CCR2的4-取代-环己基氨基-4-哌啶基-乙酰胺拮抗剂
阅读：421发布：2024-01-05
专利汇可以提供CCR2的4-取代-环己基氨基-4-哌啶基-乙酰胺拮抗剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 包含式(I)的化合物，式(I)其中：R1、R2、R3、R4、X、Y和Z为如 说明书 中所定义。本发明还包含 预防 、 治疗 或改善综合征、病症或 疾病 的方法，其中所述综合征、病症或疾病是II型糖尿病、 肥胖症 和哮喘。本发明还包含通过施用 治疗有效量 的至少一种式(I)的化合物来抑制 哺乳动物 中的CCR2活性的方法。，下面是CCR2的4-取代-环己基氨基-4-哌啶基-乙酰胺拮抗剂专利的具体信息内容。
1.一种式(I)的化合物、其互变异构体或可药用盐
式(I)
其中：
R1是 、 、 、 、 、 、2,3-二氢
吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；
2
R是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、OCH2CF3、-CN、CO2H、C(O)C(1-4)烷基、C(O)NH2、C(O)NHC(1-4)烷基、C(O)N(C(1-4)烷基)2或CF3；
R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：
2,3-二氢-1H-茚-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二氟-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二甲基-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二氟-2,3-二氢苯并呋喃-
5-基、2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基；
X是H、OH、NH2或F；
Y是NH2；
Z是NH或–HC=CH–。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中：
R1是 、 、 、2,3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶
基或哒嗪基；其中所述吡啶基、嘧啶基或哒嗪基任选地被OCH3取代；
R2是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3或CF3；
R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：
2,3-二氢-1H-茚-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二氟-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二甲基-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二氟-2,3-二氢苯并呋喃-
5-基、2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基；
X是H、OH或F；
Y是NH2；并且
Z是NH或–HC=CH–。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中：
R1是 、 、 、2,3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基或吡啶基；其
中所述吡啶基任选地被OCH3取代；
R2是H、Cl、OCH3或F；
R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OCH3、SC(1-4)烷基、OCF3或CF3；
R4是H、OCH3或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2,3-二氢-
1H-茚-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二氟-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,
2-二甲基-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二氟-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基；
X是H或F；
Y是NH2；并且
Z是NH或–HC=CH–。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中：
R1是 、 、 、2,3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基或2-甲氧基-
吡啶-5-基；
R2是H、Cl或F；
R3是H、F、Cl、CO2CH2CH3、CH3、SCH3、OCF3或CF3；
R4是H或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2,3-二氢-1H-茚-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二氟-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基；
X是H；
Y是NH2；并且
Z是NH或–HC=CH–。
5.一种选自以下的化合物：
其互变异构体或可药用盐。
6.一种化合物，该化合物是
或其互变异构体。
7.一种药物组合物，包含权利要求1所述的化合物和可药用载体。
8.一种药物组合物，其通过将权利要求1所述的化合物与可药用载体混合来制备。
9.一种用于制备药物组合物的方法，包括将权利要求1所述的化合物与可药用载体混合。
10.一种用于制备权利要求1所述的式(I)的化合物的方法，包括在选自NaBH4、NaBH
(CN)3、NaBH(OAc)3的还原剂的存在下，使式(XII) 的化合物与式(II)
的化合物反应，在式(XII)的化合物中PG是胺保护基团，并且R6和R7是H，在式
(II)的化合物中R1是
、 、 、 、 、 、2,3-二氢吲哚-
3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；并且X是H、OH、NH2或F。
11.一种用于制备权利要求1所述的式(I)的化合物的方法，包括在碱和/或偶联试剂的存在下，使式(XV) 的化合物与式(XIV) 的化合物反应，
5
在式(XV)的化合物中R是-N=C=O或-C=C-CO2H；在式(XIV)的化合物中
R1是 、 、 、 、 、 、2,3-二氢
吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；
2
R是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、OCH2CF3、-CN、CO2H、C(O)C(1-4)烷基、C(O)NH2、C(O)NHC(1-4)烷基、C(O)N(C(1-4)烷基)2或CF3；
R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：
2,3-二氢-1H-茚-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,2-二氟-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二甲基-苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基、2,2-二氟-2,3-二氢苯并呋喃-
5-基、2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基；
X是H、OH、NH2或F；并且
Y是NH2。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述碱是TEA或DIEA，所述偶联试剂是DCC或
EDCI。
13.治疗有效量的权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、治疗或改善CCR2介导的综合征、病症或疾病。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述综合征、病症或疾病与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联，或是伴随有与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联的综合征、病症或疾病的炎性状况。
15.有效量的权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、治疗或改善综合征、病症或疾病，其中所述综合征、病症或疾病选自：眼科病症、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、特应性皮炎、多发性硬化症、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肾炎、器官同种异体移植物排斥、纤维化肺、肾功能不全、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病并发症、超重、肥胖症、肥胖症相关联的胰岛素抵抗、代谢综合征、肺结核、慢性阻塞性肺疾病、肉样瘤病、侵入性葡萄球菌病、白内障手术后炎症、过敏性鼻炎、慢性荨麻疹、哮喘、牙周病、齿龈疾病、舒张性心肌疾病、心肌梗塞、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、实体瘤和癌症。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述糖尿病并发症选自糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性微血管病；所述哮喘是过敏性哮喘；所述牙周病是牙周炎；所述齿龈疾病是齿龈炎；所述癌症选自慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、何杰金氏病、膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、胃癌；所述眼科病症选自葡萄膜炎和过敏性结膜炎。
17.根据权利要求16所述的用途，其中所述糖尿病性视网膜病是糖尿病性视网膜炎。
18.治疗有效量的权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、治疗或改善综合征、病症或疾病，其中所述综合征、病症或疾病选自：I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病并发症、肥胖症、肥胖症相关联的胰岛素抵抗、代谢综合征、哮喘。
19.根据权利要求18所述的用途，其中所述糖尿病并发症选自糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性微血管病；所述哮喘是过敏性哮喘。
20.根据权利要求19所述的用途，其中所述糖尿病性视网膜病是糖尿病性视网膜炎。
21.治疗有效量的权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自II型糖尿病、肥胖症和哮喘的病症。
CCR2的4-取代-环己基氨基-4-哌啶基-乙酰胺拮抗剂
技术领域
[0001] 本发明涉及4-取代-环己基氨基-4-哌啶基-乙酰胺化合物、其药物组合物和使用方法，所述4-取代-环己基-4-哌啶基-乙酰胺化合物为趋化性细胞因子受体2(CCR2)的拮抗剂。本发明的化合物对于预防、治疗或改善CCR2介导的综合征、病症或疾病是有用的。
背景技术
[0002] CCR2是GPCR受体家族的成员(统称为趋化因子受体)，由单核细胞和记忆性T-淋巴细胞表达。CCR2信号级联放大涉及磷脂酶(PLCβ2)、蛋白激酶(PKC)和脂类激酶(PI-3激酶)的激活。
[0003] 趋化性细胞因子(即趋化因子)是相对较小的蛋白质(8-10kD)，其刺激细胞的迁移。根据第一个高度保守的半胱氨酸和第二个高度保守的半胱氨酸之间的氨基酸残基数将趋化因子家族分成四个亚族。
[0004] 单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是CC趋化因子亚族(其中CC表示第一个半胱氨酸和第二个半胱氨酸相邻的亚族)的成员，并且与细胞表面趋化因子受体2(CCR2)结合。MCP-1是强效的趋化因子，其在结合至CCR2后可介导单核细胞和淋巴细胞向炎症位点迁移(即趋化性)。MCP-1还由心肌细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、肾小球膜细胞、肺泡细胞、T-淋巴细胞、巨噬细胞等表达。
[0005] 在单核细胞进入炎性组织并分化成巨噬细胞后，单核细胞分化提供数种促炎性调节剂的第二来源，所述调节剂包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、IL-8(CXC趋化因子亚族的成员，其中CXC表示在第一个半胱氨酸和第二个半胱氨酸之间的一个氨基酸残基)、IL-12、花生四烯酸代谢物(例如PGE2和LTB4)、氧衍生的自由基、基质金属蛋白酶和补体成分。
[0006] 慢性炎性疾病的动物模型研究已证明通过拮抗剂抑制MCP-1和CCR2之间的结合抑制了炎性应答。MCP-1和CCR2之间的相互作用已牵涉于(见Rollins B J，Monocyte chemoattractant protein1：a potential regulator of monocyte recruitment in inflammatory disease(单核细胞趋化蛋白质1：炎性疾病中单核细胞募集的潜在调节子)，Mol.Med.Today《当今分子医学》、1996、2，第198页；和Dawson J等人，Targeting monocyte chemoattractant protein-1signaling in disease(疾病中靶向单核细胞趋化蛋白质-1信号发送)Expert Opin Ther.Targets《治疗靶标专家评论》，2003，7(1)，第35-48页)炎性疾病病理例如牛皮癣、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化症、克罗恩氏病、肾炎、器官同种异体移植物排斥、纤维化肺、肾功能不全、II型糖尿病、糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、肺结核、肉样瘤病、侵入性葡萄球菌病、白内障手术后炎症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、慢性荨麻疹、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、过敏性哮喘、牙周病、牙周炎、齿龈炎、齿龈疾病、舒张性心肌疾病、心肌梗塞、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、肾小球肾炎、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、何杰金氏病，以及膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌和胃癌。
[0007] 单核细胞迁移由MCP-1拮抗剂(MCP-1的抗体或可溶性失活片段)抑制，其已显示出抑制关节炎、哮喘和葡萄膜炎的发展。MCP-1和CCR2敲除(KO)小鼠均已证明显著减少了单核细胞向炎性病变处的浸润。此外，这种KO小鼠可抵抗实验性变应性脑脊髓炎(EAE，一种人MS模型)、蟑螂过敏原诱导的哮喘、动脉硬化症和葡萄膜炎的发展。类风湿性关节炎和克罗恩氏病患者在用TNF-α拮抗剂(例如单克隆抗体和可溶性受体)以与MCP-1表达及浸润性巨噬细胞数量减少相关的剂量治疗期间得以改善。
[0008] MCP-1已牵涉于季节性过敏性鼻炎和慢性过敏性鼻炎的发病机理中，其被发现于大多数尘螨过敏患者的鼻粘膜中。已发现MCP-1还可体外诱发组胺从嗜碱粒细胞释放。在过敏状况期间，过敏原和组胺均已显示会触发(即上调)MCP-1和其它趋化因子在过敏性鼻炎患者的鼻粘膜中的表达，表明在这些患者中存在正反馈回路。
[0009] 仍然需要小分子CCR2拮抗剂来预防、治疗或改善由MCP-1诱导的单核细胞和淋巴细胞向炎性位点的迁移而导致的CCR2介导的炎性综合征、病症或疾病。
[0010] 将本文引用的所有文献以引用方式并入本文。
发明内容
[0011] 本发明包括式(I)的化合物及其互变异构体和可药用盐
[0012]
[0013] 其中：
[0014] R1是2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；
[0015] R2是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
[0016] R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、OCH2CF3、-CN、CO2H、C(O)C(1-4)烷基、C(O)NH2、C(O)NHC(1-4)烷基、C(O)N(C(1-4)烷基)2或CF3；
[0017] R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二氟-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0018] X是H、OH、NH2或F；
[0019] Y是OH、NH2、OC(O)C(1-4)烷基、NHC(O)C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、NHC(1-4)烷基、N(C(1-4)烷基)2或NHOH；
[0020] Z是NH或-HC＝CH-。
具体实施方式
[0021] 本发明包括式(I)的化合物及其互变异构体和可药用盐
[0022]
[0023] 其中：
[0024] R1是2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；
[0025] R2是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
[0026] R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、OCH2CF3、-CN、CO2H、C(O)C(1-4)烷基、C(O)NH2、C(O)NHC(1-4)烷基、C(O)N(C(1-4)烷基)2或CF3；
[0027] R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二氟-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0028] X是H、OH、NH2或F；
[0029] Y是OH、NH2、OC(O)C(1-4)烷基、NHC(O)C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、NHC(1-4)烷基、N(C(1-4)烷基)2或NHOH；
[0030] Z是NH或-HC＝CH-。
[0031] 在本发明的另一个实施例中：
[0032] R1是 2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基或哒嗪基；其中所述吡啶基、嘧啶基或哒嗪基任选地被OCH3取代；
[0033] R2是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
[0034] R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、或CF3；
[0035] R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二氟-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0036] X是H、OH或F；
[0037] Y是OH、NH2、OC(O)CH3、NHC(O)CH3、OC(1-4)烷基、NHC(1-4)烷基、N(C(1-4)烷基)2或NHOH；
[0038] Z是NH或-HC＝CH-。
[0039] 在本发明的另一个实施例中：
[0040] R1是 2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基或吡啶基；其中所述吡啶基任选地被OCH3取代；
[0041] R2是H、Cl、OCH3或F；
[0042] R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OCH3、SC(1-4)烷基、OCF3或CF3；
[0043] R4是H、OCH3或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二氟-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0044] X是H或F；
[0045] Y是OH、NH2、OC(1-4)烷基、NHC(1-4)烷基、N(C(1-4)烷基)2或NHOH；
[0046] Z是NH或-HC＝CH-。
[0047] 在本发明的另一个实施例中：
[0048] R1是 2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基或2-甲氧基-吡啶-5-基；
[0049] R2是H、Cl或F；
[0050] R3是H、F、Cl、CO2CH2CH3、CH3、SCH3、OCF3或CF3；
[0051] R4是H或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0052] X是H；
[0053] Y是OH、NH2、OCH3、NHCH3、N(CH3)2或NHOH；
[0054] Z是NH或-HC＝CH-。
[0055] 本发明的另一个实施例是选自以下的化合物及其互变异构体和可药用盐：
[0056]
[0057]
[0058]
[0059]
[0060]
[0061]
[0062] 本发明的另一个实施例是包含式(I)的化合物和可药用载体的药物组合物。
[0063] 本发明的另一个实施例涉及通过将式(I)的化合物与可药用载体混合而制备的药物组合物。
[0064] 本发明的另一个实施例是用于制备药物组合物的方法，所述方法包括将式(I)的化合物与可药用载体混合。
[0065] 本发明还提供了用于预防、治疗或改善CCR2介导的综合症、病症或疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。在本发明的一个实施例中，CCR2介导的综合征、病症或疾病是炎性综合征、病症或疾病。
[0066] 本发明还提供了用于预防、治疗或改善CCR2介导的炎性综合征、病症或疾病的方法，其中所述综合征、病症或疾病与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联，或是伴随有与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联的综合征、病症或疾病的炎性状况，所述方法包括将有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。
[0067] 本发明还提供了预防、治疗或改善综合征、病症或疾病的方法，其中所述综合征、病症或疾病选自：慢性阻塞性肺疾病(COPD)、眼科病症、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、特应性皮炎、多发性硬化症、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肾炎、器官同种异体移植物排斥、纤维化肺、肾功能不全、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、超重、肥胖症、肥胖症相关联的胰岛素抵抗、代谢综合征、肺结核、慢性阻塞性肺疾病、肉样瘤病、侵入性葡萄球菌病、白内障手术后炎症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、慢性荨麻疹、哮喘、过敏性哮喘、牙周病、牙周炎、齿龈炎、齿龈疾病、舒张性心肌疾病、心肌梗塞、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、肾小球肾炎、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、何杰金氏病，以及膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌或胃癌，所述方法包括将有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。
[0068] 本发明还提供了预防、治疗或改善综合征、病症或疾病的方法，其中所述综合征、病症或疾病选自：I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖症、肥胖症相关联的胰岛素抵抗、代谢综合征、哮喘和过敏性哮喘，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。
[0069] 本发明还提供了治疗选自II型糖尿病、肥胖症和哮喘的病症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。
[0070] 在另一个实施例中，本发明涉及由实例1至实例54中的任一个实例所述的方法制备的产物。
[0071] 在另一个实施例中，本发明涉及这样的化合物，其为实例1-54中任一个的极性更多的异构体。
[0072] 在另一个实施例中，本发明涉及用于制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括在还原剂的存在下，使式(XII) 的化合物与式(II) 的化合物反应，在式(XII)的化合物中PG是胺保护基团，并且R6和R7独立地是H、OH、OC(1-4)烷基、NH2、NHC(1-4)烷基或C(1-4)烷基，或合在一起形成5元杂环，在式(II)的化合物中R1是
[0073] 2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；并且X是H、OH、NH2或F。在另一个实施例中，本发明涉及由上述方法制备的产物。
[0074] 在另一个实施例中，本发明涉及用于制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括在碱例如TEA或DIEA和/或偶联试剂例如DCC或EDCI的存在下，使式(XV) 的化合物与式(XIV) 的化合物反应，在式(XV)的化合物中R5是-N＝C＝O、-C＝C-
CO2H或C(＝O)卤化物；
CO2H或C(＝O)卤化物；
[0075] 在式(XIV)的化合物中
[0076] R1是2，3-二氢吲哚-3-基、吲哚-3-基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基；其中所述吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基或吡咯基任选地被OCH3、CH3、OCF3、CF3、OCF3、-CN或C(O)CH3取代；
[0077] R2是H、Cl、CH3、OC(1-4)烷基或F；
[0078] R3是H、F、Cl、CO2C(1-4)烷基、C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、SC(1-4)烷基、OCF3、OCH2CF3、-CN、CO2H、C(O)C(1-4)烷基、C(O)NH2、C(O)NHC(1-4)烷基、C(O)N(C(1-4)烷基)2或CF3；
[0079] R4是H、CH3、OC(1-4)烷基或F；或R4可与R3及其附连的苯基合在一起形成选自以下的二环：2，3-二氢-1H-茚-5-基、2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二氟-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二甲基-苯并[d][1，3]二氧戊环-5-基、2，2-二氟-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、2，2-二甲基-2，3-二氢苯并呋喃-5-基、色满-6-基和2，3-二氢苯并[b][1，4]二 英-6-基；
[0080] X是H、OH、NH2或F；并且
[0081] Y是OH、NH2、OC(O)C(1-4)烷基、NHC(O)C(1-4)烷基、OC(1-4)烷基、NHC(1-4)烷基、N(C(1-4)烷基)2或NHOH。在另一个实施例中，本发明涉及由上述方法制备的产物。
[0082] 在另一个实施例中，本发明涉及用作药物，具体地用作治疗CCR2介导的综合症病症或疾病的药物的如实例中所述或式(I)的化合物。
[0083] 在另一个实施例中，本发明涉及如式(I)的实例中所述的化合物制备用于治疗与升高的或不适当的CCR2活性相关联的疾病的药物的用途。
[0084] 定义
[0085] 除非另外指明，否则术语“烷基”是指最多12个碳原子(优选最多6个碳原子)的直链和支链基团，并且其包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基以及十二烷基。
[0086] 术语“C(a-b)”(其中a和b为表示指定数目的碳原子的整数)是指烷基、烯基、炔基、烷氧基或环烷基，或是指基团中的烷基部分，其中烷基作为前缀词根出现，含有a至b(包括a和b)个碳原子。例如，C(1-4)表示含有1、2、3或4个碳原子的基团。
[0087] 术语“卤化物”或“卤素”指由氟、氯、溴或碘组成的原子。
[0088] 对于在医学中的使用，本发明化合物的盐是指无毒的“可药用盐”。FDA批准的可药用盐形式(参考International J.Pharm《. 国际制药学杂志》1986，33，第201-217页；J.Pharm.Sci《. 制药科学杂志》，1977，66(1)，第1页)包括可药用酸式/阴离子盐或碱式/阳离子盐。
[0089] 在本说明书通篇中，化合物被描述为通常通过硅胶柱来分离，但还可使用制备性薄层色谱法或者高压或低压液相色谱法。公认的是，当通过硅胶型分离介质洗脱化合物时，极性最小的化合物在极性较大的化合物之前洗脱。因此，术语“极性较少的异构体”或“极性较少的非对映体”是指首先从硅胶型分离介质中洗脱的化合物。
[0090] 缩写
[0092] Ar 芳族基团或芳基
[0093] Boc 叔丁氧羰基
[0094] Bn 苄基
[0095] Bu 丁基
[0096] Cbz 苄氧羰基
[0097] DAST 二乙氨基三氟化硫
[0098] DBU 1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
[0099] DCC 二环己基碳二亚胺
[0100] DCM 二氯甲烷
[0101] DIEA 二异丙基乙胺(又名-Hunig’s base)
[0102] DMF 二甲基甲酰胺
[0103] EDCI 1-乙基-3-(3′-二甲基氨丙基)碳二亚胺
[0104] Et 乙基
[0105] EtOAc 乙酸乙酯
[0106] EtOH 乙醇
[0107] Fmoc 9-芴甲氧羰基
[0108] Het 杂芳族基团
[0109] HOBt 羟基苯并三唑
[0110] HPLC 高效液相色谱法
[0111] IPA 异丙醇
[0112] LCMS 液相色谱法-质谱法
[0113] LHMDS 六甲基二硅氮烷锂
[0114] Me 甲基
[0115] Ms 甲磺酸根
[0116] OAc 乙酸根
[0118] PG 保护基团
[0119] PPh3 三苯膦
[0120] iPr 异丙基
[0121] PyBrop 三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐
[0122] TEA 三乙胺
[0123] TFA 三氟乙酸
[0124] THF 四氢呋喃
[0125] TLC 薄层色谱法
[0126] TMS 三甲基硅烷基
[0127] Ts 甲苯磺酸根
[0128] 可药用酸式/阴离子盐包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰对氨基苯胂酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明盐、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、1，8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐以及三乙基碘化物。有机酸或无机酸还包括但不限于氢碘酸、过氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、糖精酸或三氟乙酸。
[0129] 可药用碱式/阳离子盐包括且不限于铝、2-氨基-2-羟甲基-丙烷-1，3-二醇(还称为三(羟甲基)氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷(tromethane)或“TRIS”)、氨、苄星、叔丁胺、钙、葡萄糖酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己胺、二乙醇胺、乙二胺、锂、LiOMe、L-赖氨酸、镁、葡甲胺、NH3、NH4OH、N-甲基-D-葡糖胺、哌啶、钾、叔丁醇钾、氢氧化钾(含水)、普鲁卡因、奎宁、钠、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠、三乙醇胺或锌。
[0130] 使用方法
[0131] 本发明涉及用于预防、治疗或改善CCR2介导的综合征、病症或疾病的方法，所述方法包括将有效量的式(I)的化合物或其形式、组合物或药物施用给需要其的受检者。
[0132] 其中使用式(I)的化合物的CCR2介导的综合症、病症或疾病的例子包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、眼科疾病、葡萄膜炎、动脉粥样硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、特应性皮炎、多发性硬化症、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肾炎、器官同种异体移植物排斥、纤维化肺、肾功能不全、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、超重、肥胖症、肥胖症相关联的胰岛素抵抗、代谢综合症、肺结核、慢性阻塞性肺疾病、肉样瘤病、侵入性葡萄球菌病、白内障手术后的炎症、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、慢性荨麻疹、哮喘、过敏性哮喘、牙周病、牙周炎、齿龈炎、齿龈疾病、舒张性心肌疾病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、腹主动脉瘤、多发性硬化症、肾小球肾炎、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、何杰金氏病、膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌或胃癌，以及慢性神经炎性疾病，包括但不限于阿尔茨海默病、缺血性中风、脊髓损伤、神经挫伤和外伤性脑损伤)。
[0133] 就本发明方法而言，术语“施用”意指通过使用式(I)的化合物或其形式、组合物或药物来治疗性地或预防性地预防、治疗或改善本文所述的综合征、病症或疾病的方法。这种方法包括在治疗期间以不同的次数施用有效量的所述化合物、配混物形式、组合物或药物，或者以组合形式同时施用。本发明的方法应被理解为涵盖所有已知的治疗性处理方案。
[0134] 术语“受检者”是指患者，其可以是已作为治疗、观察或实验的对象的动物，通常是哺乳动物，通常是人。在本发明的一个方面，受检者有发展与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联的综合征、病症或疾病的风险(或易于发生所述发展)，或者为具有伴随与升高的MCP-1表达或MCP-1过表达相关联的综合征、病症或疾病的炎性状况的患者。
[0135] 术语“治疗有效量”意指在组织系统、动物或人中引起生物学反应或药物反应的活性化合物或药剂的量，而所述生物学反应或药物反应正是研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻求的，包括预防、治疗或改善所治疗的综合征、病症或疾病的症状。
[0136] 术语“葡萄膜炎”通常是指涉及眼的任何炎性疾病。可根据炎症存在的眼部位将葡萄膜炎分成临床上不同的亚类(百分比对应已知符合这些类别的患者)：前葡萄膜炎(51％)、中间葡萄膜炎(13％)、后葡萄膜炎(20％)或全葡萄膜炎(16％)，并且根据疾病进程，可分为急性葡萄膜炎(16％)、复发性葡萄膜炎(26％)或慢性葡萄膜炎(58％)。患有前葡萄膜炎的那些患者尽管进行积极治疗，但最终也会发展成不能恢复的视力损伤，如单侧盲(9％)、双侧盲(2％)或者单侧或双侧视力受损(8％)。大多数葡萄膜炎案例为特发性的，但已知的原因包括感染(例如弓形体病、细胞巨化病毒等)或作为全身性炎性病症和/或自身免疫病症的一部分发展(例如幼年型类风湿性关节炎、HLA-B27相关联的脊椎关节病、肉样瘤病等)。(HLA-B27：人类白细胞抗原B*27-为由在染色体6上的主要组织相容性复合物(MHC)中的B基因座编码的I类表面抗原，并将微生物抗原呈递给T细胞。HLA-B27与某一组被称为血清反应阴性脊椎关节病变的自身免疫疾病密切相关联。
[0137] 当用作CCR2抑制剂时，本发明化合物可以约0.5mg至约10g的剂量范围内、优选约0.5mg至约5g之间的剂量范围内的治疗有效量，以单次施用或分开的日剂量施用。施用的剂量将受诸如施用途径，受体的健康状态、体重和年龄，治疗频率以及同期治疗和不相关的治疗的存在等因素影响。
[0138] 对于本领域的技术人员还将显而易见的是，本发明的化合物或其药物组合物的治疗有效剂量将根据所需效果而变化。因此，本领域的技术人员可容易地确定待施用的最佳剂量，并且最佳剂量将随所使用的具体化合物、施用方式、制剂强度和疾病状况的进展而变化。另外，与待治疗的具体受检者相关联的因素(包括受检者年龄、体重、饮食和施用时间)将导致需要将剂量调整至适当的治疗水平。因而上述剂量是一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围有利的个别情况，并且这类情况也在本发明的范围内。
[0139] 可将式(I)的化合物配制成包含任何已知的可药用载体的药物组合物。示例性载体包括但不限于任何合适的溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂以及等渗剂。还可作为制剂组分的示例性赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂以及润滑剂。
[0140] 式(I)的化合物的可药用盐包括由无机或有机酸或碱形成的常规无毒盐或季铵盐。此类酸加成盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、十二烷基硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐以及酒石酸盐。碱盐包括铵盐、碱金属盐诸如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐、有机碱盐例如二环己胺盐以及氨基酸例如精氨酸的盐。还可将碱性含氮基团用例如烷基卤化物进行季铵化。
[0141] 本发明的药物组合物可通过任何能实现其预期目的的方式施用。例子包括通过肠胃外、皮下、静脉内、肌内注射、腹膜内注射、透皮、口腔或眼等途径施用。作为另外一种选择或同时地，可通过口服途径施用。适用于肠胃外施用的制剂包括水溶性形式的活性化合物(例如，水溶性盐)的水溶液、酸性溶液、碱性溶液、右旋糖水溶液、等渗碳水化合物溶液以及环糊精包合复合物。
[0142] 本发明还包括制备药物组合物的方法，所述方法包括将可药用载体与本发明的任何化合物混合。另外，本发明包括通过将可药用载体与本发明的任何化合物混合而制备的药物组合物。如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含规定量的规定成分的产物，以及任何由规定量的规定成分的组合直接或间接得到的产物。
[0143] 多晶型物和溶剂化物
[0144] 此外，本发明的化合物可具有一种或多种多晶型或无定形结晶形式，这些多晶型或无定形结晶形式旨在包括在本发明的范围内。此外，化合物可例如与水(即水合物)形成溶剂化物或与普通有机溶剂形成溶剂化物。如本文所用，术语“溶剂化物”意指本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。该物理缔合涉及不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键合。在某些情况下，溶剂化物将能够在(例如)一个或多个溶剂分子混在结晶固体的晶格中时分离出来。术语“溶剂化物”旨在既涵盖溶液相溶剂化物又涵盖可分离溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性例子包括乙醇化物、甲醇化物等。
[0145] 本发明旨在包括在其范围内的本发明化合物的多晶型物和溶剂化物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“施用”应涵盖使用本发明的化合物或其多晶型物或溶剂化物治疗、改善或预防本文所述的综合征、病症或疾病的方法，其虽然没有被具体公开，但这将明显包括在本发明的范围内。
[0146] 本发明包括在其范围内的本发明化合物的前药。一般来讲，此类前药为化合物的官能化衍生物，其可在体内容易地转化成所需的化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“施用”应涵盖对具体描述的化合物或未具体描述的化合物所述的多种疾病的治疗，但该化合物在施用至患者后会于体内转化成特定的化合物。例如，在Design of Prodrugs，Ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985(《前药设计》，H.Bundgaard，Elsevier编辑，1985年)中描述了用于选择和制备合适的前药衍生物的常规程序。
[0147] 如果根据本发明的化合物具有至少一个手性中心，则它们可因此作为对映体存在。当化合物具有两个或更多个手性中心时，它们可另外作为非对映体存在。应当理解，所有这类异构体及其混合物均涵盖在本发明的范围内。
[0148] 如果用于制备根据本发明的化合物的方法产生立体异构体的混合物，则这些异构体可通过诸如制备色谱法之类的常规技术分离。化合物可以外消旋的形式制备，或者个别对映体可通过对映特异性合成或通过解析制备。例如，化合物可通过标准技术解析成其组分对映体，例如通过与光学活性酸(例如(-)-二-对甲苯酰基-d-酒石酸和/或(+)-二-对甲苯酰基-1-酒石酸)的盐形成作用，随后通过分级结晶并使游离碱再生而形成非对映体对。化合物也可通过非对映的酯或酰胺的形成，随后通过色谱分离和手性助剂的去除解析。或者，化合物可使用手性HPLC柱解析。
[0149] 在用于制备本发明化合物的任何方法期间，可能有必要和/或需要保护所涉及的任何分子上的敏感基团或反应性基团。这可通过常规的保护基来实现，如以下文献中描述的保护基：Protective Groups in Organic Chemistry，J.F.W.McOmie(编辑)，Plenum Press，1973和T.W.Greene&P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，1991。可在方便的后续阶段使用本领域已知的方法去除保护基团。
[0150] 一般反应方案
[0151] 本发明的代表性化合物可根据下文所述的一般合成方法合成。式(I)的化合物可通过本领域的技术人员已知的方法制备。以下反应方案仅意在表示本发明的实例且绝不意在限制本发明。
[0152] 式(I)的化合物可根据方案1中所概述的方法制备。
[0153] 方案1
[0154]
[0155] 其中PG是保护基团，例如Cbz、Fmoc、Boc；
[0156] 并且LG是离去基团，例如Cl。
[0157] 方案1示出了得到式(I)的化合物的合成路线。经由本领域熟知的程序(例如公开号WO2005/060665；US2005/026714；WO2006/010094；WO2007/145835；和Bioorg.Med.Chem.Lett《. 生物有机化学与医药化学通讯》，2006，14，第3285-99页中描述的那些)由可商购获得的试剂制备的取代的环己酮(II)，在还原剂例如NaBH4、NaBH(CN)3或NaBH(OAc)3，的存在下，在有机溶剂例如甲醇和乙腈中用苄胺进行处理，得到仲胺(III)，所述仲胺可通过研磨或用有机溶剂重结晶非对映异位地富集。
[0158] 然后在约20℃至约60℃范围内的温度下，在合适的催化剂例如碳载钯、氧化铂等上，在酸例如HCl或HOAc的存在下，在有机溶剂例如甲醇或乙醇中，经由氢解使仲胺(III)进行苄基去保护，以提供伯胺(IV)的盐。在约-10℃至约25℃范围内的温度下，在有机溶剂例如甲醇或乙醇中，用合适的碱例如NaOEt或NaOMe将胺盐转换为游离碱。在约50℃至约100℃范围内的温度下，在有机溶剂例如乙腈或二氧杂环己烷中，用溴化物(V)和有机碱例如TEA或DIEA处理(IV)的游离碱获得仲胺(VI)。
[0159] 通过标准方法例如皂化、水解、氨解或酰胺形成，(VI)的Y基团可任选地在此处或在最后一个步骤中转换为另一种官能团。在约0℃至约50℃的温度下，在有机溶剂例如MeOH、DCM或二氧杂环己烷中，可通过在金属催化剂例如钯上氢解(其中PG是Cbz)或用合适的酸例如TFA或HCl处理(其中PG是Boc或Fmoc)来去除哌啶基的去保护，以得到哌啶(VII)。
[0160] 然后在约-10℃至约25℃范围内的温度下，在有机碱例如TEA或吡啶的存在下，在有机溶剂例如DCM或吡啶中，用适当取代的亲电体(VIII)例如酰氯、异氰酸盐或氯甲酸盐处理哌啶(VII)，以获得最终产物(I)。
[0161] 还可通过在约-10℃至约25℃范围内的温度下，在偶联试剂例如EDCI/HOBt、PyBrop或DCC的存在下，在有机溶剂例如THF、二氯甲烷或1，2-二氯乙烷中，使哌啶(VII)与取代的羧酸反应进行方案1的最后一个步骤，得到最终产物(I)。
[0162] 作为另一种选择，式(I)的化合物可根据方案2中概述的方法制备。
[0163] 方案2
[0164]
[0165] 其中R5是N＝C＝ON-C＝C-CO2H。
[0166] 在方案2中，通过用强的受阻有机碱例如LHMDS处理且用硅烷化试剂例如TMSCl诱陷，首先将酯(IX)转换为TMS烯醇醚，并且然后使中间体烯醇与亲电体例如溴反应，得到溴化物(V)。通过用叠氮基盐例如NaN3的亲核置换来完成至叠氮化物(X)的转换，并且然后产物经由在合适的催化剂例如碳载钯、氧化铂等上的氢解进行还原，以得到伯胺(XI)。可在约20℃至约100℃范围内的温度下，在溶剂例如水、乙醇或二氧杂环己烷中，通过与试剂例如NH3(或其水合物或盐)、NH2OH或烷基胺反应，将(XI)的酯转换为酰胺，以提供氨基酰胺(XII)。
[0167] 在-10℃至约50℃范围内的温度下，在还原剂例如NaBH4、NaBH(CN)3或NaBH(OAc)3和路易斯酸例如Ti(iPrO)4的存在下，含或不含分子筛，在有机溶剂例如THF、IPA或EtOH中，使氨基酰胺(XII)与适当取代的酮(II)反应，以获得相应的环己胺(XIII)。
[0168] 然后在约0℃至约50℃范围内的温度下，在有机溶剂例如二乙醚、THF或二氯甲烷中，通过用酸例如1N HCl、1N H2SO4或TFA处理来去除环己胺(XIII)的保护基团，以获得相应的胺(XIV)。
[0169] 使胺(XIV)与亲电体(XV)反应，其中Z为如式(I)中所定义，并且R5是-N＝C＝O或-C＝C-CO2H。当R5是-C＝C-CO2H时，合适的偶联试剂包括EDCI/HOBt、PyBrop或DCC和碱例如TEA、Na2CO3或吡啶，在有机溶剂例如THF、二氯甲烷或乙腈中，在约0℃至约50℃范围内的温度下。当R5是-N＝C＝O时，合适的试剂包括碱例如TEA，在有机溶剂例如THF、二氯甲烷或乙腈中，在约0℃至约50℃范围内的温度下。
[0170] 作为另外一种选择，氨基酰胺(XII)可通过Weinreb等人[Tet.Lett《. 四面体通讯》，1977，48，第4171-74页]的方法由叠氮基酯(X)生成，随后氢解，如上所述，得到氨基酰胺(XII)，如方案3中所示。
[0171] 方案3
[0172]
[0173] 式(I)的化合物可衍生自酮(XIX)。(XIX)的制备在方案4中概述。
[0174] 方案4
[0175]
[0176] 在约-78℃至约0℃范围内的温度下，在有机金属试剂例如n-BuLi、i-PrMgBr或i-PrMgCl的存在下，在有机溶剂例如乙醚、THF或二氧杂环己烷中，使可商购获得的芳基-、烷基或杂芳基-卤化物R1Q(其中R1为如式(I)中所定义，且Q为任何卤素)与可商购获得的酮(XVII)反应，以获得相应的缩酮(XVIII)。在约0℃至约50℃范围内的温度下，在有机溶剂如丙酮、乙腈或THF中，用酸例如1N HCl或1N H2SO4处理缩酮(XVIII)，以获得相应的酮(XIX)。
[0177] 式(I)的化合物可衍生自酮(XXII)。(XXII)的制备在方案5中概述。
[0178] 方案5
[0179]
[0180] 在约-10℃至约25℃范围内的温度下，在有机溶剂如乙醚、THF或二氧杂环己烷中，用脱水剂例如伯吉斯试剂(Burgess’reagent)处理缩酮(XVIII)，以获得相应的烯烃(XX)。在约20℃至约60℃范围内的温度下，在有机溶剂例如甲醇中，通过金属例如10％Pd/C进行催化，用还原剂例如H2气体使烯烃(XX)氢化，以获得相应的烷烃(XXI)。在约0℃至约50℃范围内的温度下，在有机溶剂例如丙酮、乙腈或THF中，用酸例如1N HCl或1N H2SO4处理烷烃(XXI)，以获得相应的酮(XXII)。
[0181] 作为另一种选择，化合物(XX)可根据方案6中概述的方法制备。
[0182] 方案6
[0183]
[0184] 在约80℃至约120℃范围内的温度下，在催化剂例如Pd(Ph3P)4、PdCl2(Ph3P)2或PdCl2(dppf)和碱例如2N Na2CO3或K2CO3的存在下，在有机溶剂例如甲苯、二氧杂环己烷或THF的存在下，使可商购获得的芳基硼酸(XXIII)(其中R1为如式(I)中所定义，且Q为任何卤素)与三氟甲磺酸乙烯酯(XXIV)反应，以获得相应的烯烃(XX)，所述三氟甲磺酸乙烯酯(XXIV)根据W.Pearson等人，J.Org.Chem《.有机化学杂志》2004，69，第9109-9122页的程序制备。
[0185] 作为另外一种选择，在约80℃至约120℃范围内的温度下，在催化剂例如Pd(Ph3P)4、PdCl2(Ph3P)2或PdCl2(dppf)和碱例如2N Na2CO3或K2CO3的存在下，在有机溶剂例如甲苯、二氧杂环己烷或THF中，使可商购获得的芳基或杂芳基卤化物R1Q与乙烯硼酸酯(XXV)反应，以获得相应的烯烃(XX)，所述乙烯硼酸酯(XXV)根据A.M.Birch等人，国际专利申请
2006，WO2006064189制备。
2006，WO2006064189制备。
[0186] 式(I)的化合物可衍生自酮(XXVII)。酮(XXVII)可根据方案7中概述的方法制备。
[0187] 方案7
[0188]
[0189] 在约-78℃至约0℃范围内的温度下，在有机溶剂如二氯甲烷、THF或二氧杂环己烷中，用氟化剂例如DAST或三氟磺酰氟处理缩酮(XVIII)，以获得相应的氟化物(XXVI)。在约0℃至约50℃范围内的温度下，在有机溶剂如丙酮、乙腈或THF中，用酸例如1N HCl或1N H2SO4处理氟化物(XXVI)，以获得相应的酮(XXVII)。
[0190] 式(I)的化合物可衍生自酮(XXX)。酮(XXX)可根据方案8中概述的方法制备。
[0191] 方案8
[0192]
[0193] 在约25℃至约80℃范围内的温度下，在偶联试剂例如Ti(OEt)4或CuSO4的存在下，在有机溶剂如二氯甲烷、THF或二氧杂环己烷中，使可商购获得的2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺与可商购获得的1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-酮(XVII)反应，以获得sulfinimide(XXVIII)。在约-78℃至约25℃范围内的温度下，在有机溶剂如乙醚、THF或二氧杂环己烷中，用有机金属试剂例如R1MgBr或R1Li处理sulfinimide(XXVIII)，以获得相应的亚磺酰胺(XXIX)。在约0℃至约25℃范围内的温度下，在有机溶剂如丙酮、乙腈或THF中，用酸例如1N HCl或1N H2SO4处理亚磺酰胺(XXIX)，以获得相应的酮(XXX)。
[0194] 其中R1通过例如在吡咯烷中的N与环己基环连接的式(I)的化合物可衍生自酮(XXII)。酮(XXII)可根据方案9中概述的方法制备。
[0195] 方案9
[0196]
[0197] 在约25℃至约80℃范围内的温度下，在无机碱例如K2CO3、Cs2CO3或NaH的存在下，在有机溶剂例如DMF或THF中，使可商购获得的杂芳基R1H(其中R1为如式(I)中所定义)与甲苯磺酸盐、甲磺酸盐或卤化物(XXXI)反应，以获得相应的缩酮(XXI)，然后可在约0℃至约50℃范围内的温度下，在有机溶剂例如丙酮、乙腈或THF中，用酸例如1N HCl或1N H2SO4处理所述缩酮(XXI)，以获得相应的酮(XXII)。
[0198] 式(I)的化合物可衍生自酮(XXII)。(XXII)的制备在方案10中概述。
[0199] 方案10
[0200]
[0201] 在约50℃至约100℃范围内的温度下，在碱例如NaOH或KOH的存在下，在有机溶剂例如MeOH、IPA或二氧杂环己烷中，使可商购获得的芳基或杂芳基稠合的吡咯例如吲哚或氮杂吲哚与可商购获得的酮(XVII)反应，以获得相应的烯基缩酮(XXXIII)。然后使烯基缩酮(XXXIII)如方案5中所述进行氢化并用酸处理，以获得相应的酮(XXII)，其中R1是芳基或杂芳基稠合的吡咯。
[0202] 实例
[0203] 本发明的代表性化合物可根据下文所述的一般合成方法合成。式(I)的化合物可通过本领域的技术人员已知的方法制备。以下实例仅意在表示本发明的实例且绝不意在限制本发明。
[0204] 实例1：R，S-2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺二盐酸盐
[0205] 步骤A：3-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1H-吲哚
[0206]
[0207] 向配备有顶置式搅拌器、加热套、温度探针和回流冷凝器的2-L三颈圆底烧瓶中加入吲哚(100.0g，0.836mol)、1，4-环己二酮乙二醇单缩酮(175.10g，1.09mol，1.3eq)和甲醇(221mL)。同时向该搅拌溶液中加入KOH片(31.5g，0.48mol)，并且在4小时内将反应加热至70℃。反应通过HPLC判断完成。将所得悬浮液过滤，用MeOH(150mL)洗涤，随后用乙醇(2×
150mL)洗涤固体。将产物在真空炉中在60℃下进一步干燥30分钟，以去除残余溶剂并获得标题化合物。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：7.97-8.16(m，1H)，7.90(d，J＝8.1Hz，1H)，
7.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.05-7.23(m，3H)，6.05-6.22(m，1H)，3.95-4.12(m，4H)，2.72(ddd，J＝1.6，4.6，8.4Hz，2H)，2.45-2.61(m，2H)，1.97(t，J＝6.6Hz，2H)；mp：190.7-193.1；对于C16H17NO2的元素分析计算：C，75.27；H，6.71；N，5.49；发现：C，74.93；H，6.73；N，5.37；KF：＜
0.1。
150mL)洗涤固体。将产物在真空炉中在60℃下进一步干燥30分钟，以去除残余溶剂并获得标题化合物。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：7.97-8.16(m，1H)，7.90(d，J＝8.1Hz，1H)，
7.35(d，J＝7.8Hz，1H)，7.05-7.23(m，3H)，6.05-6.22(m，1H)，3.95-4.12(m，4H)，2.72(ddd，J＝1.6，4.6，8.4Hz，2H)，2.45-2.61(m，2H)，1.97(t，J＝6.6Hz，2H)；mp：190.7-193.1；对于C16H17NO2的元素分析计算：C，75.27；H，6.71；N，5.49；发现：C，74.93；H，6.73；N，5.37；KF：＜
0.1。
[0208] 步骤B：3-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吲哚
[0209]
[0210] 向2-L PAAR氢化瓶中装入Pd/C(10％，11.06g)和部分THF(1.11L)。加入固体3-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1H-吲哚(如先前步骤中制备的，221.1g)连同剩余的THF。
将瓶连接至PAAR摇动器，通过真空/氮(3x)、真空/氢(3x)循环，并且伴随摇动应用45psi氢。
经过4小时历程，压力下降且再装填直至维持45psi。反应通过LCMS完成。使用硅藻土/玻璃纤维过滤器过滤催化剂，并且将反应蒸发，但未至完全干燥。加入变性EtOH(250mL)，并且将反应浓缩，但再次未至干燥。加入EtOH(1050mL)，并且将内容物加热至沸腾，这溶解几乎所有的材料。使混合物在搅拌下达到环境温度，并且将产物沉淀。在达到环境温度后，将悬浮液在冷藏机中冷却3小时，并且将产物过滤，并用冰冷的EtOH(250mL)洗涤，以获得标题化合物。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：7.79-8.04(m，1H)，7.66(d，J＝7.3Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.12(d，J＝6.8Hz，1H)，6.99(d，J＝2.2Hz，1H)，4.00(s，4H)，
2.74-3.03(m，1H)，2.09(br.s.，2H)，1.66-1.96(m，6H)。13C NMR(101MHz，CHLOROFORM-d)：
136.4，126.8，121.9，119.3，111.1，108.9，77.2，64.3，35.1，34.1，31.0。
将瓶连接至PAAR摇动器，通过真空/氮(3x)、真空/氢(3x)循环，并且伴随摇动应用45psi氢。
经过4小时历程，压力下降且再装填直至维持45psi。反应通过LCMS完成。使用硅藻土/玻璃纤维过滤器过滤催化剂，并且将反应蒸发，但未至完全干燥。加入变性EtOH(250mL)，并且将反应浓缩，但再次未至干燥。加入EtOH(1050mL)，并且将内容物加热至沸腾，这溶解几乎所有的材料。使混合物在搅拌下达到环境温度，并且将产物沉淀。在达到环境温度后，将悬浮液在冷藏机中冷却3小时，并且将产物过滤，并用冰冷的EtOH(250mL)洗涤，以获得标题化合物。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：7.79-8.04(m，1H)，7.66(d，J＝7.3Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.12(d，J＝6.8Hz，1H)，6.99(d，J＝2.2Hz，1H)，4.00(s，4H)，
2.74-3.03(m，1H)，2.09(br.s.，2H)，1.66-1.96(m，6H)。13C NMR(101MHz，CHLOROFORM-d)：
136.4，126.8，121.9，119.3，111.1，108.9，77.2，64.3，35.1，34.1，31.0。
[0211] 步骤C：4-(1H-吲哚-3-基)环己酮
[0212]
[0213] 向配备有顶置式搅拌器、温度探针、加料漏斗的3-L四颈圆底烧瓶中加入3-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吲哚(如先前步骤中制备的，143.2g，0.56mol)和DMF(190mL)。将悬浮液加热至50℃，并且将HCl水溶液(2M，290mL)装入加料漏斗中，并且逐滴加入，并且在约5分钟后，形成沉淀。将反应在30℃下搅拌24小时。HPLC显示存在剩余＜2％的乙缩醛。
将悬浮液在冰浴中冷却至6℃，加入水(1.2L)，并且将悬浮液在环境温度下搅拌15分钟。将固体过滤，用水(250mL)洗涤，并且在真空炉中在50℃下干燥过夜。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：8.16(br.s.，1H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，7.15-
7.26(m，1H)，7.08-7.16(m，1H)，6.95(d，J＝2.0Hz，1H)，3.33(tt，J＝3.3，11.6Hz，1H)，
2.28-2.66(m，6H)，1.88-2.06(m，2H)。
将悬浮液在冰浴中冷却至6℃，加入水(1.2L)，并且将悬浮液在环境温度下搅拌15分钟。将固体过滤，用水(250mL)洗涤，并且在真空炉中在50℃下干燥过夜。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：8.16(br.s.，1H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，7.15-
7.26(m，1H)，7.08-7.16(m，1H)，6.95(d，J＝2.0Hz，1H)，3.33(tt，J＝3.3，11.6Hz，1H)，
2.28-2.66(m，6H)，1.88-2.06(m，2H)。
[0214] 步骤D：2-溴-2-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)-乙酸甲酯
[0215]
[0216] 将可商购获得的2-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)-乙酸甲酯(爱斯特公司(Astatech)，2.57g，10.0mmol)在氩气下溶解于无水THF(20mL)中，冷却至-78℃，用1N LHMDS在THF中的溶液(20mL)逐滴处理，并且在正Ar压下搅拌30分钟。三甲基溴硅烷
(2.10mL，15.9mmol)经由干燥注射器在5分钟内逐滴加入，然后从加料漏斗一次性加入新鲜重结晶的N-溴琥珀酰亚胺(2.14g，12.0mmol)在无水THF(20mL)中的溶液。将反应保持在-78℃下2小时，然后升温至环境温度。将粗反应在真空中浓缩，然后在饱和NaHCO3水溶液和乙酸乙酯之间分配。将水层用乙酸乙酯萃取两次，并且将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并将滤液在真空中中浓缩，得到4.7g有机浆液。这通过快速柱色谱法在硅胶上(0至10％EtOAc/DCM分步梯度洗脱)纯化，并且将合并的TLC-纯馏分浓缩并在真空中中干燥，得到粘稠、淡黄色油状标题化合物。1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：4.05-4.26(m，2H)，4.02(d，J＝8.8Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.70(br.s.，2H)，1.97-2.10(m，4H)，1.57-1.68(m，2H)，
1.45(s，9H)，1.13-1.32(m，3H)。
(2.10mL，15.9mmol)经由干燥注射器在5分钟内逐滴加入，然后从加料漏斗一次性加入新鲜重结晶的N-溴琥珀酰亚胺(2.14g，12.0mmol)在无水THF(20mL)中的溶液。将反应保持在-78℃下2小时，然后升温至环境温度。将粗反应在真空中浓缩，然后在饱和NaHCO3水溶液和乙酸乙酯之间分配。将水层用乙酸乙酯萃取两次，并且将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并将滤液在真空中中浓缩，得到4.7g有机浆液。这通过快速柱色谱法在硅胶上(0至10％EtOAc/DCM分步梯度洗脱)纯化，并且将合并的TLC-纯馏分浓缩并在真空中中干燥，得到粘稠、淡黄色油状标题化合物。1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：4.05-4.26(m，2H)，4.02(d，J＝8.8Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.70(br.s.，2H)，1.97-2.10(m，4H)，1.57-1.68(m，2H)，
1.45(s，9H)，1.13-1.32(m，3H)。
[0217] 步骤E：2-叠氮基-2-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)-乙酸甲酯
[0218]
[0219] 将先前步骤的产物(26.3g，78.2mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF，100mL)中，用叠氮化钠(26.2g，403mmol)处理，并且在环境温度下搅拌24小时。反应用玻璃料过滤，不溶物用DMF洗涤一次，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(DCM)中并用水洗涤两次，用DCM萃取水层，并且将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并过滤。滤液在真空中浓缩得到金色油状标题化合物。对于C13H22N4O4计算的质谱(LCMS，正离子模式电喷射电离质谱法(“ESI pos.”))：299(M+H)。发现：298.7(87％纯)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：3.81(s，3H)，3.73(d，J＝6.8Hz，1H)，2.59-2.78(m，2H)，1.91-2.05(m，
1H)，1.62-1.72(m，1H)，1.55(ddd，J＝13.1，2.6，2.5Hz，1H)，1.42-1.48(m，10H)，1.25-1.42(m，2H)。
1H)，1.62-1.72(m，1H)，1.55(ddd，J＝13.1，2.6，2.5Hz，1H)，1.42-1.48(m，10H)，1.25-1.42(m，2H)。
[0220] 步骤F：2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)-乙酸甲酯
[0221]
[0222] 将先前步骤的产物(23.5g，78.2mmol)溶解于甲醇(100mL)中，用氩气鼓泡10分钟，在氩气下用10％碳载钯(0)(2.3g)处理，反应烧瓶在室内真空下抽成真空且用氢气回填(5次)，并且将反应在氢气球下在环境温度下剧烈搅拌。在24小时内将氢气球再装填3次(使用抽真空和回填)，然后去除氢，反应用氩气短暂鼓泡，并用硅藻土521过滤两次。硅藻土用甲醇洗涤(在Ar下)，并且将合并的滤液在真空中浓缩，得到金色油状标题化合物。对于C13H24N2O4计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：273(M+H)。发现：272.8(100％纯)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ：4.15(br.s.，2H)，3.74(s，3H)，3.48(s，1H)，3.34(d，J＝５.6Hz，1H)，2.67(br.s.，2H)，1.72-1.85(m，1H)，1.64(d，J＝13.1Hz，1H)，1.54(d，J＝12.9Hz，1H)，1.42-1.49(m，10H)，1.32-1.42(m，1H)，1.22-1.32(m，1H)。
[0223] 步骤G：2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-乙酰胺
[0224]
[0225] 将先前步骤的产物(11.5g，42.2mmol)溶解于7N氨的甲醇溶液(100mL)中，转移至150mL塑料镀膜玻璃压力瓶中，用PTFE螺旋帽和Viton O形环紧紧盖上，并在3天内在搅拌下加热至100℃。然后将反应在冰中冷却，转移至圆底烧瓶中，并在真空中浓缩至琥珀色凝胶。
这用干燥二乙醚(100mL)处理，在环境温度下超声处理15分钟，并用中等多孔性玻璃料过滤。将固体用乙醚洗涤并在真空干燥器中在环境温度干燥过夜，得到淡棕褐色固体状标题化合物。对于C12H23N3O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：258(M+H)。发现：258.0。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：7.31(br.s.，4H)，6.99(br.s.，4H)，3.95(d，J＝11.6Hz，10H)，2.95(d，J＝5.8Hz，4H)，2.62(br.s.，10H)，1.50-1.67(m，9H)，1.45(d，J＝13.1Hz，5H)，1.38(s，
44H)，1.21(ddd，Ｊ＝12.8，3.9Hz，1H)，1.00-1.13(m，5H)。
这用干燥二乙醚(100mL)处理，在环境温度下超声处理15分钟，并用中等多孔性玻璃料过滤。将固体用乙醚洗涤并在真空干燥器中在环境温度干燥过夜，得到淡棕褐色固体状标题化合物。对于C12H23N3O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：258(M+H)。发现：258.0。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：7.31(br.s.，4H)，6.99(br.s.，4H)，3.95(d，J＝11.6Hz，10H)，2.95(d，J＝5.8Hz，4H)，2.62(br.s.，10H)，1.50-1.67(m，9H)，1.45(d，J＝13.1Hz，5H)，1.38(s，
44H)，1.21(ddd，Ｊ＝12.8，3.9Hz，1H)，1.00-1.13(m，5H)。
[0226] 步骤H：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-(1-Boc-哌啶-4-基)-乙酰胺
[0227]
[0228] 将先前步骤的产物(456mg，1.77mmol)和来自实例1，步骤C的酮(345mg，1.62mmol)在氩气下用无水乙醇(30mL)和四异丙醇钛(IV)(0.56mL，1.91mmol)处理。将反应在环境温度下搅拌2小时，然后在氩气下用粉末状硼氢化钠(93mg，2.45mmol)处理，用氩气吹扫反应容器，并在隔片下在环境温度下搅拌3天。反应用饱和Na2CO3水溶液(30mL)猝灭，在环境温度下搅拌30分钟，用中等多孔性玻璃料过滤，并且用EtOAc洗涤固体。将滤液在真空中浓缩，以去除有机溶剂，并且将水层用EtOAc和DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在40g硅胶AnaLogix柱上经由ISCO CombiFlash系统(在35分钟内，40-100％乙腈的DCM溶液，40mL/分钟)纯化蒸发的滤液。最慢运行的产物馏分在真空中浓缩得到白色固体状标题化合物。HPLC显示这是环己基非对映体(主要是极性较多的那种)的3∶1混合物。对于C26H38N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：455(M+H)。发现：455.1(89％纯)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm7.99(br.s.，1H)，7.62(d，J＝7.8Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，
1H)，7.30(d，J＝5.3Hz，1H)，7.18(td，J＝7.6，1.3Hz，1H)，7.07-7.13(m，1H)，6.93(d，J＝
2.3Hz，1H)，5.54(d，J＝5.3Hz，1H)，4.17(br.s.，2H)，3.12(d，J＝4.3Hz，1H)，2.76-2.85(m，
1H)，2.59-2.76(m，3H)，2.44(tt，J＝11.2，3.7Hz，1H)，2.17(dd，J＝6.8，3.0Hz，1H)，2.13(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，2.06-2.12(m，1H)，1.88-2.03(m，3H)，1.77-1.86(m，1H)，1.67-
1.77(m，2H)，1.59-1.67(m，5H)，1.48-1.58(m，2H)，1.46(s，9H)，1.45(d，J＝1.8Hz，4H)，
1.40(dd，J＝12.9，4.5Hz，1H)，1.32-1.37(m，1H)，1.17-1.32(m，3H)。
1H)，7.30(d，J＝5.3Hz，1H)，7.18(td，J＝7.6，1.3Hz，1H)，7.07-7.13(m，1H)，6.93(d，J＝
2.3Hz，1H)，5.54(d，J＝5.3Hz，1H)，4.17(br.s.，2H)，3.12(d，J＝4.3Hz，1H)，2.76-2.85(m，
1H)，2.59-2.76(m，3H)，2.44(tt，J＝11.2，3.7Hz，1H)，2.17(dd，J＝6.8，3.0Hz，1H)，2.13(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，2.06-2.12(m，1H)，1.88-2.03(m，3H)，1.77-1.86(m，1H)，1.67-
1.77(m，2H)，1.59-1.67(m，5H)，1.48-1.58(m，2H)，1.46(s，9H)，1.45(d，J＝1.8Hz，4H)，
1.40(dd，J＝12.9，4.5Hz，1H)，1.32-1.37(m，1H)，1.17-1.32(m，3H)。
[0229] 步骤J：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-哌啶-4-基-乙酰胺二盐酸盐
[0230]
[0231] 将先前步骤的产物(0.423g，0.930mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)中，用4N HCl的二氧杂环己烷(2.3mL，9.2mmol)溶液处理，并且在3小时内在回流冷凝器下在搅拌下加热至50℃。将反应用DCM稀释，在冰上短暂冷却，并用中等多孔性玻璃料过滤。将固体用DCM和乙醚洗涤，并在真空干燥器中在环境温度干燥过夜，得到白色固体状标题化合物。HPLC显示这种产物含有77％极性较多的非对映体。对于C21H30N4O计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：355(M+H)。发现：355.3(95％纯)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：10.81(s，1H)，9.21(br.s.，1H)，9.03(br.s.，1H)，8.83(br.s.，1H)，8.67(br.s.，1H)，8.23(br.s.，1H)，7.93(br.s.，1H)，7.58(d，J＝8.1Hz，1H)，7.33(d，J＝8.1Hz，1H)，7.08(d，J＝1.8Hz，1H)，7.05(t，J＝7.6Hz，1H)，
6.95(t，J＝7.2Hz，1H)，3.95(br.s.，1H)，3.57(s，1H)，3.07(br.s.，1H)，2.64-2.94(m，3H)，
2.21(d，J＝10.4Hz，2H)，1.98-2.17(m，4H)，1.91(d，J＝12.1Hz，2H)，1.71(d，J＝14.9Hz，
2H)，1.59-1.65(m，1H)，1.44-1.59(m，3H)。
6.95(t，J＝7.2Hz，1H)，3.95(br.s.，1H)，3.57(s，1H)，3.07(br.s.，1H)，2.64-2.94(m，3H)，
2.21(d，J＝10.4Hz，2H)，1.98-2.17(m，4H)，1.91(d，J＝12.1Hz，2H)，1.71(d，J＝14.9Hz，
2H)，1.59-1.65(m，1H)，1.44-1.59(m，3H)。
[0232] 步骤K：R，S-2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺(实例1a)
[0233]
[0234] 将可商购获得的反式-3，5-二氟肉桂酸(320mg，1.74mmol)、HOBT水合物(274mg，2.02mmol)和EDCI盐酸盐(480mg，2.50mmol)的混合物在Ar下溶解于无水DCM(30mL)中，搅拌
10分钟，并且用在无水DCM和无水DMF(18mL)的2∶1混合物中的先前步骤的产物(0.70g，
1.51mmol)和TEA(3.50mL，25.1mmol)溶液处理。在环境温度下搅拌2天后，将反应用水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，用DCM萃取合并的水层，用盐水洗涤合并的有机物，用Na2SO4干燥，并过滤。将蒸发的滤液通过快速柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到非对映体的粗混合物形式的标题化合物。这种产物的一半通过制备性薄层色谱法(3∶1然后为2∶1乙腈/DCM)纯化两次，得到淡绿色固体状标题化合物，极性较多的产物。对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，
1
ESI pos.)：521(M+H)。发现：521.2(100％纯)。HPLC显示这是96％极性较多的非对映体。H NMR(CHLOROFORM-d)δ：7.97(br.s.，1H)，7.61(d，J＝7.6Hz，1H)，7.54(d，J＝15.4Hz，1H)，
7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.27-7.32(m，1H)，7.18(t，J＝7.5Hz，1H)，7.06-7.13(m，1H)，7.02(d，J＝6.1Hz，2H)，6.93(d，J＝2.0Hz，1H)，6.88(d，J＝15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，
2.3Hz，1H)，5.52(d，J＝4.5Hz，1H)，4.81(t，J＝13.9Hz，1H)，4.14(br.s.，1H)，3.15(br.s.，
2H)，2.75-2.86(m，1H)，2.56-2.75(m，1H)，2.46(t，J＝10.9Hz，1H)，2.05-2.26(m，4H)，2.01(br.s.，1H)，1.81(br.s.，2H)，1.44-1.55(m，3H)，1.10-1.44(m，3H)。
10分钟，并且用在无水DCM和无水DMF(18mL)的2∶1混合物中的先前步骤的产物(0.70g，
1.51mmol)和TEA(3.50mL，25.1mmol)溶液处理。在环境温度下搅拌2天后，将反应用水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，用DCM萃取合并的水层，用盐水洗涤合并的有机物，用Na2SO4干燥，并过滤。将蒸发的滤液通过快速柱色谱法(5％MeOH/DCM)纯化，得到非对映体的粗混合物形式的标题化合物。这种产物的一半通过制备性薄层色谱法(3∶1然后为2∶1乙腈/DCM)纯化两次，得到淡绿色固体状标题化合物，极性较多的产物。对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，
1
ESI pos.)：521(M+H)。发现：521.2(100％纯)。HPLC显示这是96％极性较多的非对映体。H NMR(CHLOROFORM-d)δ：7.97(br.s.，1H)，7.61(d，J＝7.6Hz，1H)，7.54(d，J＝15.4Hz，1H)，
7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.27-7.32(m，1H)，7.18(t，J＝7.5Hz，1H)，7.06-7.13(m，1H)，7.02(d，J＝6.1Hz，2H)，6.93(d，J＝2.0Hz，1H)，6.88(d，J＝15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，
2.3Hz，1H)，5.52(d，J＝4.5Hz，1H)，4.81(t，J＝13.9Hz，1H)，4.14(br.s.，1H)，3.15(br.s.，
2H)，2.75-2.86(m，1H)，2.56-2.75(m，1H)，2.46(t，J＝10.9Hz，1H)，2.05-2.26(m，4H)，2.01(br.s.，1H)，1.81(br.s.，2H)，1.44-1.55(m，3H)，1.10-1.44(m，3H)。
[0235] 步骤L：R，S-2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺二盐酸盐(实例1b)
[0236]
[0237] 将先前步骤的产物(0.73g，1.40mmol)部分溶解于热乙腈(80mL)中，在涡旋的同时用4N HCl的二氧杂环己烷(0.36mL，1.44mmol)溶液逐滴处理，并且将所得悬浮液覆盖并在环境温度下静置18小时。将产物用精细玻璃砂芯漏斗过滤，固体用乙腈洗涤两次，并在真空干燥器中干燥24小时，得到白色粉末状标题化合物。对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：521(M+H)。发现：521.2(100％纯)。HPLC显示这是96％极性较多的非对映体。
[0238] 实例2：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺的R*和S*对映体
[0239]
[0240] 实例1，步骤H的产物通过手性HPLC 和20％乙醇/80％乙腈作为洗脱剂非对映和对映分离，并且通过实例1，步骤J&K的方法转换为标题化合物(I)，以得到标题化合物。
[0241] R*对映体(实例2a)：对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：521(M+H)。发现：521.0(92％纯)。1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：８.01(d,J＝9.1Hz，1H)，7.61(d，J＝7.8Hz，1H)，7.55(d，J＝15.4Hz，1H)，7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.29(d，J＝4.5Hz，1H)，7.18(t，J＝
7.2Hz，1H)，7.06-7.14(m，1H)，6.96-7.06(m，2H)，6.93(d，J＝2.0Hz，1H)，6.89(d，J＝
15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，2.1Hz，1H)，5.54(d，J＝4.0Hz，1H)，4.81(t，J＝13.8Hz，1H)，
4.14(br.s.，1H)，3.02-3.24(m，2H)，2.80(tt，J＝11.9，3.0Hz，1H)，2.55-2.74(m，1H)，2.45(tt，J＝10.9，3.5Hz，1H)，2.04-2.23(m，4H)，1.99(d，J＝13.1Hz，1H)，1.80(br.s.，2H)，
1.13-1.58(m，7H)。
7.2Hz，1H)，7.06-7.14(m，1H)，6.96-7.06(m，2H)，6.93(d，J＝2.0Hz，1H)，6.89(d，J＝
15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，2.1Hz，1H)，5.54(d，J＝4.0Hz，1H)，4.81(t，J＝13.8Hz，1H)，
4.14(br.s.，1H)，3.02-3.24(m，2H)，2.80(tt，J＝11.9，3.0Hz，1H)，2.55-2.74(m，1H)，2.45(tt，J＝10.9，3.5Hz，1H)，2.04-2.23(m，4H)，1.99(d，J＝13.1Hz，1H)，1.80(br.s.，2H)，
1.13-1.58(m，7H)。
[0242] Ｓ＊对映体(实例2b)：对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：521(M+H)。发现：521.2(100％纯)。1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：7.94-8.07(m，1H)，7.61(d，J＝7.8Hz，
1H)，7.55(d，J＝15.4Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.29(d，J＝4.8Hz，1H)，7.18(t，J＝
7.1Hz，1H)，7.06-7.13(m，1H)，6.96-7.06(m，2H)，6.93(d，J＝1.8Hz，1H)，6.89(d，J＝
15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，2.3Hz，1H)，5.55(d，J＝4.5Hz，1H)，4.81(t，J＝13.6Hz，1H)，
4.14(br.s.，1H)，3.05-3.23(m，J＝15.2Hz，2H)，2.80(tt，J＝11.9，3.3Hz，1H)，2.56-2.74(m，1H)，2.45(tt，J＝11.1，3.6Hz，1H)，2.04-2.23(m，4H)，1.99(d，J＝12.9Hz，1H)，1.79(d，J＝12.4Hz，2H)，1.40-1.57(m，4H)，1.13-1.40(m，3H)。
1H)，7.55(d，J＝15.4Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.29(d，J＝4.8Hz，1H)，7.18(t，J＝
7.1Hz，1H)，7.06-7.13(m，1H)，6.96-7.06(m，2H)，6.93(d，J＝1.8Hz，1H)，6.89(d，J＝
15.4Hz，1H)，6.80(tt，J＝8.7，2.3Hz，1H)，5.55(d，J＝4.5Hz，1H)，4.81(t，J＝13.6Hz，1H)，
4.14(br.s.，1H)，3.05-3.23(m，J＝15.2Hz，2H)，2.80(tt，J＝11.9，3.3Hz，1H)，2.56-2.74(m，1H)，2.45(tt，J＝11.1，3.6Hz，1H)，2.04-2.23(m，4H)，1.99(d，J＝12.9Hz，1H)，1.79(d，J＝12.4Hz，2H)，1.40-1.57(m，4H)，1.13-1.40(m，3H)。
[0243] 实例3：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-顺式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0244]
[0245] 标题化合物作为极性较少的产物从实例1，步骤K中的色谱分离中分离，得到通过LCMS主要是极性较少的环己基非对映体的固体。对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：521(M+H)。发现：521
[0246] 实例4：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3，4-二氯苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0247]
[0248] 将实例1，步骤J的产物(102mg，0.239mmol)在Ar下溶解于无水DCM(10mL)中，经由注射器用TEA(0.20mL，1.43mmol)处理，搅拌10分钟，用3，4-异氰酸二氯苯酯(53mg，0.282mmol)处理，并且将反应在环境温度在隔片下搅拌24小时。将反应用DCM稀释，用水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，用DCM和EtOAc萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，并过滤。蒸发的滤液通过制备性TLC纯化两次，得到分离的顺式(极性较少的)和反式(极性较多的)环己基非对映体。对于C28H33Cl2N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：542(M+H)。对于两种异构体均发现：542.2(100％纯)。
[0249] 顺式非对映体(实例4a)：1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：8.84(d，J＝1.0Hz，1H)，7.62(d，J＝8.1Hz，1H)，7.60(d，J＝2.5Hz，1H)，7.37(d，J＝8.1Hz，1H)，7.30(d，J＝8.6Hz，1H)，7.20-7.27(m，1H)，7.12-7.20(m，1H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，7.01(s，1H)，4.13(br.s.，
2H)，3.00(d，J＝15.7Hz，3H)，2.78-2.90(m，2H)，2.74(d，J＝3.8Hz，1H)，1.77-1.96(m，5H)，
1.59-1.77(m，4H)，1.22-1.51(m，2H)。
2H)，3.00(d，J＝15.7Hz，3H)，2.78-2.90(m，2H)，2.74(d，J＝3.8Hz，1H)，1.77-1.96(m，5H)，
1.59-1.77(m，4H)，1.22-1.51(m，2H)。
[0250] 反式非对映体(实例4b)：1H NMR(CHLOROFORM-d)δ：8.63(br.s.，1H)，7.57-7.67(m，2H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.33(m，1H)，7.21-7.29(m，1H)，7.16(t，J＝7.6Hz，1H)，7.03-7.13(m，1H)，6.94(s，1H)，4.16(br.s.，2H)，3.12(d，J＝4.8Hz，1H)，2.81-2.92(m，
3H)，2.35-2.53(m，1H)，2.05-2.24(m，3H)，1.99(d，J＝8.1Hz，2H)，1.73(d，J＝9.1Hz，2H)，
1.18-1.62(m，6H)。
3H)，2.35-2.53(m，1H)，2.05-2.24(m，3H)，1.99(d，J＝8.1Hz，2H)，1.73(d，J＝9.1Hz，2H)，
1.18-1.62(m，6H)。
[0251] 实例5：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0252]
[0253] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物(142mg，0.333mmol)和反式-3，4-二氟肉桂酸制备标题化合物，得到对于极性较多的色谱产物的黄色固体，其通过NMR和LCMS仍是立体异构体的混合物。对于C30H34F2N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：521(M+H)。发现：1
521.2。H NMR(CHLOROFORM-d)δ：7.95-8.03(m，1H)，7.62(dd，J＝7.7，3.9Hz，1H)，7.55(dd，J＝15.4，6.8Hz，1H)，7.30-7.39(m，2H)，7.06-7.24(m，4H)，6.90-7.02(m，1H)，6.75-6.86(m，J＝15.4，6.1Hz，1H)，5.54(d，J＝3.5Hz，1H)，4.69-4.90(m，1H)，4.14(br.s.，1H)，3.02-
3.22(m，J＝15.4Hz，2H)，2.73-2.85(m，1H)，2.56-2.73(m，1H)，2.45(tt，J＝11.0，3.4Hz，
1H)，2.04-2.23(m，3H)，1.89-2.04(m，2H)，1.66-1.88(m，5H)，1.14-1.54(m，6H)。
521.2。H NMR(CHLOROFORM-d)δ：7.95-8.03(m，1H)，7.62(dd，J＝7.7，3.9Hz，1H)，7.55(dd，J＝15.4，6.8Hz，1H)，7.30-7.39(m，2H)，7.06-7.24(m，4H)，6.90-7.02(m，1H)，6.75-6.86(m，J＝15.4，6.1Hz，1H)，5.54(d，J＝3.5Hz，1H)，4.69-4.90(m，1H)，4.14(br.s.，1H)，3.02-
3.22(m，J＝15.4Hz，2H)，2.73-2.85(m，1H)，2.56-2.73(m，1H)，2.45(tt，J＝11.0，3.4Hz，
1H)，2.04-2.23(m，3H)，1.89-2.04(m，2H)，1.66-1.88(m，5H)，1.14-1.54(m，6H)。
[0254] 实例6：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-4-氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0255]
[0256] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物(0.50mmol)和反式-4-氟肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的白色固体状标题化合物。对于C30H35FN4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：503(M+H)。发现：503
[0257] 实例7：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0258]
[0259] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物(0.50mmol)、反式-3-氟肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的白色固体状标题化合物。对于C30H35FN4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：503(M+H)。发现：503
[0260] 实例8：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-2-氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0261]
[0262] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-2-氟-肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体。对于C30H35FN4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：502(M+H)。发现：503
[0263] 实例9：2-[4-(１H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(4-{三氟甲基}-苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0264]
[0265] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物(0.50mmol)和3-(乙氧基羰基)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C29H34F3N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：542(M+H)。发现：542
[0266] 实例10：2-[4-(１H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-{三氟甲基}-肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0267]
[0268] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物(142mg，0.333mmol)和反式-3-(三氟甲基)肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的金色固体。对于C31H35F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：553(M+H)。发现：553.2。
[0269] 实例11：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(4-{三氟甲氧基}-苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0270]
[0271] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物(0.50mmol)和4-(三氟甲氧基)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS是非对映体的混合物的固体。对于C29H34F3N5O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：558(M+H)。发现：558
[0272] 实例12：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-茚满-5-基丙-2-烯酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0273]
[0274] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3-茚满-5-基丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C33H40N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：525(M+H)。发现：525
[0275] 实例13：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-4-{三氟甲基}-肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0276]
[0277] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-4-(三氟甲基)-肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C31H35F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：553(M+H)。发现：553
[0278] 实例14：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-4-氯-肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0279]
[0280] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3-氯-肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体。对于C30H35CL4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：519(M+H)。发现：519
[0281] 实例15：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)丙-2-烯酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0282]
[0283] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C32H38N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：527(M+H)。发现：527
[0284] 实例16：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3-{三氟甲基}-苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0285]
[0286] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3-(三氟甲基)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C29H34F3N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：542(M+H)。发现：542
[0287] 实例17：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧戊环-5-基)丙-2-烯酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0288]
[0289] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3-(2，2-氟-1，3-苯并二氧戊环-5-基)丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C31H34F2N4O4计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：565(M+H)。发现：565
[0290] 实例18：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0291]
[0292] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体。对于C30H36N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：484(M+H)。发现：484
[0293] 实例19：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3-{乙氧基羰基}-苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0294]
[0295] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3-(乙氧基羰基)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C31H39N5O4计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：546(M+H)。发现：546
[0296] 实例20：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3-氟苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺(I)
[0297]
[0298] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3-异氰酸氟苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体。对于C28H34FN5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：492(M+H)。发现：492
[0299] 实例21：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-4-(三氟甲氧基)肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0300]
[0301] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-4-(三氟甲氧基)肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体。对于C31H35F3N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：569(M+H)。发现：569
[0302] 实例22：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(4-{乙氧基羰基}-苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0303]
[0304] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和4-(乙氧基羰基)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C31H39N5O4计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：546(M+H)。发现：546
[0305] 实例23：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3-{2，3-二氢-1，4-苯并二 英-7-基}丙-2-烯酰)哌啶-4-基]-乙酰胺
[0306]
[0307] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3-(2，3-二氢-1，4-苯并二英-7-基)丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C32H38N4O4计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：543(M+H)。发现：543
[0308] 实例24：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酸甲酯
[0309] 步骤A：2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯
[0310]
[0311] 根据实例1，步骤H和I的程序制备标题化合物，使用来自实例1，步骤F的2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)-乙酸甲酯代替2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-乙酰胺。
[0312] 步骤B：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酸甲酯
[0313]
[0314] 通过实例1，步骤K的方法由2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯(来自实例24，步骤A)和反式-3，5-二氟肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体。对于C31H35F2N3O3计算的质谱(LCMS，pos.)：536(M+H)。发现：536.3。
[0315] 实例25：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酸盐酸盐
[0316]
[0317] 将实例24的产物溶解于3∶1v/v MeOH/THF(8mL)中，用粉末状氢氧化锂(36mg，1.50mmol)的水(2mL)溶液处理，并且在环境温度下搅拌4天。将反应在真空中浓缩至浆料，用1NHCl水溶液酸化至pH4，用玻璃料过滤，将固体用水洗涤一次、用无水乙醚洗涤两次，并且在真空中干燥，得到白色无定形固体状标题化合物。对于C30H33F2N3O3计算的质谱(LCMS，pos.)：522(M+H)。发现：522.3。
[0318] 实例26：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酸盐酸盐
[0319]
[0320] 通过实例1，步骤K以及实例25的方法由甲基2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸酯(来自实例24，步骤A)和反式-3，4，5-三氟肉桂酸制备标题化合物，得到白色粉末。对于C30H32F3N3O3计算的质谱(LCMS，pos.)：540(M+H)。发现：540。
[0321] 实例27：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[N-(3，4-二氯苯基)-哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酸盐酸盐
[0322]
[0323] 通过实例4和实例25的方法由2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯(来自实例24，步骤A)和3，4-异氰酸二氯苯酯制备标题化合物，得到对于极性最多的色谱产物的白色粉末。对于C28H32Cl2N4O3计算的质谱(LCMS，APCI pos.)：543(M+H)。发现：543.3。
[0324] 实例28：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-顺式-环己基氨基]-2-[N-(3，4-二氯苯基)-哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酸盐酸盐(I)
[0325]
[0326] 通过实例1，步骤K和实例25的方法由2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯(来自实例24，步骤A)和3，4-异氰酸二氯苯酯制备标题化合物，得到对于极性第二多的色谱产物的白色粉末。对于C28H32Cl2N4O3计算的质谱(LCMS，APCI pos.)：543(M+H)。发现：543.3。
[0327] 实例29：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(4-氟苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0328]
[0329] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和4-异氰酸氟苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的标题化合物。对于C28H34FN5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：492(M+H)。发现：492
[0330] 实例30：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3，5-二氟苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0331]
[0332] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3，5-(二氟苯基)异氰酸酯制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体状标题化合物。对于C28H33F2N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：510(M+H)。发现：510
[0333] 实例31：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3-{甲基磺酰}苯基)-哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0334]
[0335] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3-(甲基磺酰)异氰酸苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的固体状标题化合物。对于C29H37N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：520(M+H)。发现：520
[0336] 实例32：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[N-(3，4-二氟苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0337]
[0338] 通过实例4的方法由实例1，步骤J的产物和3，4-异氰酸二氟苯酯制备标题化合物，得到通过LCMS主要是极性较多的环己基非对映体的固体状标题化合物。对于C28H33F2N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：510(M+H)。发现：510
[0339] 实例33：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-{1-[(2E)-3-(3，4-二氢-2H-色烯-6-基)丙-2-烯酰]哌啶-4-基}乙酰胺
[0340]
[0341] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和(2E)-3-(3，4-二氢-2H-色烯-6-基)丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的黄色固体。对于C33H40N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：541(M+H)。发现：541
[0342] 实例34：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-{1-[(2E)-3-(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基)丙-2-烯酰]哌啶-4-基}乙酰胺
[0343]
[0344] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和(2E)-3-(2，2-二甲基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基)丙-2-烯酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的黄色固体。对于C33H40N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：541(M+H)。发现：541[0345] 实例35：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0346]
[0347] 通过实例1，步骤K的方法由实例1，步骤J的产物和反式-3，4，5-三氟肉桂酸制备标题化合物，得到通过LCMS是环己基非对映体的混合物的黄色固体。对于C30H33F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：539(M+H)。发现：539
[0348] 实例36：R，S-2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0349]
[0350] 通过反相HPLC(C-18固定相且用含有0.05％TFA作为两种溶剂中的添加剂的20至80％乙腈/水的梯度洗脱)纯化实例35的产物，得到极性较多的非对映体(较短的保留时间)的标题化合物。对于C30H33F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：539(M+H)。发现：539。
[0351] 实例37：R，S-2-[4-(1H-吲哚-3-基)-顺式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0352]
[0353] 通过快速色谱法(20％MeOH/EtOAc)纯化实例35的产物，得到极性较少的非对映体(较长的保留时间)的标题化合物。对于C30H33F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：539(M+H)。发现：539。
[0354] 实例38：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酰胺盐酸盐的R*和S*对映体
[0355]
[0356] 通过手性、反相HPLC对映分离实例36的产物，以得到棕褐色固体状标题化合物。
[0357] R*对映体(实例38a)：对于C30H33F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：539(M+H)。发现：539。
[0358] S*对映体(实例38b)：对于C30H33F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：539(M+H)。发现：539。
[0359] 实例39：2-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0360]
[0361] 通过实例1，步骤H至K的方法由4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己酮(经由实例1，步骤A至C的程序由4-氮杂吲哚产生)、来自实例1，步骤G的氨基酰胺和反式-3，4，5-三氟肉桂酸制备标题化合物，得到黄色固体。
[0362] 这通过快速色谱法分离，得到两种非对映体，关于极性较多的环己基非对映体(反式，实例39a)的黄色固体，关于极性较少的环己基非对映体(顺式，实例39b)的黄色固体。对于C29H32F3N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：540(M+H)。对于两者均发现：540。
[0363] 实例40：2-[4-(1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[N-(3，4-二氯苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0364]
[0365] 通过实例1，步骤H和J以及实例4的方法由4-(1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基)环己酮(经由实例1，步骤A至C的程序由5-氮杂吲哚产生)、2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-乙酰胺(来自实例1，步骤G)和3，4-异氰酸二氯苯酯制备标题化合物，得到棕褐色固体。对于C27H32Cl2N6O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：543(M+H)。发现：543。
[0366] 实例41：R，S-2-[反式-4-(1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0367]
[0368] 通过实例39的方法由5-氮杂吲哚制备标题化合物，得到黄色固体。对于C29H32F3N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：540(M+H)。发现：540
[0369] 实例42：2-[反式-4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[N-(3，4-二氯苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0370]
[0371] 通过实例40的方法由4-氮杂吲哚制备标题化合物，得到无色固体。对于C27H32Cl2N6O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：543(M+H)。发现：543。
[0372] 实例43：R，S-2-[反式-4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0373]
[0374] 通过实例39的方法由4-氮杂吲哚制备标题化合物，得到黄色固体。对于C29H35N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：486(M+H)。发现：486。
[0375] 实例44：2-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0376]
[0377] 通过实例39的方法由7-氮杂吲哚制备标题化合物，得到黄色固体。对于C29H32F3N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：540(M+H)。发现：540。
[0378] 实例45：R，S-2-[反式-4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0379]
[0380] 通过实例39的方法由4-氮杂吲哚制备标题化合物，得到黄色固体。对于C29H33F2N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：522(M+H)。发现：522
[0381] 实例46：R，S-2-[4-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，5-二氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0382]
[0383] 通过实例39的方法由7-氮杂吲哚制备标题化合物，得到黄色固体。对于C29H33F2N5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：522(M+H)。发现：522。
[0384] 实例47：2-[4-(1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-4-氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0385]
[0386] 通过实例39的方法由5-氮杂吲哚制备标题化合物，得到对于极性较多的环己基非对映体(反式，实例47a)的棕褐色固体，对于极性较少的环己基非对映体(顺式，实例47b)的黄色固体。对于C29H34FN5O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：504(M+H)。发现：504。
[0387] 实例48：2-[4-(1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[N-(3-甲苯基)哌啶-1-甲酰胺-4-基]-乙酰胺
[0388]
[0389] 通过实例40的方法由4-氮杂吲哚制备标题化合物，得到环己基非对映体的混合物的棕褐色固体。对于C28H36N6O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：489(M+H)。发现：489[0390] 实例49：2-[4-(1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)哌啶-4-基]-乙酸甲酯
[0391]
[0392] 通过实例1，步骤K的方法由2-((4-(1H-吲哚-3-基)环己基)氨基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯(来自实例24，步骤A)和反式-3，4，5-三氟肉桂酸制备标题化合物，并且通过快速色谱法分离产物非对映体的混合物，得到对于极性较多的环己基非对映体(反式，实例49a)的淡黄色固体，对于极性较少的环己基非对映体(顺式，实例49b)的棕褐色固体。对于C31H35F2N3O3计算的质谱(LCMS，pos.)：536(M+H)。发现：536。
[0393] 实例50：2-[4-(6-甲氧基吡啶-3-基)环己基]氨基-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]-乙酰胺
[0394]
[0395] 通过实例1，步骤H至K的方法由4-(6-甲氧基吡啶-3-基)环己酮(根据方案5中所示的一般程序由可商购获得的4-羟基-4-(6-甲氧基吡啶-3-基)环己酮制备)、2-氨基-2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-乙酰胺(来自实例1，步骤G)和反式-3，4，5-三氟肉桂酸制备标题化合物，得到环己基非对映体的混合物的淡黄色固体。
[0396] 利用如本文所示的方法，还制备实例51至54的化合物。
[0397] 实例51：N-羟基-2-{[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]}-乙酰胺
[0398]
[0399] 对于C30H33F3N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：555(M+H)。发现：555
[0400] 实例52：2-{[4-(2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)-反式-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]}-乙酰胺
[0401]
[0402] 对于C30H35F3N4O2计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：541(M+H)。发现：541
[0403] 实例53：N-甲基-2-{[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]}-乙酰胺
[0404]
[0405] 对于C30H33F3N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：553(M+H)。发现：553。
[0406] 实例54：N，N-二甲基-2-{[4-(1H-吲哚-3-基)-环己基氨基]-2-[1-(反式-3，4，5-三氟肉桂酰)-哌啶-4-基]}-乙酰胺
[0407]
[0408] 对于C30H33F3N4O3计算的质谱(LCMS，ESI pos.)：567(M+H)。发现：567。
[0409] 实例55：体外生物学数据
[0410] 使本发明化合物经受多种代表性的生物学测试。这些测试的结果旨在以非限制性的方式说明本发明。在THP-1细胞中的MCP-1受体结合测定法人单核细胞细胞系THP-1细胞获自美国典型培养物中心(美国弗吉尼亚州的马纳萨斯(Manassas，Va.，USA))。在37℃下将THP-1细胞在补充有10％胎牛血清的RPMI-1640(RPMI：Roswell Park Memorial Institute Medium-细胞培养生长培养基)中在5％CO2潮湿气氛中生长。将细胞密度维持在0.5×106个细胞/mL之间。
[0411] 在30℃下将THP-1细胞与0.5nM125I标记的MCP-1(Perkin-Elmer Life Sciences，Inc.Boston，Mass.)在不同浓度的未标记的MCP-1(R&D Systems，Minneapolis，Minn.)或测试化合物的存在下在96孔平板中一起温育2小时。然后将细胞收获至滤板上，干燥，并将20μL的Microscint20加入至每孔中。将平板在TopCount NXT(微定量盘式闪烁及冷光计数仪(Microplate Scintillation&Luminescence Counter，Perkin-Elmer Life Sciences，Inc.Boston，Mass.))中计数。从所有值减去空白值(仅有缓冲液)并将药物处理值与溶媒处理值进行比较。将1μM冷MCP-1用于非特异性结合。
[0412] 表1列出了针对本发明的测试化合物获得的抑制MCP-1与CCR2结合的IC50值。当对于具体化合物未获得IC50值时，抑制百分比在25μM的测试浓度时提供。当超过一个IC50值可用时，报道两个最相似值的平均值。
[0413] 表1：MCP-1结合抑制的IC50
[0414]
[0415]
[0416] 实例56：动物。
[0417] 利用注射进C57BL/6小鼠中的靶向129Sv/Evbrd胚胎干细胞克隆产生小鼠CCR2敲除/人CCR2敲入小鼠。hCCR2转录物的表达通过对来自纯合hCCR2敲入小鼠的脾脏和血液总RNA执行的定量反转录聚合酶链反应来确认。向C57BL/6遗传背景的回交继续进行到第八代。转基因小鼠在维持12小时光照/12小时黑暗周期的没有特定病原体的温控设施中圈养。小鼠自由饮水和进食。实验程序根据动物管理的机构标准来实施，并由机构动物管理和使用委员会批准。
[0418] 实例57：鼠体内细胞迁移测定。
[0419] 动物以3、10和30mg/kg一日两次按剂量口服溶媒或CCR2拮抗剂。动物经历麻醉和剖腹手术。将远侧小肠襻(loop)(5cm长)轻轻从腹腔取出至湿润消毒纱布上。将合成的人MCP-1(1mg/100mL无菌PBS)或单独的PBS逐滴施用至取出的肠襻的绒毛膜上。将缝线结置于肠系膜中以标记处理的区域的末端。二十四小时后，处死动物，并移出该肠节段及相邻区域。沿肠系膜边界打开组织，钉平并去除粘膜。剩余的肌肉层在100％EtOH中稍作固定，然后使用Hanker-Yates试剂染色，以检测含有髓过氧化物酶的免疫细胞。在以10mg/kg，一日两次经口施用时，如果与溶媒处理动物相比细胞迁移的抑制达到30％，则认为化合物是有效的。
[0420] 实例58：小鼠中巯基乙酸盐诱导的腹膜炎。
[0421] 以3、10、30和100mg/kg一日两次给动物按剂量口服溶媒或CCR2拮抗剂。在一小时后，给动物腹腔内注射无菌巯基乙酸盐(25mL/kg，腹膜内，Sigma)以诱导腹膜炎。每天用溶媒或CCR2拮抗剂经口处理动物两次。在72小时时间点后，用10mL的无菌盐水灌洗腹腔。使用显微镜进行腹腔灌洗液中的总细胞计数并在Giemsa染色(Hema Tek2000)后利用细胞离心涂片器(cytospin)分析进行细胞区别。通过比较CCR2拮抗剂处理小鼠与溶媒处理小鼠的白细胞数变化，来计算对巯基乙酸盐诱导的腹膜炎的抑制百分比。
[0422] 实例59：MCP-1-诱导的单核细胞向小鼠气道的募集
[0423] 用以3、10和30mg/kg一日两次经口服的溶媒或CCR2拮抗剂经口处理动物。一小时后，将动物鼻内按剂量服用在无菌盐水溶液中的4μgMCP-1。每天用溶媒或CCR2拮抗剂经口处理动物两次。在48小时后，通过腹膜内注射麻醉溶液(Sleepaway-戊巴比妥钠)对小鼠实施安乐死。使用1.4ml含有3mM EDTA的冰冷PBS执行整个支气管肺泡灌洗(BAL)。使用显微镜执行BAL灌洗液中的总细胞计数并在Giemsa染色(Hema Tek2000)后利用细胞离心涂片器分析执行细胞分化。通过比较化合物处理小鼠和溶媒处理小鼠的总白细胞计数(包括单核细胞/巨噬细胞和淋巴细胞)的变化来计算抑制百分比。如果抑制百分比达到30％，则认为化合物是有效的。
[0424] 实例60：小鼠中高脂肪饮食诱导的肥胖症和胰岛素抗性。
[0425] 在第7周龄时在动物中通过高脂肪饮食(D-12492；Research Diets Inc.)诱导肥胖症持续10-24周，该高脂肪饮食大约60％的卡路里来自脂质。在7周龄之前，给动物饲喂标准颗粒食物，其中5％的卡路里以脂肪提供。通过体重和脂肪量对肥胖动物进行随机化。用以3、10和30mg/kg一日两次经口服的溶媒或CCR2拮抗剂经口处理肥胖动物。监测体重和食物摄入和空腹血糖水平。通过NMR分析器(Burker MiniSpec)来确定体重。在禁食3小时的动物中进行胰岛素耐受性测试。在腹膜内弹丸式注射重组人胰岛素(1.5U/kg)之后，使用血糖测计仪在注射之前和在注射之后15、30、45、60、90和120分钟测量血糖浓度。在过夜(17小时)禁食之后执行葡萄糖耐受性测试。在按剂量口服溶于水的葡萄糖(1g/kg)之前和之后15、30、60、90、120分钟测量血糖浓度。通过完整的实验室动物监测系统监测能量消耗分析。
在用溶媒或CCR2拮抗剂处理40天之后，通过CO2窒息处死动物。通过比较化合物处理小鼠和溶媒处理小鼠的体重变化，来计算体重减轻的百分比。
在用溶媒或CCR2拮抗剂处理40天之后，通过CO2窒息处死动物。通过比较化合物处理小鼠和溶媒处理小鼠的体重变化，来计算体重减轻的百分比。
[0426] 实例61：过敏性哮喘的小鼠模型。
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