的方法，其中借助于酶活性、荧光或化学发光来检测所捕获的抗体。
7.根据权利要求1至6之一的方法，其中所述载体选自包括下列各项的组：基于膜的免疫印迹，优选地Western印迹或线印迹；一种或多于一种珠粒；为免疫荧光而准备的生物芯片；和用于ELISA的微量滴定板。
8.载体，其包含用于捕获针对至少一种多肽的抗体的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X。
9.根据权利要求5至8之一的方法或载体，其中所述载体进一步包含用于捕获针对至少一种病毒的抗体的工具，所述病毒选自包括下列各项的组：单纯疱疹病毒HSV-1、单纯疱疹病毒HSV-2、人疱疹病毒HHV-6、人疱疹病毒HHV-7、狂犬病病毒、LCMV、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、乌苏土病毒、托斯卡纳病毒、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、马脑炎病毒、基孔贡亚病毒、拉克罗斯病毒、裂谷热病毒、圣路易斯脑炎病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、亨德拉病毒、尼巴病毒、肠道病毒、加利福尼亚脑炎病毒、玻瓦散病毒、墨累山谷脑炎病毒和日本脑炎病毒。
10.根据权利要求5至9之一的方法或载体，其中所述载体进一步包含用于捕获针对神经病学抗原的抗体的工具，所述抗原选自包括下列各项的组：NMDAR、AMPAR、GAD65、双载蛋白、GABA(A)、GABA(B)、DPPX、LgI1、CASPR2、IGLON5、SNARE、NBC1、阀蛋白和ITPR，优选地NMDAR。
11.试剂盒，其包含根据权利要求8至10之一的载体，以及用于检测所捕获的抗体的工具或用于检测样品，优选地血清样品或CSF样品的存在的对照。
12.根据权利要求8至11之一的载体或试剂盒或者适合于检测博尔纳病毒的引物或正好如此的探针用于诊断脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩，用于预断移植后并发症，用于监测脑炎或移植后并发症的治疗，或者用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的用途。
13.根据权利要求8至11之一的载体或试剂盒或者包含用于捕获针对NMDAR的抗体的工具的载体用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎，优选地边缘系脑炎的用途。
14.抗原性多肽或其变体在制备用于诊断脑炎，优选地用于鉴别诊断边缘系脑炎的诊断剂或试剂盒中的用途，所述抗原性多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N、VSBV-P、NMDAR、AMPAR、GAD65、双载蛋白、GABA(A)、GABA(B)、DPPX、LgI1、CASPR2、IGLON5、SNARE、NBC1、阀蛋白和ITPR。
15.对于博尔纳病毒有效的药物用于预防或治疗移植后并发症或者脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩的用途，所述脑炎优选地为边缘系脑炎。
用于诊断博尔纳病毒感染的方法
[0001] 本发明涉及：用于诊断边缘系脑炎、副肿瘤综合征(PNS)、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩的方法，其包括检测样品中的博尔纳病毒的步骤，所述博尔纳病毒优选地选自包括下列各项的组：哺乳动物2型博尔纳病毒，更加优选地VSBV-1，和哺乳动物1型博尔纳病毒，更加优选地BoDV-1；载体，其包含用于捕获针对至少一种多肽的抗体的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N和VSBV-P；试剂盒，其包含根据本发明的载体以及用于检测所捕获的抗体的工具和用于检测样品的存在的对照；以及，载体或者试剂盒或者适合于检测博尔纳病毒的引物或正好如此的探针用于诊断脑炎，用于预断移植后并发症，用于监测脑炎或移植后并发症的治疗，或者用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的用途。
[0003] 在及时得到识别的情况下，存在对于许多脑炎有效的治疗方法，然而，其取决于疾病的原因而显著不同。由细菌引起的脑炎症可以用抗生素来进行治疗，而病毒性脑炎可以通过静脉内给予抗病毒药剂例如阿昔洛韦来进行治疗，因此在由于自身免疫性而引起的脑炎的情况下，施用免疫抑制性药剂是适当的。
[0004] 在表现轻的情况下，脑炎经常完全不被察觉。该疾病越早治疗越好，因此特别重要的是，尽管有着非特异性的和可能轻微的症状，但是能够及早地和可靠地做出诊断。如果错误地进行治疗或未进行治疗，那么可以导致具有持久损害的严重的疾病，例如麻痹、言语障碍和精神残疾。在细菌性脑炎的情况下，死亡率在50％之内；在由单纯疱疹病毒引起的脑炎的情况下，死亡率甚至达70％。
[0005] 近几年，发现了病毒性的或由于自身免疫性而引起的脑炎的许多表现，例如由于针对NMDAR(EP2057466 B1)、GABA(A)(EP2863231 A1)、GABA(B)(EP2483417 B1)、DPPX(US9719993 BB)、LgI1(US9250250 BB)、IGLON5(EP2905622 A1)、SNARE(EP17001205)、NBC1(EP3026434 A1)、阀蛋白(EP3101424 A1)和ITPR(EP3018478 A1)的自身抗体而引起的脑炎。
[0006] 尽管如此，仍然还总是存在有大量的罹患具有对于脑炎来说典型的症状的疾病但是未能被正确地诊断的患者(Bloch和Glaser(2007)Diagnostic approaches for patients with suspected encephalitis.Current Infectious Disease Reports(4):315-22)。这特别地涉及具有边缘系脑炎的患者群组，所述边缘系脑炎在文献中被描述为无列外地由于自身免疫性而引起(Melzer等人,(2015)Limbic Encephalitis:Potential Impact of Adaptive Autoimmune Inflammation on Neuronal Circuits of the Amygdala.Front.Neurol.3,6:171)。
[0007] 一个特别有风险的群组是经历了器官移植的患者。除了这些患者本来就虚弱的状态之外，在移植后以高剂量长年给予药物(免疫抑制剂)有利于各种各样的疾病例如机会性感染的发作。一个重要的问题，特别是在实体器官移植的情况下，在于神经病学并发症，其毕竟涉及10％至59％的接受者(Senzolo等人,(2009)Neurologic complications after solid organ transplantation.Transpl.Int.(3):269-78，10-59％)。
[0008] 在许多情况下，不清楚的是，这些神经病学并发症由于什么而引起。除了神经病学感染症状外，还可以考虑所施用的免疫抑制剂的神经毒性。因此，给予皮质类固醇导致增高的肌病风险。肝衰竭也可能以神经病学症状的形式表现出来(Shalimar等人,(2015)Management in Acute Liver Failure.J.Clin.Exp.Hepatol.(5):pp 104-115)。
[0009] 哺乳动物中的博尔纳病毒感染在100多年前就已经进行了描述。在马中，已知哺乳动物博尔纳病毒BoDV-1是脑炎的原因。在该情况下，出现持续的在中枢神经系统中的疾病，其后果是发展出非脓性脑膜脑炎(脑炎症和脑膜炎症)。患病的动物发展出运动障碍，因行为奇特而与众不同，并且经常由于感染而死亡。
[0010] Hoffmann等人,(2015)A variegated squirrel bornavirus associated with fatal human encephalitis,N Engl J Med 2015,373,pp 154-162描述了侵袭杂色松鼠的博尔纳病毒(“VSBV-1”，即杂色松鼠博尔纳病毒-1(Variegated Squirrel Bornavirus-1))对于几位具有先期疾病(高血压、糖尿病和/或肥胖症)的老年男性患者的以致命方式行进的病毒感染。所有患者均罹患血栓形成，其导致肺栓塞。所述患者罹患脑炎，然而其不是边缘系脑炎，而是没有边缘系分布的在脑皮层区域中具有水肿性损伤的病象。借助于基于被完整BoDV-1病毒感染的猫细胞系的间接免疫荧光测试(IIFT)来检测针对博尔纳病毒的抗体。
[0011] 在21世纪初，一个工作组做了关于据称的在精神病学疾病与被侵袭马的那一种类的博尔纳病毒感染之间的相互关系的报道。这些结果未能被独立的专家重现，并因此在学术界没有得到承认。相反地，Robert Koch Institut得出结论：“根据本发现，必须认为由Bode等人(2001)所描述的测试不适合用于有意义的诊断”(https://www.rki.de/DE/Content/Forsch/Forschungsschwerpunkte/NeueRisiken/NeuartigeErreger/Einstellung_Projekt_Bornavirus.html，于2017年12月14日检索的)。迄今在现有技术中还未描述过在人中的由BoDV-1引起的脑炎。
[0012] 在媒体声明中，Friedrich Institute做了关于开发用于检测VSBV-1的测试的报道(http://www.wir-sind-tierarzt.de/2015/07/bestaetigt-bunthoernchen-uebertragen-bornaviren/，于2017年12月14检索的)。
[0013] 在该背景下，作为本发明基础的任务是提供经改善的用于诊断病毒感染，特别是博尔纳病毒感染的检测系统，其优选地具有相对于现有技术中所描述的系统而言经改善的诊断可靠性，特别是在特异性和/或灵敏度方面。
[0014] 此外，作为本发明基础的任务是提供用于诊断，特别是鉴别诊断脑炎的检测系统，其重点是边缘系脑炎，所述检测系统特别地允许区别由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的(特别是由于病毒感染而引起的)脑炎，更加优选地边缘系脑炎。
[0015] 此外，作为本发明基础的任务是提供允许诊断、治疗和预防移植后并发症，特别是具有神经病学症状的并发症的检测系统。
[0017] 在第一个方面，作为本发明基础的任务通过用于诊断边缘系脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩的方法而得到解决，所述方法包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤，所述博尔纳病毒优选地选自包括下列各项的组：哺乳动物2型博尔纳病毒，更加优选地VSBV-1，和哺乳动物1型博尔纳病毒，更加优选地BoDV-1。
[0018] 在第二个方面，作为本发明基础的任务通过用于预断神经病学移植后并发症或者用于筛选器官供者或供者器官的方法而得到解决，所述方法包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤。
[0019] 在第三个方面，作为本发明基础的任务通过用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的方法而得到解决，所述方法包括检测样品，优选地人样品中的博尔纳病毒的步骤。
[0020] 在一个优选的实施方案中，所述检测通过检测所述样品中的针对博尔纳病毒特异性多肽的抗体来进行，所述博尔纳病毒特异性多肽优选地选自包括下列各项的组：博尔纳病毒的N蛋白、P蛋白和X蛋白。
[0021] 在一个进一步的优选的实施方案中，使所述样品与载体相接触，所述载体包含用于捕获针对至少一种多肽的抗体的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X。
[0022] 在一个进一步的优选的实施方案中，借助于酶活性、荧光或化学发光来检测所捕获的抗体。
[0023] 在一个进一步的优选的实施方案中，所述载体选自包括下列各项的组：基于膜的免疫印迹，优选地Western印迹或线印迹；一种或多于一种珠粒；为免疫荧光而准备的生物芯片；和用于ELISA的微量滴定板。
[0024] 在第四个方面，作为本发明基础的任务通过载体而得到解决，所述载体包含用于捕获针对至少一种多肽的抗体的工具，所述多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X。
[0025] 在一个优选的实施方案中，所述载体进一步包含用于捕获针对至少一种病毒的抗体的工具，所述病毒选自包括下列各项的组：单纯疱疹病毒HSV-1、单纯疱疹病毒HSV-2、人疱疹病毒HHV-6、人疱疹病毒HHV-7、狂犬病病毒、LCMV、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、乌苏土病毒(Usutu virus)、托斯卡纳病毒(Toscana virus)、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、马脑炎病毒、基孔贡亚病毒、拉克罗斯病毒、裂谷热病毒、圣路易斯脑炎病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、亨德拉病毒(Hendra virus)、尼巴病毒(Nipah virus)、肠道病毒、加利福尼亚脑炎病毒、玻瓦散病毒、墨累山谷脑炎病毒和日本脑炎病毒。
[0026] 在一个优选的实施方案中，所述载体进一步包含用于捕获针对神经病学抗原的抗体的工具，所述抗原选自包括下列各项的组：NMDAR、AMPAR、GAD65、双载蛋白、GABA(A)、GABA(B)、DPPX、LgI1、CASPR2、IGLON5、SNARE、NBC1、阀蛋白和ITPR。
[0027] 在第五个方面，作为本发明基础的任务通过试剂盒而得到解决，所述试剂盒包含根据本发明的载体，以及用于检测所捕获的抗体的工具或用于检测样品的存在的对照。
[0028] 在第六个方面，作为本发明基础的任务通过根据本发明的载体或试剂盒或者适合于检测博尔纳病毒的引物或正好如此的探针或者用于检测针对博尔纳病毒的抗体的工具用于诊断脑炎、PNS、脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩，用于预断移植后并发症，用于监测脑炎或移植后并发症的治疗，或者用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎的用途而得到解决。
[0029] 在第七个方面，作为本发明基础的任务通过根据本发明的载体或试剂盒或者包含用于捕获针对NMDAR的抗体的工具的载体用于区分由自身免疫引起的脑炎和由感染引起的脑炎，优选地边缘系脑炎的用途而得到解决。
[0030] 在第八个方面，作为本发明基础的任务通过抗原性多肽或其变体在制备用于诊断脑炎，优选地用于鉴别诊断边缘系脑炎的诊断剂或试剂盒中的用途而得到解决，所述抗原性多肽选自包括下列各项的组：BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N、VSBV-P、NMDAR、AMPAR、GAD65、双载蛋白、GABA(A)、GABA(B)、DPPX、LgI1、CASPR2、IGLON5、SNARE、NBC1、阀蛋白和ITPR。
[0031] 在第九个方面，作为本发明基础的任务通过对于博尔纳病毒有效的药物用于预防或治疗移植后并发症或者脑炎，优选地边缘系脑炎的用途而得到解决。
[0032] 本发明基于发明人的令人惊讶的发现：如果不是仅就针对一种博尔纳病毒种类的抗体，而是就针对BoDV-1和VSBV的抗体来检查相应的样品，那么在患者，特别是人患者中的博尔纳病毒感染可以特别可靠地得到诊断。
[0033] 此外，本发明基于发明人的令人惊讶的发现：边缘系脑炎不仅可以以自身免疫性疾病的形式发生，而且可以由于病毒感染(特别是博尔纳病毒感染)引起而发生；并且它可以通过检测针对博尔纳病毒的抗体而得到诊断。
[0034] 此外，本发明基于发明人的令人惊讶的发现：移植后并发症(包括神经病学症状和疾病，或者更确切地说，脑脊髓炎、白质脑病、视网膜炎或视神经萎缩)可以由于博尔纳病毒(特别是BoDV-1)的传播而引起，并且可以通过检测针对博尔纳病毒的抗体来进行诊断并相应地进行治疗。此外，通过在它们的样品中检测针对博尔纳病毒的抗体，可以就其质量来查验器官供者和供者器官。同样地，可以弄明白对器官接受者进行预防性抗病毒治疗或免疫接种是否是适当的。
[0035] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的术语“边缘系脑炎”被理解为是指中枢神经系统的一种神经病学疾病，其中MRI检查显示出在属于边缘系统的脑区域中的异常信号强度，特别是颞内侧信号升高，特别是在几天内未正常化的那些。更加优选地，出现从由下列各项组成的组中选择的三个症状中的至少一个：新记忆障碍、颞叶癫痫发作和情感失常。在文献中公开了特征性的MRI图像，例如在Simon/Greenberg/Aminoff,Clinical Neurology,第7版,2009,第66页(图1-23)中。
[0036] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的术语“诊断”被理解为是指这样的程序，在所述程序中获得信息，所述信息支持评估或总的来说首先允许评估受试者是否罹患疾病或者以比平常人高的概率罹患疾病或者在过去罹患了或在未来将会罹患疾病，同样地，疾病是否正在进展或者它在未来将会如何发展；或者所述程序是为了评价某一种治疗是否起起作用。例如，在供者或供者器官的样品中检测到博尔纳病毒表明，由于博尔纳病毒而引起的移植后并发症的概率提高。此外，这样的检测表明，患者可以得益于抗病毒治疗(例如用利巴韦林)，但是并不得益于旨在阻止或减少自身抗体形成的免疫抑制治疗。换言之，术语“诊断”不仅包括做出诊断，而且还包括疾病进展或治疗成果的预断和监测，在疾病的情况下。
[0037] 优选地，对于诊断来说仅检测抗体是否存在就足够了，其中可以测定在所述样品中是否存在可检测浓度的抗体。在一个优选的实施方案中，测定在待诊断的患者中的相对抗体浓度是否高于在平常的健康者中的抗体浓度。可以测定所述浓度是否高至在平常的健康者的样品中的浓度的1.1倍，优选地1.2、1.5、2、5、10、20、25、50、100、200、500、1000、10000或100000倍。
[0038] 如果可以检测到针对博尔纳病毒(其优选地选自包括VSBV-1或BoDV-1的组)的抗体，那么这说明了所述患者罹患博尔纳病毒感染的概率提高；或者说明了脑炎(优选地，边缘系脑炎)是由于病毒感染，而不是由于自身免疫性疾病而引起的。此外，在罹患脑炎的患者中检测到此类抗体表明，该患者没有罹患PNS和因此与PNS相关联的癌症，例如小细胞肺癌。
[0039] 检测到针对博尔纳病毒的抗体和待由此推断出的博尔纳病毒感染赞成用抗病毒药物或相应的治疗措施进行治疗性或防备性处理。例如，可以显示，利巴韦林对于博尔纳病毒是有效的。与此相反，给予免疫抑制剂是完全错误的，这是因为这不仅与巨大的副作用相联系，而且减弱患者对于病毒感染和机会性感染的抵抗力。不存在针对博尔纳病毒的抗体和/或存在自身抗体(优选地，针对NMDAR)赞成用免疫抑制剂进行治疗性或防备性处理，所述免疫抑制剂例如选自包括下列各项的组：利妥昔单抗、泼尼松龙、甲泼尼龙、环磷酰胺、吗替麦考酚酯、静脉注射免疫球蛋白、他克莫司、环孢菌素、甲氨蝶呤和硫唑嘌呤。
[0040] 在一个优选的实施方案中，区分待诊断的患者是否具有一种或多于一种(优选地，两种或更多种或者三种或更多种)不同的针对博尔纳病毒的抗体，其中所述抗体任选地选自下组抗体：针对BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X，优选地BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N和VSBV-P的抗体。特别地，检测到针对一种从该组中选择的抗原的抗体可以表明，所述患者罹患早期或潜伏的感染；而检测到针对多于一种(优选地，两种、三种或四种)从该组中选择的抗原的抗体则表明了在临床上明显的感染。
[0041] 技术人员将会理解，这样的检测通常单独地并不允许全面的诊断，而是必须考虑其他方面，例如其他的在样品中待测定的参数、病史、临床症状、既往症或成像方法(例如MRI)的结果。技术人员将会进一步理解，根据本发明的方法的价值可以在于，可以进行间接诊断或鉴别诊断，其中一种疾病的排除表明，所述患者罹患具有类似症状的其他疾病。在一个优选的实施方案中，检测到针对博尔纳病毒的抗体可以表明，所述患者罹患不是自身免疫性疾病的边缘系脑炎。此外，这样的检测可以表明，所述患者没有罹患副肿瘤综合征和/或癌症，优选地小细胞肺癌。相反地，检测到针对NMDA受体的自身抗体可以表明，所述患者没有罹患由病毒引起的脑炎，特别是边缘系脑炎。
[0042] 在一个优选的实施方案中，技术人员重视了在本文中所述及的临床症状，正如在优先权日之时由相应的教科书例如Simon/Greenberg/Aminoff,Clinical Neurology,第7版,2009得知。
[0043] 所述博尔纳病毒优选地为侵袭哺乳动物的博尔纳病毒。更加优选地，所述博尔纳病毒为侵袭人的博尔纳病毒。在一个特别优选的实施方案中，所述博尔纳病毒选自包括下列各项的组：哺乳动物2型博尔纳病毒，更加优选地VSBV-1，和哺乳动物1型博尔纳病毒，更加优选地BoDV-1。
[0044] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的“哺乳动物1型博尔纳病毒”包括AJ311524_BoDV-2_1998、AJ311522_BoDV-1_1980、BDU04608_BoDV-1_1929、AJ311523_BoDV-1_1994、AB246670_BoDV-1_2004和AB258389_BoDV-1_1997，参见Tappe等人,(2018)Fatal limbic encephalitis in a zoo animal caretaker caused by variegated squirrel bornavirus:Zoonotic bornaviruses as occupational risk,提交的原稿。
[0045] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的“哺乳动物2型博尔纳病毒”包括LT594387_BH122/15-2_C.prevostii_2015、KY488724_BH22/16-36_C.prevostii_2016、KY488723_BH22/16-37_C.prevostii_2016、KY488727_BH22/16-16_T.swinhoei_2016、LT594389_BH49/15-1_C.prevostii_2015、KY488726_BH22/16-34_C.prevostii_2016、LT594388_BH133/15_C.prevostii_2015、KY488722_BH22/16-38_C.prevostii_2016、KY488725_BH22/16-35_C.finlaysonii_2016、LT594383_BH3/16-2_C.prevostii_2016、LT594381_BH122/15-1_C.prevostii_2015、LT594382_BH48/15-1_S.variegatoides_2015、LN713681_H.sapiens_2015、LN713680_S.variegatoides_2015、LT594386_BH3/16-1_C.prevostii_2016、LT594384_BH49/15-6_S.variegatoides_2015、LT594385_BH49/15-11_S.variegatoides_2015、LT594391_BH48/15-2_S.variegatoides_2015、LT594390_BH75/15_S.variegatoides_2015、KY488728_BH21/16_C.prevostii_2016、MF597762_BH55/16_H.sapiens_2016和KY488729_BH12/16_C.prevostii_2016，参见Tappe等人,(2018)Fatal limbic encephalitis in a zoo animal caretaker caused by variegated squirrel bornavirus:Zoonotic bornaviruses as occupational risk,提交的原稿。
[0046] 使用在Shahhosseini N,Lühken R, H,Jansen S, J,Rieger T,Krüger A,Yadouleton A,de Campos R,Cirne-Santos CC,Ferreira DF,
Garms R,Becker N,Tannich E,Cadar D,Schmidt-Chanasit J.(2017)Infect Genet Evol.,55:260-268中所描述的方法学，并结合由Tappe等人,(2018)Fatal limbic encephalitis in a zoo animal caretaker caused by variegated squirrel bornavirus:Zoonotic bornaviruses as occupational risk(提交的原稿)所发表的数据，可以通过全基因组测序来鉴定所有博尔纳病毒。
Garms R,Becker N,Tannich E,Cadar D,Schmidt-Chanasit J.(2017)Infect Genet Evol.,55:260-268中所描述的方法学，并结合由Tappe等人,(2018)Fatal limbic encephalitis in a zoo animal caretaker caused by variegated squirrel bornavirus:Zoonotic bornaviruses as occupational risk(提交的原稿)所发表的数据，可以通过全基因组测序来鉴定所有博尔纳病毒。
[0047] 对于检测抗体的情况，待检查的样品为包含患者的有代表性的一组抗体的样品。优选地，它选自包括下列各项的组：血清、血浆、唾液和CSF。
[0048] 在一个特别优选的实施方案中，还通过使用博尔纳病毒特异性引物和探针以分子遗传学方法来鉴定和检测所述病毒，优选地通过PCR，更加优选地逆转录酶-PCR。所述引物和/或探针可以是对于BoDV-1和/或对于VSBV-1来说特异性的。用于检测VSBV-1的示例性的引物、探针和相应的实验方案描述在Hoffmann等人,(2015)A variegated squirrel bornavirus associated with fatal human encephalitis,N Engl J Med 2015,373,pp 154-162中。关于用于检测所有已知的哺乳动物博尔纳病毒和大多数的侵袭鸟类的博尔纳病毒的广谱测试的相应的试剂和方法以及用于检测BoDV-1的试剂和方法描述在Bourg等人,(2016)Virology Journal,13:151中。
[0049] 简而言之，可以通过下述方式以分子遗传学方法来检测人样品中的博尔纳病毒：首先通过使用商购可得的试剂盒[MagMAXTM Viral RNA Isolation Kit(Life Technologies,Carlsbad,California,USA)]来从样品中提取病毒核酸。随后，可以通过进行测序[Schlottau等人,2018]和将所获得的序列与来自文献例如[Schlottau等人,2018；
GenBank:LN713681，关于VSBV-1；KU748787、AJ311521、AY374521、AY374519，关于BoDV-1；
AJ311524，关于BoDV-2]的已知序列进行比较来测定病毒基因组。
GenBank:LN713681，关于VSBV-1；KU748787、AJ311521、AY374521、AY374519，关于BoDV-1；
AJ311524，关于BoDV-2]的已知序列进行比较来测定病毒基因组。
[0050] 备选地，可以借助于RT-PCR来检测博尔纳病毒。为此，可以通过使用合适的试剂盒例如Viral Mini Kit(Qiagen)来提取病毒RNA。博尔纳病毒的检测可以通过使用在Bourg等人(2016)中所描述的引物“正向引物Borna-2048-F”(5′-CGC GAC CMT CGA GYC TRG T-3′)和“反向引物Borna-2118-R”(5′-GAC ARC TGY TCC CTT CCK GT-3′)经由扩增P基因的61bp片段和X基因的末端来进行。所述检测通过琼脂糖凝胶电泳来进行。BODV-1的定量检测可以通过使用下述引物和探针经由扩增X基因和P基因的161bp片段来进行：BoDV1-1288-F TAGTYAGGAGGCTCAATGGCA，BoDV-1449-RGTCCYTCAGGAGCTGGTC，BoDV1-1346-探针FAM-AAGAAGATCCCCAGACACTACGACG-BHQ1(Schlottau等人,2018)。BODV-1的定量检测可以通过使用下述引物和探针经由扩增M基因和G基因的74bp片段来进行：BoDV1-2262-FCAATYAATGCAGCYTTCAATGTCTT，BoDV1-2336-RGAATGTCYGGGCCGAGAG，BoDV-2316-探针FAM-CCARCACCAATGTTCCGAAGCCG-BHQ1(Schlottau等人,2018)。
[0051] 还可以通过检查组织切片以免疫组织化学方法来检测所述病毒。这在检查供者器官(对于其不存在血液样品)的情况下是一种选择。
[0052] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的术语“移植后并发症”被理解为是指在移植了身体部分之后的并发症，所述身体部分优选地为组织或实体器官，更加优选地实体器官，其更加优选地选自包括下列各项的组：肝、肾、肺、肠、胰腺和心脏。在一个特别优选的实施方案中，所述并发症包括神经病学症状的出现，并且可以包括脑炎，优选地边缘系脑炎。在一个进一步的特别优选的实施方案中，在“移植后并发症”的情况下发生感染。在一个优选的实施方案中，神经病学症状选自包括下列各项的组：四肢麻痹、神经病、意识模糊、构音困难、运动徐缓、震颤、步态不稳、受损的认知能力和记忆力以及神经炎。在一个特别优选的实施方案中，所述移植后并发症包括视觉功能的受损，优选地神经病学眼科症状和/或疾病，特别优选地视神经萎缩。
[0053] 在时间上，“移植后并发症”优选地为在接受者中进行外科手术后，优选地在手术后直至一个月、在前六个月中或晚于六个月出现的并发症。
[0054] 对于筛选器官供者或供者器官，可以在进行移植之前，从供者或其器官获取合适的样品。在供者的情况下，优选地为血液样品、唾液样品或CSF样品。在器官的情况下，检查血液或组织残留物或者样品。所述组织可以来源于从包括下列各项的组中选择的器官：肝、肾、肺、肠、胰腺、心脏和脑。
[0055] 在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的“自身免疫性脑炎”被理解为是指与一种或多于一种自身抗体的出现相关联的脑炎。所述自身抗体优选地为针对神经元自身抗原的自身抗体，所述神经元自身抗原优选地选自包括下列各项的组：NMDAR(EP2057466 B1)、GABA(A)(EP2863231 A1)、GABA(B)(EP2483417 B1)、DPPX(US9719993 BB)、LgI1或CASPR2(US9250250 BB)、IGLON5(EP2905622 A1)、SNARE(EP17001205)、NBC1(EP3026434 A1)、阀蛋白(EP3101424 A1)、DAGLA(EP18196867)、SNARE(EP17001205)和ITPR(EP3018478 A1)。自身抗原的合适的序列公开于在括号中指出的专利文件中。
[0056] 在一个优选的实施方案中，检测样品中的博尔纳病毒。这意味着，在所述样品中检测所述病毒或源自其的分子或者患者的针对所述病毒或源自其的分子的抗体。
[0057] 由于自身免疫性而引起的脑炎，特别是NMDA受体脑炎，而非由于博尔纳病毒感染而引起的脑炎，经常与肿瘤的出现相关联。在一个优选的实施方案中，在本文中所使用的术语“PNS”(副肿瘤神经病学综合征)被理解为是指一种全身性疾病，其由于肿瘤的存在而间接地引起，例如由于肿瘤产生表位或者释放或以增高的量释放物质(例如激素)，在相当的情形下该肿瘤所源自的细胞不释放或不以这样的量释放所述物质。直接或间接的后果可以是自身抗体的形成，其优选地针对神经系统的结构或部分，并且在任何情况下直接地或间接地与神经病学症状的出现相关联并优选地引起它们。已知可以将NMDA受体脑炎与卵巢畸胎瘤的出现相关联。在由于自身免疫性而引起的脑炎的情况下，所述肿瘤不是可检测的。
[0058] 根据本发明的检测可以通过检测对于博尔纳病毒来说特异性的多肽或针对其的抗体，优选地针对其的抗体来进行。所述抗体优选地为针对从包括下列各项的组中选择的病毒多肽的抗体：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X，优选地BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N和VSBV-P。在一个特别优选的实施方案中，检测所述患者是否具有一种、两种、三种、四种或者多于一种、两种、三种、四种、五种或六种针对从包括下列各项的组中选择的病毒多肽的抗体：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X。
[0059] 在一个优选的实施方案中，所述载体包含博尔纳病毒的大约40kDa的核蛋白作为捕获工具。在一个优选的实施方案中，所述载体包含博尔纳病毒的大约23kDa的磷蛋白作为捕获工具。在一个优选的实施方案中，所述载体包含一种或多于一种、两种、三种、四种、五种或六种从包括下列各项的组中选择的多肽或其变体作为捕获工具：BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X，优选地BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N和VSBV-P。在一个优选的实施方案中，所述载体包含BoDV-1-N和BoDV-1-P或其变体。在一个优选的实施方案中，所述载体包含VSBV-N和VSBV-P或其变体。在一个优选的实施方案中，所述载体包含BoDV-1-P和VSBV-P或其变体。在一个优选的实施方案中，所述载体包含VSBV-N和BoDV-1-N或其变体。
[0060] 在一个优选的实施方案中，“BoDV-1-N”、“BoDV-1-P”、“VSBV-N”和“VSBV-P”被理解为是指在本专利申请的优先权日之时分别由Uniprot条目P0C796(BoDV-1-N)、P0C798(BoDV-1-P)、A0A0H5BWD6(VSBV-N)和A0A0H5BWK0(VSBV-P)所描述的序列。VSBV-X优选地具有序列ART67059.1，BoDV-1-X优选地具有序列AIK27011.1。对于所有设置，在优先权日可得的数据库版本和在该日可检索的数据状态是权威性的。在一个优选的实施方案中，博尔纳病毒的N蛋白、P蛋白或X蛋白被理解为是指分别与序列P0C796、P0C798和AIK27011.1具有至少60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的蛋白质，特别优选地其变体。
[0061] 在一个优选的实施方案中，根据本发明所使用的载体为医学装置，优选地诊断装置，其包含用于捕获一种或多于一种抗体的工具。在本文中所使用的术语“用于捕获抗体的工具”被理解为是指这样的试剂，其如此与待检测的抗体特异性地相结合，从而使得该抗体单独地或者以足够的量比另一种抗体，特别是比另一种与同源多肽相结合并且优选地可能招致假阳性结果的抗体更强地进行结合。
[0062] 特别地，对于鉴别诊断(其中目标可以在于，在具有神经病学症状的患者中区别其罹患由自身免疫引起的脑炎还是由感染引起的脑炎，优选地边缘系脑炎)，有利的是，同时捕获和/或检测一方面针对NMDAR的抗体，和另一方面针对BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N、VSBV-P或者在感染时引起类似或易混淆的症状的其他病毒或源自其的抗原的抗体。除了NMDAR和/或至少一种从包括BoDV-1-N、BoDV-1-P、VSBV-N、VSBV-P的组中选择的抗原外，适合于此的载体还具有其他病毒的至少一种抗原，优选地其他病毒的几种抗原。可以用其来检测其他自身抗体的其他抗原同样地是有意义的。在这种情况下，特别可能的是，可以用一种抗原以一个检查轮次就取得阳性检测，并且不是必须用基于排除的诊断来进行工作。
[0063] 在一个特别优选的实施方案中，在抗体的情况下，在本文中所使用的术语“特异性地(相)结合”意味着，它在以1×10-5M，更优选地1×10-7M，更优选地1×10-8M，更优选地1×10-9M，更优选地1×10-10M，更优选地1×10-11M，更优选地1×10-12M的解离常数为特征的结合反应或者更强的结合反应中针对相应的抗原进行结合。优选地，在该情况下，所述解离常数通过使用Biacore设备在25℃下和在处于pH 7的PBS缓冲液中经由表面等离子体共振来测量，并且通过使用由制造商所提供的软件来计算。
[0064] 在一个特别优选的实施方案中，用于捕获抗体的工具为具有被待检测的抗体所识别的表位的多肽或其变体。备选地，也可以使用具有相应的针对待检测的抗体的结合能力的此类多肽的肽模拟物，例如拟肽、β-肽和具有非天然氨基酸的肽。技术人员熟悉此类分子和其设计(Pelay Gimeno M,Glas A,Koch O,Grossmann TN(2015)."Structure-based design of inhibitors of protein-protein interactions:Mimicking peptide binding epitopes".Angewandte Chemie International Edition.54(31):8896-8927)。作为捕获工具的示例性多肽包含SEQ ID NO:7，用于捕获针对人NMDA受体的NR1亚基、其二聚体或者其与NMDA受体的其他亚基例如NR2A(来自EP2057466的SEQ ID NO:3)或NR2B(来自EP2057466的SEQ ID NO:1)或NR2C(来自EP2057466 B1的SEQ ID NO:5)的复合物的抗体，以用于捕获针对NMDA受体的抗体；来自EP2863231A1的SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2，用于捕获针对人GABA(A)受体的抗体；来自EP2483417B1的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3，用于捕获针对人GABA(B)受体的抗体；来自WO2014/041035A1的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4，用于捕获针对DPPX的抗体；来自US9250250BB的SEQ ID NO:2，用于捕获针对LgI1或CASPR2的抗体(US9250250BB)；用于捕获针对IGLON5的抗体，来自EP2905622 A1的SEQ ID NO:1；用于捕获针对NSF的抗体，来自EP17001205的SEQ ID NO:
1；用于捕获针对STX1V的抗体，来自EP17001205的SEQ ID NO:3；用于捕获针对VAMP2的抗体，来自EP17001205的SEQ ID NO:6；用于捕获针对NBC1的抗体，来自Uniprot的序列Q9Y6R1(参见EP3026434A1)；用于捕获针对阀蛋白的抗体，O75955(阀蛋白1，Uniprot)和/或Q14254(阀蛋白2，Uniprot)(参见EP3101424 A1)；和用于捕获针对ITPR的抗体，Q14643(Uniprot)(参见EP3018478 A1)；以及其各自的变体。所述捕获工具可以为病毒本身，优选地以被该病毒感染的细胞(优选地哺乳动物细胞)的形式。所述细胞优选地是经分离的和/或经纯化的。
1；用于捕获针对STX1V的抗体，来自EP17001205的SEQ ID NO:3；用于捕获针对VAMP2的抗体，来自EP17001205的SEQ ID NO:6；用于捕获针对NBC1的抗体，来自Uniprot的序列Q9Y6R1(参见EP3026434A1)；用于捕获针对阀蛋白的抗体，O75955(阀蛋白1，Uniprot)和/或Q14254(阀蛋白2，Uniprot)(参见EP3101424 A1)；和用于捕获针对ITPR的抗体，Q14643(Uniprot)(参见EP3018478 A1)；以及其各自的变体。所述捕获工具可以为病毒本身，优选地以被该病毒感染的细胞(优选地哺乳动物细胞)的形式。所述细胞优选地是经分离的和/或经纯化的。
[0065] 根据本发明的教导不仅可以通过使用所指出的多肽的野生型序列或参考序列(如将它以SEQ ID NO(此后统称为“全长多肽”)或数据库编号的形式或者以别的方式，任选地含蓄地，在此指出)，而且还可以通过使用这些序列的变体来实现。
[0066] 在一个特别优选的实施方案中，在该情况下，在本文中所使用的术语“变体”意指全长多肽的至少一个片段，其相对于全长多肽而言在C-末端和/或N-末端被截短一个或多于一个氨基酸。这样的片段可以包含来自全长多肽序列的5、6、7、8、10、12、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500或600个连续氨基酸的长度，优选地10个或更多个连续氨基酸。
[0067] 在一个进一步的优选的实施方案中，在本文中所使用的术语“变体”不仅包括片段，而且还包括这样的多肽，所述多肽具有以优先级渐增的顺序与全长多肽或其片段具有至少40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，其中没有缺失或非保守性地置换对于生物学活性(例如抗原与对于全长多肽抗原来说特异性的抗体相结合的能力)来说必不可少的氨基酸。现有技术公开了用于确定氨基酸序列的序列同一性的方法，例如在Arthur Lesk(2008),Introduction to bioinformatics,Oxford University Press,2008,第三版中。在一个优选的实施方案中，为此利用ClustalW软件(Larkin,M.A.,Blackshields,G.,Brown,N.P.,Chenna,R.,McGettigan,P.A.,McWilliam,H.,Valentin,F.,Wallace,I.M.,Wilm,A.,Lopez,R.,Thompson,J.D.,Gibson,T.J.,Higgins,D.G.(2007).Clustal W and Clustal X version 2.0.Bioinformatics,23,2947-2948)，其中使用默认设置。
[0069] 变体也可以是与其他已知的多肽或其变体(优选地与用于纯化的标签，其更加优选地选自包括His标签、硫氧还蛋白、麦芽糖结合蛋白、链霉抗生物素蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶或其变体的组)的融合蛋白；并且可以是或具有有活性的部分或结构域，其优选地与全长多肽具有至少70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。在一个优选的实施方案中，术语“有活性的部分或结构域”被理解为是指全长多肽的片段或变体，其保留了全长多肽的至少一部分生物学活性。
[0070] 必要的是，全长多肽的变体具有生物学活性。在一个优选的实施方案中，所述生物学活性为抗原捕获与全长多肽特异性地相结合的抗体的能力。因此，BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X的变体具有捕获分别针对BoDV-1-N、BoDV-1-P、BoDV-1-X、VSBV-N、VSBV-P和VSBV-X的抗体的能力。优选地，抗体是特异性地存在于罹患某种疾病的患者的血液中的抗体。例如，用于捕获针对博尔纳病毒的抗体的抗原的变体具有特异性地结合来自患者的针对博尔纳病毒的这些抗原的抗体的能力。是否是这种情况可以通过使用免疫印迹来测定，如在实施例1中所描述的那样。
[0071] 根据本发明的变体包括例如SEQ ID NO:1(VSBV-N的变体)、SEQ ID NO:3(VSBV-P)、SEQ ID NO:4(BoDV-1-N)和SEQ ID NO:5(BoDV-1-P)。
[0072] 在一个优选的实施方案中，所述捕获工具为经分离的和/或经纯化的多肽，其特别优选地是重组的。在该情况下，“经分离的”多肽可以被理解为是指，将所述多肽从其天然环境中移除。在一个优选的实施方案中，“经纯化的”多肽被理解为是指通过使用色谱方法相对于在其天然环境中的浓度和/或纯度而言经富集的多肽，所述色谱方法优选地选自包括下列各项的组：亲和色谱法、凝胶过滤色谱法和离子交换色谱法。在一个特别优选的实施方案中，多肽是经纯化的，如果它具有至少40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或99.5％的纯度(这可以目视地或者优选地通过在考马斯蓝染色后在SDS-PAGE凝胶上的条带的强度测量来判断)。
[0073] 多肽可以以组织或细胞(优选地，重组组织或重组细胞)的形式来提供。所述细胞优选地为真核细胞，更优选地昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞，更加优选地哺乳动物细胞，最优选地人细胞。
[0074] 多肽可以以经折叠的形式或以未折叠的形式来提供。优选地，所述折叠在缓冲液中(例如在处于pH 7的10mM磷酸钠中)借助于CD-光谱学来进行测量，所述缓冲液允许所述测量并且在所述缓冲液中该蛋白质可以采取其三维折叠(参见例如Banaszak L.J.(2008),Foundations of Structural Biology,Academics Press；或Teng Q.(2013),Structural Biology:Practical Applications,Springer)。优选地，所述蛋白质采取被待检测的抗体所识别的折叠。
[0075] 将捕获工具固定化，优选地在载体上，更加优选地通过共价或非共价键。
[0076] 在一个优选的实施方案中，在捕获之后通过从包括下列各项的组中选择的方法来检测抗体：免疫扩散、免疫电泳、光散射、凝集、放射性、酶促活性、(电)化学发光和免疫荧光。在通过放射性、酶促活性、(电)化学发光和免疫荧光进行检测的情况下，可以使用可检测的标记物。优选地，将它安置在与待检测的抗体相结合的二抗上。检测方法例如描述在Zane,H.D.(2001),Immunology-Theoretical&Practical Concepts in Laboratory Medicine,W.B.Saunders Company中，特别地在第14章中。
[0077] 在一个优选的实施方案中，待检测的抗体为从包括下列各项的组中选择的抗体：免疫球蛋白类别G(IgG)、免疫球蛋白类别M(IgM)和免疫球蛋白类别A(IgA)，优选地G或M，更加优选地G。在一个进一步的优选的实施方案中，检测从包括下列各项的组中选择的两个或更多个类别的抗体：免疫球蛋白类别G、免疫球蛋白类别M和免疫球蛋白类别A，优选地G和M。
[0078] 可以对待检测的抗体进行定量。在一个优选的实施方案中，在多于一天检测和优选地定量待检测的抗体。更加优选地，所述抗体为类别G的抗体(IgG)。以该方式，可以追踪滴度的进程。在该情况下，在进程中升高的IgG滴度允许识别活动性博尔纳病毒感染，以及区别活动性博尔纳病毒感染与被动免疫接种或者更久地在过去发生的与病原体的接触或被其感染。
[0079] 在一个优选的实施方案中，所述载体选自包括下列各项的组：基于膜的免疫印迹，优选地Western印迹、侧流测定法或线印迹；一种或多于一种珠粒；为免疫荧光而准备的生物芯片；和用于ELISA的微量滴定板。
[0080] 根据本发明，提供了试剂盒，其包含根据本发明的载体，以及另外任选地，指导和/或缓冲液和试剂，其优选地选自包括下列各项的组：洗涤溶液、包含用于检测所捕获的抗体的工具的溶液和包含阳性对照的溶液。不用溶液，各试剂也可以以干燥的形式(例如作为粉末)来提供，优选地具有在需要时可以将它溶解在其中的溶液。待检测的抗体或其变体(其与该抗体所结合的抗原特异性地相结合)可以充当阳性对照。优选地，所述载体包含用于检测样品，优选地血清样品的存在的对照。例如，可以检测在每种血清样品中存在的蛋白质，以确认血清样品的存在。优选地，具有可检测的标记物的二抗充当用于检测所捕获的抗体的工具。
[0081] 在本专利申请中，列出了新的多肽和/或核酸。它们具有下列序列：
[0082] SEQ ID NO:1(VSBV-N(40kDa，His-标签))
[0083] MNITMPPKRRLLEDPDVMDDQEPEPTSPPMPKLPGKFLQYTVGGSDPHPGIGEEKDIKHNAVALLDSSRRDMFHPVTPSLVFLCLLIPGLHAAFLHGGVPKESYLSTPISRGEQTFVKVSRFYGERTASRELTELEISSIFNHCCSLLIGVVIGSSAKIRAGAEQIKKRFKTLMASLNRPSHGETATLLQMFNPHEAIDWINGQPWVGSLVLSLLTTDFESPGKEFMDQIKLVASYAQMTTYTTIKEYLAECMDATLTIPAVAHEIREFLEISAKLKNEHAELFPFLGAIRHPDAIKLAPRSFPNLASAAFYWSKKENPTMAGYRASTIQPGATVKETQLARYRRREVSRGEDGAELSGEISDIMKMIGVTGLVLEHHHHHH
[0084] SEQ ID NO:2(VSBV-N肽(30kDa，His-GST-标签))
[0085] MSHHHHHHHHMSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKLEVLFQGPAMFVKVSRFYGERTASR
[0086] SEQ ID NO:3(VSBV-P(23kDa，His-标签))
[0087] MASRPSSLVESLEDEESLQTPRRVRSRSPRPKRIPQDALTQPVDRLLKNIKKNPSMISDPEQRTGREQLSNDELIKQLVTELAENSMIEAEGLRGALDDISSKVDSGLESISSLQVETLQTVQKTDYADSIKTLGENIKVLDRSMKTMMETMRLMMEKIDLLYASTAIGQSNTPMLPSHPAQPRLYPTLPSAPTADEWDILPLEHHHHHH
[0088] SEQ ID NO:4(BoDV-1-N(40kDa，His-标签))
[0089] MNITMPPKRRLVDDADAMEDQDLYEPPASLPKLPGKFLQYTVGGSDPHPGIGHEKDIRQNAVALLDQSRRDMFHTVTPSLVFLCLLIPGLHAAFVHGGVPRESYLSTPVTRGEQTVVKTAKFYGEKTTQRDLTELEISSIFSHCCSLLIGVVIGSSSKIKAGAEQIKKRFKTMMAALNRPSHGETATLLQMFNPHEAIDWINGQPWVGSFVLSLLTTDFESPGKEFMDQIKLVASYAQMTTYTTIKEYLAECMDATLTIPVVAYEIRDFLEVSAKLKEEHADLFPFLGAIRHPDAIKLAPRSFPNLASAAFYWSKKENPTMAGYRASTIQPGASVKETQLARYRRREISRGEDGAELSGEVSAIMKMIGVTGLNLEHHHHHH
[0090] SEQ ID NO:5(BoDV-1-P(23kDa，His-标签))
[0091] MATRPSSLVDSLEDEEDPQTLRRERSGSPRPRKIPRNALTQPVDQLLKDLRKNPSMISDPDQRTGREQLSNDELIKKLVTELAENSMIEAEEVRGTLGDISARIEAGFESLSALQVETIQTAQRCDHSDSIRILGENIKILDRSMKTMMETMKLMMEKVDLLYASTAVGTSAPMLPSHPAPPRIYPQLPSAPTADEWDIIPLEHHHHHH
[0092] SEQ ID NO:6(VSBV-N肽，A0A0H5BWD6的氨基酸116-130)FVKVSRFYGERTASR[0093] SEQ ID NO:7(NMDAR受体的NR1亚基)
[0094] MSTMHLLTFALLFSCSFARAACDPKIVNIGAVLSTRKHEQMFREAVNQANKRHGSWKIQLNATSVTHKPNAIQMALSVCEDLISSQVYAILVSHPPTPNDHFTPTPVSYTAGFYRIPVLGLTTRMSIYSDKSIHLSFLRTVPPYSHQSSVWFEMMRVYNWNHIILLVSDDHEGRAAQKRLETLLEERESKAEKVLQFDPGTKNVTALLMEARELEARVIILSASEDDAATVYRAAAMLNMTGSGYVWLVGEREISGNALRYAPDGIIGLQLINGKNESAHISDAVGVVAQAVHELLEKENITDPPRGCVGNTNIWKTGPLFKRVLMSSKYADGVTGRVEFNEDGDRKFANYSIMNLQNRKLVQVGIYNGTHVIPNDRKIIWPGGETEKPRGYQMSTRLKIVTIHQEPFVYVKPTMSDGTCKEEFTVNGDPVKKVICTGPNDTSPGSPRHTVPQCCYGFCIDLLIKLARTMNFTYEVHLVADGKFGTQERVNNSNKKEWNGMMGELLSGQADMIVAPLTINNERAQYIEFSKPFKYQGLTILVKKEIPRSTLDSFMQPFQSTLWLLVGLSVHVVAVMLYLLDRFSPFGRFKVNSEEEEEDALTLSSAMWFSWGVLLNSGIGEGAPRSFSARILGMVWAGFAMIIVASYTANLAAFLVLDRPEERITGINDPRLRNPSDKFIYATVKQSSVDIYFRRQVELSTMYRHMEKHNYESAAEAIQAVRDNKLHAFIWDSAVLEFEASQKCDLVTTGELFFRSGFGIGMRKDSPWKQNVSLSILKSHENGFMEDLDKTWVRYQECDSRSNAPATLTFENMAGVFMLVAGGIVAGIFLIFIEIAYKRHKDARRKQMQLAFAAVNVWRKNLQDRKSGRAEPDPKKKATFRAITSTLASSFKRRRSSKDTSTGGGRGALQNQKDTVLPRRAIEREEGQLQLCSRHRES
[0096] 图1显示了在实施例1中制备和使用的具有博尔纳病毒抗原的线印迹条的构造。
[0097] 图2显示了在根据实施例1进行温育后，在实施例1中制备的具有博尔纳病毒抗原的线印迹条。
[0098] 图3显示了通过使用在实施例1中制备的线印迹条来检查来自具有边缘系脑炎的患者的样品的结果。
[0099] 图4显示了通过使用另一个在实施例1中制备的线印迹条来检查来自具有边缘系脑炎的患者的样品的结果。
[0100] 图5显示了借助于免疫荧光来检查来自移植患者的样品的结果(参见实施例2)，以两种不同的放大倍数(左边200x，右边400x)。
[0101] 图6显示了通过使用根据实施例1制备的具有博尔纳病毒抗原的线印迹条来检查来自移植患者的样品，参见实施例2。
[0102] 实施例1：基于膜的针对杂色松鼠博尔纳病毒I(VSBV1)和哺乳动物博尔纳病毒I(BoDV-1)的抗体检测
[0103] 1.1.EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带(Profile)的制备
[0105] 将VSBV-N蛋白(SEQ ID NO:1)、VSBV-P肽(SEQ ID NO:2)、BoDV-1-N蛋白(SEQ ID NO:4)、BoDV-1-P蛋白(SEQ ID NO:5)和VSBV-P蛋白(SEQ ID NO:3)在大肠杆菌(E.coli)中以重组方式与His-标签相融合，并且通过使用标准实验方案以亲和色谱法来进行纯化。将经纯化的蛋白质进行冷冻贮存(-70℃)，并在包被前进行解冻。
[0106] 对于制备EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带a，将所述抗原以各自两个稀释度进行包被(具有每种抗原9μg/mL至59μg/mL的可变浓度)。
[0107] 在下面的第二个EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b上，将BoDV-1抗原的浓度各自减少50％。经稀释的抗原的包被用接触式吸液头分配器以机械方式来进行(参见：Raphael Wong,Harley Tse:Lateral Flow Immunoassay,Humana Press,2008,第137页)。图1显示了所述EUROLINE的构造，在此1标明了较高的抗原浓度和2标明了较低的抗原浓度。
[0108] 随后，封闭经包被的膜，漂洗，干燥，并贮存于-20℃以备进一步使用。
[0109] 将包被物粘贴在载体薄膜上：
[0110] 为了制成EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带，将每种抗原的线固定在塑料薄膜上。随后，分开为单个的测试条。
[0111] 1.2.通过使用所述EUROLINE来进行免疫测定法
[0112] 血清样品的温育：
[0113] 1.预处理：
[0114] 根据待检查的患者样品的数目，向温育槽装入各1.5mL以即用方式进行稀释的通用缓冲液(ZD 1100-1050，EUROIMMUN AG)。用镊子从包装中取出需要量的测试条，并且各直接放入一个装有缓冲液的温育槽中并在摆动式摇动器上在室温下温育15分钟。随后，将液体从槽中完全吸出。
[0115] 2.样品温育：
[0116] 在每个装有测试条的温育槽中装入1.5mL的在通用缓冲液中以1:51进行稀释的患者样品，并且在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下温育30分钟。
[0117] 3.洗涤：
[0118] 将液体从每个槽中完全吸出，并且在摆动式摇动器上用各1.5mL以即用方式进行稀释的通用缓冲液洗涤3×5分钟。
[0119] 4.缀合物温育：
[0120] 各自将1.5mL以即用方式进行稀释的酶缀合物(经碱性磷酸酶标记的抗人IgG；AE 142-1030，EUROIMMUN AG)移液到温育槽中，并且在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下温育
30分钟。
30分钟。
[0121] 5.洗涤：
[0122] 将液体从槽中完全吸出。再次进行步骤3。
[0123] 6.底物温育：
[0124] 各自将1.5mL底物溶液(ZW 1020-0130，EUROIMMUN AG)移液到温育槽中。随后为在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下进行10分钟的温育。
[0125] 7.终止：
[0126] 将液体从每个槽中完全吸出，并且用蒸馏水或去离子水漂洗每个测试条3×1分钟。
[0127] 8.评价：
[0128] 将测试条进行风干并进行评价。
[0129] 脑脊液样品的温育：
[0130] 1.预处理：
[0131] 根据待检查的患者样品的数目，向温育槽装入各1.5mL通用缓冲液。用镊子从包装中取出需要量的测试条，并且各直接放入一个装有缓冲液的温育槽中。在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下温育15分钟。随后，将液体从槽中完全吸出。
[0132] 2.样品温育：
[0133] 在每个装有测试条的温育槽中装入1.0mL的经稀释的患者样品(脑脊液的稀释倍数1:4，在通用缓冲液中进行稀释)。随后为在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下进行三个小时的温育。
[0134] 3.洗涤：
[0135] 将液体从每个槽中完全吸出，并且在摆动式摇动器上用各1.5mL以即用方式进行稀释的洗涤缓冲液洗涤3×5分钟。
[0136] 4.缀合物温育：
[0137] 各自将1.5mL以即用方式进行稀释的酶缀合物(经碱性磷酸酶标记的抗人IgG)移液到温育槽中。在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下温育一小时。
[0138] 5.洗涤：
[0139] 将液体从槽中完全吸出，并且如上面那样进行洗涤。
[0140] 6.底物温育：
[0141] 各自将1.5mL底物溶液移液到温育槽中。在摆动式摇动器上在室温(+23℃)下温育20分钟。
[0142] 7.终止：
[0143] 将液体从每个槽中完全吸出，并且用蒸馏水或去离子水漂洗每个测试条3×1分钟。
[0144] 8.评价：
[0145] 将测试条进行风干并进行评价。
[0146] 图2显示了在温育后的一个示例性的测试条。
[0147] 评价：
[0148] 将用EUROLINEScan软件(EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG,Lübeck)所测量得到的强度由一位有经验的工作人员在考虑下面所述的标准的情况下来进行评价。对于阳性结果，在每种情况下，特异性的抗原包被物(两个所包被的稀释物中浓度较低的那个)必须在截止值之上进行反应。
[0149] 对于EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带a，如下确定截止值。数字相应于在EUROLINE-Scan中所测量得到的条带强度：
[0150] BoDV-1抗原：0-23＝阴性；24-30＝边界值；>30＝阳性
[0151] VSBV抗原：0-13＝阴性；14-20＝边界值；>20＝阳性。
[0152] 对于EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b，确定下列的截止值：所有抗原：0-13＝阴性；14-20＝边界值；>20＝阴性。
[0153] 1.3.通过使用各种不同的样品集合的结果
[0154] 经NMDA-R-IFT预表征的患者血清：
[0155] 检查罹患边缘系脑炎的症状的患者的经匿名化处理的血清样品。
[0156] 总之，在第一个试验中在EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带a上温育n＝60个样品，和在第二个研究中在EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b上温育另外的n＝49个样品，它们符合这些要求。借助于免疫荧光(产品FA 112d-1003-51，EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG)就针对NMDA受体的自身抗体的存在来检查所述样品。随后，将它们在1.1下所制备的EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带上进行测试。
[0157] 在借助于免疫荧光的检查中，总共n＝109个样品中的n＝7个样品在抗-NMDA-R-IFT中发生阳性反应。因此，在这些患者的情况下，脑炎被归因于针对NMDA受体的自身抗体。所述n＝7个NMDA-R-IFT-阳性血清中没有一个在所述EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带上发生阳性反应。
[0158] 在其样品在抗-NMDA-R-IFT中发生阴性反应的其余n＝102名患者中，疾病的原因仍不清楚。在该集合中，尤其可以预期博尔纳病毒感染是可能的起因。
[0159] 在这n＝102个样品中，总共n＝14个样品与至少一种博尔纳病毒抗原发生阳性反应(其中n＝7个在第一个试验中和n＝7个在第二个试验中)。这相应于13.73％的可能由于博尔纳病毒感染而引起的脑炎。
[0160] 具有多发性硬化的患者的血清
[0161] 在播散性脑脊髓炎的情况下，准确的原因也仍然是不清楚的。但是，这种脑炎涉及与边缘系脑炎不同的CNS的其他区域，并且充当对照集合。在EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b上测试n＝36个样品，其中n＝1个血清与所述EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带发生阳性反应。
[0162] 阳性对照：
[0163] 在EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带a上使用下列样品作为阳性对照：
[0164] n＝1个抗-VSBV-阳性的脑脊液
[0165] n＝1个来自具有精神病的患者的血清
[0166] n＝2个在血清学上经预表征的BoDV-1-阳性的血清。
[0167] 在EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b上温育下列的阳性对照：n＝4个多克隆兔血清(针对VSBV-N、VSBV-P、BoDV-1-N和BoDV-1-P各一个，其是通过使用具有在实施例部分的第1.1节中所述的序列的VSBV-N蛋白、VSBV-N肽、BoDV-1-N蛋白、BoDV-1-P蛋白和VSBV-P蛋白按照标准实验方案对兔子进行免疫接种而制备的)。
[0168] 在这些中，总共n＝8个血清均与在所述EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带上的至少一种抗原发生阳性反应，所述多克隆抗体各自识别相应的经包被的抗原。
[0169] 阴性对照：
[0170] 使用不是来源于具有疑似的边缘系脑炎的患者的脑脊液样品。所述脑脊液样品中没有一个与所述EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带发生阳性反应，这显示了在这些温育条件下所述调查研究条的特异性。
[0171] 用EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带a的结果描绘在图3中，用EUROLINE抗博尔纳病毒特性谱带b的结果描绘在图4中。它们图解说明，罹患NMDAR受体脑炎和相关联的PNS或相关联的癌症类型的患者中没有一个具有针对BoDV-1或VSBV-1的抗体。
[0172] 实施例2：在来自具有移植后并发症的患者的样品中针对博尔纳病毒的抗体的检测
[0173] 患者：
[0174] 患者1获得来自在临床上不显眼的供者的器官捐献。该接受者在移植后发展出神经病学并发症，其以脑炎而达到顶点。
[0175] 作为阴性对照，检查了264个来自健康献血者的血液样品。
[0176] 抗体检测：
[0177] 通过使用EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG公司的抗基孔贡亚病毒IIFT(订购号码FI 293a-1005G)来检查来自所述患者的血清样品，除了下述方面之外：不使用在所述的测试中所使用的(被CHIKV感染的Vero细胞)作为抗原，而是使用被BoDV-1感染的细胞系CRFK 227，如在Hoffmann等人,(2015)A variegated squirrel bornavirus associated with fatal human encephalitis,N Engl J Med 2015,373,第154-162页中，和在与此有关的补充附录(第19页)中所描述的。遵照在制造商的指导中的实验方案。
[0178] 将从在移植后第72天起定期地获取的样品就针对BoDV-1-P、BoDV-1-N、VSBV-P和VSBV-N的抗体的存在进行检查。在该情况下，使用在实施例1中所描述的印迹，并且进行像在所述的实施例中一样的检测。
[0179] 结果：
[0180] 将患者1的顺序样品的一部分用间接免疫荧光测试来进行检查。所有样品均显示出阳性反应性，即在被博尔纳病毒感染的细胞中可识别出特异性的荧光样式。这示例性地描绘在图5中。在被感染的细胞的细胞核中，单个至多个包含所述病毒抗原的颗粒发荧光。这确认了在所述患者样品中博尔纳病毒特异性抗体的存在。
[0181] 在线印迹中血液样品的检查显示，在移植后第72天，抗体仍然还是不可检测的(图6)。从第84天起，针对BoDV-1-P的抗体是可检测的，从第382天起针对VSBV-N的抗体也是可检测的。根据IIFT，98.5％的献血者是阴性的。
[0182] 结论：
[0183] 因此，可以得出结论：所述器官供者被BoDV-1潜伏感染，而没有出现在临床上明显的感染。所述移植在器官接受者中引起感染的发作，据猜测这是由于免疫抑制治疗而引起的。
[0184] 实施例3：由于VSBV-1感染而引起的边缘系脑炎
[0185] 方法
[0186] 病例研究
[0187] 2013年7月，一名来自石勒苏益格-荷尔斯泰因州(Schleswig-Holstein)的45岁女性动物饲养员发展出了发热、发声困难、咳嗽、咽炎、眩晕和其眼睛下感觉异常。在这些症状之后为共济失调、昏迷和垂体腺功能不全。该患者没有已知的先期疾病。CSF的分析显示了淋巴细胞性脑脊液淋巴细胞增多。外周血中的炎症参数增高，具有相对的中性白细胞增多和淋巴细胞减少。最初的头部MRI检查显示出正常的结果。3周后借助于MRI进行的追踪检查在基底核中和在上脊髓中显示出具有双侧边缘系分布的损伤(内侧颞叶、前扣带、脑岛、海马、下丘脑、室周顶盖)。在形态学上，诊断出了在一周之内具有进展的边缘系脑炎。关于中枢神经系统感染和自身免疫性疾病的广范的实验室检查显示出正常的结果。没有发现作为根本性原因的瘤形成。重复的脑电图显示出通常的慢活动和不是惊厥性癫痫发作。借助于显微术、培养或PCR，没有显示出向神经的细菌、真菌、寄生虫或病毒。通过免疫组织化学，可以排除克-雅病。由于双侧肺炎，因而该患者需要人工呼吸，并且在疾病的晚期过程中用广谱抗感染疗法(包括阿昔洛韦)、抗惊厥药和类固醇对她进行治疗。在症状开始后3个月之内，她最后死于病因学在那个时刻未确定的脑脊髓炎。
[0188] PCR
[0189] 对于分析，提供贮藏的经冷冻的CSF以及经福尔马林固定的、包埋在石蜡中的脑组织、心肌、肺组织、肾组织、肝组织、脾组织、胰腺组织、骨髓和肠组织以供分析使用。如在Hoffmann等人,(2015)中所描述的那样，进行VSBV-1特异性的实时RT-PCR。
[0190] 免疫组织化学
[0191] 从用各自的重组抗原进行免疫接种的兔子中获得针对VSBV-1和BoDV-1的N蛋白和P蛋白的多克隆抗血清，并且将它们借助于经由A蛋白的亲和色谱法来进行纯化(Davids Biotechnologie,Regensburg,Germany)。兔抗血清和免疫前血清的反应性借助于免疫荧光抗体试验(IFAT)和借助于在实施例1中所描述的博尔纳病毒免疫印迹来进行测试。使用十个没有血缘关系的人脑组织样品作为阴性对照。在用蛋白酶K进行预处理和封闭内源性过氧化物酶后，将该患者的FFPE切片与抗血清一起进行温育(在PBS中1:1,000-1:5,000，在室温下过夜)。随后，将它们与山羊抗兔的经生物素化的聚合物抗体、链霉抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶复合物和3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)底物(DCS,Hamburg,Germany)一起进行温育。
[0192] 血清学测试
[0193] 为了检测血清和CSF中的博尔纳病毒特异性IgG抗体，将被BoDV-1持久地感染的细胞系用于根据标准的间接免疫荧光测试(IFAT)(Hoffmann等人,2015)；另外，还开发了ELISA和免疫印迹。
[0194] 对于VSBV-1-IgG ELISA，克隆了VSBV-1N蛋白和P-蛋白的序列，并且以与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白的形式在大肠杆菌菌株BL21GOLD(DE3)(Novagen-Merck,Darmstadt,Germany)中进行表达。将所述蛋白质通过直链淀粉亲和色谱法进行纯化并洗脱。在4℃下通过3C蛋白酶裂解N-末端MBP-标签过夜。在去除蛋白酶后，将蛋白质样品通过凝胶过滤色谱法进一步进行纯化(Superdex 200,Sigma-Aldrich,München,Germany)。将微量滴定板(Polysorp,Nunc,Roskilde,Denmark)在4℃下用2μg/mL VSBV-1N蛋白或P蛋白包被过夜。在用6％BSA进行封闭后，添加在1％BSA稀释溶液中进行稀释的人血清。在37℃下进行两小时的温育后，添加100μl抗人IgG(Dako Cytomation,Hamburg,Germany，经1:6,000稀释的)，并且将平板在37℃下温育一小时。在室温下进行5分钟的温育后，用3,3',5,5'-四甲基联苯胺来终止反应。最后，在450nm下测量光密度(OD)(参考：620nm)。测量关于每个血清样品的最终OD值，作为包含VSBV-1N蛋白或P蛋白的孔与包含MBP的孔之间的差异。如果平均OD超过平均OD加上三倍标准偏差(其用来自200名健康献血者的对照样品来获得)，那么关于1:400的血清稀释度的最终OD值被认为是阳性的。
[0195] 对于博尔纳病毒-IgG免疫印迹，使用在实施例1中所制备的条。将它们在室温下与血清(30分钟，1:51)或与CSF(3小时，1:4)一起进行温育，随后为与碱性磷酸酶的缀合物(30分钟或1小时，各1:10)和与作为底物的氯化氮蓝四唑鎓(10或20分钟)一起进行温育。所检测的抗体的强度通过使用EurolineScan软件(EUROIMMUN AG,Lübeck,Germany)自动地来进行评价。为了验证，测试了来自150名健康献血者的样品。
[0196] 结果
[0197] 用那位脑炎女性患者的样品的血清学
[0198] 通过免疫荧光以细胞核样式的形式(IgG终点滴度1:2560)和通过ELISA，在该患者的CSF中以高浓度检测到对于博尔纳病毒来说特异性的IgG抗体。在免疫印迹上显示出强的针对VSBV-1-N多肽的IgG反应性，和以较低的程度的针对VSBV-1-P抗原和BoDV-1-P抗原的IgG反应性(表1)。
[0199]
[0200]
[0201] 动物饲养员的血清学检测
[0202] 通过使用ELISA、免疫荧光和免疫印迹来检查所有十四名动物饲养员的血清。六名动物饲养员定期地与杂色松鼠相接触，而他们中的五名偶尔地接触。其余人仅罕见地接触。从免疫印迹中判断，十四个血清中的六个与VSBV-1-N抗原和四个与BoDV-1-N抗原发生阳性或弱阳性反应，但没有一个与相应的P抗原发生反应。免疫荧光测试在两种情况下显示出低的滴度，而ELISA结果为阴性。血清学反应性不与所报告的与松鼠的接触强度相关。根据免疫印迹，13.5％的献血者与VSBV-1-N抗原，4.5％与BoDV-1-N抗原，1.5％与VSBV-1-P抗原，和6％与BoDV-1-P抗原发生阳性或弱阳性反应。献血者中的一名与多于一种博尔纳病毒抗原发生反应。
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